CZ297419B6

CZ297419B6 - Kapalný farmaceutický prostredek s obsahem gonadotropinu

Info

Publication number: CZ297419B6
Application number: CZ0013598A
Authority: CZ
Inventors: Titus Philip Skrabanja@Arnold; den Oetelaar@Petrus Johannes Maria Van
Original assignee: Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1997-01-15
Filing date: 1998-01-15
Publication date: 2006-12-13
Also published as: DE69813322T2; CZ13598A3; ID19499A; DE69813322D1; PL324279A1; US5929028A; BR9800323A; HUP9800056A3; KR19980070493A; HU227154B1; DE122010000011I1; JPH10203997A; TW518235B; AU5205998A; HUP9800056A2; NO2010013I1; NO2021001I1; EP0853945A1; KR100498531B1; HU9800056D0

Abstract

Kapalný farmaceutický prostredek s obsahem gonadotropinu, který obsahuje gonadotropin a stabilizacní mnozství polykarboxylové kyseliny nebo její solia thioetherové slouceniny. Popsán je rovnez zpusob výroby tohoto prostredku a kazeta s jeho obsahem.

Description

Kapalný farmaceutický prostředek s obsahem gonadotropinu

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického prostředku s obsahem gonadotropinu, způsobu jeho výroby a také kazety s jeho obsahem.

Dosavadní stav techniky

Gonadotropiny tvoří rodinu strukturně příbuzných glykoproteinových hormonů. Typické členy zahrnují choriový gonadotropin (CG), folikuly stimulující hormon (FSH; folitropin), luteinizační hormon (LH; lutropin) a thyroidní stimulační hormon (TSH; thyrotropin). FSH, LH a TSH jsou přítomny u většiny druhů obratlovců a jsou syntetizovány a secemovány hypofyzou. CG byl dosud objeven pouze u primátů, včetně lidí, a u koní a je syntetizován placentální tkání. FSH a LH jsou hypofyzámí hormony nezbytné pro dozrávání a luteinizaci folikulů u žen a pro dozrávání varlat a spermatogenesi u mužů. Purifíkovaný FSH podaný samostatně nebo v kombinaci se semipurifikovanými lidskými menopausálními gonadotropiny obsahujícími směs FSH a LH byl použit, mimo jiné, pro stimulaci vývoje ovariálních folikulů, jak je nutné pro techniky asistované reprodukce, jako je IVF (in vitro fertilizační) metoda. Lidský FSH, částečně purifíkovaný z moči, je také klinicky používán při stimulaci dozrávání folikulů u anovulujících žen s chronickým anovulačním syndromem nebo deficiencí luteální fáze. U mužů byla kombinace FSH a LH použita u mnoha stavů spojených s mužskou neplodností.

V posledních letech se staly dostupnými velmi čisté přípravky gonadotropinů díky použití rekombinantní DNA technologie (viz například Boime et al., v Seminars in Reproductive Endocrinology 10: 45 - 50, 1992: „Expression of Recombinant human FSH, LH and CG in mammalian cells“). Rekombinantní gonadotropiny jsou konstantní kvality, tj. mají reprodukovatelné biochemické a biologické vlastnosti. Genomové a cDNA klony byly připraveny pro všechny podjednotky a jejich primární struktura byla potom určena. Kromě toho, ovariální buňky čínského křečka (CHO) byly transfektovány genem pro podjednotku lidského gonadotropinu a tyto buňky byly schopné sekrece intaktních dimerů (např. Keene et al., (1989), J. Biol. Chem., 264: 4769 4775; Van Wezenbeek et al., (1990) v From Cloně to Clinic (vyd. Crommelin D.J.A. and Schellekens H.), 245 - 251). Bylo demostrováno, že biologické a biochemické charakteristiky např. rekombinantního FSH jsou téměř shodné jako charakteristiky přirozeného FSH (Mannaerts et al., (1991). Endocrinology, 129: 2623 - 2630). Kromě toho, byla dosažena těhotenství po kontrolované ovariální superovulaci za použití rekombinantního FSH (Germond et al., (1992), Lancet, 339: 1170; Devroey et al., (1992), Lancet, 339: 1170- 1171).

