CZ298120B6

CZ298120B6 - Heterocyklické thioestery nebo ketony

Info

Publication number: CZ298120B6
Application number: CZ0055699A
Authority: CZ
Inventors: S. Hamilton@Gregory; Li@Jia-He
Original assignee: Gpi Nil Holdings, Inc.
Priority date: 1996-09-25
Filing date: 1997-09-09
Publication date: 2007-06-27
Also published as: PE110498A1; ATE380791T1; NZ334315A; BR9713202A; CN1275977A; KR20000048591A; ATE310722T1; JP2001506231A; IL167896A; CA2263927C; DE69734720T2; US5786378A; PL194249B1; WO1998013343A1; EP1626043B1; EP1900726A1; CN1285575C; CA2263927A1; BG103233A; CZ55699A3

Abstract

Heterocyklické thioestery nebo ketony obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky prijatelná sul, kde: Z je vybrán ze skupiny zahrnující S, CH.sub.2.n., CHR.sub.1.n. a C(R.sub.1.n.).sub.2.n., R.sub.1.n. je C.sub.2.n.-C.sub.5.n. alkyl s prímým nebo rozvetveným retezcem, substituovaný Ar.sub.1.n., nebo C.sub.2.n.-C.sub.5.n. alkenyl s prímým nebo rozvetveným retezcem, substituovaný Ar.sub.1.n., R.sub.2.n. je vybrán ze skupiny zahrnující: - C-C.sub.9.n. alkyl s prímým nebo rozvetveným retezcem, - C.sub.2.n.-C.sub.9.n. alkenyl s prímým nebo rozvetveným retezcem, - C.sub.3.n.-C.sub.8.n. cykloalkyl, - C.sub.5.n.-C.sub.7.n. cykloalkenyl, a- skupinu Ar.sub.1.n., kde Ar.sub.1.n. je fenyl,benzyl, pyridyl, fluorenyl, thioindolyl nebo naftyl, pricemz uvedený Ar.sub.1.n. muze být nesubstituovaný nebo substituovaný v jedné nebo více polohách. Slouceniny jsou vhodné pro prípravu léciva s neuronální aktivitou.

Description

Helcroeyklieké thioestery nebo ketony obecného vzorce I nebo jejich lármaceulieky přijatelná sul. kde:

Z je v v brán zc skupiny zahrnující S. Cl L. CHRj a

C(R_SU.

R[ je CS-C; alky I s přímým nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný z\r_L. nebo C₂-C₅ alkeny I s přímým nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný

Ar,.

R_? je vybrán ze skupiny zahrnující:

- C-C.; alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem.

- C.-C.’,, alkeny I s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C₃-C_s cykloalky I.

- C₅-C₇ cykloalkenyl. a

- skupinu Ar,, kde Ar, je lenyl, benzyl, pyridyl. Iluoreny 1. thioindolyl nebo naftyI. přičemž uvedený Ar, muže byl nesubstituovaný nebo substituovaný v jedné nebo více polohách. Sloučeniny jsou vhodné pro přípravu léčiva s ncuronálni aktivitou.

Heterocyklické thioestery nebo ketony

Oblast techniky

Vynález se týká neurotropních heterocyklických thioesterů nebo ketonů s nízkou molekulovou hmotností a malou molekulou, které mají afinitu k imunofí línům typu FKBP a použití těchto sloučenin jako inhibitorů enzymové aktivity spojené s imunofilinovými proteiny, zvláště s enzymovou aktivitou peptidy 1 prolylizomerázy nebo rotamázy.

Dosavadní stav techniky

Termínem imunofilin se označuje skupina proteinů, které mají funkci receptorů pro hlavní imunosupresiva, jako jsou cyklosporin A (CsA), FK 506 a rapamycin. Známými třídami imunofilinů jsou cyklofiliny a proteiny FK 506, které mají schopnost specifické vazby, nebo sloučeniny zkráceně nazývané FKBP. Cyklosporin A se váže k cyklofilinú A, zatímco Fk 506 a rapamycin se váží k FKBP 12. Tyto komplexy imunofilinů s léčivými látkami jsou tak ovlivnitelné kontaktem s různými signálními transdukčními systémy uvnitř buněk, zvláště s imunitním a nervovým systémem,.^ „ ___... „ ~ _ ..h. ______ _; ~.. . __

O imunofilinech je známo, že mají enzymovou aktivitu peptidyl-prolylizomerázy (Plazy) nebo rotamázy. Bylo zjištěno, že enzymová aktivita rotamázy hraje roli při katalýze vzájemné přeměny cis a trans izomerů výchozích peptidů a proteinů, ze kterých se připravují imunofilinové proteiny.

Imunofiliny byly původně objeveny a studovány v imunitní tkáni. Odborníci se domnívali, že inhibice rotamázové aktivity imunofilinů vede k inhibici proliferace T-buněk, což způsobuje imunosupresivní účinek imunosupresiv jako je cyklosporin A, FK 506 a rapamycin. Další studie ukázaly, že inhibice rotamázové aktivity není sama o sobě příčinou imunosupresivní aktivity. Viz Schreiber et al., Scince, 1990, vol. 250, pp. 556-559. Místo toho se zdá, že imunosupresivita nachází v komplexu imunosupresiva s imunofí línem pouze zdroj své energie. Bylo prokázáno, že mechanizmus účinku komplexů imunofilinů s léčivem je založen na interakci těchto komplexů stemámími proteinovými cíly. Viz Schreiber et al., Cell, 1991, vol. 66, pp. 807-815. V případě komplexů FKBP-FK506 a cyklofilin-CsA je mechanizmus založen na tom, že tyto komplexy imunofilinů a léčiva váží enzym kalcineurin a inhibují signalizaci receptorů T-buněk, které u těchto T-buněk spouští proliferaci. Podobně komplex imunofilinů s léčivem FKBP-rapamycin má schopnost interakci s proteinem RAFT1/FRAP a tím inhibuje signalizací receptorů IL-2.

Je známo, že imunofiliny jsou přítomny ve vysokých koncentracích v centrálním nervovém systému. Jejich přítomnost v centrálním nervovém systému je 10 až 50krát vyšší než v imunitním systému. Ukazuje se, že v nervové tkáni mají imunofiliny vliv na syntézu oxidů dusíku, uvolňování neuřotransmiterů a šíření nervového vzduchu.

Je známo, že pikomolámí koncentrace imunosupresiv, jako jsou FK 506 nebo rapamycin, stimulují růst neuritů buněk PC 12 a smyslových neuronů, zvláště v dorzálních kořenových gangliových buňkách (DRG). Viz Lyons etal. Proč. ofNatl. Acad. sci, 1949, vol 91, pp. 3191-3195. Při všech experimentech na zvířatech bylo zjištěno, že FK 506 podporuje regeneraci nervů po povrchovém zranění nervů.

