CZ292614B6 - 16-Substituované 4-azaandrostanové deriváty a farmaceutické prostředky s jejich obsahem - Google Patents

Abstract

16-Substituované 4-azaandrostanové deriváty obecného vzorce I, jsou látky, které jsou inhibitory 5.alfa.-reduktázy a je proto možno je ve formě farmaceutických prostředků, které rovněž tvoří součást řešení, použít k léčení poruch, citlivých na působení androgenních látek, jako jsou akné, zvýšené ochlupení u žen, plešatost mužského typu a benigní hyperplasie prostaty.ŕ

Description

Vynález se týká 16-substituovaných 4-azaandrostanových derivátů, které jsou cennými inhibitory 5-alfa-reduktázy, a to jejího izoenzymu 1. Tyto látky jsou vhodné pro použití v lékařství ve formě farmaceutických prostředků pro selektivní inhibici uvedeného enzymu.

Dosavadní stav techniky

Některé nežádoucím projevy pozměněných fyziologických funkcí, jako jsou akné vulgaris, mazotok, zvýšené ochlupení u žen a úbytek vlasů androgenního typu, zahrnující plešatost ženského i mužského typu a také benigní hyperplasie prostaty jsou důsledkem hvperandrogenní stimulace, která je způsobena příliš velkým nahromaděním testosteronu T nebo obdobného androgenního hormonu v metabolickém systému. Snahy získat prostředky pro potlačení těchto nežádoucích účinků vedly k objevu několika steroidních antiandrogenních látek, které však také měly nežádoucí hormonální účinky. Například estrogeny nejen potlačí účinky androgenů, nýbrž mají také feminizační účinky. Byly vyvinuty také nesteroidní antiandrogenní látky, například 4'-nitro-3'-trifluormethylizobutyranilid, který byl popsán v publikaci Meri a další, Endocrinol., 1972, 91, (2). Tyto produkty sice nemají hormonální účinky, avšak dostávají se na receptorech do kompetice se všemi přírodními androgeny, takže vzniká tendence k feminizaci muže nebo dítěte mužského pohlaví před narozením u těhotných žen a/nebo může dojít ke zpětné vazbě a v jejím důsledku k hyperstimulaci činnosti varlat.

Hlavním mediátorem androgenní účinnosti v některých cílových orgánech, například v prostatě je 5alfa-dihydrotestosteron, DHT, který se tvoří místně v cílovém orgánu působením testosteron-5alfa-reduktázy (dále pouze 5alfa-reduktáza). Inhibitory tohoto enzymu pak mohou zabránit nebo zmírnit příznaky hyperandrogenní stimulace v uvedených orgánech, jak bylo popsáno zvláště v patentových spisech US 4 377 584 z 22. března 1983 a 4 760 071 z 26. července 1988 (oba Měrek and Co., Inc.). Nyní je známo, že existuje ještě druhý izoenzym uvedeného enzymu, který může ovlivnit zejména pokožku a zvláště pokožku hlavy, jak bylo popsáno v publikaci G. Harris, a další, Proč. Nati. Acad. Sci., USA, sv. 89, str. 10787 - 10791 (listopad 1992). Izoenzym, který se dostává do interakce převážně s pokožkou se označuje jako 5alfa-reduktáza 1, zatímco druhý izoenzym, který působí převážně na tkáň prostaty, je označován jako 5alfa-reduktáza 2 nebo 5alfa-reduktáza typu 2.

Při léčení stavů, v nichž hrají svou úlohu androgeny, například v případě benigní hyperplasie prostaty, BPH a/nebo při prevenci a léčení zhoubných nádorů prostaty by bylo žádoucí mít k dispozici látky, které jsou účinné v prostatě proti působení obou izoenzymů tak, aby došlo k podstatné inhibici produkce všech dihydrotestosteronových derivátů. Dále by bylo žádoucí mít k dispozici látky, selektivní pro inhibici 5alfa-reduktázy 1 pro léčení chorobných stavů pokožky a vlasové části hlavy, jako jsou akné vulgaris, plešatost mužského typu a zvýšené ochlupení u žen. Mimoto by bylo možno použít selektivní inhibitory 5alfa-reduktázy 1 v kombinaci s inhibitory 5alfa-reduktázy 2, jako jsou finasterid (Proscar®) při léčení hyperandrogenních stavů, jako BPH a/nebo při prevenci a léčení zhoubných nádorů prostaty i pro léčení poruch pokožky, ochlupení a vlasové části hlavy, jako jsou akné, mazotok, zvýšené ochlupení u žen a plešatost mužského typu. Mimoto by bylo možno použít inhibitory 5alfa-reduktázy 1 také spolu s látkami, otevírajícími draslíkové kanály, například spolu s minoxidilem při léčení uvedených poruch pokožky a ochlupení. Vynález si proto klade za úkol nalézt sloučeniny s dostatečnou účinností při inhibici izoenzymu 5alfa-reduktázy 1.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří 16-substituované-4-azaandrostanové deriváty obecného vzorce I

kde přerušovaná čára v poloze Ci-C₂ znamená, že vazba v poloze 1 a 2 může být jednoduchá nebo dvojná

R^{1 *} znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku,

R znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku, jeden ze symbolů

R³ a R⁴ znamená atom vodíku nebo methyl a druhý znamená

a) aminoskupinu,

b) kyanoskupinu,

c) atom fluoru,

d) methyl,

e) hydroxyskupinu,

f) -C(O)NRbRc, kde Rb a R<; nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl o 6 až 10 atomech uhlíku nebo aralkyl o 6 až 10 atomech uhlíku v arylové a 1 až 6 atomech uhlíku valkylové části, která může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, arylová skupina ve svrchu uvedeném významu může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl,

g) alkyl-X- o 1 až 10 atomech uhlíku v alkylové části,

h) alkenyl-X- o 2 až 10 atomech uhlíku v alkenylové části, přičemž alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku v případě g) a alkenyl o 2 až 10 atomech uhlíku v případě

h) může být substituován 1 až 3 substituenty ze skupiny

i) ) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, mono- di- nebo trihalogenmethyl, oxoskupina, hydroxysulfonyl nebo karboxyl,

-2CZ 292614 B6 ii) ) hydroxyalkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfonyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, alkyloxykarbonyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, přičemž alkylové části těchto zbytků jsou popřípadě ještě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluoromethyl, iii) ) arylthioskupina, aryl, ve svrchu uvedeném významu, aiyloxyskupina, arylsulfonyl, aryloxykarbonyl, přičemž arylové části ve svrchu uvedeném významu jsou popřípadě ještě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, iv) ) -C(O)NRbRc; -N(R_b)-C(O)--R_c; -NRtR,.; kde R_b a R_c mají svrchu uvedený význam,

i) aryl-Χ-, kde aryl má svrchu uvedený význam,

j) heteroaryl-Χ-, kde heteroaryl je 5. 6 nebo 7-členný heteroaromatický kruh, který obsahuje alespoň jeden člen ze skupiny: atom kyslíku v kruhu, atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinaci těchto členů, přičemž heteroaromatický kruh může také být kondenzován s jedním benzenovým nebo dalším heteroarylovým kruhem ve svrchu uvedeném významu a mimoto může být aryl v případě i) a heteroaryl v případě j) substituován 1 až 3 substituenty ze skupiny

v) ) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, mono-, di- nebo trihalogenmethyl, mono-, di- nebo trihalogenmethoxyskupina, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 6 atomech uhlíku, formyl, hydrogensulfonyl, karboxyl nebo ureidoskupina, vi) ) alkyl, hydroxyalkyl, alkyloxyskupina, alkyloxyalkyl, alkylkarbonyl, alkylsulfonyl, alkylthioskupina, alkylsulfinyl, alkylsulfonamidoskupina, alkylarylsulfonamidoskupina, alkyloxykarbonyl nebo alkyloxykarbonylalkyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylových částech, R_bR<;N-C(O)alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, alkanoylaminoalkyl nebo aroylaminoalkyl s alkylovými částmi vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, a arylovou částí o 6 až 10 atomech uhlíku, přičemž alkylové části jsou popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, aryl, aryloxyskupina, arylkarbonyl, arylthioskupina, arylsulfonyl, arylsulfinyl, arylsulfonamidoskupina, aryloxykarbonyl, kde aiylová část má svrchu uvedený význam a je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl,

Vlil)) -CÍOjNRUL, -O-CíOj-NRfeRc, -N(R_b)-C(O}-R_c, -NR^, RbQOj-NCRJ-, kde R_b a R_c mají význam, uvedený svrchu v odstavci f) nebo -N(Rb)-C(O)ORg, kde R znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl ve svrchu uvedeném významu přičemž alkylová část může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl a arylová část je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, dále -NÍRbj-CÍOj-NRcRd, kde Ra znamená vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl ve svrchu uvedeném významu přičemž alkylová a arylová část mohou být substituovány způsobem, uvedeným v odstavci f) pro symboly R_b a R<, ix)) heterocyklická skupina, kterou je 5, 6 nebo 7-členný kruh, obsahující alespoň jeden člen ze skupiny atom kyslíku v kruhu, atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinaci těchto členů, přičemž heterocyklický kruh je aromatický, nenasycený nebo nasycený a popřípadě

-3CZ 292614 B6 kondenzovaný s benzenovým kruhem a popřípadě je heterocyklický kruh substituován 1 až 3 substituenty tak, jak byly svrchu definovány v odstavcích v)), vi)), vii)) a viii)),

k) R³ a R⁴ společně tvoří karbonyl nebo

l) R³ a R⁴ společně tvoří =CH-R_g, kde R_g má význam, uvedený v odstavci viii)) a

X se volí ze skupiny

-O-, S(O)_n-, C(O)-, -CH(Re)-, C(O)-C-\ -C(O)-N(Re)-^x, -N(Re)-C(O)-O^x- -O-C(O>N(Re)-^x, -N(Re)C(O)-N(R_e)-, -O-CH(Re)-^x, N(R«)-, kde Re znamená vodík, alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, aryl ve svrchu uvedeném významu, arylalkyl o 1 až 3 atomech uhlíku v alkylové části a arylové části ve svrchu uvedeném významu nebo heteroaryl ve svrchu uvedeném významu, popřípadě substituovaný ve významu z odstavce j), přičemž ^x znamená vazbu, kterou je skupina vázána v poloze 16 v obecném vzorci I a n znamená celé číslo 0, 1 nebo 2, a jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo estery.