Strukturně jsou gonadotropiny heterodimery složené ze dvou odlišných podjednotek, označených a a β, které jsou asociovány nekovalentními vazbami. Uvnitř druhuje oc-podjednotka v podstatě identická pro každý člen rodiny gonadotropinů; je také vysoce konzervovaná mezi druhy. β-Podjednotky jsou odlišné pro každý člen, tj. CG, FSH, TSH a LH, ale mají významnou homologii struktury. Dále, také β-podjednotky jsou vysoce konzervovány mezi druhy. U lidí se a-podjednotka skládá z 92 aminokyselinových zbytků, zatímco β-podjednotka se liší ve své velikosti pro každý člen: 111 zbytků u hFSH, 121 zbytků u hLH, 118 zbytků u hTSH a 145 zbytků u hCG (Combamous, Y. (1992) Endocrine Reviews, 14: 291 - 311). β-Podjednotka hCG je významně větší než jiné β-podjednotky v tom, že obsahuje asi 34 dalších aminokyselin na C-konci, které jsou zde označeny jako karboxy terminální protein (CTP).

Relativně čisté přípravky gonadotropinů jsou komerčně dostupné. Například, jsou dostupné kompozice, obsahující přirozeně derivovaný lidský menopausální gonadotropin (hMG), s FSH a LH aktivitami v poměru přibližně 1 : 1, a přirozeně derivovaný lidský choriový gonadotropin, jako mrazem sušené přípravky pod obchodním názvem Humegon^R a Pregnyl^R, v příslušném pořadí,

- 1 CZ 297419 B6 od N.V.Organon, Oss, The Netherlands. Za mrazu sušený rekombinantní lidský FSH přípravek je, například, dostupný pod obchodním názvem Puregon^R od stejné společnosti. Rekombinantní

FSH je vhodný pro použití pro indukci ovulace a pro kontrolovanou ovariální hyperstimulaci.

Stabilita proteinů ve vodných formulacích je obecným problémem ve farmaceutickém průmyslu. Stejně tak je stabilita vodných roztoků gonadotropinů nedostatečná pro umožnění skladování po delší dobu. Toto zejména platí pro přípravky obsahující velmi čisté gonadotropiny, které jsou připraveny za použití rekombinantních DNA metod, v relativně ředěných roztocích. Proto jsou obvykle tyto přípravky skladovány v sušené formě, která je získána po lyofilizaci. Stabilizovaný gonadotropin obsahující lyofilizovaná farmaceutická kompozice je popsána v evropském patentu 448146 (Akzo N.V.). Tyto přípravky obsahují organické karboxylové kyseliny, zejména kyselinu citrónovou, a volitelně neredukující cukr jako je sacharóza. Jiná farmaceutická kompozice, obsahující pevný gonadotropin obsahující sacharózu jako stabilizátor, je popsána v mezinárodní patentové přihlášce WO 93/11788 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.).

Ačkoliv jsou tyto mrazem sušené přípravky dostatečně stabilní pro zaručení dostatečných skladovatelnosti, mají tu nevýhodu, že před podáním je nezbytná rekonstituce. Pacient proto nutně musí rekonstituovat sušený gonadotropin v ředidle před použitím, což je nevýhodné a nepohodlné pro pacienta. Kromě toho, ředidlo musí být poskytnuto spolu s mražením sušeným přípravkem gonadotropinů.

Pro pacienta, který potřebuje injekce gonadotropinů v pravidelných intervalech, například pro pacienta dostávajícího denní dávku recFSH pro indukci ovulace, bude důležité, aby se s formulací gonadotropinů snadno manipulovalo, dávkovalo a injikovalo. Rekonstituce mrazem sušeného přípravku gonadotropinů vyžaduje opatrnost a pečlivost, a pokud je to možné, měla by být vynechána. Užívání gonadotropinů by usnadnilo, když by tyto glykoproteiny mohly být produkovány a distribuovány jako stabilní roztok pacientovi, který by si mohl injikovat lék přímo bez rekonstituce. Kromě toho, proces sušení vymražením je nákladný a časově náročný proces, a bylo by výhodné, kdyby tento krok mohl být vynechán při přípravě gonadotropinové formulace.

Proto existuje potřeba pro injekční přípravek připravený pro použití, který má dostatečnou stabilitu pro zaručení rozumné skladovatelnosti.

