CZ294136B6

CZ294136B6 - Substituované pyridinoarylpiperaziny použitelné při léčení benigního zbytnění prostaty

Info

Publication number: CZ294136B6
Application number: CZ20003044A
Authority: CZ
Inventors: Kuoágee@Hong; Murrayáwilliamáv; Proutyácatherineáp
Original assignee: Ortho@Mcneilápharmaceuticalźáinc
Priority date: 1998-02-20
Filing date: 1999-02-19
Publication date: 2004-10-13
Also published as: HUP0100781A3; CZ20003044A3; HUP0100781A2; EP1054868B1; CN1291188A; US6218396B1; KR100591028B1; PT1054868E; BR9909647A; IL137954A0; NO20004141D0; WO1999042448A1; ATE250580T1; EP1054868A1; JP2002503724A; KR20010041115A; ZA991315B; NO317103B1; AU3302599A; TR200003220T2

Abstract

Substituované pyridinoarylpiperaziny obecného vzorce IŹ jejich použití k terapeutickým účelům a farmaceutické kompoziceŹ které je obsahují@ Sloučeniny podle vynálezu selektivně inhibují vazbu na @alfa@�@sub@a@n@ adrenergický receptorŹ který byl implikován v benigní prostatické hyperplasiiŕ

Description

Substituované pyridinoarylpiperaziny použitelné při léčení benigního zbytnění prostaty

Oblast techniky

Tento vynález se týká řady pyridinoarylpiperazinových derivátů, farmaceutických prostředků, které je obsahují, stejně jako způsobů jejich použití. Sloučeniny podle vynálezu selektivně inhibují vazbu na al_a adrenergický receptor, který byl implikován v benigní prostatické hyperplasii. Spolu s tím redukují sloučeniny podle vynálezu intrauretální tlak v in vivo modelu. Tyto sloučeniny jsou tedy potenciálně vhodné pro léčení této nemoci.

Dosavadní stav techniky

Benigní prostatická hyperplasie (BPH), nezhoubné zvětšení prostaty, je nejběžnějším benigním nádorem u mužů. Přibližně 50 % všech mužů starších než 65 let má určitý stupeň BPH a každý třetí z těchto mužů má klinické symptomy shodné s obstrukcí vývodu měchýře (Hieble a Caine, 1986). Ve Spojených státech jsou benigní a maligní onemocnění prostaty odpovědné za více chirurgických zákroků než onemocnění jakéhokoliv jiného orgánu u mužů nad padesát let xěku.

BPH má dvě složky, statickou a dynamickou složku. Statická složka je zaviněná zbytněním žlázy předstojné, prostaty, což může být příčinou stlačení močové trubice a obstrukce toku moči z močového měchýře. Dynamická složka je zaviněna zvýšením tonusu hladkého svalstva hrdla měchýře a prostaty samé (což odpovídá vyprazdňování měchýře) a je regulována alfa 1 adrenergickými receptory (al-ARS).

Medicinální ošetření určená na BPH směrují tyto složky v různých stupních a terapeutický výběr se rozšiřuje.

Výběr chirurgických ošetření je směrován ke statické složce BPH a zahrnuje transuretální resekci prostaty (TURP), transuretální incizi prostaty (TUIP), otevřenou prostatektomii, rozšíření vydutím, hypertermii, ablaci stenty a laserovou ablaci. TURP je preferovaným ošetřením u pacientů s BPH, a v roce 1990 se ve Spojených státech provedlo kolem 320 000 resekci TURP v ceně 2,2 bilionů dolarů (Weis a kol., 1993). I přes účinné léčení většiny mužů se symptomatickým BPH není u přibližně 20-25 % pacientů uspokojivě dlouhodobý výsledek. Komplikace zahrnují retrográdní ejakulaci (70-75 % pacientů), impotenci (5-10 %), postoperativní infekce močového traktu (5-10 %) a určitý stupeň inkontinence moči (2-4 %) (Mebust a kol., 1989). Navíc je vyhodnocen výskyt reoperace u mužů do 10 let nebo později jako přibližně 15-20% (Wennberg a kol., 1987).

Kromě chirurgických zásahů jsou určité terapie pomocí léků, směrovaných na statickou složku tohoto chorobného stavu. Finasterid (Proscar , Merc) je jedním z těchto léčiv, které je určeno pro léčení symptomatického BPH. Toto léčivo je kompetitivním inhibitorem enzymu 5a-reduktázy, který je zodpovědný za konverzi testosteronu na dihydrotestosteron v prostatě (Gormley a kol., 1992). Dihydrotestosteron se zdá být podstatným mitogenem pro růst prostaty, a látky, které inhibují 5oc-reduktázu, redukují velikost prostaty a zlepšují tok moči prostatickou močovou trubicí. Ačkoliv je finasterid potentním inhibitorem 5a-reduktázy a zajišťuje výrazný pokles koncentrací dihydrotestosteronu v séru a tkáni, je pouze mírně účinným při léčení symptomatického BPH (Oesterling, 1995). Trvá 6-12 měsíců než jsou účinky finasteridu evidentní, a u mnoha mužů je klinické zlepšení minimální (Barry, 1997).

Pro dynamickou složku BPH bylo stanoveno použití látek blokujících adrenergický receptor (alAR blokátory), které působí snížením tonosu hladkého svalstva s prostatickou žlázou samou. Pro léčení symptomatické obstrukce hrdla měchýře vzhledem kBPH byla zkoumána řada al

-1 CZ 294136 B6

AR blokátorů (terazosin, prazosin, a doxazosin), přičemž nejvíce byl studován terazosin (Hytrin, Abbott). Ačkoliv jsou al-AR blokátory dobře tolerovány, přibližně u 10-15% pacientů se vyvinou klinicky nepříznivé účinky (Lepor, 1995). Nežádoucí účinky jsou u všech členů této skupiny podobné, přičemž posturální hypertenze je nejběžněji stanoveným vedlejším účinkem (Lepor a kol. 1992). Ve srovnání s inhibitory αΐ-reduktázy mají al-AR blokátory mnohem rychlejší začátek působení (Steers, 1995). Nicméně jejich terapeutický účinek, který je měřen zlepšením symptomů a maximální rychlostí průtoku moči, je zmírněn (Oesterling, 1985).

Použití al-AR antagonistů při léčení BPH se týká jejich schopnosti snižovat tonus hladkého svalstva prostaty, vedoucí ke zmírnění obstruktivních symptomů. Bylo zjištěno, že adrenergické receptory v těle hrají dominantní úlohu při regulaci krevního tlaku, nazálního rozpoznávání, zhroucených funkcí a dalších postupů (Harrison a kol., 1991). Dále existuje řada klonovaných al-AR receptorových subtypů: al-AR_a-y, al_b-AR, a ald-AR (Bruno a kol., 1991; Forray a kol., 1994& Hirasawa a kol., 1993& Ramaro a kol-& Schwinn a kol. 1995& Weinberg a kol., 1994). Rada laboratoří charakterizována al-AR-y v lidské prostatě technikami týkajícími se funkce, radiovazebnými technikami a technikami molekulární biologie (Forray a kol., 1994& Hatano a kol., 1994; Marshall a kol., 1992; Yamada a kol., 1994). Tyto studie poskytují důkazy na podporu názoru, že al_a-AR subtyp zahrnuje většinu z al-AR-ů v lidském prostatickém hladkém svalstvu a zmírňuje kontrakce této tkáně. Zato zjištění předpokládají, že rozvoj selektivního subtypu al_a-AR antagonisty by mohl vést k terapeuticky účinnému činidlu se sníženými vedlejšími účinky pro léčení BPH.

Podstata vynálezu

Sloučeniny podle vynálezu se selektivně vážou na al_a-AR receptor. Antagonizují aktivitu tohoto receptorů a jsou selektivní pro tkáň prostaty oproti aortické tkáni. Jako takové tedy znamenají dostupné léčení BPH bez vedlejších účinků spojených se známými al-AR antagonisty.

Vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce I

kde

Ri je vodík, halogen, Ci_₅alkoxyskupina, hydroxyl nebo Ci_₅ alkyl;

R₂ je Ci_6alkyl, substituovaný C^alkyl, kde jsou substituenty alkylu nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů, fenyl, substituovaný fenyl kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z

Ci_₅alkylu, Ci_5alkoxyskupiny, a trihalogen Ci_₅alkylu, fenylC]_₅alkyl, nebo substituovaný fenylCi_₅alkyl,

-2CZ 294136 B6 kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci-salkylu, halogenu, Ci_₅alkoxyskupiny, a trihalogen C]_₅alkylu;

R₃ je vodík, hydroxyskupina nebo Ci_salkoxyskupina, pokud je vazba obsahující přerušovanou čáru jednoduchou vazbou; nebo je kyslík, pokud je vazba obsahující přerušovanou čáru dvojnou vazbou;

R4 je vodík, Ci_₅alkyl, fenylCi_₅alkyl nebo substituovaný fenylCi_₅alkyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více členů skupiny sestávající z

C]_₅alkylu, Ci-₅alkoxyskupiny, a trihalogen Ci_₅alkylu;

R_s jeC_Malkyl, substituovaný Ci^alkyl, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více halogenů, fenyl, substituovaný fenyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více členů skupiny sestávající z

C]__salkylu, vodíku, halogenu, hydroxyskupiny, Ci_₈alkylu, substituovaného C].₈alkylu, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů,

Ci_₅alkoxyskupiny, aminoskupiny, Ci_₅alkylaminoskupiny, diCi_₅alkylaminoskupiny, Ci_₅alkyl-karbonylu, C]_₅alkoxykarbonylu, fenylkarbonylu, naftylkarbonylu, nitrilu, aminosulfonylu, C]_₅alkylsulfonylu, fenyisulfonylu a substituovaného fenylsulfonylu, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více členů ze skupiny sestávající z C]_₈alkyl vodíku, halogenu, hydroxyskupiny a nitroskupiny;

fenylCj-salkyl, substituovaný fenylCi_₅alkyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více členů ze skupiny sestávající zCi_₈alkyl vodíku, halogenu, hydroxyskupiny, Ci_₈alkylu, substituovaného Cj.salkylu, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více halogenů, C]_₅alkoxyskupiny, aminoskupiny, Ci_₅alkylaminoskupiny, diCi_₅alkylaminoskupiny, Ci_₅alkylkarbonylu, C1-5 alkoxykarbonylu, a nitroskupiny;

X je kyslík, síra nebo NH;

jejich farmaceuticky přijatelné soli a stereoizomery, racemické směsi, stejně jako jejich enantiomery.

Předmětem vynálezu jsou dále substituované pyridinoarylpiperaziny vzorce I definované výše pro použití pro léčení benigní prostatické hyperplasie a obecně pro léčení nemocí spojených s a-l_a adrenergickým receptorem, jakož i použití těchto sloučenin pro výrobu příslušných léčiv. Konečně jsou předmětem vynálezu také farmaceutické kompozice či prostředky obsahující účinnou dávku sloučenin vzorce I.

Termíny užívané v popisu vynálezu jsou běžně používané a jsou známé odborníkovi v dané oblasti techniky. Termíny, které mají jiný význam než je uvedený, jsou definovány.

„HBSS“ označuje Hankův rovnovážný solný roztok.

„Nezávisle“ znamená, že pokud zde je více než jeden substituent, mohou být substituenty různé.

-3 CZ 294136 B6

Termín „alkyl“ označuje přímý a větvený řetězec alkylskupin a s ohledem na účelnost se pod tímto termínem rozumí i cyklický řetězec cykloalkylskupin v případě, že specifikovaný počet atomů uhlíku v těchto skupinách umožňuje existenci kruhu;

„alkoxy“ označuje O-alkyl, kde je alkyl definovaný zvlášť.

„Ac“ znamená acetyl, „Me“ znamená methyl, „Et“ znamená ethyl, „Boc“ znamená íerc-butoxykarbonyl, „Pd/C“ znamená palladium na uhlíkovém nosiči, „DMAP“ označuje dimethylaminopyridin, „HOBT“ označuje hydroxybenzotriazol hydrát, a „EDCI“ označuje l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid hydrochlorid.

Termín „HATU“ označuje O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluronium hexafluorofosfát a symbol „Ph“ označuje fenyl, a „aryl“ zahrnuje mono- a kondenzované aromatické kruhy jako je fenyl a naftyl. Symbol „ES“ označuje elektrosprej a symbol „MS“ označuje hmotové spektrum.

Některé ze sloučenin vzorce I zahrnují chirální uhlíkový atom. Tyto sloučeniny tedy mohou být připraveny jako stereoizomemí, racemické směsi nebo čisté enantiomery. Všechny stereoizomery, čisté enantiomery a racemické směsi jsou považovány za spadající do rozsahu tohoto vynálezu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být připraveny podle následujících schémat, kde některá schémata dokládají více než jedno provedení vynálezu. V těchto případech je výběr schématu na volbě podle schopností chemika.

Sloučenina vzorce I, kde X je NH, Ri je vodík, R₂ je fenyl, R₃ je hydroxyskupina, R4 je vodík a Rs je 3-trifluormethylfenyl, může být připraveny za použití schématu 1. l-Azido-3-(p-toluensulfonyloxy)propan-2-ol la, je zahříván na asi 100 °C s vhodně substituovaným derivátem piperazinu, lb po asi 2-5 dní za získání azidu 1c. Tento azid se zpracovává s Pd/C a H₂ (50 psi; 1 psi je asi 6,9 kPa) v inertním rozpouštědle po dobu 16 h za získání volného aminu Id. Tento amin se zpracovává s 3-acyl-2-substituovaným pyridinovým derivátem, jako je 2-[(3-trifluormethylfenyl)amino]-3-pyridinkarbonylchlorid, le, DMPA a N,N-diizopropylethylamin v methylenchloridu při asi teplotě okolí po 2-16 h za získání požadované sloučeniny vzorce I. Toto schéma může být použito pro přípravu řady sloučenin vzorceI. Například pro přípravu sloučenin, kde R] a R₂ se mění, jednoduchou náhradou znázorněného lb jakýmikoliv známými substituovanými piperaziny. Ačkoliv byl znázorněný produkt připraven z racemického azidu la, čisté enantiomery tohoto azidu jsou známé a mohou být v tomto schématu použity. Pro přípravu sloučenin, kde R₃ je jiné než substituovaný fenyl, nahradí se acylpyridinový derivát le jiným acylpyridinem. Například pro přípravu sloučeniny, kde R₃ je fenylmethyl, nahradí se znázorněný le s 2-[(fenyl-methyl)amino]-3-pyridinkarbonylchloridem. Pro přípravu sloučenin, kde X je jiné než NH, aminem substituovaný acylpyridin se nahradí thio- nebo oxy-substituovaným, pyridinem. Například pro přípravu sloučeniny, kde X je síra, Ri je vodík, R₂ je fenyl, R₃ je hydroxyskupina, R4 je vodík, a R₅ je fenyl, nahradí se znázorněný le s 2-(fenyl-thio)pyridin-3karboxylchloridem.

Pro přípravu sloučenin, kde R₃ je Ci_₅alkoxyskupina, nahradí se výchozí materiál lc s 1—[1— azido-2-methoxypropan-l-yl]-4-[2-izopropoxyfenyl]piperazinem a dále se provádí zbývající kroky schématu.

Sloučeniny, kde R₃ je karbonyl, mohou být připraveny zpracováním produktů ze schématu 1 s oxidačním činidlem, jako je Swemovo činidlo (vzniklé z oxalylchloridu a DMSO) při -78 °C až teplotě místnosti po 30 minut až 1 hodinu.

-4CZ 294136 B6

Schéma 1

(lb)

HjN

CF₃

(ld)

Schéma 2 může být použito pro přípravu sloučenin vzorce I, kde X je síra, Ri je fluor, R₂ je ethyl, R₃ je vodík, R4 je vodík a R₅ je 4-chlorfenyl. Příslušně substituovaný piperazinový derivát 2a je zpracován s N-BOC chráněným 3-brompropylaminem a uhličitanem cezným v acetonitrilu pod 5 refluxem po 16 hodin za získání substituovaného derivátu piperazinu 2b. Tento derivát je konvertován na volný amin, 2c, zpracováním s TFA a methylenchloridem při teplotě místnosti po 2 až 6 hodin. Derivát 2C je kuplován se substituovaným acylpyridinovým derivátem 2d s použitím DMAP, a Ν,Ν-diizopropylethylaminu v methylenchloridu při asi teplotě místnosti po 2 až 6 hodin za získání požadované sloučeniny vzorce I. Jak je popsáno ve schématu 1, schéma 2 ío může být modifikováno za získání mnoha sloučenin vzorce I.

