CZ2014230A3 - Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro - Google Patents
Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2014230A3 CZ2014230A3 CZ2014-230A CZ2014230A CZ2014230A3 CZ 2014230 A3 CZ2014230 A3 CZ 2014230A3 CZ 2014230 A CZ2014230 A CZ 2014230A CZ 2014230 A3 CZ2014230 A3 CZ 2014230A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- vitro
- culture medium
- oocyte
- fertilization
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 89
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 27
- -1 allyl compound Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- UBAXRAHSPKWNCX-UHFFFAOYSA-N diallyl trisulfide Chemical compound C=CCSSSCC=C UBAXRAHSPKWNCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- UBJVUCKUDDKUJF-UHFFFAOYSA-N Diallyl sulfide Chemical compound C=CCSCC=C UBJVUCKUDDKUJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- PFRGXCVKLLPLIP-UHFFFAOYSA-N diallyl disulfide Chemical compound C=CCSSCC=C PFRGXCVKLLPLIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N Allicin Natural products C=CCS[S@](=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 6
- JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N allicin Chemical compound C=CCSS(=O)CC=C JDLKFOPOAOFWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000010081 allicin Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 235000015295 alliin Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- XUHLIQGRKRUKPH-GCXOYZPQSA-N Alliin Natural products N[C@H](C[S@@](=O)CC=C)C(O)=O XUHLIQGRKRUKPH-GCXOYZPQSA-N 0.000 claims abstract description 5
- XUHLIQGRKRUKPH-UHFFFAOYSA-N S-allyl-L-cysteine sulfoxide Natural products OC(=O)C(N)CS(=O)CC=C XUHLIQGRKRUKPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- XUHLIQGRKRUKPH-DYEAUMGKSA-N alliin Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C[S@@](=O)CC=C XUHLIQGRKRUKPH-DYEAUMGKSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 21
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 6
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 6
- 244000309466 calf Species 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 235000001543 Corylus americana Nutrition 0.000 description 1
- 240000007582 Corylus avellana Species 0.000 description 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, s obsahem základních surovin, které je charakterizováno tím, že dále obsahuje přídavek allyl sloučeniny, vybraných ze skupiny alliin, allicin, diallylsulfid, diallyldisulfid nebo diallyltrisulfid v koncentracích do 500 mikromol/l.
Description
Řešení se týká modifikace kultivačních médií pro prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro s použitím allyl sloučenin pro jeho přípravu.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že oocyty savců (samičí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost a při následné kultivaci v podmínkách in vitro po dokončení zrání podléhají spontánně řadě procesů, jež je znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze) i v humánní medicíně (asistovaná reprodukce). Nejvýznamnější z procesů je fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů, jež je důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila. Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené a tím stále dochází k velkým ztrátám při používání současných reprodukčních technik.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky odstraňuje kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, s obsahem základních surovin, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že dále obsahuje přídavek allyl sloučenin, vybraných ze skupiny alliin, allicin, diallylsulfid, diallyldisulfid nebo diallyltrisulfid tak, aby se finální koncentrace allyl sloučeniny v kultivačním médiu pohybovala do 500 mikromolií/l.
Kultivační medium podle vynálezu je charakterizováno tím, že obsahuje allyl sloučeniny v koncentracích 20 až 300 mikromolů/l.
Použití allyl sloučenin pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro je dále charakterizováno tím, že se odebrané dozrálé savčí ovocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem allyl sloučenin po dobu 3 až 5 dnů. Poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování). Optimálně se dozrálé savčí oocyty kultivují v kultivačním médiu podle vynálezu až po dobu 5 dnů s allyl sloučeninou. Poté jsou oocyty opláchnuty v kultivačním médiu bez allyl sloučeniny a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Kultivační médium podle vynálezu se používá na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro tak, že se savčí oocyty dozrálé do stádia metafáze II zbaví kumulárních buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium M199 obohacené o 10 % bovinního telecího séra, nebo DMEM) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem allyl sloučenin (např. alliin, allicin, diallylsulfid, diallyldisulfid nebo diallyltrisulfid). V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty opláchnuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o allyl sloučeninu a následně byly kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o allyl sloučeninu. Po ukončení kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez allyl sloučeniny a kultivovány běžným laboratorním postupem.
Původci vynálezu ověřili, že použitím allyl sloučenin pro přípravu kultivačního média podle vynálezu jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například při kultivaci v médiu s alliinem v koncentraci 200 mikromolu/l po dobu tří dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentaci ani lýze, zatímco při kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentovaných oocytů zhruba 25 % a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10 %. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti allyl sloučenin je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je podstatně vyšší.
Při oplození oocytů in vitro hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla samicez nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemenného kance, býka, hřebce), odebrané oocyty rychle ztrácejí na své kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Následující nežádoucí škody v reprodukci savců jsou velké.
Rovněž při oplození oocytů člověka při léčbě neplodnosti metodami asistované reprodukce (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla budoucí matky/nebo jsou tyto oocyty získány po dozrání v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při potížích s odběrem spermatu potenciálního otce), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození a tím i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Negativní následky jsou pak velmi citelné.
Z uvedeného jasně vyplývá, že použití allyl sloučenin k modifikaci běžných kultivačních medií podle vynálezu pro prodloužení kultivace oocytů lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat (např. klonování, in vitro oplození, IVF, ICSI, transgenozi).
