CZ292860B6 - Deriváty androstenu a farmaceutický prostředek obsahující tyto deriváty - Google Patents

Abstract

Nové deriváty androstenu, které mají protizánětlivou účinnost, meziprodukty pro jejich výrobu a farmaceutické prostředky, které obsahují tyto deriváty, pro podávání teplokrevným živočichům při ošetřování zánětu. Účinnými sloučeninami jsou alkyl-17.alfa.-dichloracetoxy-11.beta.-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17.beta.-karboxyláty a příbuzné androsteny.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových derivátů androstenu, které mají protizánětlivou účinnost, farmaceutických prostředků, které obsahují tyto deriváty, nových chemických meziproduktů použitelných při přípravě těchto derivátů a způsobů podávání těchto derivátů savcům při ošetřování zánětu.

Dosavadní stav techniky

Topická nebo jiná lokální aplikace silně účinných glukokortikoidů může vést k prudkým toxickým účinkům, jako jsou Cushingova nemoc, potlačení činnosti hypofýzy a nadledvinek, atrofie kůže, imunosuprese a inhibice hojení ran. Při dlouhodobém používání léčiv tohoto typu může docházet k dalším druhům toxických reakcí, včetně alergií a katarakt.

Oční aplikace glukokortikosteroidů přináší další problémy. Ochranný mechanismus oka dovoluje pouze malým množstvím dávek aplikovaných do oka dosáhnout cílových míst v oku. Obecně přes 90 % celkové dávky nachází svou cestu do celkové cirkulace. Což naopak vede k vážným systemickým vedlejším účinkům výše uvedeného typu. Kromě toho při používání tohoto léčiva do oka dochází k vážnému a specifickému vedlejšímu účinku, to je že se zvyšuje nitrooční tlak (IOP). Chronický nebo akutní glaukom vyvolaný kortikosteroidy byl již popsán v časných 60. letech. Obecně je třeba používat kortikosteroidy k léčbě zánětu pouze topicky. Avšak absorbovaný steroid je odpovědný za vážné vedlejší účinky uvedené výše. Předpokládá se, že účinek kortikosteroidu na volní výstupní cesty a přilehlé tkáňové glykosaminoglykany (GAG) je důležitý při vývinu oční hypertenze vyvolané glukokortikoidem.

Je proto stále zapotřebí silných lokálních protizánětlivých steroidů, které nemají systemický účinek a následkem toho nepůsobí vážné systemické vedlejší účinky působené léčivy této třídy.

Přírodní glukokortikosteroidy a mnohé jejich na trhu uváděné deriváty jsou Δ⁴ a Δ¹’⁴ pregneny mající 21-hydroxyskupiny. V literatuře je však popsána řada protizánětlivých Δ⁴ a Δ^1,4 androstenů. Tak Anner a j., US patent 3 636 010, vydaný 18. 01. 1972, popisují estery Δ⁴ a Δ^1,4-16a-methyl-6a-9a-difluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-3-oxo-androstadien-l 7-karboxylovou kyselinu mající „dobrou protizánětlivou a thymolytickou účinnost“. Thymolytická účinnost je však známkou systemická účinnosti.

V 70. letech a v časných 80. letech bylo vydáno několik patentů, které popisují deriváty androstenu, které mají údajně více žádoucí poměry protizánětlivého účinku k nežádoucím vedlejším účinkům. Jsou to britský patent 1 384 372, Phillips a j., US patent 3 828 080, Phillips aj., US patent 3 856 828, Phillips a j., US patent 4 093 721, britská patentová přihláška GB 2 014 579, Edwards, US patent 4 188 385, Alvarez, US patent 4 198 403 a Edwards, US patent 4 263 289. Deriváty Δ⁴ a Δ^1,4 3-oxoandrostenu v těchto procentech mohu mít různé substituenty v polohách 6, 9, 11 a 16 a typicky obsahují 17a-hydroxy- nebo 17a-alkanoyloxysubstituent. Jako skupiny v poloze 17β lze jednotlivě uvést alkylester karboxylové kyseliny, halogenalkylester karboxylové kyseliny nebo alkylester thiokarboxylové kyseliny. V britském patentu 1 578 243 a v jeho US analogu a Kalvoda a j. v US patentu 4 285 937 také popisují androsta-dien-17-karboxylové kyseliny a jejich estery. Sloučeniny v US patentu 4 285 937 jsou uváděny jako nové esteiy androstadien-17-karboxylových kyselin obecného vzorce

kde R' znamená volnou hydroxylovou skupinu nebo hydroxylovou skupinu esterifikovanou karboxylovou kyselinou obsahující do 7 atomů uhlíku, R znamená methylovou skupinu v anebo β-poloze nebo methylenovou skupinu, R je H nebo Cl, každý ze symbolů X a Y znamená atom vodíku, atom chloru nebo atom fluoru, stou výhodou, že alespoň jeden z těchto substituentů je jedním z těchto halogenů, když R je Cl a že Y je pouze Cl nebo F a X je pouze Cl, když R je H a že esterová skupina androstadien-17-karboxylové kyseliny neobsahuje více než 11 atomů uhlíku. O těchto sloučeninách se uvádí, že mají zřetelný protizánětlivý účinek spojený se zřetelně nízkými systemickými vedlejšími účinky a že jsou zejména vhodné pro dermatologické použití. Estery steroidních 17-karboxylových kyselin jsou odvozeny od alkoholů obsahujících 1 až 10 atomů uhlíku alifatického, aralifatického a heterocyklického typu, které jsou nesubstituovány nebo substituovány atomem chloru, fluoru nebo bromu, hydroxylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou nebo nižší alkanoyloxyskupinou. Tyto alkoholy zahrnují nižší alkanoly (methanol, ethanol atd.). 17-esterovou skupinou může být také chlormethoxykarbonyl, fluormethoxykarbonyl nebo 2-chlorethoxykarbonyl nebo 2-fluorethoxykarbonyl. Esterifíkovaná hydroxyskupina R' je odvozena od nasycené nebo nenasycené karboxylové kyseliny s 1 až 7 atomy uhlíku, která je nesubstituována nebo substituována atomy halogenu, hydroxylovou skupinou nebo nižší alkoxyskupinou, jako příklady R' lze uvést formyloxyskupinu, acetoxyskupinu, propionyloxyskupinu, butyryloxyskupinu, valeryloxyskupinu, diethylacetoxyskupinu, kaproyloxyskupinu, chloracetoxyskupinu, chlorpropionyloxyskupinu, oxypropionyloxyskupinu nebo acetoxypropionyloxyskupinu. Avšak jedinou specifickou sloučeninou, ve které je poloha 2 nesubstituována, která je popsána Kalvodou aj., je methyl-9a-chlor-6a-fluor-l 1 β-hydroxy16a-methyl-3-oxo-l 7a-propionyloxyandrosta-l ,4-dien-l 7-karboxylát. Skutečně všechny specifické sloučeniny popsané Kalvodou a j. jsou 17a-propionyloxysloučeniny. Vzhledem k tomu, že se očekává, že sloučeniny podle Kalvody aj. se hydrolyzují in vivo, čímž se uvolňuje kyselina z polohy esteru 17a, není překvapující, že Kalvoda aj. preferují pro derivatizaci 17a-hydroxylové skupiny kyselinu propionovou, o které je známo, že má LD₅₀ u krys pouze 4,29 g/kg orálně. Kyselina octová, která je také v podstatě netoxická, má LD₅₀ u krys 3,53 g/kg orálně. Naopak LD₅₀ kyseliny chloroctové u krys je 76 mg/kg orálně, což je relativně zcela toxické.

Nedávno byly vyvinuty měkké steroidy ve snaze připravit sloučeniny mající silnou protizánětlivou účinnost s minimální systemickou účinností. Tyto sloučeniny zahrnují Δ⁴ a Δ¹’⁴ 17a-alkoxy11 fF-hydroxy-3-oxoandrosteny, popřípadě substituované různými substituenty v polohách 6, 9 a 16 a příbuzné sloučeniny substituované v poloze 11, které jsou estery nebo thioestery 17β— karboxylových kyselin. Tyto 17a-ethery jsou popsány v US patentu 4 710 495 (Bodor). Výhodné sloučeniny jsou nazvány jako halogenalkylestery 17a-alkoxy-lip~hydroxyandrost-4en-3-on-17P-karboxylových kyselin.

Další řadou měkkých steroidů, které jsou popsány jako látky mající silnou protizánětlivou účinnost s minimální systemickou účinností, jsou 17a-karbonáty sloučenin popsaných v US patentu 4 996 335. Tyto sloučeniny zahrnují jako výhodné látky halogenalkyl-17a-alkoxykarbonyloxy-ll|3-hydroxyandrost-4-en-3-on-17P-karboxyláty a odpovídající Δ¹’⁴ sloučeniny, popřípadě substituované 6a- a/nebo 9a-fluorem a 16a- nebo 16|3-methylem. Jednou z těchto

-2CZ 292860 B6 sloučenin je chlormethyl-17a-ethoxykarbonyloxy-l ip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17pkarboxylát, také známý jako loteprednol etabonát, pro který byl proveden klinický vývoj a který čeká na schválení FDA.

Nicméně stále je třeba vyvíjet nové protizánětlivé steroidy, které mají silnou lokální protizánětlivou účinnost a přitom mají minimální nebo žádnou systemickou účinnost.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou nové deriváty androstenu, které mají protizánětlivou účinnost a které mají obecný vzorec I

X~R1 (I) ve kterém

Ri je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a alkylsulfonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, α-methylová skupina, β-methylová skupina, =CH₂ nebo a- nebo p-OC(=O)CHCl₂,

R4 je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru,

R₅ je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina,

X je -O- nebo -S-,

Z je karbonylová skupina, β-hydroxymethylenová skupina nebo β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, že 1,2-vazba je nasycená nebo nenasycená.

V této skupině sloučenin je výhodná následující podskupina:

(1) sloučeniny, ve kterých R₃ je H, R4 je H nebo F a R₅ je H, F nebo CH₃, (2) sloučeniny, ve kterých R3 je 01-CH3 nebo β-CHs, R4 je H nebo F a R5 je H, F nebo CH3, a (3) sloučeniny, ve kterých R₃ je α-ΟΗ, β-ΟΗ- a-OCOCHCh nebo |3-OCOCHC1₂, R4 je H nebo F a R₅ je H, F nebo CH₃.

-3 CZ 292860 B6

Obzvláště výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, které mají jednu nebo více z následujících strukturních charakteristik:

(1) R] je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, zejména kde R! je nesubstituovaná alkylová skupina, obzvláště kde Ri je methylová nebo ethylová skupina, (2) Xje-O-, (3) Z je β-hydroxymethylenová skupina, (4) 1,2-vazba je nenasycená, zejména kde R3, R4 a R₅ znamenají výhodné významy uvedené v předchozím odstavci.

Obzvláště výhodná je jedna skupina derivátů podle vynálezu strukturního vzorce la

(la), kde R_n je methylová skupina, ethylová skupina, izopropylová skupina nebo chlormethylová skupina, zejména jde Ru je methylová skupina, ethylová skupina nebo izopropylová skupina.

Androstenové deriváty obecného vzorce i jsou extrémně silnými lokálními protizánětlivými činidly, které nemají systemickou účinnost. Z toho důvodu lze sloučeniny podle předloženého vynálezu použít při lokálním (například topickém) ošetřování zánětlivých stavů bez vážných systemických vedlejších účinků, které provázejí použití mnoha známých glukokortikosteroidů. Kromě toho s ohledem na jejich vynikající vlastnosti jako vazby na receptor a vasokonstriktorů představují tyto nové sloučeniny novou třídu bezpečných a účinných steroidních protizánětlivých činidel, které mají vynikající bezpečnostní vlastnosti.

Alkylové skupiny mohou být přímé nebo rozvětvené skupiny obsahující výše uvedený počet atomů uhlíku. Podobně alkylové části alkoxyskupin, alkylthioskupin, alkylsulfinylových skupin a alkylsulfonylových skupin mohou mít přímé nebo rozvětvené řetězce.

Specifickými příklady alkylových skupin přítomných v obecném vzorci I buď jako specifické hodnoty pro Ri nebo jako Část skupiny Ri jsou methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl a n-butyl.

Alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylové skupiny a alkylsulfonylové skupiny jsou typu -O-alkyl, -S-alkyl, -SO-alkyl a -SOr-alkyl, kde alkylové skupiny mají výše uvedený význam.

I když všechny sloučeniny obecného vzorce I v podstatě splňují podmínky předloženého vynálezu, přesto jsou určité skupiny sloučenin výhodné a byly již definovány výše. Zejména výhodnou skupinou sloučenin obecného vzorce I jsou sloučeniny obecného vzorce la definované výše.

-4CZ 292860 B6

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří sloučeniny obecného vzorce I mající 16a-methylovou skupinu nebo 16fl-methylovou skupinu, zejména ty, kde Z, X a R, mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách dexamethasonu, betamethasonu, flumethasonu nebo paramethasonu, zejména, když R] je 5 nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, když Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku. Z těchto sloučenin mají zvláštní význam sloučeniny obecného vzorce Ib

*51 kde Rn má význam uvedený u obecného vzorce Ia, R₃₁ je a-CH₃ nebo [3-CH₃, R» je H nebo F io a R₅i je H nebo F, zejména, kde Rii je methylová skupina nebo ethylová skupina.

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří sloučeniny obecného vzorce I, kde Z, X a R] mají význam uvedený výše u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách hydrokortizonu (to je R₃, R4 a R₅ jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba 15 je nasycená) nebo prednisolonu (to je R₃, R4 a R₅ jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nenasycená), zejména kde Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina a obzvláště, kde Rj je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří obdobné sloučeniny, které jsou uvedeny v předchozím odstavci, s 6a- a/nebo 9a-fluorem. V této skupině jsou zvláště výhodné sloučeniny, kde Z, X a R] mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách fluorokortizonu, triamcinolonu, fluprednisolonu, izofluprednonu nebo difluprednatu, zejména, kdy Rj je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, kdy Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku. Dále jsou zajímavé sloučeniny, kde Z, X a Ri mají význam uvedený u obecného vzorce I, R₃ je a- nebo (3-OC(=O)CHC12 a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách triamcinolonu, zejména, kdy R] je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, kdy Rj je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Dalšími androstenovými deriváty zvláštního významu jsou sloučeniny obecného vzorce I, které mají 6a-methylovou skupinu, zejména ty, ve kterých Z, X a Ri mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbývající strukturní proměnné jsou identické stěmi v odpovídajících 35 polohách fluorometholonu nebo methylprednisolonu, zejména, kdy R] je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, kdy Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

V každé skupině sloučenin uvedených ve třech předcházejících odstavcích jsou zvláště výhodné 40 sloučeniny, kde X je atom kyslíku. Zvláště výhodné jsou sloučeniny patřící do skupin uvedených

-5CZ 292860 B6 výše, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina, kde X je atom kyslíku a kde Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, zejména nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména methyl, ethyl nebo izopropyl).

I když sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých Z je β-hydroxymethylenová skupina, jsou obecně výhodné, zvláštní význam mají také zejména deriváty, kde Z je β-chlormethylenová skupina nebo kde Z je karboxylová skupina. To jsou sloučeniny, ve kterých 1,2-vazba, R₃, R4, R₅ a Z jsou identické s odpovídajícími částmi dichlorisonu (kde Z je β-chlormethylenová skupina) nebo ve kterých 1,2-vazba, R₃, R4, R₅ a Z jsou identické s odpovídajícími částmi prednisonu, chloroprednisonu nebo kortizonu (kde Z je vždy karbonylová skupina). Jak již bylo uvedeno výše, zvláštní význam mají sloučeniny, ve kterých R] je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina.

Sloučeniny obecného vzorce I lze obecně připravit známými způsoby, jejichž výběr je závislý na identitě různých substituentů v požadovaném konečném produktu.