Schéma 2

(2a)

BOC-NH +

BOC-NH^x^/Br

Další způsob přípravy sloučenin podle vynálezu je znázorněn schématem 3. Zpracováním derivátu 2c a 2-chlornikotinové kyseliny s HOPT, DMAP, ADCI a N,N-diizopropylethylaminem v methylenchloridu při asi teplotě místnosti po 2 až 6 hodin se získá chlorpyridin

-6CZ 294136 B6

3a. Zpracování tohoto derivátu s aromatickým alkoholem jako je 3b poskytne sloučeninu podle vynálezu, kde X je kyslík, Rj je fluor, R₂ je ethyl, Rje vodík, R4 je vodík, a R₅ je 4-methylfenyl.

Schéma 3

Pro přípravu sloučenin podle vynálezu, kde R4 je jiné než vodík, může být použito schématu 4.

Aminoskupina meziproduktů 2c může být zpracována s aldehydem 4a, jako je např. benzaldehyd, a získání iminu 4b. Tento meziprodukt může být redukován s NaBH₄ při teplotě místnosti za získání monoaminu 4c. Tento amin je kuplován se substituovaným acylpyridinovým derivátem za použití DMPA a Ν,Ν-diizo-propylethylaminu v methylenchloridu při přibližně teplotě místnosti po 2 až 6 hodin za získání požadované sloučeniny vzorce I. Jak je popsáno v předchozích schématech, může být schéma 4 modifikováno pro poskytnutí řady sloučenin vzorce I. Například pro přípravu sloučeniny, kde R₃ je hydroxyskupina, nahradí se 2c meziproduktem ld a následují zbývající kroky ve schématu 4.

Schéma 4

-8CZ 294136 B6

Pro přípravu čistých enantiomerů sloučenin vzorce I, kde R₃ je hydroxyskupina, může být použito schéma 5. (S)(+)epichlorhydrin (97%) může být zpracován s benzylaminem ve vhodném organickém rozpouštědle, jako je hexan, při přibližně teplotě místnosti po asi 48-72 hodin za 5 získání hydroxysloučeniny 5a. Tento meziprodukt může být zpracován s BOC reakčním činidlem jako je di-íerc-butyldikarbonát, a organickou bází, jako je triethylamin, v inertním rozpouštědle, jako je THF, při asi 0 °C až přibližně teplotě místnosti po 10 až 24 hodiny za získání Nchráněného derivátu 5b. Tento meziprodukt může být zpracován s piperazinovým derivátem, 5c, bází, jako je hydroxid draselný, v alkoholickém rozpouštědle jako je methanol při asi 0 °C až ío přibližně teplotě místnosti po dobu asi 1 až asi 3 dny za získání sloučeného derivátu 5d. Z této sloučeniny může být odstraněna chránící skupina zpracováním s kyselinou, jako je TFA při přibližně teplotě místnosti po 18 až 24 hodiny za získání volného aminu 5e. Tento amin může být debenzylován použitím palladiového katalyzátoru a formiátu amonného v alkoholovém rozpouštědle, jako je EtOH při asi 45-60 °C po 20 hodin za získání primárního aminu 5f. Tento amin 15 může být kuplován na kyseliny typu 5g použitím peptidového kuplovacího činidla jako je HATU za získání sloučeniny vzorce I. Jak je popsáno ve schématu, může být schéma 5 modifikováno, aby se získala řada sloučenin vzorce I.

-9CZ 294136 B6

- 10CZ 294136 B6

Ačkoliv jsou nárokované sloučeniny vhodné jako antagonisty al_a-AR, některé sloučeniny jsou účinnější než druhé a jsou buď preferovány, nebo zvláště preferovány. Výhodné sloučeniny podle vynálezu zahrnují sloučeniny, kde:

Ri je halogen nebo hydroxyskupina,

R₂ je fenyl nebo vodík,

R₃ je C ^alkoxyskupina,

R4 je Ci_₅alkyl,

R₅ je Ci_₅alkyl, a

X je síra.

Zejména výhodné sloučeniny vzorce I zahrnují sloučeniny, kde:

Ri je vodík,

R₂jeCi_6alkyl,

R₃ je hydroxyskupina nebo vodík

R4 je vodík,

R₅ je fenyl a C]_₅alkyl-substituovaný fenyl

X je kyslík.

Jak je indikováno biologickou aktivitou, sloučeniny vzorce I mohou být použity ve farmaceutických prostředcích pro léčení pacientů (lidí nebo jiných savců) s poruchami týkajícími se inhibice aktivity al_aadrenergického receptoru. Preferovanou cestou je orální podávání. Rozmezí orálních dávek jsou od asi 0,01 do asi 100 mg/kg denně; přičemž optimální rozmezí dávdk je asi 0,1 až asi 25 mg/kg/denně. Infuzní dávky jsou v rozmezí od asi 0,001 - 1 mg/kg/min inhibitoru, smíšeného s farmaceutickým nosičem, po dobu trvající od několika minut do několika dní mohou být podávány intravenózní infuzí.

Farmaceutické prostředky mohou být připraveny s běžnými farmaceutickými excipienty a slučovacími technikami. Orálními dávkovými formami mohou být elixíry, sirupy, kapsle, tablety a podobné. Typickým pevným nosičem je inertní látka, jako je laktóza, škrob, glukóza, methylcelulóza, stearát hořečnatý, fosfát vápenatý, mannitol a podobné; a typické kapalné orální excipienty zahrnují ethanol, glycerol, vodu a podobné. Všechny excipienty mohou být dle potřeby smíseny s dezintegračními prostředky, ředidly, granulačními látkami, mazadly, pojivý a podobně s použitím běžných postupů známých odborníkům ze stavu techniky pro přípravu dávkových forem. Parenterální dávkové formy se připravují s použití vody nebo jiného sterilního nosiče.

Obvykle jsou sloučeniny vzorce I izolovány a používány jako volné báze, nicméně sloučeniny mohou být izolovány a použity jako své farmaceuticky přijatelné soli. Příklady těchto solí zahrnují sůl bromovodíkovou, jodovodíkovou, chlorovodíkovou, chloristou, sírovou, maleinovou, fumarovou, jablečnou, vinnou, citrónovou, benzoovou, mandlovou, methansulfonovou, hydroethansulfonovou, benzensulfonovou, oxalovou, pamoovou, 2-naftalensulfonovou, ptoluen-sulfonovou, cyklohexansulfamovou a glukarovou.

Pro ilustraci vynálezu jsou zařazeny následující příklady. Tyto příklady neomezují vynález. Jsou předkládány pouze pro doložení postupu provádění vynálezu. Ti, kteří znají léčení benigní prostatické hyperplasie, chemické syntézy, farmaceutické slučování reakce stejně jako další odbornosti, mohou nalézt jiné postupy vedoucí k uskutečnění vynálezu. Nicméně tyto postupy jsou předpokládány za spadající do rozsahu tohoto vynálezu.

- II CZ 294136 B6

Příklady provedení vynálezu:

Příklady přípravy

Příklad 1

OH

(Slouč.1)

Fumarátová sůl l-(2-izopropoxyfenyl)-piperazinu (3,91 g, 12 mmol) byla upravena 20% NaOH (vod.) (100 ml) a extrahována methylenchloridem. Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄) a koncentrovány za získání oleje (2,74 g). Směs oleje a l-azido-3-(ptoluensulfonyloxy)propan-2-olu (3,25 g, 12 mmol, Antonín Hol, Collect Czech. Chem. Comm. 1989, 54(2), 446) byla míchána při 100 °C po 36 h. Ochlazená směs byla zředěna vodou a extrahována etherem, sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografií na koloně (silikagel) za získání výtěžku sloučeniny 1 (2,92 g, 76 %) jako světle hnědé pevné látky: MS (ES) m/z: 320 (MÍT); Anal. vypočt. Pro Ci₆H₂₅N₅O₂: C, 60,17; H, 7,89; N, 21 93. Nalezeno: C, 60,45; H, 7,83; N, 22,01.

Příklad 2

OH f^N

(Slouč. 2)

10% HC1 (6 ml) byla přidána do směsi sloučeniny 1 (2,43 g, 7,6 mmol) a 10% Pd/C (1,22 g) v MeOH (60 ml) a směs byla hydrogenována pod H₂ (345,5 kPa) v Parrově třepačce o 16 h při 20 °C. Směs byla zfiltrována přes celit a filtrát byl koncentrován. Zbytek byl upraven zásadou, 20% NaOH, a extrahován methylenchloridem. Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄) a koncentrovány za získání sloučeniny 2 jako nažloutlého oleje. MS(ES) m/z: 294 (MH*’).