Při klonování savců obecně dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplasmy oocytů, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytů významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Při náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro klonování uchovávány v podmínkách in vitro. Přitom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují odebraný oocyt. Pro následný vývoj embrya klonu je nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleací nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použít média obohaceného o allyl sloučeniny. Původci vynálezu bylo zjištěno, že takto použité oocyty nebo cytoplasty (oocyty zbavené enukleací jaderné dědičné informace) jsou opět kvalitnější a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější, než při dosud používaných postupech. To má pro budoucí vývoj v této oblasti dalekosáhlé možnosti využití.
Následující příklady provedení použití allyl sloučenin k modifikaci kultivačních mezdií podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly. Uvedené modifikace kultivačních meZdií byly úspěšně ověřeny v laboratořích České zemědělské univerzity v Praze a ve Výzkumném ústavu živočišné výroby, v.v.i., Praha, CZ.
Lísku Ucnzni vyrta & z u
Příklady ikmvedemť
Příklad 1
Dozrálé prasečí oocyty (300 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o alliin ve výsledné koncetraci 200 mikromolu/l. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez allyl sloučeniny a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez allyl sloučenin, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 70 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití allyl sloučenin pro přípravu kultivačního média podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 2
Dozrálé prasečí oocyty (40 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány v médiu obohaceném o allicin ve výsledné koncentraci 100 mikromoluVI. V tomto médiu byly drženy až do chvíle, kdy z nich byly enukleací připraveny cytoplasty pro následný přenos jader somatických buněk. Po přenosu jader do cytoplastů z takto ošetřených oocytů byl pozorován vývoj do stádia blastocyty v 18 % případů. Pokud byly oocyty nechány před přípravou cytoplastů stejně dlouhou dobu bez allicinu, jejich kvalita se zhoršila natolik, že je nebylo možné pro klonování použít v důsledku vysoké náchylnosti k fragmentaci (zániku programovanou smrtí - apoptózou).
Příklad 3
Dozrálé prasečí oocyty (100 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o diallyltrisulfid ve výsledné koncentraci 40 mikromolu/l. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez allyl sloučeniny a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez allyl sloučenin, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 65 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití allyl sloučenin pro přípravu kultivačního media podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 4
Dozrálé prasečí oocyty (100 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o diallydisulfid ve výsledné koncentraci 80 mikromolp/l. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez allyl sloučeniny a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez allyl sloučenin, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 69 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití allyl sloučenin pro přípravu kultivačního media podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 5
Dozrálé prasečí oocyty (150 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o diallysulfid ve výsledné koncentraci 120 mikromolu/l. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez allyl sloučeniny a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez allyl sloučenin, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 72 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití allyl sloučenin pro přípravu kultivačního media podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za přítomnosti allyl sloučenin, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat i v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Vysvětlení zkratek použitých v textu
IVF
ICSI in vitro oplodnění (in vitro fertization) intracytoplazmatická injekce spermie (intra cytoplasmic sperm injection)
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, s obsahem základních surovin, vyznačující se tím, že dále obsahuje přídavek allyl sloučenin, vybraných ze skupiny alliin, allicin, diallylsulfid, diallyldisulfid nebo diallyltrisulfid v koncentracích do 500 mikromolů/l.
- 2. Kultivační medium podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje allyl sloučeninu v koncentracích 20 až 300 mikromolů/l.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-230A CZ2014230A3 (cs) | 2014-04-04 | 2014-04-04 | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-230A CZ2014230A3 (cs) | 2014-04-04 | 2014-04-04 | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ305178B6 CZ305178B6 (cs) | 2015-05-27 |
| CZ2014230A3 true CZ2014230A3 (cs) | 2015-05-27 |
Family
ID=53266956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-230A CZ2014230A3 (cs) | 2014-04-04 | 2014-04-04 | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2014230A3 (cs) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ302580B6 (cs) * | 2010-07-27 | 2011-07-20 | Výzkumný ústav živocišné výroby, v. v. i. | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení |
-
2014
- 2014-04-04 CZ CZ2014-230A patent/CZ2014230A3/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ305178B6 (cs) | 2015-05-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018109958A (ru) | Культуральная среда | |
| JP2019010094A (ja) | 哺乳動物精子の分離方法、人工授精方法及び体外受精方法 | |
| Parmar et al. | Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and its applications in veterinary sciences: An overview | |
| CZ2007197A3 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Mrowiec et al. | Technical, biological and molecular aspects of somatic cell nuclear transfer–a review | |
| CZ302580B6 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Lee et al. | Optimization of the in vitro fertilization system in pigs | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ302912B6 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2009535A3 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanalu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| Widyastuti et al. | The viabilities of freeze-thaw Pasundan-bull sperms after a short-term exposure to media with different pHs | |
| CZ2006787A3 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| CZ307949B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| Beigh et al. | Role of trichostatin A as reprogramming enhancer on in vitro development of cloned embryos: a review | |
| CZ2014809A3 (cs) | Způsob kultivace in vitro rostoucích oocytů zvířat | |
| CZ2018320A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem B | |
| CZ2018344A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| CZ2014296A3 (cs) | Kultivační medium pro zvýšení kvality savčích oocytů dozrálých v podmínkách in vitro | |
| CZ2017366A3 (cs) | Způsob elimace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S | |
| CZ27174U1 (cs) | Kultivační medium pro zvýšení kvality savčích oocytů dozrálých v podmínkách in vitro | |
| CZ2018300A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem A |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20190404 |