CZ21336U1 - Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro - Google Patents
Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ21336U1 CZ21336U1 CZ201023030U CZ201023030U CZ21336U1 CZ 21336 U1 CZ21336 U1 CZ 21336U1 CZ 201023030 U CZ201023030 U CZ 201023030U CZ 201023030 U CZ201023030 U CZ 201023030U CZ 21336 U1 CZ21336 U1 CZ 21336U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- vitro
- culture medium
- sulfane
- mammalian
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims description 63
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims description 18
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M sodium hydrosulfide Chemical compound [Na+].[SH-] HYHCSLBZRBJJCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Oblast techniky
Řešení se týká kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, zejména při použití subtoxických koncentrací sulfanu (sirovodík, H2S) pro přípravu kultivačního média na prodloužení Životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že oocyty savců (samičí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost a pri následné kultivaci v podmínkách in vitro po dokončení zrání podléhají spontánně io řadě procesů, jež je znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze) i v humánní medicíně (asistovaná reprodukce). Nej významnější z procesů je fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů, jež je důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila.
Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené a tím stále dochází k velkým ztrátám pri používání současných reprodukčních technik.
Podstata technického řešení
Výše uvedené nedostatky odstraňuje kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, podle technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že kultivační médium pro kultivaci odebraných savčích oocytů v podmínkách in vitro obsahuje přídavek sulfanu.
Podstata použití sulfanu pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro podle technického řešení dále spočívá v tom, že se odebrané dozrálé savčí oocyty kultivují až po dobu 5 dnů s látkou uvolňující subtoxické koncentrace sulfanu. Poté jsou oocyty opláchnuty v kultivačním médiu bez sulfanu a případně přeneseny do čerstvě připraveného kultivačního média se subtoxickými koncentracemi sulfanu pro kultivaci dalších 1 až 3 dnů a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Použití sulfanu pro přípravu kultivačního média podle technického řešení na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro se výhodně provádí tak, že se savčí oocyty dozrálé do stádia metafáze II zbaví kumulámích buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium Ml99, které je na bázi earíeových solí, a je obohacené o 10 % hmotn. bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul uvolňujících do média subtoxické koncentrace sulfanu (např. Na2S nebo NaHS). V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty oplách35 nuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o látky uvolňující subtoxické koncentrace sulfanu a následně byly kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o látky uvolňující subtoxické koncentrace sulfanu. Po ukončení kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez sulfanu a kultivovány běžným laboratorním postupem.
Původci technického řešení ověřili, že použitím látek uvolňujících subtoxické koncentrace sulfanu pro přípravu kultivačního média podle technického řešení jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například pri kultivaci v médiu s 1 milimol simíku sodného (Na2S) po dobu tří dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentaci ani lýze, zatímco pri kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentovaných oocytů zhruba 25 % hmotn. a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10 % hmotn. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti inhibitorů draslíkových kanálů závislých na
- 1 CZ 21336 Ul
ATP je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je podstatně vyšší.
Pri oplození oocytů in vitro hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla samice nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. pri zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemenného kance, býka, hřebce), odebrané oocyty rychle ztrácejí na své kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Následující nežádoucí škody v reprodukci savců jsou velké.
ío Rovněž pri oplození oocytů člověka pri léčbě neplodnosti metodami asistované reprodukce (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla budoucí matky, nebo jsou tyty oocyty získány po dozrání v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při potížích s odběrem spermatu potenciálního otce), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození a tím i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Negativní následky jsou pak velmi citelné.
Z uvedeného jasně vyplývá, že použití látek uvolňujících subtoxické koncentrace sulfanu pro přípravu kultivačního média na prodloužení kultivace oocytů za současného použití subtoxických koncentrací sulfanu podle technického řešení lze využít zejména pri reprodukčních bio20 technologiích u hospodářských zvířat (např. klonování, in vitro oplození, IVF, ICSI, transgenozi).
Při klonování savců obecně dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplasmy oocytů, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytů významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Pri náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro klonování uchovávány v podmínkách in vitro. Přitom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují odebraný oocyt. Pro následný vývoj embrya klonuje nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleací nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použít média obohaceného o sulfan. Původci technic30 kého řešení bylo zjištěno, že takto použité oocyty nebo cytoplasty (oocyty zbavené enukleací jaderné dědičné informace) jsou opět kvalitnější a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější, než pri dosud používaných postupech. To má pro budoucí vývoj v této oblasti dalekosáhlé možnosti využití.
