CZ292672B6

CZ292672B6 - Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-1-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové, způsob jeho výroby, jeho použití a farmaceutické prostředky tyto látky obsahující

Info

Publication number: CZ292672B6
Application number: CZ19971729A
Authority: CZ
Inventors: Hans Ulrich Dr. Stilz; Gerhard Dr. Beck; Manfred Dr. Radau
Original assignee: Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date: 1996-06-05
Filing date: 1997-06-04
Publication date: 2003-11-12
Also published as: IL120984A; AU717106B2; ZA974912B; NO972506D0; HU9700998D0; PL320355A1; CA2206748A1; KR980002029A; ES2241016T3; EP0811616B1; DE19622489A1; JP4249277B2; AU2467497A; TR199700457A2; HUP9700998A1; EP0811616A1; MX9704128A; AR008993A1; CN1104420C; HK1006359A1

Abstract

Řešení se týká hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-1-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové obecného vzorce I, ve kterém HB značí kyselinu maleinovou, jakož i jeho fyziologicky přijatelných solí, způsobu jejich výroby, jejich použití v léčivech a farmaceutických prostředků tyto látky obsahujících.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká soli ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoimmomethyl)fenyl)-4—methyl-2,5dioxoimidazolidin-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové, jakož i jejích fyziologicky přijatelných solí, způsobu jejich výroby, jejich použití v léčivech a farmaceutických prostředků tyto látky obsahujících.

Dosavadní stav techniky

Hydrochlorid ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové a jeho farmakologické vlastnosti jsou již popsané v PCT-přihlášce PCT/EP 94/03491 (WO-A-95/14008). Hydrochlorid-sůl ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-lyl)acetylamino)-3-fenylpropionové, ethylesteru kyseliny (R)-3-(2-((R)-4-(4-(aminoiminomethyi)fenyl)-4—methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové, ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((R)-4-(4-aminoiminomethyI)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové a ethylesteru kyseliny (R)-3-(2-((S)-4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové mají ale tu nevýhodu, že jsou amorfní a nemohou se získat v krystalické formě. Výše uvedené hydrochlorid-soli se tedy nemohou čistit krystalizací a jsou proto málo vhodné pro použití jako účinné látky v léčivech, pro která jsou zákonodárci předepsané přesně definované stupně čistoty obsahových látek a pro cílový produkt musí být při technické syntéze farmakologicky aktivní substance zachovány při postupu izolace a čištění podmínky, přesně definované zákonnými předpisy. Také jsou amorfní hydrochlorid-soli na základě svých fyzikálních vlastností a své použitelnosti málo vhodné pro galenickou výrobu farmaceutických přípravků, jako je například tablety.

Úkolem předloženého vynálezu tedy je možnost přípravy ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové ve vhodné nehygroskopické formě, která by umožnila jednoduchým způsobem zachování požadovaného stupně čistoty a splnění galenických požadavků při technické syntéze.

Podstata vynálezu

Výše uvedený úkol byl vyřešen přípravou hydrogenmalenátu ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové, obzvláště solí, které tento ethylester a kyselinu maleinovou obsahují ve formě soli (to znamená ve formě adiční soli s kyselinou) v molámím poměru asi 1 : 1.

-1 CZ 292672 B6

Předmětem předloženého vynálezu tedy je hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-25-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové obecného vzorce I

(l), ve kterém HB značí kyselinu maleinovou, ve všech stereoizomemích formách a jejich směsi v libovolných poměrech, jakož i jejich fyziologicky přijatelné soli.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou krystalické a nejsou hygroskopické a mají tedy předpokládatelné výhody. Mohou se za definovaných podmínek krystalizovat a čistit rekrystalizací a jsou vhodné pro použití v léčivech a pro galenickou výrobu lékových forem.

Předložený vynález zahrnuje všechny stereoizomery sloučenin obecného vzorce I, tedy izomer s (S)-konfigurací na chirálním centru v imidazolidinOvém kruhu a s (S)-konfigurací na chirálním centru jednotky kyseliny propionové, izomer s (R)-konfigurací na chirálním centru v imidazolidinovém kruhu a s (S)-konfigurací na chirálním centru jednotky kyseliny propionové, izomer s (S)-konfígurací na chirálním centru v imidazolidinovém kruhu a s (R)-konfígurací na chirálním centru jednotky kyseliny propionové a izomer s (R)-konfigurací na chirálním centru v imidazolidinovém kruhu a s (R)-konfigurací na chirálním centru jednotky kyseliny propionové.

Výhodnou formou je izomer s (S)-konfigurací na chirálním centru v imidazolidinovém kruhu a s (S)-konfigurací na chirálním centru jednotky kyseliny propionové, tedy sůl ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-lyl)acetylamino)-3-fenylpropionové obecného vzorce la

(la), ve kterém HB značí kyselinu maleinovou, jakož i jeho fyziologicky přijatelné soli.

Předložený vynález zahrnuje také všechny směsi dvou nebo více stereoizomerů obecného vzorce I v libovolných poměrech množství.

Ve sloučeninách podle předloženého vynálezu obecného vzorce I, které obsahují ethylester kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoimmomethyl)fenyl)-4-methyI-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové a kyselinu maleinovou v molámím poměru asi 1 : 1, je jedna z obou karboxylových skupin kyseliny maleinové neutralizována bazickou amidinoskupinou a vyskytuje se ve formě soli, to znamená jako negativně nabitá karboxylátová skupina (amidinoskupina

-2CZ 292672 B6 v ethylesteru se vyskytuje pro protonizaci kyseliny maleinovou potom jako pozitivně nabitá amidiniová skupina). Druhá z obou karboxylových skupin kyseliny maleinové se může ve sloučeninách podle předloženého vynálezu vyskytovat v kyselé formě, to znamená jako karboxylová kyselina, nebo se může vyskytovat ve formě soli, to znamená jako karboxylátová skupina. Před5 mětem předloženého vynálezu jsou jak hydrogenmaleináty, ve kterých se vyskytuje ještě jedna karboxylová skupina a které jsou výhodné, tak také od nich odvozené fyziologicky přijatelné soli, které jsou z nich vytvořené s anorganickými nebo organickými bázemi.

Fyziologicky přijatelné soli jsou přitom obzvláště farmaceuticky použitelné nebo netoxické soli.