Ve WO 93/22335 (COP Therapeutics lne.) jsou popsány kapalné kompozice významně čištěných polypeptidů stabilní při skladování, které jsou připraveny rozpuštěním polypeptidů v citrátovém pufru pH 5,0 až 5,5. Kapalné formulace, obsahující rekombinantní hCG gonadotropin stabilizovaný neredukujícím cukrem, preferovaně manitolem, ve vodném roztoku ve fosfátovém pufru pH 7 jsou popsány ve WO 96/29095 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.).

Roztoky obsahující gonadotropiny a soli polykarboxylevých kyselin jsou popsány v evropském patentu 448146 (Akzo N.V.) Tyto roztoky, obsahující například kyselinu citrónovou, jsou popsány pro přípravu stabilizovaných lyofilizovaných formulací gonadotropinů. Při skladování takových roztoků samotných po delší dobu (měsíce při pokojové teplotě) jsou gonadotropiny nedostatečně stabilní.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří kapalný farmaceutický prostředek s obsahem gonadotropinů, který obsahuje gonadotropin a stabilizační množství polykarboxylové kyseliny nebo její soli a thioetherové sloučeniny.

Farmaceutické prostředky s obsahem gonadotropinů podle předkládaného vynálezu mají zlepšenou stabilitu při dlouhodobém skladování ve srovnání s formulacemi, ve kterých thioetherová sloučenina chybí. Termín polykarboxylová kyselina, jak je zde použit, znamená organická

- 2 CZ 297419 B6 kyselina mající dvě nebo více karboxylových skupin. Typickými polykarboxylovými sloučeninami jsou kyselina citrónová, kyselina izocitronová, kyselina vinná, kyselina aspartová, kyselina glutamová nebo směsi těchto kyselin. Může být použita jakákoliv farmaceuticky akceptovatelná sůl, zejména soli alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, jako je sodík, draslík a vápník.

Preferovanou solí je sodná sůl.

Termín thioetherová sloučenina znamená sloučeninu, která obsahuje alkylthioalkylovou funkci mající vzorec Ri-S-R₂- kde Ri je nižší alkyl a R₂ je nižší alkenyl. Termín nižší alkyl znamená větvenou nebo nevětvenou alkylovou skupinu mající 1 až 6 atomů uhlíku, jako je hexyl, pentyl, butyl, terc-butyl, propyl, izopropyl, ethyl nebo methyl. Preferovanou nižší alkylovou skupinou je methyl. Termín nižší alkylen znamená alkenylovou skupinu mající 1 až 6 atomů uhlíku, jako je 1,6-hexandiyl, 1,5-pentadiyl, 1,4-butandiyl, 1,3-propandiyl, propyliden, 1,2-ethandiyl, ethyliden nebo methyliden. Preferovaně má thioetherová sloučenina alkylthioalkyl funkci, která koresponduje postrannímu řetězci α-aminokyseliny, jako tomu je u aminokyseliny methioninu, homoa nor-methioninu, buď jako D-nebo jako L-enanthiomer, nebo jako racemická směs. Preferovanou thioetherovou sloučeninou je aminokyselina methionin (R] je methyl; R₂ je 1,2-ethandiyl).

Formulace, obsahující kapalný gonadotropin podle předkládaného vynálezu, obsahuje gonadotropin ve směsi s určitými stabilizátory v roztoku. Formulace bude obsahovat dostatečné množství polykarboxylové kyseliny, nebo její soli, a thioetherovou sloučeninu pro stabilizaci gonadotropinu v roztoku po požadovanou dobu při požadované teplotě.

Gonadotropin nebo deriváty gonadotropinu, jak je použito v definici formulace podle předkládaného vynálezu, jsou proteiny popsané výše, např. lidský choriový gonadotropin (hCG), folikuly stimulující hormon (FSH), luteinizační hormon (LH), thyroidní stimulační hormon (TSH), nebo jejich deriváty, analoga a směsi, s nebo bez proteinové složky.

Gonadotropiny mohou být izolovány z přirozených zdrojů, například z lidské moči, nebo mohou být gonadotropiny připraveny (bio)syntetickou cestou, tj. rekombinantními DNA technikami. Rekombinantní gonadotropiny mohou být například připraveny tak, jak to popisuje Keene et al., (1989) Expresion of Biologically Active Human Follitropin in Chinese Hamster Ovary Cells, The Joumal of Biological Chemistry, 264: 4769 - 4775, nebo jak popisuje Reddy et al., v mezinárodní patentové přihlášce WO 86/04 589 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.).