Jeden obecně používaný způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina a X je atom kyslíku, používá výchozí steroidní sloučeninu obecného vzorce II

*5 kde R4, R₅ a čárkovaná přímka v kruhu A mají význam uvedený u obecného vzorce I a R₃' je atom vodíku, α-methylová skupina, β-methylová skupina, α-ΟΗ, β-ΟΗ nebo =(3¾ (a kterou lze obvykle připravit reakcí odpovídajících 21-hydroxypregnenolonů vzorce

kde R4, R₅, R₃' a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, s NaIO₄ ve vhodném organickém rozpouštědle při teplotě místnosti nebo při zvýšené teplotě). Při tomto způsobu podle vynálezu se výchozí sloučenina obecného vzorce II nechá reagovat s dichloracetylchloridem (CI2CHCOCI) za bezvodých podmínek, v příslušném inertním organickém rozpouštědle, jako je

-6CZ 292860 B6 methylenchlorid, chloroform nebo tetrahydrofuran, s výhodou v přítomnosti vhodného akceptoru kyseliny (například triethylaminu, pyridinu, uhličitanu vápenatého, hydrogenuhličitanu sodného nebo jiné příslušné báze). Reakční doba a reakční teplota nejsou kritickými faktory, avšak reakce se běžně provádí při teplotě mezi 0 °C a teplotou místnosti a po dobu asi 1 až 6 hodin. Vzniklá nová sloučenina 17[3-karboxylová kyselina 17a-dichloracetát má obecný vzorec III

*5 kde R4, R₅ a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam a R₃ je H, a-CH₃, fl-CH₃, a-OCOCHCl₂, P-OCOCHC1₂ nebo =CH₂. Jestliže R₃' ve výchozí sloučenině obecného vzorce II je α-OH nebo β-ΟΗ, je obvykle používaný dichloracetylchlorid dostatečný pro tvorbu dichloracetátového seskupení v poloze 16, jakož i v poloze 17 (to je, kdy R₃' v obecném vzorci II je OH, R₃ ve vzniklém meziproduktu obecného vzorce III je a- nebo β-OCOCHCh). V případě potřeby lze následně skupinu 16a- nebo 16p-OCOCHCl₂ odstranit selektivní hydrolýzou, čímž se regeneruje 16-hydroxyskupina, například hydrolýzou svodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného nebo působením methanolické kyseliny chlorovodíkové. Alternativně, je-li ve výchozí sloučenině přítomna 16a- nebo β-hydroxyskupina, lze ji chránit tvorbou trimethylsilyletheru nebo trifluoracetylesteru, meziprodukt chráněný v poloze 16 lze potom podrobit výše popsané acylaci a vzniklá sloučenina, a to je v poloze 16 chráněná 17|3-karboxylová kyselina-17adichloracetát, se potom nechá reagovat známým způsobem, čímž se odstraní chránící skupina a získá se odpovídající 16-hydroxy-17p-karboxylová kyselina-17a-dichloracetát.

Jestliže se zavádí 17a-substituent způsobem popsaným v předcházejícím odstavci, bylo zjištěno, že čištění meziproduktů je časově náročné, protože hodnoty Rf nečistot a požadovaných meziproduktů obecného vzorce III jsou si velmi blízké. Avšak, nechá-li se výchozí sloučenina obecného vzorce II reagovat s dichloracetylchloridem v hexamethylfosforamidu (HMPA) v přítomnosti kyanidu stříbrného za zahřívání, získají se požadované meziprodukty ve vysokém (v některých případech téměř kvantitativním) výtěžku a s tak malými nečistotami, že je lze snadno čistit nebo je lze použít v následujícím stupni bez dalšího čištění. Reakce se obvykle provádí při teplotě asi 80 °C po krátkou dobu, například řádově 10 až 15 minut.

Po výše popsaném zavedení 17a-substituentu se vzniklý nový meziprodukt obecného vzorce III snadno převede na odpovídající sloučeninu obecného vzorce I působením alkylhalogenidu Ri-Hal [například CH₃I, C₂H₅I, (CH₃)₂CHI] nebo, když R| je halogenalkylová skupina, působením halogenalkylhalogenidu [například C1CH₂I] nebo halogenalkylchlorsulfátu Hal-SO₃R] (například C1SO₃CH₂C1). Jestliže Ri v konečném produktu je alkylová skupina substituovaná alkoxyskupinou nebo alkylthioalkylová skupina, může se alkoxyalkylhalogenid nebo alkylthioalkylhalogenid nechat reagovat s meziproduktem obecného vzorce ΙΠ. Tento stupeň reakčního postupu se může vhodně provádět při teplotě místnosti po dobu asi 1 až 24 hodin, v příslušném rozpouštědle, jako je methylenchlorid.

Reakce popsaná v předcházejícím odstavci může být provedena za použití alkylhalogenidu v hydrogenuhličitanu sodném v přítomnosti tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (TBA) jako katalyzátoru fázového přenosu, ale poskytuje konečné produkty v nízkém celkovém výtěžku. Kromě toho oddělení nečistot a požadovaných produktů je časově náročné. Avšak, připraví-li se meziprodukt obecného vzorce ΙΠ způsobem s kyanidem stříbrným v HMPA, a tento meziprodukt se nechá reagovat s alkyljodidem v přítomnosti uhličitanu draselného v HMPA při teplotě místnosti, celkový výtěžek značně stoupne, na asi 90 %. Skutečně téměř kvantitativní výtěžek lze získat ve druhém stupni, kdy se použije meziprodukt obecného vzorce III ve vyčištěné formě. Reakce se nechá probíhat tak dlouho, až je kompletní (například asi 1,5 až 2 hodiny).

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých Ri je seskupení obsahující sulfinylovou nebo sulfonylovou část, lze připravit oxidací odpovídajících thiosteroidů. Tak například sloučenina obecného vzorce I, kde R! je alkylthioalkylová skupina, se může nechat reagovat s 1 ekvivalentem m-chlorperoxybenzoové kyseliny při teplotě 0 až 25 °C po dobu 1 až 24 hodin, ve vhodném rozpouštědle, jako je chloroform, čímž se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde Ri je alkylsulfinylalkylová skupina, nebo se 2 ekvivalenty m-chlorperoxybenzoové kyseliny, čímž se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde R] je alkylsulfonylalkylová skupina.

Mají-li se připravit sloučeniny obecného vzorce I, kde R₃ je a- nebo β-hydroxyskupina, lze je připravit částečnou kyselou hydrolýzou odpovídajících sloučenin obecného vzorce I, kde R₃ je a- nebo |3-OOCHC12, v prostředí vhodného rozpouštědla. Je třeba použít mírné reakční činidlo, například vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného nebo kyselinu mravenčí v methanolu. Alternativně lze, jak již bylo výše uvedeno, provést hydrolýzu 16-dichloracetátu na 16-hydroxysloučeninu v dřívějším stupni syntézy pro zavedení 16,17-bis(dichloracetátových) skupin, například selektivní hydrolýzou meziproduktu obecného vzorce III majícího 16- a 17-dichloracetátové skupiny na odpovídající 16-hydroxy-17-dichloracetát, načež následuje převedení na odpovídající sloučeninu obecného vzorce I, jak je popsáno výše.

Další možný způsob přípravy sloučenin podle předloženého vynálezu, který lze použít pro ' * přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina a X je atom kyslíku nebo atom síry, využívá výše uvedený meziprodukt obecného vzorce III, to je 17|3-karboxylovou kyselinu-17a-dichloracetát. Podle tohoto způsobu se meziprodukt obecného vzorce III nechá nejdříve reagovat s mírným činidlem tvořícím acylchlorid, například jako je diethylchlorfosfát nebo oxalylchlorid, čímž se získá nový chlorid kyseliny obecného vzorce IV

kde R₃, Ri, R₅ a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, a potom s R]XM', kde Ri a X mají výše uvedený význam, a M' je atom vodíku nebo M, kde M je vhodný kov, například alkalický kov (jako je sodík nebo draslík), kov alkalické zeminy/2 nebo thalium nebo NH4, v inertním rozpouštědle (například v CHC1₃, THF, acetonitrilu nebo DMF), při teplotě mezi asi 0 °C a teplotou varu rozpouštědla, po dobu 1 až 6 hodin, čímž se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I. Používá-li se sloučenina obecného vzorce R]XM', kde M' je atom vodíku, je v reakčním systému s výhodou přítomna látka vázající kyselinu, jako je triethylamin. Tyto dva

-8CZ 292860 B6 stupně tohoto způsobu mohou vhodně probíhat vtémže rozpouštědle, bez izolace chloridu kyseliny obecného vzorce IV vzniklého v prvním stupni. Tento způsob je obzvláště vhodný při přípravě sloučeniny obecného vzorce I, kde X je S.

Pro převedení chloralkyl-17|3-karboxylátu obecného vzorce I na odpovídající fluoralkylový derivát lze použít reakci výměny halogenu založenou na relativních rozpustnostech. Při této reakci lze použít fluorid stříbrný, přičemž reakce se provádí ve vhodném organickém rozpouštědle (například v acetonitrilu), které je zejména použitelné při přípravě sloučenin, kde Ri je fluormethyl nebo fluorethyl.

21-hydroxypregnenolony, ze kterých se připravují výchozí steroidní sloučeniny obecného vzorce II, lze získat komerčně nebo je lze připravit známými způsoby. Rovněž tak nesteroidní výchozí sloučeniny používané v různých výše diskutovaných postupech jsou komerčně dostupné neboje lze připravit známými chemickými postupy.

Také se může výchozí sloučenina obecného vzorce II nechat reagovat s dichloracetylchloridem, čímž se získá meziprodukt obecného vzorce V

*5 kde R₃, R4, R₃ a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, který lze převést na odpovídající meziprodukt obecného vzorce III částečnou hydrolýzou, s izolací nebo bez izolace sloučeniny obecného vzorce V. Tato reakce výchozí sloučeniny obecného vzorce II s dichloracetylchloridem se může provádět za stejných podmínek jako reakce sloučeniny obecného vzorce II s dichloracetylchloridem, jak byla popsána výše, s výjimkou toho, že se dichloracetylchlorid použije v množství 2 molů nebo více najeden mol sloučeniny obecného vzorce Π. Částečnou hydrolýzu vzniklé sloučeniny obecného vzorce V lze provádět v inertním rozpouštědle v přítomnosti katalyzátoru. Jako příklady vhodných katalyzátorů lze uvést terciární alkylaminy, jako je triethylamin, trimethylamin nebo pod., aromatické aminy, jako je pyridin, 4,4-dimethylaminopyridin, chinolin nebo pod., sekundární alkylaminy, jako je diethylamin, dimethylamin nebo pod. a anorganické báze, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydrogenuhličitan draselný nebo pod. S výhodou se používají pyridin a hydrogenuhličitan draselný. Jako příklady vhodných inertních rozpouštědel pro použití při hydrolýze lze uvést vodu, nižší alkoholy, jako je ethanol, methanol nebo pod., ethery, jako je dimethylether, diethylether, dimethoxyethan, dioxan, tetrahydrofuran nebo pod., halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform nebo pod., terciární aminy, jako je pyridin, triethylamin nebo pod., nebo směs dvou nebo více výše uvedených rozpouštědel. Reakce se obvykle provádí při teplotě od asi 0 do 100 °C, s výhodou při teplotě místnosti až 50 °C, po dobu 1 až 48 hodin, s výhodou po dobu 2 až 5 hodin.

Dále jsou podstatou vynálezu nové sloučeniny obecného vzorce Ic

-9CZ 292860 B6

X-Rj

Ř5 (Ic) , kde R_b R₃, R», R₅, X a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam u obecného vzorce I. 11-ketosloučeniny obecného vzorce Ic lze připravit postupy výše popsanými pro přípravu odpovídajících 11 β-hydroxysloučenin obecného vzorce I. Tak se výchozí sloučenina odpovídající obecnému vzorci II, ale která má 11-ketoskupinu, nechá reagovat s dichloracetylchloridem, čímž se získá odpovídající nový meziprodukt odpovídající obecnému vzorci III nebo V, ale který má 11-ketoskupinu, který se potom může nechat reagovat, jak je výše popsáno pro 1 Ιβ-hydroxysloučeninu, čímž se nakonec získá sloučenina obecného vzorce I, kde Z je karbonylová skupina (to je sloučenina obecného vzorce Ic). Všechny reakční podmínky jsou stejné, jak je výše popsáno pro odpovídající způsoby přípravy odpovídajících 11 β-hydroxysloučenin obecného vzorce I. Také příprava sloučenin obecného vzorce Ic, kde R] je seskupení obsahující sulflnylovou nebo sulfonylovou část, nebo kde R₃ je hydroxyskupina, obecně probíhá v konečném stupni syntézy analogicky, jak je popsáno pro odpovídající 11 β-hydroxysloučeniny obecného vzorce I.

Obdobně lze sloučeniny obecného vzorce I, kde Z je β-chlormethylenová skupina, snadno připravit analogickými postupy, které byly použity pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina nebo karbonylová skupina.

Kromě toho lze 11-ketosloučeniny obecného vzorce Ic připravit reakcí odpovídajících 11 β-hydroxysloučenin obecného vzorce I s oxidačním činidlem. Oxidace 11 β-hydroxysloučeniny obecného vzorce I za účelem převedení na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ic se obvykle provádí za použití oxidačního činidla v příslušném rozpouštědle. Rozpouštědlem může být jakékoliv běžné rozpouštědlo, například voda, organická kyselina (například kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina trifluoroctová), alkohol (například methanol, ethanol), halogenovaný uhlovodík (například chloroform, methylenchlorid), nebo pod.. Oxidačním činidlem může být také jakékoliv běžné činidlo, které účinně oxiduje hydroxyskupinu na karbonylovou skupinu, například pyridiniumchlorchromát, oxid chromový v pyridinu, peroxid vodíku, dvojchromová kyselina, dvojchromany (například dvojchroman sodný, dvojchroman draselný), kyselina manganistá, manganistany (například manganistan sodný, manganistan draselný) nebo pod.. Oxidační činidlo se obvykle používá v množství 1 mol nebo více, s výhodou 1 až 3 moly, na mol 11 β-hydroxysloučeniny obecného vzorce I. Reakce se obvykle provádí při teplotě 0 až 40 °C, s výhodou při teplotě místnosti, po dobu asi 6 až 30 hodin.

Nové sloučeniny obecného vzorce Ic se používají nejen jako steroidní protizánětlivá činidla, ale také jako in vivo nebo in vitro prekurzory odpovídajících 11 β-hydroxysloučenin. Tak se mohou sloučeniny obecného vzorce Ic redukovat in vitro, čímž vzniknou odpovídající 11 β-hydroxysloučeniny obecného vzorce I, za použití redukčních činidel, která jsou známá schopností redukovat 11-oxoskupinu na 11 β-hydroxyskupinu, aniž by se modifikoval zbytek steroidní výchozí sloučeniny. Pro provedení požadovaného převedení je typicky výhodná mikrobiologická redukce, i když chemická redukce je také možná. Dále lze sloučeniny obecného vzorce Ic formulovat do

-10CZ 292860 B6 příslušných dávkových forem (například retenčních klystýrů) pro ošetřování stavů, jako je vředová kolitida. Předpokládá se, že v těchto dávkových formách se sloučeniny obecného vzorce Ic mikrobiologicky redukují bakteriemi v těle (například v tlustém střevě) na vysoce účinné 11 β— hydroxysteroidy, které vyvolávají požadovanou protizánětlivou odezvu.

Výhodnými sloučeninami obecného vzorce Ic jsou ty, které jsou prekurzory výhodných sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina. Specielně výhodnou skupinu sloučenin obecného vzorce Ic tvoří ty sloučeniny, kde X a R] mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách kortizonu (to je kde R₃, R4 a R₅ jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nasycená), prednisonu (to je kde R₃, R4 a R5 jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nenasycená), nebo jejich 6a- a/nebo 9a-fluorovaných analogů, včetně 16a-methyl-a Ιόβ-m ethyl sloučenin, jako jsou betamethason a dexamethason, zejména když R] je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina. Obzvláště výhodnými jsou deriváty, kde X je atom kyslíku.

Výsledky různých studií účinnosti reprezentativních sloučenin podle vynálezu, které jsou detailně diskutovány níže, jasně ukazují silnou protizánětlivou účinnost a minimální systemickou účinnost/toxicitu sloučenin obecného vzorce I. Z hlediska požadovaného terapeutického indexu, to je oddělení lokální a systemické účinnosti, lze sloučeniny podle vynálezu používat pro ošetřování topických nebo jiných lokalizovaných zánětlivých stavů, aniž by docházelo k vážným systemickým vedlejším účinkům, které jsou charakteristicky vykazovány známými přírodními a syntetickými glukokortikosteroidy, jako je kortizon, hydrokortizon, hydrokortizon-17abutyrát, betamethason-17-valerát, triamcinolon, betamethason-dipropionát a pod.. Studie vazby na receptor, také diskutované níže, ukazují, že sloučeniny podle vynálezu mají vynikající vlastnosti vazby na receptor. Dále testování vasokonstrikce u lidí, také popsané níže, ukazuje, že tyto sloučeniny jsou silné a dlouhopůsobící. Další testy ukazují, že sloučeniny obecného vzorce I vykazují také požadovanou úroveň stability.

