CZ302912B6 - Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro - Google Patents
Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302912B6 CZ302912B6 CZ20090536A CZ2009536A CZ302912B6 CZ 302912 B6 CZ302912 B6 CZ 302912B6 CZ 20090536 A CZ20090536 A CZ 20090536A CZ 2009536 A CZ2009536 A CZ 2009536A CZ 302912 B6 CZ302912 B6 CZ 302912B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- culture medium
- calcium channel
- type
- vitro
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 69
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 229940125400 channel inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 13
- 102000004016 L-Type Calcium Channels Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000420 L-Type Calcium Channels Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 5
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-{[2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethyl](methyl)amino}-2-(propan-2-yl)pentanenitrile Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CCN(C)CCCC(C#N)(C(C)C)C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 229960001722 verapamil Drugs 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- ZDXUKAKRHYTAKV-UHFFFAOYSA-N lercanidipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC(C)(C)CN(C)CCC(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)C1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 ZDXUKAKRHYTAKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004294 lercanidipine Drugs 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Rešení se týká použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro, kdy se odebrané savcí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivacním médiu s prídavkem specifického inhibitoru vápníkových kanálu typu L.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukcí po delší dobu v podmínkách in vitro.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že oocyty savců (samičí pohlavní buňky) mají po vyjmutí z těla samice omezenou životnost a pri následné kultivaci v podmínkách in vitro po dokončení zrání podléhají spontánně řadě procesů, ježje znehodnocují pro další využití v reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (klonování, in vitro oplození, transgeneze) i v humánní medicíně (asistovaná reprodukce). Nej významnější z procesů je fragmentace oocytů, jež je projevem apoptózy, a lýza oocytů jež je důsledkem nekrózy. Proto jsou hledána ošetření, která by těmto procesům zabránila. Možnosti potlačit apoptózu a nekrózu oocytů jsou zatím ale velmi omezené a tím stále dochází k velkým ztrátám pri používání současných reprodukčních technik.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky odstraňuje použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů ín vitro podle vynálezu, jehož podstata spočívá vtom, že se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického inhibitoru vápníkových kanálů typu L.
Použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro je dále charakterizováno tím, že se odebrané dozrálé savčí oocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem specifického inhibitoru vápníkových kanálů typu L po dobu 3 až 5 dnů. Poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Podstata použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro podle vynálezu dále spočívá v tom, že se dozrálé savčí oocyty kultivují až po dobu 5 dnů se specifickým inhibitorem vápníkových kanálů typu L. Poté jsou oocyty opláchnuty v kultivačním médiu bez inhibitoru a použity pro reprodukční biotechnologie (např. partenogenetickou aktivaci, oplození in vitro, pro přípravu cytoplastů k přenosu jader somatických buněk, tj. klonování).
Použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti odebraných savčích oocytů uchovávaných pro reprodukci po delší dobu v podmínkách in vitro podle vynálezu se výhodně provádí tak, že se savčí oocyty dozrálé do stádia metafáze II zbaví kumulámích buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium Ml99 obohacené o 10 % hmotn. bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul inhibuj ících vápníkové kanály typu L (např. verapamil, lercanidipin). V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 3 dnů. Pro další kultivaci je výhodné, aby po 3 dnech kultivace byly oocyty opláchnuty v čerstvě připraveném médiu obohaceném o inhibitor vápníkových kanálů typu L a následně byly kultivovány v čerstvě připraveném médiu obohaceném o inhibitor vápníkových kanálů typu L. Po ukončení
- 1 CZ 302912 B6 kultivace s cílem prodloužit životaschopnost oocytů jsou oocyty před dalším použitím propláchnuty v médiu bez inhibitoru a kultivovány běžným laboratorním postupem.
Původci vynálezu ověřili, že použitím inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média podle vynálezu jsou u oocytů kultivovaných po dlouhou dobu v podmínkách in vitro potlačeny procesy fragmentace a lýzy. Například při kultivaci v médiu s 40 mikromolů verapamilu po dobu tří dnů nedochází u oocytů prasete vůbec k fragmentací ani lýze, zatímco při kultivaci standardním způsobem dosahuje za stejnou dobu podíl fragmentováných oocytů zhruba 25 % a podíl lyžovaných oocytů zhruba 10 %. Výsledkem kultivace oocytů v přítomnosti inhibitorů vápníkových kanálů typu L je tedy eliminace nežádoucích procesů fragmentace a lýzy oocytů. Podíl oocytů, které si uchovávají životaschopnost, je podstatně vyšší.
Při oplození oocytů in vitro hospodářských zvířat (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mi kro injekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla samice, nebo po kultivaci v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např. při zpoždění dodávky spermatu vybraného plemeníka, např. plemen né ho kance, býka, hřebce), odebrané oocyty rychle ztrácejí na své kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Následující nežádoucí Škody v reprodukci savců jsou velké.