Jak je zde použito, gonadotropin, například folikulámí stimulační hormon (FSH), zahrnuje analoga sloučeniny a její rekombinantní, přirozené, deglykosylované, neglygosylované, modifikované glykosylované a jiné formy. Například, v definici gonadotropinů jsou zahrnuty modifikované formy gonadotropinů, ve kterých je karboxy konec proteinu rozšířen o karboxy terminální peptid (CTP), jehož sekvence je odvozena od β-podjednotky lidského choriového gonadotropinů (sekvence CTP reprezentuje aminokyselinové zbytky 112 až 118 až 145 hCG β podjednotky, nebo její varianty), jak je popsáno v evropském patentu 0 461 200 (Washington University). Příklady takových modifikovaných forem jsou rekombinantní FSH-CTP a rekombinantní LH-CTP.

Nejvíce preferovaným gonadotropinem je FSH produkovaný rekombinantní DNA technikou (recFSH), bud samostatně nebo ve směsi s LH nebo hCG. FSH purifikovaný z přirozených zdrojů je obecně pouze částečně purifikovaný. Zdá se, že (proteinové) znečištění jej nějak stabilizuje. U recFSH není znečištění nicméně přítomno a tak FSH, přítomný ve srovnatelně nižší koncentraci na bázi proteinu, je citlivější k rychlé degradaci.

Jak je zde použito, stabilizace je relativní pojem. Stabilizace formulace, obsahující kapalný gonadotropin, stabilizačním činidlem nebo sloučeninou znamená zabránit nebo oddálit snížení aktivity gonadotropinů stabilizátorem. Například, přípravek bude považován za stabilizovaný, pokud při přidání stabilizující sloučeniny (stabilizátoru) uběhne delší doba (např. 2 týdny místo týdne) do degradace při dané teplotě, což uvolní nějakou jeho in vivo a/nebo in vitro aktivitu ve srovnání s přípravkem bez stabilizátoru.

- 3 CZ 297419 B6

Aktivita gonadotropinu může být stanovena za použití známých metod pro určitý gonadotropin. Jedno možné měření aktivity může být provedeno určením množství (inaktivních) oligomerů, nebo modifikovaných (např. oxidovaných) monomerů a a β podjednotek, vytvořených během určité doby. Tvorba oligomerů ve vzorku může být určena HPSEC (chromatografií s vylučováním podle velikosti s vysokou rozlišovací schopností). Jiné metody pro určení residuální aktivity například recFSH zahrnují enzymový test imunoaktivity (EIA) jak je popsán v patentu US 32 696, Schuurs et al.; kit je dostupný pod obchodním názvem FSHEIA od BioMérieux of Marcy 1'Etoile 69260 Charbonniéres-les-Bains, France pro FSH; a in vitro biotest pro FSH, FSH-CTP a LH jak je popsán v Mannaerts et al., Applications of in vitro Bioassays for Ganodotropins, Neuroendocrinology of Reproduction, str. 49 -58 (Elsevier Science Publishers BV, Amsterodam, NL, 1987).

V preferovaném provedení vynálezu obsahuje formulace, obsahující kapalný gonadotropin, jako stabilizátory dostatečné množství soli kyseliny citrónové, preferovaně citrátu sodného a dostatečné množství thioetherové sloučeniny methioninu (racemická DL směs).

Pokud jsou citrát sodný a methionin vybrané stabilizátory kapalné sloučeniny podle předkládaného vynálezu, pak jsou vhodné koncentrace citrátu sodného 25 až 100 mM a vhodné koncentrace methioninu jsou 1 až 10 mM.

