CZ299219B6 - Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro - Google Patents
Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299219B6 CZ299219B6 CZ20060787A CZ2006787A CZ299219B6 CZ 299219 B6 CZ299219 B6 CZ 299219B6 CZ 20060787 A CZ20060787 A CZ 20060787A CZ 2006787 A CZ2006787 A CZ 2006787A CZ 299219 B6 CZ299219 B6 CZ 299219B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- vitro
- mammalian
- protein kinase
- oocyte
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 claims description 13
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract description 6
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 abstract description 5
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 abstract description 5
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 abstract 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006088 activator proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000001771 cumulus cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 229940105132 myristate Drugs 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Rešení se týká prodlouženého uchovávání savcích oocytu v podmínkách in vitro za soucasné aktivace protein kináz C. Tento zpusob kultivace zajištuje zvýšenou životaschopnost oocytu a má velký význam pri reprodukcních biotechnologiích u hospodárských zvírat.
Description
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za současné aktivace protein kináz C. Tento způsob kultivace zajišťuje zvýšenou životaschopnost oocytů a má velký význam při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat.
Způsob prodloužení životnosti savčích oocytů v podmínkách in vitro
Oblast techniky
Vynález se tyká způsobu prodloužení životnosti savčích oocytů, aby se zachovala životaschopnost savčích oocytů uchovávaných po delší dobu v podmínkách in vitro. Prodloužení životnosti oocytů savců má velký význam pro reprodukční biotechnologie u hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze).
Dosavadní stav techniky
Oocyty savců (samicí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost a při následné kultivaci v podmínkách in vitro to způsobuje potíže. Po dokončení zrání podléhají spontánně řadě procesů, jež je znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze). Nej významnější z procesů je fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů, jež je důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila. Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené.
Podstata vynálezu
Uvedené nedostatky odstraňuje způsob prodloužení životnosti savčích oocytů v podmínkách in vitro podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že savčí oocyty jsou při něm v savčích oocytech aktivovány enzymy protein kináz C.
Způsob podle vynálezu ještě spočívá v tom, že se na savčí oocyty působí látkami se specifickým aktivačním účinkem na protein kináz C.
Způsob podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že se savčí oocyty kultivují in vitro až po dobu 5 dnů s aktivátory protein kináz C s tím, že se po 3 dnech oocyty přenesou do čerstvě připraveného kultivačního média s přídavkem aktivátoru protein kináz C.
Způsobem podle vynálezu jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například při kultivaci v médiu s 50 mikroM forbol 12myristát 13-acetátu po dobu 3 dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentaci ani lýze, zatímco při kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentovaných oocytů zhruba 25 % a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10 %. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti aktivátorů protein kináz C je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je podstatně vyšší. Způsob prodloužené kultivace oocytů za současné aktivace protein kináz C podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat, např. klonování, oplození in vitro (IVF), intracytoplasmatické injekci spermií (ICSI) či transgenozi.
Je známo, že při oplození in vitro oocytů hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla samice nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvo50 du nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemenného kance), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození, úspěšného a zdravého vývoje zárodku.
-1 CZ 299219 B6
Při klonování živočichů (savců) dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplasmy oocytu, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytu významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Při náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro použití uchovávány v podmínkách in vitro. Při tom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují oocyt. Pro následný vývoj embrya klonu je nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleací nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použít médium obohacené o aktivátory protein kináz C. Takto použité oocyty nebo cytoplasty (oocyty zbavené enukleací jaderné dědičné informace) jsou kva10 litnčjší a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější.
Bylo prokázáno, že významného prodloužení životaschopnosti oocytů potlačením fragmentace a lýzy savčích oocytů lze dosáhnout ošetřením oocytů podle vynálezu, jehož podstata spočívá v aktivaci (zvýšení aktivity) protein kináz C, kdy se savčí oocyty dozrálé v podmínkách in vitro nebo získané po dozrání in vivo dále kultivují in vitro až po dobu 5 dnů se specifickými aktivátory protein kináz C.
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv ome20 zovaly.
Příklady provedení
Příklad 1
Podle nového způsobu podle vynálezu jsou dozrálé prasecí oocyty ve stádiu metafáze II kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 50 mikroM aktivátoru protein kináz C forbol 1230 myristát 13-acetátu. V tomto kultivačním médiu jsou kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak jsou oocyty opláchnuty médiem bez aktivátoru a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty mají vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány bez aktivátoru protein kináz C a i vzniklá embrya jsou životaschopnější.