Příklad 3

OH

(Slouč. 3)

- 12CZ 294136 B6

Směs sloučeniny 2 (100 mg, 0,341 mmol), 2-fenoxypyridin-3-karbonylchloridu (81 mg, 0,341 mmol), DMPA (kat.) a N,N-diizopropylethylaminu (0,23 ml) v methylenchloridu (2 ml) byla míchána při 20 °C po 16 hodin. Směs byla koncentrována, zředěna vodou a extrahována EtOAc. Spojená organická vrstva byla sušena Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifíkován chromatografií na koloně (silikagel) za získání 116 mg (69 %) sloučeniny 3, jako pěny:

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,59 (d, J = 6,3 Hz, 1 H), 8,32 (brs, 1 H), 8,20 (d, J % 3,1 Hz, 1 H), 7,44 (m, 2 H), 7,21 (m, 4H), 6,87 (m, 4 H), 4,57 (m, 1 H), 3,98 (m, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 3,5 (m, 1 H), 3,06 (m, 4 H), 2,79 (m, 2H), 2,48 (m, 4 H), 1,33 (d, J = 5,9 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 491 (MH⁴).

Příklad 4

(Slouč.4)

3-Brompropylamin hydrobromid (5 g, 22,8 mmol) byl rozpuštěn v 10% NaOH (50 ml), extrahován methylenchloridem a koncentrován. Do volné báze methylenchloridu byl přidán (Boc)₂O (5,23 g, 23,9 mmol) a tato směs byla míchána při 20 °C po 4 hodiny. Methylenchloridová vrstva byla míchána kyselinou citrónovou (6%) zředěnou vodou, NaHCO₃ a nasyc. roztokem NaCl, sušena a koncentrována. Produkt byl purifíkován chromatografií na koloně (silikagel) za získání chráněného aminu (4,84 g, 89 %). Fumarátová sůl l-(2-izopropoxyfenyl)piperazinu (5,1 g, 15 mmol) byla upravena na bazickou pomocí 20% NaOH (vodn.) (100 ml), extrahována methylenchloridem, sušena (Na₂SO₄) a koncentrována za získání žlutého oleje (3,15 g). Směs oleje, chráněného aminu (3,42 g, 14,3 mmol) a Cs₂CO₃ (4,66 g, 14,3 mmol) v CH₃CN (50 ml) byla přes noc zahřívána pod refluxem. Pevné látky byly odfiltrovány a filtrát byl odpařen. Produkt byl purifíkován chromatografií na koloně (silikagel) zazískání sloučeniny 4 (4,4 g, 81 %): MS (ES) m/z: 378 (Mtf).

Příklad 5

(Slouč.5)

Sloučenina 4 (0,185 g, 0,53 mmol) byla rozpuštěna ve 25% TFA/methylenchloridu (5 ml) a míchána po 1,5 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno a TFA sůl byla promyta toluenem (3 x) a potom upravena na bazickou pomocí 20% NaOH (vodn.), následovala extrakce methylenchloridem (3x), sušení (Na₂SO₄) a koncentrování za získání oleje. Tento olej byl rozpuštěn v methylenchloridu (4 ml), diizopropylethylaminu (0,34 g, 2,64 mmol), katalytickém množství DMAP a 2-fenoxypyridin-3-karbonylchloridu (0,12 g, 0,53 mmol). Reakční směs byla míchána při 20 °C pod dusíkem po 2 hodiny a koncentrována. Produkt byl purifíkován chromatografií na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 5 (0,2 g, 80 %):

-13 CZ 294136 B6 *H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,61 (dd, J = 7,5, 2,0 Hz, 1 H), 8,20 (dd, J = 4,9, 2,0 Hz, 1 H), 8,05 (m, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 7,29 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,15 (m, 3 H), 6,88 (m, 4 H), 4,56 (m,

H), 3,59 (q, J = 6,3 Hz, 2 H), 3,03 (m, 4 H), 2,56 (m, 4 H), 2,49 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,87 (m,

H), 1,32 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 475 (MFT).

Příklad 6

OH

(Slouč.6)

Fumarátová sůl l-(2-izopropoxyfenyl)-piperazinu (112,5 g, 345 mmol) byla upravena zásadou 20% NaOH (vodn.) (500 ml), extrahována methylenchloridem (3 x), sušena Na₂SO₄) a koncentrována za získání asi 70 g oleje. Směs oleje a (2S)-3-azido-2-hydroxypropyl ptoluensulfonátu (91 g, 335 mmol, Kristina Juřicova, Collect. Czech. Chem. Comm. 1995, 60,237) byla míchána při 100 °C vNMP s triethylaminem (70 g, 690 mmol) po 30 hodin. Směs byla ochlazena, zředěna vodou a extrahována etherem (3x 500 ml). Spojené extrakty byly opět promyty NaCl (nasyc.) (100 ml), sušeny (Na₂SO₄) a koncentrovány. Produkt byl purifikován chromatografíi na koloně (silikagel) a rekrystalizací (methylenchlorid/hexan) za získání 70,6 g (66 %) sloučeniny 6 (98,8 % testováno chiralcel AD kolonou), jako téměř bílé látky: [a]²⁵ _D-3,6° (c = 1,CH₃OH);

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,91 (m, 4 H), 4,59 (m, 1 H), 3,93 (m, 1 Η), 3,67 (brs, 1 H), 3,42 (dd, J = 12,6, 3,8 Hz, 1H), 3,23 (dd, J = 12,6, 5,4 Hz, 1 H), 3,12 (m, 4 H), 2,83 (m, 2 H), 2,53 (m, 3 H), 2,42 (dd, J = 12,2, 3,8 Hz, 1 H), 1,34 (d, J = 6,0 Hz, 6H); MS (ES) m/z: 320 (MH⁺).

Příklad 7

(Slouč. 7)

10% HC1 (6 ml) byl přidán do směsi sloučeniny 6 (15 g, 47 mmol) a 10% Pd/C (4 g) v MeOH (100 ml). Směs byla hydrogenována pod vodíkem (343,5 kPa) vParrově třepačce po 21 h při 20 °C. Směs byla zfíltrována přes celit a filtrát byl koncentrován. Zbytek byl upraven zásadou, 20% NaOH (vodn.) (75 ml), extrahován methylenchloridem (3x), sušen (Na₂SO₄) a koncentrován za získání sloučeniny 7 (14 g, asi 100 %) jako nažloutlého oleje:

[a]²⁵ _D + 23,6° (c= 1,CH₃OH);

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,91 (m, 4 H), 4,59 (m, 1 H), 3,76 (m, 1 H), 3,12 (m, 4 H), 2,83 (dd, J = 12,7, 3,7 Hz, 2H), 2,82 (m, 1 H), 2,25-2,68 (m, 8 H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6H); MS (ES) m/z: 294 (Μ1Γ).

- 14CZ 294136 B6

Příklad 8

(Slouč. 8)

Piperazin 7 (8 g, 27,3 mmol) byl rozpuštěn ve směsi diizopropylethylaminu (14,1 g, 109,2 mmol) a methylenchloridu (100 ml). Získaný světlý nažloutlý roztok byl přidáván pomalu do roztoku methylenchloridu (50 ml), 2-fenoxynikotinové kyseliny (5,87 g, 27,3 mmol), EDCI (5,24 g, 27,3 mmol), HOBT (3,69 g, 27,3 mmol) a DMPA (50 mg, kat.) při 20 °C a míchán po 18 hodin. Byla přidána voda a získaná směs byla extrahována etherem (3 x). Spojené organické extrakty byly promyty NaCl (nasyc.) sušeny (Na₂SO₄) a koncentrovány. Produkt byl purifíkován chromatografii na koloně (SiO₂, methylenchlorid/aceton) za získání sloučeniny 8 (8,4 g, 62 %) jako bílé pěny:

[a]²⁵ _D+14,8° (c = 1, CH₃OH);

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,60 (dd, J = 7,5, 2 Hz, 1 H), 8,31 (brs, 1H), 8,22 (dd, J = 4,7, 2 Hz, 1 H), 7,43 (brt, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,14 - 7,30 (m, 4H), 6,87 (m, 4 H), 4,58 (m, 1 H), 3,97 (m, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 3,51 (m, 1 H), 3,06 (m, 4H), 2,80 (m, 2H), 2,49 (m, 4H), 1,33 (d, J = 6,0 Hz, 6H); MS (ES) m/z: 491 (ΜΗ*).

Příklad 9

Cl O

OH

(Slouč. 9)

Směs sloučeniny 2 (900 mg, 3,07 mmol), 2-chlornikotinové kyseliny (485 mg, 3,07 mmol), EDCI (589 mg, 3,07 mmol), HOBT (414 mg, 3,07 mmol), DMAP (kat.) a N,N-diizopropylethylaminu (2 ml) v methylenchloridu (20 ml) byla míchána při 20 °C po 20 hodin. Směs byla koncentrována, zředěna vodou a extrahována etherem. Organická vrstva byla sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifíkován chromatografii na koloně (silikagel) za získání 580 mg (44 %) sloučeniny 8 jako bílé pěny: MS (ES) m/z: 433 (MH⁺).