Aniž by bylo třeba vázat se na určitou teorii, předpokládá se, že výhodné vlastnosti sloučenin podle vynálezu jsou spojeny se způsobem, jakým se metabolizují. Navzdory bráněné povaze I7a-dichioracetoxyskupiny bylo překvapivě zjištěno in vivo a v testech krve, že 17a-skupina se přednostně a rychle hydrolyzuje, čímž se získá alkylester 17a-hydroxy-17[3-karboxylové kyseliny, který se potom hydrolyzuje za vzniku netoxické kortienové kyseliny nebo jejího analogu. To je v protikladu k metabolizmu jednoduchých alkylesterů 17a-alkanoyloxy-17Pkarboxylové kyseliny, kde probíhá nejdříve hydrolýza Πβ-skupiny, čímž vznikne 17a-alkanoyloxy-17[3-karboxylová kyselina, která se může podrobit intramolekulámímu přenosu skupiny acylové části do 17[3-polohy, čímž vznikne reaktivní smíšený anhydrid podle schématu:

Test ušního edému

Při ošetřování skupin myší se vybraná množství testované sloučeniny rozpustí v acetonu obsahujícím 5 % krotonového oleje a potom se aplikuje každé myši 50 mikrolitrů tohoto roztoku na vnitřní povrch pravého ucha. Kontrolní skupina myší se stejně ošetří pouze vehikulem, to je 5% krotonovým olejem v acetonu. Šest hodin po aplikaci krotonového oleje se měří tloušťka každého ucha. Výsledky testů reprezentativní sloučeniny podle vynálezu, to je methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ll|3-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylátu,

-11 CZ 292860 B6 ukazují inhibici otékání z 37,4 % a z 92,1 % při dávkách 10 pg/ml a 100 pg/ml. Tyto výsledky se signifikantně odlišují od kontrolních hodnot, p<0,001 a prokazují, že reprezentativní sloučenina podle vynálezu má silnou lokální protizánětlivou účinnost.

Test vážení kůže

Samci krys Sprague-Dawley o hmotnosti asi 210 g se lehce anestetizují etherem, oholí se a označí se na třech místech každého boku intradermální injekcí modrého inkoustu. Plochy na každém pravém boku slouží jako neošetřené kontroly, zatímco plochy na každém levém boku se topicky ošetří 0,1% roztoky vybrané testované sloučeniny v Ν,Ν-dimethylformamidu (DMF). Kontrolní zvířata byla ošetřována denně topickou aplikací samotného vehikula (DMF). Rozpouštědlo a roztoky testované sloučeniny (10 μΐ) se aplikují jednou za den po 10 po sobě následujících dnů, v případě nutnosti za opětovného oholení. Jedenáctý den se zvířata zabijí, jejich kůže se odstraní a z každé ošetřované plochy se vyjmou kotoučky o průměru 16 mm. Kotoučky se opatrně zbaví podkožního tuku a svaloviny a potom se vysuší na filtračním papíru a zváží se. Výsledky jsou shrnuty v tabulce I níže. Atrofíe kůže je známým vedlejším účinkem spojeným s topickou aplikací protizánětlivých steroidů. Výsledky ukazují, že reprezentativní sloučenina, i když je ve skutečnosti více účinná než hydrokortizon-17-butyrát, působí méně kožní atrofíe.

Tabulka I

Účinek na hmotnost kůže po 10 dnech topického ošetřování krys

ošetření	denní dávka % pg	počet zvířat	hmotn. přírůstek (g)	brzlík hmotn. (g)	hmotnost vlhké kůže (mg)
neošetř.	úbytek %a)	ošetř.	úbytek %
kontrola	DMF	6	46,8±2,6	480±20	83,7±7,0		99,3±2,0
slouč. 1	0,1	30	4	40,8±4,l	481±32	74,3±4,9	11,2	87,8±1,7**	11,6
slouč. 2	0,1	30	3	45,7±10,6	540±61	72,0±4,7	14	86,3±1,5***	13,1
slouč. 3	0,1	30	5	24,2±2,3***	190±14***	67,6±6,2	19,2	78,2±2,3***	21,2

(střed±S.E.) slouč. 1 = methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l lp-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-l 7fJ-karboxylát slouč. 2 = hydrokortizon-17-butyrát slouč. 3 = clobetasol-17-propionát

a) hodnoty vyjádřeny jako procento úbytku kontroly signifikantní rozdíly od kontrolní skupiny: * = p<0,05, ** = <0,01, *** = <0,001.

Testy tvorby granulomu

Testované sloučenina se rozpustí v acetonu a alikvotní podíly s odlišujícími se koncentracemi se injikují do peletek z bavlny. Peletky se vysuší a potom se každé z testovaných krys implantuje jedna peletka pod kůži. Po šesti dnech se zvířata zabijí a zrnitá tkáň (granulom), která se vytvoří v implantované peletce a kolem ní, se vyjme, vysuší se a zváží se. Kromě toho se vyjme brzlík a nadledvinky a zváží se. Schopnost sloučeniny inhibovat tvorbu granulomu při tomto testu je přímou indikací lokální protizánětlivé účinnosti, takže čím je nižší hmotnost zrnité tkáně, tím je lepší protizánětlivá účinnost. Na druhé straně signifikantní snížení hmotnosti brzlíku je znakem signifikantní systemické účinnosti, naopak jestliže testovaná sloučenina nesnižuje signifikantně hmotnost brzlíku ve srovnání s kontrolou, je to indikací, že neexistují (nebo existují jen velmi minimální) systemické vedlejší účinky.

-12CZ 292860 B6

Při tomto testu vykazuje reprezentativní sloučenina podle vynálezu, jmenovitě methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-11 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7P-karboxylát, signifikantní lokální protizánětlivou účinnost při relativně mnohem nižším systemickém účinku.

Z výsledků získaných ve výše popsaném testu se vypočítají hodnoty ED₅₀ a relativní účinnosti reprezentativní sloučeniny podle vynálezu a steroidů podle známého stavu techniky a tyto hodnoty jsou uvedeny v tabulce II níže. Jednomu ze steroidů podle známého stavu techniky, jmenovitě betamethason-valerátu, byla přisouzena hodnota účinnosti 100 při ED₅o a účinnosti ío ostatních sloučenin byly vyjádřeny relativně k této hodnotě. Hodnoty ED₅₀ jsou dávky nutné pro dosažení 50% snížení hmotnosti zrnité tkáně.

Test inhibice brzlíku

Bylo provedeno několik dalších studií pro stanovení účinků vybrané sloučeniny podle vynálezu a steroidů podle známého stavu techniky na hmotnost brzlíku u krys po systemické aplikaci léčiva. V každé z těchto studií se použijí samci krys Sprague-Dawley. Testované sloučeniny se suspendují v 0,5% CMC (karboxymethylcelulóza) a injikují se podkožně jednou denně po tři dny. Pátý den (48 hodin po posledním ošetření) se zvířata zabijí a zjistí se hmotnost brzlíku.

24 hodin po posledním ošetření se zjistí přírůstek tělesné hmotnosti. Z výsledků testu se vypočítají hodnoty TED₄₀ (thymolytické účinné dávky, to je dávky nutné pro dosažení 40% inhibice hmotnosti brzlíku) a relativní účinnosti reprezentativní sloučeniny podle vynálezu a srovnávacích steroidů. V tabulce II níže byla relativní účinnost pro srovnávací steroid betamethason-17-valerát při dávce TED₄₀ přisouzena hodnota 100 a účinnosti ostatních sloučenin 25 byly vyjádřeny relativně k této hodnotě. Je zřejmé, že čím vyšší je inhibice účinnosti brzlíku při dané dávce, tím je sloučenina více toxická.

Hodnoty ED₅₀ vypočtené pro test lokálního granulomu peletky z bavlny a hodnoty TED₄₀ vypočtené na podkladě testu inhibice brzlíku, jak bylo popsáno výše, se použijí pro stanovení 30 relativní účinnosti a terapeutického indexu pro reprezentativní sloučeniny podle vynálezu ve srovnání se steroidy známými ze stavu techniky. Viz tabulka II níže, která jasně ukazuje silnou protizánětlivou účinnost a minimální systemickou toxicitu reprezentativní sloučeniny podle vynálezu.

Tabulka II

Srovnání lokálního účinku a systemických vedlejších účinků

testovaná sloučenina	granulom relativní účinnost při ED50 hladina (a)	thymolysa relativní účinnost při ED4o hladina (b)	terapeutický index (a/b)
methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor- 11 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 73-karboxylát	1 107	156	7,1
hydrokortizon-17-butyrát	70	57	1,23
clobetisol-17-propionát	2965	1927	1,54
betamethason-valerát	100	100	1

Další reprezentativní sloučeniny podle vynálezu byly testovány v různých testech stability a studiích vazby na receptory, jakož i v testech vasokonstrikce u lidí, což je detailně popsáno níže.

-13CZ 292860 B6

Studie stability

Analytická metoda

Pro kvantitativní stanovení následujících sloučenin podle vynálezu byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC):

testovaná sloučenina	chemický název
A	methyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17p-karboxylát
B	ethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17p-karboxylát
C	izopropyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxy lát
D	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-androsta-l,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxy lát

Toto jsou výhodné sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce la, který byl již dříve v popisu uveden.

Whatman C-18 kolona (4,6 mm x 108 mm) se připojí na Spectra Physics HPLC systém sestávající zSP 8810 izokratické pumpy, injektoru Rheodyne 7125 (20 μΐ injekční objem), SP 8450 UV/VIS detektoru s proměnlivou vlnovou délkou (230 nm) a SP 4290 intergátoru. Systém pracuje při teplotě místnosti. Jako mobilní fáze se použije směs acetonitrilu, kyseliny octové a vody (60:0,1:40). Při průtoku 1,0 ml/min jsou retenční časy pro testované sloučeniny 4,74 minut pro sloučeninu A, 5,84 minut pro sloučeniny B, 6,93 minut pro sloučeninu C a 5,72 minut pro sloučeninu D.

Pro stanovení rychlostí úbytku sloučenin byly použity plochy a výšky píků HPLC jako míra koncentrace testovaných sloučenin a vynesené proti času. Stabilita se stanoví měřením rychlostní konstanty pseudo-prvního řádu (kob_S v min’) nebo poločasu (t_t/2 v min) úbytku testované sloučeniny v pufru. Konstanta kob_s se stanoví ze sklonu log křivky úbytku [ko_bs = sklon x (-2,303)] a ti/2 testované sloučeniny se vypočte z rovnice ti,₂ = 0,693/kob_S.

Stabilita v pufrech

Stability testovaných sloučenin A, B, C a D byly testovány v pufrech při rozmezí pH 4,0 až 9,0. 0,1 ml podíl každé sloučeniny při koncentraci 1 mM se smísí s 10 ml fosfátového pufru (připraveného smísením 0,05 M NaH₂PO4 a 0,05 M Na₂HPO4 s 0,05 M NaCl), čímž se získá konečná koncentrace 0,01 M. Směsi se inkubují při teplotě 37 °C, odeberou se vzorky a injikují se do HPLC systému v příslušných časových intervalech. Profily pH každé testované sloučeniny jsou uvedeny v tabulce III níže.

Tabulka III

Stabilita, poločas (ti/₂, min) testovaných sloučenin ve vodném roztoku fosfátového pufru (pH 7,40) při teplotě 37 °C

sloučenina vzorce la	poločas (minuty) při uvedených pH
č.	Rn	4,5	6,56	7,4	8,08	9
A	CHj	*	1 146	202	21	4,25
B	CH2CH3	*	1 004	305	52	8,67
C	CH(CH3)2	*	680	974	125	16,2
D	ch2ci	841	49,3	13,9	2,9	1,07

-14CZ 292860 B6 * žádná degradace nepozorována ve dvou dnech

Stabilita v biologickém prostředí

0,2 ml alikvotní podíly zásobního roztoku (1 mM) každé testované sloučeniny A, B, C a D se přidají ke 2 ml každého biologického prostředí (plně heparinizovaná krysí krev, 20% homogenát z krysích jater a 6 objemy zředěný homogenát z plic v izotonickém pufru pH 7,40 vzniklého smísením 0,05 M Na₂HPO₄ a 0,05 M NaH₂PO₄ s 0,05 M NaCl), které se udržuje při teplotě 37 °C ve vodní lázni, čímž se získá konečná koncentrace 0,1 mM v každém biologickém prostředí. V příslušných časových intervalech se po dobu 2 hodin (při 0, 3, 5, 10, 20, 40, 60, 90 a 120 minutách) odebírají vzorky 0,1 ml a smísí se s 0,2 ml acetonitrilu obsahujícího 5 % DMSO. Každá směs se centrifuguje a supematant se injikuje do HPLC. Stability (t]/₂, poločasy) testovaných sloučenin v krysí krvi, homogenátu z jater a homogenátu z plic jsou uvedeny v tabulce IV níže.

Tabulka IV

Stabilita, poločas (t^, min) testovaných sloučenin ve vodném roztoku fosfátového pufru (pH 7,40) a různých biologických prostředích při teplotě 37 °C

sloučenina vzorce Ia	poločas (minuty)
č.	Rn	pufr	krev	játra	plíce
A	ch3	201,9	26,9	3,7	43,1
B	ch2ch3	304,8	77,4	18,8	137,2
C	CH(CH3)2	657,6	106,9	29,3	170,4
D	ch2ci	13,9	11,6	7,6	52,4

Stabilita v cytosolu

Pro stanovení, že sloučeniny podle vynálezu mohou být stabilní během inkubační periody, se testované sloučeniny A, B, C a D zkoušejí na jejich stabilitu při inkubačních podmínkách pro studie vazby na receptor, což je teplota místnosti a doba 2 hodin. Zmrazený cytosol, který byl připraven pro studie vazby na receptor, se rozmrazí ve vodní lázni a zředí se 1 dílem inkubačního pufru (10 mM Tris/HCl, 10 mM molybdát sodný a 2 mM 1,4-dithiothreitol) obsahujícího 15 mM koncentraci enzymového inhibitoru, diizopropylfluorofosfátu. Podíly (560 μΐ) zředěného cytosolu se přidají do centrifugačních zkumavek obsahujících 80 μΐ podíly slepého inkubačního pufru místo objemu značkovací sloučeniny ([³H]triamcinolon-acetonid), která má být použita při studiu vazby na receptor (RBS), 80 μΐ roztoku Δ'-kortienové kyseliny (0,1 mM) v pufru (konečná koncentrace Δ-kortienové kyseliny vinkubačním prostředí je lOnM) a 80 μΐ 100 000 nM koncentrací testovaných sloučenin v ethanolu, čímž se získá konečná koncentrace 10 OOOnM. Směs se udržuje při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. V příslušných časových intervalech (0, 05, 1, 1,5, 2 hodiny) se odebírají vzorky 0,1 ml a smísí se s 0,2 ml acetonitrilu obsahujícího 5 % DMSO. Každá směs se centrifuguje a supematant se injikuje do HPLC. Stability (% zůstávající po inkubaci) testovaných sloučenin v cytosolu za různých podmínek jsou uvedeny v tabulce V.

