CZ293690B6 - Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) - Google Patents
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) Download PDFInfo
- Publication number
- CZ293690B6 CZ293690B6 CZ20023061A CZ20023061A CZ293690B6 CZ 293690 B6 CZ293690 B6 CZ 293690B6 CZ 20023061 A CZ20023061 A CZ 20023061A CZ 20023061 A CZ20023061 A CZ 20023061A CZ 293690 B6 CZ293690 B6 CZ 293690B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mva
- ankara
- vaccinia virus
- modified
- type
- Prior art date
Links
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 title claims abstract description 151
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 42
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 27
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 108
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 88
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 57
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 32
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims description 25
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims description 10
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 8
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 claims description 3
- 208000006586 Ectromelia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010024503 Limb reduction defect Diseases 0.000 claims description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract description 17
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 8
- 230000001018 virulence Effects 0.000 abstract description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 18
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 10
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000867610 Chlorocebus pygerythrus Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 206010069586 Orthopox virus infection Diseases 0.000 description 2
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 2
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000001617 Interferon Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010054267 Interferon Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012768 mass vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000015323 positive regulation of phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/08—Inactivation or attenuation by serial passage of virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
- A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24161—Methods of inactivation or attenuation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Řešení se týká nových kmenů modifikovaného viru vakcinie typu Ankara, které mají silně sníženou virulenci pro většinu savců, zejména lidí, ale přesto rostou v buňkách kontinuální buněčné linie. Jsou to kmeny modifikovaného viru vakcinie typu Ankara adaptované pro růst v buňkách buněčné linie Vero. Řešení dále zahrnuje způsob přípravy adaptovaných kmenů MVA. Dále se řešení týká vakcíny pro imunizaci živého živočišného organizmu včetně lidského obsahující tyto nové kmeny MVA. Adaptovaný modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) lze použít například pro parenterální imunizaci, jako vektorový systém, nebo v aktivované nebo inaktivované formě jako pomocnou látku, nebo jako regulátor nespecifických složek imunitního systému.ŕ
Description
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA)
Oblast techniky
Předložený vynález se týká nových kmenů modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (Modified Vaccinia Virus Ankara - MVA), který má silně sníženou virulenci pro většinu savců, zejména lidí, ale nicméně roste v buňkách kontinuální buněčné linie schválené pro přípravu terapeutického přípravku, jako je vakcína. Vynález se dále týká způsobu přípravy adaptovaných kmenů MVA. MVA lze použít například k parenterální imunizaci, jako vektorový systém, nebo v aktivní nebo inaktivované formě jako pomocnou látku nebo jako regulátor nespecifických složek imunitního systému.
Dosavadní stav techniky
Organismus je neustále vystaven účinku infekčního prostředí činidel jako jsou bakterie, viry, houby nebo paraziti. Imunitní systém chrání organizmus od permanentní infekce způsobené těmito činidly destrukci a eliminaci těchto infekčních činidel a toxických molekul, které produkují. Imunitní systém lze rozdělit na část specifickou a část nespecifickou i když obě jsou velmi úzce svázány. Nespecifická imunitní odpověď umožňuje okamžitou obranu proti širokému rozsahu cizorodých látek a infekčních činidel. Naproti tomu specifická imunitní odpověď je zvýšena až ve zpožděné fázi, když organizmus je vystaven účinku látky poprvé. Avšak specifická imunitní odpověď je vysoce účinná. Specifická imunitní odpověď zodpovídá za skutečnost, že jednotlivec, který se uzdraví ze specifické infekce je proti této infekci chráněný, ale stále náchylný na jiné infekční nemoce. Všeobecně druhá infekce tím samým nebo podobným infekčním činidlem způsobuje slabší příznaky nebo vůbec žádné. Imunita přetrvává dlouhou dobu, v některých případech také po celý život. Tato imunologická paměť je použita pro vakcinaci, kde organizmus je vystaven účinku neškodné nebo inaktivované formy infekčního činidla za účelem vyvolání specifické imunity. Někdy se do vakcín zabudují pomocné přísady, aby se zvýšila specifická imunitní odpověď.
Mnoho ze znalostí o infekčních nemocích a imunitě pochází ze studia pravých neštovic. Nemoc je způsobena virem variola, členu z rodu orthopoxvirů. Skoro před dvěma stoletími bylo zahájeno profylaktické očkování kravskými neštovicemi, jehož výsledkem bylo očkování proti pravým neštovicím. Pozdější imunizace byla provedena virem vakcinie. Začátkem padesátých let minulého století mnohé průmyslové země, vymýtily endemické pravé neštovice za použití vakcinace s virem vakcinie. Avšak, vakcinaci pravých neštovic virem vakcinie došlo někdy k vážným komplikacím, jako post-vakcinační encefalitidě, generálizováným pravým neštovicím nebo kontaktní infekci.
Nová vakcína, která nevykazuje tyto nevýhody byla vyvinuta Antonem Mayrem. Vakcína proti neštovicím sestává z poxviru označeného jako Modifikovaný Virus Vakcinie typu Ankara (Modified Vaccinia Virus Ankara -MVA) a byla použita pro parenterální vakcinaci proti pravým neštovicím v asi 150 000 případech bez toho, že by způsobila jakékoliv komplikace v souvislosti s vakcinaci. Ani děti s imunologickými nedostatečnostmi nevykazovaly žádné vedlejší účinky. Tento modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) byl získán mutaci a selekcí původního viru vakcinie typu Ankara po 575 pasážích ve fibroblastových kulturách kuřecích embryí. Bezpečnost tohoto modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) je prokázaná jeho biologickými, chemickými a biologickými charakteristikami. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) má sníženou molekulovou hmotnost, šest delecí v genomu, a je silně oslabený pro savčí buňky, například DNA a protein jsou syntetizovány ale ve skutečnosti nejsou produkované žádné virové částice (partikule). Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara(MVA) vyvinutý Antonem Mayrem byl uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů (ECACC), Salisbury, UK, pod číslem V 94012707.
-1 CZ 293690 B6
Očkování proti pravým neštovicím bylo velice úspěšné. V roce 1979 vyhlásila Světová zdravotnická organizace pravé neštovice za vymýcené. Vzhledem k tomu bylo hromadné očkování dětí přerušené a očkovány jsou jen laboratorní pracovníci a členové ozbrojených složek v některých 5 zemích.
Vymýcením pravých neštovic byla odstraněna hlavní příčina infekci neštovic u lidí. Avšak některé viry neštovic netypické pro lidi mají sníženou specificitu na hostitele tj. způsobují infekce nejen u svého specifického hostitele např. kravské neštovice u krávy, ale také u jiných zvířat ío například potkanů a koček. Touto cestou mohou být také infikováni lidé. Protože část populace již není imunní proti pravým neštovicím mohou být pro ně infekce viry neštovic některých druhů zvířat nebezpečné. Hlavním zdrojem nákazy pro lidi jsou domácí zvířata. Vzhledem k tomu má rostoucí význam očkování domácích zvířat proti virům neštovic. Navíc může být modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) významný jako vektor v genové terapii tj. přenáší sekvence 15 nukleových kyselin do cílové buňky, kde jsou exprimovány.