Příklad 10

(Slouč. 10)

-15 CZ 294136 B6

Směs sloučeniny 9 (43 mg, 0,1 mmol), 4-methoxyfenolu (124 mg, 1 mmol) a uhličitanu cezného (65 mg, 0,2 mmol) vNMP (1 ml) byla míchána při 110°C po 20 hodin. Získaná směs byla ochlazena, byla přidána voda a tato směs byla extrahována etherem. Extrakt byl sušen (Na₂SO₄) a koncentrován. Produkt byl purifikován chromatografií na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 10 (36 mg, 69 %) jako bílé pěny: MS (ES) m/z: 521 (MHj.

Příklad 11

(Slouč. 11)

Směs sloučeniny 2 (100 mg, 0,341 mmol), kyseliny niflumové (96 mg, 0,341 mmol), EDC1 (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMPA (kat.) a N,N-diizopropylethylaminu (0,23 ml) v methylenchloridu (2 ml) byla míchána při 20 °C po 20 hodin.

Směs byla koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografií na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 11(101 mg, 53 %) jako pěny: MS(ES) m/z: 558 (MlT).

Příklad 12

(Slouč. 12)

Směs sloučeniny 2 (100 mg, 0,341 mmol), 2-(4-chlorfenylthio)pyridin-3-karboxylové kyseliny (91 mg, 0,341 mmol), EDC1 (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMAP (kat.) a N,N-diizopropylethylaminu (0,23 ml) v methylenchloridu (2 ml) byla míchána při 20 °C po 20 hodin. Směs byla koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografií na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 12 (128 mg, 70 %) jako pěny: MS (ES) m/z: 541 (MlT).

Příklad 13

(Slouč. 13)

-16CZ 294136 B6

Směs sloučeniny 2 (100 mg, 0,341 mmol), 2-methoxynikotinové kyseliny (52 mg, 0,341 mmol), EDC1 (65 mg, 0,341 mmol), HOBT (46 mg, 0,34 mmol), DMAP (kat.) a N,N-diizopropylethylamiu (0,23 ml) v methylenchloridu (2 ml) byla míchána při 20 °C po 20 hodin. Směs byla koncentrována. Byl přidán 3% K₂CO₃ (vodn.) a směs byla extrahována etherem, sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografíí na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 13 (32 mg, 22 %) jako pěny: MS (ES) m/z: 429 (Mřf).

Příklad 14

OCHaf^N

(Slouč. 14)

Sloučenina 1 (0,8 g, 2,5 mmol) byla rozpuštěna v 50 ml bezvodého THF. Roztok byl ochlazen na 0 °C a byly přidány 2 ekv. 60% NaH (0,2 g, 5,0 mmol). Roztok byl míchán po 10 minut a bylo přidáno 1,5 ekv. CH₃I (0,53 g, 3,8 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C po 2 hodiny. Byl přidán NaH (0,1 g, 2,5 mmol) a 1 ekv. CH₃I (0,15 ml) a směs byla míchána po další 2 hodiny. Reakce byla zmrazená nasyceným NH₄C1, rozpouštědlo bylo odpařeno a vodná vrstva byla promyta methylenchloridem (3x), sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografíí na koloně (silikagel) za získání sloučeniny A (0,69 g, 83 %): MS (ES) m/z: 334 (MH*).

Příklad 15

OCHaf^N

(Slouč. 15)

10% HC1 (0,3 ml) byl přidán do směsi sloučeniny 14 (0,64 g, 1,9 mmol) a 10% Pd/C (0,13 g) v MeOH (ml) a směs byla hydrogenována pod vodíkem (3435 kPa) v Parrově třepačce přes noc. Směs byla zfíltrována přes celit a filtrát byl koncentrován. Zbytek byl upraven zásadou 20%NaOH a extrahován methylenchloridem (3 x). Spojené organické extrakty byly sušeny (Na₂SO₄) a koncentrovány za získání žlutého oleje v kvantitativním výtěžku. MS (ES) m/z: 308 (ΜΗ*).

Příklad 16

H

N

OCHaf^N

(Slouč.16)

-17CZ 294136 B6

Sloučenina 15 (0,15 g, 0,49 mmol) byla rozpuštěna v methylenchloridu (4 ml) a byl přidán diizopropylethylamin (0,25 g, 1,95 mmol). Do tohoto roztoku byla přidána směs HATU (0,185 g, 0,49 mmol) a 2-fenoxynikotinová kyselina (0,11 g, 0,49 mmol). Reakce byla míchána pod dusíkem přes noc při teplotě místnosti, rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl rozpuštěn vEtOAc. Tento roztok byl promyt 3% K₂CO₃, organická vrstva byla sušena (Na₂SC>4) a koncentrována. Produkt byl purifikován mžikovou chromatografií (SiO₂, methylenchlorid/aceton = 10:1, 8:1, 6:1,4:1) za získání sloučeniny 16 (0,16 g, 64 %)jako oleje:

’HNMR (300 MHz, CDClj) δ 8,61 (dd, J = 7,4 Hz, 1 H), 8,27 (brs, 1 H), 8,23 (m, 1 H), 7,44 (m, 2 H), 7,26 (m, 1 H), 7,17 (m, 3 H), 6,87 (m, 4 H), 4,58 (m, 1 H), 3,92 (m, 1 H), 3,55 (m, 2 H), 3,42 (s, 3 H), 3,03 (brs, 4 H), 2,54 (m, 6 H), 1,33 (d, J = 6,0 Hz); MS (ES) m/z: 308 (MET).

Příklad 17

_H o

(Slouč. 17)

Oxalylchlorid (0,03 g, 0,22 mmol) byl rozpuštěn v 0,3 ml methylenchloridu. Směs DMSO (0,035 ml, 0,49 mmol) v methylenchloridu (3,0 ml) byla přidána po kapkách do tohoto roztoku při -78 °C. Směs byla míchána při -78 °C 1 hodinu. Roztok sloučeniny 3 (68414, 0,1 g, 0,2 mmol) v methylenchloridu (0,4 ml) byl přidáván pomalu. Reakční směs byla míchána po 30 minut a pomalu byla přidána TEA (0,14 ml, 1,02 mmol). Směs byla ponechána ohřát na teplotu místnosti, byla přidána voda a získaná směs byla extrahována methylenchloridem. Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SC>4) a koncentrovány za získání sloučeniny 17 (13,2 mg, 13 %).

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,61 (dd, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,23 (dd, J = 4,6 Hz, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 7,28 (m, 3 H), 7,15 (m, 1 H), 6,89 (m, 4 H), 4,57 (m, 3 H), 3,35 (s, 2 H), 3,15 (brs, 4 H), 2,70 (brs, 4 H), 1,33 (d, J = 5,97 Hz, 6 H); MS (ES) m/z: 489 (ΜΗ*).

Příklad 18

(Slouč. 18)

Piperazin 7 (150 mg, 0,51 mmol) byl rozpuštěn ve směsi diizopropylethylaminu (0,35 ml) a methylenchloridu (2 ml). 2-(4-Methylfenoxy)pyridin-3-karbonylchlorid (126 mg, 0,51 mmol) a DMAP (kat.) byly přidány do výše uvedeného methylenchloridového roztoku. Směs byla míchána při 20 °C po 16 hodin a koncentrována. Produkt byl purifikován chromatografií na koloně (silikagel) za získání sloučeniny 18 (146 mg, 57 %) jako pěny: MS (ES) m/z: 505 (MH*).

-18CZ 294136 B6

Příklad 19

(Slouč. 19)

Směs (S)-(+)-epichlorhydrinu (10 g, 108,1 mmol) v hexanu (40 ml) byla míchána při 20 °C po 62 hodin. Vysrážela se bílá pevná látka. Byl přidán další hexan (asi 350 ml), míchán po 20 min a vystaven ultrazvuku, aby se rozbily velké shluky bílé sraženiny. Bílá pevná látka byla spojena filtrací a promyta hexanem, sušena pod vakuem za získání 19,8 g (92 %) bílé pevné látky. Bílá pevná látka rekrystalizovala z EtOAc/hexanu za získání 17,76 g (82 %) sloučeniny 19 jako bílé krystalické látky;

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,31 (m, 5 H), 3,88 (m, 1 H), 3,79 (m, 2 H), 3,53 (d, J = 5,3 Hz, 2 H), 2,89 (m, 2 H), 2,81 (dd, J = 12,4, 4,1 Hz, 1 H), 2,69 (dd, J = 12,2, 7,9 Hz, 1 H), 2,69 (dd, J = 12,2, 7,9 Hz, 1 H); MS (ES): 200 (MH+); Anal. Vypočteno pro C_I0Hi₄NOCl: C, 60,15; H, 7,07; N, 7,01. Nalezeno: C, 60,10; H, 7,02; N, 6,92.