-15CZ 292860 B6

Tabulka V

Stabilita testovaných sloučenin v inkubačním prostředí

sloučenina vzorce Ia	% zbývající po 2 hodinách inkubace
č.	Ru
A	ch3	75,1
B	ch2ch3	100
C	CH(CH3)2	100
D	ch2ci	70,6

Další studie stability a metabolismu

Analytická metoda

Pro stanovení následujících sloučenin byla vyvinuta metoda vysoce účinné kapalinové chromatografíe (HPLC) pracující za teploty místnosti:

(VII)

slouč. vz. VII	R13	r23	r33	R43
B	ch2ch3	cochci2	H	H
F	ch2ch3	H	H	H
H	H	COCHC12	H	H
I	ch3	cochci2	ch3	F
J	ch2ch3	COCHClz	ch3	F
L	H	COCHC12	ch3	F
M	CH2CH3	H	ch3	F
N	H	COCHC12	ch3	F
O	ch3	H	ch3	F

Waters NOVA-PAK fenylová kolona se připojí na Spectra Physics HPLC systém sestávající z SP 8810 izokratické pumpy, injektoru Rheodyne 7125 (injekční objem 20 μΐ), SP 8450 UV/VIS detektoru s proměnlivou vlnovou délkou (pracujícího při 254 nm) a SP 4270 intergátoru. Mobilní fáze sestává z acetonitrilu, vody a kyseliny octové v objemovém poměru 40:60:0,1 a pracuje při průtokové rychlosti 1 ml/minutu. Retenční časy sloučeniny B podle vynálezu a jejích metabolitů F a H jsou 6,32, 2,25 a 1,66 minuty. Retenční časy sloučeniny J podle vynálezu a jejích metabolitů L a M jsou 8,64, 2,70 a 2,45 minuty. Retenční časy sloučeniny I podle vynálezu a jejích metabolitů N a O jsou 5,84, 2,70 a 1,81 minuty. Retenční čas kortienové kyseliny je 1,00 minuty.

-16CZ 292860 B6

Stabilita v lidském nebo krysím plazmatu

Použijí se čerstvě odebrané lidské nebo krysí plazma. K předehřátému plazmatu (37 °C) se přidá alikvotní podíl lOmM roztoku testované sloučeniny vethanolu, čímž se získá konečná koncentrace 100 mM. V příslušných časových intervalech se odebírají vzorky (0,1 ml) a smísí se s 0,2 ml 5% roztoku dimethylsulfoxidu a acetonitrilu. Směsi se centrifugují a supematant se analyzuje pomocí HPLC. Rychlostní konstanta pseudo-prvního řádu úbytku sloučeniny v biologickém prostředí se stanoví lineární regresní analýzou z grafické závislosti log plochy píku a výšky píku oproti času.

Stabilita se hodnotí rychlostní konstantou pseudo-prvního řádu (k, h^_1) a poločasem (ti/2, h) úbytku sloučeniny v prostředí. Výsledky jsou shrnuty v tabulkách VI a VII níže.

Tabulka VI

Stabilita sloučenin podle vynálezu v lidském plazmatu při teplotě 37 °C

testovaná slouč.	k, h '	tl/2, h	r
B	0,138	5,03	0,970
I	0,0633	10,94	0,994
J	0,0173	40,01	0,989

Tabulka Vil

Stabilita sloučenin podle vynálezu v krysím plazmatu při teplotě 37 °C

testovaná slouč.	k, h'1	tl/2, h	r
B	0,136	5,08	0,999
I	0,0702	9,88	0,999
J	0,017	40,73	0,996

Kinetická data generovaná následujícím úbytkem sloučenin podle vynálezu pomocí HPLC dokazují tvorbu všech očekávaných metabolitů, to je následujících sloučenin obecného vzorce VII, ve kterých R₎₃ je Η (H, L, N) a sloučenin, ve kterých R₂₃ je H (F, M, O), jakož i elementárních metabolitů, ve kterých R¹³ je H a R₂₃ je H (kortienová kyselina a odpovídající 9a-fluor-l 6a-methylkyselina).

Studie vazby na receptor

Materiály

Neznačené chemikálie jsou od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Radioaktivně značenou sloučeninu, to je l,2,4-[³H]-triamcinolon-acetonid (45 Ci/mmol) lze koupit od firmy New England Nuclear (Boston, MA). Rozpouštědla pro mobilní fáze jsou HPLC kvality, která je ověřena ACS.

Zařízení

Pro studie vazby na receptor se použijí následující zařízení: homogenizér T line Laboratory (Talboys Enginnering Corp., Emerson, NJ), homogenizér Virtis 45 (The Virtis Co., Gardiner, NY), ultracentrifuga Beckman L8-70 M s rotorem T-170 (Palo Alto, CA), centrifuga Fischer

-17CZ 292860 B6

Micro, model 235 C (Fischer Scientifíc Co., Fairlawn, NJ), počítač pro kapalné vzorky Beckman LS 500 TD (Fullerton, CA).

Příprava cytosolu

Použijí se samci krys Sprague-Dawley, každá o hmotnosti 150 až 200 g, 6 dnů po odnětí nadledvinek. Krysy se usmrtí dekapitací. Ihned po resekci plic se tkáň zmrazí v ledu. Cytosol se připraví za použití mírně modifikované již dříve popsané metody (Dahlberg, 1984). Po přidání 6 objemů ledově studeného inkubačního pufru (10 mM Tris/HCl, 10 mM molybdát sodný a 2 mM 1,4-dithiothreitol) se tkáň homogenizuje v homogenizéru Virtis 45 při plné rychlosti, po 4 desetisekundových periodách s desetisekundovým chlazením mezi každým stupněm. Homogenát se centrifuguje při 35 000 g po dobu 1 hodiny při teplotě 4 °C v ultracentrifuze Beckman L8-70M vybavené rotorem TI70. Podíly (5 ml) cytosolu se zmrazí v kapalném dusíku a skladují se při teplotě -80 °C.

Studie vazby

V těchto studiích se zkoumají následující sloučeniny A, B, C a D podle vynálezu a jejich předpokládané metabolity E, F, G a H:

(VIII)

slouč. vzorce VIII	R12	r22
A	ch3	cochci2
B	ch2ch3	cochci2
C	CH(CH3)2	cochci2
D	ch2ci	cochci2
E	ch3	H
F	ch2ch3	H
G	CH(CH3)2	H
H	H	COCHC12

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu (A, B, C a D), jejich metabolity (E, F, G a H), dexamethason a triamcinolon-acetonid se každá rozpustí v absolutním ethanolu, čímž se získají 1 mM koncentrace a zředí se za vzniku různých koncentrací v rozmezí 300 000 nM až 10 nM pomocí 40% ethanolu ve vodě. Cytosol se rozmrazí ve vodní lázni a zředí se 1 dílem inkubačního pufru obsahujícího 15 mM koncentraci diizopropylfluorofosfátu. Podíly (140 μΐ) zředěného cytosolu se přidají do centrifugačních zkumavek obsahujících 20 μΐ podíly zásobního roztoku [³H]triamcinolon-acetonidu v inkubačním pufru (konečná koncentrace značkovací sloučeniny v každém inkubačním prostředí je 10 nM), 20 μΐ roztoku Á’-kortienové kyseliny (0,1 mM) v pufru (konečná koncentrace Δ'-kortienové kyseliny v inkubačním prostředí je 10 nM) a 20 μΐ různých koncentrací zkoušených látek (sloučeniny podle vynálezu A, B, C a D, jejich metabolity E, F, G a H, dexamethason a triamcinolon-acetonid) v ethanolu. Po 2 hodinách inkubační periody při teplotě místnosti (24 °C) se odstraní nevázané steroidy přidáním 2% suspenze

-18CZ 292860 B6 aktivovaného aktivního uhlí v inkubačním pufru (400 μΐ). Směs se inkubuje po dobu 5 minut při teplotě místnosti a potom se centrifuguje při 10 000 g po dobu 3 minut v mikrocentrifuze. Radioaktivita (cpm) v supematantu (400 μΐ) se stanoví kapalinovým scintilačním počítačem. Nespecifická vazba se stanoví v přítomnosti neznačeného dexamethasonu (10“⁶) a ve všech případech je méně než 10 % celkové vazby.

Hodnota IC₅₀ zkoumaného steroidu (koncentrace sloučeniny nutná k vytěsnění 50 % vazby [³H]triamcinolon-acetonidu) a faktor sklonu vzniklé křivky se stanoví metodou nelineárního prokládání bodů regresní křivkou za použití NON-LIN modulu verze Macintosh SYSTAT. Data odpovídají následující logistické funkci:

B = T - T x C^N/(C^N + IC₅₀ ⁿ) + NS, kde B = CPM v přítomnosti zkoumané látky, T - CPM bez přítomnosti zkoumané látky, C = koncentrace zkoumané látky, N = faktor sklonu Hill a NS = cpm za nespecifických podmínek vazby. Vzniklá hodnota IC₅₀ se převede na relativní vazebnou afinitu (RBA) za použití dexamethasonu (RBA = 100) jako srovnávacího standardu:

RBA(X) = IC₅₀ (dexamethason)/IC₅₀(X) x 100

Vazebné afinity na receptor (RBA) reprezentativních sloučenin podle vynálezu A, B, C a D a jejich předpokládaných metabolitů, E, F, G a H pro krysí plicní glukokortikoidní receptor jsou uvedeny v tabulce VIII níže.

Tabulka VIII

Relativní vazebné afinity (RBA) testovaných sloučenin

testovaná sloučenina	IC5o	RBAa
A	49,45	165
B	40,06	204
C	69,77	117
D	11,93	684
E	>2000	<1
F	>2000	<1
G	>2000	<1
H	>2000	<2
dexamethason	81,61	100
triamcinolon-acetonid	13	628

* relativní vazebná afinita vzhledem k dexametasonu (RBA = 100)

Při tomto testovacím postupu má další reprezentativní sloučenina podle vynálezu, methyl-17adichloracetoxy-9a-fluor-l ip-hydroxy-16a-methylandrosta-I,4—dien-3-on-17B~karboxylát, RBA 495. Loteprednol-etabonát má RBA 420. Naproti tomu bylo zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce VI, kde R₁₂ je ethylová skupina a R₂ je nižší alkanoylová skupina, to je dobře známé alkyl-17a-alkanoyloxy-17p-karboxylátové analogy sloučenin podle vynálezu mají hodnoty RBA menší než 1.

-19CZ 292860 B6

Účinek Δ’-kortienové kyseliny na vazebné afinity na receptor

Pro reprezentativní sloučeninu B podle vynálezu se zkoumá vazebná afinita na receptor s Δ’-kortienovou kyselinou a bez ní v inkubačním roztoku, čímž se sleduje účinek Δ’-kortienové kyseliny na vazebnou afinitu na receptor. Výsledky jsou uvedeny v tabulce IX níže.

Tabulka IX

Srovnání vazebných afinit na receptor (RBA) ve studii vazebné afinity na receptor sloučeniny B „s“ a „bez“ Δ’-kortienové kyseliny

podmínky	vazebná afinita na receptor
s Δ’-kortienovou kyselinou	204
bez Δ’-kortienové kyseliny	181

Loteprednol-etabonát má RBA bez Δ'-kortienové kyseliny 152, zatímco s Δ’-kortienovou kyselinou 420. Na rozdíl od loteprednol-etabonátu sloučeniny podle vynálezu se neváží na transkortin. Následkem toho sloučeniny podle vynálezu jsou mnohem aktivnější k požadované enzymatické deaktivaci, což dále zvyšuje jejich vlastnost nepřítomných nežádoucích vedlejších účinků.

Další studie vazby na receptor

Další studie vyhodnocují relativní vazebné afinity sloučenin podle vynálezu, dalších výše uvedených sloučenin obecného vzorce VII a známých protizánětlivých steroidů za použití výše popsaných studií vazby na receptor. Ze známých steroidů byly testovány dexamethason, triamcinolon-acetonid, fluorometholon a betamethason-17-valerát. Ze sloučenin podle vynálezu byly testovány výše uvedené sloučeniny A, B, C, D, I a J. Pro účely srovnání byla také testována následující sloučenina obecného vzorce VII:

slouč. vzorce VII	Rb	r23	R33	R43
P	ch2ch3	coch2ch3	H	H

Výsledky jsou uvedeny v tabulce X níže.

Tabulka X

Relativní vazebné afinity (RBA) testovaných sloučenin

testovaná sloučenina	RBA	% zbylá po inkubaci
dexamethason	100
triamcinolonacetonid	630
fluorometholon	136±5*
betamethason-17-valer át	1742±130*
A	165	75%
B	222±16*	75%
C	117	>90 %
D	684	70%
I	1745±185*	>90 %
J	687±49*	>90 %
P	38	>90 %

* průměr ± SE 3 až 5 výsledků

-20CZ 292860 B6

Test vasokonstrikce u lidí

Testované sloučeniny (10 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1) a 50 μΐ směsi se aplikuje na kruhovou náplast, 8 mm v průměru. Po odpaření ethanolu se náplasti aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a pokryjí se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin. Intenzita vasokonstrikce se hodnotí 1,8, 17 a 24 hodin po odstranění náplasti.

Odstupňovaná škála vasokonstrikční účinnosti je následující: 0 je normální kůže, 1 je mírná bledost nezřetelného obrysu, 2 je bledost s alespoň dvěma obrysovými jádry, 3 je stejnoměrná bledost s jasným obrysem v aplikovaných místech, 4 je velmi intenzivní bledost.

Tabulka XI

Vasokonstrikční účinnost dexamethasonu, loteprednol-etabonátu a různých sloučenin obecného vzorce la

doba (hodiny)	1	8	17	24
dexamethason- vzorek 1	0	1	1	1
dexamethason- vzorek 2	0	1	1	1
loteprednol-etabonát - vzorek 1	2	3	2	2
loteprednol-etabonát - vzorek 2	2	2	2	1
A	2	4	4	4
B - vzorek 1	3	4	4	4
B - vzorek 2	3	4	4	4
C	3	4	3	2
D - vzorek 1	3	4	3	2
D - vzorek 2	3	4	3	2

Protože stupeň bledosti závisí jak na vlastní síle testované sloučeniny tak na množství sloučeniny působící na místech účinku, lze učinit závěr, že reprezentativní sloučeniny podle vynálezu jsou silnými a dlouho působícími topickými protizánětlivými činidly s dobrým pronikáním.

Další testování vasokonstrikce u lidí

Metoda 1

Testované sloučeniny (0,1 až 10 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1), čímž se získá čirá směs. Tyto směsi se v 50 μΐ množstvích aplikují na kulaté náplasti (8 mm v průměru). Po odpaření ethanolu se náplasti aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a pokryjí se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin. Intenzita vasokonstrikce (škála 0 až 4) se vyhodnocuje v různých časových intervalech po odstranění náplasti. Odstupňovaná škála je následující: 0 je normální kůže, 1 je mírná bledost nezřetelného obrysu, 2 je bledost s alespoň dvěma obrysovými jádry, 3 je stejnoměrná bledost s jasným obrysem v aplikovaných místech, 4 je velmi intenzivní bledost. Testy kůže (2 až 4 testy pro každou sloučeninu) se provádějí na tomtéž člověku. Výsledky jsou shrnuty v tabulkách XII a XIII níže.

Metoda 2

Testované sloučeniny (0,1 až 5 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1). Směsi v 20 μΐ množstvích se aplikují na kulaté náplasti (o průměru asi 6,4 mm). Náplasti se aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a překryjí se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin. Vasokonstrikční účinnost se vyhodnocuje objevením se bledosti v různých časových

-21 CZ 292860 B6 bodech po odstranění náplastí. Testy se provádějí na témže člověku a výsledky se získají ze 2 až 4 pozorování. Výsledky jsou shrnuty v tabulce XIV níže.

Pro účely srovnání se jako referenční sloučeniny použijí dexamethason, betamethason-17-valerát a loteprednol-etabonát. Testovány byly také následující sloučeniny obecného vzorce VII

slouč. vzorce VII	Rn	R23	R33	R43
A	ch3	cochci2	H	H
B	ch2ch3	cochci2	H	H
C	CH(CH3)2	cochci2	H	H
D	ch2ci	cochci2	H	H
I	ch3	COCHClí	ch3	F
J	ch2ch3	COCHC12	ch3	F
K	ch2ci	cochci2	ch3	F
P	ch2ch3	coch2ch3	H	H

Sloučeniny A, B, C a D jsou sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce la. Sloučeniny I, J a K jsou sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce lb. Sloučenina P je 17a-nehalogenovaná alkanoyloxysloučenina vybraná pro srovnávací účely.

