CZ361698A3 - Deriváty androstenu a farmaceutický prostředek obsahující tyto deriváty - Google Patents

Description

(57) Anotace:

Nové deriváty androstenu, které mají protizánětlivou účinnost, farmaceutické prostředky, které obsahují tyto deriváty a způsoby jejich podávání teplokrevným živočichům při ošetřování zánětu. Účinnými sloučeninami jsou alkyl-17.alfa.-dichloracetoxy-11 .alfa.hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17b-k arboxyláty a příbuzné androsteny.

CZ 3616-98 A3 i

176 578/HK

Deriváty androstenu a farmaceutický prostředek obsahující tyto deriváty

Oblast techniky

Vynález se týká nových derivátů androstenu, které mají protizánětlivou účinnost, farmaceutických prostředků, které obsahují tyto deriváty, nových chemických meziproduktů použitelných při přípravě těchto derivátů a způsobů podávání těchto derivátů savcům při ošetřování zánětu.

Dosavadní stav techniky

Topická nebo jiná lokální aplikace silně účinných glukokortikoidů může vést k prudkým toxickým účinkům, jako jsou Cushingova nemoc, potlačení činnosti hypofysy a nadlevinek, atrofie kůže, imunosuprese a inhibice hojení ran. Při dlouhobobém používání léčiv tohoto typu může docházet k dalším druhům toxických reakcí, včetně alergií a katarakt.

Oční aplikace glukokortikosteroidů přináší další problémy. Pochranný mechanismus oka dovoluje pouze malým množstvím dávek aplikovaných do oka dosáhnout cílových míst v oku. Obecně přes 90 % celkové dávky nachází svou cestu do celkové cirkulace. Což naopak vede k vážným systemickým výše uvedeného typu. Kromě toho při léčiva do oka dochází k vážnému a specifickému vedlejšímu účinku, to je že se zvyšuje nitroroční tlak (IOP). Chronický nebo akutní glaukom vyvolaný kortikosteroidy byl již popsán v časných 60. letech. Obecně je třeba používat kortikosteroidy k léčbě zánětu pouze topicky. Avšak absorbovaný steroid je odpovědný za vážné vedlejší účinky uvedené výše. Předpokládá se, že účinek kortikosteroidu vedlejším účinkům používání tohoto

na vodní výstupní cesty a přilehlé tkáňové glykosaminoglykany (GAG) je důležitý při vývinu oční hypertense vyvolané glukokortikoidem.

Je proto stále zapotřebí silných lokálních protizánětlivých steroidů, které nemají systemický účinek a následkem toho nepůsobí vážné systemické vedlejší účinky působené léčivy této třídy.

Přírodní glukokortikosteroidy a mnohé jejich na trhu * uváděné deriváty jsou Δ⁴ a Δ¹'⁴ pregneny mající » 21-hydroxyskupiny. V literatuře je však popsána řada í-( protizánětlivých Δ⁴ a Δ^1,4 androstenů. Tak Anner a j., US patent č. 3 636 010, vydaný 18.01.1972, popisují estery Δ⁴ a Δ^1,4-16α-methyl-6α-9α-difluor-ΙΙβ,l7a-dihydroxy-3-oxo-androstadien-17-karboxylovou kyselinu mající dobrou protizánětlivou a thymolytickou účinnost. Thymolytická účinnost je však známkou systemické účinnosti.

V 70. letech a v časných 80. letech bylo vydáno několik patentů, které popisují deriváty androstenů, které mají údajně více žádoucí poměry protizánětlivého účinku k nežádoucím vedlejším účinkům. Jsou to britský patent č. 1 384 372, Phillipps a j., US patent č. 3 828 080, Phillipps a j., US patent č. 3 856 828, Phillipps a j., US patent č. 4 093 721, britská patentová přihláška GB 2 014 579, Edwards, US patent č. 4 188 385, Alvarez, US patent č. 4 198 403 a Edwards, US patent č. 4 263 289. Deriváty Δ⁴ a Δ^1,4 3-oxoandrostenu v těchto patentech mohou mít různě substituenty v polohách 6, 9, 11 a 16 a typicky obsahují 17a-hydroxy- nebo 17a-alkanoyloxysubstituent. Jako skupiny v poloze 17β lze jednotlivě uvést alkylester karboxylové kyseliny, halogenalkylester karboxylové kyseliny nebo alkylester thiokarboxylové kyseliny. V britském patentu č. 1 578 243 a v jeho US analogu a Kalvoda a j. v US patentu č. 4 285 937 také popisují androsta-dien-17-karboxylové kyseliny a jejich estery. Sloučeniny v US

-34 4 44

4 4 4 patentu č. 4 285 937 jsou uváděny jako nové estery androstadien-17-karboxylových kyselin obecného vzorce ch₃ r^z

kde R' znamená volnou hydroxylovou skupinu nebo hydroxyiovou skupinu esterifikovanou karboxylovou kyselinou obsahující do 7 atomů uhlíku, R znamená methylovou skupinu v cc- nebo β-poloze nebo methylenovou skupinu, R je H nebo Cl, každý ze symbolů X a Y znamená atom vodíku, atom chloru nebo atom fluoru, s tou výhradou, že alespoň jeden z těchto substituentů je jedním z těchto halogenů, když R je Cl a že Y je pouze Cl nebo F a X je pouze Cl, když R je H a že esterová skupina androstadien-17-karboxylové kyseliny neobsahuje více než 11 atomů uhlíku. 0 těchto sloučeninách se uvádí, že mají zřetelný protizánětlivý účinek spojený se zřetelně nízkými systemickými vedlejšími účinky a že jsou zejména vhodné pro dermatologické použití. Estery steroidních 17-karboxylových kyselin jsou odvozeny od alkoholů obsahujících 1 až 10 atomů uhlíku alifatického, aralifatického a heterocyklického typu, které jsou nesubstituovány nebo substituovány atomem chloru, fluoru· nebo bromu, hydroxylovou skupinou, nižší alkoxyskupínou nebo nižší alkanoyloxyskupinou. Tyto alkoholy zahrnují nižší alkanoly (methanol, ethanol atd.). 17-esterovou skupinou může být také chlormethoxykarbonyl,

2-chlorethoxykarbonyl nebo

Esterifikovaná hydroxyskupina R' je odvozena od nasycené nebo nenasycené karboxylové kyseliny s 1 až 7 atomy uhlíku, která je nesubstituována nebo substituována atomy halogenu, hydroxylovou skupinou nebo nižší alkoxyskupínou, jako příklady fluormethoxykarbonyl nebo 2-fluorethoxykarbonyl.

-4♦ 44 4 4 44 44

4444 44 44 4444

444 4 4 4444

4444 · 4444444

444 4 4 444

444 44 444 444 44 44

R' lze uvést formyloxyskupinu, acetoxyskupinu, propionyloxyskupinu, butyryloxyskupinu, valeryloxyskupinu, diethylacetoxyskupinu, kaproyloxyskupinu, chloracetoxyskupinu, chlorpropionyloxyskupinu, oxypropionyloxyskupinu nebo acetoxypropionyloxyskupinu. Avšak jedinou specifickou sloučeninou, ve které je poloha 2 nesubstituována, která je popsána Kalvodou a j., je methyl-9a-chlor-6a-fluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo17a-propionyloxyandrosta-l,4-dien-17-karboxylát. Skutečně všechny specifické sloučeniny popsané Kalvodou a j. jsou 17a-propíonyloxysloučeniny. Vzhledem k tomu, že se očekává, že sloučeniny podle Kalvody a j. se hydrolysují in vivo, čímž se uvolňuje kyselina z polohy esteru 17a, není překvapující, že Kalvoda á j. preferují pro derivatisaci 17a-hydroxylové skupiny kyselinu propionovou, o které je známo, že má LD_S0 u krys pouze 4,29 g/kg orálně. Kyselina octová, která je také v podstatě netoxická, . má LD_SO u krys 3,53 g/kg orálně. Naopak LD_S0 kyseliny chloroctové u krys je 76 mg/kg orálně., což je relativně zcela toxické.

Nedávno byly vyvinuty, měkké steroidy ve snaze připravit sloučeniny mající silnou protizánětlivou účinnost s minimální systemickou účinností. Tyto sloučeniny zahrnují Δ⁴ a Δ^1,4 17a-alkoxy-lip-hydroxy-3-oxoandrosteny, popřípadě substituované různými substituenty v polohách 6, 9 a 16 a příbuzné sloučeniny substituované v poloze 11, které jsou estery nebo thioestery 173-karboxylových kyselin. Tyto 17a-ethery jsou popsány v US patentu č. 4 710 495 (Bodor) . Výhodné sloučeniny jsou nazvány jako halogenalkyiestery 17a-alkoxy-liP-hydroxyandrost-4-en-3-on-17p-karboxylových kyselin.

Další řadou měkkých steroidů, které jsou popsány jako látky mající silnou protizánětlivou účinnost s minimální systemickou účinností, jsou 17a-karbonáty sloučenin popsaných v US patentu 4 996 335. Tyto sloučeniny zahrnují jako výhodné látky halogenalkyl-17a-alkoxykarbonyloxy-lip-hydroxyandrost-4-en-3-on-17p~karboxyláty a odpovídající Δ^1,4 sloučeniny,

-54 44 4 4 44 ··

4 · 44 44 4 4 4 4

4 4 · · 4 4 44

4 4 4 4 4 4 4444 4

444 4 4 4 · ·

444 44 444 444 44 44 popřípadě substituované 6α- a/nebo 9α-fluorem a 16a- nebo Ιδβ-methylem. Jednou z těchto sloučenin je chlormethyl-17a-ethoxykarbonyloxy-liP-hydroxyansrosta-l,4-dien-3-οη-17β-karboxylát, také známý jako loteprednol etabonát, pro který byl proveden klinický vývoj a který čeká na schválení FDA.

Nicméně stále je třeba vyvíjet nové protizánětlivé steroidy, které mají silnou lokální protizánětlivou účinnost a přitom mají minimální nebo žádnou systemickou účinnost.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou nové deriváty androstenu, které mají protizánětlivou účinnost a které mají obecný vzorec I

*5 (II ve,kterém

R_x je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, která je nesubstituovaná nebo substituovaná jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a alkylsulfonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, α-methylová skupina, β-methylová skupina, =CH₂ nebo a- nebo β-Ού(=Ο) CHC1₂,

R₄ je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru,

-6» «» « · ·· ·· ·· · · ·· ·· · · · · • Β Β Β Β ΒΒΒ»

Β Β Β Β Β Β Β ΒΒΒ Β Β

ΒΒΒ Β Β ΒΒΒ

ΒΒΒ ΒΒ ·ΒΒ ΒΒΒ ΒΒ ΒΒ

R_s je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina,

X je -0- nebo -S-, z

Z je karbonylová skupina, β-hydroxymethylenová skupina nebo β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, že 1,2-vazba je nasycená nebo nenasycená.

V této skupině sloučenin je výhodná následující podskupina:

(1) sloučeniny, ve kterých R₃ je H, R₄ je H nebo F a R₅ je H,

F nebo CH₃, (2) sloučeniny, ve kterých R₃ je cc-CH₃ nebo β-ΟΗ₃, R₄ je H nebo

F a R₅ je H, . F nebo CH₃, a (3) sloučeniny, ve kterých R₃ je ct-OH, β-ΟΗ- a-0C0CHCl₂ nebo β-ΟΟΟΟΗΟ1₂, R₄ je H nebo F a R_s je H, F nebo CH₃.

Obzvláště výhodné sloučeniny podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, které mají jednu nebo více z následujících strukturních charakteristik:

(1) R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, zejména kde R_x je nesubstituovaná alkylová skupina, obzvláště kde R_x je methylová nebo ethylová skupina, (2) X je -0-, (3) Z je β-hydroxymethylenová skupina, (4) 1,2-vazba je nenasycená, zejména kde R₃, R₄ a R_s znamenají výhodné významy uvedené v předchozím odstavci.

Obzvláště výhodná · je jedna skupina derivátů podle vynálezu strukturního vzorce Ia

2>.

-Ί -

• · » · « ··· · (Ia) kde R_X1 je methylová skupina, ethylová skupina, isopropylová skupina, skupina skupina nebo chlormethylová methylová skupina, ethylová skupina.

Androstenové deriváty obecného vzorce -I jsou extrémně silnými lokálními protizánětlivými činidly, které nemají systemickou účinnost. Z toho důvodu lze sloučeniny podle předloženého vynálezu použít při lokálním (například topickém) ošetřování zánětlivých stavů bez vážných systemických vedlejších účinků, které provázejí použití mnoha známých glukokortikosteroidů. Kromě toho s ohledem na jejich vynikající vlastnosti jako vazby na receptor a vasokonstriktorů představují tyto nové sloučeniny novou třídu bezpečných a účinných steroidních protizánětlivých činidel, které mají vynikající bezpečnostní vlastnosti.

Alkylové skupiny mohou být přímé nebo rozvětvené skupiny obsahující výše uvedený počet atomů uhlíku. Podobně alkylové části alkoxyskupin, alkylthioskupin, alkylsulfinylových skupin a alkylsulfonylových skupin mohou mít přímé nebo rozvětvené řetězce.

Specifickými příklady alkylových skupin přítomných v obecném vzorce X buď jako specifické hodnoty pro R_x nebo jako zejména kde R_1X je nebo isopropylová

-8část skupiny R_x jsou methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl a n-butyl.

Alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylové skupiny a alkylsulfonylové skupiny jsou typu -O-alkyl, -S-alkyl, -SO-alkyl a -SO₂-alkyl, kde alkylové skupiny mají výše uvedený význam.

I když všechny sloučeniny obecného vzorce I v podstatě splňují podmínky předloženého vynálezu, přesto jsou určité skupiny sloučenin výhodné a byly již definovány výše. Zejména výhodnou skupinou sloučenin obecného vzorce I jsou sloučeniny obecného vzorce la definované výše.

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří sloučeniny obecného vzorce I mající 16cc-methylovou skupinu nebo 16βmethylovou skupinu, zejména ty, kde Z, X a R_x mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách dexamethasonu, betamethasonu, flumethasonu nebo paramethasonu, zejména, když Rj je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethýlova skupina, obzvláště, když R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku. Z těchto sloučenin mají zvláštní význam sloučeniny obecného vzorce Ib

I k₅₁ kde R_u má význam uvedený u obecného vzorce la,. R₃₁ je a-CH3 nebo β-CHj, R₄₁ je H nebo F a R₅₁ je H nebo F, zejména, kde R_1X je methylová skupina nebo ethylová skupina.

·· · · « • · « *· ··

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří sloučeniny obecného vzorce I, kde Z, X a R_x mají význam uvedený výše u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách hydrokortisonu (to je R₃, R₄ a R_s jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nasycená) nebo prednisolonu (to je R₃, R₄ a R_s jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nenasycená), zejména kde R₃ je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina a obzvláště, kde R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Další výhodnou skupinu sloučenin tvoří obdobné sloučeniny, které jsou uvedeny v předchozím odstavci, s δαa/nebo 9a-fluorem. V této skupině jsou zvláště výhodné sloučeniny, kde Z, X a R_x mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách fluorokortisonu, triamcinolonu, fluprednisolonu, isofluprednonu nebo difluprednatu, zejména, kdy R_x je nesubstituovaná . alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, kdy R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku. Dále jsou zajímavé sloučeniny, kde Z, X a R_x mají význam uvedený u obecného vzorce I, R₃ je a- nebo β-OC (=0) CHC1₂ a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách triamcinolonu, zejména, kdy R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, obzvláště, kdy R₃ je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Dalšími androstenovými deriváty zvláštního významu jsou sloučeniny obecného vzorce I, které mají 6a-methylovou skupinu, zejména ty, ve kterých Z, X a R_x mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbývající strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách fluorometholonu nebo methylprednisolonu, zejména, kdy R₃ je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová • · * · fc · • fc ft fc' · fc··

4» skupina, obzvláště, kdy R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

V každé skupině sloučenin uvedených ve třech předcházejících odstavcích jsou zvláště výhodné sloučeniny, kde X je atom kyslíku. Zvláště výhodné jsou sloučeniny patřící do skupin uvedených výše, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina, kde X je atom kyslíku a kde R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, zejména nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku (zejména methyl, ethyl nebo isopropyl).

I když sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých Z je β-hydroxymethylenová skupina, jsou obecně výhodné, zvláštní význam mají také zejména deriváty, kde Z je β-chlormethylenová skupina nebo kde Z je karbonylová skupina. To jsou sloučeniny, ve kterých 1,2-vazba, R₃, R₄, R_s a Z jsou identické s odpovídajícími částmi dichlorisonu (kde Z je β-chlormethylenová skupina) nebo ve kterých 1,2-vazba, R₃, R„, R_s a Z jsou identické . s odpovídájícími částmi prednisonu, chloroprednisonu nebo kortisonu (kde Z je vždy karbonylová skupina). Jak již bylo uvedeno výše, zvláštní význam mají sloučeniny, ve kterých R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina.

Sloučeniny obecného vzorce I lze obecně připravit známými způsoby, jejichž výběr je závislý na identitě různých substituentů v požadovaném konečném produktu.