Kombinace substituentů a/nebo jiných částí molekuly jsou přípustné v těch případech, v nichž je výsledkem těchto kombinací stálá sloučenina.

Vhodným provedením vynálezu jsou deriváty obecného vzorce I, v němž R¹ znamená atom vodíku nebo methyl a R² znamená atom vodíku nebo methyl.

Další provedení vynálezu tvoří deriváty obecného vzorce I, v němž jeden ze symbolů

R³ a R⁴ znamená atom vodíku nebo methyl a druhý z těchto symbolů se volí ze skupiny

b) kyanoskupina,

c) atom fluoru,

e) hydroxyskupina,

g) alkyl-X- o 1 až 10 atomech uhlíku v alkylové části, kde alkylová část je popřípadě substituována arylovou skupinou a arylová část může být substituována 1 až 2 substituenty ze skupiny atom halogenu nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, kde aryl má svrchu uvedený význam,

h) alkenyl-X- o 2 až 10 atomech uhlíku v alkenylové části,

i) aryl-X-,

j) heteroaiyl-Χ-, kde heteroarylem je 5- nebo 6-členný heteroaromatický kruh, obsahující 1 až 2 atomy dusíku v kruhu a arylová skupina v případě i) a heteroarylová skupina v případě j) je popřípadě substituována jedním nebo dvěma substituenty ze skupiny

x)) atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, trihalogenmethyl, trihalogenmethoxyskupina, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl, alkylsulfonyl o 1 až 6 atomech uhlíku

-4CZ 292614 B6 nebo alkylarylsulfonaminoskupina o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, kde aryl má svrchu uvedený význam, xi) ) -NR_bRc nebo Rb-CfOj-NCRc)-, kde R_b a R_c nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl nebo arylalkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, přičemž alkylová část může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl a arylová část je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, kde aryl má svrchu uvedený význam, xii) ) heterocyklickou skupinu s pěti členy v aromatickém kruhu, obsahující jeden atom dusíku v kruhu nebo 1 atom dusíku a 1 atom kyslíku v kruhu a

k) R³ a R⁴ společně tvoří kyslíkový atom karbonylové skupiny,

X se volí ze skupiny

-O-, -S(O)_n-, -CH(Re)-, -C(O)-N(Re)-^x, -O-CfOj-NÍR^p, kde R« znamená vodík, alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, aryl nebo arylalkyl o 1 až 3 atomech uhlíku v alkylové části, kde aryl má svrchu uvedený význam, ^x znamená vazbu, jíž je skupina připojena v poloze 16 obecného vzorce I a n znamená celé číslo 0 nebo 2.

Z nových derivátů podle vynálezu podle tohoto provedení je možno uvést například následující sloučeniny:

4-aza-4,7beta-dimethyl-5alfa-androstan-3,16-dion,

4-aza-4-methyl-5alfa-androstan-3,16-dion,

3-oxo—4-aza—4-methyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(benzylaminokarbonyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4—methyl-16beta-benzoylamino-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-allyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-4-methyl-6alfa-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

-5CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-ch!orfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-l 6beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-androst-1 -en,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-/4-(l-pyrrol)fenoxy/-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-alIyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3,3-dimethylallyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-OXO-4—aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(izo-pentoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,16beta-dimethyl-l 6beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyi-16beta-ethyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-benzyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-methylthio-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propylthio)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza—4,7beta-dimethyl-16beta-fluor-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-kyano-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-l 6beta-( l-hexyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-benzyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorbenzyl)-5alfa-androstan,

3-OXO-4—aza-4,16alfa-dimethyl-l 6beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-kyanofenoxy)-5 alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-kyanofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-nitrofenoxy)-5alfa-androstan,

-6CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethy 1-16beta-( 1-nafty loxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-andiOStan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(terc.butyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-methyl-l-butyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethoxyfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ethylthio-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ethylsulfonyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylsulfonylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo—4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(4-tolylsulfonylamino)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dímethyI-16beta-(3-pyridyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/(4-fenyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-fluorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-pyrazinyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(5-oxyzolyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-ΟΧΟ-4—aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-pyrimidinyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(l-pyiTyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-aminofenoxy)-5alfa—androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-acetylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-benzoylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androst-l-en,

-7CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorbenzyliden)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-benzyliden-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylbenzyliden)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorbenzyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylbenzyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-pyridylmethyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-methansulfonyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-thiofenoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorthiofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-fluorthiofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylthiofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methoxythiofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-fenylsulfínyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-fenylsulfonyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-(4-trifluormethylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-methoxy-5alfa-androstan, a farmaceuticky přijatelné soli těchto látek a jejich analogy, v nichž meziuhlíková vazba v poloze 1 a 2 je dvojná vazba, v nichž R¹ znamená atom vodíku a/nebo R² znamená atom vodíku nebo methyl.

Dalším provedením vynálezu jsou deriváty obecného vzorce I, v nichž meziuhlíková vazba v poloze 1 a 2 je jednoduchá vazba, R¹ znamená methyl, R² znamená methyl, R³ znamená nesubstituovanou nebo substituovanou aryloxyskupinu a R⁴ znamená vodík.

Dále budou uvedeny další příklady sloučenin podle vynálezu, spadajících do tohoto provedení.

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-kyanofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-kyanofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-nitrofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-l 6beta-( l-naftyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

-8CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethoxyfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylsulfonylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(4-tolylsulfonylamino)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/(4-fenyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-fluorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(5-oxazolyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(l-pyrryl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-aminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-acetylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-benzoylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlorfenoxy)-5alfa-androstan, a farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin.

Cenným derivátem obecného vzorce I je 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Pod pojmem „alkyl“ se v průběhu přihlášky rozumí nasycený alifatický uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem s uvedeným počtem uhlíkových atomů, například methyl (Me), ethyl (Et), propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, oktyl, nonyl, decyl, izopropyl (i-Pr), izobutyl (i-Bu), terc.butyl (t-Bu), sek.butyl (s-Bu), izopentyl a podobně. Alkoxylová skupina nebo alkyloxyskupina je alkylová skupina s uvedeným počtem uhlíkových atomů, vázaná přes kyslíkový můstek, jako methoxyskupina, ethoxyskupina, propyloxyskupina a podobně. Alkenyl je uhlovodíková skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem s nejméně jednou meziuhlíkovou dvojnou vazbou, která se může nacházet ve kterékoliv stálé poloze v průběhu řetězce, jako ethenyl, propenyl nebo alyl, butenyl, pentenyl a podobně. Vynález zahrnuje také všechny diastereomery E a Z výsledných derivátů.

Alkylové a alkenylové skupiny jsou nesubstituovaná nebo mohou být substituovány nejméně jedním substituentem, s výhodou 1 až 3 substituenty ze skupiny

i) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, mono-, di- nebo trihalogenmethyl, oxoskupina, hydroxysulfonyl nebo karboxyskupina, ii) hydroxyalkyl, alkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfonyl nebo alkyloxykarbonyl s alkylovými částmi vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, přičemž tyto alkylové části jsou popřípadě

-9CZ 292614 B6 dále substituovány 1 až 3 substituent} ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, iii) arylthioskupina, aryl, aryloxyskupina, arylsulfonyl, aryloxykarbonyl, v těchto zbytcích může být arylová část dále substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, iv) -C(O)NRbRc, -NfRbj-CCOJ-Rc, -NRbRc, kde R_b a Rc mají svrchu uvedený význam a atomem halogenu je fluor, chlor, brom nebo jod.

Pod pojmem „oxo“ se rozumí oxoskupina, která může být uložena v jakékoliv stálé poloze v průběhu uhlíkového řetězce za vzniku formylové skupiny v případě, že se nachází na konci řetězce nebo za vzniku acylové nebo aroylové skupiny v případě, že se nachází na jiném místě v průběhu řetězce.

Pod pojmem „aryl“, například aryl o 6 až 10 atomech uhlíku se rozumí fenyl nebo naftyl, včetně skupin jako jsou 1-naftyl nebo 2-naftyl, přičemž tyto skupiny jsou popřípadě substituovány svrchu uvedeným způsobem.