Tabulka XII

Vasokonstrikční účinnost po 3 a 20 hodinách (metoda 1) hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
10	5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
dexamethason	1	—	-	-	—	-	-
betamethason-17-valerát	4	3	3	2	1	1	0
loteprednol-etabonát	4	3	3	2	1	0	0
A	4	-	—	-	-	-	—
B	4	3	3	2	1	1	0
C	4	—	—	—	—	-	—
D	4		—	-	-	-	-
I	4	4	4	3	2	2	1
J	4	3	3	2	2	1	0
K	—	—	—	—	—	-	—
P	-	3	2	1	0	0	0

-22CZ 292860 B6 hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
10	5	1	0,5	0,1	0.05	0,01
dexamethason	1	—	—	-	-	-	-
betamethason-17-valerát	2	1	1	1	1	1	0
loteprednol-etabonát	2	I	0	0	0	0	0
A	2	-	-	-	-	-	-
B	2	1	1	1	1	0	0
C	1	-	-	-	-	-	-
D	1	-	-	-	-	-	-
I	-	2	1	1	1	1	0
J	2	1	1	1	0	0	0
K	-	-	-	-	-	-	-
P	-	1	1	0	0	0	0

Tabulka XIII

Vasokonstrikční účinnost po 24 hodinách s 1 hodinovou reoklusí při 20 až 21 hodinách (metoda 1) hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
0,5	0,1	0,05	0,01
betamethason-17-valerát	2	2	1	1
B	2	2	1	1
I	3	3	2	1
J	2	2	1	1
P	2	1	0	0

Tabulka XIV

Vasokonstrikční účinnost stanovená metodou 2 v různých časových bodech hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
I	+	+	+	+	-	-
J	+	+	-	-	-	-
K	+	+	-	-	-	-
betamethason-17-valeát	+	+	-	-	-	-

hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
5	0	0,5	0,1	0,05	0,01
I	+	+	+	+	+	-
J	+	+	+	-	-	-
K	+	+	+	+	-	-
betamethason-17-valeát	+	+	+	-	-	-

-23CZ 292860 B6

Tabulka XIV - pokračování

Vasokonstrikční účinnost stanovená metodou 2 v různých časových bodech až 22 hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
I	+	+	+	+	—	—
J	+	4-	+	—	—	—
K	+	+	+	—	—	—
betamethason-17-valeát	+	+	+	-	-	-

hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
I	+	+	+	+	—	—
J	+	+	+	—	—	—
K	+	+	+	-	—	—
betamethason-17-valeát	+	+	-	-	-	-

V tabulce XIV výše znamená, že byl získán negativní výsledek. V ostatních tabulkách znamená, že nebylo testováno.

Testování vasokonstrikce u lidí se používá jako index perkutánní absorpce, účinnosti a biologické dostupnosti glukokortikoidů. Srovnávají se sloučeniny podle vynálezu, strukturně příbuzné sloučeniny a známá protizánětlivá činidla. Výsledky uvedené v tabulce XII ukazují, že v době 3 hodiny a 20 hodin po odstranění náplasti vykazují sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu vasokonstrikční účinnost stejnou nebo vyšší než betamethason-17-valerát. Jednohodinová reokluse v době 20 hodin po odstranění náplasti má za následek zřetelné znovuobjevení se bledosti na kůži. Opět, jak je uvedeno v tabulce XIII výše, reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu vykazují vasokonstrikční účinnost stejnou nebo vyšší než betamethason17-valerát.

V tabulce XIV výše jsou použity výsledky jednodušší metody posuzování vasokonstrikční účinnosti, při které jsou zaznamenávány pouze „pozitivní“ (bledost může být pozorována) nebo „negativní“ (bledost nelze detekovat) výsledky. Opět vykazují reprezentativní sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu stejnou nebo vyšší účinnost než betamethason-17-valerát.

V tabulkách XII, XIII a XIV je také ukázáno, že jestliže se charakteristická 17a-dichloracetoxyskupina ve sloučeninách obecného vzorce I nahradí 17a-propionyloxyskupinou, lokální protizánětlivá účinnost se značně sníží. Tyto tabulky také ukazují, že tyto 17a-dichloracetoxysloučeniny vykazují obecně větší účinnost, je-li 17|3-skupinou ethylester nebo methylester.

Sloučeniny obecného vzorce I lze mísit s vhodnými netoxickými farmaceuticky přijatelnými nosiči a připravit tak farmaceutické prostředky pro použití při ošetřování topického nebo jiného lokalizovaného zánětu. Z hlediska toho, že sloučeniny podle vynálezu nemají systemickou účinnost, se nepředpokládá jejich použití při ošetřování stavů, kdy je indikována systemická adrenokortikální terapie, to je adrenokortikální nedostatečnost. Jako příklady zánětlivých stavů, které lze ošetřovat farmaceutickými prostředky obsahujícími alespoň jednu sloučeninu podle vynálezu a jeden nebo více farmaceutických nosičů, lze uvést následující stavy: dermatologické choroby, jako jsou atopická dermatitida, akné, psoriasa nebo kontaktní dermatitida, alergické stavy, jako je bronchiální astma, oční a ušní choroby vyvolávající akutní nebo chronickou alergii a zánětlivé reakce (například oční zánětlivé stavy, jako jsou zánět očního víčka, zánět oční

-24CZ 292860 B6 spojivky, zánět episklery, zánět běliny, zánět rohovky, přední uveitida a sympatická oftaimie), respirační choroby, záněty v ústech, dásních a/nebo krku, jako jsou zánět dásní nebo ústní afta, záněty nosní sliznice, například způsobené alergiemi, záněty horních a dolních vnitřností, jako je vředový zánět tlustého střeva, záněty spojené s arthritidou a anorektální záněty, svědění a bolesti spojené s hemoroidy, zánětem konečníku, kryptitidou, fisurami, pooperační bolestí a svěděním řítě. Tyto prostředky lze také aplikovat lokálně jako profylaktická opatření proti zánětům a odmítání tkáně, které nastává ve spojení s transplantáty.

Obvykle se výběr nosiče nebo nosičů a dávkových forem mění podle zvláštnosti stavu, pro který se prostředek podává.

Jako příklady různých typů prostředků pro topické/lokální podávání lze uvést masti, vodičky, krémy, prášky, kapky (například oční, ušní nebo nosní kapky), spreje (například pro nos nebo krk), čípky, retenční klystýry, žvýkací nebo cucací tablety nebo pilulky (například pro ošetření aftových vředů) a aerosoly. Masti a krémy lze například formulovat na vodném nebo olejovém základu s přidáním vhodných zahušťovacích a/nebo gelovacích činidel a/nebo glykolů. Těmito základy mohou být například voda a/nebo olej, jako jsou parafínový olej nebo rostlinný olej, jako arašídový olej nebo ricinový olej, nebo glykolová rozpouštědla, jako je propylenglykol nebo 1,3-butandiol. Zahušťovacími činidly mohou být podle povahy základu měkký parafín, stearát hlinitý, cetosteaiylalkohol, polyethylenglykoly, tuk z vlny, hydrogenovaný lanolin a včelí vosk a/nebo glycerylmonostearát a/nebo neionogenní emulgačni činidla.

Rozpustnost steroidu v masti nebo krému může být zvýšena přidáním aromatického alkoholu, jako jsou benzylalkohol, fenylethylalkohol nebo fenoxyethylalkohol.

Vodičky mohou být formulovány na vodném nebo olejovém základu a obecně také obsahují jednu nebo více z následujících činidel, jmenovitě emulgačni činidla, dispergační činidla, suspendační činidla, zahušťovací činidla, rozpouštědla, barviva a parfémy. Prášky mohou být tvořeny pomocí jakéhokoliv vhodného práškového základu, například talku, laktosy nebo škrobu. Kapky mohou být formulovány na vodném základu, který také obsahuje jedno nebo více dispergačních činidel, suspendačních činidel nebo solubilizačních činidel atd.. Prostředky ve formě sprejů mohou být například formulovány jako aerosoly s použitím vhodných hnacích činidel, například dichlordifluormethanu nebo trichlorfluormethanu.

Rozprašovací nebo práškové přípravky lze připravovat pro orální inhalace pro ošetřování astmatu, jak je známo ze stavu techniky. Roztoky a suspenze lze připravovat pro orální nebo rektální podávání pro ošetřování zánětů vnitřností, například jak je detailněji popsáno v příkladech. Parenterální/injikovatelné přípravky lze připravovat pro přímé injekce do kloubů při ošetřování arthritidy podle známých metod aplikace parenterálních přípravků.

Podíl účinné látky v prostředcích podle vynálezu se mění s použitím určité sloučeniny, typu připravovaného přípravku a podle zvláštnosti stavu, pro který mají být podávány. Přípravky obvykle obsahují od asi 0,0001 do asi 5,0 % hmotnostních sloučeniny obecného vzorce I. Topické přípravky obvykle obsahují 0,0001 až 2,5 %, s výhodou 0,01 až 0,5 %, a aplikují se jednou denně nebo podle potřeby. Obecně lze také sloučeniny podle vynálezu inkorporovat do topických a jiných lokálních prostředků připravených v podstatě tak, jako jsou běžné dostupné známé glukokortikoidy, v přibližně stejných (nebo v případě nejúčinnějších sloučenin podle vynálezu v příslušně menších) dávkách ve srovnání se známými velmi účinnými látkami, jako jsou methylprednisolonacetát a beclomethasondipropionát nebo ve značně menších dávkách ve srovnání s méně účinnými známými látkami, jako je hydrokortizon.

Tak například inhalační přípravek vhodný pro ošetřování astmatu lze připravit postupy známými pro přípravu těchto farmaceutických přípravků jako aerosol s odměřovanými jednotkovými dávkami, který obsahuje reprezentativní sloučeninu podle vynálezu, jako je ethyl-17a-dichloracetoxy-11 [3-hydroxyandrosta-l,4—dien-3-on-17[3-karboxylát nebo methyl-17a-dichlor

-25CZ 292860 B6 acetoxy-9a-fluor-11 β-hydroxy-l 6a-methyl-androsta-l ,4-dien-3-on-l 7p-karboxylát. Tento aerosolový jednotkový přípravek může obsahovat mikrokrystalickou suspenzi výše uvedené sloučeniny ve vhodném hnacím činidle (například trichlorfluormethanu a dichlordifluormethanu) s olejovou kyselinou nebo s jiným vhodným dispergačním činidlem. Každá jednotka typicky obsahuje 1 až 10 mg výše uvedené účinné látky, přičemž se při každém použití uvolňuje přibližně 5 až 50 pg.

Dalším příkladem farmaceutického prostředku podle vynálezu je pěna vhodná pro ošetření různých zánětlivých anorektálních chorob, která se má aplikovat análně nebo perianálně a která obsahuje 0,05 až 0,1 % sloučeniny obecného vzorce I, jako je ethyl-17a-dichloracetoxy-l 1βhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7[3-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor1 ip-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát, a 1 % lokálního anestetika, jako je pramoxinhydrochlorid, v pěnovém základu, který přilne ke sliznici, jako je propylenglykol, ethoxylovaný stearylalkohol, polyoxyethylen-10-stearylether, cetylalkohol, methylparaben, propylparaben, triethanolamin, a vodu s inertními hnacími činidly.

Dalším farmaceutickým přípravkem podle vynálezu je roztok nebo suspenze vhodná pro použití jako retenční klystýr, jehož jednotková dávka obsahuje obvykle 20 až 40 mg sloučeniny podle vynálezu, jako je ethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-androsta-l ,4-dien-3-on-l 7p~-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l, 4-dien3-on-17β-karboxylát, spolu s chloridem sodným, polysorbátem 80 a od 28,35 g do 170 g vody (vodu lze přidat těsně před použitím). Suspenzi lze podávat jako retenční klystýr nebo kontinuální infuzi několikrát týdně při ošetřování vředové kolitidy.

Další farmaceutické přípravky podle vynálezu jsou blíže popsány v následujících příkladech.

Předpokládá se, že podle uvedeného popisu lze plně využít rozsah předloženého vynálezu, aniž by bylo třeba provádět další práce. Proto jsou následující příklady provedení konstruovány pouze jako ilustrativní a neomezují žádným způsobem ani popis ani přiložené nároky.

V příkladech syntézy jsou všechny nesteroidní chemikálie a rozpouštědla chemické kvality. Všechny teploty tání jsou stanoveny za použití Fischer-Johnsova zařízení pro měření teploty tání a jsou nekorigovány. Data 300 MHz ’Η-NMR se měří za použití spektrometrů Varian T-90, QE-300 nebo Varian Unity-300 a jsou uvedeny v částech na milion (ppm) 5, vzhledem ktetramethylsilanu. Elementární analýzy jsou prováděny zařízením Atlantic Microlab, lne., Atlanta, Georgia USA. Hmotnostní spektra se měří za použití zařízení Kratos MFC 500 a Fast Atom Bombardment (FAB). Chromatografie v tenké vrstvě se provádí za použití Měrek DC destiček s hliníkovým filmem potažených tloušťkou 0,2 mm silikagelu 60 obsahujícího fluorescenční (254) indikátor. Silikagel (velikost částic 32 až 63) lze získat od firmy Selecto Scientific.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

K roztoku prednisolonu (15 g, 0,04 mol) v tetrahydrofuranu (120 ml) a methanolu (30 ml) se při teplotě místnosti přidá teplý (přibližně 50 °C) roztok metaperjodátu sodného (25,7 g, 0,12 mol) ve vodě (100 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin, potom se zahustí za sníženého tlaku, čímž se odstraní tetrahydrofiiran a methanol. Pevná látka se rozmělní 50 ml vody, oddělí se filtrací, promyje se několikrát vodou a suší se za sníženého tlaku při teplotě 50 °C po dobu 3 hodin. Získá se produ kt, llβ,17α-dihydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina 1 (která může být také označena Δ’-kortienová kyselina), ve formě bílého prášku v přibližném výtěžku 94 % (13,5 g), o teplotě tání 231 až 232 °C. ’Η-NMR (DMSO-de) δ (ppm):

-26CZ 292860 B6

5,51 (s, 1, CH=CH), 1,41 (s, 3, 19-CH₃), 0,92 (s, 18-CH₃). Elementární analýza: vypočteno pro

C₂₀H₂₆O₅: 69,36 C, 7,51 H, nalezeno: 69,31 C, 7,56 H. Sloučenina má strukturní vzorec

OH

Příklad 2

Náhradou prednisolonu použitého v příkladu 1 za ekvivalentní množství jedné z níže uvedených výchozích sloučenin a provedením popsaného postupu se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
fluorokortizon	9a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxyandrost—4-en-3-on-17β-karboxylová kyselina, t.t. 250 až 253 °C
betamethason	9a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4-dien-3οη-Πβ-ΑβΛοχγΙονέ kyselina, t.t. 248 až 249 °C
dexamethason	9a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3οη-Πβ-ΑηΛοχγΙονέ kyselina, t.t. 275 až 278,5 °C
hydrokortizon	11 β, 17a-dihydroxynadrost-4-en-3-on-l 7β-4ί3τ1χ^1ονέ kysel ina, t.t. 231 až 234 °C (tj. kortienová kyselina)

Příklad 3

Náhradou prednisolonu použitého v příkladu 1 za ekvivalentní množství jedné z níže uvedených výchozích sloučenin a provedením popsaného postupu se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
kortizon	17a-hydroxyandrost-4~en-3,l 1-dion-17β^ηώοχγ1ονέ kyselina
chloroprednison	6a-chlor-l 7a-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3,11 -dion-17 β-karboxylová kyselina
flumethason	6a,9a-difluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6a-methyl-androsta-l ,4-diβη-3-οη-17β-4<3Λοχγ1ονέ kyselina
fluprednisolon	6a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxynadrosta-l ,4-dien-3-on-l 7p~karboxylová kyselina
meprednison	17a-hydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4-dien-3,l 1-dion-17βkarboxylová kyselina
methylprednisolon	11 β, 17a-dihydroxy-6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
paramethason	6a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3on-17[3-karboxylová kyselina
prednison	17a-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7 β-karboxylová kyselina

-27CZ 292860 B6

Tabulka - pokračování

výchozí sloučenina	produkt
triamcinolon	9a-fluor-l 1 β, 16α, 17a-trihydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
izoflupredon	9a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
6a,9a-difluorprednisolon	6a,9a-difluor-l 1 β, 17a-dihydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
beclomethason	9a-chlor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6|3-methylandrosta-l ,4-dien-3on-17[3-karboxylová kyselina
9a-chlor-6-a-fluor- 16a-methylprednisolon	9a-chlor-6a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-17β-karboxylová kyselina
9a-fluor-6a-methylprednisolon	9a-fluor-l 1 β, 17a-dihydroxy-6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on17β-karboxylová kyselina
dichlorison	9α, 11 β-dichlor-l 7a-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
9a-chlor-16a-methylprednisolon	9a-chlor-l 1 β, 17a-dihydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3οη-17β-1ί3Γ6οχγ1ονέ kyselina

Příklad 4 ip,17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17|3-karboxylová kyselina 1 (3,12 g, 9,0 mmol) se rozpustí v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (7,56 g, 90 mmol) ve vodě (100 ml). Přidá se methylenchlorid (100 ml) a potom tetrabutylamoniumhydrogensulfát (1,0 g). Směs se intenzivně míchá a během 5 minut se po kapkách přidává dichloracetylchlorid (1,51 g, 17 mmol) v methylenchloridu (10 ml). V míchání se pokračuje přibližně 5 hodin, potom se organická fáze oddělí a promyje se postupně 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem thiosíranu sodného. Organický roztok se vysuší síranem sodným a zahustí se za sníženého tlaku. Vzniklý surový produkt ve formě pevné látky se čistí chromatografii selucí směsí 1:100 obj. methanolu a methylenchloridu. ’H-NMR (DMSOd₆)8ppm: 1,00 (s, 18-CH₃), 1,42 (s, 19-CH₃), 4,30 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2CH), 6,87 (s, COCHCh), 7,30 (m, 1-CH=C). FAB hmotnostní spektrum: 457 (M⁺). Elementární analýza: vypočteno pro C₂2H₂6O6C1₂: 57,77 C, 5,69 H, 15,54 Cl, nalezeno: 56,58 C, 5,83 H, 15,14 Cl. Produkt, 17a-dichloracetoxy-1113-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-14|3-karboxylová kyselina 4, má strukturní vzorec

OH

-28CZ 292860 B6

Příklad 5

Náhradou 1 ip,17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17[3-karboxylové kyseliny použité v příkladu 4 za ekvivalentní množství 9a-fluor-lip,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta-l,45 dien-3-on-17P-karboxylové kyseliny a provedením v příkladu 4 popsaného postupu se získá

17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina 5, která má strukturní vzorec

OH

C—O

Čištěním surového produktu rychlou chromatografií na silikagelu směsí 10:100 methanolu ío a methylenchloridu se získá sloučenina 5 ve výtěžku 90 %. MS: 490,7 ([M+H]), 510,7 ([M+Na]).