Jeden obecně používaný způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina a X je atom kyslíku, používá výchozí steroidní sloučeninu obecného vzorce

II i

4 4 4 • 4 4 4

4 4 *

*5 (II) kde R₄, R_s a čárkovaná přímka v kruhu A ma j í význam uvedený u obecného vzorce I a R₃' je atom vodíku, α-methylová skupina, β-methylová skupina, α-ΟΗ, β-ΟΗ nebo =CH₂ (a kterou lze obvykle připravit reakcí odpovídajících 21-hydroxypregnenolonů vzorce

*5 kde R₄, R_s, R₃ a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, s NaIO₄ ve vhodném organickém rozpouštědle při teplotě místnosti nebo při zvýšené teplotě). Při tomto způsobu podle vynálezu se výchozí sloučenina obecného vzorce II nechá reagovat s dichloracetylchloridem (C1₂CHCOC1) za bezvodých podmínek, v příslušném inertním organickém rozpouštědle, jako je methylenchlorid, chlorform nebo tetrahydrofuran, s výhodou v přítomnosti vhodného akceptoru kyseliny (například triethylaminu, pyridinu, uhličitanu vápenatého, hydrogenuhličitanu sodného nebo jiné příslušné base). Reakční doba a reakční teplota nejsou kritickými faktory, avšak reakce se běžně provádí při teplotě mezi 0 °C a teplotou místnosti a po

-12I * · · ► · · ·· • · · · « • · « • * ·♦ dobu asi 1 až 6 hodin. Vzniklá nová sloučenina 17p~karboxylová kyselina 17a-dichloracetát má obecný vzorec III

(III!

chránit esteru,· *5 kde R₄, R₅ a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam a R₃' je H, a-CH₃, β-<2Η₃, a-OCOCHCl₂, P-OCOCHCl₂ nebo =CH₂. Jestliže R₃' ve výchozí sloučenině obecného vzorce II je α-OH nebo β-ΟΗ, je obvykle používaný dichloracetylchlorid dostatečný pro tvorbu dichloracetátového seskupení . v poloze 16, jakož i v poloze 17 (to je, kdy R₃' v obecném vzorci II je OH, R/^x ve vzniklém meziproduktu obecného vzorce III je anébo β-ΟΟΟΟΗΟ1₂) . V případě potřeby lze následně skupinu 16 anebo 16β-ΟΟΟΟΗΟ1₂ odstranit selektivní hydrolysou, čímž se regeneruje 16-hydroxyskupina, například hydrolysou s vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného nebo působením methanolické kyseliny chlorovodíkové. Alternativně, je-li ve výchozí sloučenině přítomna 16a- nebo β-hydroxyskupina, lze ji tvorbou trimethylsilyletheru nebo trifluoracetylmeziprodukt chráněný v poloze 16 lze potom podrobit výše popsané acylaci a vzniklá sloučenina, to je v poloze 16 chráněná 173-karboxylová kyselina 17a-dichloracetát, se potom nechá reagovat známým způsobem, čímž se odstraní chránící skupina a získá se odpovídající 16-hydroxy 17β-karboxylová kyselina 17a-dichloracetát.

Jestliže se zavádí 17a-substituent způsobem popsaným v předcházejícím odstavci, bylo zjištěno, že čištění meziproduktů je časově náročné, protože hodnoty R_f nečistot a

-13·> «4 44 444 4

4 4 4 4 44 •44 · 444444« • 4 4 4 4 4 4 «4 444 444 «4 44 požadovaných meziproduktů obecného vzorce III jsou si velmi blízké. Avšak, nechá-li se výchozí sloučenina obecného vzorce II reagovat s dichloracetylchloridem v hexamethylfosforamidu (HMPA) v přítomnosti kyanidu stříbrného za .zahřívání, získají se požadované meziprodukty ve vysokém (v některých případech téměř kvantitativním) výtěžku a s tak malými nečistotami, že je lze snadno čistit nebo je lze použít v následujícím stupni bez dalšího čištění. Reakce se obvykle provádí při teplotě asi 80 °C po krátkou dobu, například řádově 10 až 15 minut.

Po výše popsaném zavedení 17a-substituentu se vzniklý nový meziprodukt obecného vzorce III snadno převede na odpovídající sloučeninu obecného vzorce I působením alkylhalogenidu R_x-Hal [například CH₃I, C₂H_SI, (CH₃)₂CHI] nebo, když R_x je halogenalkylová skupina, působením halogenalkylhalogenidu [například C1CH₂I] nebo halogenalkylchlorsulfátu Hal-SOjRjL (například CÍSO₃CH₂C1) . Jestliže R_x v konečném produktu je alkylová skupina substituovaná alkoxyskupinou nebo alkylthioalkylová skupina, může se alkoxyaikylhalogenid nebo alkylthioalkylhalogenid nechat reagovat s meziproduktem obecného vzorce III. Tento stupeň reakčního postupu se může vhodně provádět při teplotě místnosti po dobu asi 1 až 24 hodin, v příslušném rozpouštědle, jako je methylenchlorid.

Reakce popsaná v předcházejícím odstavci může být provedena za použití alkylhalogenidu v hydrogenuhličitanu sodném v přítomnosti tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (TBA) jako katalysátoru fázového přenosu, ale poskytuje konečné produkty v nízkém celkovém výtěžku. Kromě toho oddělení nečistot a požadovaných produktů je časově náročné. Avšak, připraví-li se ¹ meziprodukt obecného vzorce III způsobem s kyanidem stříbrným v HMPA, a tento meziprodukt se nechá reagovat s alkyljodidem v přítomnosti uhličitanu draselného v HMPA při teplotě místnosti, celkový výtěžek značně stoupne, na asi 90 %. Skutečně téměř kvantitativní výtěžek lze získat ve druhém stupni, kdy se použije meziprodukt obecného vzorce III • «· ·« ·

-14kde R_x je ekvivalenty ve vyčištěné formě. Reakce se nechá probíhat tak dlouho, až je kompletní (například asi 1,5 až 2 hodiny).

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých R₃ je seskupení obsahující sulfinylovou nebo sulfonylovou část, lze připravit oxidací odpovídajících thiosteroidů. Tak například sloučenina obecného vzorce I, kde R_x je alkylthioalkylová skupina, se může nechat reagovat s 1 ekvivalentem m-chlorperoxybenzoové kyseliny při teplotě 0 °C až 25 °C po dobu 1 až 24 hodin, ve vhodném rozpouštědle, jako je chloroform, čímž se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I, alkylsulfinylalkylová skupina, nebo se 2 m-chlorperoxybenzoové kyseliny, čímž se získá odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde R! je alkylsulfonylalkylová skupina.

Mají-li se připravit sloučeniny obecného vzorce I, kde R₃ je a- nebo β-hydroxyskupina, lze je připravit částečnou kyselou hydrolysou odpovídajících sloučenin obecného vzorce I, kde R₃ je a- nebo P~OCOCHC1₂, v prostředí- vhodného rozpouštědla. Je třeba použít mírné reakční činidlo, například vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného nebo kyselinu mravenčí v methanolu. Alternativně lze, jak již bylo výše uvedeno, provést hydrolysu 16-dichloracetátu na 16-hydroxysloučeninu v dřívějším stupni syntesy po zavedení 16,17-bis(dichloracetátových) skupin, například selektivní hydrolysou meziproduktu obecného vzorce III majícího 16- a 17-dichloracetátové skupiny na odpovídající 16-hydroxy-17-dichloracetát, načež následuje převedení na odpovídající sloučeninu obecného vzorce I, jak je popsáno výše.

Další možný způsob přípravy sloučenin podle předloženého vynálezu, který lze použít pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina a X je atom kyslíku nebo atom síry, využívá výše uvedený meziprodukt obecného vzorce III, to je 17β-karboxylovou kyselinu a 17a-dichloracetát. Podle tohoto způsobu se meziprodukt

-15> 4 4 ·· • 4 4 4 4 · • β 4 4 4 • 4 4444 4

4 4 4 «44 »· * · obecného vzorce III nechá nejdříve reagovat s mírným činidlem tvořícím acylchlorid, například jako je diethylchlorfosfát nebo oxalylchlorid, čímž se získá nový chlorid kyseliny obecného vzorce IV

kde Rs'’, R₄, R_s a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, a potom s R_xXM', kde R_x a X mají výše uvedený význam, a M' je atom vodíku nebo M, kde M je vhodný kov, například alkalický kov (jako je sodík nebo draslík), kov alkalické zeminy/2 nebo thalium nebo NH₄, v inertním rozpouštědle (například v CHC1₃, THF, acetonitrilu nebo DMF), při teplotě mezi asi 0 °C a teplotou varu rozpouštědla, po dobu 1 až 6 hodin, čímž se získá, odpovídající sloučenina obecného vzorce I. Používá-li se sloučenina obecného vzorce RjXM, kde M' je atom vodíku, je v reakčním systému s výhodou přítomna látka vázající kyselinu, jako je triethylamin. Tyto dva stupně tohoto způsobu mohou vhodně probíhat v témže rozpouštědle, bez isolace chloridu kyseliny obecného vzorce IV vzniklého v prvním stupni. Tento způsob je obzvláště vhodný při přípravě sloučeniny obecného vzxorce I, kde X je S.

Pro převedení chloralkyl-17p-karboxylátu obecného vzorce I na odpovídající fluoralkylový derivát lze použít reakci výměny halogenu založenou na relativních rozpoustnostech. Při této reakci lze použít fluorid stříbrný, přičemž reakce se provádí ve vhodném organickém rozpouštědle (například v « ·

-16- .·· ··· ·’ ·» acetonitrilu) , které je zejména použitelné pří přípravě sloučenin, kde R_x je fluormethyl nebo fluorethyl.

21-hydroxypregnenolony, ze kterých se připravují výchozí steroidni sloučeniny obecného vzorce II, lze získat komerčně nebo je lze připravit známými způsoby. Rovněž tak nesteroidní výchozí sloučeniny používané v různých výše diskutovaných postupech jsou komerčně dostupné nebo je lze připravit známými chemickými postupy.

Také se může výchozí sloučenina obecného vzorce II nechat reagovat s dichloracetylchloridem, čímž se získá meziprodukt obecného vzorce V

OCCHCI2

(v) kde R₃, R₄, R_s a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam, který lze převést na odpovídající meziprodukt obecného vzorce III částečnou hydrolysou, s isolací nebo bez isolace sloučeniny obecného vzorce V. Tato reakce výchozí sloučeniny obecného vzorce II s dichloracetylchloridem se může provádět za stejných podmínek jako reakce sloučeniny obecného vzorce II s dichloracetylchloridem, jak byla popsána výše, s výjimkou toho, že se dichloracetylchlorid použije v množství 2 molů nebo více na jeden mol sloučeniny obecného vzorce II. Částečnou hydrolysu vzniklé, sloučeniny obecného vzorce V lze provádět v inertním rozpouštědle v přítomnosti katalysátoru. Jako příklady vhodných katalysátoru lze uvést terciární alkylaminy, jako je triethylamin, trimethylamin nebo pod.,

aromatické aminy, jako je pyridin, 4,4-dimethylaminopyridin, chinolin nebo pod., sekundární alkylaminy, jako je diethylamin, dimethylamin nebo pod. a anorganické base, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydrogenuhličitan draselný nebo pod.. S výhodou se používají pyridin a hydrogenuhličitan draselný. Jako příklady vhodných inertních rozpouštědel pro použití při hydrolyse lze uvést vodu, nižší alkoholy, jako je ethanol, methanol nebo pod., ethery, jako je dimethylether, diethylether, dimethoxyethán, dioxan, tetrahydrofuran nebo pod., halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform nebo pod., terciární aminy, jako je pyridin, triethylamin nebo pod., nebo směs dvou nebo více výše uvedených rozpouštědel. Reakce se obvykle provádí při teplotě od asi 0 do 100 °C, s výhodou při teplotě místnosti až 5 0 °C, po dobu 1 až, 48 hodin, s výhodou po dobu 2 až 5 hodin.

Dále jsou podstatou vynáelzu nové sloučeniny obecného vzorce Ic

í *5 kde R_x, R₃, R„,. R_s, X a čárkovaná přímka v kruhu A mají výše uvedený význam u obecného vzorce I. 11-ketosloučeniny obecného vzorce Ic lze připravit postupy výše popsanými pro přípravu odpovídajících Ιΐβ-hydroxysloučenin obecného vzorce I. Tak se výchozí sloučenina odpovídající obecnému vzorci II, ale která má 11-ketoskupinu, nechá reagovat s dichloracetylchloridem, čímž se získá odpovídající nový meziprodukt obecného vzorce

18III nebo V, ale který má 11-ketoskupinu, který se potom může nechat reagovat, jak je výše popsáno pro Ιΐβ-hydroxysloučeninu, čímž se nakonec získá sloučenina obecného vzorce I, kde Z je karbonylová skupina (to je sloučenina obecného vzorce Ic). Všechny reakční podmínky jsou stejné, jak je výše popsáno pro odpovídající . způsoby přípravy odpovídajících Ιΐβ-hydroxysloučenin obecného vzorce I. Také příprava sloučenin obecného vzorce Ic, kde R_x je seskupení obsahující sulfinylovou nebo sulfonylovou část, nebo kde R₃ je hydroxyskupina, obecně probíhá v konečném stupni syntesy analogicky, jak je popsáno pro odpovídající Ιΐβ-hydroxysloučeniny obecného vzorce I.

Obdobné lze sloučeniny obecného vzorce I, kde Z je β-chlormethylenová skupina, snadno připravit analogickými postupy, které byly použity pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina nebo karbonylová skupina.

Kromě toho lze 11-ketosloučeniny obecného vzorce Ic připravit reakcí odpovídajících Ιΐβ-hydroxysloučenin obecného vzorce I s oxidačním činidlem. Oxidace Ιΐβ-hydroxysloučeniny obecného vzorce I za účelem převedení na odpovídající sloučeninu obecného vzorce Ic se obvykle provádí za- použití oxidačního činidla v příslušném rozpouštědle. Rozpouštědlem může být jakékoliv běžné rozpouštědlo, například voda, organická kyselina (například kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina trifluoroctová), alkohol (například methanol, ethanol), halogenovaný uhlovodík (například chloroform, methylenchlorid), nebo pod.. Oxidačním činidlem může být také jakékoliv běžné činidlo, které účinně oxiduje hydroxyskupinu na karbonylovou skupinu, například pyridiniumchlorchromát, oxid chromový v pyridinu, peroxid vodíku, dvoj chromová kyselina, dvojchromany (například dvojchroman sodný, dvojchroman draselný), kyselina manganistá, manganistany (například manganistan sodný, manganistan draselný) nebo pod..

-19«· ·· ř · · · ► fc «· fc· · fc 4 • · 4 • · ··

Oxidační činidlo se obvykle . používá v množství 1 mol nebo více, s výhodou 1 až 3 moly, na mol Ιΐβ-hydroxysloučeniny obecného vzorce I. Reakce se obvykle provádí při teplotě 0 až 40 °C, s výhodou při teplotě místnosti, po. dobu asi δ až 30 hodin.

Nové sloučeniny obecného vzorce Ic se používají nejen jako steroidní protizánětlivá činidla, ale také jako in vivo nebo in vitro prekursory odpovídájích Ιΐβ-hydroxysloučenin. Tak se mohou sloučeniny obecného vzorce Ic redukovat in vitro, čímž vzniknou odpovídající 1ΐβ-hydroxysloučeniny obecného vzorce I, za použití redukčních činidel, která jsou známá schopností redukovat 11-oxoskupinu na Ιΐβ-hydroxyskupinu, aniž by se modifikoval zbytek steroidní výchozí sloučeniny. Pro provedení požadovaného převedení je typicky výhodná mikrobiologická redukce, i když chemická redukce je také možná. Dále lze sloučeniny obecného vzorce Ic formulovat do příslušných dávkových forem (například retenčních klystýrů) pro ošetřování stavů, jako je vředová kolitida. Předpokládá se, že v těchto dávkových formách se sloučeniny obecného vzorce Ic mikrobiologicky . redukují bakteriemi v těle (například v tlustém střevě) na vysoce účinné Ιΐβ-hydroxysteroidy, které vyvolávají požadovanou protizánětlivou odezvu.

Výhodnými sloučeninami obecného vzorce Ic jsou ty, které jsou prekursory výhodných sloučenin obecného vzorce I, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina. Specielně výhodnou skupinu sloučenin obecného vzorce Ic tvoří ty sloučeniny, kde X a R_x mají význam uvedený u obecného vzorce I a zbylé strukturní proměnné jsou identické s těmi v odpovídajících polohách kortisonu (to je kde R₃, R₄ a R₅ jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nasycená), prednisonu (to je kde R₃, R₄ a R_s jsou každý atom vodíku a 1,2-vazba je nenasycená), nebo jejich 6aa/nebo .9a-fluorovaných analogů, včetně 16a-methyl- a Ιδβ-methylsloučenin, jako jsou betamethason a dexamethason, zejména když R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4

4 4 · • 4 44

4 4 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina. Obzvláště výhodnými jsou deriváty, kde X je atom kyslíku.

Výsledky různých studií účinnosti representativních sloučenin podle vynálezu, které jsou detailně diskutovány níže, jasně ukazují silnou protizánětlivou účinnost a minimální systemickou účinnost/toxicitu sloučenin obecného vzorce I. Z hlediska požadovaného therapeutického indexu, to je oddělení lokální a systemické účinnosti, lze sloučeniny podle vynálezu používat pro ošetřování topických nebo jiných lokalizovaných zánětlivých stavů, aniž by docházelo k vážným systemickým vedlejším účinkům,, které jsou charakteristicky vykazovány známými přírodními a syntetickými glukokortikosteroidy, jako jsou kortison, hydrokortison, hydrokortison-17a-butyrát, betamethason-17-valerát, triamcinolon, betamethason-dipropionát a pod.. Studie vazby na receptor, také diskutované níže, ukazují, že sloučeniny podle vynálezu mají vynikající vlastnosti vazby na receptor. Dále testování vasokonstrikce u lidí, také popsané níže, ukazuje, že tyto sloučeniny jsoui silné a dlouhopůsobící. Další testy ukazují, že sloučeniny obecného vzorce I vykazují také požadovanou úroveň stability.