Pro logaritmické rozmnožování modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) jsou zapotřebí buněčné kultury primárních nebo sekundárních fibroblastů kuřecích embryí. Buňky se získají z kuřecích vajec inkubovaných 10 až 12 dní. Protože vajíčka jsou biologicky proměnná, 20 také buňky získané pro systém buněčné kultury jsou proměnné, na buněčné úrovni. Navíc ve fibroblastové kultuře kuřecích embryí jsou často nalezeny jiné typy buněk jako buňky epiteliální. Tato změna buněk má za následek také změnu virů produkovaných ve fibroblastech kuřecích embryí. Proto je těžké standardizovat a potvrdit systém buněčných kultur a zaručit konstantně vysokou kvalitu produkovaného modifikovaného viru vakcinie Ankara (MVA). Dále nemůže být 25 úplně vyloučena kontaminace systému buněčných kultur mikroorganizmy nebo viry, které již jsou přítomny v inkubovaném vajíčku. Když se modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) pěstuje na buňkách kontaminovaných viry může se tento rekombinovat s kontaminujícím virem. Přitom se může generovat modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) s novými a nepředvídatelnými charakteristikami. Pro výrobu viru ve velkém v suspenzí kultuře, nejsou 30 nejvhodnější primární nebo sekundární fibroblasty kuřecích embryí. Čistění a koncentrování modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) ultracentrifugou by bylo výhodné. Avšak takovéto čištění je těžké, když se modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) kultivuje na primárních nebo sekundárních fibroblastech kuřecích embryí. Navíc se u vzrůstajícího počtu pacientů vyvinula alergie na albumin z kuřecích embryí. Přestože in vitro podmínky kultivace 35 velmi silně redukují alergický potenciál, riziko alergické reakce nelze úplně vyloučit.
Takže na jedné straně lze modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) účinně pěstovat jenom na primárních nebo sekundárních fibroblastech kuřecích embryí způsobujících řadu nevýhod, ale na druhé straně byla ukázaná bezpečná rozsáhlá aplikace modifikovaného viru 40 vakcinie typu Ankara (MVA) u lidí jeho rozsáhlou aplikací jako vakcíny.
Cílem předloženého vynálezu je poskytnutí podmínek pro výrobu homogenních virových částic modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA), tj. podmínek jež umožní snadnou výrobu modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) ve velkém.
K dosažení předchozího a jiných výhod, předložený vynález poskytuje kmen modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA), který je adaptovaný pro pěstování na kontinuálních buněčných liniích, které jsou schváleny pro výrobu terapeutických přípravků.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je změněný kmen modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) adaptovaný pro růst v buňkách kontinuální buněčné linie, získatelný vymezeným počtem
-2CZ 293690 B6 pasáží zahrnujících a) infikování buněk buněčné linie Věro a b) sběr virových částic produkovaných uvedenými buněčnými liniemi, přičemž počet pasáží je 100 nebo 200.
Význakem předmětného vynálezu je dále, že buněčnou linií je buněčná linie Věro ATCC č. CCL-81.
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu je uložený v ECACC pod číslem 99101431.
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu je uložený v ECACC pod číslem 01021411.
Význakem vynálezu je dále, že modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu může obsahovat alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny s výhodou heterologní sekvenci nukleové kyseliny jíž je gen kódující terapeutický protein a/nebo antigenní determinantu.
Dalším význakem vynálezu je hostitelská buňka infikovaná modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu.
Význakem vynálezu je dále vakcína pro imunizaci živého živočišného organizmu včetně lidského obsahující MVA podle předmětného vynálezu.
Vakcína podle vynálezu je určena zejména pro imunizaci proti orthopox infekci.
Vakcína pro imunizaci koček proti kočičím neštovicím, myší proti ektromelii a/nebo velbloudů proti velbloudím neštovicím.
Vynález dále zahrnuje farmaceutickou kompozici, obsahující MVA podle předmětného vynálezu.
Význakem vynálezu je dále farmaceutická kompozice, obsahující MVA jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému.
Dalším význakem vynálezu je farmaceutická kompozice obsahující modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem.
Význakem vynálezu je také způsob získání kmene modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se
a) buňky buněčné linie Věro infikují standardním typem MVA, s výhodou MVA uloženého v ECACC pod číslem V94012707,
b) provede sběr virů, načež se
c) čerstvé buňky stejné buněčné linie infikují nově produkovanými viry,
d) a poté se kroky b) a c) opakují až do dosažení adaptace virů na růst v buňkách řečené buněčné linie.
Dále je význakem vynálezu způsob pomnožení modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) pro přípravu virových Částic MVA podle předmětného vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se
a) buňky buněčné linie Věro kultivují za vhodných podmínek,
- J CZ 293690 B6
b) tato buněčná linie se infikuje modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) a
c) sbírají se virové částice produkované těmito buňkami.
Při způsobu pomnožení modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle vynálezu se buněčná linie s výhodou infikuje modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu uloženým v ECACC pod číslem 99101431 nebo MVA uloženým v ECACC pod číslem 01021411.
Vynález dále zahrnuje použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro výrobu farmaceutické kompozice pro léčení nebo prevenci nemoci nebo poruchy, která reaguje na MVA.
Dále vynález zahrnuje použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro výrobu farmaceutické kompozice obsahující MVA jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému.
Vynález rovněž zahrnuje použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro výrobu farmaceutické kompozice obsahující MVA jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem.
Význakem vynálezu je také použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro výrobu vakcíny pro imunizaci živých zvířecích organizmů, včetně lidských.
Dále je význakem vynálezu modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro použití jako vakcína pro imunizaci živého zvířecího organizmu včetně lidského.
Význakem vynálezu je dále modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předmětného vynálezu pro použití jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému živého zvířecího organizmu včetně lidského a pro použití jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem pro zvýšení specifické imunitní odpovědi na antigenní determinantu ve vakcíně.
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle předloženého vynálezu může také obsahovat alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny kódující například terapeutický protein a/nebo antigenní determinantu jako je peptid imunizující proti infekci malárii, hepatitidě a/nebo vzteklině.
Kompozice, s výhodou farmaceutická kompozice může kromě výše popsaného MVA obsahovat MVA a/nebo DNA této MVA. Farmaceutická kompozice může obsahovat modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) a/nebo DNA modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) jako pomocnou látku. Farmaceutická kompozice může obsahovat rekombinantní modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) a/nebo DNA rekombinantního modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA). Popsaná farmaceutická kompozice může být použita v genové terapii.
Způsob přípravy sekvence nukleové kyseliny, peptidů, polypeptidu a/nebo proteinu, zahrnuje infikování hostitelské buňky výše popsaným rekombinantním modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA), kultivaci infikované hostitelské buňky za vhodných podmínek a podle potřeby izolaci a/nebo obohacení sekvence nukleové kyseliny, peptidů a/nebo proteinu produkovaného hostitelskou buňkou.
Imunizace živého zvířecího organizmu včetně lidského, spočívá v podávání terapeuticky účinného množství výše popsané farmaceutické kompozice potřebné osobě.