Pod pojmem „heteroaryl“ se rozumí 5-, 6- nebo 7-členný heteroaromatický zbytek, obsahující alespoň jeden člen ze skupiny 1 atom kyslíku v kruhu, 1 atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinace těchto členů, přičemž heteroarylový kruh může být kondenzován s jedním benzenovým kruhem nebo dalším heteroaromatickým kruhem. Tyto skupiny zahrnují následující nesubstituované nebo substituované (jak bude dále popsáno) heteroaromatické kruhy: pyridyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, chinolyl, chinazolinyl, izochinolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbazolyl, izoxazolyl, thiazolyl, izothiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl a benzoxazolyl. Heteroarylový kruh může být spojen se strukturním vzorcem I přes heteroatom, například atom dusíku nebo přes uhlíkový atom v kruhu za vzniku stálé struktury. Heteroarylový kruh může také byt kondenzován s benzenovým kruhem.

Pokud jde o substituenty na arylové skupině o 6 až 10 atomech uhlíku nebo na heteroarylovém kruhu, může jít o 1 až 3, s výhodou 1 až 2 substituenty, které se nezávisle volí z následujících skupin:

v) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, mono-, di- nebo trihalogenmethyl, mono-, di- nebo trihalogenmethoxyskupina, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 6 atomech uhlíku, formyl, hydrogensulfonyl, karboxyskupina nebo ureidoskupina, vi) alkyl, hydroxyalkyl, alkoxyskupina, alkoxyalkyl, alkylkarbonyl, alkylsulfonyl, alkylthioskupina, alkylsulfinyl, alkylsulfonamidoskupina, alkylarylsulfonamidoskupina, alkoxykarbonyl nebo alkoxykarbonylalkyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylových částech, RbRcN-C(O)-alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, alkanoylaminoalkyl nebo aroylaminoalkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylových částech, přičemž alkylové skupiny mohou být substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, vii) aryl, aryloxyskupina, arylkarbonyl, arylthioskupina, arylsulfonyl, arylsulfinyl, arylsulfonamidoskupina, aryloxykarbonyl, přičemž arylová část je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, viii) -C(O)NR_bR_c, -O-CÍOj-NRbRc, -N(R_b)-C(O)-R_c, -NRbRc nebo R_b-C(O}-N(R_c)-, kde Rb a Re mají význam, uvedený svrchu v odstavci e), dále -N(Rb)-C(O)-ORc, kde Re znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl nebo také -N(Rb)-C(O)-NRcR<i, přičemž Rj znamená vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl a alkylové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku a arylové

-10CZ 292614 B6 skupiny jsou popřípadě substituovány způsobem, který byl svrchu popsán pro symboly R_b a Rc v odstavci e), ix) heterocyklická skupina, a to 5, 6 nebo 7-členná kruhová skupina, obsahující alespoň jeden

Člen ze skupiny 1 atom kyslíku v kruhu, 1 atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinaci těchto členů, přičemž heterocyklický kruh je aromatický, nenasycený nebo nasycený a je popřípadě kondenzován s benzenovým kruhem a popřípadě substituován 1 až 3 substituenty, uvedenými svrchu v odstavcích v), vi), vii) a viii), s výjimkou heterocyklické skupiny ve významu ix).

Kondenzované heteroaromatické kruhové systémy zahrnují purin, imidazoimidazol, imidazothiazol, pyridopyrimidin, pyridopyridazin, pyrimidopyrimidin, imidazopyridazin, pyrrolopyridin, imidazopyridin a podobně.

i? Pod pojmem „heterocyklická skupina“ jsou zahrnuty svrchu uvedené plně nenasycené heteroarylové kruhy a také jejich odpovídající dihydro-, tetrahydro- a hexahydroderiváty, takže vznikají částečně nenasycené i plně nasycené kruhové systémy. Jako příklady je možno uvést dihydroimidazolyl, dihydrooxazolyl, dihydropyridyl, tetrahydrofuryl, dihydropyrrolyl, tetrahydrothienyl, dihydroizothiazolyl, 1,2-dihydrobenzimidazolyl, 1,2-dihydrotetrazolyl, 1,2—di20 hydropyrazinyl, 1,2-dihydropyrimidyl, 1,2-dihydrochinolyl, 1,2,3,4-tetrahydroizochinolyl,

1.2.3.4- tetrahydrobenzofuryl, 1,2,3,4-tetrahydroizobenzofuryl, 1,2,3,4-tetrahydrobenzothienyl,

1.2.3.4- tetrahydropyrazonyl, 1,2,3,4-tetrahydroindolyl, 1,2,3,4-tetrahydroizoindolyl, 1,2,3,4tetrahydropurinyl, 1,2,3,4-tetrahydrokarbazolyl, 1,2,3,4-tetrahydroizoxazolyl, 1,2,3,4-tetrahydrothiazolyl, 1,2,3,4-tetrahydrooxazolyl, 1,2,3,4-tetrahydrobenzthiazolyl a 1,2,3,4-tetrahydro- benzoxazolyl a podobně.

Heterocyklická skupina může být substituována stejným způsobem jako svrchu uvedená heteroarylová skupina.

V případě, že se u alkylových, alkenylových skupin, alkoxyskupin, arylových skupin nebo heteroarv lových skupin uvádí určitý počet uhlíkových atomů, například 1 až 10 atomů uhlíku, jde o nezávisle uvedený počet uhlíkových atomů takže v případě, že se skupina v molekule vyskytuje vícekrát, může mít pokaždé odlišný počet uhlíkových atomů.

Do vynálezu jsou zahrnuty také farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I v případě, že se ve struktuře nachází bazická nebo kyselá skupina. V případě, že molekula obsahuje kyselou skupinu, například karboxylovou skupinu, je možno pro použití v lékových formách vytvořit například amonné, sodné, draselné, vápenaté a podobné soli. V případě, že je v molekule přítomna bazická skupina, například aminoskupina nebo bazický heteroarylový 40 zbytek, jako 4-pyridyl, je možno vytvořit pro použití v lékových formách adiční soli s kyselinami, jako hydrochloridy, hydrobromidy, octany, pamoáty a podobně.

V případě, že molekula obsahuje karboxylovou skupinu, je možno vytvářet také farmaceuticky přijatelné estery, například alkylestery s alkylovou částí o 1 až 5 atomech uhlíku, pivaloyloxy45 ethylester a podobně a také takové estery, o nichž je známo, že modifikují rozpustnost nebo možnost hydrolýzy, tyto ester jsou vhodné jako prekurzory nebo pro použití ve farmaceutických prostředcích s prodlouženým uvolněním účinné látky.

Jako příklady vhodných solí je možno uvést acetáty, laktobionát, benzensulfonát, laurát, benzoát, malát, hydrogenuhličitan, maleát, hydrogensíran, sůl kyseliny mandlové, hydrogentartrát, mesylát, boritan, methylbromid, bromid, methylnitrát, adetát vápenatý, methylsulfát, camsylát, soli kyseliny slizové, uhličitan napsylát, chlorid, nitrát, klavulanát, N-methylglukamin, citrát, dále je možno vytvořit amoniové soli, dihydrochlorid, oleát, edetát, oxalát, edisylát, pamoát, embonát, estolát, palmitát, esylát, pantothenát, fumarát, směs fosfátu a hydrogenfosfátu, 55 gluceptát, polygalakturonát, glukonát, salicylát, glutamát, stearát, glykolylarsanilát, sulfát, hexyl

-11 CZ 292614 B6 resorcinát, subacetát, sůl s hydrabaminem, sukcinát, hydrobromid, tannát, hydrochlorid, tartrát, hydroxynaftoát, teoklát, jodid, tosylát, izothionát, triethijodid, laktát, a valerát.

Mimoto mohou některé sloučeniny podle vynálezu vytvářet solváty s vodou nebo běžnými organickými rozpouštědly. Tyto solváty rovněž spadají do rozsahu vynálezu.

Pod pojmem „účinná množství“ se rozumí, že určité množství účinné látky nebo farmaceutického prostředku vyvolá biologický nebo léčebný účinek ve tkáni nebo systému živočicha nebo člověka.

Deriváty podle vynálezu obsahují středy chirality a mohou se tedy vyskytovat jako racemáty, racemické směsi nebo také jako jednotlivé enanciomery nebo diastereomery, přičemž vynález zahrnuje všechny izomemí formy těchto sloučenin a jejich směsi. Mimoto mohou některé krystalické formy sloučenin podle vynálezu existovat v polymorfních formách, také tyto formy jsou do rozsahu vynálezu zahrnuty.

Deriváty podle vynálezu je možno použít k léčebným účelům, zejména k léčení hyperandrogenních stavů, jako jsou plešatost mužského typu, akné, mazotok a nežádoucí ochlupení u žen, k tomuto účelu se sloučeniny podle vynálezu podávají perorálně, parenterálně nebo místně jako takové nebo v kombinaci s inhibitorem 5alfa-reduktázy 2 a/nebo v kombinaci s látkami, otevírajícími draslíkové kanály, jako je minoxidil, s antiandrogeny, jako je flutamid, s retinoidy, jako jsou tretinoin nebo izotretinoin a s antagonisty receptorů alfa-1, jako je terazocin.