Aniž by bylo třeba vázat se na určitou teorii, předpokládá se, že výhodné vlastnosti sloučenin podle vynálezu jsou spojeny se způsobem, jakým se metabolizují. Navzdory bráněné povaze 17a-dichloracetoxyskupiny bylo překvapivě zjištěno in vivo a v testech krve, že 17a-skupina se přednostně a rychle hydrolysuje, čímž se získá alkylester 17a-hydroxy-17p~karboxylové kyseliny, který se potom hydrolysuje za vzniku netoxické kortienové kyseliny nebo jejího analogu. To je v protikladu k metabolizmu jednoduchých alkylesterů 17a-alkanoyloxy-17p-karboxylové kyseliny, kde probíhá nejdříve hydrolysa 17p-skupiny, čímž vznikne 17a-alkanoyloxy-17P~karboxylová kyselina, která se může podrobit intramolekulárnímu přenosu skupiny acylové části do • 0 • 9· • 9 9 «

• 9 • 09 0·· 00

-219 9 0 9

9 9 ·

99· 9 9 · · • 9 9 9

Ιϊβ-polohy, čímž vznikne reaktivní smíšený anhydrid podle schématu:

Test ušního edému í

> Při ošetřování skupin myší se vybraná množství testované ₄ sloučeniny rozpustí v acetonu obsahujícím 5 % krotonového oleje a potom se aplikuje každé myši 50 mikrolitrů tohoto roztoku na vnitřní povrch pravého ucha. Kontrolní skupina myší se stejně ošetří pouze vehikulem, to je 5% krotonovým olejem v acetonu. Šest hodin po aplikaci krotonového oleje se měří tlouštíka každého ucha. Výsledky testů representativní sloučeniny podle vynálezu, to je methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fl'uor-l.lp-hydroxy-16a-methylandrosta-l, 4-άΐβη-3-οη-17β·karboxylátu, ukazují inhibici otékání z 37,4 % a z 92,1 %

při dávkách	10 μρ/πιΐ a 100 μ9/πι1.	Tyto	výsledky	se
signifikantně	odlišují od kontrolních	hodnot,	p<0,001	a
prokazují, že	representativní sloučenina	podle	vynálezu	má

silnou lokální protizánětlivou účinnost.

*

Test vážení kůže . Samci krys Sprague-Dawley o hmotnosti asi 210 g,.se lehce anestetizují etherem, oholí se a označí se na třech místech každého boku intradermální injekcí modrého inkoustu. Plochy na každém pravém boku slouží jako neošetřené kontroly, zatímco plochy na každém levém boku se topicky ošetří 0,1% roztoky vybrané testované sloučeniny v N,N-dimethylformamidu (DMF). Kontrolní zvířata byla ošetřována denně topickou aplikací samotného vehikula (DMF). Rozpouštědlo a roztoky testované sloučeniny (10 μΐ) se aplikují jednou za den po 10 po sobě • φ · ·

-22«

následujících dnů, v případě nutnosti za opětovného oholení. Jedenáctý den se zvířata zabijí, jejich kůže se odstraní a z každé ošetřované plochy se vyjmou kotoučky o průměru 16 mm. Kotoučky se opatrně zbaví podkožního tuku a svaloviny a potom se vysuší na filtračním papíru a zváží se. Výsledky jsou shrnuty v tabulce I níže. Atrofie kůže je známým vedlejším účinkem spojeným s topickou aplikací protizánětlivých steroidů. Výsledky ukazují, že representativní sloučenina, i když je ve skutečnosti více účinná než hydrokortison-17-butyrát, působí méně kožní atrofie.

«

•23· • · · ·· b>

g ·· ·· • · · ♦ • » · · »· · · · • « · »· ·*

H (O Ni I—I

Eh

Ni

Al n:

Ή tí '3

N

O >P

4-)

Φ >3

O

O

4d 'Φ

Ni ϋ

-P

O

-P u

Φ d

Ό o

t-1 o

Φ >N •3

N

4->

cn

O d

-P o

Φ >N •3 n:

'Φ

Ni rd >

4J m

o tí

4-) o

g

Ni Ή rP 4-> N O P g Λ jd

Ni

Φ

4-) m

•3

P

Ή

	4->
4-1	3
Φ	>P
>U	Ή
O	N
3	M
Ή	íO
d	Ni
d	N
φ	'f0
xs	Xi

d

Ni

Φ d

•H >0 o

Ή d

φ >p

4-1 φ

>3 o

úbytek%		kO í—1 $—1	rd X co rd	21,2
			-X	*
		-X	-X	X
		X	-X	X
	o	l>	140	co
	X	X	X	X
•	CM	rd	rd	CM
>P	+1	+1	+1	+1
4-1	CO	00	CO	CM
Φ	V	X	X	X
>3	σ	N	kO	co
O	σ	co	00	N
3
o\°
Ni		CM		cd
Φ		X.	•XT*	X
-U		rd	i—1	σ
>1		tP		rd
32
'3
	o	σ	N	04
>P	X	X	X	X
4-1	n			kO
Φ	+1	+1	+1	+1
>3	N	co	o	kO
O	X	X	X	X
Φ	co	Χφ	CM	[>
d	00	N	N	kO
				*
				-X
				X
	o	Cd	t—1	XŮ
	CM	co	kO	1-1
__-	+1	+1	. +1	+1
tn	o	rP	o	o
g	co	CO		σ
			140	rd
				X
				X
			kO	X
	co	rd	x	. co
	x	x	o	X
	CM		rd	CM
	+1	+1	+1	+1
	CO	co	N	CM
	X	X	X	X
tn	kO .	o	140
—'	•sf»			CM
	kO	XT1	co	140
		o	o	O
		co	co	CO
d.	ti
	s Q	rd	rd	Ϊ—t
o\°		o	o	o
	3
	1—1	ΐ—i	CM	co
	o	•	•	•
	P	>o	>υ	>υ
	4-1	3	3	3
	d	O	O	0
	0	i—1	rd	rd
	Ni	3	3	3

H co +1 φ

>p

4J

I

4-1 3 o p Ό d 3 Γ^-i >Ί

4-1

Φ g

I <o rd

I

Ni

X o

P

Ό >1

4d

I co. .

(—1 i—I I

P o

I-1

4-1

I a

σ>

i >1 4-1 '3 >1 i—I O P 4-1 d o Ni

Ni

4-i

Ni '3 rd o

o

X o

v

-X

-X

-X

140

O

O . V a

X

O

4-1

Φ

O

P

O

I-1 u

-P

Ό

I a

n i—I I

I-1

Ni

4-1

Φ g

Ni

X.

O

P

Ni

I

CO.

N d

o

I n

i d

φ •H

XJ

I

4-1 '3

P . >1

4-1

I

N rd

I d

o

Ή

4-1

P

O

Ni

O

P

Ό

Ni

4-1 '3 d o

-id o

P o 3 Ni

O

4-) d

φ o

o

P

I

N cd

I r—I

O 3 3 4-J Φ 32 O r—I o

>o

O

H

CA

CM CO >o.

o

I—I 3

-i—i

Ni d

φ >P

x) '3

-o

Ni

N

Ni

4-1

O d

X!

O >u 3 o

I—| '-3 3

Ni d

-P a

Ni

Ή d 1—i o P 4-) d o Ni

Xi

O

Ni i—I Ή Xi CM O P 'P d

4-1 d

Ni

-P

44.

-P d

tn •P tjggggsy

-249 9 9 4 ♦ · ·♦

4 4 4

4 <

»4 44

I*Test tvorby granulomu

Testovaná sloučenina se rozpustí v acetonu a alikvotní podíly s odlišujícími se koncentracemi se injikují do peletek z bavlny. Peletky se vysuší a potom se každé z testovaných krys implantuje jedna peletka pod kůži. Po šesti dnech se zvířata zabijí a zrnitá tkáň (granulom), která se vytvoří v implantované peletce a kolem ní, se vyjme, vysuší se a zváží se. Kromě toho se vyjme brzlík a nadlevinky a zváží se. Schopnost sloučeniny inhibovat tvorbu granulomu při tomto testu je přímou indikací lokální protizánětlivé účinnosti, takže čím je nižší hmotnost zrnité tkáně, tím je lepší protizánětlivá účinnost. Na druhé straně . signifikantní snížení hmotnosti brzlíku je znakem signifikatní systemické účinnosti, naopak jestliže testovaná sloučenina nesnižuje signifikantně hmotnost brzlíku ve srovnání s kontrolou, je to indikaci, že neexistují (nebo existují jen velmi minimální) systemické vedlejší účinky.

Při tomto testu vykazuje representativní sloučenina podle vynálezu, j měnovítě methyl-17a-dichloraceboxy-9 a-fluor-Ιΐβ-hydroxy-lSa-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylát, signifikantní lokální protizánětlivou účinnost při relativně mnohem nižším systemickém účinku.

Z výsledků získaných ve výše popsaném testu se vypočítají hodnoty ED_S0 a relativní účinosti representativní sloučeniny podle vynálezu a steroidů podle známého stavu techniky a tyto hodnoty jsou uvedeny v tabulce II níže. Jednomu ze steroidů podle známého stavu techniky, jmenovitě betamethason-valerátu, byla přisouzena hodnota účinnosti 100 při ED₅₀ a účinnosti ostatních sloučenin byly vyjádřeny relativně k této hodnotě.. Hodnoty' ED₅₀ jsou dávky nutné pro dosažení 50% snížení hmotnosti zrnité tkáně.

Test inhibice brzlíku

-254 4 4 4 4 44 44

4444 44 44 4444

444 4 4 44··

44·· · · · ···· ·

4 · 4 4 444

444 «4 444 444 44 44

Bylo provedeno několik dalších studií pro stanovení účinků vybrané sloučeniny podle vynálezu a steroidů podle známého stavu techniky na hmotnost brzlíku u krys po systemické aplikaci léčiva. V každé z těchto studií se použijí samci krys Sprague-Dawley. Testované sloučeniny se suspendují v 0,5% CMC (karboxymethylcelulosa) a injikují se podkožně jednou denně po tři dny. Pátý den (48 hodin po posledním ošetření) se zvířata zabijí a zjistí se hmotnost brzlíku. 24 hodin po posledním ošetření se zjistí přírůstek tělesné hmotnosti. Z výsledků testu se vypočítají hodnoty TED₄₀ (thymolytickě účinné dávky, to je dávky nutné pro dosažení 40% inhibice hmotnosti brzlíku) a relativní účinnosti representativní sloučeniny podle vynálezu a 'Srovnávacích steroidů. V tabulce II níže byla relativní účinnost pro srovnávací steroid betamethason-17-valerát při dávce TED₄₀ přisouzena hodnota 100 a účinnosti ostatních sloučenin byly vyjádřeny relativně k této hodnotě. Je .zřejmé., že čím vyšší je inhibice účinnosti brzlíku při dané dávce, tím je sloučenina více toxická.

Hodnoty ED₅₀ vypočtené pro test lokálního granulomu peletky z bavlny a hodnoty TED₄₀ vypočtené na podkladě testu inhibice brzlíku, jak bylo popsáno výše, se použijí pro stanovení relativní účinnosti a therapeutického indexu . pro representativní sloučeniny podle vynálezu ve srovnání se steroidy známými ze stavu techniky. Viz tabulka II níže, která jasné ukazuje silnou protizánětlivou účinnost a minimální systemickou toxicitu representativní sloučeniny podle vynálezu.

Tabulka II

Srovnání lokálního účinku a systemických vedlejších účinků

testovaná sloučenina	granulom relativní účinnost při EDS0 hladina(a)	thymolysa relativní účinnost při ED40 hladina(b)	therapeutický index (a/b)
methyl-17a-dichloracetoxy9a-fluor-lip-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3on-17p-karboxylát	1 107	156	7,1
hydrokortison-17-butyrát	70	57	1,23
clobetisol-17-propionát	2 965	1 927	1,54
betamethason-valerát — - . - . «	100	100	1 ,

Další representativní sloučeniny podle vynálezu byly testovány v různých testech stability a studiiích vazby na receptory, jakož i v testech vasokonstrikce u lidí, což je detailně popsáno níže.

Studie stability

Analytická metoda

Pro kvantitativní stanovení následujících sloučenin podle vynálezu byla vyvinuta metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC):

testovaná sloučenina	chemický název
A	me t hy1-17a-dichloracet oxy-11β-hydroxyandros t a-1,4 dien-3-on-17β-karboxylát
B	ethyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4dien-3-on-17β-karboxylát
C	isopropyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta- 1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
D	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4 -dien- 3 -on- 17β^πΛοχγ^0

Toto jsou výhodné sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce Ia, který byl již dříve v popisu uveden.

·· ♦· • # · · • · ··

9 9 9

9 9

99

sloučenina vzorce la	poločas	minuty)	při uvedených pH
č.	Ru	4,5	6,56	7,4	8,08	9
A	ch3	*	1 146	202	21	4,25
B	ch2ch3	*	1 004	305	52	8,67
C	CH(CH3) 2	*	680	974 '	125	16,2
. D	. CH2C1	841	49,3	13,9	2,9	1,07

* žádná degradace nepozorována ve dvou dnech

Stabilita v biologickém prostředí

0,2 ml alikvotní podíly zásobního roztoku (1 mM) každé testované sloučeniny A, B, C a D se přidají ke 2 ml každého biologického prostředí (plně heparinisovaná krysí krev, 20% homogenát z krysích jater a 6 objemy zředěný homogenát z plic v isotonickém pufru pH 7,40 vzniklého.smísením 0,05. M Na₂HPO₄ a 0,05 M NaH₂PO₄ s 0,05 M NaCl) , které se udržuje při teplotě 37 °C ve vodní lázni, čímž se získá konečná koncentrace 0,1 mM v každém biologickém prostředí. V příslušných ' časových intervalech se po dobu 2 hodin (při 0, 3, 5, 10, 20, 40, 60, a 120 minutách) odebírají vzorky 0,1 ml a smísí se s 0,2 ml acetonitrilu obsahujícího 5 % DMSO. Každá směs se centrifuguje a supernatant se injikuje do HPLC. Stability (t_1/2, poločasy) testovaných sloučenin v krysí krvi, homogenátu . z jater a homogenátu z plic jsou uvedeny v tabulce IV níže.

Tabulka IV

Stabilita, poločas (t_1/2, min) testovaných sloučenin ve vodném roztoku fosfátového pufru (pH 7,40) a různých biologických prostředích při teplotě 37 °C

sloučenina	vzorce la		poločas	(minuty).
č.	Ru	pufr	krev	játra	plíce
A	ch3	201,9	26,9	3,7	43,1

-29·· ·· » · · « » · *· ··· 9 41 • · « • ·

B	CH2CH3	304,8	77,4	18,8	137,2
C	CH(CH3)2	657,6	106,9	29,3	170,4
D	ch2ci	13,9	11,6	7,6	52,4

Stabilita v cytosolu

Pro stanovení, že sloučeniny podle vynálezu mohou být stabilní během inkubační periody, se testované sloučeniny A, B, C a D zkoušejí na jejich stabilitu při inkubačních podmínkách pro studie vazby na receptor, což je teplota místnosti a doba 2 hodin, připraven pro studie vazby na

Zmrazený cytosol, který byl receptor, se rozmrazí ve vodní lázni a zředí se 1 dílem inkubačního pufru (10 mM Tris/HCl,.10 mM molybdát. sodný a 2 mM 1,4-dithiothreitol) obsahujícího. 15 mM koncentraci enzymového inhibitoru, diisopropylfluorofosfátu. Podíly (560 μΐ) zředěného cytosolu se přidají do centrifugačních zkumavek obsahujících 80 μΐ podíly slepého inkubačního pufru místo objemu značkovací sloučeniny ( [³H]triamcinolon-acetonid), která má být použita při studiu vazby na receptor (RBS)., 80 μΐ roztoku Á^kortienové kyseliny (0,1 mM) v pufru (konečná koncentrace A¹-kort ienové kyseliny v inkubaČním prostředí je 10 nM) a 80 μΐ 100 000 nM koncentrací testovaných sloučenin v ethanolu, čímž se získá konečná koncentrace 10 OOOnM. Směs se udržuje při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. V příslušných časových intervalech (0, 05, 1, 1,5, 2 hodiny) se odebírají vzorky 0,1 ml a smísí se. s 0,2 ml acetonitrilu obsahujícího 5 % DMSO. Každá směs se centrifuguje a supernatant se injikuje do HPLC. Stability (% zůstávající po inkubaci) testovaných sloučenin v cytosolu za různých podmínek jsou uvedeny v tabulce V.

Tabulka V

Stabilita testovaných sloučenin v inkubačním prostředí

-30<·· • · • · · · · • · ·· • · ·· ·· ·· ·· · · · · • · · · ·· • · · ··· · · • · · · · ··· ··· ·· ··

sloučenina vzorce Ia	% zbývající po 2 hodinách inkubace
V* c.	Rn
A	ch3	75,1
B	ch2ch3	100
C	CH (CH3) 2	10 0
D	CH2Cl	70,6

Další studie stability a metabolismu

Analytická metoda

Pro stanovení následujících sloučenin byla vyvinuta metoda vysoceúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) pracující za teploty místnosti:

?—^R13

(VII)

slouč. vz. VII	Rl3	R-21	R33	R43
B	ch2ch3	cochci2	H	H
F	ch2ch3	H	H	H
' H	H	COCHC12	H	H
I	CH3	cochci2	ch3	F
J	ch2ch3	cochci2	ch3	F
L	H	cochci2	ch3	F
M	CH2CH3	H	ch3	F
N	H	COCHC12	ch3	F
0	ch3	H	ch3	F

• · • ·

-31• · ·· • · · · · • · · ·· ··

Waters NOVA-PAK fenylová kolona se připojí na Spectra Physics HPLC systém sestávající z SP 8810 isokratické pumpy, injektoru Rheodyne 7125 (injekční objem 20 μΐ) , SP 8450 UV/VIS detektoru s proměnlivou vlnovou délkou (pracujícího při 254 nm) a SP 4270 intergátoru. Mobilní fáze sestává z acetonitrilu, vody a kyseliny octové v objemovém poměru 40:60:0,1 a pracuje při průtokové rychlosti 1 ml/minutu. Retenční časy sloučeniny B podle vynálezu a jejích metabolitů F a H jsou 6,32, 2,25 a 1,66 minuty. Retenční časy sloučeniny J podle vynálezu a jejích metabolitů L a M jsou 8,64, 2,70 a 2,45 minuty. Retenční časy sloučeniny I podle vynálezu a jejích metabolitů N a O jsou 5,84, 2,70 a 1,81 minuty. Retenční.čas kortienové kyseliny je 1,00 minuty.