V článku autorů Holt a kol, „Structure-Activity studies of synthetic FKBP ligands as peptidyprolyl izomerase inhibitors“ (Biorganic & Medicinal Chemistry Letters, vol 4, No. 2, pp. 315320, 1994) se uvádí řada sloučenin, které mohou sloužit jako užitečné nástroje při studiu vnitrobuněčných funkční imunofilinů jako rotamáz a které rovněž představují základ pro návrh a syntézu imunosupresiv s duální doménou, které působí přes stejné biochemické mechanismy jako .20,

FK506 a/nebo rapamycin. Nejsou zde informace o neurotropním užití popisovaných sloučenin.|

Přitom imunosupresivní účinky jsou pro účely tohoto předloženého vynálezu nežádoucí.1

Překvapivě bylo zjištěno, že některé sloučeniny s vysokou afinitou k FKBP jsou potenciálně| účinné inhibitory rotamázy, vykazují vynikající neurotropní účinky a přitom nemají imunosupresivní účinky. Tato zjištění vedou k možnosti použití inhibitorů rotamázy pro léčení různých periferních neuropatií a pro podporu regenerace neuronů v centrálním nervovém systému (CNS). Studie ukázaly, že neurodegenerativní choroby, jako jsou Alzheimerova a Parkinsonova choroba amyotrofická laterální skleróza (ALS), se mohou vyskytnout jak následek ztráty nebo snížení dostupnosti neutropních látek specifických pro určitou populaci neuronů, které přestaly normálně fungovat.

Bylo identifikováno několik neurotropních faktorů, které mají vliv na některé konkrétní populace neuronů v centrálním nervovém systému. Například existuje hypotéza, ze Alzheimerova choroba vzniká za snížení hladiny nervového růstového faktoru (NGF) nebo z jeho vymizení. Proto bylo navrženo léčit pacienty trpící SDAT podáváním exogenního nervového růstového faktoru nebo jiných neurotropních proteinů, jako jsou růstový faktor získaný z mozku, gliální růstový faktor, ciliámí neurotropní faktor a neurotropin-3. Od této terapie se očekává zvýšení schopnosti přetíží degenerující populace neuronů.

Klinické aplikaci těchto proteinů při různých stavech neurologických chorob brání nesnadné pronikání a nízká biologická přístupnost velkých proteinů do cílových míst v centrálním nervovém systému. Oproti tomu mají imunosupresiva s neurotropní aktivitou relativně' malé molekuly,. . vynikající biologickou přístupnost a specifitu. Nicméně, pokud jsou imunosupresiva podávána _tdlouhodobě, projevuje se řada potenciálně vážných vedlejších účinků včetně toxicity pro ledviny;, narušení filtrace v glomerulách a nevratné intersticiální fibrózy (Kopp et al., J. Ám. Soc. Nephrol,. 1991, 1:162). Dále se mohou projevit neurologické potíže jako je bezděčný třes nebo nespecifická cerebrální angína, například s projevy nelokalizovaných bolestí hlavy (De Groen wet al,. N. EngL, J. med., 1987, 317:861), a dále vaskulámí hypertenze skomplikacemi, které zní plynou; (Kahan et al., V EngL J. Med,, 1989,321:1725).

Odstranění vedlejších příznaků, spojených s použitím imunosupresiv, řeší vynález použití neimuu nosupresivních sloučenin s malou molekulou inhibitoru FKBP rotamázy, které zajistí zvýšení růstu nervů a podporu růstu a regenerace neuronů při rozličných neuropatologických situacích, kde je potřebná obnova neuronů jako jsou: poškození periferních nervů způsobené zraněním nebo nemocí, například cukrovkou, dále fyzické poškození centrálního nervového systému (míchy a mozku), poškození mozku spojené s úderem a neurologické poruchy při nichž dochází k neurodegeneraci jako je Parkinsonova choroba, SĎAT (Alzheimerova choroba) a amyotrofická laterální skleróza.

i

Podstata vynálezu

Tento vynálezu se zabývá neurotropními sloučeninami s malou molekulou a nízkou molekulovou hmotností, které mají afinitu k imunofilínům typu FKBP. Jakmile jsou vázány na tyto proteiny, jsou neurotropní sloučeniny účinnými inhibitory enzymové aktivity spojené s imunofi li novým i proteiny, zvláště enzymové aktivity peptidyl-proly 1 izomerázy nebo rotamázy. Klíčovým znakem sloučenin podle vynálezu je to, že nemají žádné výrazné imunosupresivní působení kromě své neurotropní aktivity.

Vynález se týká heterocyklických thioesterů nebo ketonů obecného vzorce 1:

nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, kde:

Z je vybrán ze skupiny zahrnující S, CH₂, CHR^ a C(Ri)₂;

Ri je C₂—C5 alkyl s přímý nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný Ar_t nebo C2-C5 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný Ar₍ nebo C₂-C₅ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem substituovaný Αη;

'RJje vybrán ze skupiny zahrnující: '

- C1-C9 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C₂-C$ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C₃-C_s cykloalkyl,

- C5-C7 cykloalkenyl, a

- skupinu Αη, kde Αη je fenyl, benzyl, pyridyl, fluorenyl, thioindolyl nebo naftyl, přičemž uvedený Ar, může být nesubstituovaný nebo substituovaný v jedné nebo více polohách halogenem, hydroxyskupinou, trifluormethylem, nitroskupinou, C_t-alkylem s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C2-C6 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C|-C₄ alkoxyskupinou, C₂-C₄ alkenyloxyskupinou, fenoxyskupinou, benzyloxyskupinou, aminoskupinou nebo jejich kombinací.

Z je CHR] nebo CH₂.

Předmětem vynálezu je dále farmaceutický prostředek, obsahující (i) účinné množství heterocyklického thioesteru nebo ketonu obecného vzorce (I) pro vyvolání neuronální aktivity; a (ii) farmaceuticky přijatelný nosič.

Vynález dále řeší způsob ovlivnění neuronální aktivity u zvířat podáváním účinného množství sloučeniny vzorce II.

Popis vyobrazení

Obr. 1(A) je reprezentativní mikrofotografie neošetřených smyslových neuronů.

Obr. 1(B) je reprezentativní mikrofotografie neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podroben sloučeninou 1 v koncentraci 10 pM,

Obr. 1(C) je reprezentativní mikrofotografie neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 1 v koncentraci 1 nM.

Obr. 1(D) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 1 v koncentraci 1 μΜ).

Obr. 2(A) je reprezentativní mikrofotografíe neošetřených smyslových neuronů.

Obr. 2(B) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 9 v koncentraci 10 pM.

Obr. 2(C) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 9 v koncentraci 1 nM.

Obr. 2(D) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 9 v koncentraci 100 nM:

Obr. 3(A) je reprezentativní mikrofotografíe neošetřených smyslových neuronů.

Obr. 3(B) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 10 v koncentraci 10 pM.

Obr. 3(C) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpoře sloučeninou 9 v koncentraci lnM.

Obr. 3(D) je reprezentativní mikrofotografíe neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninou 9 v koncentraci 100 nM.

Obr, 4 je grafickým kvantitativním znázorněním stupně regenerace TH-pozitivních dopa * ~ minergických neuronů Vstriatu u zvířat, kterým byly podáványsloučeniny 1, 9 a 10.

Podrobný popis vynálezu

Definice důležitých pojmů:

Termín „alkyl“ znamená nasycený uhlovodíkový zbytek s rovným nebo rozvětveným řetězcem, obsahujícím 1 až 6 atomů, jako jsou methyl, ethyl, propyl, izo-propyl, butyl, izo-butyl, tercbutyl. n-pentyl, n-hexyl a podobně, pokud není stanoveno jinak.

Termín „alkoxy“ znamená skupinu -OR, kde R je alkyl, jak již byl definován. Výhodně je R.

nasycený uhlovodík s rovným nebo rozvětveným řetězcem obsahujícím 1 až 3 uhlíkové atomy.

Termín „halogen“ znamená chlor, fluor, brom nebo jod, pokud není uvedeno jinak.