Sloučeniny podle vynálezu je možno použít nejen k léčení plešatosti a k podpoře růstu vlasů, nýbrž také k léčení benigní hyperplasie prostaty, prostatitidy a k léčení a/nebo prevenci zhoubných nádorů prostaty, k tomuto účelu se uvedené látky podávají systemicky perorálně nebo parenterálně jako takové nebo v kombinaci s inhibitorem 5alfa-reduktázy-2.

Podstatu vynálezu tvoří také farmaceutické prostředky, určené pro místní, systemické perorální a parenterální podání ke svrchu uvedenému účelu. Prostředky, které obsahují jako svou účinnou složku sloučeniny podle vynálezu a jsou určeny k léčení svrchu uvedených hyperandrogenních chorobných stavů, je možno podávat v širokém rozmezí lékových forem, tak, jak jsou tyto formy běžné v případě systemického podání. Je například možno užít běžné lékové formy, jako jsou tablety, kapsle, v obou případech s okamžitým i zpomaleným uvolněním účinné látky, dále pilulky, prášky, granuláty, elixíry, tinktury, roztoky, suspenze, sirupy a emulze, nebo může také jít o injekční podání. Sloučeniny je možno podávat nitrožilně jednorázově nebo v infuzi, intraperitoneálně, podkožně, nitrosvalově nebo místě při použití běžně známých lékových forem.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují obvykle farmaceuticky přijatelný nosič a účinné množství derivátů obecného vzorce I. Mimoto mohou tyto prostředky obsahovat ještě:

1) účinné množství inhibitorů 5alfa-reduktázy 2 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, například finasteridu, epristeridu nebo turosteridu,

2) účinné množství látky, otevírající draslíkové kanály nebo její farmaceutické soli, jako je minoxidil,

3) účinné množství retinoidu nebo jsou farmaceuticky přijatelné soli, jako tretinoinu nebo izotretinoinu,

4) účinné množství antiandrogenní látky nebo její farmaceuticky přijatelné soli, například flutamidu, spironolactonu nebo casodexu.

Denní dávka derivátu podle vynálezu se může pohybovat v rozmezí 0,1 až 1000 mg denně pro dospělého člověka. V případě perorálního podání se účinná látka s výhodou podává ve formě

-12CZ 292614 B6 tablet, popřípadě opatřených dělicí rýhou a obsahujících například 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0 nebo 50,0 mg účinné látky tak, aby bylo možno snadno upravit vhodnou dávku na základě příznaků chorobného stavu u každého nemocného. Obvykle se užívá dávka 0,002 až 50 mg/kg hmotnosti denně, výhodné rozmezí je 0,01 až 7 mg/kg denně.

Sloučeniny podle vynálezu je s výhodou možno podávat v jediné dávce denně nebo je možno celkovou denní dávku podat rozděleně ve formě 2, 3 nebo 4 denních dávek. Mimoto je sloučeniny podle vynálezu možno podávat do nosu spolu s nosičem, vhodným pro toto použití nebo transdermálně při použití náplastí, které jsou v oboru známy a z nichž se účinná látka může vstřebávat. V případě transdermálního podání jde spíše o kontinuální podání než o podání ve formě jednotlivých dílčích dávek v průběhu dne.

Při léčení alopecie včetně plešatosti mužského typu, akné, mazotoku a nežádoucího ochlupení u žen, je možno deriváty podle vynálezu podávat ve formě farmaceutického prostředku, který obsahuje účinnou složku v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, vhodným pro místní podání. Může například jít o roztoky, krémy, mazání, gely, lotiony, šampony nebo o prostředky typu aerosolu pro nanášení na pokožku. Tyto farmaceutické prostředky pro místní podání budou obvykle obsahovat deriváty podle vynálezu v koncentraci 0,001 až 15 % hmotnostních, mimoto budou obsahovat farmaceuticky přijatelný nosič.

V případě léčení akné, alopecie včetně plešatosti mužského typu, mazotoku, nežádoucího ochlupení u žen, benigní hyperplasie prostaty, prostatitidy a v případě prevence a/nebo léčení zhoubných nádorů prostaty, je možno použít deriváty podle vynálezu jako takové nebo v kombinaci s účinným množstvím inhibitorů 5alfa-reduktázy 2, například v kombinaci s finasteridem, přičemž může jít o systemické perorální nebo parenterální podání. V případě poruch, souvisejících se stavem pokožky a ochlupení, například v případě akné, plešatosti mužského typu, při mazotoku a ochlupení u žen, je možno zpracovat deriváty podle vynálezu jsou s inhibitorem 5alfa-reduktázy 2 pro místní podání. Je možno uskutečnit také kombinované léčení tak, že se derivát obecného vzorce I a inhibitor 5alfa-reduktázy 2 podávají odděleně perorálně, parenterálně nebo místně. Je například možné podávat deriváty vzorce I a finasterid společně perorálně nebo místně nebo je možno každou z těchto účinných látek podat odděleně, například v oddělené lékové formě pro perorální podání, nebo je možno podat perorálně finasterid a místě derivát obecného vzorce I. Pokud jde o dávky a vhodné lékové formy pro inhibitory 5alfa-reduktázy, je možno příslušné údaje nalézt v patentových spisech US 4 377 584 a 4 760 071. V případě, že se účinné látky podávají v odlišných lékových formách, je možno je podat současně nebo následně v určitém časovém odstupu.

Z inhibitorů 5alfa-reduktázy 2, použitelných k uvedenému účelu je možno uvést například následující látky: kyselina 17beta-(N-terc-butylkarbamoyl)androsta-3,5-dien-3-karboxylová (epristerid, Smith Kline and Beecham, SKF 105657), tato látka byla popsána v mezinárodních patentových spisech WO9113550 a WO9319758 a 17beta-/N-izopropyl-N-(izopropylkarbamoyl)karbamoyl/-4-methyl-4-aza-5alfa-androstan-3-on (turosterid, Farmitalia, FCE 26073), tato látka byla popsána spolu se svými deriváty v patentovém spisu US 5 155 107.

Dále je možno deriváty podle vynálezu podávat v kombinaci s účinným množstvím sloučeniny, určené k otevírání draslíkových kanálů, použít je možno například minoxidil, cromakalin, pinacidil, sloučeniny odvozené od S-triazinu, thian-l-oxid, benzopyran a pyridinpyranové deriváty nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, zejména v případě plešatosti mužského typu. Obě účinné látky je pak možno zpracovat na jediný prostředek pro místní podání neboje možno obě účinné látky podávat odděleně, například ve formě odlišných farmaceutických prostředků pro místní podání nebo je možno perorálně podávat deriváty obecného vzorce I a místně podávat například minoxidil. Lékové formy a dávky, vhodné pro látky, otevírající draslíkové kanály byly uvedeny například v patentových spisech US 4 596 812,4 139 619av mezinárodním patentovém spisu WO 92/02225, zveřejněném 20. února 1992. I když se obě látky podávají v odlišných farmaceutických prostředcích, je možno je podat současně nebo také v určitém časovém odstupu.

-13CZ 292614 B6

Mimoto je možno v případě akné a/nebo plešatosti mužského typu použít kombinovaného léčení tak, že se podává účinné množství derivátů obecného vzorce I, popřípadě v kombinaci s inhibitorem 5alfa-reduktázy 2 a popřípadě ještě v kombinaci s účinným množstvím retinoidu, například tretinoinu (Retin A) nebo izotretinoinu (Accutane, Roche), tyto látky byly popsány v patentových spisech US 3 006 939, 3 746 730 a 4 556 518.

V případě léčení akné vulgaris, plešatosti mužského typu, mazotoku, ochlupení u žen, benigní hyperplasie prostaty nebo prostatitidy a při prevenci a/nebo léčení zhoubných nádorů prostaty je možno použít kombinovaného léčení tak, že se podává účinné množství derivátů obecného vzorce I spolu s účinným množstvím antiandrogenních látek, jako jsou flutamid, spironolakton nebo casodex.

Uvedeným způsobem je možno dosáhnout inhibice biosyntetické přeměny testosteronu na dihydrotestosteronem u savců včetně člověka, velmi výhodné je podávat savcům současně účinné množství derivátu obecného vzorce I, popřípadě v kombinaci s inhibitorem 5alfa-reduktázy 2.

Dávkování derivátu podle vynálezu se volí v souladu s celou řadou faktorů, jako jsou věk, hmotnost, pohlaví a celkový stav nemocného, závažnost léčeného onemocnění, způsob podání, ledvinové a jatemí funkce nemocného, v úvahu je zapotřebí brát také zvolený derivát. Účinné množství každého derivátu zvolí ošetřující lékař nebo veterinář také v závislosti na tom, zdaje derivát užit k léčebným účelům nebo k prevenci. Optimální dávka je taková dávka, při níž je možno dosáhnout požadovaného účinku, avšak ještě se nevyskytují příznaky toxicity. Je tedy nutno brát v úvahu biologickou dostupnost účinné látky v místě, kde má působit, její distribuci a její vylučování.

Jak již bylo uvedeno, účinné látky podle vynálezu se obvykle podávají ve směsi s farmaceutickými ředidly, pomocnými látkami nebo nosiči po zpracování na tablety pro perorální podání, kapsle, elixíry, sirupy a podobně způsobem, běžným ve farmaceutickém průmyslu.