Stabilita v lidském nebo krysím plasmatu

Použijí se čerstvě odebrané lidské nebo krysí plasma. K předhřátému plasmatu (37 °C) se přidá alikvotní podíl 10 mM roztoku testované sloučeniny v ethanolu, čímž se získá konečná koncentrace 100 mM. V příslušných časových intervalech se odebírají vzorky (0,1 ml) a smísí se s 0,2 ml 5% roztoku dimethylsulfoxidu a acetonitrilu. Směsi se centrifugují a supernatant se analysuje pomocí HPLC. Rychlostní konstanta pseudo-prvního řádu úbytku sloučeniny v biologickém prostředí se stanoví lineární regresní analysou z grafické závislosti log plochy píku a výšky píku oproti času.

Stabilita se hodnotí rychlostní konstantou pseudo-prvního řádu (k, h'¹) a poločasem (t_1/2, h) úbytku sloučeniny v prostředí. Výsledky jsou shrnuty v tabulkách VI a VII níže.

Tabulka VI

Stabilita sloučenin podle vynálezu v lidském plasmatu při teplotě 37 °C

testovaná slouč.	k, h1	t-l/2/ Ů	r
B	0,138	5,03	0,970

I	0,0633	10,94	0,994
J	0,0173	40,01	0,989

Tabulka.VII

Stabilita sloučenin podle vynálezu v krysím plasmatu při teplotě 37 °C

testovaná slouč.	k, h'1	t-l/2, h	r
B	0,136	5,08	0,999
I	0,0702	9,88	0,999
J	0,017	40,73	0,996 .

Kinetická data generovaná následujícím úbytkem sloučenin podle vynálezu pomocí HPLC dokazují tvorbu všech očekávaných metabolitů, to je následujících sloučenin obecného vzorce VII, ve . kterých R₁₃ je Η (H, L, N) a sloučenin, ve kterých R₂₃ je H (F, M, _; 0), jakož i elementárních metabolitů, ve kterých R_n je K a R₂₃ je H (kortíencvá kyselina a odpovídající 9a-fluor-16a-methylkyselina).

Studie vazby na receptor

Materiály

Neznačené chemikálie jsou od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Radioaktivně značenou sloučeninu, to je 1,2,4-[³H] -tríamcinolon-acetonid (45 Ci/mmol) lze koupit od firmy New England Nuclear (Boston, MA). Rozpouštědla pro mobilní fáze jsou HPLC kvality, která je ověřena ACS.

Zařízení

Pro studie vazby na receptor se použijí následující zařízení: homogenizér T line Laboratory (Talboys Engineering Corp., Emerson, NJ) , homogenizér Virtis 45 (The Virtis Co. , Gardiner, NY) , ultracentrifuga Beckman L8-70 M s rotorem T-170 (Palo Alto, CA), centrifuga Fischer Micro, model 235 C (Fischer Scientific Co., Fairlawn, NJ) , počítač pro kapalné vzorky Beckman LS 500 TD (Fullerton, CA).

♦·

Příprava cytosolu

Použijí se samci krys Sprague-Dawley, každá o hmotnosti 150 až 2 00 g, 6 dnů po odnětí nadledvinek. Krysy se usmrtí dekapitací. Ihned po resekci plic se tkáň zmrazí v ledu. Cytosol se připraví za použití mírně modifikované již dříve popsané metody (Dahlberg, 1984). Po přidání 6 objemů ledově studeného inkubačního pufru (10 mM Tris/HCl, 10 mM molybdát sodný a 2 mM 1,4-dithiothreitol) se tkáň homogenisuje v homogeniséru Virtis 45 při plné rychlosti, po 4 desetisekundových periodách s desetisekundovým chlazením mezi každým stupněm. Homogenát se centrifuguje při 3 5 000 g po dobu 1 hodiny při teplotě 4 °C v ultracentrifuze Beckman L.8-70M vybavené rotorem T170. Podíly (5 ml) cytosolu se zmrazí v kapalném dusíku a skladují se při teplotě -80 °C.

Studie vazby

V těchto studiích se zkoumají následující sloučeniny A, B, C a D podle vynálezu a jejich předpokládané metabolity E, F, G a H:

OR

(VIII)

slouč. vzorce VIII	K-12	F-22
A .	ch3	cochci2
B	ch2ch3	cochci2
C	ch(ch3)2	cochci2
D	ch2ci	COCHC12
E	ch3	H
F	ch2ch3	H

• ·

G	CH(CH3)2	H
H	H	COCHC12

Representativní sloučeniny podle vynálezu (A, B, C a D) , jejich metabolity (E, F, G a H) , dexamethason a triamcinolon-acetonid se každá rozpustí v absolutním ethanolu, čímž se získají 1 mM koncentrace a zředí se za vzniku různých koncentrací v rozmezí 300 000 nM až 10 nM pomocí 40% ethanolu ve vodě. Cytosol se rozmrazí ve vodní lázni a zředí se 1 dílem inkubačního pufru obsahujícího 15 mM koncentraci diisopropylfluorofosfátu. Podíly (140 μΐ) zředěného cytosolu se přidají do centrifugačních zkumavek obsahujících 20 zásobního roztoku [³H] triamcinolon-acetonidu v μΐ podíly inkubačním pufru (konečná koncentrace značkovací sloučeniny v každém inkubačním prostředí je 10 nM) , 20 μΐ roztoku Á¹-kortienové kyseliny (0,1 mM) v pufru (konečná koncentrace Δ¹-kortienové kyseliny v inkubačním prostředí je 10 nM) a 2 0 μΐ různých koncentrací zkoušených látek (sloučeniny podle vynálezu A, B, a H, dexamethason a 2 hodinách inkubační se odstraní nevázané

C a D, jejich metabolity E, F, G triameinolon-acetonid) v ethanolu. Po periody při teplotě místnosti (24 °C) steroidy přidáním 2% suspense aktivovaného aktivního uhlí v inkubačním pufru (4 00 μΐ) . Směs se inkubuje po dobu 5 minut při teplotě místnosti a potom se centrifuguje při 10 000 g po dobu 3 minut v mikrocentrifuze. Radioaktivita (cpm) v supernatantu (400 μΐ) se stanoví kapalinovým scintilačním počítačem. Nespecifická vazba se stanoví v přítomnosti neznačeného dexamethasonu (10'^s) a ve všech případech je méně než 10 % celkové vazby.

Hodnota IC_S0 zkoumaného steroidu (koncentrace sloučeniny nutná k vytěsnění 50 vazby [³H] triamcinolon-acetonidu) a faktor sklonu vzniklé křivky se stanoví metodou nelineárního prokládání bodů regresní křivkou za použití NON-LIN modulu verse Macintosh SYSTAT. Data odpovídají následující logistické funkci:

B = T - T x C^N/ (C^N + IC_S0 ^N) + NS, kde B = CPM v přítomnosti zkoumané látky, T = CPM bez přítomnosti zkoumané látky, C = koncentrace zkoumané látky, N = faktor sklonu Hill a NS = cpm za nespecifických podmínek vazby. Vzniklá hodnota IC₅₀ se převede na relativní vazebnou afinitu (RBA) za použití dexamethasonu (RBA = 100) jako srovnávacího standardu:

RBA(X) = IC₅₀ (dexamethason)/IC_5Q (X) x 100 Vazebné afinity na receptor (RBA) representativních sloučenin podle vynálezu A, B, C a D a jejich předpokládaných metabolitů E, F, G a H pro krysí plicní glukokortikoidní receptor jsou uvedeny v tabulce VIII níže.

Tabulka VIII

Relativní vazebné afinity (RBA) testovaných sloučenin

testovaná sloučenina	ICS0	RBAa
A	49,45	165
B	40,06	204
C	'69,77	117
D	11,93	684
E	>2000	<1
F	>2000	<1
G	>2000	<1
H	>2000	<2
dexamethason	81,61	100
triamcinolon-acetonid	13	628

^a relativní vazebná afinita vzhledem k dexamethasonu (RBA 100 )

Při tomto testovacím postupu má další representativní sloučenina podle vynálezu, methyl-17cc-dichloracetoxy-9á-f luor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát,

-36ί 4 4 * ί 4 ·4

4 4 <

RBA 495. Loteprednol-etabonát má RBA 420. Naproti tomu bylo zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce VI, kde R₁₂ je ethylová skupina a R₂ je nižší alkanoylová skupina, to je dobře známé alkyl-17a-alkanoyloxy-17p-karboxylátové analogy sloučenin .podle vynálezu mají hodnoty RBA menší než 1.

Účinek A¹-kortienové kyseliny na vazebné afinity na receptor

Pro representativní sloučeninu B podle vynálezu se zkoumá vazebná afinita na receptor s A¹-kortienovou kyselinou a bez ní v inkubačním roztoku, čímž se sleduje účinek A¹-kortienové kyseliny na vazebnou afinitu na receptor. Výsledky jsou uvedeny v tabulce IX níže.

Tabulka IX

Srovnání vazebných afinit na receptor (RBA) ve studii vazebné afinity na receptor sloučeniny B s a bez A¹-kortienové kyseliny

podmínky	vazebná afinita na receptor
s A1-kortienovou kyselinou	204
bez A1-kortienové kyseliny	181

Loteprednol-etabonát má RBA bez A¹-kortienové kyseliny 152, zatímco s A¹-kortlenovou kyselinou 420. Na rozdíl od loteprednol-etabonátu sloučeniny podle vynálezu se neváží na transkortin. Následkem toho sloučeniny podle vynálezu jsou mnohem aktivnější k požadované enzymatické deaktivaci, což dále zvyšuje jejich vlastnost nepřítomných nežádoucích vedlejších účinků.

Další studie vazby na receptor

Další studie vyhodnocují relativní vazebné afinity sloučenin podle vynálezu, dalších výše uvedených sloučenin obecného vzorce VII a známých protizánětlivých steroidů za použití výše popsaných studií vazby nareceptor. Ze známých steroidů byly testovány dexamethason, triamcinolon-acetonid,

• · « *

-37fluorometholon a betamethason-17-valerát. Ze sloučenin podle vynálezu byly testovány výše uvedené sloučeniny A, B, C, D, I a J. Pro účely srovnání byla také testována následující sloučenina obecného vzorce VII:

slouč. vzorce VII	Rl3	R-23	R33	R43
P	ch2ch3	coch2:ch3	H	H

Výsledky jsou uvedeny v tabulce X níže.

Tabulka X

Relativní vazebné afinity (RBA) testovaných sloučenin

testovaná sloučenina	RBA	% zbylá po inkubaci
dexamethason	100
triamcinolon- acetonid	630-
fluorometholon	136+5*
betamethason- 17-valerát	1742±13O*
A	165	75 %
B	222±16*	75 %
C	117	>90 %
D	684	70 %
I	1745±185*	>90 %
J	687±49*	>90 %
P	38	>90 %

průměr + SE 3 až 5 výsledků

Test vasokonstrikce u lidí

Testované sloučeniny (10 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1) a 50 μΐ směsi se aplikuje na kruhovou nálast, 8 mm v průměru. Po odpaření ethanolu se náplasti aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a pokryjí

-38• 4 4 · • 4 4 4

4 4 *

4 4 «4 4 4

Intensita odstranění a 4 * · • · · • 4· ··· se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin, vasokonstrikce se hodnotí 1, 8, 17 a 24 hodin po náplasti.

Odstupňovaná škála vasokonstrikční účinnosti je následující: 0 je normální kůže, 1 je mírná bledost nezřetelného obrysu, 2 je bledost s alespoň dvěma obrysovými jádry, 3 je stejnoměrná bledost s jasným obrysem v aplikovaných místech, 4 je velmi intensivní bledost.

Tabulka XI

Vasokonscrikční účinnost dexamethasonu, loteprednol-etabonátu a různých sloučenin obecného vzorce la

doba (hodiny)	1	8	17	24
dexamethason- vzorek 1	0	2_	-i X	1
dexamethason- vzorek 2 i	0	1·	1	1
loteprednol-etabonát vzorek 1	2	3	2 •	2
loteprednol-etabonát vzorek 2	2	2	2	1
A	2	4	4	4
B - vzorek 1	3	4	4	4
B - vzorek 2	3	4	4	4
C	3	4	3	2
D - vzorek 1 '	3	4	3	2
D - vzorek 2	3	4	3	2

Protože stupeň bledosti závisí jak na vlastní síle testované sloučeniny tak na množství sloučeniny působící na místech účinku, lze učinit závěr, že representativní sloučeniny podle vynálezu jsou silnými a dlouhopůsobícími topickými protizánětlivými činidly s dobrým pronikáním.

Další testování vasokonstrikce u lidí

Metoda 1

-39«9 ··

Testované sloučeniny (0,1 až 10 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1), čímž se získá čirá směs. Tyto směsi se v 50 μΐ množstvích aplikují na kulaté náplasti (8 mm v průměru). Po odpaření ethanolu se náplasti aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a pokryjí se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin. Intensita vasokonstrikce (škála 0 až 4) se vyhodnocuje v různých časových intervalech po odstranění náplasti. Odstupňovaná škála je následující: 0 je normální kůže, 1 je mírná bledost nezřetelného obrysu, 2 je bledost s alespoň dvěma obrysovými jádry, 3 je stejnoměrná bledost s jasným obrysem v aplikovaných místech, 4 je velmi intensivní bledost. Testy kůže (2 až 4 testy pro každou sloučeninu) se provádějí na tomtéž člověku. Výsledky jsou shrnuty v tabulkách XII a XIII níže.

Metoda 2

Testované sloučeniny (0,1 až 5 mM) se rozpustí v roztoku ethanolu a propylenglykolu (9:1) . Směsi v 20 μΐ množstvích se aplikují na kulaté náplasti (o průměru asi 6,4 mm). Náplasti se aplikují na předloktí lidských dobrovolníků a překryjí se ve vodě nerozpustným filmem na dobu 3 hodin. Vasókonstrikční účinnost se vyhodnocuje objevením se bledosti v různých časových bodech po odstranění náplastí. Testy se provádějí na témže člověku a výsledky se získají ze 2 až 4 pozorování. Výsledky jsou, shrnuty v tabulce XIV níže.

Pro účely srovnání se jako referenční sloučeniny použijí dexamethason, betamethason-17-valerát a loteprednol-etabonát. Testovány byly také následující sloučeniny obecného vzorce VII

slouč. vzorce VII	*13	*23	*33	*4 3
A	ch3	cochci2	H	H
B	ch2ch3	cochci2	H	H
C	ch(ch3)2	cochci2	H	H
D	ch2ci	cochci2	H	H
I	ch3	cochci2	ch3	F

J	ch2ch3	cochci2	ch3	F
K	ch2ci	cochci2	ch3 ;	F
P	ch2ch3	coch2ch3	H	H

Sloučeniny A, B, C a D jsou sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce la. Sloučeniny I, J a K jsou sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce Ib. Sloučenina P je 17a-nehalogenovaná alkanoyloxysloučenina vybraná pro srovnávací účely.

Tabulka XII

Vasokonstrikční účinnost po 3 a 20 hodinách (metoda 1) 3 hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
10	5	1	0,5	0,1	0, 05	0,01
de xame t ha s on	1	-	-	-	-	-	-
betamethason-17-valerát	4	3	3	2	1	1	0
lotepredncl-etabonát	4	3	3	2	1	. 0	0
A	4	-	-	-	-	-	-
B	4	3	3	2	1	1	0
C	4	-	-	-		-	-
D	4	-	-	-	-	-	-
I	4	4	4	3	2	2	1
J	4	3	3	2	2	1	0
K	-	-	-	-	-	-	-
P	-	3	2	1	0	0	0

hodin

testovaná sloučenina	koncentrace mM
10	5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
dexamethason	1	-	-	-	-	-	-
betamethason-17-valerát	2	1	1	1	1	1	0
loteprednol-etabonát	2	1	0	0	0	0	0
A	2	-	-	-		-	-
B	2	1	1	1	1	0	0
C	1	-	-	-	-	-	-

-414 4 ·

• 4

4

4 • 44

4

D	1	-	-	-	-	-	-
I	-	2	1	1	1	1	0
J	2	1	1	1	0	0	0
K	-	-	-	-	-	-	-
P	-	1	1	0	0	0	0

Tabulka XIII

Vasokonstrikční účinnost po 24 hodinách s 1 hodinovou reoklusí při 20 až 21 hodinách (metoda 1) hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace. mM
0,5	0,1	0,05	0,01
betamethason-17-valerát	2	.. o	1	1
B	2	2	1	1
I	3	3	2	1
-J	2	2	1	1
p	2	1	0 .	0

Tabulka XIV

Vasokonstrikční účinnost stanovená metodou 2 v různých časových bodech 4 hodiny

testovaná sloučenina	koncentrace,	mM
5	1	0,5	0,1	0,05-	0,01
I	+	+	+	+	-	-
J	+	+	-	-	-	-
K	+	+	-	-	-	-
betamethason-17-valerát	+	+	-	-	-	-

hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, a	íM
5	0	0,5	0,1	0, 05	0,01
I	+	+	+	+	+	-
J	+	+	+	-	-	-
K	+	+	+	+		-

»· · • · • » ♦ » ·» ··· · <

betamethason-17-valerát

+

+

+

-

-

-

Tabulka XIV - pokračování

Vasokonstrikční účinnost stanovená metodou 2 v různých časových bodech 10 až 22 hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
.5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
I	+	+	+	+	-	-
J	+	4*	+	-	, -	-
K	+	+	+	-	-	-
betamethason-17-valerát	+	+	+	-	-	-

hodin

testovaná sloučenina	koncentrace, mM
5	1	0,5	0,1	0,05	0,01
, I	+	; +	+		-	-
J	4-	+	+	-	-	-
K	+	+	+	-	-	-
betamethason-17-valerát	+	+ .	-	-	-	-

V tabulce XIV výše znamená, že byl získán negativní výsledek. V ostatních tabulkách znamená, že nebylo testováno.