-4CZ 293690 B6
Zavedení homologické a/nebo heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky zahrnuje infikování cílové buňky výše popsaným modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) a/nebo DNA modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA).
Aktivace, potlačení a/nebo stabilizace imunitního systému živého zvířecího organizmu včetně lidského spočívá v podávání výše uvedené farmaceutické kompozice živému zvířecímu organizmu včetně lidského.
Zvýšení specifické imunitní odpovědi na antigenní determinantu ve vakcíně spočívá v podávání modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) jako pomocné látky živému zvířecímu organizmu, včetně lidského.
Podle předloženého vynálezu je poprvé možná efektivní výroba modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) ve velkém. Protože buňky kontinuální buněčné linie jsou homogenní a jejich charakteristiky jsou stabilní, také vlastnosti modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) jsou homogenní a předvídatelné. Dále riziko kontaminace mikroorganizmy může být hlídané a kontaminace modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) proteiny z kuřecího vejce, lze vyloučit jak bylo zjištěno při kultivaci modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) na fibroblastech kuřecích embryí. Manipulace s permanentní buněční linii je pohodlná a proto velice výhodná pro průmyslovou aplikaci.
Ve výhodném provedení podle vynálezu, modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) je adaptovaný pro pěstování v buňkách savčí buněčné linie, která je schválená pro výrobu vakcíny. Bylo s překvapením zjištěno, že modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) adaptovaný na savčí buněčnou linii jako je buněčná linie Věro má sníženou virulenci pro lidi a také pro široký okruh jiných savců. Podle toho je virus vakcinie typu Ankara (MVA) silně oslabený tj. DNA a protein jsou syntetizovány, ale ve skutečnosti nejsou produkovány žádné virové Částice, čehož výsledkem je skutečnost, že je eliminována schopnost vyvolání nemoci. Vzhledem ktomu je modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle vynálezu také velice vhodný jako vakcína pro lidi a pro široký okruh savců. Proto je také modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) speciálně použitelný ve veterinární oblasti.
Dále je předložen způsob získání kmene modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle vynálezu. Podle tohoto význaku vynálezu jsou buňky buněčné linie schválené pro výrobu terapeutické substance infikovány standardním typem modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA). S výhodou se používá vysoká multiplicita infekce (MOI- Multiplicity of Infection) tj. pro tuto infekci se používá velký počet virů na jednu buňku. Potom se viry sesbírají a čerstvé buňky tytéž buněčné linie se infikují nově produkovanými viry. Tento postup se opakuje (sériové pasážování) dokud není modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) adaptovaný na uvedenou buněčnou linii. Adaptace se dosáhne, když po 72 hodinách po infekci, je titr viru alespoň o 1- až 9- násobě, s výhodou, 10- až 99- násobně, nejvýhodněji 100 až 106 násobně a nej výhodněji 107 až 1010 násobně zvětšený v porovnání s výchozím titrem viru. Adaptace se dosáhne po vymezeném počtu pasáží.
„Adaptovaný k růstu“ (pěstování) znamená, že množství virů produkovaných z jedné infekce (výstup) je zvětšeno v porovnání s množstvím virů původně použitých k infikování buněk (vstup). V tomto případě je poměr výstup/vstup větší jako 1.
„Derivát“ modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) deponovaného ve sbírce mikroorganizmů ECACC, Salisbury, UK pod číslem 99101431 a/nebo pod číslem 01021311 značí modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) adaptovaný pro růst na Věro buňkách rychlostí, která je v podstatě stejná jako rychlost růstu deponovaného kmene, ale má alespoň jeden rozdíl v genomu v porovnání s deponovaným kmenem.
-5 CZ 293690 B6
Termín „imunitní systém“ v zásadě označuje komplex mechanizmů zúčastňujících se obrany organizmu proti cizorodým látkám a mikroorganizmům. Je rozdělený na část buněčnou zahrnující různé typy buněk jako lymfocyty a jiné buňky odvozené od buněk bílých krvinek, a část humorální zahrnující peptidy a proteiny jako protilátky, komplementové faktory a cytokiny.
Termín „imunitní odpověď“ označuje reakci imunitního systému když do organizmu vnikne cizorodá látka nebo mikroorganizmus. Obecně je imunitní odpověď rozdělena na specifickou a nespecifickou reakci i když obě jsou úzce svázané. Nespecifická odpověď je okamžitá obrana vůči širokému spektru cizorodých látek a infekčních činidel. Specifická imunitní odpověď může být charakterizovaná jako vysoce účinný obranný mechanizmus organizmu proti cizorodé látce, která je vyvolaná proti uvedené látce po časové prodlevě a je vysoce specifická pro danou látku. Specifická imunitní odpověď je odpovědna za fenomén, že jedinec, který překonal specifickou infekci je proti této infekci v budoucnu chráněn.
„Aktivátor imunitního systému“ znamená jakoukoliv látku, která je schopna vyprovokovat nebo zlepšit imunitní odpověď.
„Potlačovatel imunitního systému“ znamená jakoukoliv látku, která je schopná snížit nebo inhibovat imunitní odpověď.
„Stabilizátor imunitního systému“ znamená jakoukoliv látku, která je schopná udržet imunitní odpověď na konstantní úrovni.
Vynálezce předkládá dva výhodné kmeny modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA), které jsou adaptované na buněčnou linii afrických zelených opic (kočkodanů) označovaná jako buněčná linie Věro (ATCC č. CCL-81 (Američan Type Culture Collection No. CCL-81)). Kmen modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) pasážovaného na Věro buňkách 100 krát byl označený jako „Vero-MVA“ a uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů, Salisbury, UK, pod číslem 99101431. Kmen MVA po 200 pasážích na Věro buňkách byl nazván „Vero-MVA-200“ a uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů, Salisbury, UK, pod číslem 01021411.
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA), získaný jak popsáno výše je dále amplifikovaný kultivací buněk schválených buněčných linií za vhodných podmínek, infikováním buněk s MVA a sesbíráním (sklizením) produkovaných virových částic. Takto může být MVA účinně a lehce rozšiřován ve velkém. Překvapující je, že modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle vynálezu nevykazuje zvýšenou virulenci v jiných buňkách než Věro buňkách, například lidských buněčných liniích, včetně HL, HEP-2 nebo HeLA.
Dalším význakem předloženého vynálezu je modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) obsahující alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny tj. sekvenci nukleové kyseliny, která se přirozeně nenachází v genomu MVA (rekombinantní MVA). S výhodou je heterologní sekvence nukleové kyseliny gen, výhodněji gen kódující imunizační protein a nejvýhodněji kódující imunizační protein proti malárii, vzteklině a/nebo hepatitidě. Exprese uvedené heterologní sekvence nukleové kyseliny je s výhodou pod transkripční kontrolou promotoru viru vakcinie, s výhodou MVA promotoru. Dalším význakem vynálezu je, že heterologní sekvence nukleové kyseliny je vložená v přirozeně se v MVA genomu vyskytujícím místě delece (viz PCT/EP96/02926).