Například v případě tablety nebo kapsle pro perorální podání je možno účinnou látku smísit s inertním nosičem, který je netoxický a vhodný pro perorální podání, jako je etanol, glycerol, voda a podobně. V případě potřeby je možno použít pojivá, kluzní látky, desintegrační činidla a barviva. Vhodným pojivém je například škrob, želatina, přírodní cukry, jako glukóza nebo beta-laktóza, kukuřičný sirup, přírodní a syntetické gumy, například zakácie, tragakantu a podobně, dále může jít o alginát sodný, karboxymethylcelulózu, polyethylenglykol, vosky a podobně. Z kluzných látek je možno uvést například oleát sodný, stearát sodný, stearát hořečnatý, benzoát sodný, octan sodný, chlorid sodný a podobně. Z dezintegračních činidel je možno použít například škrob, methylcelulózu, agar, bentonit, xanthanovou gumu a podobně.

V kapalných formách je možno použít suspenzní nebo disperzní činidla, například syntetické a přírodní gumy, například z tragakantu nebo akácie, dále methylcelulózu a podobně. Použít je možno také glycerol a obdobné látky. Pro parenterální podání jsou vhodné sterilní suspenze a roztoky. Pro nitrožilní podání jsou vhodné izotonické prostředky, které obvykle obsahují vhodné konzervační činidlo.

Prostředky pro místní podání obsahují účinnou látku ve směsi s různými známými nosnými nebo pomocnými látkami, jde například o alkoholy, gel z aloe, alantoin, glycerol, olej s obsahem vitaminu A a E, minerální oleje, PPG2, myristylpropionát a podobně, výsledné prostředky mohou mít například formu roztoků v alkoholu, čisticích krémů, gelů, suspenzí a také šampónů typu krémů nebo gelů, tyto prostředky byly popsány například v EP 285 382, pokud jde o jejich vhodné obecné složení.

Deriváty podle vynálezu je možno podávat také ve formě liposomů. Může jít o malé unilamelámí útvary, velké unilamelámí kulovité útvary nebo multilamelámí kulovité útvary. Liposomy je

-14CZ 292614 B6 možno vytvořit při použití různých fosfolipidů, například cholesterolu, stearylaminu nebo fosfatidylcholinu.

Deriváty podle vynálezu je možno dopravovat na místo určení také při použití monoklonálních protilátek jako nosičů, na něž jsou molekuly těchto derivátů vázány. Deriváty podle vynálezu je možno také vázat na rozpustné polymery jako na nosiče, které je možno účelně dopravit na potřebné místo určení. Z vhodných polymerů je možno uvést polyvinylpyrrolidon, pyranové kopolymery, konjugát polyhydroxypropylmethakrylamidu a fenolu, polyhydroxyethylaspartamidfenol nebo polyethylenoxidpolylysin, substituovaný palmitoylovými zbytky. Mimoto je 10 možno deriváty podle vynálezu vázat na skupinu biologicky degradovatelných polymerů, použitelných pro dosažení řízeného uvolnění účinné látky, jde například o kyselinu polymléčnou, o polyepsilonkaprolakton, kyselinu polyhydroxymáselnou, polyorthoestery, polyacetaly, polydihydropyrany, polykyanoakryláty a zesítěné nebo amfipathické blokové kopolymery hydrogelů.

Deriváty podle vynálezu je možno snadno připravit různými postupy, které jsou uvedeny v následujících reakčních schématech a v jednotlivých příkladech, nebo je možno tyto postupy modifikovat při použití snadno dostupných výchozích látek, reakčních činidel a běžných syntetických postupů. Při těchto reakcích je možno využít také různé známé varianty, které v těchto postupech nejsou výslovně podrobněji uvedeny. Specifické definice jednotlivých 20 symbolů ve schématech, například R = CH₃ jsou uvedeny pouze pro ilustraci a postup nemá být na tyto významy omezen. Ve schématech jsou uvedeny následující zkratky: pH= fenyl, Ac = acyl, t-Bu - terc.butyl, Et = ethyl, Me = methyl, i-Am = izoamyl a EtOAc = ethylacetát.

Inhibitory je možno podle schématu 1 připravit následujícím způsobem. Nejprve se převede 25 4—aza-8-methyl-5alfa-androstan-3,17-dion A na izomemí 3,16-dion vzorce 1 následujícími reakcemi: 1) na A se působí izoamylnitritem v terc.butanolu v přítomnosti terc.butoxidu draslíku, čímž se jako meziprodukt získá 16-oximino-17-keton, 2) 17-ketoskupina této látky se redukuje působením hydrazinhydrátu a hydroxidu draselného v ethylenglykolu při vyšší teplotě za vzniku 16-oximu vzorce B a pak se 3) odštěpí 16-oximinoskupina ze sloučeniny B hydrolýzou půso30 bením vodného roztoku kyseliny při vyšší teplotě nebo hydrogensiřičitanem sodným a pak se směs zpracovává vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, čímž se získá derivát vzorce 1. Redukci 16-ketonu vzorce 1 na 16beta-alkohol vzorce 2 je možno uskutečnit při použití vhodného redukčního činidla na bázi hydridu, například hydroborátu sodného v methanolu nebo lithiumtrisek.butylhydroborátu v tetrahydrofuranu, THF. Alkohol vzorce 2 se pak převádí na 35 alkyleterové deriváty vzorce 3 a 4 tak, že se nejprve vytvoří alkoxidový anion působením hydridu draslíku v Ν,Ν-dimethylformamidu, DMF nebo působením hydroxidu draselného v dimethylsulfoxidu, DMSO a pak se uskuteční adice příslušného alkylbromidu nebo alkyljodidu. 16beta-(n-propyloxy)derivát vzorce 5 se připraví z prekurzoru, 16beta-(allyloxy)derivátu vzorce 4 katalytickou hydrogenací.

Inhibitory je také možno podle schématu 2 připravit tak, že se 16-oxim B převede na lóbetaamin C katalytickou hydrogenací v přítomnosti heterogenního katalyzátoru, například oxidu platiny ve vodné kyselině octové. Acylaci sloučeniny C je možno uskutečnit působením příslušného anhydridu nebo chloridu kyseliny v přítomnosti látky, schopné vázat kyselinu, například 45 pyridinu, triethylaminu nebo 4-dimethylaminopyridinu, DMAP. Tímto způsobem je možno připravit sloučeniny 6 a 7. Karbamáty, například sloučeniny 8 ze schématu 3 je možno získat tak, že se na alkohol vzorce 2 působí příslušným izokyanátem v přítomnosti organické báze, například triethylaminu, pyridinu nebo 4^-dimethylaminopyridinu.

Inhibitory, popsané ve schématu 4 je možno připravit tím způsobem, že se lóbeta-alkohol vzorce 2 převede na lóalfa-alkohol vzorce 9 působením kyseliny 4-nitrobenzoové v přítomnosti diethylazadikarboxylátu, DEAD a trifenylfosfinu za vzniku meziproduktu, 16alfa-(p-nitrobenzoát)esteru D s následnou hydrolýzou působením vodné báze v příslušném alkoholu. Alkylace sloučeniny vzorce 9 se provádí analogickým způsobem při použití alkoholu vzorce 2, získají

-15CZ 292614 B6 se požadované lóalfa-alkyletery, například lóalfa-methoxyderivát, který je znázorněn ve schématu 4 a jehož příprava je podrobněji popsána v příkladu 10.

7beta-methylinhibitory, popsané ve schématu 5 je možno připravit obdobným způsobem jako deriváty ze schématu 1, avšak jako výchozí látka se užije 4-aza-4,7beta-dimethyl-5alfa-androstan-3,17-dion vzorce E.

7beta-methylinhibitory, popsané ve schématu 6 je možno připravit snadno následujícím způsobem: sloučeninu 20 je možno připravit tak, že se na alkohol vzorce 12 působí terc.butyltrichloracetimidátem v přítomnosti organické sulfonové kyseliny, například kyseliny trifluormethansulfonové, 16beta-aryloxyderiváty, například sloučeniny 21 až 24 je možno připravit tak, že se nejprve vytvoří alkoxidový anion z alkoholu vzorce 12 působením hydridu draselného nebo sodného v tetrahydrofuranu nebo Ν,Ν-dimethylformamidu nebo působením hydroxidu draselného v dimethylsulfoxidu s následnou adicí příslušně substituovaného fluorbenzenového derivátu.

17beta-methylinhibitory ze schématu 7 je možno připravit podobným způsobem jako svrchu uvedené sloučeniny ve schématu 4, avšak jako výchozí látka se užije 7beta-methyl-16beta-ol, meziprodukt vzorce 12. Přeměna konfigurace v poloze 16 za vzniku derivátu vzorce F se uskuteční transformací podle Mitsunoby tak, jak je znázorněno ve schématu 7. Pak se uskuteční ještě O-alkylace, jak již bylo popsáno svrchu, čímž se získají 16alfa-etery, například vzorce 26.

Inhibitory, uvedené ve schématu 8 je možno připravit tak, že například adicí methylmagneziumbromidu v tetrahydrofuranu na keton vzorce 1 nebo vzorce 11 je možno připravit odpovídající 16alfa-methyl-17beta-alkohol vzorce 27 nebo 28. O-alkylace nebo O-arylace se pak uskuteční obdobně jako v předchozích schématech, čímž se získají například 16alfa-methyl-16betaeterové deriváty vzorce 29 a 30.