Testování vasokonstrikce u lidí se používá jako index perkutánní absorpce, účinnosti a biologické dostupnosti glukokortikoidů. Srovnávají se sloučeniny podle vynálezu, strukturně příbuzné sloučeniny a známá protizánětlivá činidla. Výsledky uvedené v tabulce XII ukazují, že v době 3 hodiny a 20 hodin po odstranění náplasti vykazují sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu vasokonstrikční účinnost stejnou nebo vyšší než betamethason-17-valerát. Jednohodinová reokluse v době 20 hodin po odstranění náplasti má za následek zřetelné znovuobjevení se bledosti na kůži. Opět, jak je uvedeno v

-43i « ·♦· * tabulce XIII výše, representativní sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu vykazují vasokonstrikční účinnost stejnou nebo vyšší než betamethason-17-valerát.

V tabulce XIV výše jsou použity výsledky jednodušší metody posuzování vasokonstrikční účinnosti, při které jsou zaznamenávány pouze positivní (bledost může být pozorována) nebo negativní (bledost nelze detekovat) výsledky. Opět vykazují representativní sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu stejnou nebo vyšší účinnost než betamethason-17-valerát.

V tabulkách XII, XIII a XIV je také ukázáno, že jestliže se charateristická 17cc-dichloracetoxyskupina ve sloučeninách obecného vzorce I nahradí 17a-propionyloxyskupinou, lokální protizánětlivá účinnost se značně sníží. Tyto tabulky také ukazuji, že tyto 17ct~dichloracetoxysloučeniny vykazují obecně větší účinnost, je-li 17P-skupinou ethylester nebo methylester.

Sloučeniny obecného vzorce I lze mísit s vhodnými netoxickými farmaceuticky přijatelnými nosiči a připravit tak farmaceutické prostředky pro použití při ošetřování topickšho nebo jiného lokalisovaného zánětu. Z hlediska toho, že sloučeniny podle vynálezu nemají systemickou účinnost, se nepředpokládá jejich použití při ošetřování stavů, kdy je indikována systemická adrenokortikální therapie, to je adrenokortikální nedostatečnost. Jako příklady zánětlivých stavů, které lze ošetřovat farmaceutickými prostředky obsahujícími alespoň jednu sloučeninu podle vynálezu a jeden / nebo více farmaceutických nosičů, lze uvést následující stavy: dermatologické choroby, jako jsou atopícká dermatitida, akné, psoriasa nebo kontaktní dermatitida, alergické stavy, jako je bronchiální astma, oční a ušní choroby vyvolávající akutní nebo chronickou alergii a zánětlivé reakce (například oční zánětlivé stavy, jako jsou zánět očního víčka, zánět oční spojivky, zánět episklery, zánět bělimy, zánět rohovky, přední

-44uveitida a sympatická oftalmiě), respiračni choroby, záněty v ústech, dásních a/nebo krku, jako jsou zánět dásní nebo ústní afta, záněty nosní sliznice, například způsobené alergiemi, záněty horních a dolních vnitřností, jako je vředový zánět tlustého střeva, záněty spojené s arthritídou a anorektální záněty, svědění a bolesti spojené s hemoroidy, zánětem konečníku, kryptitidou, fisurami, pooperační bolestí a svěděním řitě. Tyto prostředky lze také aplikovat lokálně jako profylaktická opatření proti zánětům a odmítání tkáně, které nastává ve spojení s transplantáty.

Obvykle se výběr nosiče nebo nosičů a dávkových forem mění podle zvláštnosti stavu, pro který se prostředek podává.

Jako příklady různých typů prostředků pro topické/lokální podávání lze uvést masti, vodičky, krémy, prášky, kapky (například oční, ušní nebo nosní kapky), spreje (například pro nos nebo krk), čípky, retenční klystýry, žvýkací nebo cucací tablety nebo pilulky (například pro ošetření aftových vředů) a aerosoly. Masti a krémy lze například formulovat na vodném nebo olejovém základu s přidáním vhodných zahušúovacích a/nebo gelovacích činidel a/nebo glykolů. Těmito základy mohou být například voda a/nebo’ olej, jako jsou parafinový olej nebo rostlinný olej, jako arašídový olej , nebo ricínový olej, nebo glykolová rozpouštědla, jako je propylenglykol nebo 1,3-butandiol. Zahušúovacími činidly mohou být podle povahy základu měkký parafin, stearát hlinitý, cetostearylalkohol, polyethylenglykoly, tuk z vlny, hydrogenovaný lanolin a včelí vosk a/nebo glycerylmonostearát a/nebo neionogenní emulgační činidla.

Rozpustnost steroidu v masti nebo krému může být zvýšena přidáním aromatického alkoholu, jako jsou benzylalkohol, fenylethylalkohol nebo fenoxyethylalkohol.

Vodičky mohou být formulovány na vodném nebo olejovém základu a obecně také obsahují jednu nebo více z následujících činidel, jmenovitě emulgační činidla, dispergační činidla,

-45• · » 4 4 «

I . · ··

4 4 4

4 «

44 suspendační činidla, zahušfovací činidla, rozpouštědla, barviva a parfémy. Prášky mohou být tvořeny pomocí jakéhokoliv vhodného práškového základu, například talku, laktosy nebo škrobu. Kapky mohou být formulovány na vodném základu, který také obsahuje jedno nebo více dispergačních činidel, suspendačních činidel nebo solubilisačních činidel atd. . Prostředky ve formě sprejů mohou být například formulovány jako aerosoly s použitím vhodných hnacích činidel, například dichlordifluormethanu nebo trichlorfluormethanu.

Rozprašovací nebo práškové přípravky lze připravovat pro orální inhalace pro ošetřování astmatu, jak je známo ze stavu techniky. Roztoky a suspense lze připravovat pro orální nebo rektální podávání pro ošetřování zánětů vnitřností, například jak je detailněji popsáno v příkladech. Parenterální/injikovatelné přípravky lze připravovat pro přímé injekce do kloubů při ošetřování arthritidy podle známých metod aplikace parenterálních přípravků.

Podíl účinné látky v prostředcích podle vynálezu se mění s použitím určité sloučeniny, typu připravovaného přípravku a podle zvláštnosti stavu, pro který mají být podávány. Přípravky obvykle obsahují od asi 0,0001 do asi 5,0 % hmotnostních sloučeniny obecného vzorce I. Topické přípravky obvykle obsahují 0,0001 až 2,5 %, s výhodou 0,01 až 0,5 %, a aplikují se jednou denně nebo podle potřeby. Obecně lze také sloučeniny podle vynálezu inkorporovat do topických a jiných lokálních prostředků připravených v podstatě tak, jako. jsou běžné dostupné známé glukokortikoidy, v přibližně stejných (nebo v případě nejúčinnějších sloučenin podle vynálezu v příslušné menších) dávkách ve srovnání se známými velmi účinnými látkami, jako jsou methylprednisolonacetát a beclomethasondiproionát nebo ve značně menších dávkách ve srovnání s méně účinnými známými látkami, jako je hydrokortison.

• ·

-46• 9 > · • ΦΦ · • · ·· ·· s odměřovanými representativní

Tak například inhalační přípravek vhodný pro ošetřování astmatu lze připravit postupy známými pro přípravu těchto farmaceutických přípravků jako aerosol jednotkovými dávkami., který obsahuje sloučeninu podle vynálezu, jako je ethyl-17a-dichloracetoxy-ll3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát nebo methyl-17a-dichloraoetoxy-9a-fluor-ll3-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát. Tento aerosolový jednotkový přípravek může obsahovat mikrokrystalickou suspensi výše uvedené sloučeniny ve vhodném hnacím činidle (například trichlorfluormethanu a dichlordifluormethanu) s olejovou kyselinou nebo s jiným vhodným dispergačním činidlem. Každá jednotka typicky obsahuje 1 až 1.0 mg výše uvedené účinné látky, přičemž se při každém použití uvolňuje přibližně 5 až 5 0 ,ug.

Dalším příkladem farmaceutického prostředku podle vynálezu je pěna vhodná pro ošetření různých zánětlj.vých anorektálních chorob, která se má 'aplikovat análně nebo perianálně a která obsahuje 0,05 až 0,1 % sloučeniny obecného vzorce I, jako je ethyl-17a-dichlořacetoxy-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylát, a 1 % lokálního anestetika, jako je pramoxinhydrochlorid, v pěnovém základu, který přilne ke sliznici, jako je propylenglykol, ethoxylovaný stearylalkohol, polyoxyethylen-10-stearylether, cetylalkohol, methylparaben, propylparaben, triethanolamin, a vodu s inertními hnacími činidly.

Dalším farmaceutickým přípravkem podle vynálezu je roztok nebo suspense vhodná pro použití jako retenční klystýr, jehož jednotková dávka obsahuje obvykle 20 až 40 mg sloučeniny podle vynálezu, jako je ethyl-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P~karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ll3-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-4Ί·*· ··· ·· ··

-ΐνβ-karboxylát, spolu s chloridem sodným, polysorbátem 80 a od 28,35 g do 170 g vody (vodu lze přidat těsně před použitím) . Suspensi - lze podávat jako retenční klystýr nebo kontinuální infusi několikrát týdně při ošetřování vředové kolitidy.

Další farmaceutické přípravky podle vynálezu jsou blíže popsány v následujících příkladech.

Předpokládá se, že podle uvedeného popisu lze plně využít rozsah předloženého vynálezu, aniž by bylo třeba provádět další práce. Proto jsou následující příklady provedení konstruovány pouze jako ilustrativní a neomezují žádným způsobem ani popis ani přiložené nároky.

V příkladech syntesy jsou všechny nesteroidní chemikálie a rozpouštědla chemické kvality. Všechny teploty tání jsou stanoveny za použití Fischer-Johnsova zařízení pro měření teploty tání a jsou nekorigovány. Data 3 00 MHz ¹H-NMR se měří za použití spektrometrů Varian T-90, QE-300 nebo . Varian

Unity-300 a jsou uvedeny v částech na milion (ppm) Ó, vzhledem k tetramethylsilanu. Elementární analysy jsou prováděny zařízením Atlantic Microlab, lne., Atlanta, Georgia USA. Hmotnostní spektra se měří za použití zařízení Kratos MFC 500 a Fast Atom Bombardment (FAB). Chromatografie v tenké vrstvě se provádí za použití Merck DC destiček s hliníkovým filmem potažených tloušúkou 0,2 mm silikagelu 60 obsahujícího fluorescenční (254) indikátor. Silikagel (velikost částic 32 až 63) lze získat od firmy Selecto Scientific.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

K	roztoku prednisolonu	(15	g-	0,04 mol) v tetrahydro-
furanu	(120 ml) a methanolu	(30	ml)	se při teplotě místnosti
přidá	teplý (přibližně 50	°C)	roztok metaperjodátu sodného

-48> · 4 · » 4 ·· • 4 · 4 ·

4 · ·· (25,7 g, 0,12 mol) ve vodě (100 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin, potom se zahustí za sníženého tlaku, čímž se odstraní tetrahydrofuran a methanol. Pevná látka se rozmělní 50 ml vody, oddělí se filtrací, promyje se několikrát vodou a suší se za sníženého tlaku při teplotě 50 °C po dobu 3 hodin. Získá se produkt,

11β,17a-dihydroxyandrosta-l,4-άίβη-3-οη-17β-^Η^οχγ1σνί kyselina 1 (která může být také označena Á¹-kortienová kyselina) , ve formě bílého prášku v přibližném výtěžku 94 % (13,5 g) , o teplotě tání 231 až 232 °C. ¹H-NMR (DMSO-d_s) δ (ppm): .5,51 (s, 1, CH=CH) , 1,41 (s, 3, 19-CH₃) , 0,92 (s,

I8-CH3) . Elementární analysa: vypočteno pro C₂₀H₂₆O_s: 69,36 C,

7,51 H, nalezeno: 69,31 C, 7,56 H. Sloučenina má strukturní vzorec

OH

Příklad 2

Náhradou prednisolonu použitého v příkladu 1 za ekvivalentní množství jedné z níže uvedených výchozích sloučenin a provedením popsaného postupu se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
fluorokortison	9a-fluor-ΐΐβ, l7a-dihydroxyandrost-4-en-3-on17p-karboxylová kyselina, t.t. 250-253 °C

44 · *	44 ··
• · ·	4 ·
4 4 4 4	4 ·
• 4 4	4 ·
4 4« 44	444 44

·· ·· • · · · • · ·· ·· · · · • · ·

4« ··

betameťhason	9a-f luor- Ιΐβ, 17cc-dihydroxy-16P-methylandrosta1,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina, t.t. 248-249 °C
dexamethason	9a-fluor-ΙΙβ,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina, t.t. 275-278,5 °C
hydrokortison	Ιΐβ,17a-díhydroxyandrost-4-en-3-οη-17βkarboxylová kyselina, t.t. 231-234 °C (t.j. kortienová kyselina)

Příklad 3

Náhradou prednisolonu použitého v příkladu 1 za ekvivalentní množství jedné z níže uvedených výchozích sloučenin a provedením popsaného postupu se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
kortison	17a-hydroxyandrosc-4-en-3,11-dion-17βkarboxylová kyselina
chloroprednison	6a-chlor-17a-hydroxyandrosta-l,4 -d.ien-3,11dion-17β-karboxylová kyselina
flumethason	6a,9a-difluor-ΐΐβ,17a-dihydroxy-16a-methylandřosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina
fluprednisolon	6a-fluor-ΐΐβ,17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien3-on-17β-karboxylová kyselina
meprednison	17α-hydroxy-16β-methylandrosta-l,4-dien-3,11dion-17β-karboxylová kyselina
methylprednisolon	Ιΐβ,17a-dihydroxy-6a-methylandrosta-l,4-dien3-on-17β-karboxylová kyselina
paramethason	6a-fluor-ΐΐβ,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta -1,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina
prednison	17a-hydroxyandrosta-l,4-dien-3,11-άίοη-17βkarboxylová kyselina
triamcinolon	9a-fluor-ΙΙβ,16a,17a-trihydroxyandrosta-l,4 dien-3-on-17p-karboxylová kyselina

·· ·· • · • · · • · · ·· ··· ··· • · ·· ··· ♦ * • · · ·· ··

isofluprednon	9a-fluor-l^,17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien3-on-17β-karboxylová kyselina
6a,9a-difluorprednisolon	6a,9a-difluor-ΙΙβ,17a-dihydroxyandrosta-l,4dien-3-on-17β-karboxylová kyselina
beclomethason	9a-chlor-l^,17α-dihydroxy-16β-methylandrosta -1,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina
9a-chlor-6-a- fluor-16a-met- hylprednisolon	9a-chlor-6a-fluor-Ιΐβ,17a-dihydroxy-16ame t hylandros 13-1,4-άίβη-3-οη-17β-karboxylová kyselina
9a-fluor-6a- methyl- prednisolon	9a-fluor-ΐΐβ,17a-dihydroxy-6a-methylandrosta1,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina
dichlorison	9a,l^-dichlor-17a-hydroxyandrosta-l,4-dien3-on-17β-karboxylová kyselina
9a-chlor-l6a- methyl- prednisolon	9a-chlor-Ιΐβ,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta -1,4-dien-3-on-17β-karboxylová kyselina

Příklad 4

11β, 17a-dihydroxyandrosta-l, 4-dien-3 ~οη~17β^ΛΖ±;οχ>'·1αΛ/ή kyselina 1. (3,12 g, 9,0 mmol) se rozpustí v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (7,56 g, 90 mmol) ve vodě (100 ml) . Přidá se methylenchlorid (100 ml) a potom tetrabutylamoniumhydrogensulfát (1,0 g). Směs se intensivně míchá a během 5 minut se po kapkách přidává dichloracetylchlorid (1,51 g, 17 mmol) v methylenchloridu (10 ml) . V míchání se pokračuje přibližně 5 hodin, potom se organická fáze oddělí a promyje se postupně 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem thiosíranu sodného. Organický roztok se vysuší síranem sodným a zahustí se za sníženého tlaku. Vzniklý surový produkt ve formě pevné látky se čistí chromatografii s elucí směsí 1:100 obj . methanolu a methylenchloridu. ¹H-NMR (DMSO-d_s) δ (ppm) : 1,00 (s, 18-CH₃) ,

1,42 (s, 19-CH₃) , 4,30 (m, 11-CH) , 5,93 (s, 4-CH) , 6,24 (m, 2-CH), 6,87 (s, COCHC1₂) , 7,30 (m, 1-CH=C) . FAB hmotnostní

• ·

I « ·· spektrum: 457 (Μ*) . Elementární analysa: vypočteno pro CjjHjgOgClj: 57,77 C, 5,69 H, 15,54 Cl, nalezeno: 56,58 C, 5,83 H, 15,14 Cl. Produkt, 17a-dichloracetoxy-ll3~hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-143~karboxylová kyselina 4, má strukturní vzorec

OH

Příklad 5

Náhradou Ιΐβ, 17a-dihydroxyandrosta-T,4-dien-3-οη-17βkarboxylové kyseliny použité v příkladu 4 za ekvivalentní množstí 9a-fluor-Ιΐβ,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta-l,4•dien-3-on-17β-karboxylové kyseliny a provedením v příkladu 4 popsaného postupu se získá 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ΙΙβhydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylová . kyselina 5, která má strukturní vzorec

OH

Čištěním surového produktu rychlou chromatografii na silikagelu směsí 10:100 methanolu' a methylenchloridu se získá

• 4 4	•	4
• · · ·	e 4	4 ·
• * f · • 4 * ·	• •	4 ·
• 4 · ··· 44	* • 4 4	• 4 4

sloučenina 5. ve výtěžku 90 %. MS: 490,7 ( [M+H] ) , 510,7 ([M+Na]).