Rovněž při oplození oocytů člověka při léčbě neplodnosti metodami asistované reprodukce (ať již metodou kultivace oocytů se spermiemi nebo metodou mikroinjekce spermie do cytoplasmy oocytů) jsou získávány zralé oocyty buď odběrem z těla budoucí matky, nebo jsou tyto oocyty získány po dozrání v podmínkách in vitro. Pokud se ale z jakéhokoli důvodu nezdaří tyto oocyty okamžitě oplodnit (např, při potížích s odběrem spermatu potenciálního otce), oocyty rychle ztrácejí na kvalitě, procházejí procesem stárnutí, což snižuje pravděpodobnost úspěšného oplození a tím i úspěšného a zdravého vývoje zárodku. Negativní následky jsou pak velmi citelné.
Z uvedeného jasně vyplývá, že použití inhibitoru vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení kultivace oocytů za současné inhibice vápníkových kanálů typu L podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích u hospodářských zvířat (např. klonování, in vitro oplození, IVF, ICSI, transgenezi).
Při klonování savců obecně dochází ke vnášení jaderné dědičné informace somatické buňky do cytoplasmy oocytů, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Kvalita použitého oocytů významně ovlivňuje úspěšnost celého postupu klonování. Při náročném postupu přenosu jsou oocyty připravené pro klonování uchovávány v podmínkách in vitro. Přitom v nich ale samovolně probíhají procesy stárnutí, které poškozují odebraný oocyt. Pro následný vývoj embrya klonuje nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Pro takové dočasné uchovávání oocytů před enukleaci nebo i pro uchovávání enukleovaných oocytů před vlastním přenosem jádra somatické buňky lze s výhodou použit média obohaceného o inhibitory vápníkových kanálů typu L. Původci vynálezu bylo zjištěno, že takto použité oocyty nebo cytoplasty (oocyty zbavené enukleaci jaderné dědičné informace) jsou opět kvalitnější a embrya klonů, která jsou z nich vytvořena přenosem jader somatických buněk, jsou životaschopnější, než pri dosud používaných postupech. To má pro budoucí vývoj v této oblasti dalekosáhlé možnosti využití.
Následující příklady provedení použití inhibitoru vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
-2CZ 302912 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Dozrálé prasečí oocyty (250 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány před oplozením v médiu obohaceném o 40 μΜ inhibitoru vápníkových kanálů typu L verapamilu. V tomto kultivačním médiu byly kultivovány až do chvíle, kdy je vše připraveno k jejich oplození. Pak byly oocyty opláchnuty médiem bez inhibitoru a následně podrobeny obvyklým procedurám potřebným k oplození in vitro. Takto ošetřené oocyty měly vyšší kvalitu než oocyty, které by byly před oplozením kultivovány podle dosavadních postupů bez inhibitorů vápníkových kanálů typu L, a i vzniklá embrya byla životaschopnější. Úspěšnost reprodukce s oocyty kultivovanými podle vynálezu byla při opakovaných pokusech v průměru 70 % (u reprodukce podle dosavadního způsobu zacházení s oocyty bývá cca 45 %).
Při ověřování použití inhibitoru vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média podle vynálezu na prodloužení životnosti odebraných oocytů in vitro u telat, hříbat, jehňat a kůzlat bylo původci vynálezu potvrzeno zvýšení životaschopnosti oocytů v průměru o 20 % oproti současně používaným způsobům reprodukce hospodářských zvířat.
Příklad 2
Dozrálé prasečí oocyty (40 oocytů) ve stádiu metafáze II byly po dozrání v podmínkách in vitro kultivovány v médiu obohaceném o 50 μΜ inhibitoru vápníkových kanálů typu L lercanidipinu. V tomto médiu byly drženy až do chvíle, kdy z nich byly enukleací připraveny cytoplasty pro následný přenos jader somatických buněk. Po přenosu jader do cytoplastů z takto ošetřených oocytů byl pozorován vývoj do stádia blastocyty v 18 % případů. Pokud byly oocyty nechány před přípravou cytoplastů stejně dlouhou dobu bez inhibitoru vápníkových kanálů typu L lercanidipinu, jejich kvalita se zhoršila natolik, že je nebylo možné pro klonování použít v důsledku vysoké náchylnosti k fragmentaci (zániku programovanou smrtí - apoptózou).
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká prodlouženého uchovávání savčích oocytů v podmínkách in vitro za současné inhibice vápníkových kanálů typu L, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích i hospodářských zvířat i v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Vysvětlení zkratek použitých v textu:
IVF in vitro oplodnění (in vitro fertilization)
ICSI intracytoplazmatická injekce spermie (intra cytoplasmic sperm injection)
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro, kdy se odebrané savčí oocyty kultivují v podmínkách in vitro v kultivačním médiu s přídavkem specifického inhibitoru vápníkových kanálů typu L.