Příklad 20

Boc OH

Ph^N^A^CI (Slouč. 20)

Boc₂O (lig, 50,1 mmol) a triethylamin (10,12 g, 100 ml) byly rozpuštěny vTHF (25 ml) a ochlazeny na 0 °C. Amin 19 (10 g, 50,1 mmol) byl přidán po částech a míchán po 20 hodin, přičemž teplota byla udržována do 20 °C přes noc. Rozpouštědlo bylo koncentrováno ve vakuu a byla přidána voda. Směs byla extrahována etherem (3x), sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Surový zbytek rekrystalizoval z EtOAc/hexanu za získání 9,9 g (66 %) sloučeniny 20 jako bílé krystalické pevné látky. Filtrát byl koncentrován (3,1 g oleje) a další produkt byl purifikován chromatograflí na koloně (krátká kolona, 8 cm výška SiO₂, EtOAc/hexan jako rozpouštědlo). Olej rekrystalizoval z EtOAc/hexanu za získání dalších 2,78 g (18 %) látky 20 jako bílé krystalické pevné látky;

[a]²⁵ _D = -10,20 (c = 1, CHC1₃); Ή NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,22 -7,36 (m, 5 H), 4,52 (m, 2 H), 4,30 (brs, 0,5 H), 3,96 (m, 1 H), 3,36-3,97 (m, 4 H), 1,47 (s, 9 H); MS (ES): 322 (M+Na); Anal. Vypočt. Pro C₁₅H₂₂NO₃C1: C, 60,10; H, 7,40; N, 4,67. Nalezeno: C, 60,26, H, 7,42; N, 4,63.

Příklad 21

Ph

(Slouč.21)

KOH (11,23 g, 200,5 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (280 ml) a fumarátová sůl l-(2izopropoxyfenyl)piperazinu (10,9 g, 33,4 mmol) byla přidána a míchána při 20 °C po 20 minut, potom byla ochlazena na 0 °C. Boc-chráněný amin 20 (10 g, 33,4 mmol) byl přidán do methanolového roztoku při 0 °C a byl míchán po 20 hodin, při ohřívání přes noc na teplotu do 20 °C. Rozpouštědlo bylo odstraněno, byla přidána voda a směs byla extrahována etherem (3x),

-19CZ 294136 B6 sušena (Na₂SO₄) a koncentrována. Produkt byl purifíkován chromatografíí na koloně (krátká kolona, 8 cm výška SiO₂, EtOAc/hexan jako rozpouštědlo) za získání 10,22 g (63 %) látky 3 (téměř 100%, Chiralpak OD 4,6 x 250 mm, 1 ml/min, 254 nm, mobilní fáze: 90/10/0,1 hexanu /IPA/0,1% diethylaminu) jako nažloutlého oleje;

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,26 - 7,35 (m, 5 H), 6,91 (m, 4 H), 4,68 (d, J = 15,6 Hz, 1 H), 4,59 (m, 3 H), 3,95 (m, 1 H), 3,35 (m, 2 H), 3,11 (m, 4 H), 2,75 (m, 2 H), 2,54 (m, 2 H), 2,38 (m, 2 H), 1,45 (m, 9 H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6 H); MS (ES): 484 (MH).

Příklad 22

(Slouč. 22)

Směs sloučeniny 21 (233 mg, 0,48 mmol) a 25% TFA/methylenchloridu (3 ml) byla míchána při 20 °C po 18 hodin. Rozpouštědlo bylo koncentrováno ve vakuu a zbytek byl upraven zásadou 20% NaOH (vodn.), extrahován methylenchloridem (3x), sušen (Na₂SO₄) a koncentrován za získání 174 mg (asi 95 %) látky 22 jako oleje. Použití přímo bez další purifikace; MS (ES): 384 (MHQ.

Příklad 23

(Slouč .23)

Do směsi látky 22 (asi 154 mg, 0,4 mmol) a 10% Pd/C (154 mg) vEtOH (3 ml) byl přidán mravenčan amonný (151 mg, 2,4 mmol) a směs byla míchána při 55-60 °C po 20 hodin. Směs byla zfiltrována přes celit a promyta methanolem. Filtrát byl koncentrován. Produkt byl purifikován na krátké koloně (5 cm výška SiO₂) za získání 63 mg (54 %) látky 23 jako oleje;

[cc]²⁵ _d = +23,6° (c = 1, CHC1₃); ‘Η NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 6,91 (m, 4 H), 4,59 (m, 1 H), 3,76 (m, 1 H), 3,12 (m, 4 H), 2,83 (dd, J = 12,7, 3,7 Hz, 2 H), 2,82 (m, 1 H), 2,52 - 2,68 (m, 8 H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 6 Hz); MS (ES): 294 (MlT).

Biologické příklady

Biologická aktivita a selektivita sloučenin podle vynálezu byla doložena následujícími zkouškami. První zkouška testovala schopnost sloučenin vzorce I vázat na membránu vazebné receptory ocl_a-AR, al_b-AR, alj-AR.

Příklad 24

Byly zveřejněny DNA sekvence tří klonovaných lidských subtypů al-AR. Klonované cDNA byly exprimovány jednak přechodně v COS buňkách, jednak stabilně ve varietách savčích buněčných linií (HeLa, LM(tk-), CHO, krysí-1 fibroblast) a bylo předvedeno, že zachovávají

-20CZ 294136 B6 vazebnou aktivitu radioligandu a schopnost vázat hydrolýzu fosfoinositidu. Byla použita publikovaná informace o DNA sekvenci k určení primerů pro použití v RT-PCR amplifíkaci každého subtypu pro získání klonovaných cDNA. Lidská póly A+ RNA byla získána z komerčně dostupných zdrojů a zahrnovala vzorky hippocampu a prostaty, zdrojů, které byly citovány v literatuře. Pro primární zjištění byl použit radioligandový vazebný test, který využívá membránové přípravky z buněk exprimujících jednotlivé klonované receptorové cDNA. Radioznačené ligandy s vazebnou aktivitou na všechny tři subtypy (neselektivní) jsou komerčně dostupné ([1251]HEAT, [3H]-prazosin).

Každý subtyp al receptoru byl klonován zpoly A+ RNA standardní metodou reverzní transkripce-polymerázové reakce řetězce (RT-PCR). Následující zdroje polyA+ RNA byly použity pro klonování subtypů al receptorů: al_a-AR, lidský hippocampus a prostata, al_a-AR, lidský hippocampus, alj-AR, lidský hippocampus. Získané cDNA byly klonovány do pcDNA3 savčího vektoru exprese (Invitrogen Corp., San Diego CA). Každá DNA byla sekvenována pro verifikaci a pro detekci možných mutací zabudovaných v průběhu procesu amplifikace. Jakákoliv úchylka v sekvenci proti publikovanému konsenzu pro každý receptorový subtyp byla opravena místně řízenou mutagenezí.

Tři subtypy al_a-AR (a, b, d) byly přeneseny do COS buněk použitím standardního DEAEdextranového postupu s chlorchinovým šokem. V tomto postupu byla každá nádobka (100 mm) s kultivační tkání inokulována 3,5 x 10⁶ buněk a transfekována 10 pg DNA. Přibližně 72 hodiny po transfekci byly buňky odebrány a byly připraveny COS membrány. Transfekované COS buňky z 25 desek (lOOmm) byly seškrábnuty a suspendovány v 15 ml TE pufru (50 mM TrisHC1, 5mM EDTA, pH 7,4). Suspenze byla roztříštěna homogenizérem. Potom byla odstředěna 1000 x g po 10 minut při 40 °C. Supematant byl odstředěn při 34 500 x g po 20 minut při 4 °C. Peleta byla resuspendována v 5 ml TNE pufru (50 mM Tris-HCl, 5mM EDTA, 150mM NaCl, pH 7,4). Získaný membránový preparát byl rozdělen a uskladněn při -70 °C. Koncentrace proteinů byla stanovena následnou solubilizací membrány s Tritonem X-100.