Inhibitory, popsané ve schématu 9 je možno připravit následujícími reakcemi. Výchozí 17betamethyl-lóalfa-alkohol vzorce 25 se převede na 16beta-thiol vzorce H působením kyseliny thioloctové v přítomnosti diizopropylazodikarboxylátu DIAD a trifenylfosfinu za vzniku meziproduktu, lóbeta-thioacetátu G, který se pak hydrolyzuje za alkalických podmínek, čímž se získá thiol H. Alkylace se uskuteční vytvořením merkaptidového aniontu působením hydridu sodného nebo draselného v tetrahydrofuranu nebo Ν,Ν-dimethylformamidu s následnou adicí příslušného alkylhalogenidu. Tímto způsobem je možno připravit deriváty z příkladů 31 až 33. Odpovídající sulfonyl, například sloučeninu 34 je možno připravit tak, že se na thioetery vzorce 31 až 33 působí oxidačním činidlem, například organickou perkyselinou nebo peroxymonosulfátem draselným (Oxone), vhodným prostředím je vodný methanol.

Inhibitory, popsané ve schématu 10 je možno připravit tak, že se p-nitrofenoxyderivát vzorce 50 redukuje při použití paladia na aktivním uhlí při teplotě místnosti ve vodíkové atmosféře za vzniku p-aminofenoxyderivátu vzorce 51. Amin se pak acyluje působením acetylchloridu v methylenchloridu v přítomnosti pyridinu za získání p-acetylaminofenoxyderivátu vzorce 52 nebo se působí benzoylchloridem za vzniku odpovídajícího p-benzoylaminoderivátu vzorce 53. Na aminosloučeninu vzorce 51 je také možno působit tosylchloridem, čímž se získá p-tosylaminoderivát vzorce 54.

Inhibitory, popsané ve schématu 11 je možno připravit tak, že se na 16-alkohol vzorce 55 s N-2,4-dimethoxybenzylovou ochrannou skupinou působí p-fluorchlorbenzenem a hydridem draslíku v dimethylformamidu, čímž se získá p-chlorfenoxyderivát vzorce 56, na který se pak působí kyselinou trifluoroctovou v methylenchloridu k odstranění N-2,4-dimethoxybenzylové ochranné skupiny za vzniku derivátu vzorce 57. Na tento derivát se působí plynným vodíkem a palladiem na aktivním uhlí jako katalyzátorem v methanolu, čímž se z fenylového kruhu odstraní atom chloru a získá se fenoxyderivát vzorce 58. Na tuto látku se působí methyljodidem a hydridem sodíku v dimethylformamidu, čímž dojde k methylaci dusíkového atomu v kruhu za

-16CZ 292614 B6 vzniku derivátu vzorce 61. Na derivát 58 je také možno působit DDQ a BSTFA v toluenu k zavedení dvojné vazby do polohy 1, čímž se získá sloučeniny vzorce 59. Při použití obdobné redukce se z 1,2-dihydroandrostanu 57 získá p-chlorandrost-l-en vzorce 60. Tato látka se pak methyluje v poloze 1 působením methyljodidu a hydridu sodíku v dimethylformamidu, čímž se získá derivát vzorce 62.

Inhibitory, které jsou popsány ve schématu 12 je možno připravit obdobnými reakcemi jako inhibitory ze schématu 11. Na 16-alkohol vzorce 55 s N-2,4-dimethoxybenzylovou ochrannou skupinou se působí 4-methyl-3-chlorfluorbenzenem a hydridem draslíku v dimethylformamidu za vzniku 4-methyl-3-chlorfenoxyderivátu vzorce 63, který se pak zpracovává kyselinou trifluoroctovou v methylenchloridu za vzniku derivátu vzorce 64, na který se působí plynným vodíkem a palladiem na aktivním uhlí v methanolu k odstranění atomu chloru z fenylového kruhu za vzniku derivátu vzorce 65, v němž se působením methyljodidu a hydridu sodíku v dimethylformamidu methyluje atom dusíku v kruhu za vzniku derivátu 67. Na derivát 65 je také možno působit DDQ a BSTFA v toluenu k zavedení dvojné vazby do polohy 1, čímž se získá derivát vzorce 66.

Inhibitory ze schématu 13 se získají tak, že se 16-alkohol vzorce 25 zpracovává kyselinou methansulfonovou v pyridinu s obsahem DMAP za vzniku mesylátu vzorce 77, na který se působí thiofenolem v bezvodém THF s obsahem hydridu sodíku. Získá se thiofenoxyderivát 78, 4-chlorthiofenoxyderivát 79, 4-fluorthiofenoxyderivát 80, 4-methylthiofenoxyderivát 81 nebo 4-methoxythiofenoxyderivát vzorce 82. V případě zpracování thiofenoxyderivátu 78 kyselinou m-chlorperbenzoovou v methylenchloridu 1 hodinu při 0 °C vzniká fenylsulfinylderivát vzorce 83. Při jeho zpracování stejným způsobem, avšak 3 hodiny vzniká fenylsulfonylový derivát 84.

Inhibitory ze schématu 14 se získají tak, že se na 16-keton vzorce 11 působí arylmethyldiethylfosfonátem za Wittigových podmínek při použití hydridu sodíku v DMF při 80 až 100 °C za vzniku odpovídajícího 4-chlorbenzylidenu 71, benzylidenu 72 a 4-methylbenzylidenu 73. Tyto látky se redukují v etanolu v atmosféře vodíku při použití 5% rhodia na aktivním uhlí za vzniku 4-chlorbenzylderivátu 74 a 4-methylbenzylderivátu 74. 3-pyridylmethylderivát 76 se získá ve dvou stupních, provedených obdobným způsobem.

-17CZ 292614 B6

SCHÉMA 1

l.KOř-Bu,ř-BuOH /-AmONO

2. KOH,

98% N₂H₄ q HO(CH₂)₂OH. 140°C

NOH

60% AcOH, reflux nebo NaHSO₃, 50% EtOH, ,, pak 0.5 N HCl, CH₂CI₂

KH, DME nebo KOH/DMSO pak R⁷! nebo R⁷Br

- 18CZ 292614 B6

SCHÉMA 2

SCHÉMA 3

-19CZ 292614 B6

SCHÉMA 4

I

CH₃ (2)

4-NO₂-C₆H₄CO₂H,

DEAD, Ph₃P, C₆H₆

.....OCH₃

-20CZ 292614 B6

SCHÉMA 5

NOH

60% AcOH, reflux

1. KOfBu, f-8uOH /AmONO

------>-

2. KOH, 98% N₂H HO(CH₂)₂OH. 140°C

O

OR⁹

I (18) : R⁹ = CH₂CH₂CH₃;

(19) : R⁹ = CH₂CH₂CH(CH₃)₃

-21 CZ 292614 B6

SCHÉMA 6

(24): R¹⁰ = F

-22CZ 292614 B6 f

•oiOCH₂CH₂CH₃

4-NO₂-C₆H₄CO₂H,

DEAD, Ph₃P. C₆H₆

(26)

1. KH, DMF, _pro QH₂=CHCHgBr

2. H₂, 10% Pd(C), EtOAc

-23CZ 292614 B6

SCHÉMA 8

^CH3 (29): R² = H:

(30): R² = CH₃

-24CZ 292614 B6

SCHÉMA 9

(25)

SAc

(32) : R¹¹ = CH₂CH₃;

(33) : R¹¹ = CH₂CH₂CH₃

-25CZ 292614 B6

SCHÉMA 10

-26CZ 292614 B6

SCHÉMA 11

CH₃

-27CZ 292614 B6

-28CZ 292614 B6

SCHÉMA 13

-29CZ 292614 B6

SCHÉMA 14

-30CZ 292614 B6

V následujících příkladech jsou uvedeny podrobnosti, týkající se způsobu výroby derivátů podle vynálezu. Tyto příklady jsou uvedeny pouze pro ilustraci a nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu. Mimoto je zřejmé, že kromě sloučenin, uvedených v jednotlivých konkrétních příkladech je možno vytvořit ještě velkou řadu dalších kombinací skupin ve významu jednotlivých substituentů a mimoto je možno uskutečnit celou řadu variací a modifikací v průběhu jednotlivých postupů. Všechny tyto možné podružné variace rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Všechny teplotní údaje v příkladové části jsou uvedeny ve stupních Celsia.

Výchozí látku, 4-aza-4-methyl-5alfa-androstan-3,17-dion (sloučenina vzorce A ve svrchu uvedeném schématu 1) je možno připravit způsobem, popsaným v publikaci Rasmusson a další, J. Med. Chem., 27, str. 1600- 1701, 1984. Další výchozí materiál, 4-aza-4,7beta-dimethyl5alfa-androstan-3,17-dion je možno připravit způsobem, který bude dále popsán v příkladu 36.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

4-aza-4—methy 1-5 a-androstan-3,16-dion

Část 1: 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3,17-dion-16-oxim

Do baňky s kulatým dnem obsahující 14 ml 2-methyl-2-propanolu se v proudu plynného dusíku přidá 740 mg (6,59 mmol) terc-butoxidu sodného. Po vytvoření roztoku se přidá 1,0 g (3,30 mmol) 4-aza—4-methyl-5a-androstan-3,17-dionu a vmíchání se pokračuje 1 hodinu. Vytvoří se do zlatova zbarvený roztok, do kterého se za stálého míchání po kapkách přidá 0,884 ml (6,58 mmol) izoamylnitritu a reakční směs se přes noc míchá za vzniku tmavě oranžového roztoku. Směs se ředí stejným objemem vody a přivede se na kyselé pH asi 2 přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po přidání diethyleteru se vytvoří pevná látka, která se filtruje, promyje se eterem a suší ve vakuu za vzniku výsledné sloučeniny.