Příklad 6 '

Provedením obecného postupu podle příkladu 4 a náhradou tam uvedených příslušných reakčních složek se získají následující nové meziprodukty obecného vzorce

	slouč. č.	r3	R<	Rs	Z	Δ
	6-1	H	H	H	OK ''c: Ή	4
	6-2	H	F	H	oíi ''c: X- ·. Ή	4
	6-3	č-ch3	F	H	X Ή	1,4
«	6-4	a-CH3	F	F	χΟΗ Ή	1,4

Sloučeniny 6-1 až 6-4 lze pojmenovat následovně:

6-1:	17cc-dichloracetoxy-ll3~hydroxyandrost-4 - en-3 - on17P~karboxylová kyselina
6-2 :	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ll3-hydroxyandrost-4- . en-3-on-17p-karboxylová kyselina

**

9 9 ·

9 9·

9 9 9

9 9

9 9.9

-53• 999

6-3 :	17a-dichloracetoxy-9α-fluor-liP-hydroxy-16Pmethylandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylová kyselina
6-4:	17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina

Příklad 7

Provedením obecného postupu podle příkladu ’4 a náhradou tam uvedených příslušných reakčních složek se získají následující nové meziprodukty obecného vzorce

OH slouč. č.

R-,

R,

7-1 _zc = o

7-2 ' 7-3

7-4

7-5

H č-ch₃ a-CH₃

H

H F

Η H

H F

Η H

OH ;c = o

OH _ZC = 0

1,4

1,4

1,4

1,4

7-6 a-OCOCHCl₂ F H

ΌΗ c:

1,4

Ή

•	7-7	Η	Η	Cl	/C = 0	1,4
	7-8	Η	Η	ch3	.OH	1,4
					Ή
	7-9	Η	F	Η	OH Ή	1,4
	7-10	Η	F	F	OH 'C Ή	1,4
*	7-11	/3-CH3	C1	Η	><0H	- 1,4
ϊ					Ή
	7-12	cc-CH3	C1	F	OH	1,4
	7-13	Η	F	ch3	Ή OK •C Ή	1,4
	7-14	Η	C1	Η	Ή	1,4
	7-15	a-CH3	C1	Η	OH-	1,4
					'Ή
	Sloučeniny	7-1 až 7-15	lze	pojmenovat	následovně ·.

7-1 :	17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3, ll-dion-17P~karboxylová kyselina
7-2 :	17a-dichloracetoxy-6a-fluor-lip-hydroxyandrosta-l,4dien-3-on-17p-karboxylová kyselina
7-3 :	17a-dichloracetoxy-16p-methylandrosta-l, 4-dien-3,11dion-17P-karboxylová kyselina
7-4 :	17a-dichloracetoxy-6a-fluor-lip-hydroxy-iea-methylandrosta-l, 4-dien-3-on-17P-karboxylová kyselina
7-5 :	17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,11-άίοη-17βkarboxylová kyselina
7-6 :	16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-liP-hydroxyandrosta- 1 ,4-dien-3-on-17p~karboxylová kyselina
7-7 :	6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3,11dion-17P~karboxylová kyselina
7-8 :	17a-dichloracetoxy-lip-hydroxy-6a-methylandrosta-1,4dien-3-on-17P-karboxylová kyselina

·· ·· « · · · • · ·· ·· · · · • · · • · «-$>

7-9 :	17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxyandrosta-l,4 - dien-3-on-17P-karboxylová kyselina
7-10 :	17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-lip-hydroxyandrosta1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina
7-11 :	9a-chlor-17a-dichloracetoxy-1iP-hydroxy-16P-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina
7-12 :	9a-chlor-l7a-dichloracetoxy-6a-fluor-llp-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina
7-13 :	17cc-dichlorac.etoxy- 9a-f luor-1 ΐβ-hydroxy-6a-methyl androsta-1,4-dien-3-on-17P~karboxylová kyselina
7-14 :	9a,lip-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3on-17P-karboxylová kyselina
7-15 :	9a-chlor-17a-dichloracetoxy-1ΐβ-hydroxy-l6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylová kyselina

Příklad 8

17a-dichloracetoxy-llp-hydroxyandrosta-.l,4-dien-3-οη-17β-karboxylová kyselina 4 (0,23 g, 0,5 mmol) se rozpustí v roztoku hydrogenuhličitanu sodného (0,2 g, 2,34 mmol) ve vodě (50 ml) . Přidá se methylenchlorid (50 ml) a potom tetrabutylamoniumhydrogensulfát (0,2 g) . Směs se intensivně míchá, přičemž se během 5 minut po kapkách přidává methyljodid (0,16 g, 1,12 mmol) v methylenchloridu (1 ml). V míchání se pokračuje přibližně 5 hodin, potom se organická fáze oddělí a. promyje se postupně 5% vodným roztokem hydřogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem thiosíranu sodného. Organický roztok se vysuší síranem sodným a zahustí se za sníženého tlaku. Vzniklý surový produkt ve formě pevné látky se čistí chromatografií, přičemž se eluuje směsí 1:200 obj . methanolu a methylenchloridu. Získá se produkt ve výtěžku 85 % (0,2 g) . Dalším čištěním rekrystalisací ze směsi n-hexanu a diethyletheru se získá methyl-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P~karboxylát 8., teploty tání 115 až 117 °C, který má strukturní vzorec

9 »9 • 9 · • · 9·· · • · och₃

¹H-NMR (CDC1₃) δ íppm): 1,02 (s, 18-CH₃) , 1,40 (s, 19-CH₃) , 3,75 (s, COOCH₃) , 4,51 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2-CH),

6,85 (s, COCHClj) , 7,30 (m, 1-CH=C) . FAB hmotnostní spektrum:

471 (M⁺) . Elementární analysa: vypočteno pro C₂₃H₂₈O₆C1₂: 58,60

C, 5,94 H, 1.5,07 Cl, nalezeno: 58,64 C, 6,15 H, 14,73 Cl.

Příklad 9

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního . množství ethyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá ethyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-l, 4-dien-3-on-17P~karboxylát 9., teploty tání 115 až 117 °C, který má strukturní vzorec

^XH-NMR (CDC1₃) δ (ppm): 1,05 (s, 18-CH₃), 1,27 (t, CH₂CH₃) , 1,37 (S, 19-CH₃) , 4,25 (s, COOCH₂) , 4,51 (m, 11-CH), 5,93 (s, 4-CH), 6,24 (m, 2-CH), 6,87 (s, COCHCIJ , 7,30 (m, 1-CH=C) . FAB hmotnostní spektrum: 485 (M⁺) . Elementární analysa: vypočteno

4«

• ·» 4 4 4	4 4	4 ·
4 4 4	4
»· ··	•
• · ·	•
44 44	44 4	4 4

» · «· · pro C₂₄H₃₀O₆Cl₂: 59,38 C, δ,19 H, 14,64 Cl, nalezeno: 59,48 C,

6,26 H, 14,72 Cl.

Příklad 10

Opakováním obecného postupu podle příkladu: 8, ale za použití ekvivalentního množství isopropyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá isopropyl-17cc-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-l, 4 -dien-3 -on-17β-karboxylát 10. teploty tání 222 až 223 °C, který má strukturní vzorec

OCH(CH₃)₂

H-NMR (CDC1₃) δ (ppm) : 1,01 (s, 18-CH₃), 1,22 (d, CH(CH₃)₂),

1,39 (s, 19-CH₃) , 4,25 (s, COOCH), 4,51 (m, 11-CH) , 5,93 (s,

4-CH), 6,24 (m, 2-CH) , 6,86 (s, COCHCIJ , 7,32 (m, 1-CH=C) . FAB hmotnostní spektrum: 499 (M⁺) . Elementární analysa: vypočteno pro C₂₅H₃₂O_SC1₂ : 60,12 C, 6,41 H, 14,23 Cl, nalezeno: 59,99 C, 6,49 H, 14,31 Cl.

Příklad 11

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití .ekvivalentního množství chlormethyljodidu místo tam použitého methyljodidu se získá chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát 11, teploty tání 122 až 123 °C, který má strukturní vzorec

^XH-NMR (CDC1₃) δ (ppm): 0,98 (s, 18-CH₃) , 1,36 (s, ’l9-CH₃) , 4,45 (m, 11-CH) , 5/76 (ABq, CH₂Cl) , 5,95 (s, 4-CH) , 6,24 (m, 2-CH), 6,89 (s, COCHC1₂) , 7,28 (m, 1-CH=C) . FAB hmotnostní spektrum:

505 (M⁺) . Elementární analysa: vypočteno pro C₂₃H₂₇O_SC1₃: 54,65

C, 5,35 H, 21,09 Cl, nalezeno: 54,61 C, 5,41 H, 20,94 Cl.

Tentýž produkt se mnohem výhodněji připraví následujícím postupem:

17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta~l,4-dien-3-οη-17β-karboxylát 4 (0,024 mol) se rozpustí ve vodě (100 ml) obsahující hydrogenuhličitan sodný (9,90 g) . Přidá se methylenchlorid (80 ml), potom tetrabutylamoniumhydrogensulfát (0,47 g, 1,18 mmol). Za intensivního míchání se během 30 minut přidává po kapkách chlormethylchlorsulfát (4,75 g, 0,029 mol) v methylenchloridu (20 ml) . Po míchání po dobu 2 hodin se organická fáze oddělí, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu za sníženého tlaku, čímž se získá surový chlormethyl-17cc-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l, 4-dien-3-on-17β-karboxylát 11. Po vyčištění chromatograf ií a rekrystalisaci podle příkladu 8 má produkt teplotu tání 122 až 123 °C.

Příklad 12

Opakováním obecného postupu podle příkladu 8, ale za použití ekvivalentního množství I7a-dichloracetoxy-9cx-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta-l, 4-dien-3-on-17β-karboxylové

kyseliny 5 místo tam použité 17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17p~karboxylové kyseliny 2 se získá methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p~karboxylát 12, která má strukturní vzorec

a který je dále charakterisován teplotou tání 248 až 251 °C.

Příklad 13

Provedením obecného postupu podle příkladu 8 a náhradou příslušných reakčních složek a získají následující sloučeniny:

-60slouč.č. Ri

Rs

R4

Rs

13-1 C₂H₅ a-CH₃ F H

13-2 iso-C₃H_{7 a}-CH₃ F H

13-3 CH₂CI ' a-CH₃ F H

13-4 CH₃ Η Η H

13-5 C->H

2ⁿ5

13-6 - 1SO-C3H7 H

13-7 CH₂C1

13-8 CH,

13-9 C₂H₅ H

I · · · · · * « · · * • « · · * φ · 9 ·

I·» » · «·· ·

OH ,OH

ΌΗ

OH «· · · *

Λ 9 99 • 4» · · * «

9 9

99

1,4

1,4

1,4

Η H .OH 4 /<

Ή

Η H /OH 4

Ή

Η H /OH 4 ''c . Ή

F H /OH 4 ''c:

OH

13-10 iso-C₃H₇ H F H ^_c/^oh

13-11 CH₂C1

F H /OH 4

Ή í -61Í!

« · » » ·· • · * « · · « • · ·· • · «·

13-12	ch3	č-ch3	F	H	°h X Ή	. 1.4
13-13	C2H5	0-ch3	F	H	°H X Ή	1,4
13-14	ÍSO-CjH-j	/3-CH3	F	H	OH X Ή	1,4
Ί3-15 X	CH2C1	3-CH3	F	Ή	OH Ή	' 1,4
13-16	ch3	a-CH3	F	F	/0H X Ή	1,4
13-17	c2h5	n-CH3	F	F	''c: Ή	1,4
13-18	íso-C3H7	a-CH3	F	F	OH X Ή	1,4
13-19	ch2ci	a-CH3	F	F	OH X Ή	1,4
13-20	ch3	H	H	H	> = 0	4
13-21	c2h5	H	H	H	> = O	4
13-22	íso-C3H7	H	H	H	> = 0	4

i

13-23

13-24

13-25

13-26 ύ,

13-27

13-28

13-29

13-30

13-31

13-32

13-33

	-62-	• ·· • * · « 9 · · • 9 · • 9 · 4»» · »	9 9 ·· « 9 · · * 9 9 < • 9 · · ♦· 9 9 9 9· «99 · ·
ch2ci	H	H	H	> = o	4
ch3	H	H	F	0H Ή	1,4
c2h5	H	H	F	OH ''C Ή	1,4
ÍSO-C3H7	H	. H	F	OH cr Ή	1,4
CH2C1	H	H	F	OH Ή	1,4
ch3	/?-CH3	H	H	> = 0	1,4
c2h5	č-ch3	H	H	)c = 0	1,4
íso-C3H7	/?-CH3	H	H	> = 0	1,4
ch2ci	0-CH3	H	H	> = 0	1,4
ch3	a-CH3	H	F	OH Ή	1,4
C2H5	a-CH3	H	F	OH X	1,4
				Ή

·«

/			-63-
	13-34	ÍSO-C3H7	a-CH3	H	F	^0H X1-.. Ή	1A
	, 13-35	CH2C1	a-CH3	H	F	OH ''c: x Ή	1A
* i	13-36	ch3	H	H	H	> = O	1A
	13-3?	c?h5	H	H	H	jc = o	1,4
	13-33	ÍSO-C3H7	H	H	H	)c = 0	1,4
	13-39	CH2C1	H	H	H	> = 0	1,4
ί	13-40	ch3	a-OCOCHCl2	F	H	OH '''CT x1— Ή	1,4
	13-41	c2h5	o:-OCOCHCI2	F	H	CH ''c; X Ή	1,4
>.	13-42	ÍSO-C3H7	a-OCOCHCl2	F	H	OH ''c: x\ Ή	1,4
ί	13-43	CH2C1	a-OCOCHCí2	F	H	OH ''C X ·. Ή	1,4
	13-44	ch3	H	H	Cl	jc = 0	1,4

-6413-IS C,H₅ Η Η CI

13-46 iso-C₃H₇ Η Η C1

13-47 CH₂C1 Η Η C1

13-4S CH₃ Η

13-49 C₂H₅ Η

13-50 iso-C₃H₇ Η

13-51 CH₂C1

13-52 CH,

13-53 C₂H₅

13-54 iso-C₃H₇ Η • * • · • φ • · φ φ · • ·Φ ,C = Ο „C = ο ,c = ο

1,4

1,4

1,4 ^Η CH₃ ._c/^oh 1,4

Η CH₃ .OH _1λ

Ή

Η CH_{3 χ}οη _1>4 Ή ^{Η CH}3 -_r/°^H Μ Ή

F Η _χοη ₁₎₄

c.

F Η /°Η _1>4

F Η .OH

Ή

1,4 • φ ·· • · φ · φ φ φφ • ···· Β • · «

ΦΦ Φ· ·· *·. » · · ’ « » ··, ·»· · <

* · « .» ··

-6513-55 CH₂CI

13-56 CH₃

13-57 C₂H₅

13-58 iso-C₃H₇

13-59 CH₂C1

13-60 CH₃

13-61 C₂H₅

13-62 iso-C₃H₇

13-63 CH₂C1

13-64 . CH₃

H

H

H

H

H /5-CH₃ j3-CH₃ /3-CH₃ č-ch₃ a-CH₃ .°H 1 4

-sp/ ^A / ·.

Ή

OH 1,4

F F /OH 1,4

X

Ή

F F /OH i4

Ή

F F /OH 1,4

Ή

Cl H /OH 1,4

Cl H ^OH 1,4 Ή

Cl H

OH 1,4

Cl H ^oh 1,4

Cl F

OH 1,4

-66»· *« : :

• · »»· ··· ·· ·· , · ·« · * · ··.