Kationty, které se v takovýchto solích mohou vyskytovat, se odvozují například od alkalických kovů a kovů alkalických zemin, jako je sodík, draslík, hořčík nebo vápník, od amoniaku nebo fyziologicky přijatelných organických aminů, jako je triethylamin, ethanolamin nebo tris-(2hydroxyethyl)amin. Soli sloučenin obecného vzorce I se mohou získat přímo při výrobním postupu popsaném dále, tak, že se například použijí vhodné soli kyseliny maleinové nebo se přidají 15 vhodné báze. Soli se mohou ale také získat tak, že se nejprve vyrobené hydrogenmaleináty obecného vzorce I, ve kterých se vyskytuje ještě jedna karboxylová skupina, zpracují vhodnou bází, například hydroxidu, uhličitany nebo hydrogenuhličitany alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, oxidy kovů alkalických zemin nebo aminy. Přitom se mohou karboxylové skupiny převést úplně do formy soli, nebo pouze částečně. Míra, ve které je takováto tvorba soli 20 provedena, závisí například na hodnotě pH, která je požadována při předpokládaném použití. Převedení volných karboxylových skupin - opět úplně nebo pouze částečně - na formu soli, může také proběhnout teprve tehdy, když se použijí hydrogenmaleináty obecného vzorce I společně s bazickými sloučeninami při výrobě farmaceutických přípravků.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou vyrobit tak, že se se sloučeninami obecného vzorce Π

o (II) ve kterém HV značí libovolnou anorganickou nebo organickou kyselinu, různou od kyseliny maleinové, provede pomocí obvyklých, pro odborníky známých metod, výměny aniontu s kyselinou maleinovou a/nebo malenáty. Jako příklady kyselin obecného vzorce HV je možno uvést 30 kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu sírovou, kyselinu fosforečnou, kyselinu octovou, kyselinu propionovou nebo kyselinu methansulfonovou. Jako příklady sloučenin obecného vzorce lije možno uvést sloučeniny vzorců Ha a Db

-3CZ 292672 B6

CHgCOOH ·

(Hb), ve kterých HV v obecném vzorci Π značí kyselinu chlorovodíkovou nebo kyselinu octovou. Výchozí sloučeniny obecného vzorce Π se mohou vyrobit tak, jak je popsáno v přihláškách PCT WO-A-95/14008 (PCT/EP 94/03491) a WO-A-96/33976, (PCT/EP 96/01572), například jako hydrochlorid (sůl s kyselinou chlorovodíkovou) nebo jako sůl s kyselinou octovou. Obsah přihlášek PCT WO-A-95/14008 a WO-A-96/33976 je tedy v celém rozsahu součástí předložené přihlášky. Jako maleáty je možno při výměně aniontů použít například sodné, lithné, draselné a amonné soli kyseliny maleinové nebo soli kyseliny maleinové s organickými amoniovými kationty. Výhodně se používá kyselina maleinová.

Pro výměnu aniontů se může například roztok sloučeniny obecného vzorce Π chromatografovat přes iontoměnič, nasycený kyselinou maleinovou. Vhodná rozpouštědla jsou pro to například voda, alkoholy, jako je například methylalkohol, ethylalkohol, butylalkohol nebo izopropylalkohol, jakož i směsi těchto rozpouštědel, například směsi voda-alkohol. Mohou se použít komerčně dostupné aniontoměničové materiály, které se obvyklým způsobem převedou nejprve do formy kyseliny maleinové, popřípadě se při opakovaném použití na tuto formu regenerují. Výměna aniontů se normálně provádí při teplotě v rozmezí -10 °C až 40 °C, výhodně -5 °C až 30 °C a obzvláště 0 °C až 25 °C. Z eluátu iontovýměnné chromatografie se může požadovat produkt vykrystalizovat po případné zahuštění, například ochlazením a/nebo vysrážením a izolovat filtrací nebo odstředěním.

Pro výměnu aniontů je možno také spojit sloučeniny obecného vzorce Π v rozpouštědle s kyselinou maleinovou a/nebo maleináty. Pod pojmem rozpouštědla se přitom rozumí také směsi dvou nebo více rozpouštědel. Vhodná rozpouštědla jsou například voda, alkoholy, například s 1 až 8 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 6 uhlíkovými atomy, obzvláště s 1 až 4 uhlíkovými atomy, ethery, jako je například dioxan, tetrahydrofuran, ethylenglykolmethylether, ethylenglykoldimethylether, diethylenglykolmonomethylether a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je například aceton nebo butanon, nitrily, jako je například acetonitril a dále dimethylformamid a dimethylsulfoxid, jakož i směsi takovýchto rozpouštědel, například směsi vody a alkoholů. Jako alkoholy se mohou například použít methylalkohol, ethylalkohol, n-propylalkohol, izopropylalkohol, η-, i-, sek - a terč.-butylalkohol, η-, i-, sek- a fórc.-pentylalkohol, n-hexylalkohol, 2ethylbutylalkohol, 2-ethylhexylalkohol, izooktylalkohol, cyklopentylalkohol, methylcyklohexylalkohol (směs) nebo benzylalkohol.

-4CZ 292672 B6

Molární poměr sloučeniny obecného vzorce Π ku kyselině maleinové, popřípadě maleinátu, je při tomto postupu normálně 1:1 až 1:10, výhodně 1:1 až 1:2, obzvláště výhodně asi 1:1. Mohou se předložit sloučeniny obecného vzorce I a přidávat kyselinu maleinovou nebo maleináty nebo směsi kyseliny maleinové a maleinátů, nebo je možno postupovat naopak, ale je možno také dávkovat obě komponenty současně do reakční nádoby. Komponenty se mohou mísit ve formě roztoků, podle typu provedení aniontoměniče může být ale také vhodné předložit suspenzi a/nebo přidávat suspenzi nebo pevnou látku. Výměna aniontů se normálně provádí při teplotě v rozmezí -10 °C až 40 °C, obzvláště -5 °C až 30 °C, výhodně 0 °C až 25 °C. Pro izolaci se může sůl kyseliny maleinové, podle potřeby po zahuštění, vykrystalizovat například ochlazením a/nebo vysrážením a oddělit filtrací nebo odstředěním. Vždy podle požadavků je možno potom ještě dále čistit promytím a podle potřeby ještě například rekrystalizací nebo digerováním.

Při výhodném způsobu výroby solí kyseliny maleinové podle předloženého vynálezu obecného vzorce I se použití jako výchozí sloučeniny soli kyseliny octové obecného vzorce lib. Obzvláště výhodné přitom je to, že se tyto soli spojí s kyselinou maleinovou v rozpouštědle.

Sloučeniny obecného vzorce Π, použité pro výměnu iontů, se mohou výhodně získat následujícím postupem. Sloučeniny obecného vzorce ΙΠ

jejichž výroba se může provést podle údajů PCT/EP 94/03491 a PCT/EP 96/01572, se mohou kopulovat za přítomnosti vodu vázajících činidel, jako je například dicyklohexylkarbodiimid (DCC), 0-((kyano-(ethoxykarbonyl)-methyl)amino-N,N,N',N'-tetramethyluroniumtetrafluoroborát (TOTU) nebo anhydrid kyseliny polyfosfonové (PPa) za podmínek obvyklých pro takovéto reakce, se sloučeninami obecného vzorce IV

OC₂H₅ (IV) jejichž výroba může probíhat pomocí v literatuře popsaných způsobů (viz například B.E. Juaristi, D. Quintana, J. Escalante, Aldrichimica Acta, Vol. 27, č. 1,1994, 3-11; D. C. Cole, Tetrahedron, Vol. 50,1994,9517-9582) na sloučeniny obecného vzorce V

-5CZ 292672 B6

Ve sloučeninách obecných vzorců ΙΠ, IV a V se mohou přitom na chirálních centrech v imidazolidinovém kruhu a v jednotce kyseliny propionové vyskytovat vždy (R)-konfigurace nebo (S)-konfigurace. Sloučeniny obecných vzorců ΙΠ a IV se mohou používat ve formě čistých stereoizomerů (enantiomerů) nebo ve formě směsí stereoizomerů, tedy například v racemické 5 formě nebo v opticky aktivní formě.

