CZ302925B6 - Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro - Google Patents
Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302925B6 CZ302925B6 CZ20090535A CZ2009535A CZ302925B6 CZ 302925 B6 CZ302925 B6 CZ 302925B6 CZ 20090535 A CZ20090535 A CZ 20090535A CZ 2009535 A CZ2009535 A CZ 2009535A CZ 302925 B6 CZ302925 B6 CZ 302925B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- culture medium
- atp
- dependent potassium
- potassium channel
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 69
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 239000004036 potassium channel stimulating agent Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 claims 1
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 abstract description 5
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 abstract description 5
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 229960004042 diazoxide Drugs 0.000 description 3
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- IVVNZDGDKPTYHK-JTQLQIEISA-N 1-cyano-2-[(2s)-3,3-dimethylbutan-2-yl]-3-pyridin-4-ylguanidine Chemical compound CC(C)(C)[C@H](C)N=C(NC#N)NC1=CC=NC=C1 IVVNZDGDKPTYHK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N Minoxidil Chemical compound NC1=[N+]([O-])C(N)=CC(N2CCCCC2)=N1 ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- CTCBPRXHVPZNHB-VQFZJOCSSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate;(2r,3r,4s,5r)-2-(6-aminopurin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O.C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O CTCBPRXHVPZNHB-VQFZJOCSSA-N 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229960003632 minoxidil Drugs 0.000 description 1
- 229960002310 pinacidil Drugs 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Rešení se týká použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro, kdy se odebrané savcí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivacním médiu s prídavkem specifického aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na adenosin trifosfátu (ATP) pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukcí po delší dobu v podmínkách in vitro.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že oocyty savců (samičí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost a při následné kultivaci v podmínkách in vitro po dokončení zrání podléhají spontánně řadě procesů, jež je znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgenoze) i v humánní medicíně (asistovaná reprodukce). Nej významnější z procesuje fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů, jež jc důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila. Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené a tím stále dochází k velkým ztrátám při používání současných reprodukčních technik.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky odstraňuje použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů in vitro podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP.
Použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro se dále vyznačuje tím, že se odebrané dozrálé savčí ovocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem specifického aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP po dobu 3 až 5 dnů. Poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Podstata použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro podle vynálezu dále spočívá v tom, že se dozrálé savčí oocyty kultivují až po dobu 5 dnů se specifickým aktivátorem draslíkových kanálů závislých na ATP. Poté jsou oocyty opláchnuty v kultivačním médiu bez aktivátoru a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro podle vynálezu se výhodně provádí tak, že se savčí oocyty dozrálé do stadia metafáze II zbaví kumulámích buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium Ml99 obohacené o 10 % hmotn. bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul inhibujících draslíkové kanály závislé na ATP (např. minodoxil, diazoxid nebo pinacidil). V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty opláchnuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o aktivátor draslíkových kanálů závislých na ATP a následně byly kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o aktivátor draslí- 1 CZ 302925 Β6 kových kanálů závislých na ATP. Po ukončení kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez aktivátoru a kultivovány běžným laboratorním postupem.
Původci vynálezu ověřili, že použitím aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média podle vynálezu jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například při kultivaci v médiu s 10 mikromolů minodoxilu po dobu tří dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentaci ani lýze, zatímco při kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentovaných oocytů zhruba 25 % hmotn. a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10 % hmotn. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je podstatně vyšší.
Při oplození oocytů in vitro hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroínjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty bud1 odběrem z těla samice nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemen ného kance, býka, hřebce), odebrané oocyty rychle ztrácejí na své kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Následující nežádoucí škody v reprodukci savců jsou velké.
Rovněž při oplození oocytů člověka při léčbě neplodnosti metodami asistované reprodukce (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroínjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla budoucí matky nebo jsou tyto oocyty získány po dozrání v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při potížích s odběrem spermatu potenciálního otce), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození a tím i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Negativní následky jsou pak velmi citelné.
Z uvedeného jasně vyplývá, že použití aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení kultivace oocytů za současné inhibice draslíkových kanálů závislých na ATP podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat (např. klonování, in vitro oplození, IVF, ICSI, transgenozi).
Při klonování savců obecně dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplasmy oocytů, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytů významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Při náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro klonování uchovávány v podmínkách in vitro. Přitom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují odebraný oocyt. Pro následný vývoj embrya klonu je nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleací nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použít média obohaceného o aktivátory draslíkových kanálů závislých na ATP. Původci vynálezu bylo zjištěno, že takto použité oocyty nebo cytoplasmy (oocyty zbavené enukleací jaderné dědičné informace) jsou opět kvalitnější a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější, než při dosud používaných postupech. To má pro budoucí vývoj v této oblasti dalekosáhlé možnosti využití.