Část 2: 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3-on-16-oxim

Do směsi 596 mg (1,79 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3,17-dion-16-oximu v 5 ml ethylenglykolu se přidá 54 μΐ (1,74 mmol) 98% roztoku hydrazinu a 568 mg (10,12 mmol) hydroxidu draselného ve formě prášku. Směs se zahřívá 16 hodin při teplotě 140 °C, a pak se zchladí a neutralizuje přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Vzniklá pevná látka se filtruje, promyje se vodou a suší se ve vakuu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotová spektrometrie: m/z 318 (M).

Část 3: 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3,16-dion

Směs 218 mg (0,684 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3-on-16-oximu a 249 mg (23,9 mmol) bisulfítu sodného v 10 ml 50% vodného roztoku etanolu se 3 hodiny zahřívá pod refluxem. Po přidání 33 ml 0,5 N roztoku ředěné kyseliny chlorovodíkové a 50 ml methylenchloridu se směs několik minut energeticky míchá. Organický podíl se oddělí, promyje se roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se. Sloučenina se čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 15% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

-31 CZ 292614 B6

FAB hmotové spektrum: m/z 304 (M + 1).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,89 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,05 (dd, IH).

Příklad 2

3-oxo-4-aza-4-methyl-16p-hydroxy-5a-androstan

Roztok 100 mg (0,330 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3,16-dionu ve 2 ml methanolu se chladí v lázni ledu. Na tento roztok se 1 hodinu působí 38 mg (0,989 mmol) borhydridu sodného. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje se dvakrát 20 ml methylenchloridu. Sloučené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařují se. Požadovaný produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí iychlou chromatografií při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

FAB hmotové spektrum: m/z 306 (M + 1).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd. IH) a 4,39 (m, IH).

Příklad 3

3-oxo-4-aza-4-methyl-16[3-methoxy-5a-androstan

Do roztoku 35 mg (0,115 mmol) 3-oxo-4-aza-4-methyl-16P-hydroxy-5a-androstanu v 1,0 ml dimethylsulfoxidu se přidá 32 mg (0,575 mmol). Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku se přidá 36 μΐ (0,575 mmol) jodmethanu a vmíchání se pokračuje další 4 hodiny. Směs se zředí 30 ml diethyleteru a vzniklý roztok se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se. Požadovaný produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

hmotové spektrum: m/z 391 (M).

400 MHz 'HNMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 6H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, IH), 3,21 (s, 3H) a 3,83 (m, IH).

Příklad 4

3-oxo-4-aza-4-methyl-16P-allyloxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 3, za použití alylbromidu namísto jodmethanu za vzniku výsledné sloučeniny.

hmotové spektrum: m/z 345 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 6H), 0,90 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, IH), 3,90 (m, 2H), 3,99 (m, IH), 5,11 - 5,27 (m, 2H) a 5,83 - 5,93 (m, IH).

-32CZ 292614 B6

Příklad 5

3-oxo-4-aza-4-methyl-16p-(n-propyloxy)-5a-androstan

Roztok 0,85 ml 3-oxo-4-aza-4-methyl-16[3-allyloxy-5a-androstanu v ethylacetátu se v přítomnosti 4 mg oxidu platiny 30 minut hydrogenuje za atmosférického tlaku a při teplotě místnosti. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV 0,45 pm filtračního zařízení. Po čištění rychlou chromatografii na sloupci silikagelu při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu vznikne výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: m/z 348 (M + 1).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): 5 0,88 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, ÍH), 3,28 (t, 2H) a 3,92 (m, ÍH).

Příklad 6

3-oxo-4-aza-4-methyl-16|3-(acetaniido)-5a-androstan

Část 1: 3-oxo-4-aza-4-methyl-16|3-(amino)-5a-androstan

Za přítomnosti 50 mg oxidu platiny se přes noc hydrogenuje za atmosférického tlaku 150 mg (0,471 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3-on-16-oximu v 15 ml etanolu a 7 ml kyseliny octové. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV 0,45 pm filtračního zařízení a filtrát se odpaří. Vzniklý zbytek se rozpustí v 50 ml methylenchloridu a vzniklý roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se za vzniku požadovaného aminu.

Část 2: 3-oxo-4-aza-4-methyl-16p-(acetamido)-5a-androstan

V 1,0 ml methylenchloridu se rozpustí 56 mg (0,184 mmol) výsledného aminu předchozí části 1) a na vzniklý roztok se při teplotě místnosti 2 hodiny působí 0,6 ml pyridinu, 5 ml 4-dimethylaminopyridinu a 0,3 ml anhydridu kyseliny octové. Směs se ředí 50 ml methylenchloridu, roztok se promyje vodou, IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a odpařování vznikne zbytek, který se po absorpci na sloupec silikagelu čistí chromatografii při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

hmotové spektrum: m/z 346 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, ÍH), 4,28 (m, ÍH) a 5,54 (d, ÍH).

Příklad 7

3-oxo-4-aza-4-methyl-16f3-(benzamido)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 6, za použití benzoylchloridu namísto anhydridu kyseliny octové.

Hmotové spektrum: m/z 408 (M).

-33CZ 292614 B6

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,89 (s. 3H), 0,90 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 4,48 (m, 1H), 6,12 (d, 1H).

Příklad 8

3-oxo-4-aza-4-methyl-16[3-(benzylaminokarbonyloxy)-5a-androstan

Do roztoku 40 mg (0,131 mmol) 3-oxo-4-aza-4-methyl-16|3-hydroxy-5a-androstanu ve 2 ml methylenchloridu se přidá 67 μΐ (0,481 mmol) triethylaminu, 2 mg 4-dimethylaminopyridinu a 50 μΐ (0,405 mmol) benzylizokyanátu. Reakční směs se 48 hodin míchá při teplotě místnosti a odpařuje se. Vzniklý zbytek se po absorpci na silikagel čistí rychlou chromatografií při eluci 15% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

FAB hmotové spektrum: m/z 439 (M + 1).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,87 (s, 6H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,90 (m, 1H) a 5,11 (m, 1H)

Příklad 9

3- oxo-4-aza-4-methyl-16a-hydroxy-5a-androstan

Část 1: 3-oxo-4-aza-4-methyl-16a-(4-nitrobenzyloxy)-5a-androstan

Do roztoku 34 mg (0,111 mmol) 3-oxo-4-aza-4-methyl-16|3-hydroxy-5a-androstanu v 1,5 ml bezvodého benzenu se přidá 35 mg (0,134 mmol) trifenylfosfinu, 22 mg (0,134 mmol) kyseliny

4- nitrobenzoové a 21 μΐ (0,134 mmol) diethylazodikarboxylátu. Reakční směs se 1 hodinu zahřívá v olejové lázni o teplotě 80 °C v atmosféře dusíku. Odpařením za sníženého tlaku se odstraní benzen a vzniklá surová směs se po absorpci na sloupec silikagelu se čistí rychlou chromatografií při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku požadovaného produktu s příměsí 97 mg trifenylfosfinu, který se saponifikuje podle postupu uvedeného v části 2).

Část 2: 3-oxo-4~aza-4-methyl-16|3-(hydroxy)-5a-androstan

V 0,5 ml etanolu se uvede do suspenze 97 mg surové výsledné sloučeniny předchozí části 1). Na suspenzi se působí 0,36 ml (0,144 mmol) 0,4N roztoku hydroxidu sodného a po 90 minutách míchání při teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje přidáním několika kapek ledové kyseliny octové, dvakrát se extrahuje 20 ml ethylacetátu a promyje se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a odpařování vznikne produkt, který se po absorpci na sloupec silikagelu Čistí chromatografií při eluci 20% roztokem acetonu v methylenchloridu. Vznikne výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: m/z 305 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,70 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H) a 4,47 (m, 1H).

-34CZ 292614 B6

Příklad 10

3- oxo-4-aza-4-methyl-16a-methoxy-5 a-androstan

Do roztoku 20 mg (0,065 mmol) 3-oxo-4-aza-4-methyl-16|3-hydroxy-5a-androstanu v 0,6 ml dimethylsulfoxidu se přidá 18 mg (0,325 mmol) hydroxidu draselného ve formě prášku. Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti se v atmosféře dusíku přidá 20 μΐ (0,325 mmol) jodmethanu a přes noc se v míchání pokračuje při teplotě místnosti. Směs se ředí 25 ml diethyleteru, vzniklý roztok se promyje dvakrát 10 ml vody, suší se nad síranem sodným a odpaří se. Požadovaný produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu.

Hmotové spektrum: m/z 319 (M).

400 MHz 'H NMR (CDClj): δ 0,70 (s, 3H), 0,87 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 3,22 (s, 3H) a 3,92 (m, 1H).