Rekombinantní modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) se používá k zavedení sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky, přičemž sekvence nukleové kyseliny je k cílové buňce homologická nebo heterologní. Zavedení heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky se může použít k výrobě heterologních nukleových kyselin, peptidů a/nebo polypeptidů a/nebo proteinu kódovaných uvedenou sekvenci nukleové kyseliny in vitro. Tato metoda zahrnuje infikování hostitelské buňky rekombinantní MVA, kultivaci infikované hostitelské buňky za
-6CZ 293690 B6 vhodných podmínek a podle volby izolace a/nebo obohacení peptidu a/nebo proteinu produkovaného řečenou hostitelskou buňkou.
Navíc, zavedení homologické nebo heterologní sekvence může být použito k in vitro a výhodně k in vivo genové terapii. Pro in vitro a ex vivo genovou terapii, se izolují buňky z jedince, který má být ošetřen, transformují se s rekombinantním modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) a vrátí jedinci, od kterého byly buňky odebrány. Pro in vivo genovou terapii se rekombinantní MVA přímo podává živému živočišnému tělu včetně lidského těla. Podle výhodného provedení vynálezu rekombinantní MVA exprimuje antigen nebo antigenní epitop. V nejvýhodnějšim provedení uvedený vektor exprimuje antigenní determinantu Plasmodia falciparum, Mycobacteria, Herpes virus, Influenza virus, hepatitidy, nebo viru získaného selhání imunity (HIV).
Protože modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle vynálezu je překvapivě stále ještě silně oslabený, je MVA ideální k imunizaci širokého výběru savců, včetně lidí. Tímto předložený vynález poskytuje vakcínu obsahující MVA pro imunizaci živých zvířat, včetně lidí proti infekci poxviry, zejména orthopoxviry. Vakcína může kromě MVA obsahovat jednu nebo dvě přísady jako antibiotikum, konzervační prostředek nebo stabilizátor. Vakcína je zejména použitelná ve veterinární oblasti například k imunizaci zvířat proti neštovicovým infekcím jako koček proti kočičím neštovicím, myší proti ektromelii nebo velbloudů proti velbloudím neštovicím. Imunizace se s výhodou provádí parenterálně.
Imunizační účinek antigenní determinanty ve vakcíně je často posílený přidáním tzv. pomocné látky - adjuvans. Pomocná látka působí jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem, vyvolávajíce silnější specifickou imunitní reakci proti antigenní determinantně vakcíny. Podle dalšího provedení vynálezu se modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) používá jako pomocná látka - adjuvans- ke kostimulaci imunitní odpovědi proti antigenní determinantě nějaké vakcíny. V tomto případě je výhodnější, když je modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) inaktivovaný. Inaktivace modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) se provádí buď teplem, nebo chemikáliemi. Výhodná je inaktivace MVA β-propiolaktonem. Podle tohoto provedení vynálezu se může přidat k vakcínám proti řadě infekčních nemocí ke zvýšení imunity vůči nim.
V případě infekce úzce spolupracují imunitní, nervový, hormonální a vaskulámí systém jedince. Tyto interakce mohou být regulovány prvky nespecifického imunitního systému, například cytokiny jako jsou interferony a interleukiny. Viry neštovic mohou ovlivnit regulaci imunitního systému (Swiss Vet. 11/99, 13-17). Podle dalšího provedení vynálezu je modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA), a to s výhodou inaktivovaný, používaný u savců včetně lidí k regulaci buněčných a humorálních elementů nespecifického (vrozeného) imunitního systému. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) se s výhodou používá jako bio-regulátor, přičemž dysfunkce imunitního systému jsou eliminovány a vlastní obranný mechanizmus organizmu těla je aktivovaný, stabilizovaný a/nebo potlačený. Velmi výhodné je použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) jako bio-regulátoru v případě virových infekcí například herpesviry, viry hepatitidy B nebo C, v případě chronických zánětlivých nemocí a/nebo na podporu nádorové terapie. MVA lze rovněž použít na stabilizaci imunitního systému v případě zvýšené náchylnosti k infekcím jako v případě stresu nebo u novorozenců. Aktivní a/nebo s výhodou inaktivovaný modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) může být aplikovaný systemicky například intramuskulárně a/nebo lokálně přes sliznice a/nebo kůži.
Závěrem lze říct, že předložený vynález poskytuje kmeny modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA), které lze použít ve stejných aplikacích jako standardní typ MVA ale eliminují problémy, způsobené amplifikaci standardního typu MVA ve fibroblastech kuřecích embryí.
-7CZ 293690 B6
Příklady provedení
Následující příklady ilustrují předložený vynález aniž se na ně omezuje. Lidem znalým v oboru je jasné, že uvedená technologie není omezena jen na tyto příklady.
Příklad 1
Adaptace modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) na Věro buňky a charakterizace uvedeného kmene (MVA)
1. Adaptace modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) na Věro buňky
Standardní typ MVA vyvinutý Antonem Mayrem, kterým je modifikovaný vir vakcinie typu Ankara, byl uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů (ECACC) pod číslem V94012707. Standardní typ MVA byl adaptovaný k růstu na Věro buňkách mnohonásobným pasážováním viru na Věro buňkách (tab. 1). Klon buňky ATCC-č. CCL-81 stacionární buněčné linie Věro (WHO banka buněk (seed stock ECACC č. 88020401) byl použitý v pasáži č. 148 až 165 (WHO očkovací šarže (seed lot), Master and Working Bank). Buňky byly pomnoženy v médiu sestávajícím zEarlova MEM činidla (ICN), pH 7,4 až 7,6 a 5 % sérové náhrady BMS (Biochrom). Technikou známou pro znalé v oboru, byly vždy stejné buňky z šarže (Working Bank) naočkovány dělením buněk 1:2 až 1:4. Médium obsahovalo přibližně 250 000 buněk na ml. Buňky byly pomnoženy ve zkumavkách (2ml), na Rouxových miskách (lOOml) a plastikových miskách (6 a případně 40ml). Buňky vytvořily po 16 až 24 hodinách souvislou vrstvu skládající se z jedné řady buněk tzv. jednovrstevný porost. Potom bylo médium nahrazeno čistým Earlovým MEM činidlem bez přísad.