Příklad 6

Provedením obecného postupu podle příkladu 4 a náhradou tam uvedených příslušných reakčních složek se získají následující nové meziprodukty obecného vzorce

-29CZ 292860 B6

*5

slouč. č.	Ra	R<		Z	Δ
6-1	H	H	H	^OH Έ	4
6-2	H	F	H	-OH ''a ~R	4
6-3	0-CH3	F	H	Ή	1.4
6-4	k-CH3	F	F	Ή	1.4

Sloučeniny 6-1 až 6—4 lze pojmenovat následovně:

6-1:	17a-dichloracetoxy-l 13-hydroxynadrost-4-en-3-on-l 7[3-karboxylová kyselina
6-2:	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 P-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7p-karboxylová kyselina
6-3:	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 |3-hydroxy-16p-methylandrosta-l ,4-dien-3on-173-karboxylová kyselina
6-4:	17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien3-on-17(3-karboxylová kyselina

-30CZ 292860 B6

Příklad 7

Provedením obecného postupu podle příkladu 4 a náhradou tam uvedených příslušných reakčních složek se získají následující nové meziprodukty obecného vzorce

OH

slouč. č.	Ra	r4		z	Δ
7-1	H	H	H	> = 0	4
7-2	H	H	F	/OH Ή	1,4
7-3	íS-CH3	H	H	> = O	1,4
7-4	a-CH3	H	F	OH ''cr Ή	1,4
7-5	H	H	H	> = O	1,4
7-6	a-0C0CHCl2	F	H	OH	1.4

*'H

-31 CZ 292860 B6

7-7	H	H	Cl	^c = o	1,4
7-8	H	H	CH-	OH X Ή	1,4
7-9	H	F	H	OH X Ή	1,4
7-10	H	F	F	°H Xf Ή	1,4
7-11	0-CH3	Cl	H	OH Ή	1,4
7-12	at-CH-	Cl	F	^0H Ή	1.4
7-13	H	F	CH-	°K Ή	1,4
7-14	H	Cl	H	X /“·. Ή	1,4
7-15	a-CH3	Cl	H	°H X Έ	1,4

Sloučeniny 7-1 až 7-15 lze pojmenovat následovně:

7-1:	17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,l 1-dion-l 73-karboxylová kyselina
7-2:	17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
7-3:	17a~dichloracetoxy-l όβ-methylandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7[3-karboxylová kyselina
7-4:	17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3on-17[3-karboxylová kyselina
7-5:	17a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7[3-karboxylová kyselina
7-6:	16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17β-karboxylová kyselina
7-7:	6a-chlor-l 7 a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3,11-dion-l 7 β-karboxylová kyselina
7-8:	17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina
7-9:	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-άΐβη-3-οη-17βkarboxylová kyselina
7-10:	17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l,4-άίεη-3-οη-17βkarboxylová kyselina
7-11:	9a-chlor-17a-dichloracetoxy-l 1β-1^κ^-16β-ιη6ΰψ13^Γ05ί3-1,4-κ1ίβη-3οη-17β^8Λοχγ1ονέ kyselina

-32CZ 292860 B6

Tabulka - pokračování

7-12:	9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-17[3-karboxylová kyselina
7-13:	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 p-hydroxy-6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on17[3-karboxylová kyselina
7-14:	9α, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7p-karboxylová kyselina
7-15:	9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3οη-17β^η^οχγ1ονέ kyselina

Příklad 8

17a-dichloracetoxy-l 1 p-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina4 (0,23 g, 0,5 mmol) se rozpustí v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (0,2 g, 2,34 mmol) ve vodě (50 ml). Přidá se methylenchlorid (50 ml) a potom tetrabutylamoniumhydrogenfosfát (0,2 g). Směs se intenzivně míchá, přičemž se během 5 minut po kapkách přidává methyljodid (0,16 g, 1,12 mmol) vmethylenchloridu (1 ml). Vmíchání se pokračuje přibližně 5 hodin, potom se organická fáze oddělí a promyje se postupně 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem thiosíranu sodného. Organický roztok se vysuší síranem sodným a zahustí se za sníženého tlaku. Vzniklý surový produkt ve formě pevné látky se čistí chromatografíí, přičemž se eluuje směsí 1:200 obj. methanolu a methylenchloridu. Získá se produkt ve výtěžku 85 % (0,2 g). Dalším čištěním rekrystalizací ze směsi n-hexanu a diethyletheru se získá methyl-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát 8, teploty tání 115 až 117 °C, který má strukturní vzorec

'H-NMR (CDC1₃) δ (ppm): 1,02 (s, 18-CH₃), 1,40 (s, 19-CH₃), 3,75 (s, COOCH₃), 4,51 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2-CH), 6,85 (s, COCHC1₂), 7,30 (m, 1-CH=C). FAB hmotnostní spektrum: 471 (M⁺). Elementární analýza: vypočteno pro C₂₃H₂₈O6C1₂: 58,60 C, 5,94 H, 15,07 Cl, nalezeno: 58,64 C, 6,15 H, 14,73 Cl.

Příklad 9

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního množství ethyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá ethyl-17a-dichloracetoxy-llp-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát 9, teploty tání 115 až 117 °C, který má strukturní vzorec

-33CZ 292860 B6

’Η-NMR (CDCIj) δ (ppm): 1,05 (s, I8-CH3), 1,27 (t, CH,CH₃), 1,37 (s, 19-CH₃), 4,25 (s,COOCH₂), 4,51 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2^CH), 6,87 (s, COCHC1₂), 7,30 (m, 1-CH=C). FAB hmotnostní spektrum: 485 (Μ*). Elementární analýza: vypočteno C₂₄H3o0₆C1₂: 59,38 C, 6,19 H, 14,64 Cl, nalezeno: 59,48 C, 6,26 H, 14,72 Cl.

Příklad 10

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního množství izopropyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá izopropyl-17a-dichloracetoxy-l 1βhydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát 10, teploty tání 222 až 223 °C, který má strukturní vzorec

^!H-NMR (CDCI3) δ (ppm): 1,01 (s, I8-CH3), 1,22 (d, CH(CH₃)₂), 1,39 (s, 19-CHj), 4,25 (s, COOCH), 4,51 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2-CH), 6,86 (s, COCHC1₂), 7,32 (m, 1-CH=C). FAB hmotnostní spektrum: 499 (M ). Elementární analýza: vypočteno pro C₂₅H3₂O₆C1₂: 60,12 C, 6,41 H, 14,23 Cl, nalezeno: 59,99 C, 6,49 H, 14,31 Cl.

Příklad 11

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního množství chlormethyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 βhydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17|3-karboxylát 11, teploty tání 122 až 123 °C, který má strukturní vzorec

-34CZ 292860 B6

OCHjCI

’Η-NMR (CDCb) δ (ppm): 0,98 (s, 18-CH₃), 1,36 (s, 19-CH₃), 4,45 (m, U-CH), 5,76 (ABq, CH₂C1), 5,95 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2-CH), 6,89 (s, COCHC1₂), 7,28 (m, 1-CH=C). FAB hmotnostní spektrum: 505 (M⁺)· Elementární analýza: vypočteno pro C₂₃H₂₇O6C1₃: 54,65 C, 5,35 H, 21,09 Cl, nalezeno: 54,61 C, 5,41 H, 20,94 Cl.

Tentýž produkt se mnohem výhodněji připraví následujícím postupem:

17a-dichloracetoxy-l ip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17[3-karboxylát 4 (0,024 mol) se rozpustí ve vodě (100 ml) obsahující hydrogenuhličitan sodný (9,90 g). Přidá se methylenchlorid (80 ml), potom tetrabutylamoniumhydrogenfosfát (0,47 g, 1,18 mmol). Za intenzivního míchání se během 30 minut přidává po kapkách chlormethylchlorsulfát (4,75 g, 0,029 mol) v methylenchloridu (20 ml). Po míchání po dobu 2 hodin se organická fáze oddělí, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá surový chlormethyl-17a-dichloracetoxy-1 l|3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17|3-karboxylát 11. Po vyčištění chromatografii a rekrystalizaci podle příkladu 8 má produkt teplotu tání 122 až 123 °C.

Příklad 12

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního množství 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylové kyseliny 5 místo tam použité 17a-dichloracetoxy-l l(3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on17p-karboxylové kyseliny 2 se získá methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát 12, která má strukturní vzorec och₃

a který je dále charakterizován teplotou tání 248 až 251 °C.

-35CZ 292860 B6

Příklad 13

Provedením obecného postupu podle příkladu 8 a náhradou příslušných reakčních složek se získají následující sloučeniny:

*5

-36CZ 292860 B6

slouč.č.	Ri	Ra
13-1	C2H5	a-CH3
13-2	lSO-C^Hy	a-CH3
13-3	ch2ci	a-CH3
13-4	ch3	H
13-5	c2h5	H
13-6	ÍSO-C3H7	H
13-7	CH2C1	H
13-8	ch3	H
13-9	c2h5	H
13-10	íso-C3H7	H
13-11	ch2ci	H

R<	R>	z	Δ
F	H	OH ''C Z*'-'.. Ή	1,4
F	H	Ή	1,4
F	H	OH s-·.. Ή	1,4
H	H	OH ''C Z—.. Ή	4
H	H	OH y·. Ή	4
H	H	OH Έ	4
H	E	°H Ή	4
F	H	CH ''C Ή	4
F	H	OH 'CL Ή	4
F	H	OH Ή	4
F	H	OH xí Ή	4

-37CZ 292860 B6

13-12	ch3	Č-CH3	F	H	°H ''CL H	1.4
13-13	c2h5	0-CH3	F	H	°H ''σ ,Χ Ή	1.4
13-14	ÍSO-C3H7	0-CH3	F	H	°H X Ή	1.4

13-15	ch2ci	0-CH-	F	H	/0H Ή	1.4
13-16	ch3	a-CH3	F	F	^°K Έ	1.4
13-17	C2H5	a-CH-	F	F	OH ''c: H	1.4
13-18	íso-C3H7	a-CH3	F	F	ΟΉ X Ή	1.4
13-19	ch2ci	cs-CH3	F	F	OH ''C x'u'-_ Ή	1,4
13-20	CH3	H	H	H	> = O	4
13-21	c2h5	H	H	H	;c = o	4
13-22	íso-C3H7	H	H	H		4

-38CZ 292860 B6

13-23	ch2ci	H	H	H	)c = o	4
13-24	ch3	H	H	F	°H *H	1,4
13-25	c2h5	H	H	F	°H X	1,4
13-26	ÍSO-C3H7	H	H	F	^°H Ή	1,4
13-27	ch2ci	H	H	F	0K	1,4
13-28	ch3	/3-CH3	H	H		1,4
13-29	c2h5	/?-ch3	H	H		1,4
13-30	ÍSO-C3H7	0-CH-	H	H	>=0	1,4
13-31	ch2ci	/3-CH3	H	H	> = O	1,4
13-32	ch3	a-CH3	H	F	-ZH Ή	1,4
13-33	c2h5	a-CH3	H	F	°H s-·. Ή	1,4

-39CZ 292860 B6

13-34	iso-C-H7	a-CH-	H	F	°H c: H	1,4
13-35	ch2ci	a-CH3	H	F	°H *H	1,4
13-36	ch3	H	H	H	> = O	1,4
13-37	c2h5	H	H	H	> = 0	1,4
13-33	ÍSO-C3H7	H	H	H	'c = o	1,4
13-39	CH^Cl	H	H	H	>=O	1,4
13-40	CH,	a-OCOCHCl2	F	H	°H Ή	1,4
13-41	C2H5	a-OCOCHCb	F	H	°H XÍ Έ	1,4
13-42	íso-C3H7	a-OCOCHCl2	F	H	OH ''C x ·. H	1,4
13-43	ch2ci	a-OCOCHCl2	F	H	OH ''C Έ	1,4
13-44	ch3	H	H	Cl	^C = O	1,4

-40CZ 292860 B6

13-45	02¾	H	H	Cl	^c = o	1,4
13-46	ÍSO-C3H7	H	H	Cl	> = 0	1Λ
13-47	ch2ci	H	H	Cl	>3 = 0	1,4
13-48	ch3	H	H	ch3	OH ''cr Ή	1,4
13-49	c2h5	H	H	ch3	°H rT Ή	1,4
13-50	ÍSO-C3H7	H	H	ch3	Έ	1,4
13-51	ch2ci	H	H	ch3	;<°E Ή	1,4
13-52	ch3	H	F	H	,/0B Ή	1,4
13-53	c2h5	H	F	H	Z’’**·· H	1,4
13-54	ÍSO-C3H7	H	F	H	-c/°H Ή	1,4

-41 CZ 292860 B6

13-55	CH2C1	H	F	H	z'·'··. Έ	1.4
13-56	ch3	H	F	F	/°H x< Ή	1,4
13-57	C2H5	H	F	F	°K Έ	1.4
13-58	ISO-C^řlg	H	F	F	^0H X1-. Ή	1.4
13-59	ch2ci	H	F	F	°H ''C x ·. Ή	1,4
13-60	ch3	/?-ch3	Cl	H	/U’. Ή	1,4
13-61		č-ch3	Cl	H	x ·. Ή	1.4
13-62	iso-C3H7	0-CH3	Cl	H	°H x< Ή	1,4
13-63	ch2ci		Cl	H	^0H H	1.4
13-64	ch3	a-CH3	Cl	F	^°K X1“·. H	1.4

-42CZ 292860 B6

13-65	C2H5	ct-CH3	Cl	F	_/0H X Ή	1,4
13-66	ÍSO-CjHy	a-CH3	Cl	F	_/°H X Ή	1,4
13-67	ch2ci	a-CH3	Cl	F	.X S~·. Ή	1,4
13-68	ch3	H	F	ch3	z''-. Ή	1 4 *» ‘
13-69	c2h5	H	F	ch3	_/°H X Ή	1,4
13-70	ÍSO-C3H-	H	F	ch3	OH X Ή	1,4
13-71	ch2ci	H	F	ch3	°K ZΉ	1,4
13-72	ch3	H	Cl	H	Ή	1,4
13-73	c2h5	H	Cl	H	X X Ή	1,4
13-74	1SO-C3H7	H	Cl	H	xc Ή	1,4