Termín „izomery“ označuje rozdílné sloučeniny, které mají stejný molekulární vzorec. „Stereo35 izomery“ jsou izomeiy, které se liší jen způsobem, jakým jsou atomy vůči sobě umístěny v prostoru. „Enantiomery“ znamená pár stereoizomerů, jejichž tvar molekul je takový, že jeden je nezaměnitelným zrcadlovým obrazem druhého, „Diastereoizomery“ jsou stereoizomery, jejichž molekula není zrcadlovým obrazem druhého. „Racemická směs“ znamená směs obsahující stejná množství jednotlivých enantiomerů. „Neracemická směs“ je směs, obsahující nestejná množství 40 jednotlivých enantiomerů nebo stereoizomerů.

„Farmaceuticky přijatelná sůl“ znamená sůl sloučeniny podle vynálezu, která vykazuje žádoucí farmaceutickou aktivitu a zároveň není biologicky ani jinak nežádoucí. Tato sůl může být odvozena od anorganických či organických kyselin, takže může jít o octan, adipát, alginát, aspartát, 45 benzoát, benzen sul fonát, hydrogensíran, butyrát, citrát, kafrát, kafrosulfonát, cyklopentanpropionát, diglukonát, dodecylsíran, ethansulfonát, fumarát, glukoheptanát, glycerfosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethan sul fonát, mléčnan, malonát, methansulfonát, 2-naftylsulfonát, nikotinát, šťavelan, thiokyanát, tosylát a undekanoát. Příkladem solí se zásadami jsou amonné soli, soli alkalických kovů, jako jsou sodné a draselné 50 soli, soli kovů alkalických zemin, jako jsou vápenaté a horečnaté soli, soli s organickými zásadami jako jsou dicyklohexylamínové soli, N-methyl-D-glukaminové soli a soli s aminokyselinami jako jsou arginin a lysin. Skupiny obsahující zásaditý dusík mohou být kvartemizová-4CZ 298120 B6 ny působením činidel, mezi která patří: nižší halogenované alkyly jako jsou methyl, ethyl, propylj a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty jako je dímethyl, diethyl, dibutyl a diamylsulfáty; halogenované uhlovodíky s dlouhými řetězci, jako jsou decyl, lautyl, myristyl a stearyl chloridy, bromidy a jodidy, a halogenované aralkyly. jako jsou benzyl a fenylethylbromidy.

5‘.t

Termín „fenyl“ označuje všechny možné izomery fenyklového radikálu, který může být popři-J pádě jednou či vícenásobně substituován alespoň jednou skupinou, vybranou ze souboru zahrnu-'í jícího alkyl, alkoxy, hydroxy, halo a hyloalkyl.

io Termín „léčení“ znamená:

(i) prevenci choroby, poruchy nebo stavu živočicha, který může mít pro v tomto směru dispozici, ale podle diagnózy je dosud zdráv, (ii) zpomalení průběhu choroby, poruchy nebo stavu, tzn. zabránění jejímu rozvoji, (iii) zbavení pacienta choroby, poruchy nebo stavu, tzn. vyvolání regrese nemoci, poruchy a/nebo potíží.

Sloučeniny podle vynálezu

20^*·Neurotřopní'sloučeniny podle'vynálezu s nízkoumolekúlovoď hmotností a málou*mólekúlovoů' ’ inhibící FKBP mají afinitu k imunofilinům typu FKBP, jako je FKBP 12. když se neurotropní sloučeniny podle vynálezu navázaly na imunofilin typu FKBP, bylo zjištěno, že inhibují aktivitu cis-trans izomerázy prolylpeptidyl nebo rotamázy, dále inhibují aktivitu vázajícího proteinu, a ý neočekávaně podporují růst neuritů.

Výhodným provedením vynálezu je sloučenina obecného vzorce:

nebo jej í farmaceuticky přijatelná sůl, kde:

Z je vybrán ze skupiny zahrnující S, CH₂, CHR_t a C(R|)₂;

Ri je C₂-C₅ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný Αη nebo C₂-C₅ alkenyl 35 s přímým nebo rozvětveným řetězcem substituovaný Αη;

R₂ je vybrán ze skupiny zahrnující:

- Ci-C₉ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C2--C9 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C3—Cg cykloalkyl,

- Cs^-C? cykloalkenyl, a

-skupinu Αη, kde Αη je fenyl, benzyl, pyridyl, fluorenyl, thioindolyl nebo naftyl, přičemž uvedený Αη může 45 být nesubstituovaný nebo substituovaný v jedné nebo více polohách halogenem, hydroxyskupinou, trifluormethylem, nitroskupinou, Ci_Ců alkylem s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

-5CZ 298120 B6

Cr-C₆ alkenylem s přímým nebo rozvětveným řetězcem, CH2₄ alkoxyskupinou, C₂-C₄ alkenyl- oxyskupinou, fenoxyskupinou, benzyloxyskupinou, aminoskupinou nebo jejich kombinací.i

Příklady těchto provedení jsou uvedeny v tabulce 1.* i

Tabulka I

č.	Ž	R_t	R2
1	ch₂	3-Fenylpropyl	3-3-Dimethylpentyl
2	ch₂	3-(3-Pyridyl)propyl	3-3-Dimethylpentyl
3	ch₂	3-Fenylpropyl	terc.-Butyl
4	ch₂	3-(3-Pyridyl)propyl	terc.-Butyl
5	ch₂	3-(3-Pyridyl)propyl	Cyklohexyl
			.... T
6	ch₂	3-(3-Pyridyl)propyl	Cyklopentyl
7	ch₂	3-(3-Pyridyl)prppyl	Cykloheptyl
8	ch₂	2-(9-Fluorenyl)ethyl	3,3-DÍrinethylpentyl'
9	s	2-Fenethyl	3,3-Dimethylpentyl
11	s	Methyl(24híoindol)	3,3-Dimethylpentyl
12	s	2-Fenethyl	Cyklohexyl
15	ch₂	3-(4-Metoxyfenyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
28	s	2-Fenethyl	Cyklopentyl
30	s	3-Fenylpropyl	3,3-Ďimethylpéntyl
31	s	3-(3-Pyrídyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
32	š	3-Fenylpropyl	Cyklohexyl
33	s	4-Fenylbútyl	Cyklohexyl
34	s	4-Fenylbutyl	3,3’Dimethyipeňtyl
35	s	3-(3-Pyridyl)propyl	Cyklohexyl
36	s	3,3-Difenylpropyl	3,3-Dimethylpentyl
37	s	3,3-Difenylpropyl	Cyklohexyl
38	s	3-(4-Metoxyfenyl)propyl	3,3-Dimethylpentylpropyl
45	s	3_ř3-Di(4-fluor)Fenylpropyl	3,3-Dimethylpentyl
46 I0	s	4₍4-Di(4-fluor)Fenylbutyl	3,3-Dimethylpentyl

-6CZ 29S12U B6

47	S	3-(1-Naftyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
48	S	2,3-Difenylethyl	3,3-Dimethylpentyl
51	s	3-(44trífluormethyl}fenyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
52	s	3~(2-Naftyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
54	s	3-(3-Chlor)Fénylpropyl	3,3-Dimethylpentyl
55	s	3-(3-{T rif luormethyl}fenyi)propyl	3,3-Dimethylpentyl
56	s	3-(2-Bifenyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
57	s	3.3-Dimethylpentyl
58	s	3-(3-Fluorfenyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl
6i	s	3-(2-Chlor)fenylpropyi	3,3-Dimethylpentyl
65	s	3-(2,5-Dimetoxyfényl)propyl	3,3-Ďimethylpehtyl
66	ch₂	3-Fenylpropyl	Cyklohexyl
.67-----	ch₂·	~ 3-Fenylethyl-- — --	terc.-Butyl * * —
70	ch₂	3,3-Di(4-fluorfenyl)propyl	3,3-Dimethylpentyl