Následující příklady provedení použití látek uvolňujících sulfan pro přípravu kultivačního média podle technického řešení pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
Příklady provedeni
Příklad 1
Dozrálé prasečí oocyty (600 oocytů) ve stádiu metafáze Π byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 1 mM Na2S. V tomto kultivačním médiu podle technického řešení byly kultivovány až do chvíle, kdy bylo vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez sulfanu a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez látek uvolňujících subtoxické koncentrace sulfanu, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými v médiu podle technického řešení byla pri opakovaných pokusech v průměru 80 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Pri ověřování použití látek uvolňujících subtoxické koncentrace sulfanu pro přípravu kultivačního média podle technického řešení na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat,
-2CZ 21336 Ul hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci technického řešení potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 30 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat. Příklad 2
Dozrálé prasečí oocyty (40 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro 5 kultivovány v médiu obohaceném o 2 mM NaHS. V tomto médiu byly drženy až do chvíle, kdy z nich byly enukleací připraveny cytoplasty pro následný přenos jader somatických buněk. Po přenosu jader do cytoplastů z takto ošetřených oocytů byl pozorován vývoj do stádia blastocyty v % případů. Pokud byly oocyty nechány před přípravou cytoplastů stejně dlouhou dobu bez látky uvolňující subtoxické koncentrace sulfanu, jejich kvalita se zhoršila natolik, že je nebylo io možné pro klonování použít v důsledku vysoké náchylnosti k fragmentaci (zániku programovanou smrtí - apoptózou).
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro v médiu obsahujícím subtoxické koncentrace sulfanu, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat i v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Vysvětlení zkratek použitých v textu:
IVF in vitro oplodnění (in vitro fertilization),
ICSI intracytoplazmatická injekce spermie (intra cytoplasmic sperm injection).
NÁROKY NA OCHRANU
Claims (1)
- 20 1. Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, vyznačující se tím, že kultivační médium pro kultivaci odebraných savčích oocytů v podmínkách in vitro obsahuje subtoxický přídavek sulfanu.25 Konec dokumentu
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023030U CZ21336U1 (cs) | 2010-07-27 | 2010-07-27 | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023030U CZ21336U1 (cs) | 2010-07-27 | 2010-07-27 | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ21336U1 true CZ21336U1 (cs) | 2010-10-05 |
Family
ID=42932094
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ201023030U CZ21336U1 (cs) | 2010-07-27 | 2010-07-27 | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ21336U1 (cs) |
-
2010
- 2010-07-27 CZ CZ201023030U patent/CZ21336U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Glutathione and cysteine enhance porcine preimplantation embryo development in vitro after intracytoplasmic sperm injection | |
| Toyoda et al. | The early history of the TYH medium for in vitro fertilization of mouse ova | |
| CN112501114A (zh) | 提高牛体外受精效率的方法 | |
| CN112980778B (zh) | 牛体外受精胚胎培养和冻存的方法 | |
| US20080268419A1 (en) | Supplementation for Embryo and/or Cell Manipulation Media | |
| CN112322579B (zh) | 牛体外受精使用的培养液和提高牛体外受精的方法 | |
| Parmar et al. | Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and its applications in veterinary sciences: An overview | |
| Ikumi et al. | Interspecies somatic cell nuclear transfer for in vitro production of Antarctic minke whale (Balaenoptera bonaerensis) embryos | |
| CZ2007197A3 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2010579A3 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Suthar et al. | Bovine In vitro embryo production: an overview | |
| Mrowiec et al. | Technical, biological and molecular aspects of somatic cell nuclear transfer–a review | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Beebe et al. | Adding essential amino acids at a low concentration improves the development of in vitro fertilized porcine embryos | |
| CZ302912B6 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ302925B6 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2006787A3 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| Beebe et al. | Development of an improved porcine embryo culture medium for cloning, transgenesis and embryonic stem cell isolation | |
| グエンティ ニエン | Studies on preservation of porcine zygotes for embryo production by interspecies somatic cell nuclear transfer | |
| Kaewma et al. | Zinc Chloride Supplementation During In Vitro Fertilization Reduces Polyspermic Fertilization of Porcine Oocytes | |
| Al-Hadıthy | In Vitro Koşullarında Üretilen Koyun Embriyolarının Kalitelerinin Iyileştirilmesi Olanakları |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20101005 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20140416 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20170727 |