Sloučeniny obecného vzorce V se mohou převést, například pomocí obvyklých metod pro převádění nitrilů na amidoximy, ve vhodných rozpouštědlech, například v alkoholech, jako je methylalkohol nebo ethylalkohol, s hydroxylaminem, popřípadě s hydroxylamoniovou solí a bází, 10 například terciárním aminem nebo hydroxidem, uhličitanem nebo hydrogenuhličitanem alkalického kovu, na sloučeniny obecného vzorce VI

O které se potom mohou převést redukcí za obvyklých podmínek, například hydrogenací vodíkem za přítomnosti kovových katalyzátorů, a přídavkem kyseliny obecného vzorce HV, obzvláště 15 hydrogenací za přítomnosti kyseliny obecného vzorce HV, na sloučeniny obecného vzorce Π.

Jako kovové katalyzátory při hydrogenací, která se může provádět za atmosférického tlaku nebo výhodně za zvýšeného tlaku, se mohou použít například katalyzátory na bázi vzácných kovů, jako je palladium na uhlí. Pro výhodnou výrobu sloučenin obecného vzorce Db je možno například hydrogenovat ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti kyseliny octové nebo také v kyselině 20 octové jako rozpouštědle.

Farmakologické vlastnosti sloučenin obecného vzorce I jsou nezávislé na skutečnosti, že se jedná o sůl kyseliny maleinové. Stejně jako například hydrochloridy mají sloučeniny podle předloženého vynálezu obecného vzorce I schopnost potlačovat adhezi buňka-buňka, která spočívá na 25 interakci proteinů, obsahujících Arg-Gly-Asp, jako je fíbronectin nebo fíbrinogen, nebo Willebrandova faktoru, s takzvanými integriny. Integriny jsou transmembránové glykoproteiny, receptory pro proteiny buněčné matrice, obsahující Arg-Gly-Asp (e. Ruoslahti a M. D. Pierschbacher, Science 238 (1967), 491 - 497; D. R. Phillips, I. F. Charo, L. V. Parise a L. A. Fitzgerald, Blood 71 (1988), 831 - 843). Kromě toho potlačují vazbu dalších adhezivních proteinů, jako je vitro30 nectin, kollagen a laminin, na odpovídající receptory na povrchu různých typů buněk. Obzvláště potlačují sloučeniny podle předloženého vynálezu obecného vzorce I agregaci trombocytů a jsou proto vhodné pro potlačování trombóz. Dále potlačují také sloučeniny podle předloženého vynálezu obecného vzorce I metastázování karcinomových buněk.

Předmětem předloženého vynálezu je také použití sloučenin obecného vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí pro uvedené účely a také jejich použití pro výrobu léčiv pro inhibici agregace trombocytů, pro potlačení trombóz nebo pro inhibici metastázování karcinomových buněk.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich fyziologicky použitelné soli se tedy mohou aplikovat na zvířata, výhodně na savce a obzvláště na lidi jako léčivo buď samotné, ve vzájemných směsích nebo ve formě farmaceutických přípravků, dovolujících enterální nebo parenterální podávání, a které jako aktivní součást obsahují účinné množství alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli, vedle jednoho nebo několika obvyklých farmaceuticky 45 přijatelných nosičů nebo přídavných látek.

-6CZ 292672 B6

Předmětem předloženého vynálezu jsou také sloučeniny obecného vzorce I a jejich fyziologicky přijatelné soli pro použití jako léčiva, jakož i farmaceutické přípravky, které obsahují jako účinnou látku jednu nebo několik sloučenin obecného vzorce I a/nebo jednu nebo několik jejich fyziologicky přijatelných solí společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči a přídavnými látkami a popřípadě ještě jednu nebo několik jiných farmakologicky účinných látek.

Takovéto farmaceutické přípravky obsahují obvykle asi 0,5 až 90 % hmotnostních sloučeniny obecného vzorce I nebo její fyziologicky přijatelné soli.

Léčiva se mohou aplikovat orálně, například ve formě pipulek, tablet, potažených tablet, dražé, tvrdých a měkkých želatinových kapslí, granulátů, roztoků, sirupů, emulzí nebo suspenzí. Aplikace může ale také probíhat rektálně, například ve formě čípků, nebo parenterálně, například ve formě injekčních roztoků nebo infuzních roztoků, nebo mikrokapslí nebo implantátů, nebo perkutánně, například ve formě mastí nebo tinktur, nebo také nazálně, například ve formě nazálních sprejů nebo aerosolových směsí.

Farmaceutické preparáty se mohou vyrobit o sobě známými způsoby za použití farmaceuticky inertních anorganických nebo organických nosičů a přídavných látek, přičemž se tyto společně s účinnou látkou převedou na požadovanou aplikační formu. Pro výrobu pilulek, tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí se může například použití laktóza, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, mastek, kyselina stearová a její soli a podobně. Jako nosiče pro měkké želatinové kapsle a čípky je možno uvést například tuky, vosky, polotuhé a kapalné polyoly, přírodní nebo ztužené oleje a podobně. Jako nosiče pro výrobu roztoků a sirupů jsou vhodné například voda, polyoly, roztoky sacharózy, invertního cukru, glukózy a podobně. Jako nosiče pro výrobu injekčních roztoků jsou vhodné například voda, alkoholy, glycerol, polyoly rostlinné oleje a podobně. Jako nosiče pro mikrokapsle nebo implantáty jsou vhodné například směsné polymery z kyseliny glykolové a kyseliny mléčné.

Farmaceutické preparáty mohou obsahovat vedle účinných látek a nosičů také ještě přísady, jako jsou například plnidla, bubřidla, pojivá, mazadla, smáčedla, stabilizační látky, emulgátory, konzervační látky, sladidla, barviva, chuťové látky nebo aromatizační činidla, pufrovací substance, zahušťovadla, rozpouštědla nebo látky zprostředkující rozpouštění, urychlovače rozpouštění, odpěňovadla, látky tvořící soli, látky tvořící gely, zahušťovadla, činidla regulující tečení, sorpční prostředky, činidla pro dosažení depotního efektu nebo činidla, obzvláště soli, pro změnění osmatického tlaku, potahové prostředky, antioxidanty a podobně. Farmaceutické preparáty mohou obsahovat také dvě nebo více sloučenin obecného vzorce I nebo jejich fyziologicky přijatelných solí a ještě jednu nebo několik jiných terapeuticky účinných látek.

Takové jiné terapeuticky účinné substance jsou například prostředky podporující prokrvení, jako je například dihydroergocristin, nicergolin, buphenin, kyselina nikotinová a jejich estery, bencyclan, nafitidrofuryl, deriváty prostacyklinu a deriváty PGEj; antiaginosní sloučeniny, jako je například nifedipin, izosorbiddinitrát, izosorbidmononitrát, glycerolnitrát, molsidomin averapamin; β-blokátory, jako je například propranolol, oxprenolol, atenolol, metaprolol a penbutolol. Kromě toho se dají uvedené sloučeniny kombinovat s ACE-inhibitory, jako je například captopril, rampiril, enalpiril, lisinopril a trandolapril, inhibitory funkce trombocytů, jako je kysleina acetylsalicylová, ticlopidin a clopidogrel a s inhibitory srážení krve, jako je například heparin a nízkomolekulámí hepariny.