···» * • · · »» ··

	13-65	^2¾	G-CH3	Cl	F	°H X Ή	1,4
	13-66	ÍS0-C3H7	a-CH3	Cl	F	, /OH ··> -xc/ / -. Ή	1,4
0 v	13-67	CH2C1	a-CH3	Cl	F .	/θΗ /^---. Ή	1,4
*	13-68	ch3	H	F	ch3	ΟΉ ''c: Ή	1,4
	13-69	c2h5	H	F	ch3	°Η X Ή	1,4
	13-70	ÍSO-C3H7	H	F	ch3	ΟΗ Ή	1,4
	13-71	ch2ci	H	F	ch3	°Η X Ή	1,4
	13-72	ch3	H	Cl	H	X ''σ XU'·. Ή	1,4
ί i	13-73.	c2h5 .	H	Cl	H	X 'σ Ή	1,4
«	13-74	ÍSO-C3H7	H	Cl	H		1,4

Ή ~Kíříí-r

	-67-	4 ·* 44 · 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 444 44	4 4 · 4 4 444
	13-75	ch2ci	H	Cl	H	a X Ή	1,4
	13-76	ch3	a-CH3	Cl	H	oh: •cr Ή	1,4
Λ	13-77	c2h5	a-CH3	Cl .	H	OH ''C X1-.. Ή-	1,4
	13-78	ISO-C^Hy	cz-CH3	Cl	H	Oíí ''cr X1·. Ή	1,4
	13-79	ch2ci	a-CH3	Cl	H	Ofí c .s-·. Ή	1,4
	13-80	n-C3H7	H	H	H	.OH X Ή	1,4
	13-81	n-C^Hg	H	H	H	OH x'-.. Ή	1,4
	13-82	n-C3H7	H	F	H	°H x Ή	1,4
*	13-83	n-C^Hg	H	F	H	.OH X Ή	1,4
4
	13-84	n-C3H7	H	F	F	OH Ή	1,4

13-85	-68	F	F	• 99 9 9 9 9 * 9 9 9 9 · 999 99 0H Of Ή	9 * 9 · 9 9 9 9 <99 999 1,4
D.-C4H9	H
13-86	11-C3H7	H	H	F	0H Ή	1,4
13-87	11-C4H9	H	H	F	.OH· Ή	1,4
13-88	n-C3H7	a-OCOCHCl2	F	H	-N° Έ	'1,4
13-89	11-C4H9	a-OCOCHCl2	F	H	xu··. Ή	1,4
13-90	n-C3H7	H	Cl	H	.O Ή	1,4
13-91	n-C4H9	H	Cl	H	Ή	1,4
13-92	n-C3H7	H	F	ch3	OH ''c; Ή	1,4
13-93	11-C4H9	H	F	ch3	OH Ή	1,4

i:

-69• * ·· • 4 44 • 4 4 4 · ·*

4 4 4

4 4

44

Následující sloučeniny lze pojmenovat následovně:

13-1 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17P~karboxylát
13-2 :	isopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxylSa-methylandrosta-l, 4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-3 :	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-11β-hydroxylSa-methylandrosta-l , 4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-4 :	methyl-17a-dichloraeetoxy-l^-hydroxyandrost-4-en-3- on-17β-karboxylát
13-5 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrost-4 -en- 3 on-17β-karboxy1át
13-6:	isopropyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrost-4-en3-on-17β-karboxylát
13-7 :	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-llp-hydroxyandrost-4- en-3-on-17β-karboxylát
13-8:	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrost-4 -en-3 -on-17β-karboxylát
13-9 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxyandrost-4-en-3-on-17β-karboxylát
13-10:	isoprópyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxyandrost-4-en-3-on-17β-karboxylát
13-11: .	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-liP-hydroxyandrost-4-en-3-on-17β-karboxylát
13-12:	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-11β-ΗγάΓθχγ-16βmethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-13:	ethyl-17α-dichloracetoxy-9α-fluor-llβ-hydroxy-16βmethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-14:	isopropyl-l7a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy16P-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-15:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy~9a-fluor-llp-hydroxyΙδβ-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-16:	methyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-liP-hydroxy16a-methylandrosta-l, 4-dien-3 -on-17P-karboxylát
13-17:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-18:	isopropyl-l7a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-liP-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát

·· ·· • · · • φ φφ • ··· φ • · «· φφ

ΦΦ · · • · · • * · · · · · ··· ··

-70·♦· ·

13-19:	chlormethyl-17α-dichloracetoxy-6α,9a-difluor-ΐΐβhydroxy-16a-methylandrosta-l, 4 -dien-3 -on-17p-karboxylát
13-20:	methyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-άίοη-17βkarboxylát
13-21:	ethyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-άίοη-17βkarboxylát
13-22 :	isopropyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-dion17β-karboxylát
13-23 :	chlormethyl-17a-dichloracetoxyandrost-4-en-3,11-dionΐνβ-karboxylát
13-24 :	methyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3 -on-17β-Κ3^οχγ1ζύ
13-25:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l^-hydroxyandrosta-1,4 -dien-3 -οη-17β-Κ3^οχγ1ζϋ
13-26:	isopropyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-27 :	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-110-hydroxyandrosta-1,4-dien~3-on-17P-karboxylát
13-28 :	methyl-17a-dichloracetoxy-16β-methylandrosta-1,4dien-3,11-άίοη-17β^3Λοχγ11ϋ
13-29 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-16β-methylandrosta-1,4 dien-3,11^ίοη-17β^3Λοχγ1ίϋ
13-30 :	isopropyl-17a-dichloracetoxy-16β-methylandrosta-1,4 dien-3,ll-dion-17p-karboxylát
13-31:	chlormethyl-17α-άίαϊι1ο^οβ^χγ-16β-ιηβ^γΐ3ηάΓθ3ϋ3- 1,4-dien-3,ll-dion-17β-karboxylát
13-32 :	methyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-liP-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-33 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l^-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-34 :	isopropyl-17a-dichloracetoxy-6a-f luor-l^-hydroxy- 16a-methylandrosta-l, 4-dien-3 -οη-17β^αΛοχγ1άϋ
13-35 :	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l^-hydroxy- 16a-methylandrosta-l, 4-dien-3 -οη-17β^α^οχγ1ίϋ
13-36 :	methyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,11-dion17β^3^οχγ1<ύ
13-37:	ethyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,11-dion17β-karboxylát

-71·» ·· • · · · « 9 99 ·9· 9 9 • · · ·· «·

• · ·

13-38 :	isopropyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3 , ΐιdion-173-karboxylát
13-39:	chlormethyl-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien-3,11dion-173-karboxylát
13-40 :	methyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3 -οη-17β^3Λοχ^1ζύ
13-41 :	ethyl-16a, 17a-bis (dichloracetoxy) -9α-ϋ1ιιθΓ-1ΐβhydroxyandrosta-1, 4-dien-3-οη-ΐϊβ-karboxylát
13-42 :	isopropyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-l^hydroxyandrosta-1,4-dien-3-οη-ΐνβ-karboxylát
13-43 :	chlormethyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-οη-ΐνβ-karboxylát
13-44 :	methyl-6a-chlor- 17ci-dichloracetoxyandrosta-1,4 -dien- ' 3,11-άίοη-17β^3Λοχγ1ζύ
13-45 :	ethyl-6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4-dien3,11-dion-17β^ΗΛοχγ1έϋ
13-46:	isopropyl-6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4 - dien-3,11-άίοη-17β^3^οχγΐ3ϋ
13-47:	chlormethyl-6a-chlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4 dien-3,ll-dion-17β-karboxy^át
13-48 :	methyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxy-6a-methyl- androsta-1,4-dien;-3-on-17β-karboxyl·át
13-49 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-11β-hydroxy-6a-methylandrosta-1,4-dien-3-οη-ΐνβ-karboxylát
13-50 :	isopropyl-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxy-6a-methylandrosta-1,4-άΐβη-3-οη-17β^3Λοχγ1Δί
13-51:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxy-6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-52 :	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ΐΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-53 :	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-11β-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-54 :	isopropyl-17α-dichloracetoxy-9α-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3 -on-17p-karboxylát
13-55 :	chlormethyl-17α-dichloracetoxy-9α-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát
13-56 :	methyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát

-72• »« · · *· ·* ··· · ·· ·· · · · * • φ · φ * · ♦ ♦· • φ · · · · · ··· · ♦ • · 9 · · · · · ··· ♦· ··· ··· ·· ··

13-57:	ethyl-17a-dichloracetoxy-6a,ga-difluor-llp-hydroxyandrosta-l, 4-dien-3-on-17P~karboxylát
13-58 :	isopropyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-liPhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-59:	chlormethyl- 17a-dichloracetoxy-6a, 9a-difluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-60 :	methyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-llβ-hydroxy-16βmethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-61:	ethyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxy-16βmethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-62:	isopropyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxy16β-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-63 :	chlormethyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxy- Ιδβ-methylandrosta-l, 4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-64 :	methyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-ΐΐβhydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-οη-17βkarboxylát
13-65:	ethyl- 9a -chlor - 17a- dichloracetoxy- Sa-fluor-ΐΐβhydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-οη-17βkarboxylát
13-66 :	isopropyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-ΐΐβhydroxy-16a-methylandrosta-l,4-άίθη-3-οη-17βkarboxylát
13-67:	chlormethyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-ΐΐβhydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-οη-17βkarboxylát
13-68 :	methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy-6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-69:	ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxy-6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-70:	isopropyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxy-6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-71:	chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy6a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-72:	methyl-9a,l^-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-l,4dien-3-on-17β-karboxylát
13-73 :	ethyl-9a,l^-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4 dien-3-on-17β-karboxylát

-73• 4 ·<* • · · · • · ·· • 4 · · 4

4 4

44

13-74:	isopropyl-9α,llp-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta1,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-75 :	chlormethyl-9α,lip-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát
13-76:	methyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxy-lδαmet hylandrosta- 1 ,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-77:	ethyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-lip~hydroxy-16a- methylandrosta-l, 4-dien-3 -on-17P-karbox'ylát
13-78 :	isopropyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxy16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-79:	chlormethyl-9a-chlor-17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxy- 16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-80 :	n-propyl-17a-dichloracetoxy-liP-hydroxyandrosta-l,4 dien-3-on-17β-karboxylát
13-81:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-1,4 dien-3-on-17β-karboxylát
13-82:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-83 :	n-butyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-kar.boxylát
13- 84 :	n-propyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-85:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluor-lip~ hydroxyandros ta-l,4-dien-3-on-17P~karboxy1át
13-86 :	n-propyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-i^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-87:	n-butyl-17a-dichloracetoxy-6a-fluor-l^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-88 :	n-propyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-lip~ hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-89:	n-butyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-lip~ hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-90 :	n-propyl-9a,llp-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta1,4-dien-3-on-17P-karboxylát
13-91:	n-butyl-9a, lip-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
13-92:	n-propyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxy-6amethylandrosta-1,4 -dien-3 -on-17β-karboxΫ·lát

·· • · · • · • « · • · ·» ·

99

9 9 9

9 99

999 9 9

9 9

99

-Ί±-

13-93 :

n-butyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-6amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17p~karboxylát

Příklad 14

Produkty podle příkladu 4 a příkladu 5, sloučeniny 2. a 4., se každá nechá reagovat nejprve s diethylchlorfosfátem a potom s CH₃SNa v chloroformu po dobu ořibližně 6 hodin. V prvním stupni se získají následující meziprodukty:

Cl

slouč. č.	r3	r4	Δ
14-1	H	H	1,4
14-2	a-CH3	F	1,4

a následující sloučeniny obecného vzorce I ve druhém stupni:

slouč. č.	Rs	r4	Δ
14-3	H	H	1,4
14-4	a-CH3	F	1,4

-75Jestliže se produkty podle příkladu 6 a podle příkladu 7 nechají reagovat podle výše uvedeného dvojstupňového postupu, získají se sloučeniny obecného vzorce:

SCHi j

*5 slouč.č. výchozí slouč.

R.

R<

14-5 6-1

14-6 6-2 ,0H

OH •H

14-7 6-3 0-CH- F Η ^^οη 1,4

14-8 6-4 g-CH₃ F F os ₁₍4

Λ	-75 a-	• •	• · · 9 9 9 9 9* 9 9 9 9 9 9 9 9 999 999	9 9 9 9 Φ 9 9 9 9 9 99 9 999 99
	14-9	7-1	Η	Η	Η	/c= 0	4
	14-10	7-2	Η	Η	F	ΟΗ X Ή	1,4
ί	14-11	7-3	č-ch3	Η	Η	>= 0	1,4
ř ΐ	14-12	7-4	&-ch3	Η	F	/ΟΗ X Ή	1,4
	14-13	7-5	Η	Η	Η	>=Ο	1,4
	14-14	7-6	a-COCHCl2	F	Η	^°Η / ·, *Η	1,4
	14-15	7-7	Η	Η	C1	jc = o	1,4
	14-16	7-8	Η	Η	ch3	^0Η Η	1,4
>	14-17	7-9	Η	F	Η	/ΟΗ ''c Ή	1,4
i*-	14-18	7-10	Η	F	F	°Η Ή	1,4

-76I · · ♦ ·· »·· · ·

14-19 7-11

14-20 7-12

14-21 7-13

14-22 7-14

14-23 7-15 jS-CH₃ Cl H

1,4 a-CH₃ Cl F ^^0Η 1,4

F CH₃ ^^oh' 1,4

Cl Η ,a 1,4 ''C x¹-·.

Ή a-CH₃ Cl H ^^0H 1,4

Příklad 15

17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-οη-17β-karboxylová kyselina 4 (7,00 mmol) se nechá reagovat s 7,00 ml 1 M methanolického roztoku hydroxidu sodného a pro účinné vysrážení se potom přidá 500 ml ethyletheru. Sraženina se oddělí -fitrací a suší se ve vakuovém exsikátoru přes noc, čímž » se získá požadovaná sůl, to je 17a-dichloracetoxy-lip~

-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylát sodný. Tato sůl se rozpustí ve 40 ml hexamethylfosforamidu a pomalu se přidá 1 ekvivalent chlormethylsulfidu. Rychle se vytvoří sraženina chloridu sodného. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu přibližně 1 hodiny, potom se zředí ethylacetátem na celkový objem 200 ml a promyje se postupně 3% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická vrstva se

-ΊΊ• · · · * ··· «·9 *·· ··

I oddělí, vysuší se síranem horečnatým a přefiltruje se. Filtrát se zahustí za sníženého tlaku na olej, který se chromatografuje na silikagelu, za použití ethylacetátu, chloroformu a kyseliny octové jako. elučních činidel.

Chromatografický produkt se přek.rystaluje ze směsi ethyletheru a hexanu, čímž se získá methylthiomethyl-17cc-dichloracetoxy-ll3-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-173-karboxylát, který má strukturní vzorec

OCí^SCHg

K roztoku methylthiomethyl~17cc^dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P-karboxylátu (1 mmol) ve 2 ml di.chlormethanu se přidá m-chlorperoxybenzoová kyselina (2 mmol. perkyseliny). Následuje exotermická reakce, která rychle ustane. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Vytvořená sraženina se odstraní filtrací a filtrát se zahustí za sníženého tlaku, čímž se získá methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-lip~hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát, který má strukturní vzorec

-78• 4»

Opakováním postupu popsaného v předcházejícím odstavci, ale za použití pouze 1 mmol m-chlorperoxybenzoové kyseliny se získá methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-liP-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17^-karboxylát.

Příklad 16

Opakováním postupu podle prvního odstavce příkladu 15, ale náhradou tam použité 17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17P~karboxylové kyseliny za ekvivalentní množství jedné z výchozích sloučenin uvedených níže se získají uvedené produkty:

výchozí sloučenina	produkt
17a-dichloracetoxy-9a-fluorllp-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17βkarboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy -9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy16a-methylandrosta-l, 4 -dien3-on-17P~karboxylát
16a,17a-bis(dichloracetoxy)9a-f luor-lip-hydroxyandrosta1,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina	methylthiomethyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9α-ί1ηοΓ-1ΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on17β-karboxylát
17a-dichloracetoxy-9a-fluorΙΐβ-hydroxyandrosta-l,4-dien3-on-17β-karboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17βkarboxylát
17a-dichloracetoxy-6a,9a-dif luor-l^-hydroxyandrosta-l, 4 dien-3 -on-17P-karboxylová kyselina	methylthiomethyl-17a-dichloracetoxy-6a, 9a-difluor-ΙΙβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on17β-karboxylát
9a, l^-dichlor-17a-dichlor~ acetoxyandrosta-1,4-dien-3οη-17β^3ηΕοχγ1ον< kyselina	methylthiometyl-9a,Ιΐβ-dichlor-17a-dichloracetoxy- androsta-1,4-άίβη-3-οη-17β- karboxylát

Příklad 17 • *·

·· 99 9 99 9

9 9 » 99

9 9 9999 9

9 9 9 ·

999 999 · · ··

Oxidací každého z produktů získaných v příkladu 16 postupem popsaným v druhém odstavci v příkladu 15 se získají:

methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llphydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát, methylsulfonylmethyl-16a, I7a-bis (dichloracetoxy) -9afluor-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p~karboxylát, methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát, methylsulfonylmethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluorΙΐβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát a methylsulfonylmethyl-9a,lip-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát.

Příklad 18

Oxidací každého z produktů získaných v příkladu 16 postupem popsaným v třetím odstavci v příkladu 15 se získají:

methylsulfinylmethyl-17a-dichlo.racetoxy-9a-fluor-l^hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát, methylsulfinylmethyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9afluor-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát, methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát, methylsulfinylmethyl-17a-dichloracetoxy-6a,9a-difluorΙΐβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát a methylsulfinylmethyl-9a,lip-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát.

Příklad 19

K roztoku 3 g chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylátu ve 100 ml acetonitrilu se přidá fluorid stříbrný v molárním poměru AgF ke steroidu

NfíNWřbp '^:Ti ·>’.

-80• 9· • 9 «»

9 * « • * 99 • 99 9 9 · • * 9 }» 99

10:1 a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 12 dnů, přičemž se reakční systém chrání před světlem. Potom se reakční směs přefiltruje a pevná látka na filtru se pečlivě promyje ethylacetátem. Filtrát a ethylacetátový roztok se spojí a směs se promyje vodou- a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší se bezvodým síranem sodným. Rozpouštědla se oddestilují, přičemž se získá surový krystalický produkt. Ten se podrobí preparativní chromatografii v tenké vrstvě (Silica Gel 60F254, Merck), za použití směsi chloroformu a methanolu (15:1)) jako elučního rozpouštědla. Potom se produkt překrystaluje ze směsi tetrahydrofuranu a n-hexanu, čímž se získá fluormethyl-17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17p~karboxylát.

Příklad 20

Provedením postupu příslušných reakčnich sloučeniny:

podle ·. příkladu . 19 složek se získají a náhradou následuj ící

slouč.č. R₃

R₄ R₅

-81·· ·· » · » * · ··

4· · · ¹ • · <

·· ·4

20-1 a-CH₃ F

20-2 Η F

20-3 Η F

20-4 a-OCOCHCI₂ F

20-5 jS-CH₃ F

20-6 H F

20-7 H Cl a-CH₃

OH

OH ;cr

ΖΏΑ

OH

OH

OH

OH

1,4

1,4

1,4

1,4

1,4

1,4

1,4

Tyto sloučeniny lze pojmenovat:

20-1:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on.-17P~karboxylát
20-2 :	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
20-3 :	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-6ά,9a-difluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát
20-4 :	fluormethyl-16a,17a-bis(dichloracetoxy)-9a-fluor-ΐΐβhydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát

4· ·· • · · · • · ·· • · · * · • · * ·» ··

20-5:	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy16p-methylandrosta-l,4-dien-3-on-173~karboxylát
20-6 :	fluormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy6a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát
20-7:	fluormethyl- 9α,1ΐβ-dichlor-17a-dichloracetoxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát

Příklad 21

Ke směsi 9a-fluor-ΙΙβ,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylové kyseliny (1 g, 2,64 mmol, 1 ekvivalent) a kyanidu stříbrného (0,78 g, 5,83 mmol,. 2 ekvivalenty) v 10 ml HMPA (hexamethylfosforamid, Aldrich) , se přidá v jedné dávce při teplotě místnosti dichloracetylchlorid (1,42 g, 9,63 mmol, 3,6 ekvivalentu). Směs se míchá v olejové lázni při teplotě 80 °C po dobu 12 minut. Potom se za míchání tato směs přidá po kapkách k nasycenému vodnému roztoku chloridu sodného (200 ml), přičemž se tvoří sraženina. Tato sraženina se odfiltruje a rozpustí se v tetrahydrofuranu. Tetrahydrofuranový roztok se přefiltruje, čímž se odstraní nerozpustný pevný AgCN. Filtrát se zahustí asi na 10 ml a vysráží se zředěním 200 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného. Jímaná sraženina (1,29 g, výtěžek 100 %) vykazuje jednu TLC stopu s 13:100 MeOH/CH₂Cl₂. Tato sraženina může být použita přímo v dalším stupni, aniž by se čistila. Bezbarvá čistá sloučenina, 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylová kyselina, se může připravit pro analysu rychlou chromatografií na silikagelu, elucí 13:100 MeOH/CH₂Cl₂. Teplota tání 217 až 218 °C. H-NMR (CDCl₃-DMSO-d₆) : 0,96 (3H, d, 16-CH₃) , 1,12 (3H, s, 18-CH₃) , 1,55 (3H, s, I9-CH3), 2,59 (1H, m, 6α-Η) , 2,65 (1H, m, 6β-Η) , 3,42 (1H, m, 16β-Η) , 4,24 (1H, široký d, 11-H) , 1,28, 1,76, 1,81, 1,84, 2,12, 2,16, 2,22 a 2,40 (8H, m, jiný H na

-83• · * · · · • · · ·· • · ·· · · fc fc · · fc fc · fc · · · · kruhu), 6,03 (1H, s, 4-H) , 6,25 (1H, d, 2-H) , 6,43 (1H, s,

CHC1₂) , 7,33 (1H, d, 1-H)ppm.