Bylo zjištěno, že inkorporace neredukujících disacharidů, jako je sacharóza nebo trehalóza, do formulace, která již obsahuje polykarboxylovou kyselinu nebo její sůl a thioetherovou sloučeninu jako stabilizátory, bude dále zvyšovat stabilitu gonadotropinu v kapalné formulaci. Sacharóza je preferovaným disacharidem ve formulacích podle předkládaného vynálezu. Koncentrace sacharózy přibližně 25 až 300 mM je vhodná. Zejména jsou preferovány formulace obsahující kapalný gonadotropin, obsahující rekombinantní FSH nebo jeho derivát, citrát sodný a methionin jako stabilizátory a další množství sacharózy. Pokud je recFSH RECFSH-CTP gonadotropin, který má být stabilizován v kapalné formulaci, pak je preferované množství sacharózy 50 mg/ml.

Formulace podle předkládaného vynálezu preferovaně také obsahují jeden nebo více neionických surfaktantů (povrchově aktivních látek). Tyto surfaktanty účinkují jako anti-adsorpční činidla a brání ztrátě gonadotropinu v důsledku adsorpce proteinu na stěnu nádoby, ve které je formulace uchovávána. Přidání anti-adsorpčního činidla do formulace podle předkládaného vynálezu je zejména žádoucí tam, kde formulace obsahuje rekombinantní gonadotropin v nízkých koncentracích.

Preferovanými neiontovými surfaktanty jsou Polysorbate 20, NF (Tween 20 dostupný od Atlas Chemicals Company), Polysorbate 80, NF (Tween 80 dostupný od Atlas Chemicals Company), Brij 35 (dostupný od ICI Pharmaceuticals) a Pluronic F123 (dostupný od BASF). Zejména je preferován Polysorbate 20, NF (Tween 20).

Polysorbát je preferovaně chápán jako polysorbát, kteiý patří do specifikace USP/NF XXII, která je publikována jako The National Formulary, str. 1763 a str. 1967, Offícial z 1.1.19990 (22. vydání, US Pharmacopeial Convention, INC. 1989).

Anti-adsorpční činidlo(a) bude nebo budou přítomna v takovém množství, aby adsorpce proteinu na stěny nádob, nebo stěny kontainerů nebo na výrobků ze skla použitých při zpracování, byla snížena. Pro ilustraci, je preferováno množství Polysorbate 20 dostatečné pro vytvoření koncentrace mezi 0,1 a 0,2 mg/ml v konečné formulaci.

Kapalná formulace podle předkládaného vynálezu má pH mezi 6 a 8, a preferovaně mezi 6,5 a

7,2. Nejvíce preferován je roztok, mající pH okolo 7,0. Bylo zjištěno, že při těchto rozmezích pH je kapalná formulace podle předkládaného vynálezu nejvíce stabilní.

- 4 CZ 297419 B6

Stabilní formulace podle předkládaného vynálezu může být připravena smísením vybraného gonadotropinu ve vodném roztoku s dostatečným množstvím stabilizátoru polykarboxylové kyseliny nebo její soli a stabilizátoru thioetherové sloučeniny pro stabilizaci proteinu a potom může být volitelně ve směsi rozpuštěn neredukující disacharid a/nebo neiontový surfaktant. pH vzniklé směsi je potom upraveno na hodnotu mezi 6,5 a 7,2 a roztok je (sterilně) filtrován.

Jak je zde použito, vodný roztok je roztok obsahující vodu, preferovaně vodu vhodné kvality pro parenterální podání (voda pro injekce USP) jako primární, ale ne nutně jediné rozpouštědlo. Malá množství farmaceuticky přijatelných s vodou mísitelných ředidel jako je ethanol mohou být také přítomna jako spolurozpouštědlo.

V preferovaném provedení předkládaného vynálezu je poskytnuta metoda pro přípravu formulace, obsahující kapalný gonadotropin obsahující smísení, ve vodném roztoku, alespoň jednoho gonadotropinu s množství citrátu sodného v koncentraci 25 až 100 mM a množstvím methioninu v koncentraci 1 až 10 mM; volitelně rozpuštění množství sacharózy v uvedené směsi v koncentraci 25 až 300 mM a volitelně rozpuštění neiontového surfaktantu, preferovaně Polysorbate 20, v uvedené směsi; a upravení pH vzniklého roztoku na hodnotu mezi 6,5 a 7,2, po čemž může být roztok sterilně filtrován.

Obecné metody pro přípravu parenterálních formulací, zejména s ohledem na měření, která mají být provedena pro to, zda je roztok sterilní, jsou v oboru známá a jsou popsána například v Gennaro et al., Remingtonů Pharmaceutical Sciences (18. vydání, Mack Publishing Company, 1990, viz část 8 Pharmaceuticals Preparations and Their Manufacture, a zejména kapitolu Parenteral Preparations na str. 1545 - 1569).