Dávka se může pohybovat v širokém rozmezí aje třeba ji přizpůsobit vždy v každém jednotlivém případě individuálním okolnostem. Všeobecně bývá při orální aplikaci denní dávka asi 0,1 až 5 mg/kg, výhodně 0,3 až 3 mg/kg, obzvláště 0,5 až 2 mg/kg tělesné hmotnosti, dostatečná k dosažení požadovaných výsledků. Při intravenózní aplikaci činí denní dávka všeobecně asi 0,01 až 0,6 mg/kg, výhodně 0,05 až 0,3 mg/kg, obzvláště 0,05 až 0,1 mg/kg tělesné hmotnosti. Denní dávka se může obzvláště při aplikaci větších množství, rozdělovat na větší počet, například 2, 3

-7CZ 292672 B6 nebo 4 dílčí dávky. Popřípadě může být, vždy podle individuálních reakcí, potřebné, uvedené denní dávky změnit jak směrem vzhůru, tak také dolů. Farmaceutické preparáty obsahují normálně 0,2 až 500 mg, výhodně 1 až 200 mg, obzvláště 10 až 100 mg účinné látky obecného vzorce I nebo některé z její farmaceuticky akceptovatelné soli pro jednu dávku.

Sloučeniny obecného vzorce I podle předloženého vynálezu se mohou například použít při potírání, popřípadě předcházení onemocnění kardiovaskulárního systému, onemocnění koronárního cévního systému nebo cerebrovaskulámího systému nebo periferních arteriálních onemocnění. Nacházejí akutní použití při nebezpečí trombózy a chronické při prevenci arterioklerózy a trombózy a chronické při prevenci arteriosklerózy a trombózy, například při profylaxi a terapii onemocnění arteriálního krevního oběhu, jako je akutní infarkt myokardu, sekundární prevence infarktu myokardu, profylaxe reocclusie po lyži a dilataci (PTCA), instabilní angína pectoris, transitorické ischemické ataky, mrtvice, koronární bypass-operace a profylaxe reocclusie bypassu, plicní embolie, periferní arteriální obstrukční onemocnění, dissezierující enauiysma; při terapii venózních a mikrocirkulačních oběhových onemocnění, jako je hluboká žilní trombóza, disseminované intravaskulámí sraženiny, pooperační a poporodní trauma, chirurgické nebo infekční šoky, septicemie, pro terapii při onemocněních s hyperreagibilními trombocyty, trombotická a trombocytopenická purpura, preeklampsie, premenstruační syndrom, dialýza, nebo extrakorporální cirkulace. Další možné použití je během operace rakoviny a také profylaktické při rakovině.

Použití sloučenin obecného vzorce I podle předloženého vynálezu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí při ošetření nebo profylaxi těchto onemocnění je rovněž předmětem předloženého vynálezu, stejně jako jejich použití pro výrobu léčiv pro ošetření nebo profylaxi těchto onemocnění. Obzvláště je předmětem předloženého vynálezu jejich použití pro výrobu léčiv pro ošetření a předcházení onemocnění koronárního oběhového systému nebo cerebrovaskulámího systému nebo periferních oběhových onemocnění nebo venózních nebo mikrocirkulačních onemocnění oběhového systému, jakož i použití pro výrobu léčiv, která se mohou použít při dialýze nebo extrakorporální cirkulaci.

Sloučeniny obecného vzorce I byly zkoušeny na svůj inhibiční účinek při agregaci krevních destiček a na ulpívání fíbronogenu na krevních destičkách. Měření se provádí na gelově filtrovaných lidských krevních destičkách, aktivovaných pomocí ADP nebo trombinu. Dále se zkouší jejich účinek in vivo na inhibici agregace trombocytů a na inhibici trombózy.

-8CZ 292672 B6

Příklady provedení vynálezu

Všechny produkty byly identifikovány pomocí hmotových spekter a NMR-spekter.

Příklad 1

Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-

2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové ^H χ““

H COOH

100 g Amberlite^RIRA93 (volná báze, Fluka) se míchá s 1000 ml 2 M roztoku kyseliny maleinové po dobu 10 minut při teplotě místnosti. Roztok kyseliny maleinové se potom odsaje a iontoměnič se potom ještě dvakrát zpracuje stejným způsobem 2 M roztokem kyseliny maleinové. Iontoměničová pryskyřice se potom promyje vodou do neutrální reakce. 1,51 g (3 mmol) hydrochloridu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové se rozpustí v 15 ml vody a tento roztok se nechá protékat přes sloupec výše uvedeného iontoměniče. Tento sloupec se potom eluuje vodou a shromažďují se frakce po 25 ml. Z frakcí 2 a 3 vykrystalizuje při teplotě místnosti čistý hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové a vytvořené krystaly se izolují filtrací.

Výtěžek: 771 mg (44 %) bílé krystalické pevné látky,

t.t.: 228 °C, [a]_D ~ -54,4° (c = 1, methylalkohol, 22 °C),

FAB-MS: 466 (M + H)⁺.

Rentgenovou krystalovou strukturní analýzou bylo prokázáno, že se jedná o hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové (s molámím poměrem ethylester : kyseliny maleinová =1:1) který je možno také znázornit následujícím iontovým vzorcem, který je ekvivalentní s výše uvedeným vzorcem.

-9CZ 292672 B6

Z matečných roztoků frakcí 2 a 3 a z frakcí 4 až 12 se dá izolovat další 740 mg čistého hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4—methyl-

2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové lyofilizací vodného roztoku.

Celkový výtěžek: 1,511 g (87 %).

Příklad 2

Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4~(4-ammoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-

2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové

2a) Ethylester kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-kyanofenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-lyl)acetylamino)-3-fenylpropionové

7,7 kg (33,5 mol) hydrochloridu ethylesteru kyseliny (S)-3-amino-3-fenylpropionové se předloží do kotle a smísí se s roztokem 9,14 kg (33,5 mol) kyseliny 2-((S)-4-(4-kyanfenyl)-4methyl-2,5-ůioxoimidazolidin-l-yl)octové v 50 ml ethylesteru kyseliny octové. Při vnitřní teplotě v rozmezí 20 °C až 23 °C se přidá 7,72 kg (8,54 1; 67 mol) N-ethylmorfolinu, směs se míchá po dobu 15 minut a potom se při teplotě v rozmezí 20 °C až 23 °C po částech přidá 11 kg (33,5 mol) O-((kyan-(ethoxykarbonyl)-methylen)amino-N,N,N',N'-tetramethyIuroniumtetrafluoroborátu. Reakční směs se míchá při teplotě v rozmezí 20 °C až 23 °C po dobu 2 hodin, přidá se 50 1 vody a míchá se dále po dobu 30 minut při teplotě v rozmezí 20 °C až 23 °C. Potom se přidá 501 methyl-terc.-butyletheru a reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě v rozmezí 8 °C až 12 °C. Vytvořená bílá suspenze se převede do odstředivky a odstředí se. Filtrační koláč se promyje 28 1 vody, potom 28 1 ethylalkoholu a nakonec ještě jednu 561 vody. Produkt se potom suší ve vakuové sušárně při teplotě 40 °C v produktu dusíku.

Výtěžek: 9,84 kg (85%).

FAB-MS: 449(M + H)⁺.