Pro adaptaci standardního typu MVA byl použitý kultivační systém ve zkumavkách. Výsledky pasáží jsou shrnuté v tab. 1 a tab. 2. Věro buňky byly infikovány s 10 MOI (multiplicita infekce) standardního MVA, v průměru 10 virových částic na jednu Věro buňku. Standardní typ MVA, se kterým se začalo pracovat byl geneticky homogenní, čištěný MVA po 575 pasážích ve fibroblastech kuřecích embryí (titr: 107’75 KIDso/ml). Po 24 hodinách 90 % Věro buněk, ze souvislé vrstvy skládající se zjedné řady buněk (jednovrstevný porost) bylo zničeno toxickými procesy (50% toxicitou, 40% lýzou). Médium a povrch buněk po zmrazení a rozmražení buněk, obsahující produkované viry, byl sebrán a 0,2ml směsi byly naočkovány na jednovrstvový porost Věro buněk v kultivačních zkumavkách (2. pasáž). Tento postup byl zopakován 200 krát. Po třetí pasáži již nebyl pozorován žáden toxický účinek, zatímco byl pozorován mírný cytopatický efekt (CPE) charakterizovaný zaokrouhlením buněk a lyži v období 4 až 6 dnů po infekci (p.inf.). Titr viru byl 101,0 KID5o/ml. Usoudilo se, že začala proliferace MVA ve Věro buňkách avšak velmi málo účinně. Po páté pasáži, byl pozorován typický cytopatický efekt (CPE), který byl dokončen po 4 až 5 dnech po infekci (p.inf.). Titr viru se zvýšil z 1O1,0 KID5o/ml pro třetí pasáži na 1O4 0 KID5o/ml po páté pasáži. Podle toho se virus již amplifikoval účinněji ve Věro buňkách. V pasážích č. 5 až 11 byl dokončený cytopatický efekt pozorován stále dříve a titr viru vzrostl s každou pasáží. Při pasáži č. 11 byla dosažena hladina 107’5 KID5o/ml. Podle toho po jedenácti pasážích byla dosažena adaptace MVA na Věro buňky. V následujících dalších 30 pasážích byly výsledky pro každé pasáže stejné a vysoce reprodukovatelné: cytopatický efekt (CPE) začal již 24 hodin po infekci (p.inf.) a všechny buňky byly zasaženy po třech dnech po infekci (p.inf.). Přitom 20 % Věro buněk bylo zaokrouhlených a 80 % lyžovaných. Po třech dnech po infekci (p.inf.) byl titr víru pořád kolem 107’73 KID50/ml. Po patnácté pasáži byly viry vždy sebrány po dvou až třech dnech po infekci a jenom 1 MOI namísto 10 MOI bylo použito pro infikování buněk (tab. 2). V následujících dodatečných pasážích se růstové charakteristiky MVA měnily jen slabě. Pozoruhodné je, že optimální titr viru se dále zvýšil a dosáhl 1010 KIDjo/ml při 200. pasáži.
-8CZ 293690 B6
Závěrem lze říct, že virus roste na Věro buňkách reprodukovatelně exponenciálně. Uvedená růstová charakteristika je překvapivě odlišná od charakteristik standardního typu MVA. Podle toho lze říct, že opakujícím se pasážováním byl získán nový kmen. Tento nový kmen byl označen jak „Vero-MVA“ a po 200. pasáži na Věro buňkách jako „Vero-MVA-200“.
Vero-MVA a Vero-MVA-200 byly kultivovány ve větším množství. Pro skladování byl VeroMVA koncentrován odstředěním, resuspendováním v 2,5% polygelinu a lyofilizován v 2ml lékovkách. Titr po lyofilizaci byl stále nejméně 108,5 KIDso/ml. Lyofilizovaný Vero-MVA a Vero-MVA-200 byly kontrolovány na nečistoty a toxicitu a skladovány při +4 °C.
2. Charakterizace biologických vlastností Vero-MVA
Biologické vlastnosti Vero-MVA (pasáž 100) a Vero-MVA-200 (pasáž 200) byly porovnávány s charakteristikami standardními typu MVA (tabulka 3 a tabulka 5). Přitom byly použité techniky známé odborníkům v oboru. Vynálezce ukázal, že se nezměnilo ani spektrum hostitele viru mimo pro Věro buňky, ani nebyl zvýšená virulence pro lidi nebo zvířata. Vero-MVA je charakterizovaný abortivním rozmnožováním vnepermisivních hostitelských buňkách.
Základní identita virových částic (partikulí) Vero-MVA ve srovnání s virovými částicemi (partikulemi) viru vakcinie kmene Elstree byla ukázaná zkříženou reaktivitou protilátek vyvolaných proti kmeni Elstree. Kmen Elstree je kmen vakcinie doporučený Světovou zdravotnickou organizací (WHO) pro očkování proti pravým neštovicím. Polyklonální hyperimunní sérum králíků proti kmeni Elstree bylo přidáno k Vero-MVA. lOOKID5o/ml Vero-MVA bylo úplně neutralizováno při zředění séra 1:512. Dvojnásobné zředění séra bylo potřebné k neutralizaci stejného množství kmene Elstree viru vakcinie (1:256). Podle toho Vero-MVA může být účinné neutralizován sérem imunním proti vakcinie.
Vero-MVA, Vero-MVA-200 a standardní typ MVA byly porovnány v řadě dalších testů ukázaných v tabulkách 3, 4 a 5. Ukazuje se, že virulence Vero-MVA, Vero-MVA-200 pro savce, včetně lidí není zvýšená ve srovnáním se standardním typ MVA. Bylo rovněž ukázáno, že Vero-MVA a Vero-MVA-200 nejsou pro savce včetně lidí nakažlivé nebo toxické. Bylo překvapující, že Vero-MVA byl víceméně identická co do specifičnosti se standardním typem MVA kromě pro Věro buňky: Vero-MVA se v buňkách lidských buněčných liniích (viz tabulka 4: HL-, HEP-2-, a HeLa-buňky) amplifikuje skoro tak neúčinně jako standardní typ MVA. Přesto, že lidské buňky a buňky afrických zelených opic (kočkodanů) jsou fylogeneticky úzce příbuzné, u Vero-MVA buněk nebyla zjištěna schopnost amplifikace v lidských buňkách. Ani v dalších testech nebyly viděny podstatné rozdíly.
Dále byly srovnávány fyzikální, chemické a biologické charakteristiky standardního typu MVA a Vero-MVA (tabulka 5). Zatímco standardní typ MVA pěstovaný na buněčných kulturách fibroblastů kuřecích embryí má ve srovnání s genomem viru pravých neštovic původně izolovaného v Ankaře, tři delece v levé obrácené koncové oblasti, Vero-MVA-200 má čtyři delece v levé koncové oblasti. Tudíž, pasážování standardního typu MVA na Věro buňkách vedlo k další deleci.
Vero-MVA byl použitý k imunizaci domácích zvířat proti infekci orthopoxvirem. Sérum zvířat bylo posbírané a byl proveden neutralizační test. Ukázalo se, že zvířata vyprodukovala protilátky s vysokým titrem. Titry protilátek byl stabilní po období alespoň 111 dní. Ukázalo se rovněž, že protilátky byly schopné neutralizovat in vitro virové částice (partikule) MVA v plakovém testu. Závěrem je, že Vero-MVA lze použít jako vakcínu proti infekci orthopoxviry u domácích zvířat a lidí.