Nevýhodnějšími příklady z tabulky 1 jsou sloučeniny následujících názvů:

1. (28)-2-( { l-oxo-5-fenyl}-pentyl-l-(3,3-dimcthyl-],2-dioxopentyl)pyrrolidin,

2. 3,3-DimethyI-l-((2S)-2-(S-(3-pyridyl)pentanoyl)-l-pyrrolidín)-1.2-pentandion,

3. (2S)—2-({l-ox0-4-fenyl}-butyl-l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxobutyl)pyrrolidin,

9. 2-Fenyl-l-ethyl-l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-piperidinkarbothioát,

11. (3-Thiomdolyl)methylester kyseliny (2S)— 1 -(3,3-dimethyl-l ,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidín io karbothiové,

12. 2-Fenyl-l-ethylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

28. 2-Fenyl-l-ethylester kyseliny (2S)-l-(l-cykIopentyl-l,2-<iioxopentyl)-2-pyrrolidin karbothiové

30. 3-fenyl-l-propy lester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

31. 3—(3—Pyridyl)—1 -propylester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pynO lídinkarbothiové,

32. 3-(Fenyl-l-propylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxoethyl)-2-pyrroIidin karbothiové,

33. 4-Feny 1-1-butylester kyseliny (28)-1-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxoethyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

34. 4-Fenyl-l-butylesterkyseliny (2S)-l~(3,3-dimethyl-l,2--dioxopentyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

35. 3—(3—Pyridyl—I-propylester kyseliny (2S)-l-’(2-cykIohcxyl-l,2-dioxopcntyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

36. 3,3-Difenyl-l-propylester kyseliny (2 8)-1-(3,3-dimethyl-l.2-dioxopcntyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

37. 3,3—dífenyl—1 —propylester kyseliny (2S)— 1—(2—cyklohcxyI— 1,2-dioxopentyl)-2-pyrroIidin karbothiové,

38. 3-(para-metoxyfenyl)-l-propylester kyseliny (2S)—1—(3,3—dimethyl—1,2—dioxopentyt>-2— pyrrolidinkarboxythiové,

45. 3,3-D i(para-fluor) feny 1-1-propylester kyseliny (2S)-143,3-dimethyl-£2-dioxopentyl)-

2-pyrrol idinkarboxyth iové,

46. 4,4-Di(para-Fluorfenyl)butylester kyseliny l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrro lidinkarbothiové,

47. 3-(l-Naftyl)propylester kyseliny (2Sý-l-(3,3-dimethyl-l-oxopentanoyl)-2-pýrrolidin karbothiové,

48. 2,2-Difenylethylester kyseliny (2S)-l-(3.3-dimethyl-2-oxopentanoyl)tetrahydro-l H-2pyrrolkarbothiové,

51. 3-(4-(Trifluormethyl)fenyl]propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopcntanoyl)-

2-pyrrolidinkarboxythiové,

52. 3-(2-Naftyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3“dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolÍdin karbothiové,

54. 3-(3-Chlorfenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrro lidinkarbothiové,

55. * 3^(3-Trifliiórřnethyl)fenyl)propylešter kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2- pyrrolidinkarbothiové,

56. 3-(l-difěnyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxo-pentanoyl)-2-pyrrolidin karbothiové,

57. 3-(2-Fluorfenyl)propylester kyseliny (28)-1-(3.3-dimethyl-2^)xopentanoyl)-2-pyrro lidinkarbothiové,

58. 3-(3-Fluorfenyl)propyIester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2^)xopentanoyl)-2-pyrro lidinkarbothiové,

61. 3-(2-Chlorfenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentnaoyl)-2-pyrro lidinkarbothiové,

65. 3-(3,4-Dimetoxyfenyl)propylester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2- pyrrolidinkarbothiové,

66. (2S)-2-({ l-oxo-4-fenyl}-butyl-l-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxoethyl)pyrrolidin,

67. 2-({ l-oxo-4-fenyl}-butyl-l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxobutyl)pyrrolidin,

70. i —{(2S)—2—[5,5—di(4—fluorfenyl)pentanoy 1]—2—pyrrol idin}—3,3—dimethyl— 1,2-pentandion.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují asymetrická centra, proto mohou být vyrobeny jako směsi . stereoizomerů nebo jako samostatné stereo i zomery. Samostatné stereoizomery mohou být získány s použitím opticky aktivních výchozích surovin, mnohonásobným rozpouštěním racemické nebo neracemické směsi meziproduktů v některém vhodném kroku syntézy, nebo obdobným dělením sloučeniny uvedeného obecného vzorce. Je zřejmé, že samostatné stereoizomery, stejně 40 jako směsi stereoizomerů (racemická a neracemická) spadají do rozsahu tohoto vynález. Sloučeniny podle vynálezu mají alespoň jedno asymetrické centrum, a proto mohou být vyrobeny jako směs stereoizomerů nebo jako samostatné R- a S-stereo i zomery. Jednotlivé enantiomery mohou být získány mnohonásobným rozpouštěním racemické nebo neracemické směsi meziproduktů v některém vhodném kroku syntézy. Je zřejmé, že samostatné R- a některém vhodném kroku 45 syntézy. Je zřejmé, že samostatné R- a S-stereoizomery rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Sstereoizomerům se dává přednost, protože vykazují větší aktivitu.

-8Způsoby použití sloučenin podle vynálezu J

Sloučeniny podle vynálezu mají afinitu k vázacímu proteinu FK 506, zvláště FKBP 12, který je přítomen v mozku. Když se sloučeniny podle vynálezu naváží v mozku na FKBP, vykazují vynikající neurotropní aktivitu. Tato aktivita je užitečná při stimulaci poškozených neuronů, pro podporu neuronální regenerace, prevenci degenerace neuronů a při léčení několika neurologických '· onemocnění o nichž je známo, že jsou spojeny s degenerací neuronů a periferní neuropatií.

ίο Z těchto důvodů vynález dále řeší způsoby ovlivňování neuronální aktivity u živočichů, které zahrnují podávání neurotropicky účinného množství sloučeniny uvedeného obecného vzorce živočichům.

Ve výhodném provedení vynálezu je neuronální aktivita vybrána ze skupiny zahrnující stimulaci poškozených neuronů, podporu neuronální regenerace, prevenci degenerace neuronů a léčení neurologických onemocnění.

Mezi neurologická onemocnění, která mohou být léčena lze zařadit (výčet však není limitující): trigeminální neuralgie; glosofaryngeální neuralgie; Bellova obrna; myasthenia gravis; svalová dystrofie; amyotrofická laterální skleróza; progresivní svalová atrofie; progresivní bulbámí svalová atrofie;¹ syndromy meziobratlových plotének kýlniT vyhřezlé nebo ruptury, cervikální spóndylóza; poruchy pletence; hrudní destrukční syndromy; periferální neuropatie způsobené například olovem, nevhodnou potravou, klíšťaty, porfyrií nebo Guillain-Berrého syndromem; Alzheimerova choroba a Parkínsonova choroba.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou zvláště vhodné pro léčení neurologických poruch vybraných ze skupiny zahrnující: periferní neuropatie způsobená fyzickým poškozením nebo nemocí, traumatickým poškozením mozku, fyzikálním poškozením míchy, úderem spojeným s poškozením mozku, a neurologických poruch spojeným s degenerací neuronů. Příkladem neu30 rologických poruch vztahujících se k neurodegeneraci jsou Alzheimerova choroba, Parkínsonova choroba a amyotrofícká laterální skleróza.