2b) Ethylester kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-ammohydroximinomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino-3-fenylpropionové

Do kotle se předloží 1201 ethylalkoholu a za míchání se při teplotě místnosti přidá 12 kg (26,786 mol) ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-kyanofenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové. Potom se přidá 3,74 kg (53,813 mol) hydroxylamin-hydrochloridu a 5,44 kg (7,45 1; 53,86 mol) triethylaminu a reakční směs se zahřeje k varu pod zpětným chladičem a potom se míchá po dobu 2 hodin při teplotě 80 °C. Při teplotě lázně 50 °C se potom za vakua oddestiluje 90 1 ethylalkoholu, získaný zbytek se vyjme do 220 1 ethylesteru kyseliny octové a třikrát se extrahuje vždy 50 1 vody. Ethylacetátová fáze se ve vakuu

-10CZ 292672 B6 odpaří při teplotě lázně 50 °C až na objem 30 1, třikrát se smísí se vždy 10 1 toluenu a potom se odpaří do sucha.

Výtěžek: 11,1 kg (85 %).

FAB-MS: 482 (M + H)⁺.

2c) Sůl kyseliny octové ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino-3-fenylpropionové kg (22,869 mol) ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminohydroximinomethyl)fenyl)4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino-3-fenylpropionové se rozpustí v 70 1 ledové kyseliny octové a tato směs se dá do autoklávu o objemu 125 1. K tomuto roztoku se přidá suspenze 1,0 kg palladia na uhlí (10%; 50% vody) a 51 ledové kyseliny octové, načež se hydrogenuje při teplotě 50 °C a za tlaku vodíku 1,0 MPa po dobu 15 hodin. Katalyzátor se potom přes tlakovou nuč pod dusíkovou atmosférou odsaje a promyje se 5 1 ledové kyseliny octové. Filtrát se při teplotě lázně 60 °C ve vakuu na rotační odparce úplně odpaří, získaný zbytek se rozpustí ve 30 1 acetonu a tento roztok se v průběhu 30 minut při teplotě 20 °C přidá ke 200 1 methyl-terc-butyletheru. Reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti avysrážený produkt se odstředí. Filtrační koláč se promyje 10 1 methyl-terc-butyletheru a ve vakuu se usuší. Získá se takto 10,1 kg (85 %) produktu.

FAB-MS: 466(M + H)⁺.

Pro čištění se do kotle předloží 90 1 acetonu a 10,1 kg výše popsaného produktu, směs se zahřeje na teplotu 50 °C a míchá se po dobu jedné hodiny při této teplotě. Při teplotě pláště 20 °C se potom míchá přes noc, pevná látka se izoluje odstředěním a promyje se 10 1 acetonu. Acetonem zvlhčený produkt se rozmíchá s 50 1 acetonu, zahřeje se na teplotu varu pod zpětným chladičem (57 °C) a míchá se po dobu jedné hodiny. Potom se za míchání nechá během 24 hodin ochladit, míchá se po dobu jedné hodiny při teplotě 15 °C a produkt se izoluje odstředěním. Filtrační koláč se promyje 101 methyl-Zerc-butyletheru a ve vakuu se za tlaku 0,01 MPA a při teplotě 40 °C usuší. Získaný produkt se rozemele.

Výtěžek: 7,2 kg (60 %).

FAB-MS: 466 (M + H)⁺.

2d) Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino-3-fenylpropionové

75,68 g (144 mmol) soli kyseliny octové ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino-3-fenylpropionové se rozpustí ve 340 ml vody, tento roztok se přefiltruje a za míchání se smísí s roztokem 16,87 g (144 mmol) kyseliny maleinové (99%) ve 48 ml vody. Reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny a potom se nechá stát přes noc v ledové lázni. Produkt vypadne z roztoku jako krystalická pevná látka, která se odsaje a za vysokého vakua se usuší nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 80,7 g (96 %) bílé krystalické pevné látky,

t.t.: 228 °C, [cc]d⁼ -54,4° (c = 1; methylalkohol; 22 °C),

Fab-MS: (M + H)⁺.

-11 CZ 292672 B6

Výroba výchozích sloučenin, použitých v kroku 2a)

I. Hydrochlorid ethylesteru kyseliny (S)-3-amino-3-fenylpropionové la. (R)-2-amino-2-fenylethanol g (920 mmol) lithiumborhydridu se rozpustí ve 420 ml absolutního tetrahydrofuranu, za míchání se přikape 233,5 ml (1,84 mol) trimethylchlorsilanu a potom se po částech v průběhu 4 hodin přidá 69,5 g (0,46 mol) (R)-fenylglycinu. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, potom se přidá 690 ml methylalkoholu, míchá se po dobu 2 hodin při teplotě místnosti a ve vakuu se zahustí. Získaný zbytek se za míchání rozpustí v 690 ml 20% vodného roztoku hydroxidu draselného a vodná fáze se třikrát extrahuje ethylesterem kyseliny octové. Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí.

Výtěžek: 41,2 g (65,3 %).

FAB-MS: 138 (M + H)⁺.

lb. (R)-2-benzyloxykarbonylamino-2-fenylethanol

40.5 g (295 mol) (R)-2-amino-2-fenylethanolu se rozpustí ve 385 ml absolutního dimethylformamidu, za míchání se při teplotě 0 °C přidá 73,5 g N-(benzylkarbonyloxy)sukcinimidu (295 mmol) a při této teplotě se reakční směs míchá po dobu jedné hodiny. Ledová lázeň se potom odstraní a vsázka se nechá stát po dobu 48 hodin při teplotě místnosti. Reakční roztok se potom ve vakuu odpaří a získaný zbytek se vyjme do 500 ml ethylesteru kyseliny octové. Organická fáze se promyje dvakrát 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a jednou vodou, načež se vysuší pomocí bezvodého síranu sodného a zahustí se. Získaný krystalický surový produkt (82,3 g) se znovu rozpustí v ethylesteru kyseliny citrónové a jednou vodou. Potom se produkt vykrystalizuje ze směsi ethylesteru kyseliny octové a petroletheru.

Výtěžek: 74,6 g (93,3 %).

FAB-MS: 272 (M + H)⁺.

lc. ((R)-2-ben2yloxykarbonylamino-2-fenyl-ethyl)-4-methylfenylsulfonát

53,9 g (198,7 mmol) (R)-2-benzyloxykarbonylamino-2-fenylethanolu se rozpustí ve směsi 500 ml methylenchloridu a 80,3 ml (993,5 mmol) pyridinu, za míchání se při teplotě 0 °C přidá

45.5 g (238,4 mmol) tosylchloridu ve 240 ml methylenchloridu a reakční směs se nechá míchat po dobu 7 hodin při teplotě místnosti, potom se přidá dalších 11,36 g tosylchloridu (59,61 mmol), nechá se míchat po dobu 5 hodin při teplotě 0 °C a vsázka se nechá stát přes noc při teplotě místnosti, načež se ve vakuu odpaří. Získaný zbytek se vyjme do ethylesteru kyseliny octové, organická fáze se třikrát promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a dvakrát vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí. Získaný zbytek se rozetře s diethyletherem, odsaje se, promyje se diethyletherem a usuší se nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 60,9 g (72 %).

Matečný roztok se zahustí, vyjme se do směsi heptanu ethylesteru kyseliny octové (6:4) a chromatografuje se na silikagelu.

Výtěžek: 3,5 g (4,2 %).

Celkový výtěžek: 64,4 g (76,2 %).