Příklad 2
Dozrálé savčí oocyty nacházející se ve stádiu zrání metafáze 11 se zbaví kumulámích buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium M199 obohacené o 10 % hmotn. bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul aktivujících protein kináz C (např. forbol 12-myristát 13acetát) v koncentracích od 1 do 100 mikroM. V tomto médiu se oocyty kultivují až po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty opláchnuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o vybraný aktivátor kináz C a následně byly kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o aktivátor protein kináz C. Po ukončení kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez aktivátoru a kultivovány běžným laboratorním postupem.
-2CZ 299219 B6
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za současné 5 aktivace protein kináz C, což má velký význam pří reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (2)
1. Způsob prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro, vyznačují15 c í se tím, že jsou při něm v savčích oocytech aktivovány enzymy protein kináz C.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se na savčí oocyty působí látkami se specifickým aktivačním účinkem na protein kináz C.
20 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se savčí oocyty kultivují in vitro až po dobu 5 dnů s aktivátory protein kináz C s tím, že se po 3 dnech oocyty přenesou do čerstvě připraveného kultivačního média s přídavkem aktivátoru protein kináz C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060787A CZ299219B6 (cs) | 2006-12-08 | 2006-12-08 | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060787A CZ299219B6 (cs) | 2006-12-08 | 2006-12-08 | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2006787A3 CZ2006787A3 (cs) | 2008-05-21 |
| CZ299219B6 true CZ299219B6 (cs) | 2008-05-21 |
Family
ID=39399194
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20060787A CZ299219B6 (cs) | 2006-12-08 | 2006-12-08 | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ299219B6 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ302913B6 (cs) * | 2010-05-21 | 2012-01-18 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Zpusob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytu aktivací protein kináz C |
-
2006
- 2006-12-08 CZ CZ20060787A patent/CZ299219B6/cs not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Downs S.M. et al.: "Protein kinase C and meiotic regulation in isolated mouse oocytes, Mol. Reprod. Dev., Vol. 58(1), 101-115, 2001 * |
| Quan H.M. et al.: "Effects of PKC activation on the meiotic maturation, fertilization and early embryonic development of mouse oocytes", Zygote 11(4):329-337, 2003 * |
| Viveiros M.M. et al.: "Protein Kinase C Activity Regulates the Onset of Anaphase I in Mouse Oocytes", BIOLOGY OF REPRODUCTION, Vol. 71, 1525û1532, 2004 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ302913B6 (cs) * | 2010-05-21 | 2012-01-18 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Zpusob zvýšení vývojové schopnosti rostoucích oocytu aktivací protein kináz C |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2006787A3 (cs) | 2008-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bavister et al. | Development of in vitro matured/in vitro fertilized bovine embryos into morulae and blastocysts in defined culture media | |
| Li et al. | Glutathione and cysteine enhance porcine preimplantation embryo development in vitro after intracytoplasmic sperm injection | |
| RU2018109958A (ru) | Культуральная среда | |
| US20240076611A1 (en) | Medium supplement to increase the efficiency of oocyte maturation and embryo culture in vitro | |
| Gasparrini et al. | Chemical activation of buffalo (Bubalus bubalis) oocytes by different methods: effects of aging on post-parthenogenetic development | |
| Shyam et al. | Effect of Dickkopf-1 and colony stimulating factor-2 on the developmental competence, quality, gene expression and live birth rate of buffalo (Bubalus bubalis) embryos produced by hand-made cloning | |
| Kim et al. | Improved preimplantation development of porcine somatic cell nuclear transfer embryos by caffeine treatment | |
| Li et al. | Leptin and nonessential amino acids enhance porcine preimplantation embryo development in vitro by intracytoplasmic sperm injection | |
| Park et al. | A modified swim-up method reduces polyspermy during in vitro fertilization of porcine oocytes | |
| Cevik et al. | Can sequential human embryo culture media be used in bovine in vitro embryo culture? | |
| Liang et al. | In vitro development of vitrified buffalo oocytes following parthenogenetic activation and intracytoplasmic sperm injection | |
| Morishita et al. | Development of golden hamster embryos effectively produced by injection of sperm heads sonicated in Tris‐HCl buffer with EGTA | |
| CZ299219B6 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| Travnickova et al. | Production of sexed bovine embryos in vitro can be improved by selection of sperm treatment and co‐culture system | |
| CZ299271B6 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| Lee et al. | Optimization of the in vitro fertilization system in pigs | |
| CZ2005369A3 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2010579A3 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| KR102159054B1 (ko) | Edta를 활용한 개 배아의 atp를 향상시키는 방법 | |
| Beebe et al. | Development of an improved porcine embryo culture medium for cloning, transgenesis and embryonic stem cell isolation | |
| CZ2009536A3 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2009535A3 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanalu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| Shahzad et al. | Buffalo Embryo Production | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20141208 |