Pro tyto účely mohou být sloučeniny podávány orálně, parenteráíně, v inhalačním spreji, místně, rektálně, nazálně, bukálně, vaginálně nebo prostřednictvím implantovaného rezervoáru v lékové formě obsahující běžné netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvanty a vehikula. Termín „parenterální“ jak je užit zde zahrnuje podávání injekčními nebo infuzními technikami subkutánně, intravenózně, intramuskulámě, intraperitoneálně, intratekálně, intraventrikulámě, intrasternálně a intrakraniálně.

Aby mohly sloučeniny účinné farmaceuticky působit jako cíle centrálního nervového systému, sloučeniny musejí při periferním podávání rychle procházet bariérou mezi krví a mozkem. Sloučeniny, které tuto bariéru nejsou schopny rychle překonat, mohou být podávány intraventrikulárně.

Sloučeniny mohou být podávány ve formě sterilních přípravků pro injekční podávání, jako jsou například sterilní vodné nebo olejové suspenze. Tyto suspenze se vyrábějí známými technikami za použití vhodných disperzních a zvlhčovačích činidel a suspendačních činidel. Sterilní prostředky pro injekce mohou být rovněž sterilní injekční roztoky nebo suspenze v netoxických parenteráíně přijatelných rozpouštědlech, například roztoky v 1.3-butandiolu.

Mezi přijatelnými vehikuly a rozpouštědly, které mohou být využity, jako voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Jako rozpouštěcí nebo suspendovací médium se navíc také běžně používají stabilizované oleje. Pro tento účel může být použit kterýkoliv nedráždivý stabilizovaný olej, jako je syntetický mono- nebo di-glycerid. Pro výrobu injekcí lze také využít mast55 ných kyselin, jako jsou kyselina olejová a její glyceridové deriváty, včetně olivového a ricino-9<1 czBO vého oleje, zvláště v jejich polyoxyeethylovaném stavu. Tyto roztoky nebo suspenze voleji1 mohou rovněž obsahovat jako rozpouštědla nebo disperzanty alkoholy s dlouhým řetězcem.

Sloučeniny mohou být rovněž podávány orálně ve formě kapslí, tablet, vodných roztoků nebo?

suspenzí, tablety mohou obsahovat nosiče, jako je laktóza a kukuřičný škrob, a/nebo Iubrikační1 přísady, jako stearát hořečnatý. Kapsle mohou obsahovat rozpouštědla jako jsou laktóza a sušený kukuřičný škrob. Vodné roztoky mohou obsahovat emulzní a suspenzní činidla, kombinovaná s aktivní látkou. Orálně podávané lékové formy mohou dále obsahovat látky pro oslazení, ochucovadla a barviva.

Sloučeniny je rovněž možno podávat rektálně ve formě čípků. Tyto prostředky se připravují smícháním účinné látky s vhodným nedráždivým excipientem, kteiý je za pokojové teploty pevný, ale tekutý při teplotě rekta, a proto se v konečníku rozpouští za uvolňování účinné látky. Vhodné materiály zahrnují kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.

Sloučeniny rovněž mohou být aplikovány místně, zvláště, když je třeba léčit oblasti přístupné místní aplikaci, jako jsou neurologické poruchy oka, kůže nebo nižšího intestinálního traktu. Vhodné místně použitelné prostředky jsou pak připraveny pro každé z těchto místních použití.

Pro místní aplikaci v oku nebo jiné oftalmologické použití je prostředek připraven jako mikroni-·- zovaná suspenze sloučeniny v izotonické’sterilní solance's upravenýmpH^nebo^ výhodně jako*^ roztok v izotonické sterilní solance s adjustovaným pH, s nebo bez konzervačního prostředku, jako je benzylakoniumchlorid. Sloučenina může být případně zapracována do masti, jako je vazelína pro oftalmologické účely.

Pro místní aplikaci na kůži může být sloučenina zapracována do vhodných mastí obsahujících sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou například ve směsi s jednou nebo více následujícími látkami: minerální olej, tekutá vazelína, bílá vazelína, propylenglykol, sloučeniny polyetho- xyethylenu a polyethoxypropylenu, emulgační vosk a voda. Sloučenina může být případně zapra30 cována do tekutých krémů nebo krémů obsahujících aktivní látku suspendovanou nebo rozpuštěnou například ve směsi jedné nebo více následujících látek: minerální olej, monostearát kyseliny sorbitové, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a vody.

Místní aplikace do nižšího zařizovacího traktu může být realizována pomocí rektálních čípků (viz nahoře) nebo vhodným prostředkem pro klystýr.

Pro léčení shory uvedených stavů jsou vhodná léčiva v množství od 0,1 mg do 10 000 mg účinné látky, výhodně od 0,1 mg do 1000 mg účinné látky. Množství účinné látky tedy může být kombi40 nováno s nosiči tak, aby se vyrobená jednotlivá dávka pohybovala v závislosti na léčené poruše a daném způsobu podávání.

Je jasné, že dávka léčiva pro určitého pacienta bude záviset na mnoha faktorech, včetně účinnosti konkrétních použitých látek, věku a váhy pacienta, jeho celkovém zdraví, pohlaví a výživě, dále 45 na době podávání, rychlosti vylučování, dalších podávaných léků, závažnosti konkrétní léčené choroby a formě podávání léčiva.

Sloučeniny mohou být podávány s jinými neurotropními přípravky, jako jsou neurotropní růstový faktor (NGF), růstový faktor odvozený od gliomu, růstový faktor odvozený od mozku, ciliámí 50 neurotropní faktor a neurotropin-3. Dávka jiných neurotropních léčiv bude závist na již . vyjmenovaných faktorech a na neurotropní účinnosti kombinace léčiv.

-10CZ 29812« B6

Farmaceutický prostředek podle vynálezu

Vynález se rovněž týká farmaceutického prostředku, který obsahuje:

(í) neurotropně účinné množství sloučeniny obecného vzorce (I), (ii) farmaceuticky přijatelný nosič.

Shora uvedená diskuse, vztahující se k využití a podávání sloučenin podle vynálezu, se rovněž vztahuje na farmaceutický prostředek podle vynálezu.

Příklady provedení

Následující příklady jsou použity jen jako ilustrativní pro tento vynález a nejsou zamýšleny jako limitující. Pokud není uvedeno jinak, všechny procenta jsou vztažena ke 100% hmotnostním konečného produktu.

Příklad 1

.. ²⁰_ Syntéza (2S)-2-({l-oxo-5-fenyl }-pentyl-l-(3,3-dimcthyl-L2-dioxopentyl)pyrrolidinu (1) - — (2S)-2-( l-oxo-4-feny l)buty 1-N-benzylpyrrol idin

Roztok l-chlor-4-fenylbutanu (1,78 g; 10,5 mmol) ve 20 ml THF byl přidán k refluxující směsi hořčíkových odřezků 0,25 g (10 mmol) v 50ml THF. Když bylo přidávání ukončeno, směs byla dále refluxována dalších 5 hodin, a pak byla přidána pomalu pod refluxem do roztoku ethylesteru N-benzyl-L-prolinu (2,30 g; 10 mml) ve 10 ml THF. Po dvou hodinách dalšího refluxování byla směs ochlazena a upravena 5 ml 2 N HC1. Reakční směs byla pak zředěn etherem (100 ml) a promyta nasyceným roztokem NaHCOj, vodou a solankou. Organická fáze byla vysušena, zahuštěna a chromatografována, s elucí 5:1 CH₂Cl₂:EtOAc, čímž se získalo 2,05 g (64 %) ketonu ve formě oleje, ‘HNMR (CDC1_3i 300 MHz): 1,49-2,18 (m, 8H); 2,32-2,46 (m, IH; 2,56-2,65 (m, 2H); 2,97-3,06 (m, IH); 3,17-3,34 (m, IH); 3,44-3,62 (m, IH); 4,02-4,23 (ob 2H); 7,01-44 (m, 1 OH).