-12CZ 292672 B6

FAB-MS: 426 (M + H)⁺.

ld. (S)-3-benzyloxykarbonylamino-3-fenylpropionitril

60,5 g (142,2 mmol) ((R)-2-benzyloxykarbonylamino-2-fenyl-ethyl)-methylfenylsulfonátu se rozpustí v 675 ml dimethylformamidu, k tomuto roztoku se přidá 13,9 g (213,3 mmol) kyanidu draselného, 5,64 (21,33 mmol) 18-koruny-6 a 520 mg (3,13 mmol) jodidu draselného a reakční směs se míchá po dobu 20 hodin při teplotě 50 °C. Reakční roztok se potom vlije do 500 ml ledové vody a míchá se po dobu 5 hodin při teplot 0 °C, načež se odsaje a získaná sraženina se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové. Organická fáze se potom třikrát promyje vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí. Získaný zbytek se rozetře s diethyletherem, odsaje se, promyje se diethyletherem a usuší se nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 25,3 g (63,5 %),

FAB-MS: 281 (M + H)⁺.

le. Ethylester kyseliny (S)-3-benzyloxykarbonylamino-3-fenylpropionové g (53,51 mmol) (S)-3-benzyloxykarbonylamino-3-fenylpropionitrilu se suspenduje ve směsi 110 ml absolutního ethylalkoholu a 30 ml dioxanu a za míchání a chlazení se do této suspenze zavádí při teplotě v rozmezí 10 °C až 15 °C plynný chlorovodík. Po krátké době se vytvoří čirý roztok. Plynný chlorovodík se za chlazení zavádí dále, dokud již není pomocí chromatografie na tenké vrstvě prokazatelný žádný výchozí materiál. Potom se přes reakční směs vede po dobu 15 minut dusík a nakonec se směs ve vakuu odpaří. Získaný zbytek se smísí s vodou až do trvajícího zákalu, načež se vodná fáze extrahuje třikrát ethylesterem kyseliny octové. Spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí. Získaný zbytek se vyjme do směsi ethylesteru kyseliny octové a petroletheru (1 : 1) a chromatografuje se na silikagelu.

Výtěžek: 10,55 g (60 %).

FAB-MS: 328 (M + H)⁺.

lf. Hydrochlorid ethylesteru kyseliny (S)-3-amino-3-fenylpropionové

10,29 g (31,44 mmol) ethylesteru kyseliny (S)-benzyloxykarbonylamino-3-fenylpropionové se rozpustí ve 125 ml ethylalkoholu a na automatické byretě se za přídavku 3 N ethanolické kyseliny chlorovodíkové při pH 4 katalyticky hydrogenuje za použití palladia na aktivním uhlí. Katalyzátor se potom odsaje před křemelinu a filtrát se zahustí. Získaný zbytek se rozetře s diethyletherem, odsaje se, promyje se diethyletherem a usuší se nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 5,05 g (70 %).

FAB-NS: 194 (M + H)⁺.

Π. Kyselina 2-((S)-4-(4-kyanofenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)octová

Ha (R,S)-4-(4-bromfenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin

49,8 g (0,25 mol) 4-bromacetofenonu, 21,2 g (0,235 mol) kyanidu draselného a 211,4 g (2,2 mol) uhličitanu amonného se suspendují v 1,0 1 vodného roztoku ethylalkoholu (0,5 1 destilované vody a 0,5 ethylalkoholu). Tato suspenze se míchá při teplotě 60 °C, dokud se již nedá pomocí chromatografie na tenké vrstvě prokázat žádný výchozí materiál (asi 8 hodin). Potom se reakční

-13CZ 292672 B6 směs ochladí na teplotu místnosti a hodnota pH se upraví pomocí polokoncentrované kyseliny chlorovodíkové na 6,3, přičemž se produkt vysráží jako bílá sraženina. Vsázka se ponechá stát přes noc při teplotě 4 °C, bílá sraženina se odsaje, promyje se vodou a ve vakuu se usuší nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 65,3 g (97 %) bílé pevné látky.

FAB-MS: 269 (M + H)⁺.

Hb. Kyselina (R,S)-2-amino-2-(4-bromfenyl)propionová

5.3 g (20 mmol) (R,S)-4-(4-bromfenyl)-4-methyl-2,5-dioxonnidazolidinu se suspenduje v 50 ml 3 N hydroxidu sodného a tato suspenze se zahřívá v autoklávu po dobu jedné hodiny při teplotě 145 °C za přetlaku dusíku 1,0 MPa. Ochlazený reakční roztok se potom zředí 150 ml vody a za silného míchání se hodnota pH upraví pomocí kyseliny octové za chlazení ledem na 4, načež se míchá při teplotě 0 °C ještě po dobu 2 hodin. Vytvořená sraženina se odsaje, promyje se vodou a ve vakuu se usuší nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 3,65 g (75 %) bílé pevné látky.

FAB-MS: 244 (M + H)⁺.

líc. Ethylester kyseliny (R,S)-2-amino-2-(4-bromfenyl)propionové

27.3 g (112,3 mmol) kyseliny (R,S)-2-amino-(4-bromfenyl)-propionové se suspenduje ve 150 ml 9,8 N ethanolického roztoku chlorovodíku, zahřívá se po dobu 18 hodin kvaru pod zpětným chladičem, přidá se ještě jednou 50 ml 9,8 N ethanolického roztoku chlorovodíku a zahřívá se po dobu dalších 5 hodin k varu pod zpětným chladičem. Roztok se potom zahustí a získaný zbytek se rozdělí mezi ethylester kyseliny octové a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se promyje vodou a vysuší se pomocí bezvodého síranu sodného. Surový produkt (23,22 g) se pro vyčištění destiluje za vysokého vakua (teplota varu = 129 °C až 130 °C při 267 Pa.).

Výtěžek: 20,7 g (68 %).

FAB-MS: (M + H)⁺.

lid. Ethylester kyseliny (S)-2-amino-2-(4-bromfenyI)propionové

44.3 g (163 mmol) ethylesteru kyseliny (R,S)-2-amino-2-(4—bromfenyl)propionové a 24,8 g (163 mmol) kyseliny D-(-)-mandlové se při teplotě místnosti rozpustí ve 138 ml izopropylalkoholu, přidá se 414 ml diizopropyletheru a přes noc se chladí na teplotu 0 °C. Vypadlá sraženina se odsaje a získaná sůl se ještě dvakrát stejným způsobem rekrystalizuje. Získá se takto 20 g enantiomerně čisté soli ([a]o ~ -14° (c = 1; 2,15 N ethanolický roztok chlorovodíku; 22 °C). Získaná sůl se rozdělí mezi ethylester kyseliny octové a vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, organická fáze se promyje vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí. Enantiomemí čistota je stanovena po derivatizaci s chloridem kyseliny R-(-)-amethoxy-a-(trifluormethyl)fenyloctové (Mosherovo činidlo) pomocí HPLC vyšší než 99 %.

Výtěžek: 12,5 g (28 %).

[a]o = + 52,7° (c = 1; 2,15 N ethanolický roztok chlorovodíku; 22 °C).

FAB-MS: 272(M + H)⁺.

-14CZ 292672 B6

Ile. N-((S)-l-(4-bromfenyl)-l-(ethoxykarbonyl)ethyl)-N'-(ethoxykarbonylmethyl)močovina

12,4 g (45,6 mmol) ethylesteru kyseliny (S)-2-amino-2-(4-bromfenyl)propionové se rozpustí v 70 ml methylenchloridu a během 15 minut se při teplotě 0 °C přikape roztok 5,11 ml (45,6 mmol) ethylesteru kyseliny izokyanátooctové ve 35 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě 0 °C a potom se zahustí.