-9CZ 293690 B6
Tabulka 1
Adaptace modifikovaného viru vakcinie (MVA) na Věro buňky
| Pasáž č. | Buněčná kultura | Nejvyšší titr viru [logl0/ml] | Výsledek | Závěry |
| 1 | Toxický účinek po 24 hodinách | 2,0 | Zbytky naočkovaných virů | Slepé pasáže |
| 3 | Žádná toxicita mírný cytopatický efekt po 4-6 dnech | 1,0 | Zbytky naočkovaných virů Začátek pomnožování viru | Fenomén tvorby zón a cytokinu |
| 5 | Typický cytopatický efekt ukončený po 4-5 dnech | 4,0 | Zvýšené pomnožování viru | |
| 11 | CPE-cytopatický efekt dokončen po 3 dnech | 7,5 | Logaritmické pomnožování viru | Úspěšná adaptace |
| 12-42* | CPE-cytopatický efekt začíná po 24 hod, ukončen po 3 dnech | 7,75 | Reprodukovatelné pomnožování viru | Vero-MVA |
| 43-100* | CPE-cytopatický efekt začíná po 24 hod, ukončen po 3 dnech | 8,0 | Reprodukovatelné pomnožování viru | Vero-MVA |
| 100-200* | CPE-cytopatický efekt začíná po 24 hod, ukončen po 3 dnech | 10,0 | Reprodukovatelné pomnožování víru | Výsledek Vero-MVA-200 |
Pojedenácté pasáži naočkováno jenom 1 MOI namísto 10 MOI
Tabulka 2
Změna titru viru v průběhu adaptace MVA na Věro buňky
| Pasáž č. | Sběr po [dny po infekci] | Titr na ml [logio/ml] |
| 1 | 1 | <2,0 |
| 2 | 3 | 2,0 |
| 3 | 5 | 1,0 |
| 5 | 5 | 4,0 |
| 8 | 4 | 6,5 |
| 11 | 3 | 7,5 |
| 18 | 2 | 8,0 |
| 19 | 2 | 7,75 |
| 20 | 3 | 8,0 |
| 25 | 2 | 7,75 |
| 29 | 2 | 7,75 |
| 30 | 3 | 7,75 |
| 31 | 3 | 8,0 |
| 45 | 2 | 7,75 |
| 51 | 3 | 7,75 |
| 60 | 2 | 8,0 |
| 66 | 2 | 7,75 |
-10CZ 293690 B6
Tabulka 2 - pokračování
| Pasáž č. | Sběr po [dny po infekci] | Titr na ml [logio/ml] |
| 68 | 2 | 8,0 |
| 75 | 3 | 8,0 |
| 100 | 2 | 8,0 |
| 200 | 2 | 10,0 |
Tabulka 3
Porovnání biologických charakteristik standardního typu MVA a Vero-MVA
| Markér | Standardní typ MVA | Vero-MVA (100, pasáží) | Vero-MVA-200 |
| CPE v monolayer buněčné kultuře (1MOI seeded) | Zaokrouhlování a lýze buněk po 5 dnech (90 % buněk cytopatický efekt-CPE) | Zaokrouhlování a lýze po 5 dnech (100% cytopatický efekt-CPE) | Zaokrouhlování a lýze buněk po 3 až 5 dnech (100 % cytopatický efektCPE) |
| Titr optimální sběru | 1080 KIDjo/ml | 107’75 KIDS0/ml | 10'°’oKID5o/ml |
| Abortivní reprodukce viru na nepermisivních buněčných systémech | Ano | Ano | Ano |
| Snížená virulence pro lidi a zvířata | Ano | Ano | Ano |
| Hemaglutinace (kuřecí erytrocyty) | Ne | Ne | Ne |
| Charakter primárních plaků na chorioalantoidní membráně | Žádné proliferační uzly bez nekrózy | Žádné proliferační uzly bez nekrózy | Žádné proliferační uzly bez nekrózy |
| Inaktivace β-propiolaktcnem | Kinetika prvního řádu pro 0,05 % | Kinetika prvního řádu pro 0,05 % | Kinetika prvního řádu pro 0,04-0,05% |
| Ochranný účinek | Ano | Ano | Ano |
| Toxicita pro lidi a zvířata | Ne | Ne | Ne |
| Stimulace cytokinú | Interferon alfa, IL-2 a 12, CSA | Interferon alfa, 1L-2 a 12 CSA | Interferon alfa a gama. IL1,2 a 12, CSA |
| Aktivace fagocytózy, NK-buněk (přirozených zabíječských buněk), a T-lymfocytú | Ano | Ano | Ano, zvýšená |
Tabulka 4
Rychlost pomnožování v KID50/ml Vero-MVA a standardního typu MVA na různých buněčných kultivačních systémech [logi0/ml]
| Buněčný kultivační systém | Vero-MVA (31. Vero-pasáž) | Standardní typ MVA (575. pasáž v primárních fibroblastech kuřecích embryí) |
| υ Věro (buňky z ledvin afrických zelených opic) | 8,0 | 4,5 |
| Primární fibroblasty kuřecích embryí | 4,5 | 8,5 |
| UJ HL (lidské plíce) | 3,0 | 2,5 |
| HEP-2 (lidský epidermoidní karcinom) | 3,0 | 2,5 |
-11 CZ 293690 B6
Tabulka 4 - pokračování
| Buněčný kultivační systém | Vero-MVA (31. Vero-pasáž) | Standardní typ MVA (575. pasáž v primárních fibroblastech kuřecích embryí) |
| M) HeLa (lidský karcinom děložního čípku) | 2,75 | 2,75 |
| l,2) BHK (buňky z ledvin křečka) | 5,75 | 5,25 |
| l,2) MDBK (bovinní ledvinové buňky) | 3,5 | 3,5 |
| 1>2) PK-15 (buňky z vepřových ledvin) | 3,25 | 3,5 |
1) Kontinuální buněčné linie z tkání a druhů uvedených v závorkách.
2) Buněčné linie obdržené ze sbírky Ústavu pro lékařskou mikrobiologii vMnichově, Německo.
Tabulka 5 ío Porovnání standardního typu MVA (572. pasáž na fibroblastech kuřecích embryí (CEF)) s VeroMVA-200 (200. pasáž na Věro buňkách)
| Druhy znaků | Standardní typ MVA | Vero-MVA-200 |
| Genetické znaky (srovnání s kmenem neštovic izolovaného v Ankaře) | 3 delece v levé terminální oblasti (obrácená terminální repetice) | 4 delece v levé terminální oblasti |
| Velikost genomu redukovaná z 208 na 178 kb | Další redukce velikosti genomu na 172 kb | |
| Ztráta 15 % molekulové hmotnosti původního genomu | Ztráta 20 % molekulové hmotnosti původního genomu | |
| Ztráta receptoru pro interferon | Další ztráta receptorů např. pro IL-1 β | |
| Buněčné znaky | Aktivace pomocných buněk (CD4, CD8, CD25) | Zvýšená aktivace cytotoxických T-lymfocytů |
| Aktivace NK-buněk | Zvýšená aktivace NK-buněk | |
| Abortivní rozmnožování v savčích buňkách (mimo BHK buněk) | Další zúžení hostitelského spektra v buněčném kultivačním systému | |
| Cytokiny | Interferon a, IL-2, IL-12 | Interferon a a γ, IL-1,2, 12 |
| Titr viru | CEP: 109’5 KIDjo/ml Věro buňky: 1040 KID50/ml | CEF: 104·5 KID3o/ml Věro buňky: 109’5 KID5o/ml |
| Imunitní systém | Snížení aktivity specifického imunitního systému | Zvýšená aktivita nespecifického imunitního systému |
| Virulence pro lidi a zvířata | nízká | žádná |
- 12CZ 293690 B6
Claims (23)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) adaptovaný pro růst v buňkách kontinuální buněčné linie, získatelný vymezeným počtem pasáží zahrnujících a) infikování buněk buněčné linie Věro a b) sběr virových částic produkovaných uvedenými buněčnými liniemi, přičemž počet pasáží je 100 nebo 200.