(2Sj-2-Jl-Oxo-4-fenyl)pentylpyrrolidin.

Ketonová sloučenina (500 mg) s hydroxidem palladia (20% na uhlíku, 50 mg), byla hydrogenována přes noc při 280 kPa (40 psi) v Paarově míchatelném zařízení. Katalyzátor byl odfiltrován a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu. Byly získány volné aminy ve formě žlutého oleje (230 mg; 100 %), 'HNMR (CDC1₃; 300 MHz): 1,75-2,34 (m, 10H); 2,55 (m, 2H); 2,95 (dm,

IH); 3,45-3,95 )m, IH); 4,05 (m, IH); 7,37 (m, 5H).

(2S)-2-(l-oxo-4-fenyl)butyl-~l-(L2-dioxo-2-metoxyethyl)pyrrolidin

K roztoku (2S)-2-(l-oxo-4-fenyl)pentylpyrrolidinu (230 mg; 1,0 mmol) ve CH₂C1₂ (20 ml) při 0°C byl po kapkách přidán methyloxalylchlorid (135 mg; 1,1 mmol). Po míchání při 0°C po dobu 3 hodin byla reakce ukončena nasyceným NHjCl, organická fáze byla promyta vodou a solankou, a potom vysušena a zahuštěna. Surový zbytek byl čištěn v koloně plněné silíkagelem, eluce roztokem 20:1 CH2CL2:EtOAc, čímž bylo získáno 300 mg oxalátu ve formě čistého oleje (98%, IH NMR, CDClj, 300 MHz): 1,68 (m, 4H); 1,91-2,38 (m, 4H); 2,64 (t, 2H); 3,66-3,80 (m, 2H); 3,77 (3,85 (s, 3Hcelkový); 4,16 (m, 2H), 4,90 (m, IH); 7,16 (m, 3H); 7,27 (m, 2H).

-11(JZ Z98IZU B6 (2S)-2-((l-ox^5-fenyl)-pentyl-l-(33-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-pyrrolidin

K roztoku shora uvedeného oxalátu (250 mg, 0,79 mmol) v bezvodém etheru (15 ml), ochlazeném na-78 °C, byl přidán 1,1 -dimethyIpropylehlorid horečnatý (0,8 ml, 1,0 M roztoku v etheru, 5 0,8 mmol). Výsledná směs byla míchána při -78 °C po dobu 2 hodin, reakce byla ukončena přidáním 2 ml nasyceného NH4CI, a poté 100 ml EtOAc. Organická fáze byla promyta solankou, vysušena, koncentrována a vyčištěna v koloně plněné silikagelem, eluce roztokem 50:1 CH₂Cl₂:EtOAc. Sloučenina 1 byla získána ve formě čistého oleje, 120 mg, 'HNMR (CDC1₃, 300 MHz): δ 0,87 (t, 3H, J=7,5); 1,22 (s, 3H); 1,25 (s, 3H); 1,67 (m, 4H); 1,70-2,33 (m, 6H);

2,61 (t, 2H, >7,1); 3,52 (m, 2H); 4,17 (t, 2H, J=6,2); 4,52 (m, IH); 7,16-7,49 (m, 5H).

Elementární analýza:

Vypočteno: pro C₂₂H₃₁NO₃ - H₂O: C, 70,37; H, 8,86; N, 3,73.

Nalezeno: 70,48; H, 8,35; N, 3,69.

Příklad 2

Syntéza 2-fenyl-l —ethylesteru kyseliny l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidinkarbo20^ .thiové (9).^. u *'j«- -rf-. » * - « -^1,

Methy lester kyseliny (2 S)— 1 —(1,2-dioxo-2-metoxyethyl)-2-pyrrol idinkarboxylové

Roztok hydrochloridu methylesteru L-prolinu (3,08 g; 18,60 mmol) v suchém methylechloridu 25 byla ochlazena na 0 °C a potom na ni bylo působeno triethylaminem (3,92 g, 38,74 mmol,

2,1 ekvivalentů). Vzniklý kal byl míchán v dusíkové atmosféře po dobu 15 minut a potom byl přidán po kapkách roztok methyloxalylchloridu (45 ml). Výsledná směs byla míchána při 0 °C po dobu 1,5 hodiny. Po odstranění pevných látek filtrací, byla organická fáze promyta vodou, vysušena nad MgSO₂, a koncentrována. Surový zbytek byl čištěn v koloně se silikagelem, eluován 30 50% ethylacetátem v hexanu, čímž bylo získáno 3,52 g (88 %) produktu ve formě načervenalého oleje. Směs obsahovala cis-trans amidové rotameiy, uvedená data jsou pro trans rotamery.

'H NMR (CDCI₃): δ 1,93 (dm, 2H); 2,17 (m, 2H); 3,62 (m, 2H); 3,71 (s, 3H); 3,79, 3,84 (s, 3H celkově); 4,86 (dd, IH, J=8,4, 3,3).

Methy lester kyseliny (2S)-l-(l,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2-pyrrol idinkarboxylové

Roztok methylesteru kyseliny (2S)-l-(l,2-dioxo-2-metoxyethyl)-2-pyrrolidinkarboxylové (2,35 g; 10,90 mmol) ve 30 ml tetrahydrofuranu (THF) byl ochlazen na -78 °C a pak na něj bylo působeno 14,2 ml roztoku 1,0 M 1,1 -dimethyIpropylehloridu horečnatého v THF. Výsledná 40 homogenní směs byla při -78 °C míchána po dobu 3 hodin, pak byla nalita do nasyceného chloridu amonného (100 ml) a extrahována do ethylacetátu. Organická fáze byla promyta vodou, vysušena, koncentrována a surový produkt získaný odstraněním rozpouštědla byl vyčištěn na koloně se silikagelem, eluován 25% roztokem ethylacetátu v hexanu, čímž bylo získáno 2,10 g (75 %) oxamátu jako bezbarvého oleje. IH NMR (CDC1₃): δ 0,88 (t, 3H); 1,22, 1,26 (s, 3H, 45 total); 1,75 (dm, 2H); 1,87-2,10 (m, 3H); 2,23 (m, IH); 3,54 (m, 2H); 3,76 (s, 3H); 4,52 (dm, 1H, >8,4,3,4).

Kyselina (2S)-l-(l,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2-pyrTolidinkarboxylová.