Výtěžek: 18,1 g (99 %).

[a]_D = +10,7° (c = 1; 2,15 N ethanolický roztok chlorovodíku; 22 °C).

FAB-MS: 401 (M + H)⁺.

Uf. Kyselina 2-((S)-4-(4-bromfenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)octová g (44,9 mmol) N-((S)-l-(4-bromfenyl)-l-(ethoxykarbonyl)ethyl)-N'-(ethoxykarbonylmethyl)močoviny se smísí se 180 ml 6N roztoku chlorovodíku a reakční směs se po dobu 10 hodin zahřívá kvaru pod zpětným chladičem. Potom se nechá ochladit na teplotu 0 °C a vysrážený reakční produkt se odsaje. Potom se promyje vodou a ve vakuu se usuší nad oxidem fosforečným.

Výtěžek: 11,4 g (78 %).

[a]_D = +32,8° (c = 1; 2,15 N ethanolický roztok chlorovodíku; 22 °C).

FAB-MS: 327(M + H)⁺

Kg. Kyselina 2-((S)-4-(4—kyanofenyl)-4—methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)octová

11,75 g (35,9 mmol) kyseliny 2-((S)-4-(4-bromfenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)octové se rozpustí v 90 ml dimethylformamidu, přidá se 14,15g(158 mmol) kyanidu měďného a reakční směs se za míchání zahřívá po dobu 20 hodin k varu pod zpětným chladičem. Tato reakční směs se potom ochladí a vlije se do 300 ml vody. Vodná fáze se okyselí pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové (ph = 1 až 1,5), míchá se po dobu 30 minut a odsaje se. Vodná fáze se potom třikrát extrahuje ethylesterem kyseliny octové, spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a ve vakuu se zahustí.

Výtěžek: 9,3 g (95%).

[a]_D = +33,4° (c = 1; 2,15 N ethanolický roztok chlorovodíku; 22 °C).

FAB-MS: 274(M + H)⁺.

Příklad 3

Stanovení sorpce vodní páry

Stanovení přijímání vodní páiy substancí se provádí pomocí dvouramenné mikrováhy, která se provozuje ve vakuu, popřípadě v atmosféře, která má definované složení, popřípadě definovaný tlak. Na jedné straně váhy se nachází vysušený vzorek, na druhé straně tárovací závaží. V prostoru váhy se vytvoří atmosféra vodní páry, jejíž tlak se postupně zvyšuje. Přírůstek hmotnosti vzorku se registruje v závislosti na tlaku vodní páry. Měření se provádí při konstantní teplotě 25 °C.

-15CZ 292672 B6

Prostor váhy se nejprve evakuuje až do konstantní hmotnosti a zajistí se výchozí hmotnost vzorku. Potom se do evakuovaného prostoru váhy zavede přes ventil určité množství vodní páry. V dále uváděném pokusu odpovídá v tomto prvním kroku nastavený tlak vodní páry při teplotě měření 25 °C relativní vlhkosti vzduchu 4,7 %. Když se po zavedení vodní páry opět dosáhne konstantní hmotnosti, to znamená když je vzorek v rovnováze s atmosférou vodní páry, registruje se přírůstek hmotnosti vzorku. Potom se ve více krocích zvyšuje zaváděním další vodní páiy tlak vodní páry (každý tlak vodní páry přitom odpovídá určité relativní vlhkosti vzduchu při teplotě měření 25 °C). Při každém kroku se po dosažení konstantní hmotnosti registruje přírůstek hmotnosti vzorku. Při zkoumání hydrogemnaleátu ethylesteru kyseliny vzorku. Při zkoumání hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-amino-imino-methyl)-fenyl)-4methyl-2,5-dioxo-imidazolidin-l-yl)-acetylamino)-3-fenyl-propionové byly pozorovány následující přírůstky hmotnosti, vztažené na výchozí hmotnost vzorku.

Relativní vlhkost (%) 4,7 18,5 32,8 49,6 64,7 75,5 82,1 přírůstek hmotnosti (%) 0,06 0,11 0,16 0,23 0,33 0,43 0,54

Výsledky ukazují, že i při relativní vlhkosti vzduchu asi 80 % je přírůstek hmotnosti hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-amino-imino-methyl)-fenyl)-4—methyl-2,5dioxo-imidazolidin-l-yl)-acetylamino)-3-fenyl-propionové pouze velmi nepatrný (asi 0,5 %). Substance tedy není hygroskopická.

Příklad 4

Farmakologické vyšetření na modelu cyklického kolísání koronárního prokrvení u psa (model instabilní angíny pectoris)

Psi obojího pohlaví (20 až 35 kg) byli narkotizováni ketaminem a pentobarbitalem sodným, napojeni na umělé dýchání a připraveni na měření hemodynamických parametrů (periferní krevní tlak, levoventrikulámí tlak, konstraktibilita srdečního svalu a srdeční frekvence), jakož i na měření EKG. Krevní plyny a hematokrit byly udržovány konstantní pomocí infiizí elektrolytů. Po ošetření levé hrudní dutin bylo srdce obnaženo. Rámus circumflexus sin. koronární arterie byl opatřen pro zajištění středního koronárního prokrvení elektromagnetickou měřicí hlavou průtoku. Distálně k této měřicí hlavě byl rámus circumflexus pro poškození cévního endotelu smáčknut krátkodobě svorkou. V poškozené oblasti byla vyvolána soustředná konstrukce malým válečkem z plastu (průměr vždy podle velikosti cévy 1,0 až 1,7 mm, délka 4 mm). Tím došlo k potlačení reaktivní hyperemie v důsledku 10 sekund dlouhé okluze rámus cicumflexus a ke vzniku cyklického kolísání prokrvení (asi 10 za hodinu) na základě opakované tvorby trombů, bohatých na trombocyty, v oblasti stenózy. 60 minut po prvním výskytu pravidelného kolísání průtoku krve byly aplikovány zkoušené látky jako intravenózní nebo intraduodenální bolus. Následně bylo po dobu alespoň 2 až 5 hodin pozorováno kolísání prokrvení. Byl zjišťován procentuální útlum trombotického koronárního cyklu na 5 až 8 zvířatech srovnáním mezi průměrnými hodnotami kolísání prokrvení za hodinu před a po aplikaci zkoušených substancí. U kontrolních zvířat zůstal počet cyklického kolísání koronárního prokrvení za hodinu po mnoho hodin konstantní. (Literatura: Folts J. D. a kol., (1976), Circulation 54, 365-370; Just M. a kol., (1989), J. Cardiovasc. Pharmacol. 14 (Suppl. 11), 129-136).

Při zkoumání hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové byly získány následující výsledky. Udávalo je procentuální Snížení počtu stenózou indukovaných cyklických kolísání koronárního průtoku krve za hodinu po první, druhé a třetí hodině po aplikaci substance ve srovnání s obdobím před aplikací. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Dávka je uváděna v mg najeden kilogram tělesné hmotnosti.