Příklad 22

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-16amethylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylové kyseliny (0,80 g, 1,63 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,69 g, 8,2 mmol, 5 ekvivalentů) a tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (0,11 g, 0,32 mmol, 0,2 ekvivalentu) v 25 ml vody a 25 ml methylenchloridu se přidá za intensivního míchání při teplotě místnosti jodethan (0,54 g, 3,5 mmol, 2,1 ekvivalentu) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí a promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Odstraněním rozpouštědla se získá surový produkt, který se čistí rychlou chromatografii na silikagelu, elucí směsmi 3,5:.100 a 13:100 MeOH/methylenchlorid, čímž se získá ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-liP~hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17p-karboxylát (154 mg, 22,6 %) , teploty tání 234 až 236 °C. MS: 518,1 ([M+H]).

Příklad 23

Ke směsi Ιΐβ, 17a-dihydroxyandrosta-l,4-dien-3-οη-17β-karboxylové kyseliny (1,09 g, 3,14 mmol, 1 ekvivalent), NaHCO₃ (2,64 g, 31,4 mmol, 10 ekvivalentů), tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (0,31 g, 0,91 mmol, 0,3 ekvivalentu) v methylenchloridu a vodě (každý 150 ml) se přidá za intensivního míchání při teplotě místnosti dichloracetylchlorid (6,28 mmol, 2 ekvivalenty·) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí a promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Odstraněním rozpouštědla se

-84• · · · * ··* 9*9 ♦· ·♦ získá surový produkt, který se čistí rychlou chromatografií na silikagelu směsí 10:100 methanolu a methylenchloridu, čímž se získá čistá 17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylová kyselina ve výtěžku 95 %.

Příklad 24

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-liP-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylové kyseliny (3,24 g, 7,09 mmol, 1 ekvivalent), hydrogenuhličitanu sodného (2,96 g, 35,4 mmol, 5 ekvivalentů) a tetrabutylamoniumhydrogensulťátu (2,96 g, 8,72 mmol, 1,2 ekvivalentu) v 60 ml methylenchloridu a 60 ml vody se za intensivního míchání při teplotě místnosti přidá ethyljodid (2,21 g, 14,17 mmol,. 2 ekvivalenty) v 5 ml methylenchloridu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Organická vrstva se oddělí, promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří se na rotačním odpařováku, čímž se získá surový produkt. Tento surový produkt.se čistí rychlou chromatografi£ na silikagelu s elucí směsí methanol/methylenchlorid 2,1:100, čímž se získá čistá sloučenina, ethyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát, (1,89 g, výtěžek 54,9 %) , teploty tání 207 až 208 °C. MS: 484,9 ([M+]).

Příklad 25

Ke směsi nepřečištěné 17a-dichloracetoxy-9cc-fluor-lip-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylové kyseliny (1 g, 2,0 mmol, 1 ekvivalent) připravené podle příkladu 21 a bezvoděho K₂CO₃ (0,72 g, 5,21 mmol, 2,61 ekvivalentu) v hexamethylfosforamidu (12 ml) se při teplotě místnosti přidá methyljodid (3,8 g, 26,8 mmol, 13,4 ekvivalentu). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Tato směs se za míchání přidá k nasycenéhmu vodnému

-85roztoku chloridu sodného (200 ml), čímž se získá sraženina. Tato sraženina se rozpustí v methanolu (200 ml). Methanolický roztok se vysráží zředěním nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (200 ml). Sraženina se čistí rychlou chromatografií na silikagelu (150. g) , elucí se směsí 3:100 methanol/methylenchlorid, čímž se získá čistý methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylát (0,95 g, výtěžek 92 % vypočteno na basi výchozí sloučeniny podle příkladu 21, to je 9a-fluor-lip,17a-dihydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on -17p-karboxylově kyseliny). Vzorek pro elementární analysu se získá rozpuštěním produktu v methylenchloridu, filtrací roztoku a odpařením, čímž se získá pevná látka, která se potom překrystaluje ze směsi methylenchloridu a hexanu. Teplota tání 252 až 253 °C. ^-NMR (CDC1₃) : . 1,01 (3H, d, 16-CH₃) , .1,09 (3H, s, 18-CH₃) , 1,56 \3H, s, 19-CH₃) , 2,43 (1H, m, 6<X-H) , 2,63 (1H, m, 6β-Η) , 3,38 (1H, m, 16β-Η) , 3,75 (3H, s, CO₂CH₃) , 4,41 (1H, široký d,

11-H), 1,36, 1,64, 1,69, 1,72, 1,85, .2,18, 2,21 a 2,38 (8H, m, další H na kruhu), 5,94 (1H, s, CHC1₂) , .6,13 (1H, s, 4-H), 6,35 (1H,. d, 2-H), 7,22 (1H, d, 1-H)ppm.

Provede-li se výše popsaná reakce s přečištěnou 17a-dichloracetoxy-9cc-f luor-llp-hydroxy-16cc-methylandrosta-l, 4-dien-3-on-17P~karboxylovou kyselinou, je reakční výtěžek kvantitativní.

Příklad 26

Ke směsi 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17p~karboxylové kyseliny (0,50 g, 1,02 mmol, 1 ekvivalent) a K₂CO₃ (0,36 g, 2,60 mmol, 2,6 ekvivalentu) v hexamethylfosforamidu (10 ml) se při teplotě místnosti přidá chlormethyljodid (1,18 g, 6,69 mmol, 6,6 ekvivalentu) . Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin a potom se přidá 200 ml nasyceného vodného roztoku

chloridu sodného. Vodným roztokem se probublává vzduch, aby se podpořila tvorba sraženiny. Sraženina se rozpustí v methanolu (10 ml) a přidá se k nasycenému vodnému roztoku chloridu se čistí rychlou elucí směsí 3:100 sodného (200 ml) . Vytvořená sraženina chromatografii na silikagelu (47 g) , methanol/methylenchlorid, čímž se získá chlormethyl-l7a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip~hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien3-on-173-karboxylát (0,29 g, výtěžek 53 %) , teploty tání 228 až 229 °C (rozklad) . ¹H-NMR (CDCl₃) : 1,01 (3H, d, 16-CH₃) , 1,16 (3H, s, 18-CH₃) , 1,56 (3H, s, 19-CH₃) , 2,42 (1H, m, 6a-H) , 2,64 (1H, m, 6β-Η) , 3,42 (1H, m, 16β-Η) , 4,45 (1H, m široký d,

11-H), 1,35, 1,63, 1,73, 1,78, 1,83, 1,88, 2,22 a 2,37 (8H, m, další H na kruhu) ) , 5,56 a 5,94 (2H, 2d, CH₂C1) , 5,96 (1H, s, CHCI.) , 6,14 (1H, s, 4-H), 6,37 (1H, d, 2-H), 7,23 (1H, d, 1-H) ppm. Analysa pro ' C₂₄H₂₈C1FO₆: vypočteno: 53,60 C, 5,25 H, nalezeno: 53,81 C, 5,56 H.

Příklad 27

Mast

sloučenina vz. I, t.j. ethyl- nebo isopropyl17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17cc-dichloracetoxy9a-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát	0,05% hmot/hmot
parafinový olej	10,0 % hmot/hmot
bílý měkký parafin	89,95 % hmot/hmot

Pilulka na vředovité afty

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy9a-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát

0,1 mg

-8799 99 * 9 9 9 • 9 99

999 9 9

9 9

9 9 9 9

laktosa	69,90 mg
arabská guma	3,00 mg
stearát horečnatý	0,75 mg

Retenční klystýr

sloučenina vz . I, t.j. ethyl- nebo isopropyl17a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-l^-karboxylát nebo methyl-17cc-dichloracetoxy9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-173-karboxylát	0,001% hmot/obj
Tween 80	0,05 % hmot/obj
ethanol	0,015 % hmot/obj
propylparaben	0,02 % hmot/obj
methylparaben	0,08 % hmot/obj
destilovaná voda	q.s. 100 objemů

Oční kapky

sloučenina vz. 1, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy- 9a-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien- -3-on-17β-karboxylát	0,05 % hmot/hmot
Tween 80	2,5 % hmot/obj
ethanol	1,75 % hmot/obj
benzalkoniumchlorid	0,02% hmot/obj
fenylethanol	0,25 % hmot/obj
chlorid sodný	0,60% hmot/obj
voda pro injekce	q. s. 100 obj emů

-884 4 4 · · 4 44 4 · 4 4

4 4 4 ·

4 4 4

44444 4444

44 • 4 4 · • 4 44

4 4 4

4 4

44

Příklad 28

Mast

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy- Ιΐβ-hydroxyandrosta-1,4 -dien-3 -on-l^-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy9a-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta~l, 4-dien-3-on-l^-karboxylát	0,1% hmot/hmot
parafinový olej	10,0 % hmot/hmot
bílý měkký parafin	89,9% hmot/hmot

Pilulka na vředovité afty

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17ec-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l, 4-dien-3 -οη-17β^ΗΛοχγ1<Ρ nebo methyl-17a-dichloracetoxy9a-f1uor-11β-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát	0,15 mg
laktosa	60,85 mg
arabská guma	3,00 mg
stearát hořečnatý	0,75 mg

Retenční klystýr

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy9a-fluor-ΐΐβ-hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien- -3-on-17p-karboxylát	0,001 % hmot/obj
Tween 80	0,05 % hmot/obj
ethanol	0,015 % hmot/obj
propylparaben	0,02 % hmot/obj
methylparaben	0,08 % hmot/obj
destilovaná voda	q.s. 100 obj emů

-89• 9

9

9 • 9 9 9

9

9 9 9

9 99

999 9 <

9 9

99

.. rní kapky

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy-lip-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát nebo methyl-17a-dichloracetoxy9a-fluor-lip-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17P~karboxylát	0,1 % hmot/obj
Tween 80	2,5 % hmot/obj
ethanol	0,75 % hmot/obj
benzalkoníumchlorid	0,02 % hmot/obj
fenylethanol	0,25 % hmot/obj
chlorid sodný	0,60 % hmot/obj
voda pro inj ekce	q.s. 100 obj emů

Příklad 29

Oční kapky

sloučenina vz. I, t.j. isopropyl- nebo ethyl17a-dichloracetoxy-llp-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17P-karboxylát nebo methyl-17cc-dichloracetoxy9a-fluor-Ιΐβ-hydroxy-l6a-methylandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát	0,5 % hmot/hmot
povidon	0,6 % hmot/obj
benzalkoníumchlorid	0,02 % hmot/obj
edetát sodný U.S.P.	0,10 % hmot/obj
glycerin U.S.P.	2,5 % hmot/obj
tyloxapol U.S.P.	3,0 % hmot/obj
[chlorid sodný	0,3 % hmot(obj

-909*« * * · 9 9 9 • · » · · ♦ ♦ ··· · · ···· · ··· ··· ,, ·«· »»· ·· ··

γ-aminobutyrát sodný	1,0 % hmot/obj
sterilní destilovaná voda	q.s. 100 obj emů

Uvedené složky se smísí, zkontroluje se pH, v případě potřeby se upraví na 5,0. až 5,5 zalkalisováním hydroxidem sodným nebo okyselením kyselinou chlorovodíkovou.

Claims (15)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina obecného vzorce I

   X-_Rl která je ve kterém

   R_x je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, nesubstituovaná nebo substituovaná jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, alkoxyskupinu s 1 až 4.atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylovou skupimi s 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkylsulfonylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, a.-methylová skupina, β-methylová skupina, =CH₂ nebo a-OC (=0) CHC1₂, nebo β-OC (=0) CHC1₂,

   r₄ je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru, R_s je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina, > s. X je -0- nebo -S-, MÍ Z je karbonylová skupina, β-hydroxymethylenová skupina nebo

   β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, že 1,2-vazba je nasycená nebo nenasycená.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, mající jednu následujících charakteristik:

   nebo více z

   -92• 4 4 4

   4 4 44

   444 4 4

   4 4 ·

   44 44 (a) Rj je atom vodíku, α-methylová skupina, β-methylová skupina, α-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, a-OCOCHCl₂, nebo

   P-ocochci₂, (b) R₄ je atom vodíku nebo atom fluoru, (c) R₅ je atom vodíku nebo atom fluoru, (d) R_x je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina, (e) X je -0-, (f) Z je β-hydroxymethylenová skupina, (g) vazba 1,2 je nenasycená.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1, vzorce kde R_lř R₃, R„, R_s a čárkovaná přímka mají význam uvedený v nároku 1, zejména, kde R₃ je atom vodíku, α-methylová skupina, β-methylová skupina, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, a-OCOCHCl₂, nebo P-OCOCHCl₂, R₄ je atom vodíku nebo atom fluoru a R_s. je atom vodíku, atom fluoru nebo methylová skupina, obzvláště, kde 1,2-vazba je nenasycená.
4. 4. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce Ia • fc ·93· kde R_X1 je nesubstituovaná alkylová skupina s i až 4 atomy uhlíku nebo chlormethylová skupina.
5. 5. Sloučenina podle nároku 4, kterou je:

   methyl-17a-dichloracetoxy-11β-hydroxyandrosta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylát, ethyl-17d-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát, isopropyl-Í7a-dichloracetoxy-Ιΐβ-hydroxyandrosta-l,4-dien-3-on-17β-karboxylát, nebo chlormethyl-17a-dichloracetoxy-l^-hydroxyandrosta-l,4dien-3-on-17P~karboxylát.
6. 6. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce Ib ?·' • · · « • · ·· ··· · '

   -94R_u je nesubstituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy íku nebo chlormethylová skupina, R₄₁ je atom vodíku nebo atom fluoru a R_S1 je atom vodíku nebo atom fluoru.
7. 7. Sloučenina podle nároku 6, kterou je: methyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-l?3-karboxylát, ethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-lip-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-170-karboxylát, nebo chlormethyl-17a-dichloracetoxy-9a-fluor-llp-hydroxy-16amethylandrosta-1,4-dien-3-on-17p-karboxylát.
8. 8. Sloučenina obecného vzorce *5 kde

   R₃ je atom vodíku, a-hydroxyskupina, β-hydroxyskupina, α-methylová skupina, β-měthylová skupina, =CH₂, a-OC(=0)CHC1₂, nebo β-OC (=0) CHC1₂,

   R₄ je atom vodíku, atom fluoru nebo atom chloru,

   R_s je atom vodíku, atom fluoru, atom chloru nebo methylová skupina,

   Z je karbonylová skupina,.β-hydroxymethylenová skupina nebo β-chlormethylenová skupina, a čárkovaná přímka v kruhu A znamená, nasycená nebo nenasycená.

   že 1,2-vazba je • · ·· • · · ··· · • · ♦· ·«

   -959. Sloučenina podle nároku 8, kde Z je β-hydroxynylenová skupina a/nebo kde R₄ je atom vodíku nebo atom iluoru a R_s je atom vodíku, atom fluoru nebo methylová skupina.
9. 10. Sloučenina podle nároku 8 obecného vzorce kde Z má význam uvedený v nároku 8.
10. 11. Sloučenina podle nároku 8 obecného vzorce *51 kde Z má význam uvedený v nároku 8, R₃₁ je cc-CH₃ nebo β-ΟΗ₃, R₄₁ je atom vodíku nebo atom fluoru a R_S1 je atom vodíku nebo atom fluoru.
11. 12. Sloučenina podle nároku 10, kterou je 17ct-dichloracetoxy-11β-hydroxyandrost a-1,4-dien-3-on-17 β-karboxy1ová kyselina.

    -96·· ·· • * · « • · ·· • ··· · « • · <

    ·· ··
12. 13. Sloučenina podle nároku 11, kde Z je β-hydroxymethylenová skupina.
13. 14. Sloučenina podle nároku 13., kterou je 17a-dichloracetoxy-9a-fluor-l^-hydroxy-16a-methylandrosta-l,4-dien-3-on-17β^3ΓΪ)θχγ1ονί kyselina.
14. 15. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje protizánětlivě účinné množství sloučeniny podle nároku 1 a netoxický farmaceuticky přijatelný nosič, přičemž tento prostředek je vhodný pro topickou nebo jinou lokální aplikaci, zejména oftalmický prostředek obsahující protizánětlivě účinné množství sloučeniny podle nároku 1 a netoxický oftalmologicky přijatelný nosič.
15. 16. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro ošetřování topického nebo jiného lokálního zánětu, zejména pro ošetřování oftalmického zánětu.