Směs methylesteru kyseliny (2S)-l-(l,2-dioxo-3-dimethylypentyl)-2-pynOlidinkarboxylové (2,10 g, 8,23 mmol), 1 N LiOH (15 ml), a methanolu (50 ml) byla 30 minut míchána při 0 °C a pak ještě při teplotě místnosti přes noc. Směs byla poté okyselena 1 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové na pH 1 a extrahována 100 ml methylenchloridu. Organický extrakt byl promyt solankou a zahuštěn. Bylo získáno 1,73 g (87 %) sněhobílé pevné látky, která nevyžadovala další

-12čištění. ‘HNMR (CDCI₃): δ 0,87 (t, 3H); 1,22, 1,25 (s, 3Htotal); 1,77 (dm, 2H); 2,02 (m, 2H); 2,17 (m, IH); 2,25 (m, IH); 3,53 (dd, 2H, J=10,4, 7,3); 4,55 (dd, IH, J=8,6,4,1)

2-fenyl-l-ethylester kyseliny l-(3,3-dimethyl-!,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidinkarbothiové(9)

Do roztoku kyseliny (2S)-l-(l,2-dioxcH3,3-dimethylpentyl)-2-pyrrolidinkarboxylové (241 mg;

1,0 mmol) ve CH₂C1₂ (10 ml) byl přidán dicyklohexylkarbodiimid (226 mg; 1,1 mmol). Výsledná směs byla míchána 5 minut, roztok byl ochlazen na 0 °C a bylo na něj působeno roztokem fenylmerkaptanu (138 mg; 1,0 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (5 mg) v 5 ml CH₂C1₂. Směs 10 byla ponechána za stálého míchání přes noc, aby se zahřála na teplotu místnosti. Pevné látky byly odstraněny filtrací a filtrát byl zahuštěn ve vakuu. Surový produkt byl vyčištěn mžikovou chromatografií (10:1 hexan:EtOAc), čímž bylo získáno 302 mg (84%) látky (9) ve formě oleje: 'H NMR(CDCIi, 300 MHz): δ 0,85 (t, 3H, J=7,5); 1,29 (s, 3H); 1,31 (s, 3H); 1,70-2,32 (m, 6H);

2,92 (t, Γ=7,4); 3,22 (t, 2H, J=7,4); 3,58 (m, 2H); 4,72 (m, IH); 7,23-7,34 (m, 5H). Elementární 15 analýza pro C20H27NO3S. 4H₂O: C 65,15; H, 7,60; N, 3,80. Nalezeno: C, 65,41; H, 7,49; N, 3,72.

Jak bylo již uvedeno, sloučeniny podle vynálezu mají afinitu k vázacímu proteinu FK 506, zvláště k FKBP 12. Jako indikátoru této afinity může být použito inhibice aktivity prolylpeptidy 1 cis-trans izomerázy prostřednictvím FKBP.

²⁰

Způsob'stanovení Kj“ * ^** * ’^ ^^ ” —

Inhibice aktivity peptidy 1-proly 1 izomerázy (rotamázy) ve sloučeninách podle vynálezu může, být vyhodnocena metodami popsanými v literatuře. (Harding et al., Nátuře, 1989, 341: 758-760;

Holt et al., Am. Chem. Soc., 115:9923-9938). Tyto hodnoty jsou získány jako hodnoty zdánlivé Kj a jsou uvedeny v tabulce IV. Izomerizace cis-trans vazby alanin-prolin v srovnávací sloučenině, N-sukcinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilidu, je monitorována spektrofotometricky testem, při kterém se váže chymotrypsin, který z trans formy srovnávací sloučeniny uvolňuje paranitroanilid. Stanovuje se inhibice této reakce způsobená přidáváním různých koncentrací inhibi30 toru a výsledky se vyjádří jako závislost změny kinetické konstanty prvního řádu na koncentraci testovaného inhibitoru, aby se získaly hodnoty zjevného Kj.

Do plastové kyvety bylo nalito 950 ml ledově chladného testovacího pufru (25 mM HEPES, pH 7,8, 100 mM NaCl), 10 ml FKBP (2,5 mM, v 10 mM Tris-Cl pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM 35 dithiotreitol), 25 ml chymotrypsinu (50 mg/ml v 1 mM Hel) a 10 ml zkoušené látky v různých koncentracích v dimethylsulfoxidu. Reakce byla spuštěna přidáním 5 ml modelové látky (N-sukcinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilidu, 5 mg/ml v 2 mM LÍCI v trifluorethanolu),

Pomocí spektrofotometru byla měřena absorbance při 390 nm v závislosti na čase po dobu 90 40 sekund a z hodnot absorbance v závislosti času byla vypuštěna hodnota kinetické konstanty.

Data získaná během tohoto experimentu pro reprezentativní sloučeniny jsou uvedena v tabulce IV ve sloupci označeném „Ki“.

Neurotropní účinky sloučenin podle vynálezu lze demonstrovat v buněčných biologických experimentech in vítro, popsaných dále.

Kultivace a růst neuritů u kuřecího dorzálního kořeněného gangliónu

Neurotropní účinky sloučenin inhibujících FKBP lze demonstrovat vyhodnocením schopnosti sloučenin podpořit růst neuritů v kultivarových kuřecích smyslových neuronech z dorzálního kořeněného ganglia. Dorzální kořeněné ganglium bylo vyňato z kuřecích embryí po deseti dnech vývoje. Celé gangliové explantáty byly kultivovány na tenkovrstvých deskách pokrytých Matrigelem, se 12 zásobníky, s Liebovitz LI5 spolu s médiem s vysokým obsahem glukózy, doplně55 ným 2 mM glutaminem a 10% fetálním telecím sérem, a rovněž obsahujícím 10 μΜ cytosin-β-13uz zvaizu Βό

D-arabinofuranosidu (Ara C) při 37 °C v prostředí obsahujícím 5 % CO₂. Po 24 hodinách bylo na DRG působeno různými koncentracemi nervového růstového faktoru, imunofilinových ligandů nebo kombinací NFG s léčivy. Čtyřicet osm hodin po aplikaci léčiv byla ganglia vizualizována fázovým kontrastem nebo Hoffmanovým modulačním kontrastem v inverzním mikro5 skopu Zeiss Axiovert. Byly pořízeny mikrofotografie explantátů a byl kvantifikován růst neuritů.

Neutiry delší, než průměr DRG byly považovány za pozitivně ovlivněné. Pro každé experimentální podmínky bylo také stanoveno celkové množství neuritů. V každé nádobce byly prováděny testy s třemi až čtyřmi DRG a každý test byl dvakrát opakován.

ío Z výsledků byly vyneseny křivky závislosti účinku na dávce, a z těchto křivek byly získány hodnoty ED₅₀. Výsledky těchto experimentů jsou uvedeny v tabulce IV ve sloupci „ED₅₀“. Reprezentativní mikrofotografie neošetřených (kontrolních) smyslových neuronů a neuritů smyslových neuronů, jejichž růst byl podpořen sloučeninami 1 (10 pM, 1 nM, 1 μΜ), 9 (10 pM, 1 nM, 100 nM) a 10 (10 pM, 1 nM, 100 nM) podporujících růst jsou ukázány na obrázcích 1 (A až D), 2 (A až D) a 3 (A až D).

MPTP model Parkinsonovy choroby

Znatelné neurotropní a neuroregenerativní účinky sloučenin podle vynálezu byly dále démon20 strovány na zvířecím modelu neurodegenerativní choroby. Jako zvířecí model Parkinsonovy choroby byl poůžit MPTP model poškození dopaminergických neuronů u myší.’Samcům bílých myší CD1, stalým čtyři týdny, bylo i.p. podáváno 30 mg/kg MPTP po dobu 5 dní. Zároveň byla podávána s.c. testovaná sloučenina (4 mg/kg) nebo vehikulum zároveň s s MPTP po dobu 5 dní, následované zastavením podávání MPTP po dobu dalších pěti dní.