Schopnost každé sloučeniny vázat se na každý ze subtypů al_a-AR byla zkoumána ve zkoušce receptorové vazebnosti. [125I]-HEAT, neselektivní al-AR ligand, byl použit jako radioznačný ligand. Každá miska z 96-miskové desky obsahovala: 140 μΐ TNE, 25 μΐ [125I]-HEAT zředěného v TNE (50 000 cpm; finální koncentrace 50 pM), 10 μΐ testované sloučeniny zředěné vDMSO (finální koncentrace 1 pM-10 μΜ), 25 ml COS buněčného membránového preparátu exprimujícího jeden ze tří subtypů al-AR (0,05-0,2 mg membránového proteinu). Plotna byla inkubována po 1 hodinu při teplotě místnosti a reakční směsi byly filtrovány přes filtrační desku Packard GF/C Unifíltr. Filtrační deska byla sušena po 1 hodinu ve vakuové peci. Do každé misky byla přidána scintilační tekutina (25 ml) a filtrační deska byla počítána scintilačním čítačem Packard Topcount. Data byla analyzována softwarem GraphPad Prism.

Tabulka A uvádí soupis hodnot vyjádřených v nanomolámí koncentraci u vybraných sloučenin podle vynálezu ve všech receptorových subtypech.

H

K₂

-21 CZ 294136 B6

Tabulka A

Slouč.	X R₂ ...	Ri	r₅	ala	al b	a1d
3	O i-propyl	OH	Ph	1.5	909	211
5	O j-propyl	H	Ph	0.64	151	40
8	O j-propyl*	OH	Ph	0.76	668	81
35	O i-propyl**	OH	Ph	10.2	889	314
10	O i-propyl	OH	4-OCHa-Ph	2.4	1910	131
36	O i-propyl	OH	4-F-Ph	1.5	1182	148
37	O j-propyl	OH	3-CI-Ph	0.91	952	180
38	O i-propyl	OH	S-N(CH₃)₂-Ph	2	972	56
39	O j-propyl	OH	2-CH₃-Ph	1.1	730	1.7
40	O j-propyl	OH	2-OCH₃-Ph	1.7	580	2.2
11	NH j-propyl	OH	3-CFyPh	25	1020	79
12	S j-propyl	OH	4-CI-Ph	2.6	806	299
41	O i-propyl	OH	4-CHy-Ph	0.52	928	21
42	O i-propyl	OH	4-CI-Ph	1	838	74
43	S j-propyl	OH	Ph	2	1220	70
18	O j-propyl*	OH	4-CH₃-Ph	0.51	290	50
27	O i-propyl*	OH	4-CI-Ph	0.86	791	57
28	O i-propyl**	OH	4-CH₃-Ph	25	361	969
29	O i-propyl	H	4-CH₃-Ph	0.27	>2000	43
30	O i-propyl	OH	3,4-di-CI-Ph	2	2251	56
31	NH i-propyl	OH	Ph	25	736	25
32	O čh₃	OH	Ph	30	1570	147
13	O i-propyl	OH	CH₃	3.5	>2,000	191
33	O j-propyl	OH	4-(CH₃)₃C-Ph	3.3	>2,000	78
34	O CH3CH2	OH	Ph	9.1	132	206
16	O j-propyl	och₃	Ph	2.4	1356	21
17	O i-propyl	O	4-(CH₃hC-Ph	63	887	546

označuje S stereochemii označuje R stereochemii

Příklad 25

Antagonistická aktivita a selektivita sloučenin podle vynálezu pro prostatické tkáně oproti aortickým tkáním stejně jako jejich antagonistů byla demonstrována následně. Kontraktilní odezvy krysí prostatické tkáně a krysí aortické tkáně byly zkoumány za přítomnosti nebo nepřítomnosti antagonistických sloučenin. Jako indikace selektivity antagonismu, účinky testované sloučeniny na kontraktilitu vaskulámího hladkého svalstva (a fy-AR a alj-AR) byly srovnávány s účinky na prostatické hladké svalstvo (al_a-AR). Proužky prostatické tkáně a kroužky z aorty byly získány z myších samců z Long Evans, vážících 275 gramů a usmrcených cervikální dislokací. Prostatická tkáň byla vložena pod jednogramovou zátěž v 10 ml lázně obsahující fosfátový pufrový roztok pH 7,4 při 32 °C, a izometrické napětí bylo měřeno převodníky síly. Aortická tkáň byla vložena pod dvougramovou zátěž v 10 ml lázně obsahující fosfátový pufrový roztok o pH 7,4 při 37 °C. Byla stanovena schopnost testované sloučeniny redukovat norepinephrinem indukovanou kontraktilní odezvu v 50 % (IC₅₀)- Sloučenina 3 inhibovala kontraktilní odezvu v aortické tkáni s IC₅o 4,74 μΜ, a v prostatické tkáni s IC₅₀ 0,143 μΜ. Sloučenina 35 inhibovala kontraktilní odezvu v aortické tkáni s IC₅₀ 8,5 μΜ a v prostatické tkáni s IC₅₀ 0,18 μΜ.

-22CZ 294136 B6

Příklad 26

Vybrané sloučeniny z vynálezu byly testovány na svou schopnost antagonizovat fenylephrinem (PE) indukované zvýšení intrauretálního tlaku u psů. Selektivita těchto sloučenin byla demonstrována porovnáním jejich účinku na PE indukovaných zvýšeních středního arteriálního tlaku (MAP) u psů.

Samcům psů beagle byla podána anestezie a byli katetrizováno pro měření intrauretálního tlaku (IUP) v prostatické trubici. Střední arteriální tlak (MAP) byl měřen použitím katetru vloženého do femorální arterie. Nejprve bylo podáno psům šest i.v. bolusových dávek (1 až 32 mg/kg) fenylephrinu (PE) ke stanovení kontrolní křivky odezvy na dávku agonisty. Byly zaznamenávány IUP a MAP po sobě následujících dávek, až se IUP vrátila k základní linii. Potom byla psům podávána i.v. bolusová dávka antagonistické sloučeniny, následovaná i.v. PA čelendžemi vzestupného dávkování, jako u kontrolní křivky pro odezvu na dávku agonisty. Byla zaznamenávána měření IUP a MAP, následující vždy po PE čelendži. Antagonistické sloučeniny byly testovány v dávkovém rozmezí 3 až 300 pg/kg v polo-logaritmických přírůstcích. Interval mezi antagonistickými dávkami byl alespoň 45 min a pro každou testovanou sloučeninu se provedly tři experimenty. Graf na obr. 1 dokládá střední procentní snížení IUP a MAP u sloučeniny 8.

Odkazy

M. Barry & C. Roehbom, Management of Benign Prostatic Hyperplasia, 48 Annu. Rev. Med. 177-89(1997),

Bruno JF, Whittaker J, Song J, a Berelowitz M. (1991) Molecular cloning and sequencing of a cDNA encoding a human alA adrenergic receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 179: 1485-1490,

Forray C. Bard JA, Wetzel JM, Chiu G, Shapiro E, Tang R, Lepor H, Hartig PR, Weinshank RL, Branchek TA a Gluchowski C (1994): The al- adrenergic receptor that mediates smooth muscle contraction in human prostatě has the pharmacological properties of the cloned human ale subtype. Mol. Pharmacol. 45: 703-708,

Gormley G, Stoner E, Briskewitz RC a kol., (1992): The effect of fínasteride in men with benign prostatic hyperplasia. N. Engl. J. Med. 327: 1185-1191.

Hatano A, Takahashi H, Tamaki M, Koneyama T, Koizumi T a Takeda M (1994): Pharmacological evidence of distinct al- adrenoreceptor subtypes mediating the contraction of human prostatic urethra and peripheral artery. Br. J. Pharmacol. 113: 723-728.

Harrison JK, Pearson WR, a Lynch KR (1991): Molecular characterization of al- a a2adrenoreceptor. Trends Pharmacol. Sci. 12:62-67,

Hieble JP a Caine M (1986): Etiology of benign prostatic hyperplasia and approaches to pharmacological management. Fed. Proč. 45: 2601-2603.

Hirasawa A, Horie K, Tanakava T, Tagasaki K, Murai M, Yano J, a Tsujimoto G (1993): Cloning, functional expression and tissue distribution of human cDNA for the alc-adrenergic receptor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 195: 902-909.

Lepor H a Rigaud G (1990): The efficacy o tranurethral tesection of the prostatě in men with moderate symptoms of prostatism. J. Urol. 143: 533-537.

-23 CZ 294136 B6

Lepor H, Auerbach S, Puras-Baez A a kol. (1992): A randomized, placebo-controlled multicenter study of the effícacy of terazosin in the treatment f benign prostatic hyperplasia. J.Urol. 148: 1467-1474.