Následující příklady provedení použití aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
-2CZ 302925 B6
Příklady provedení
Příklad 1
Dozrálé prasečí oocyty (300 oocytů) ve stadiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 500 nM aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP minoxidilu. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je io vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez aktivátoru a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez draslíkových kanálů závislých na ATP, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru i5 70 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %),
Při ověřování použití aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 2
Dozrálé prasečí oocyty (40 oocytů) ve stadiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány v médiu obohaceném o 20 μΜ aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP diazoxidu. V tomto médiu byly drženy až do chvíle, kdy z nich byly enukleací připraveny cytoplasty pro následný přenos jader somatických buněk Po přenosu jader do cytoplastů z takto ošetřených oocytů byl pozorován vývoj do stadia blastocyty v 18 % případů. Pokud byly oocyty jo nechány před přípravou cytoplastů stejně dlouhou dobu bez aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP diazoxidu, jejích kvalita se zhoršila natolik, že je nebylo možné pro klonování použít v důsledku vysoké náchylnosti k fragmentaci (zániku programovanou smrtí - apoptózou).
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za současné inhibice draslíkových kanálů závislých na ATP, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat i v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Vysvětlení zkratek použitých v textu:
ATP adenosin trifosfát
IVF in vitro oplodnění (in vitro fertilization)
ICSI intracytoplazmatická injekce spermie (intra cytoplasmic sperm injection)
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, kdy se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP.
- 2. Použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média, podle nároku I, kdy sc odebrané dozrálé savčí oocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem aktivátoru draslíkových kanálů závislých na ATP po dobu 3 až 5 dnů, poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem, případně jsou přeneseny do čerstvě připraveného kultivačního média s aktivátorem pro kultivaci dalších 1 až 3 dnů.
- 3. Použití aktivátorů draslíkových kanálů závislých na ATP pro přípravu kultivačního média, podle nároku 1, kdy se odebrané dozrálé savčí oocyty kultivují in vitro po dobu až 5 dnů s aktivátory draslíkových kanálů závislých na ATP, poté se po případném opláchnutí kultivačním médiem oocyty přenesou do čerstvě připraveného kultivačního média a je s nimi nakládáno běžným laboratorním postupem.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090535A CZ302925B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090535A CZ302925B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2009535A3 CZ2009535A3 (cs) | 2011-02-23 |
| CZ302925B6 true CZ302925B6 (cs) | 2012-01-18 |
Family
ID=43602679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090535A CZ302925B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ302925B6 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS229219B1 (cs) * | 1982-11-30 | 1984-06-18 | Moravec Josef | Zařízení pro vyklápění palet s drobným materiálem |
| CZ297528B6 (cs) * | 2005-06-10 | 2007-01-03 | Výzkumný ústav živočišné výroby | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
| CZ299271B6 (cs) * | 2007-03-14 | 2008-06-04 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
-
2009
- 2009-08-10 CZ CZ20090535A patent/CZ302925B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS229219B1 (cs) * | 1982-11-30 | 1984-06-18 | Moravec Josef | Zařízení pro vyklápění palet s drobným materiálem |
| CZ297528B6 (cs) * | 2005-06-10 | 2007-01-03 | Výzkumný ústav živočišné výroby | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
| CZ299271B6 (cs) * | 2007-03-14 | 2008-06-04 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Lauritzen I. et al.: " The Potassium Channel Opener (a)-Cromakalim Prevents Glutamate-Induced Cell Death in Hippocampal Neurons", J. Neurochem., Vol. 69, 1570-1579, 1997 * |
| Nakaya Y et al.: "Effect of minoxid sulfate and pinacidil on single potassium channel.....", J. Dermatol. Science, Vol. 7(1), 104-108, 1994 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2009535A3 (cs) | 2011-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018109958A (ru) | Культуральная среда | |
| JP5439677B2 (ja) | 透明帯が菲薄化又は除去された哺乳動物卵又は胚を調製するための方法及び培地、該方法により調製された哺乳動物卵を用いた受精方法 | |
| Kikuchi et al. | Contribution of in vitro systems to preservation and utilization of porcine genetic resources | |
| CN112501114A (zh) | 提高牛体外受精效率的方法 | |
| US20080268419A1 (en) | Supplementation for Embryo and/or Cell Manipulation Media | |
| CN112322579B (zh) | 牛体外受精使用的培养液和提高牛体外受精的方法 | |
| Parmar et al. | Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and its applications in veterinary sciences: An overview | |
| Pope | Thirty years of assisted reproductive technology in the domestic cat: A selected summary | |
| CZ299271B6 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ302580B6 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CZ302925B6 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Nakagawa et al. | Improvement of survivability and developmental ability in vitrified rat oocytes | |
| CZ302912B6 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Beebe et al. | Development of an improved porcine embryo culture medium for cloning, transgenesis and embryonic stem cell isolation | |
| CZ299219B6 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Wang et al. | Injection of frozen-thawed porcine first polar bodies into enucleated oocytes results in fertilization and embryonic development | |
| Yu et al. | Interspecies embryo reconstruction in Tibetan antelope Pantholops hodgsonii by handmade cloning | |
| Krivokharchenko et al. | Fertilization and subsequent development of cattle oocytes after reduced incubation with spermatozoa | |
| Mohyuddin et al. | Recent advances in oocytes in-vitro maturation process in bovines. | |
| Parnpai et al. | Cryopreservation of buffalo oocytes. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160810 |