-43CZ 292860 B6

13-75	CH2C1	H	Cl	H	Ή	1,4
13-76	ch3	cr-CH3	Cl	H	°H X Ή	1,4
13-77	c2h5	a-CH3	Cl	H	°H Ή	1,4
13-78	iso-C3H7	a-CH3	Cl	H	x·1-·. Ή	1,4
13-79	ch2ci	a-CH3	Cl	H	_/0H ''C x'1“·. Ή	1,4
13-80	n-C3H7	H	H	H	χΟΗ X ·. Ή	1,4
13-81	Π-C^Hg	H	H	H	°Η ''C Ή	1,4
13-82	n-C3H7	H	F	H	°Κ ''CL Ή	1,4
13-83	n-C4Hg	H	F	H	OK ''σ χ’'“··. Ή	1,4
13-84	n-C3H7	H	F	F	°Κ X Ή	1,4

-44CZ 292860 B6

13-85	11-C4H9	H	F	F	°H X ·. Ή	1,4
13-86	n-C3H7	H	H	F	°H ''C x· Ή	1,4
13-87	n-C^Hg	H	H	F	OH· x· Ή	1,4
13-88	n-C3H7	a-OCOCHCl2	F	H	OH X Έ	1,4
13-89	11-C4H9	a-OCOCHCl2	F	H	Ή	1,4
13-90	n-C3H7	H	Cl	H	Ή	1,4
13-91		H	Cl	H	_/α X Ή	1,4
13-92	n-C3H7	H	F	ch3	OH '‘C x ·. Ή	1.4
13-93	H-C4H9	H	F	ch3	/0H X Ή	1,4

-45CZ 292860 B6

Následující sloučeniny lze pojmenovat následovně:

13-1:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-2:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4din-3-on-l 7β-karboxy lát
13-3:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methy landrosta- 1,4-dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-4:	methyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7β-karboxylát
13-5:	ethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 B-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7 β-karboxy lát
13-6:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7β^8Η)θχγ1έΐ
13-7:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7β-karboxylát
13-8:	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7βkarboxylát
13-9:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7β-karboxylát
13-10:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-17βkarboxylát
13—11:	chlormethy 1-17 a-dichloracetoxy-9a-fluor-11 β-hydroxyandrost-4-en-3-on-l 7 βkarboxylát
13-12:	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l όβ-πιείΙψ^ηΰΓΟΒΐΗ-1,4dien-3-on-l 7βΑ3Λοχγ1έί
13-13:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l όβ-methylandrosta-l ,4-dien- 3-on-17 β-karboxy lát
13-14:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4dien-3-on-17 β-karboxylát
13-15:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6β-methylandrosta- 1,4-dien-3-on-17 β-karboxylát
13-16:	methyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta- 1,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-17:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4— dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-18:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta- 1,4-dien-3-on-l Ί β-karboxylát
13-19:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-20:	methyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-dion-l 7 β-karboxylát
13-21:	ethyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-dion-l 7β-karboxylát
13—22;	izopropyl-17α-dichloracetoxyandrost-4-en-3,ll-dion-17β-karboxylát
13-23:	chlormethyl-17α-dichloracetoxyandrost-4-en-3,ll-dion-17β-karboxylát
13-24:	methyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-25:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-26:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17 β-karboxy lát
13-27:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17 β-karboxylát
13-28:	methyl-17a-dichloracetoxy-l 6β-methylandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7βΑαΛοxylát

-46CZ 292860 B6

13-29:	ethyl-17a-dichloracetoxy-l 6P-methylandrosta-l ,4-dien-3,11 -dion-17p-karboxylát
13-30:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-l 6[3-methylandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-17βkarboxylát
13-31:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 6(3-methylandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-17βkarboxylát
13-32:	methyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methy landrosta-1,4dien-3,11-dion-17fl-karboxylát
13-33:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-34:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-17 β-karboxylát
13-35:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta- 1,4-dien-3-on-17 β-karboxylát
13-36:	methyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,l 1-dion-17β-4ί3Λοχγ1έΐ
13-37:	ethyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,l 1-dion-17β-karboxylát
13-38:	izopropyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-17 β-karboxylát
13-39:	chlormethyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7β-karboxylát
13-40:	methyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l,4-dien-3on-17 β-karboxylát
13-41:	ethyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxylát
13-42:	izopropyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-43:	chlormethyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxý}-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β—karboxylát
13-44:	methyl-6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,l 1-dion-l 7 β-karboxylát
13-45:	ethyl-6a-chlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7β-karboxylát
13-46:	izopropyl-6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4—dien-3,ll-dion-17β-karboxylát
13-47:	chlormethyl-6a-chlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3,11-dion-l 7βkarboxylát
13-48:	methyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4-dien-3-on- 17 β-karboxylát
13-49:	ethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-óa-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-50:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-ΙηκίΓΟχγ-όα-ιηβΙΙιγΙβ^π^-Ι,4-dien-3-on- 17 β-karboxylát
13-51:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxylát
13-52:	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylát
13-53:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylát
13-54:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17β-karboxylát
13-55:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17 β-karboxylát

-47CZ 292860 B6

13-56:	methyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17(3-karboxylát
13-57:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17β-karboxylát
13-58:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17β-karboxylát
13-59:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-60:	methyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-61:	ethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6β-ιηεί1^13ηάπ^-1,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-62:	izopropyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-63:	chlormethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6 β-methyland rosta- 1,4-dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-64:	methyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7P~karboxyÍát
13-65:	ethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta1,4-dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-66:	izopropyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7P-karboxylát
13-67:	chlormethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-68:	methyl·-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4-dien3-on-l 73-karboxylát
13-69:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4-dien3-on-17 β-karboxylát
13-70:	izopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l,4dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-71:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7p-karboxylát
13-72:	methyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7P~karboxylát
13-73:	ethyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7|3-karboxylát
13-74:	izopropyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-75:	chlormethyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-76:	methyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-77:	ethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien- 3-on-17 β-karboxylát
13-78:	izopropyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l,4dien-3-on-l 7β-karboxylát
13-79:	chlormethyl-9a-chlor-l 7a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta- 1,4-dien-3-on-l 7|3-kari)oxylát
13-80:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7P-karboxylát

-48CZ 292860 B6

13-81:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7|3-karboxylát
13-82:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17β^ηΗκ^1έί
13-83:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát
13-84:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-11 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxylát
13-85:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on- 17 β-karboxylát
13-86:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17β-karboxylát
13-87:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylát
13-88:	n-propyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien- 3-on-l 7 β-karboxylát
13-89	n-butyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien- 3-on-17 β-karboxylát
13-90:	n-propyl-9a,l lβ-dichlor-17α-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-91:	n-butyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-92:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7 β-karboxylát
13-93:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β-karboxylát

Příklad 14

Produkty podle příkladu 4 a příkladu 5, sloučeniny 4 a 5. se každá nechá reagovat nejprve s diethylchlorfosfátem a potom s CH₃SNa v chloroformu po dobu přibližně 6 hodin. V prvním stupni se získají následující meziprodukty:

Cl

-49CZ 292860 B6

SCH,

slouč. č	r3	R4	Δ
14-3	H	H	1,4
14-4	a-CH3	F	1,4

Jestliže se produkty podle příkladu 6 a podle příkladu 7 nechají reagovat podle výše uvedeného dvojstupňového postupu, získají se sloučeniny obecného vzorce

	slouč.č.	výchozí slouč.	r3		Rs	z	Δ
	14-5	6-1	H	H	H	/0H X H	4
	14-6	6-2	H	F	H	' 'ή	4
	14-7	6-3	0-CH3	F	H	'•Z	1.4
5	14-8	6-4	a-CH3	F	F		1,4

-50CZ 292860 B6

14-9	7-1	Η	Η	Η	;c = o	4
14-10	7-2	Η	Η	F		1.4
14-11	7-3	č-ch3	Η	Η	)c = o	1,4
14-12	7-4	íy-CH3	Η	F	X08 Η	1,4
14-13	7-5	Η	Η	Η	>=Ο	1.4
14-14	7-6	a-C0CHCl2	F	Η		1,4
14-15	7-7	Η	Η	CI	:c=o	1,4
14-16	7-8	Η	Η	ch3	°Η ''α Ή	1,4
14-17	7-9	Η	F	Η	X-.. Ή	1.4
14-18	7-10	Η	F	F	ΟΗ Κ Η	1,4

-51 CZ 292860 B6

14-19	7-11	č-ch3	Cl	H	Ή	1,4
14-20	7-12	a-CH3	Cl	F	OH Ή	1,4
14-21	7-13	E	F	ch3	X“ Ή	1,4
14-22	7-14	H	Cl	H	~~Ά	1,4
14-23	7-15	a-CH3	Cl	H	x0H X	1,4

Příklad 15

17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7p-karboxylová kyselina 4 (7,00 mmol) se nechá reagovat s 7,00 ml 1 M methanolického roztoku hydroxidu sodného a pro účinné vysrážení se potom přidá 500 ml ethyletheru. Sraženina se oddělí filtrací a suší se ve vakuovém exsikátoru přes noc, čímž se získá požadovaná sůl, to je 17a-dichloracetoxy-l 1βhydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát sodný. Tato sůl se rozpustí ve 40 ml hexamethylfosforamidu a pomalu se přidá 1 ekvivalent chlormethylsulfidu. Rychle se vytvoří sraženina chloridu sodného. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu přibližně 1 hodiny, potom se zředí ethylacetátem na celkový objem 200 ml a promyje se postupně 3% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická vrstva se oddělí, vysuší se síranem hořečnatým a přefiltruje se. Filtrát se zahustí za sníženého tlaku na olej, který se chromatografuje na silikagelu, za použití ethylacetátu, chloroformu a kyseliny octové jako elučních činidel. Chromatografický produkt se překrystaluje ze směsi ethyletheru a hexanu, čímž se získá methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 β-karboxy lát, který má strukturní vzorec

K. roztoku methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylátu (1 mmol) ve 2 ml dichlormethanu se přidá m-chlorperoxybenzoová kyselina (2 mmol perkyseliny). Následuje exotermická reakce, která rychle ustane. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Vytvořená sraženina se odstraní filtrací a filtrát se zahustí

-52CZ 292860 B6 za sníženého tlaku, čímž se získá methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxy· androsta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylát, který má strukturní vzorec

Opakováním postupu popsaného v předcházejícím odstavci, ale za použití pouze 1 mmol n-chlorperoxybenzoové kyseliny se získá methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-llphydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylát.

Příklad 16

Opakováním postupu podle prvního odstavce příkladu 15, ale náhradou tam použité 17adichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17[3-karboxylové kyseliny za ekvivalentní množství jedné z výchozích sloučenin uvedených níže se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy16a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-9afluor-11 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4— dien-3-on-l 7 β-karboxylát
16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 βhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylová kyselina	methylthiomethyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-Ι^ΓθχγαηάΓθ5ί3-1,4dien-3-on-l 7 β-karboxylát
17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7 β-karboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-9afluor-11 β-1^Γθχγ3^Γθ3ί3-1,4-^ίβη-3-οη17 β-karboxylát
17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 βhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7βkarboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-11 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxylát
9α,11 β-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4—dien-3-on-l 7 β-karboxylová kyselina	methylthiomethyl-9a, 11 β-dichlor-l 7adichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3-on-l 7 βkarboxylát

Příklad 17

Oxidací každého z produktů získaných v příkladu 16 postupem popsaným v druhém odstavci v příkladu 15 se získají:

methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7 β-karboxylát,

-53CZ 292860 B6 methylsulfonylmethyl-16α,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l,4-dien3-on-17 β-karboxylát, methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17 β-karboxylát, methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxylát a methylsulfonylmethyl-9a, 11 β—dichlor— 17a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát.

Příklad 18

Oxidací každého z produktů získaných v příkladu 16 postupem popsaným v třetím odstavci v příkladu 15 se získají:

methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4— dien-3-on-l 7 β-karboxylát, methylsulfínylmethyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien3-on-l 7 β-karboxylát, methylsulfínylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on17 β-karboxylát, methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17P-karb<»<ylát a methylsulfínylmethyl-9α,llβ-dichlor-17α-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát.

Příklad 19

K roztoku 3 g chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-l 7βkarboxylátu ve 100 ml acetonitrilu se přidá fluorid stříbrný v molámím poměru AgF ke steroidu 10:1 a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 12 dnů, přičemž se reakční systém chrání před světlem. Potom se reakční směs přefiltruje a pevná látka na filtru se pečlivě promyje ethylacetátem. Filtrát a ethylacetátový roztok se spojí a směs se promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší se bezvodým síranem sodným. Rozpouštědla se oddestilují, přičemž se získá surový kiystalický produkt. Ten se podrobí preparativní chromatografii v tenké vrstvě (Silica Gel 60F254, Měrek), za použití směsi chloroformu amethanolu (15:1)) jako elučního rozpouštědla. Potom se produkt překrystaluje ze směsi tetrahydrofuranu a n-hexanu, čímž se získá fluormethyl-17α-dichloracetoxy-llβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17βkarboxylát.

Příklad 20

Provedením postupu podle příkladu 19 a náhradou příslušných reakčních složek se získají následující sloučeniny:

-54CZ 292860 B6

slouč.č.		R<	r5	z	Δ
20-1	a-CH3	F	H	Ή	1.4
20-2	H	F	H	°H H	1,4
20-3	H	F	F	OH X ·. Ή	1.4
20-4	a-OCOCHCl2	F	H	OH X1·, Ή	1.4
20-5	/3-CH3	F	H	'X°H zu·. a	1.4
20-6	H	F	a-CH3	^0H	1,4
20-7	H	Cl	H	-x° ' *‘H	1.4

-55CZ 292860 B6

Tyto sloučeniny lze pojmenovat:

20-1:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7(3-karboxylát
20-2:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-androsta-l ,4-dien-3-on17p-karboxylát
20-3:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3on-17 β-karboxy lát
20-4:	fluormethyl-16α, 17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β^«Γ6οχγ1έί
20-5:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6β-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7 β-karboxylát
20-6:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-6α-methylandrosta-l ,4dien-3-on-l 7β^ωΛοχγ1έί
20-7:	fluormethyl-9a, 11 β-dichlor-l 7a-dichloracetoxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l Ί βkarboxylát

Příklad 21

Ke směsi 9a-fluor-l lp,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylové kyseliny (1 g, 2,64 mmol, 1 ekvivalent) a kyanidu stříbrného (0,7á g, 5,83 mmol, 2 ekvivalenty) v 10 ml HMPA (hexamethylfosforamid, Aldrich), se přidá v jedné dávce při teplotě místnosti dichloracetylchlorid (1,42 g, 9,63 mmol, 3,6 ekvivalentu). Směs se míchá v olejové lázni při teplotě 80 °C po dobu 12 minut. Potom se za míchání tato směs přidá po kapkách k nasycenému vodnému roztoku chloridu sodného (200 ml), přičemž se tvoří sraženina. Tato sraženina se odfiltruje a rozpustí se v tetrahydrofuranu. Tetrahydrofuranový roztok se přefiltruje, čímž se odstraní nerozpustný pevný AgCN. Filtrát se zahustí asi na 10 ml a vysráží se zředěním 200 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Jímaná sraženina (1,29 g, výtěžek 100 %) vykazuje jednu TLC stopu s 13:100 MeOH/CH₂C12. Tato sraženina může být použita přímo v dalším stupni, aniž by se čistila. Bezbarvá čistá sloučenina, 17a-dichloracetoxy-9a-fluor1 l|3-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-173-karboxylová kyselina, se může připravit pro analýzu rychlou chromatografií na silikagelu, elucí 13:100 MeOH/CH₂Cl₂. Teplota tání 217 až 218 °C. 'H-NMR (CDCl₃-DMSO-d₆): 0,96 (3H, d, 16-CH₃), 1,12 (3H, s, 18-CH₃), 1,55 (3H, s, 19-CH₃), 2,59 (1H, m, 6a-H), 2,65 (lH,m, 6β-Η), 3,42 (1H, m, 16β-Η), 4,24 (1H, široký d, 11-H), 1,28, 1,76, 1,81, 1,84, 2,12, 2,16, 2,22 a 2,40 (8H, m, jiný H na kruhu), 6,03 (1H, s, 4-H), 6,25 (1H, d, 2-H), 6,43 (1H, s, CHC1₂), 7,33 (1H, d, 1-H) ppm.