Jakýkoliv použitý gonadotropin je preferovaně přítomen ve formulacích v množství dostatečném pro tvorbu terapeuticky užitečných koncentrací proteinu pro parenterální (např. subkutánní, intramuskulámí nebo intravenosní) podání.

Použitelné dávky gonadotropinů jsou lékařům známé a množství obsažené v každé dávce je závislé na onemocnění a konkrétním léčeném pacientovi.

Například, pro FSH jsou použitelné rozsahy dávek od 25 do 1500 mezinárodních jednotek (IU), zejména 50 až 225. Přibližně 75 IU je považováno za terapeutické množství.

Pro ilustraci, může být podáno množství asi 10 000 mezinárodních jednotek jako horní hranice a asi 15 mezinárodních jednotek jako dolní hranice pro hCG. Jsou používány injekce v rozsahu 20 až 225 mezinárodních jednotek LH.

Koncentrace gonadotropinu v kapalných formulacích podle předkládaného vynálezu je závislá na solubilitě gonadotropinu a na terapeutickém množství pro danou dávku.

Preferované kapalné formulace podle předkládaného vynálezu jsou formulace, které obsahují gonadotropinové rekombinantní proteiny recFSH nebo jeho recFSH-CTP derivát. Vhodné koncentrace recFSH mohou být v rozsahu asi 20 až 2 000 IU/ml, což zhruba koresponduje s koncentrací 2 až 200 pg/ml (pro přípravek mající specifickou FSH aktivitu 10 000 IU/mg proteinu). Preferovaný rozsah je od 500 do 1500 IU/ml.

V jednom preferovaném provedení je kombinace FSH a LH nebo FSH a HCG rozpuštěna společně za vytvoření formulace mající terapeutické množství obou vybraných gonadotropinů.

Formulace obsahující kapalný gonadotropin podle předkládaného vynálezu může být skladována v kapalném stavu při různých teplotách dlouhodobě a přitom si uchovává biologickou aktivitu a fyzikální stabilitu gonadotropinu. Preferovaná skladovací teplota je nižší 30 °C a vyšší než teplota teploty mrazu. Preferovaná skladovací teplota je mezi asi 2 °C a 8 °C.

- 5 CZ 297419 B6

Formulace, obsahující kapalný gonadotropin podle předkládaného vynálezu mohou být sušeny vymražením, pokud to je požadováno.

V dalším aspektu předkládaného vynálezu je poskytnuta kazeta obsahující sterilní kapalnou formulaci podle předkládaného vynálezu. Jak je zde použito znamená kazeta uzavřený kontainer, jako je ampule, violka, lahvička nebo vak.

Kazeta může obsahovat množství formulace kapalného gonadotropinu pro jednu nebo více terapeutických dávek gonadotropinu.

V dalším aspektu předkládaného vynálezu je poskytnut prostředek pro podání obsahující kazetu obsahující sterilní kapalnou formulaci podle předkládaného vynálezu. Preferovaný prostředek pro podání je injektor tužkového typu, který obsahuje prostředek pro snadné upravení množství formulace, které má být injikováno. Takové injektory tužkového typu jsou samy o sobě známy, jako je například dobře známé B-D Pen (obchodní známka Becton Dickinson and Company), injekční systém pro inzulín.

Jak je uvedeno výše, kapalná formulace gonadotropinu předkládaná tímto vynálezem řeší problém v tom, že, oproti stavu v oboru, je poskytnut přípravek, který může být injikován přímo, tj. bez toho, aby pacient musel rekonstituovat sušený produkt před použitím. Z tohoto hlediska umožňuje vynález také použití pro výrobu přímo injikovatelných kapalných léčiv pro léčbu neplodnosti.

Takové přípravky neexistují, nejsou zřejmé ze současných, komplikovaných injekčních přípravků, uvedené použití není předpokládáno z pohledu dřívější techniky a mají zřejmé výhody v léčbě pacientů.