-16CZ 292672 B6

Tabulka

Dávka mg/kg	způsob aplikace	snížení cyklického kolísání (%)
první hod.	druhá hod. třetí hod
0,1	intravenózně	52	81	89
0,2	intravenózně	75	96	99
0,1	intraduodenálně	39	62	74
0,2	intraduodenálně	23	66	78

Výsledky, získané v tomto pokusu in vivo dokládají silnou antitrombotickou aktivitu zkoušené substance, zvláště pak koronární antitrombotický účinek. Všechny během pokusu zaznamená hemodynamické parametry nevykazovaly žádné signifikantní změny.

Příklad 5

Farmakologická zkouška na modelu ex-vivo inhibice agrogenace trombocytů u psů

Psům obojího pohlaví (míšenci labrador/harrier, tělesná hmotnost 21 až 28 kg) byla přes noc 15 odebrána strava. Zkoušené látky jim byly podány orálně v želatinových kapslích nebo intravenózně. Před aplikací zkoušených substancí a potom vícekrát v časovém období 24 hodin jim bylo odebíráno 20 ml krve z véna cephalica a bylo zabráněno koagulaci kyselou citrátovou dextrózou (9+1 obj.). Odstředěním byla připravena plazma, bohatá na krevní destičky (PRP). Agregace trombocytů vPRP byla zjišťována agregometrem (BioData) po přidání ADP 20 (3 - 30 pmol/l) nebo kolagenu (0,3 - 10 pg/ml) + epinefrinu (10 μΜ) při teplotě 37 °C. Srovnávaná byla v procentech vyjádřená maximální agregace trombocytů před a po aplikaci zkoušené substance. Udávána je procentuální inhibice agregace trombocytů při nejnižší koncentraci agonistů, kterými ještě byla vyvolána ireverzibilní maximální agregace. Dále byla při odběru vzorku krve z odchlupené přední tlapky měřena pomocí přístroje Simplate^Rl kožní krvácivost. 25 Vypočteno bylo procentuální prodloužení krvácivosti po aplikaci zkoušených látek ve srovnání s výchozími hodnotami.

Při zkoumání hydrogenmaleátu ethylesteru kyseliny (S)-3-(2-((S)-4-(4-aminoimmomethyl)fenyl)-4-methyl-2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové byly získány 30 následující výsledky. V následujících tabulkách je udávána procentuální inhibice agregace trombocytů 1 h, 4 h, 8 h a 24 h po aplikaci zkoušené substance. Dávka je udávána v mg na kilogram na tělesné hmotnosti, n je počet zkoušených psů.

Tabulka

a) Inhibice ADP-indukované ex-vivo agregace trombocytů

Dávka mg/kg	způsob aplikace (n)	inhibice agregace (%)
1 hod.	4 hod.	8 hod.	24 hod.
0,5	intravenózně (6)	93	88	59	16
0,5	orálně (6)	46	83	33	18
1	orálně (6)	76	97	86	70
2	orálně (8)	64	86	78	49

- 17CZ 292672 B6

Tabulka

b) Inhibice kollagenem indukované ex-vivo agregace trombocytů

Dávka mg/kg	způsob aplikace (n)	inhibice agregace (%)
lhod.	4 hod.	8 hod.	24 hod.
0,5	intravenózně (6)	27	26	18	0
0,5	orálně (6)	8	19	5	0
1	orálně (6)	36	67	50	11
2	orálně (8)	28	65	60	20

Maximální změnou krvácivosti bylo prodloužení o 68 % (p < 0,05) 4 hodiny po intravenózní aplikaci 0,5 mg/kg a prodloužení o 122 % (p < 0,05) 2 hodiny po orální aplikaci 2 mg/kg. Při nižších orálně podávaných dávkách se krvácivost signifikantně neměnila. Výsledky těchto pokuío sů dokládají významnou účinnost zkoušené látky jako in-vivo inhibitoru agregace trombocytů.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(aminoiminomethyl)fenyl)-4-methyl-
2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové obecného vzorce I ve kterém HB značí kyselinu maleinovou, ve všech stereoizomemích formách a jejich směsích v libovolných poměrech, jakož i jeho fyziologicky přijatelné soli.

2. Hydrogenmaleát podle nároku 1, ve kterém je na chirálním centru v imidazolidinovém kruhu 25 (Sj-konfigurace a na chirálním centru v jednotce kyseliny propionové (S)-konfigurace a jeho fyziologicky přijatelné soli.
3. Hydrogenmaleát ethylesteru kyseliny 3-(2-(4-(4-(ammoiminomethyl)fenyl)-4-methyl2,5-dioxoimidazolidin-l-yl)acetylamino)-3-fenylpropionové.

-18CZ 292672 B6
4. Způsob výroby hydrogenmaleátu obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se ve sloučenině obecného vzorce Π ve kterém HV značí libovolnou anorganickou nebo organickou kyselinu, různou od kyseliny 5 maleinové, provede výměna aniontu s kyselinou maleinovou a/nebo maleáty.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se po výměně aniontu chromatografují sloučeniny obecného vzorce Π přes iontoměnič, nasycený kyselinou maleinovou.

ío
6. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se pro výměnu aniontu smísí sloučeniny obecného vzorce Π v rozpouštědle s kyselinou maleinovou nebo maleáty.
7. Způsob podle jednoho nebo několika nároků 4 až 6, vyznačující se tím, že se výměna iontu provádí se solemi kyseliny octové vzorce nb
8. Způsob podle jednoho nebo několika nároků 4až 7, vyznačující se tím, že se pro výrobu sloučenin obecného vzorce Π sloučeniny obecného vzorce ΙΠ (Hl)

-19CZ 292672 B6 kopulují se sloučeninami obecného vzorce IV (IV) na sloučeniny obecného vzorce V oc₂h₅

O

5 tyto se převedou reakcí s hydroxylaminem na sloučeniny obecného vzorce VI

O (VI) a tyto se potom převedou hydrogenací za přídavku kyseliny obecného vzorce HV, obzvláště hydrogenací za přítomnosti kyseliny octové, na sloučeniny obecného vzorce lib.
10 9. Hydrogenmaleát obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli pro použití jako léčiva.

10. Hydrogenmaleát obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli pro použití jako inhibitory agregace trombocytů, pro použití pro

15 potlačení trombóz nebo pro použití jako inhibitorů metastázování karcinomových buněk.
11. Použití hydrogenmaleátu obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3 a/nebo jeho fyziologicky přijatelných solí pro výrobu léčiv pro inhibici agregace trombocytů, pro potlačení trombózní nebo pro inhibici metastázování karcinomových buněk.
12. Hydrogenmaleát obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli pro ošetření nebo předcházení onemocnění koronárního oběhového systému nebo cerebrovaskulámího systému, periferních arteriálních onemocnění, nebo venózních nebo mikrocirkulatorických oběhových onemocnění, nebo pro použití při dialýze nebo mimotělní

25 cirkulaci.

-20CZ 292672 B6
13. Použití hydrogenmaleátu obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až 3 a/nebo jeho fyziologicky přijatelných solí pro výrobu léčiv pro ošetření nebo předcházení onemocnění koronárního oběhového systému nebo cerebrovaskulámího systému, periferních

5 arteriálních onemocnění, nebo venózních nebo mikrocirkulatorických oběhových onemocnění, nebo léčiv, která se používají při dialýze nebo mimotělní cirkulaci.
14. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou látku jeden nebo několik hydrogenmaleátů obecného vzorce I podle jednoho nebo několika nároků 1 až ío 3 a/nebo jednu nebo několik jejich fyziologicky přijatelných solí společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči a přísadami.