Lepor H (1995): α-Blockade for benign prostatic hyperplasia (BPH) J. Clin. Endocrinol. Metab. 80: 750-753

Marshall I, Buřt RP, Anderson PO, Chapple CR, Greengrass PM, Johnson GI a Wyllie MG (1992): Human ale- adrenoreceptor: functional characterisation in prostatě. Br. J. Pharmacol. 10 107 (Proč. Suppl. Dec):327P,

Marshall I, Buřt RP, a Chapple CR (1995): Noradrenaline contractions of human prostatě mediated by alA- (ale-) adrenoreceptor subtype. Br. J. Pharmacol. 115: 781-786,

Mebust WK, Holtgrewe HL, Cockett ATK a Peters PC (1989): Transurethral prostatectomy: immediate and postoperative complications. A cooperative study of 13 participating institutions 3885 patients. J. Urol- 141: 243-247.

Oesterling JE (1995) Benign prostatic hyperplasia. Medical and minimally invasive treatment 20 options. N. Engl. J. Med. 332:99-109,

Ramarao CS, Kincade Denker JM, Perez DM, Gaivin RJ, Riek RP, a Graham RM (1992): Genomic organization and expression of the human αΙΒ-adrenergic receptor. J. Biol. Chem. 267:21936-21945.

Schwinn DA, Johnston GI, Page SO, Mosley MJ, Wilson KH, Worman NP, Campbell S, Fidock MD, Fumess LM, Parry-Smith DJ, Peter B a Bailey DS (1995): Cloning and pharmacological characterization of human alpha-1 adrenergic receptors: sequence corrections and direct comparison with other species homologues. JPET 272: 134-142.

William D. Steers & Burkhart Zom, Benign Prostatic Hyperplasia, in Disease-a-Month (M.Greenberger a kol., Eds., 1995).

Weinburg DH, Trivedi P, Tan CP, Mitra S, Perkins-Barrow A, Borkowski D, Strader CD, a 35 Bayne M (1994): Cloning, expression and characterization of human a adrenergic receptor alA, alB a alC. Biochem. Biophys. Res. Commun. 201: 1296-1304.

Weis KA, Epstein RS, Huse DM, Deverka PA a Oster G (1993): The costs of prostatectomy for benign prostatic hyperplasia. Prostatě 22: 325-334.

Wennberg JE, Roos N, Sóla L, Schori A, a Jaffe R. (1987): Use of claims data systems to evaluate health care outcomes: mortality and reoperation following prostatectomy. JAMA 257:933-936.

Yamada S, Tanaka C, Kimura R a Kawabe K (1994): Alpha 1-adrenoreceptor in human prostatě: characterization and binding characteristics of alpha 1-antagonists. Life Sci. 54: 1845-1854.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Substituovaný pyridinoarylpiperazin obecného vzorce I (i), kde

Ri je vodík, halogen, Ci_₅alkoxyskupina, hydroxyl nebo C^alkyl;

R₂ je Ci_6alkyl, substituovaný C]_6alkyl, kde jsou substituenty alkylu nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů, fenyl, substituovaný fenyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci-salkylu, C]_₅alkoxyskupiny, a trihalogen Ci_₅alkylu, fenylCi_₅alkyl, nebo substituovaný fenylCj-salkyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci-salkylu, halogenu, C]_₅alkoxyskupiny, a trihalogen C]_₅alkylu;

R₃ je vodík, hydroxyskupina nebo Ci_₅alkoxyskupina, pokud je vazba obsahující přerušovanou čáru jednoduchou vazbou; nebo je kyslík, pokud je vazba obsahující přerušovanou čáru dvojnou vazbou;

R} je vodík, Ci_₅alkyl, fenylCi_₅alkyl nebo substituovaný fenylCi_₅alkyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci-salkylu, Ci_₅alkoxyskupiny, a trihalogen Ci_₅alkylu;

R₅ je Ci-salkyl, substituovaný Ci_₆alkyl, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů, fenyl, substituovaný fenyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci__galkylu, vodíku, halogenu, hydroxyskupiny, Ci__salkylu, substituovaného C ^alkylu, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů, Cj^alkoxyskupiny, aminoskupiny, Ci_₅alkylaminoskupiny, diC].₅alkylaminoskupiny, Ci_₅alkylkarbonylu, Ci_₅alkoxykarbonylu, fenylkarbonylu, naftylkarbonylu, nitrilu, aminosulfonylu, C^alkylsulfonylu, fenylsulfonylu a substituovaného fenylsulfonylu,

-25 CZ 294136 B6 kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů ze skupiny sestávající z C]_₈alkyl vodíku, halogenu, hydroxyskupiny a nitroskupiny;

fenylCi_₅alkyl, substituovaný fenylCi_₅alkyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více členů ze skupiny sestávající z C]_₈alkyl vodíku, halogenu, hydroxyskupiny,

CTgalkylu, substituovaného C ^alkylu, kde substituenty alkylu jsou nezávisle vybrány z jednoho nebo více halogenů, Ci.salkoxyskupiny, aminoskupiny, Ci_₅alkylaminoskupiny, diCi.jalkylaminoskupiny, Ci-salkylkarbonylu, Ci_5 alkoxykarbonylu, a nitroskupiny;

X je kyslík, síra nebo NH;

přičemž pod pojmy „alkyl“ a „alkoxy“, ať již se vyskytují izolovaně nebo v podobě částí složitějších zbytků, se ve výše uvedených definicích kromě skupin s otevřeným řetězcem rozumějí i skupiny s cyklickým řetězcem, tedy cykloalkyl- a cykloalkoxyskupiny, v případě že specifikovaný počet atomů uhlíku v těchto skupinách umožňuje existenci kruhu;

jeho farmaceuticky přijatelné soli;

a stereoizomery, racemické směsi, jakož i jejich enantiomery.
2. Substituovaný pyridinoarylpiperazin podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R₃ je kyslík.
3. Substituovaný pyridinoarylpiperazin podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R₃ je vodík nebo hydroxyskupina.
4. Substituovaný pyridinoarylpiperazin podle nároku 3, obecného vzorce I, kde R_t je vodík, halogen nebo hydroxyskupina, R₂ je fenyl, vodík nebo C^alkyl, R4 je Ci_₅alkyl nebo vodík, a R₅je C]_₅alkyl, fenyl nebo substituovaný fenyl a X je síra nebo kyslík.
5. Substituovaný pyridinoarylpiperazin podle nároku 4, obecného vzorce I, kde Ri je vodík, R₂je C]_₅alkyl, R₃ je hydroxyskupina, R4 je vodík, R₅ je substituovaný fenyl a X je kyslík.
6. Substituován pyridinoarylpiperazin podle nároku 1, obecného vzorce I, kde Ri je vodík, R₂je i-propyl, R₃ je hydroxyskupina nebo vodík, R4 je vodík, R₅ je fenyl nebo substituovaný fenyl, kde substituenty fenylu jsou nezávisle vybrány zjednoho nebo více členů skupiny sestávající z Ci_₅alkoxyskupiny, halogenu, diCi_5alkylaminoCi_₅alkylu, a halogenem substituovaného C].₅alkylu, a X je kyslík.
7. Substituovaný pyridinoarylpiperazin podle nároku 1, obecného vzorce I, kde Rj je vodík, R₂je i-propyl, R₃ je hydroxyskupina, R4 je vodík, R₅ je fenyl, X je kyslík a stereochemie chirálního uhlíku je S.
8. Substituovaný pyridinoarylpiperazin obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 7 pro použití pro léčení benigní prostatické hyperplasie.
9. Použití substituovaného pyridinoarylpiperazinu obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až Ί pro výrobu léčiva pro léčení benigní prostatické hyperplasie.
10. Substituovaný pyridinoarylpiperazin obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 7 pro použití pro léčení nemocí spojených s oc-l_a adrenergickým receptorem.

-26CZ 294136 B6
11. Použití substituovaného pyridinoarylpiperazinu obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 7 pro výrobu léčiva pro léčení nemocí spojených s a-l_a adrenergickým receptorem.

5
12. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje účinnou dávku substituovaného pyridinoarylpiperazinu obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 7.
13. Farmaceutická kompozice podle nároku 12, vyznačující se tím, že účinná dávka substituovaného pyridinoarylpiperazinu vzorce I je asi 0,1 až asi 25,0mg/kg.

o
14. Farmaceutická kompozice podle nároku 12, vyznačující se tím, že účinná dávka substituovaného pyridinoarylpiperazinu vzorce I je asi 0,01 až asi l,0mg/kg.