Příklad 22

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l l|3-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on17|3-karboxylové kyseliny (0,80 g, 1,63 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,69 g, 8,2 mmol, 5 ekvivalentů) a tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (0,11 g, 0,32 mmol, 0,2 ekvivalentu) v 25 ml vody a 25 ml methylenchloridu se přidá za intenzivního míchání při teplotě místnosti jodethan (0,54 g, 3,5 mmol), 2,1 ekvivalentu) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí a promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Odstraněním rozpouštědla se získá surový produkt, který se čistí rychlou chromatografií na silikagelu, elucí směsmi 3,5:100 a 13:100 MeOH/methylenchlorid, čímž se získá ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l,4dien-3-on-17|3-karboxylát (154 mg, 22,6 %), teploty tání 234 až 236 °C. MS: 518,1 ([M+H]).

-56CZ 292860 B6

Příklad 23

Ke směsi 1 ip,17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylové kyseliny (1,09 g, 3,14 mmol, 1 ekvivalent), NaHCO₃ (2,64 g, 31,4 mmol, 10 ekvivalentů), tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (0,31 g, 0,91 mmol, 0,3 ekvivalentu) v methylenchloridu a vodě (každý 150 ml) se přidá za intenzivního míchání při teplotě místnosti dichloracetylchlorid (6,28 mmol, 2 ekvivalenty) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí a promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Odstraněním rozpouštědla se získá surový produkt, který se čistí rychlou chromatografií na silikagelu směsí 10:100 methanolu a methylenchloridu, čímž se získá čistá 17a-dichloracetoxy1 ip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina ve výtěžku 95 %.

Příklad 24

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-ll[3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17|3-karboxyiové kyseliny (3,24 g, 7,09 mmol, 1 ekvivalent), hydrogenuhličitanu sodného (2,96 g, 35,4 mmol, 5 ekvivalentů) a tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (2,96 g, 8,72 mmol, 1,2 ekvivalentu) v 60 ml methylenchloridu a 60 ml vody se za intenzivního míchání při teplotě místnosti přidá ethyljodid (2,21 g, 14,17 mmol, 2 ekvivalenty) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí, promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se na rotačním odpařováku, čímž se získá surový produkt. Tento surový produkt se čistí rychlou chromatografií na silikagelu s elucí směsí methanol/methylenchlorid 2,1:100, čímž se získá čistá sloučenina, ethyl-17a-dichloracetoxylip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát, (1,89 g, výtěžek 54,9 %), teploty tání 207 až 208 °C. MS: 484,9 ([M+]).

Příklad 25

Ke směsi nepřečištěné 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l6a-methylandrosta-l,4dien-3-on-17β-karboxylové kyseliny (1 g, 2,0 mmol, 1 ekvivalent) připravené podle příkladu 21 a bezvodého K₂CO₃ (0,72 g, 5,21 mmol, 2,61 ekvivalentu) v hexamethylfosforamidu (12 ml) se při teplotě místnosti přidá methyljodid (3,8 g, 26,8 mmol, 13,4 ekvivalentu). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Tato směs se za míchání přidá k nasycenému vodnému roztoku chloridu sodného (200 ml), čímž se získá sraženina. Tato sraženina se rozpustí v methanolu (200 ml). Methanolický roztok se vysráží zředěním nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (200 ml). Sraženina se čistí rychlou chromatografií na silikagelu (150 g), elucí se směsí 3:100 methanol/methylenchlorid, čímž se získá čistý methyl-17a-dichloracetoxy-9afluor-l+β-hydroxy-16α-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát (0,95 g, výtěžek 92 % vypočteno na bázi výchozí sloučeniny podle příkladu 21, to je 9a-fluor-l^,17a-dihydroxy16α-methylandrosta-l,4-dίen-3-on-17β-karboxylové kyseliny). Vzorek pro elementární analýzu se získá rozpuštěním produktu v methylenchloridu, filtrací roztoku a odpařením, čímž se získá pevná látka, která se potom překrystaluje ze směsi methylenchloridu a hexanu. Teplota tání 252 až 253 °C. *H-NMR (CDC1₃): 1,01 (3H, d, 16-CH₃), 1,09 (3H, s, 18-CH₃), 1,56 (3H, s, 19-CH₃), 2,43 (1H, m, 6a-H), 2,63 (1H, m, 6β-Η), 3,38 (1H, m, 16β-Η), 3,75 (3H, s, CO₂CH₃), 4,41 (1H, široký d, 11-H), 1,36, 1,64, 1,69, 1,72, 1,85, 2,18, 2,21 a 2,38 (8H,m, další H na kruhu), 5,94 (1H, s, CHC1₂), 6,13 (1H, s, 4-H), 6,35 (1H, d, 2-H), 7,22 (1H, d, 1-H) ppm.

Provede-li se výše popsaná reakce s přečištěnou 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l Ιβ-hydroxy16α-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylovou kyselinou, je reakční výtěžek kvantitativní.

-57CZ 292860 B6

Příklad 26

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l lp-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on17p-karboxylové kyseliny (0,50 g, 1,02 mmol, 1 ekvivalent) a K₂CO₃ (0,36 g, 2,60 mmol, 2,6 ekvivalentu) v hexamethylfosforamidu (10 ml) se při teplotě místnosti přidá chlormethyljodid (1,18 g, 6,69 mmol, 6,6 ekvivalentu). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin a potom se přidá 200 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Vodným roztokem se probublává vzduch, aby se podpořila tvorba sraženiny. Sraženina se rozpustí v methanolu (10 ml) a přidá se k nasycenému vodnému roztoku chloridu sodného (200 ml). Vytvořená sraženina se čistí lychlou chromatografií na silikagelu (47 g), elucí směsí 3:100 methanol/methylenchlorid, čímž se získá chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy-16a-methylandrostal,4-dien-3-on-17P-karboxylát (0,29 g, výtěžek 53 %), teploty tání 228 až 229 °C (rozklad). *H-NMR (CDC1₃): 1,01 (3H, d, 16-CH₃), 1,16 (3H, s, 18-CH₃), 1,56 (3H, s, 19-CH₃), 2,42 (1H, m 6a-H), 2,64 (1H, m, 6β-Η), 3,42 (1H, m, 16β-Η), 4,45 (1H, m široký d, 11-H), 1,35, 1,63, 1,73, 1,78, 1,83, 1,88, 2,22 a 2,37 (8H, m, další H na kruhu)), 5,56 a 5,94 (2H, 2d, CH₂C1), 5,96 (lH,s, CHC1₂), 6,14 (1H, s, 4-H), 6,37 (1H, d, 2-H), 7,23 (1H, d, 1-H) ppm. Analýza pro C₂4H₂₈C1FO₆: vypočteno: 53,60 C, 5,25 H, nalezeno: 53,81 C, 5,56 H.

Příklad 27

Mast

sloučenina vz. I, tj. ethyl- nebo izopropyl-17a-dichloracetoxy-11 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1βhydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17 βkarboxylát	0,05 % hmotn./hmotn.
parafínový olej	10,0 % hmotn./hmotn.
bílý měkký parafín	89,95 % hmotn./hmotn.

Pilulka na vředovité afty

sloučenina vz. I, tj. izopropyl- nebo ethyl-17a-dichloracetoxy11 β-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17^-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7P-karboxylát	0,1 mg
laktóza	69,90 mg
arabská guma	3,00 mg
stearát hořečnatý	0,75 mg

Retenční klystýr

sloučenina vz. I, tj. ethyl- nebo izopropyl-17a-dichloracetoxy11 β-hydroxyandrosta-l,4-^ίεη-3-οη-17β^3Ηκ^1έί nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7P-karboxylát	0,001 % hmotn./obj.
Tween 80	0,05 % hmotn./obj.
ethanol	0,015 % hmotn./obj.
propylparaben	0,02 % hmotn./obj.
methylparaben	0,08 % hmotn./obj.
destilovaná voda	q.s. 100 objemů

-58CZ 292860 B6

Oční kapky

sloučenina vz. I, tj. izopropyl- nebo ethyl-17a-dichloracetoxy1 ip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17^-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7[3-karboxylát	0,05 % hmotn./hmotn.
Tween 80	2,5 % hmotn./obj.
ethanol	1,75 % hmotn./obj.
benzalkoniumchlorid	0,02 % hmotn./obj.
fenylethanol	0,25 % hmotn./obj.
chlorid sodný	0,60 % hmotn./obj.
voda pro injekce	q.s. 100 objemů

Příklad 28

Mast

sloučenina vz. I, tj. izopropyl-nebo ethyl-17a-dichloracetoxy1 l|3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17[3-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7p-karboxylát	0,1 % hmotn./hmotn.
parafínový olej	10,0 % hmotn./hmotn.
bílý měkký parafín	89,9 % hmotn./hmotn.

Pilulka na vředovité afty

sloučenina vz. I, tj. izopropyl- nebo ethyl-17a-dichloracetoxy1 lβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien- -3-on-l 7fí-karboxylát	0,15 mg
laktóza	60,85 mg
arabská guma	3,00 mg
stearát hořečnatý	0,75 mg

Retenční klystýr

sloučenina vz. I, tj. izopropyl-nebo ethyl-17a-dichloracetoxy11β-Ι^π^ηηΰΓθ5ίη-1,4-^1ίβη-3-οη-17βΑηΗκ^1έί nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7β^ηΛοχγ1έί	0,001 %hmotn./obj.
Tween 80	0,05 % hmotn./obj.
ethanol	0,015 % hmotn./obj.
propylparaben	0,02 % hmotn./obj.
methylparaben	0,08 % hmotn./obj.
destilovaná voda	q.s. 100 objemů

-59CZ 292860 B6

Oční kapky

sloučenina vz. I, tj. izopropyl- nebo ethyl-17a-dichloracetoxy11 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7[3-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9cc-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7β^3ΛοχγΙύί	0,1 % hmotn./hmotn.
Tween 80	2,5 % hmotn./obj.
ethanol	0,75 % hmotn./obj.
benzalkoniumchlorid	0,02 % hmotn./obj.
fenylethanol	0,25 % hmotn./obj.
chlorid sodný	0,60 % hmotn./obj.
voda pro injekce	q.s. 100 objemů

Příklad 29

Oční kapky

sloučenina vz. I, tj. izopropyl- nebo ethyl—17a-dichloracetoxy11 β-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l 7fl-karboxylát	0,5 % hmotn./hmotn.
povidon	0,6 % hmotn./obj.
benzalkoniumchlorid	0,02 % hmotn./obj.
edetát sodný U.S.P.	0,10 % hmotn./obj.
glycerin U.S.P.	2,5 % hmotn./obj.
tyloxapol U.S.P.	3,0 % hmotn./obj.
chlorid sodný	0,3 % hmotn./obj
γ-aminobutyrát sodný	1,0 % hmotn./obj.
sterilní destilovaná voda	q.s. 100 objemů

ío Uvedené složky se smísí, zkontroluje se pH, v případě potřeby se upraví na 5,0 až 5,5 zalkalizováním hydroxidem sodným nebo okyselením kyselinou chlorovodíkovou.

Claims (38)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Derivát androstenu obecného vzorce I

   X-Rl (I), *5

   -60CZ 292860 B6 ve kterém

   Ri je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a alkylsulfonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, α-methylová skupina, β-methylová skupina, =CH₂ nebo a- nebo (3-OC(=O)CHCI₂,

   Rt je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru,

   R₅ je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina,

   X je -O- nebo -S-,

   Z je karbonylová skupina, β-hydroxymethylenová skupina nebo β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, že 1,2-vazba je nasycená nebo nenasycená.
2. 2. Derivát androstenu podle nároku 1 obecného vzorce I, mající jednu nebo více z následujících charakteristik:

   (a) R₃ je atom vodíku, α-methylová skupina, β-methylová skupina, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, a-OCOCHCl₂, nebo β-OCOCHCh, (b) R| je atom vodíku nebo atom fluoru, (c) R5 je atom vodíku nebo atom fluoru, (d) Ri je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, (e) Xje-O-, (f) Z je β-hydroxymethylenová skupina, (g) vazba 1,2 j e nenasycená.
3. 3. Derivát androstenu podle nároku 1, vzorce kde Ri, R₃, R», R_s a čárkovaná přímka mají význam uvedený v nároku 1.

   -61 CZ 292860 B6
4. 4. Derivát androstenu podle nároku 3, kde R₃ je atom vodíku, α-methylová skupina, βmethylová skupina, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, a-OCOCHCl₂, nebo P-OCOCHC1₂, Ri je atom vodíku nebo atom fluoru a R₅ je atom vodíku, atom fluoru nebo methylová skupina a zbývající obecné symboly mají význam uvedený v nároku 3.
5. 5. Derivát androstenu podle nároku 3 nebo 4, kde 1,2-vazba je nenasycená a zbývající obecné symboly mají význam uvedený v nároku 3 nebo 4.
6. 6. Derivát androstenu podle nároku 1 obecného vzorce Ia kde Rji je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina.
7. 7. Derivát androstenu podle nároku 6, kterým je:

   methyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7P~karboxylát, ethyl—17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7P*4tarboxylát, izopropyl-17α-dichloracetoxy-llβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát, nebo chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l 1 β-hydroxyandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7β-karboxylát.
8. 8. Derivát androstenu podle nároku 1 obecného vzorce Ib (Ib), *51 kde Rn je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, R₃i je a-CH₃ nebo β-(ΖΉ₃, Rn je atom vodíku nebo atom fluoru a R51 je atom vodíku nebo atom fluoru.
9. 9. Derivát androstenu podle nároku 8, kterým je:

   -62CZ 292860 B6 methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát, ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on-l 7βkarboxylát, nebo chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l 1 β-hydroxy-l 6a-methylandrosta-l ,4-dien-3-on17 β-karboxy lát.
10. 10. Derivát androstenu obecného vzorce

    OH kde

    R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, α-methylová skupina, β-methylová skupina, =CH₂ nebo a-OC(=O)CHCl₂, nebo P-OC(=O)CHC1₂,

    R4 je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru,

    R₅ je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina,

    Z je karbonylová skupina, β-hydroxymethylenová skupina nebo β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, že 1,2-vazba je nasycená nebo nenasycená.
11. 11. Derivát androstenu podle nároku 10, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina a/nebo kde R» je atom vodíku nebo atom fluoru a R₅ je atom vodíku, atom fluoru nebo methylová skupina.
12. 12. Derivát androstenu podle nároku 10 obecného vzorce

    OH

    O'

    -63CZ 292860 B6 kde Z má význam uvedený v nároku 10.
13. 13. Derivát androstenu podle nároku 10 obecného vzorce kde Z má význam uvedený v nároku 10, R₃₎ je a-CH₃ nebo p-CH₃, R^ je atom vodíku nebo atom fluoru a R51 je atom vodíku nebo atom fluoru.
14. 14. Derivát androstenu podle nároku 12, kterým je 17a-dichloracetoxy-l Ιβ-hydroxyandrosta1,4-dien-3-on-l 7|3-karboxylová kyselina.
15. 15. Derivát androstenu podle nároku 13, kde Zje β-hydroxymethylenová skupina a zbývající obecné symboly mají významy uvedené v nároku 13.
16. 16. Derivát androstenu podle nároku 15, kterým je 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l Ιβ-hydroxy16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina.
17. 17. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje protizánětlivě účinné množství derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 a netoxický farmaceuticky přijatelný nosič, přičemž tento prostředek je vhodný pro topickou nebo jinou lokální aplikaci.
18. 18. Oftalmický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje protizánětlivě účinné množství derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 a netoxický oftalmický přijatelný nosič.
19. 19. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako mast, lotion nebo krém.
20. 20. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako prášek.
21. 21. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako kapky nebo sprej.
22. 22. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako čípek nebo retenční klystýr nebo pěna.
23. 23. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako žvýkací nebo cucací tableta nebo pilulka.
24. 24. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako aerosol.

    -64CZ 292860 B6
25. 25. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako rozprašovací nebo práškový přípravek pro orální inhalaci.
26. 26. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako roztok nebo suspenze.
27. 27. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je formulován jako prostředek pro parenterální nebo jiné injekční podání.
28. 28. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení topického nebo jiného lokálního zánětu.
29. 29. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení oftalmického zánětu.
30. 30. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení dermatologického zánětu.
31. 31. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení ušního zánětu.
32. 32. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení astmatu.
33. 33. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení zánětu v ústech, dásních nebo krku.
34. 34. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení nasálního zánětu.
35. 35. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení horní nebo dolní části střev.
36. 36. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení zánětu spojeného s arthritidou.
37. 37. Použití derivátu androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčení anorektálního zánětu.
38. 38. Deriváty androstenu podle libovolného z nároků 1 až 9 pro použití k léčení.