- 2. Použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média, podle nároku 1, kdy se odebrané dozrálé savčí oocyty in vitro kultivují před oplodněním v kultivačním médiu s obsahem inhibitoru vápníkových kanálů typu L po dobu 3 až 5 dnů, poté jsou oocyty opláchnuty kultivačním médiem, případně jsou přeneseny do čerstvě připraveného kultivačního médía5 s inhibitorem pro kultivaci po další l až 3 dny.
- 3. Použití inhibitorů vápníkových kanálů typu L pro přípravu kultivačního média, podle nároku 1, kdy se odebrané dozrálé savčí oocyty kultivují in vitro po dobu až 5 dnů s inhibitory vápníkových kanálů typu L, poté se po případném opláchnutí kultivačním médiem oocyty přenesou do io čerstvě připraveného kultivačního média a je s nimi nakládáno běžným laboratorním postupem.15 --------------------------------Konec dokumentu
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090536A CZ302912B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090536A CZ302912B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2009536A3 CZ2009536A3 (cs) | 2011-02-23 |
| CZ302912B6 true CZ302912B6 (cs) | 2012-01-18 |
Family
ID=43602680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090536A CZ302912B6 (cs) | 2009-08-10 | 2009-08-10 | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ302912B6 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS229219B1 (cs) * | 1982-11-30 | 1984-06-18 | Moravec Josef | Zařízení pro vyklápění palet s drobným materiálem |
| CZ297528B6 (cs) * | 2005-06-10 | 2007-01-03 | Výzkumný ústav živočišné výroby | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
| CZ299271B6 (cs) * | 2007-03-14 | 2008-06-04 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
-
2009
- 2009-08-10 CZ CZ20090536A patent/CZ302912B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS229219B1 (cs) * | 1982-11-30 | 1984-06-18 | Moravec Josef | Zařízení pro vyklápění palet s drobným materiálem |
| CZ297528B6 (cs) * | 2005-06-10 | 2007-01-03 | Výzkumný ústav živočišné výroby | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro |
| CZ299271B6 (cs) * | 2007-03-14 | 2008-06-04 | Ceská zemedelská univerzita v Praze | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Petr J. et al. : "Cyclopiazonic acid induces accelerated progress of meiosis in pig oocytes.", Zygote, Vol. 5(3), 193-205, 1997 * |
| Tosti E.: "Calcium ion currents mediating oocyte maturation eventsö, Reproductive Biology and Endocrinology, Vol. 4, p. 26, 2006 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2009536A3 (cs) | 2011-02-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018109958A (ru) | Культуральная среда | |
| CN111269876A (zh) | 活体采集牛卵母细胞进行体外受精和胚胎培养的方法 | |
| CN112501114A (zh) | 提高牛体外受精效率的方法 | |
| CN112980778B (zh) | 牛体外受精胚胎培养和冻存的方法 | |
| CN108728401A (zh) | 牛卵母细胞体外受精胚胎培养的方法和所用的培养基 | |
| CN112322579B (zh) | 牛体外受精使用的培养液和提高牛体外受精的方法 | |
| CN113151160B (zh) | 提高牛体外受精效率的方法和所用的冻存液和解冻液 | |
| Pope | Thirty years of assisted reproductive technology in the domestic cat: A selected summary | |
| Parmar et al. | Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and its applications in veterinary sciences: An overview | |
| CZ299271B6 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ302912B6 (cs) | Použití inhibitoru vápníkových kanálu typu L pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2010579A3 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| CZ297528B6 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| Hisey et al. | Genetic manipulation of the equine oocyte and embryo | |
| Beebe et al. | Adding essential amino acids at a low concentration improves the development of in vitro fertilized porcine embryos | |
| CZ302925B6 (cs) | Použití aktivátoru draslíkových kanálu závislých na ATP pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ2007763A3 (cs) | Použití inhibitoru proteasomu pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| CZ21336U1 (cs) | Kultivační médium na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2014230A3 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ2006787A3 (cs) | Zpusob prodloužení životnosti savcích oocytu v podmínkách in vitro | |
| CZ26979U1 (cs) | Kultivační médium pro prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| KR102027561B1 (ko) | 실라짓 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 체외수정용 배지 조성물 및 이를 이용한 체외수정 방법 | |
| US10485584B2 (en) | Supplement for cultivation of mammalian embryos | |
| Mohyuddin | RECENT ADVANCES IN OOCYTES IN-VITRO MATURATION PROCESS IN BOVINES | |
| CZ307949B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150810 |