Přímo injikovatelné kapalné léčivo může být uchováváno v kontaineru jako je violka nebo ampule, tj. kontaineru takového typu, ze kterého může být přímo odebráno a nataženo do injekčního prostředku. Může být také obsaženo v kazetě takového typu, která může umístěna do injekčního prostředku adaptovaného na takovou kazetu, jehož příkladem může být tužkový injektor typu, který byl popsán výše. Mělo by být zaznamenáno, že další výhodou předkládaného vynálezu je to, že kapalné léčivo může být ve formě kazety pro opakované použití. Při použití injektoru s vhodným ukazatelem dávky si může pacient injikovat v každou dobu potřebnou dávku. Výše uvedený B-D tužkový injektor, normálně používaný pro insulin, má vhodný systém pro úpravu injikovaného množství a může být relativně snadno poskytnut s indikátorem dávky adaptovaným na kapalné léčivo obsahující gonadotropin.

S ohledem na výše uvedené, vynález také spočívá ve způsobu pro léčbu infertility podáním gonadotropinu, kde podání je provedeno injikováním kapalného gonadotropinu přímo z podávacího prostředku, jako je injektor tužkového typu, do kterého je vložena kazeta obsahující stabilní, kapalnou formulaci gonadotropinu.

Vynález bude dále objasněn s odkazem na následující příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 - Formulace obsahující rekombinantní FSH

Byly připraveny kapalné formulace obsahující rekombinantní FSH, mající složení podle tabulky

I, a které jsou ukázané jako A-J. 0,5 ml podíly každé kompozice byly uskladněny, v uzavřených ml violkách, po dobu více než 2 měsíce při 8 °C, 30 °C a 40 °C, v příslušném pořadí.

- 6 CZ 297419 B6

In vitro bioaktivita uskladněných recFSH vzorků byla potom měřena, za pomoci určení stimulace buněk, na kterých je exprivován lidský FSH receptor. Aktivita je měřena jako množství cyklického AMP, které je uvolňováno v důsledku vazby FSH na FSH receptor. V tabulce II je vyjádřena bioaktivita FSH vzorků skladovaných po ukázanou dobu a při ukázané teplotě, jako 5 procento aktivity stejného vzorku v čase nula. Data v tabulce II ukazují, že formulace recFSH bez thioetherové sloučeniny methioninu je méně stabilní než formulace recFSH s methioninem, zejména po skladování při teplotách vyšších než je pokojová teplota a po delší dobu.

Příklad 2 - Formulace obsahující rekombinantní FSH-CTP

Byly připraveny kapalné formulace obsahující rekombinantní FSH, mající složení podle tabulky III, a které jsou ukázané jako A-J. 0,5 ml podíly každé kompozice byly uskladněny, v uzavřených 2 ml violkách, po dobu více než 2 měsíce při 8 °C, 30 °C a 40 °C, v příslušném pořadí.

In vitro bioaktivita, určená stejně jako v příkladu 1, je ukázána v tabulce IV.

Data v tabulce IV ukazují, že formulace recFSH-CTP bez thioetherové sloučeniny methioninu je méně stabilní než formulace recFSH-CTP s methioninem, zejména po skladování při pokojové 20 teplotě nebo vyšší.

Tabulka I: Formulace recFSH kompozic A-J

Sloučenina³ recFSH	ABCDEFGHIJ 50 50 50 50 50 600 600 600 600 600 IU IU IU IU IU IU IU IU IU IU
Sacharóza	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
Dihydrát citrátu sodného	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7
Polysorbate 20	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
DL-methionin	-	0,1	0,25	0,5	1,0	-	0,1	0,25	0,5	1,0
Ph	7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
Voda do (ml)	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0

^a v mg, pokud není uvedeno jinak

B-E; G-J = tento vynález, A a F = reference

Tabulka II: Udržení in vitro bioaktivity kompozic FSH A-J během doby*

	1 měsíc 8 °C	1 měsíc 30 °C	1 měsíc 40 °C	2 měsíce 8 °C	2 měsíce 30 °C	2 měsíce 40 °C
A	90	83	63	95	84	52
B	86	82	68	95	87	60
C	76	72	67	83	89	69
D	92	98	85	95	92	73
E	97	83	73	100	83	72