Po 18 dnech po působení MPTP byla zvířata usmrcena a striata byla vyňata a homogenizována. Imunovybarvení bylo provedeno na sagitálním a koronárním řezu mozku za použití antityrosinhydroxylázy 1 g, čímž se stanovilo přežití a míra regenerace dopaminergických neuronů. U zvířat, na něž bylo působeno MPTP a vehikulem, byla zaznamenána podstatná ztráta funkčních 30 dopaminergických zakončení ve srovnání se zvířaty bez tohoto ošetření. Zvířata, na něž bylo působeno MPTP, a která přijímala testové sloučeniny byla zjištěna průkazná regenerace THvybarvených dopaminergických neuronů.

Výsledky testů jsou uvedeny v tabulce IV ve sloupci % regenerace TH. Kvantitativní znázornění 35 regenerace TH-pozttivních dopaminergických neuronů ve striatu zvířat přijímajících sloučeniny

1,9 a 10, kontrolní zvířata a zvířata nepřijímající testované látky, je uvedeno na obr. 4.

ZY5IZU BĎ

Tabulka IV

Výsledky testů in vitro

PLč. Kj,nM

ED5Q,nM RegeneraceTH %

1	31	Ó.4	23
2	210	-	-
3	85	-	-
9	104	0,5	61
11	299	0,36	53
12	442	0,025	-
28	108	0,9	41
30	11	0,00025	65
i __- -	— ............
31	8,7	-	31
32	362	-	52
33	1698	-	-
34	34	0,9	48
35	62	-	-
36	7	-	56
37	68	-	-
38	8.9	0,011	37
45	31		-
46	757	-	-
47	21'	-	50
48	127	-	28
51	33	-
52	6	-
54	37	-
55	30	-
56	880	-
57	57	-
58	79	-
61	139	-
65	68	-
66	306	5	38
67	177	-	-
70	457		25

-15CZ 298120 B6

Všechny publikace a patenty dříve zde uvedené se začleňují do popisu tohoto vynálezu formou odkazu.

Vynález byl popsán a je jasné, že může být mnoha způsoby odměněn. Tyto obměny neznamenají odklon od myšlenky vynálezu ani nepředstavují únik z jeho rozsahu. Všechny tyto obměny, varianty a modifikace spadají do rozsahu vynález, jak je definován v následujících nárocích.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Heterocyklické thioestery nebo ketony obecného vzorce:

(I) nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl, kde:

20 Z je vybrán ze skupiny zahrnující S, CH₂, CHR) a C(Ri)₂,

Ri je C₂-C₅ alkyl s přímý nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný Αη nebo C₂-C₅ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, substituovaný Αη,

25 R₂ je vybrán ze skupiny zahrnující:

- Cp-Cg alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

- C2-C9 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem,

-C₃-C₈ cykloalkyl,

- C5-C7 cykloalkenyl, a

30 - skupinu Αη, kde Ar] je fenyl, benzyl, pyridyl, fluorenyl, thioindolyl nebo naftyl, přičemž uvedený Αη může být nesubstituovaný nebo substituovaný v jedné nebo více polohách halogenem, hydroxyskupinou, trifluormethylem, nitroskupinou, C|-C₆ alkylem s přímým nebo rozvětveným řetězcem, 35 C₂-C₆ alkenylem s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Č_t-C₄ alkoxyskupinou, C₂-C₄ alkenyloxyskupinou, fenoxyskupinou, benzyloxyskupinou, aminoskupinou nebo jejich kombinací.

2. Heterocyklické thioestery nebo ketony podle nároku 1, kde Z je CHRp

40 3, Heterocyklické thioestery nebo ketony pode nároku 1, kde Z je CH₂.

4. Heterocyklické thioestery nebo ketony podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující;

(2S)-2-({ l-oxo-5-fenylpenty 1-1 -(3,3-dimethy 1-1,2-dioxopentyl)pyrrolidin;

-16BJ-dimethyl-l-^Sj-ŽAS^-pyridyljpentanoylj-i-pyrrolidinJ-O-pentandioni (2 S )-2-( {l-oxo-4-fenyl}-butyl-l-(3,3-dimethyl-l ,2-dioxobutyl)pyrrolidin;

(2S)-2-({ 1-oxo-4-fenyl}-butyl-l-(2-cyklohexyl-l,2-dioxoethyll)pyrrolidiri;

2-({ l-oxo-4-fenyl}-butvl-l-(3,3-dirncthyl-l,2-dioxobutyl)pyrolidin;

5 a

1- {(2S)-2-[5,5-di(4-fluorfenyl)pentanoyl]-2-pynolidin}-3_í3-dimethyl-l,2-pentandion.

5. Heterocyklické thioestery nebo ketony podle nároku 1, kde Z je S.

10 6. Heterocyklické thioestery nebo ketony podle nároku 5, vybrané ze skupiny, zahrnující:

2- fenyl-l-ethylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pynOlidinkarbothiové;

1- {2-[(benzo[b]thiophen-3-ylmethylthio)karbonyl]pyrrolidinyl}-3,3-dirnethylpentan-l,2-dion;

2- fenyl-l-ethylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l_;2-dioxoethyl)-2-pyrrolidÍnkarbothiové;

2- fenyl-l-ethylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklopentyl-l ,2-dioxoethyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

15 3-fenyl-l-propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimcthyl-l ,2-dioxopentyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3— (3—pyridyl)—1—propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pynOlidin- — - - ** — karbothiové; *· -*¹ - - ·—

3- fenyl-l -propylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxoethyl)-2-pyrrolidinkarbothio20 vé;

4- fenyl-l-butylester kyseliny (2S>—1 —(2—cyklohexyl—1,2-dioxoethyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

4-fenyI-l-butylester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-l ,2-dioxopentyl)-2-pynolidinkarbothiové; 3^(3—pyridyl— 1 -propylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l ,2-dioxoethylJ-2-pyrrolidinkarbothiové;

25 3,3-difenyl-l-propylester kyseliny (2S)~l-(3,3-dimcthy!-L2-dioxopcntyi)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3.3- difenyl-l-propylester kyseliny (2S)-l-(2-cyklohexyl-l,2-dioxocthyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3-(para-metoxyfenyl)-l-propylester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-l,2-dioxopentyl)-2-pyrro30 lidinkarbothiové;

3.3- di(para-fluor)fenyl-l-propylester kyseliny (2S)— l—(3,3—dimethyl— 1,2-dioxopentyl)-2pyrrolidinkarbothiové;

4.4- di(para-fluorofenyl)butylester kyseliny l-(3,3-dimethyi-2-oxopcntanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

35 3-( l-naftyl)-l-propylester kyseliny (28)-1-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pynOlidinkarbothiové;

2,2-difenyIethylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3-[4-(tnfluoromethyl)fenyl]propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2pyrrolidinkarbothiovc;

40 3-(2-naftyl)propylcster kyseliny (28)-1 -(3,3 -d i methyl-2-oxopentanoyl)-2“pyrro lidinkarbothiové;

3-(3-chlorofenyl)propylester kyseliny (2 8)-1-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pynOlidinkarbothiové;

3-[3-(trifluoromethyl)fenyl]propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-

45 pyrrolidinkarbothiové;

3-(2-bifenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3A2-fluorofenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(33-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

3-(3-fluorofenyl)propylester kyseliny (25)-1-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;

5 3-(2-chlorofenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové; a

3-(3,4-dimetoxyfenyl)propylester kyseliny (2S)-l-(3,3-dimethyl-2-oxopentanoyl)-2-pyrrolidinkarbothiové;