- 2. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároku 1, vyznačený tím, že buněčná linie je buněčná linie Věro ATCC CCL-81.
- 3. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároku 1, uložený v ECACC pod číslem 99101431.
- 4. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároku 1, uložený v ECACC pod číslem 01021411.
- 5. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároků 1 až 4 obsahující alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny.
- 6. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároku 5 obsahující heterologní sekvenci nukleové kyseliny jíž je gen kódující terapeutický protein a/nebo antigenní determinantu.
- 7. Hostitelská buňka infikovaná modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) podle kteréhokoliv nároku 1 až 6.
- 8. Vakcína pro imunizaci živého živočišného organizmu včetně lidského, vyznačená t í m, že obsahuje MVA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6.
- 9. Vakcína podle nároku 8 pro imunizaci proti orthopox infekci.
- 10. Vakcína podle nároku 8 nebo 9 pro imunizaci koček proti kočičím neštovicím, myší proti ektromelii a/nebo velbloudů proti velbloudím neštovicím.
- 11. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje MVA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6.
- 12. Farmaceutická kompozice podle nároku 11, vyznačená tím, že obsahuje MVA jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému.
- 13. Farmaceutická kompozice podle nároku 11, vyznačená tím, že obsahuje modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem.
- 14. Způsob získání kmene modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároků 1 až 6, vyznačený tím, že sea) buňky buněčné linie Věro infikují standardním typem MVA, s výhodou MVA uloženého v ECACC pod číslem V94012707,b) provede sběr virů, načež se- 13 CZ 293690 B6c) čerstvé buňky stejné buněčné linie infikují nově produkovanými viry,d) a poté se kroky b) a c) opakují až do dosažení adaptace virů na růst v buňkách řečené buněčné linie.
- 15. Způsob pomnožení modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) pro přípravu virových částic MVA podle kteréhokoliv z nároků laž 6, vyznačený tím, že sea) buňky buněčné linie Věro kultivují za vhodných podmínek,b) tato buněčná linie se infikuje modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) ac) sbírají se virové částice produkované těmito buňkami.
- 16. Způsob podle nároku 15, vyznačený tím, že se buněčná linie infikuje modifikovaným virem vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároku 3 nebo 4.
- 17. Použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro výrobu farmaceutické kompozice pro léčení nebo prevenci nemoci nebo poruchy, která reaguje na MVA.
- 18. Použití podle nároku 17, kde farmaceutická kompozice obsahuje MVA jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému.
- 19. Použití podle nároku 17, kde farmaceutická kompozice obsahuje MVA jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem.
- 20. Použití modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro výrobu vakcíny pro imunizaci živých zvířecích organizmů, včetně lidských.
- 21. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároků 1 až 6 pro použití jako vakcína pro imunizaci živého zvířecího organizmu včetně lidského.
- 22. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároků 1 až 6 pro použití jako aktivátor, potlačovatel a/nebo stabilizátor nespecifického imunitního systému živého zvířecího organizmu včetně lidského.
- 23. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) podle nároků 1 až 6 pro použití jako kostimulátor imunitního systému nespecifickým způsobem pro zvýšeni specifické imunitní odpovědi na antigenní determinantu ve vakcíně.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200000410 | 2000-03-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ293690B6 true CZ293690B6 (cs) | 2004-07-14 |
Family
ID=8159327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20023061A CZ293690B6 (cs) | 2000-03-14 | 2001-03-10 | Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6682743B2 (cs) |
| EP (1) | EP1263936B1 (cs) |
| JP (1) | JP4759201B2 (cs) |
| KR (1) | KR100880765B1 (cs) |
| CN (1) | CN1291012C (cs) |
| AT (1) | ATE305030T1 (cs) |
| AU (1) | AU780696B2 (cs) |
| BR (1) | BR0109158A (cs) |
| CA (1) | CA2397675C (cs) |
| CZ (1) | CZ293690B6 (cs) |
| DE (1) | DE60113512T2 (cs) |
| DK (1) | DK1263936T3 (cs) |
| EE (1) | EE05633B1 (cs) |
| ES (1) | ES2249430T3 (cs) |
| HK (1) | HK1052725B (cs) |
| HU (1) | HU228691B1 (cs) |
| IL (3) | IL150736A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02008873A (cs) |
| NO (1) | NO20024246D0 (cs) |
| NZ (1) | NZ521270A (cs) |
| PL (1) | PL205922B1 (cs) |
| RU (1) | RU2280075C2 (cs) |
| SI (1) | SI1263936T1 (cs) |
| UA (1) | UA84388C2 (cs) |
| WO (1) | WO2001068820A1 (cs) |
Families Citing this family (49)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7445924B2 (en) * | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| US7628980B2 (en) | 2000-11-23 | 2009-12-08 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| UA76731C2 (uk) | 2000-11-23 | 2006-09-15 | Баваріан Нордік А/С | Штам mva-bn модифікованого вірусу коров'ячої віспи ankara, фармацевтична композиція, вакцина, застосування mva-bn для приготування лікарського препарату та для приготування вакцини, спосіб введення гомологічної і/або гетерологічної послідовності нуклеїнової кислоти в клітини-мішені in vitro, спосіб одержання пептиду або білка, спосіб одержання mva-bn, клітина, набір для основної/бустерної імунізації |
| US7097842B2 (en) | 2000-11-23 | 2006-08-29 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| EP1357127A1 (de) * | 2002-04-10 | 2003-10-29 | Immusystems GmbH | CD4+ T-Lymphozyten spezifische Hepatitis C Virus-Epitope |
| EP1839672A3 (en) * | 2002-04-19 | 2007-11-21 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus Ankara for the vaccination of neonates |
| IL164177A0 (en) * | 2002-05-16 | 2005-12-18 | Bavarian Nordic As | Recombinant poxvirus expressing homologous genes inserted into the poxviral genome |
| US7501127B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara |
| ATE393212T2 (de) | 2002-09-05 | 2008-05-15 | Bavarian Nordic As | Verfahren zur amplifikation von einem poxvirus in serumfreien verhältnissen |
| CA2515890C (en) | 2003-02-20 | 2013-09-17 | Therion Biologics Corporation | Novel insertion sites in pox vectors |
| EP1518932A1 (en) * | 2003-09-29 | 2005-03-30 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Modified vaccinia virus Ankara (MVA) mutant and use thereof |
| US7423155B2 (en) | 2003-11-14 | 2008-09-09 | 3M Innovative Properties Company | N-sulfonyldicarboximide containing tethering compounds |
| DE602004027767D1 (de) | 2003-11-24 | 2010-07-29 | Bavarian Nordic As | Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara |
| DE102004003572A1 (de) * | 2004-01-23 | 2005-08-18 | Bavarian Nordic A/S | Monoparamunitätsinducer basierend auf attenuierten Myxomaviren des Kaninchens |
| US20090269365A1 (en) * | 2005-04-20 | 2009-10-29 | University Of Washington | Immunogenic vaccinia peptides and methods of using same |
| EP1835031A1 (en) | 2006-03-14 | 2007-09-19 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans |
| US7607323B1 (en) | 2007-10-16 | 2009-10-27 | Hall Charles F | Curl resistant shirt collar and method of fabricating same |
| US8691502B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-04-08 | Tremrx, Inc. | T-cell vaccination with viral vectors via mechanical epidermal disruption |