F	87	84	71	90	80	55
G	97	98	84	87	85	67
H	89	90	78	96	99	83
I	99	85	75	96	88	73
J	92	90	82	100	89	75

*: bioaktivita je vyjádřena jako procento aktivity v čase nula

- 7 CZ 297419 B6

Tabulka III: Formulace recFSH-CTP kompozic A-J

Sloučenina³ recFSH-	A	B	c	D	E	F	G	H	1	J
CTP	5	5	5	5	5	30	30	30	30	30
	pg	pg	pg	pg	pg	pg	pg	pg	pg	pg
Sacharóza	50	50	50	50	50	50	50	50	50	50
Dihydrát citrátu sodného	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7	14,7
Polysorbate 20	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
DL-methionin	-	0,1	0,25	0,5	1,0	-	0,1	0,25	0,5	1,0
PH	7	7	7	7	7	7	7	7	7	7
Voda do (ml)	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0

^a v mg, pokud není uvedeno jinak

B-E; G-J = tento vynález, A a F = reference

Tabulka IV: Udržení in vitro bioaktivity kompozic recFSH-CTP A-J během doby*

	2 měsíce 8 °C	2 měsíce 20 °C	2 měsíce 30 °C	2 měsíce 40 °C
A	89	87	75	50
B	87	90	89	74
C	93	95	88	66
D	89	—	83	60
E	103	101	97	—

F	78	75	68	43
G	84	90	89	70
H	88	85	85	74
I	92	92	90	74
J	88	92	89	72

*: bioaktivita je vyjádřena jako procento aktivity v čase nula

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kapalný farmaceutický prostředek s obsahem gonadotropinu, vyznačující se tím, že obsahuje gonadotropin a stabilizační množství polykarboxylové kyseliny nebo její soli a thioetherové sloučeniny.
2. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako thioetherovou sloučeninu obsahuje aminokyselinu methionin.
3. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že jako polykarboxylovou kyselinu obsahuje kyselinu citrónovou nebo její sodnou sůl.
4. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku3, vyznačující se tím, že obsahuje citronan sodný v koncentraci 25 až 100 mM a methionin v koncentraci 1 až 10 mM.

- 8 CZ 297419 B6
5. Kapalný farmaceutický prostředek podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že dále obsahuje neredukující disacharid.
6. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako 5 neredukující disacharid obsahuje sacharózu v koncentraci 25 až 300 mM.
7. Kapalný farmaceutický prostředek podle některého z nároků 1 až 6, vy znač u j í cí se tím, že dále obsahuje neiontové smáčedlo.

10
8. Kapalný farmaceutický prostředek podle některého z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že má hodnotu pH v rozmezí 6,5 až 7,2, s výhodou má pH 7.
9. Kapalný farmaceutický prostředek podle některého z nároků laž8, vyznačující se tím, že se gonadotropin volí ze skupiny, zahrnující luteinizační hormon - LH, lidský chorio-

15 gonadotropin - hCG, folikulostimulační hormon - FSH nebo deriváty těchto látek a jejich směsi.
10. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že jako gonadotropin obsahuje rekombinantní lidský folikulostimulační hormon recFSH nebo rekombinantní FSH-karboxyterminální protein recFSH-CTP.
11. Způsob výroby farmaceutického prostředku podle některého z nároků lažlO, vyznačující se tím, že se ve vodném roztoku smísí alespoň jeden gonadotropin se stabilizačním množstvím polykarboxylové kyseliny nebo její solí a stabilizačním množstvím thioetherové sloučeniny;

25 ve směsi se popřípadě rozpustí neredukující disacharid a popřípadě ještě neiontové smáčedlo a pH výsledného roztoku se upraví na hodnotu v rozmezí 6,5 až 7,2.
12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že se ve vodném roztoku smísí alespoň jeden gonadotropin s citronanem sodným do koncentrace 25 až 100 mM a methioninem

30 do koncentrace 1 až 10 mM;

ve směsi se popřípadě rozpustí sacharóza do koncentrace 25 až 300 mM a popřípadě ještě neiontové smáčedlo a pH výsledného roztoku se upraví na hodnotu 6,5 až 7,2.
13. Kazeta, vyznačující se tím, že obsahuje sterilní farmaceutický prostředek podle 35 některého z nároků 1 až 10.
14. Prostředek pro podání, vyznačující se tím, že obsahuje kazetu podle nároku 13.