| US9005632B2 (en) | 2009-11-20 | 2015-04-14 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs against influenza virus subtypes or strains |
| WO2011063359A1 (en) * | 2009-11-20 | 2011-05-26 | Inviragen, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs |
| WO2011087839A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-07-21 | Baxter International Inc. | Vaccine to influenza a virus |
| WO2012151272A2 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | Tremrx, Inc. | T-cell vaccination with viral vectors via mechanical epidermal disruption |
| DE102013004595A1 (de) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Emergent Product Development Germany Gmbh | RSV-Impfstoffe |
| US10801070B2 (en) | 2013-11-25 | 2020-10-13 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer |
| US11725237B2 (en) | 2013-12-05 | 2023-08-15 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| CN120695169A (zh) | 2013-12-20 | 2025-09-26 | 博德研究所 | 使用新抗原疫苗的联合疗法 |
| WO2015138471A1 (en) * | 2014-03-10 | 2015-09-17 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Heat inactivated poxvirus improves vaccination results |
| US10975442B2 (en) | 2014-12-19 | 2021-04-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| EP3234130B1 (en) | 2014-12-19 | 2020-11-25 | The Broad Institute, Inc. | Methods for profiling the t-cell- receptor repertoire |
| NL2014148B1 (en) | 2015-01-16 | 2017-01-05 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Combination vaccine for camelids. |
| CN115300622A (zh) * | 2015-02-25 | 2022-11-08 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 使用灭活的修饰的痘苗病毒安卡拉作为实体肿瘤的单一免疫疗法或与免疫检查点阻断剂组合 |
| HK1252267A1 (zh) | 2015-05-20 | 2019-05-24 | The Broad Institute Inc. | 共有的新抗原 |
| TWI750122B (zh) | 2015-06-09 | 2021-12-21 | 美商博德研究所有限公司 | 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法 |
| FR3042121A1 (fr) | 2015-10-08 | 2017-04-14 | Jean-Marc Limacher | Composition anti-tumorale |
| AU2017254477A1 (en) | 2016-04-18 | 2018-11-01 | Jennifer G. ABELIN | Improved HLA epitope prediction |
| EP3574116A1 (en) | 2017-01-24 | 2019-12-04 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| KR20200003921A (ko) | 2017-05-15 | 2020-01-10 | 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. | 안정한 바이러스-함유 조성물 |
| EP3624845A1 (en) | 2017-05-15 | 2020-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
| EP3973973A1 (en) | 2017-10-31 | 2022-03-30 | KaliVir Immunotherapeutics, Inc. | Platform oncolytic vector for systemic delivery |
| JP7320601B2 (ja) | 2018-09-11 | 2023-08-03 | 上▲海▼市公共▲衛▼生▲臨▼床中心 | 広域スペクトルな抗インフルエンザワクチン免疫原及びその使用 |
| US20210382068A1 (en) | 2018-10-02 | 2021-12-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Hla single allele lines |
| WO2020131586A2 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-25 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identifying neoantigens |
| US12394502B2 (en) | 2019-10-02 | 2025-08-19 | The General Hospital Corporation | Method for predicting HLA-binding peptides using protein structural features |
| MX2023012608A (es) | 2021-04-30 | 2023-11-03 | Kalivir Immunotherapeutics Inc | Virus oncoliticos para la expresion modificada del mhc. |
| WO2023077147A2 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Pellis Therapeutics, Inc. | T-cell vaccines for patients with reduced humoral immunity |
| US20240002881A1 (en) * | 2022-05-04 | 2024-01-04 | University Of Maryland, College Park | RNA Vectors with Hairpin-like Inserts |
| WO2023220283A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Pellis Therapeutics, Inc. | Poxvirus adjuvant for t-cell vaccination |
| WO2024015892A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | The Broad Institute, Inc. | Hla-ii immunopeptidome methods and systems for antigen discovery |
| FR3160186A1 (fr) | 2024-03-13 | 2025-09-19 | Odimma Therapeutics | Vecteur non-viral pour transcription augmentee |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1341245C (en) * | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| DE4405841C1 (de) * | 1994-02-23 | 1995-01-05 | Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr | Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel |
| RU2076735C1 (ru) * | 1994-03-23 | 1997-04-10 | ГНЦВБ "Вектор" | Живая рекомбинантная вакцина гепатита в на основе вируса осповакцины для перорального применения и способ ее получения |
| UA68327C2 (en) * | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
| JP4460762B2 (ja) * | 1997-10-15 | 2010-05-12 | 旭化成ファーマ株式会社 | トロンボモジュリン水溶液注射剤の貯蔵・流通時の品質保持方法 |
| JP3736622B2 (ja) * | 2001-06-15 | 2006-01-18 | セイコーエプソン株式会社 | ライン駆動回路、電気光学装置及び表示装置 |
-
2001
- 2001-03-10 EE EEP200200507A patent/EE05633B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 NZ NZ521270A patent/NZ521270A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 DE DE60113512T patent/DE60113512T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-10 KR KR1020027012058A patent/KR100880765B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-10 IL IL15073601A patent/IL150736A0/xx active IP Right Grant
- 2001-03-10 ES ES01931508T patent/ES2249430T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-10 US US10/204,782 patent/US6682743B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-10 MX MXPA02008873A patent/MXPA02008873A/es active IP Right Grant
- 2001-03-10 CA CA2397675A patent/CA2397675C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-10 AU AU58269/01A patent/AU780696B2/en not_active Ceased
- 2001-03-10 CN CNB018064949A patent/CN1291012C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-10 PL PL357378A patent/PL205922B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 EP EP01931508A patent/EP1263936B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-10 AT AT01931508T patent/ATE305030T1/de active
- 2001-03-10 WO PCT/EP2001/002703 patent/WO2001068820A1/en not_active Ceased
- 2001-03-10 JP JP2001567304A patent/JP4759201B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-10 BR BR0109158-1A patent/BR0109158A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-03-10 UA UA2002097453A patent/UA84388C2/ru unknown
- 2001-03-10 HU HU0300120A patent/HU228691B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 HK HK03104648.5A patent/HK1052725B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 SI SI200130452T patent/SI1263936T1/sl unknown
- 2001-03-10 CZ CZ20023061A patent/CZ293690B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-03-10 DK DK01931508T patent/DK1263936T3/da active
- 2001-03-10 RU RU2002124622/13A patent/RU2280075C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-07-15 IL IL150736A patent/IL150736A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-05 NO NO20024246A patent/NO20024246D0/no not_active Application Discontinuation
-
2008
- 2008-01-08 IL IL188667A patent/IL188667A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6682743B2 (en) | Altered strain of the modified vaccinia virus ankara (MVA) | |
| AU2003239805B2 (en) | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates | |
| US8372622B2 (en) | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates | |
| US20030224018A1 (en) | Modified Vaccinia Virus Ankara for the vaccination of neonates | |
| DE102005027956B4 (de) | Hochattenuierte Poxvirusstämme, Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Paramunitätsinducer oder zur Herstellung von Vektor-Vakzinen | |
| HK1078777B (en) | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140310 |