Příklad 11

4- aza-4,7|3-dimethyl-5a-androstan-3,16-dion

Část 1: 4-aza-4,7[3-dimethyl-5a-androstan-3,16-dion-16-oxim

Do baňky s kulatým dnem obsahující 28 ml 2-methyl-2-propanolu se v proudu plynného dusíku přidá 1,35 g (12,1 mmol) terc.butoxidu draselného. Po vytvoření roztoku se přidá 1,92 g (6,0 mmol) 4-aza-4,7|3-dimethyl-5a-androstanu-3,17-dionu a vmíchání se pokračuje další 1 hodinu, až se vytvoří zlatě zbarvený roztok. Za stálého míchání se do roztoku po kapkách přidá 1,63 ml (12,1 mmol) izoamylnitritu a míchání pokračuje při teplotě místnosti přes noc. Vytvoří se tmavě oranžový roztok, který se ředí stejným objemem vody a přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové se okyselí na přibližnou hodnotu pH 2. Po extrakci třikrát 50 ml diethyleteru se sloučené eterové extrakty promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařují se. Surový produkt se čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 5% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Část 2: 4-aza-4,7p-dimethyl-5a-androstan-3-on-16-oxim

Do směsi 2,7 g (7,79 mmol) 4-aza-4,7(3-dimethyl-5a-androstan-3,17-dion-16-oximu ve 30 ml ethylenglykolu se přidá 0,27 ml (8,57 mmol) 98% roztoku hydrazinu a 2,62 g (46,8 mmol) hydroxidu draselného ve formě prášku. Vzniklá směs se 3 hodiny zahřívá při teplotě 140 °C, zchladí se, zředí se 100 ml vody a neutralizuje se přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové za vzniku žlutohnědé sraženiny. Po filtraci a sušení vznikne 1,7 g produktu, který se čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu a následné 5% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku surového produktu.

Část 3: 4-aza-4,7p-dimethyl-5a-androstan-3,l 6-dion

Směs 0,55 g (1,65 mmol) 4-aza-4,7|3-dimethyl-5a-androstan-3-on-16-oximu ve 20 ml 60% roztoku kyseliny chlorovodíkové se 48 hodin zahřívá pod refluxem, zchlazená směs se ředí 25 ml vody a třikrát se extrahuje 50 ml methylenchloridu. Sloučené extrakty se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, sušení se nad síranem sodným a odpařují se. Po lychlé chromatografíi na sloupci silikagelu při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu vznikne surová výsledná sloučenina.

-35CZ 292614 B6

Hmotové spektrum: m/z 317 (M).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 1,00 (d, 3H), 2,90 (s, 3H) a 3.07 (dd, 1H).

Příklad 12

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16[3-hydroxy-5a-androstan

V lázni ledu se chladí roztok 390 mg (1,23 mmol) 4—aza-4,7[3-dimethyl-5a-androstan-3.16dionu v 8 ml methanolu, na který se působí 30 minut 140 mg (3,68 mmol) borhydridu sodného. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje se třikrát 50 ml methylenchloridu. Sloučené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařují se. Produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografíí při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu a následně 20% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 391 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,83 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H) a 4,36 (m, 1H).

Příklad 13

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16|3-methoxy-5a-androstan i

Do roztoku 20 mg (0,063 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16(3-hydroxy-5a-androstanu v 0,5 ml dimethylsulfoxidu se přidá 18 mg (0,313 mmol) hydroxidu draselného ve formě prášku.

Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku se přidá 20 μΐ (0,313 mmol) jodmethanu a v míchání se pokračuje přes noc při teplotě místnosti. Směs se zředí 25 ml diethyleteru a vzniklý roztok se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se. Požadovaný produkt se po absorpci na silikagel čistí rychlou chromatografíí při eluci 1,5% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 334 (M+l).

400 MHz 'HNMR (CDC1₃): δ 0,83 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, lH),a3,80(m, 1H).

Příklad 14

3-oxo-4-aza-4,7P-dimethyl-l 6[3-ethyloxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 13, za použití jodetanu namísto jodmethanu a roztoku hydridu draselného v Ν,Ν-dimethylformamidu namísto roztoku hydroxidu draselného v dimethylsulfoxidu za vzniku výsledné sloučeniny.

hmotové spektrum: m/z 347 (M).

-36CZ 292614 B6

400 MHz ’Η NMR (CDC1₃): 8 0,83 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 1,18 (t, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,39 (m, 2H) a 4,40 (m, 1H).

Příklad 15

3-oxo-4-aza-4,7 β-d imethy 1-16a-al ly loxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 13, za použití alylbromidu namísto jodmethanu za vzniku výsledné sloučeniny.

hmotové spektrum: m/z 359 (M).

400 MHz ’HNMR (CDC1₃): 8 0,83 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,96 (m, 1H), 5,11 - 5,29 (m, 2H) a 5,85 - 5,93 (m, 1H).

Příklad 16

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16p-benzyloxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 14, za použití benzylbromidu namísto jodetanu a za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 409 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): 8 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,43 (q, 2H) a 7,31 (m, 5H).

Příklad 17

3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16[3-(3,3-dimethylallyloxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 13, za použití 3,3-dímethylalylbromidu namísto jodmethanu a za vzniku výsledné sloučeniny.

400 MHz ^]H NMR (CDC1₃): 8 0,82 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 1,67 (s, 3H), 1,71 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,93 (m, 1H) a 5,31 (m, 1H).

Příklad 18

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16p-(n-propyloxy)-5a-androstan

Roztok 13,0 mg (0,036 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16p-allyloxy-5a-androstanu v 0,5 ml ethylacetátu se za přítomnosti 4 mg oxidu platiny 30 minut hydrogenuje za atmosférického tlaku a při teplotě místnosti. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV 0,45 pm filtračního zařízení. Po čištění rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 1% roztokem methanolu v methylenchloridu vznikne výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: m/z 361 (M).

-37CZ 292614 B6

400 MHz 'HNMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,89 (t, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,29 (t, 2H) a 3,89 (m, 1H).

Příklad 19

3-oxo-4-aza-4,7P-dimethyl-16p-(3-methyl-l-butyloxy)-5a-androstan

Za přítomnosti 3 mg 10% roztoku palladia na aktivním uhlí se 30 minut hydrogenuje za atmosférického tlaku roztok 12 mg 3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-163-(3,3-dimethylallyloxy)-5aandrostanu v 0,5 ml ethylacetátu. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV 0,45 μιη filtračního zařízení. Vzniklý produkt se čistí rychlou chromatografií po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 389 (M).

400MHz 'HNMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,33 (m, 2H) a 3,88 (m, 1H).

Příklad 20

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16p-(t-butoxy)-5a-androstan

Do roztoku 20 mg (0,063 mmol) 3-oxo-4-aza-^4,7p-dimethyl-16P-hydroxy-5a-androstanu v 0,5 ml methylenchloridu chlazeného v lázni ledu se přidá 23 μΐ (0,126 mmol) t-butyltrichloracetimidátu a 0,56 μΐ (0,0063 mmol) kyseliny trifluormethansulfonové. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, a pak se přidá dalších 23 μΐ (0,126 mmol) t-butyltrichloracetimidátu a 0,56 μΐ (0,0063 mmol) kyseliny trifluormethansulfonové. Po 1 hodině se potřetí přidá stejné množství reakčních činidel a reakční směs se 5 hodin zahřívá při teplotě místnosti. Směs se ředí 50 ml diethyleteru, promyje se 10 ml IN vodného roztoku hydroxidu sodného, 10 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po sušení nad síranem sodným a odpařování vznikne surový produkt, který se čistí rychlou chromatografií po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 375 (M).

400 MHz 'H NMR (CDCI₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 1,11 (s, 9H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H) a 4,00 (m, 1H).

Příklad 21

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16|3-(4-kyanofenoxy)-5a-androstan

Do roztoku 20 mg (0,063 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7fl-dimethyl-16(3-hydroxy-5a-androstanu v 0,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 15 mg (0,126 mmol, 35% hmotnostních) hydridu draselného ve formě prášku. Vzniklá reakční směs se 15 minut míchá při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku. Přidá se 38 mg (0,315 mmol) 4-fluorbenznitrilu a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Po zředění 25 ml methylenchloridu se reakce ukončí přidáním směsi ledu a vody. Vodná vrstva se extrahuje třikrát 25 ml methylenchloridu a sloučené organické podíly se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařují se.

-38CZ 292614 B6

Vzniklý produkt se čistí rychlou chromatografií po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 420 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,76 (m, 1H), 6,87 (m, 2H) a 7,53 (m, 2H).

Příklad 22

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16p-(4-trifluormethylfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 21, kde namísto 4-fluorbenznitrilu se použije 4-fluorbenztrifluorid.

Hmotové spektrum: m/z 463 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,76 (m, 1H), 6,88 (d, 2H) a 7,50 (d, 2H).

Příklad 23

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16[3-(4-chlorofenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 21, kde namísto 4-fluorbenznitrilu se použije l-chlor-4-fluorbenzen.

Hmotové spektrum: m/z 430 (M + 1).

400 MHz ’H NMR (CDCI₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,74 (d, 2H) a 7,19 (d, 2H).

Příklad 24

3-OXO-4—aza-4,7p-dimethyl-16p-(4-fluorfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 21, kde namísto 4-fluorbenznitrilu se použije 1,4-difluorbenzen.

Hmotové spektrum: m/z 414 (M + 1).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,65 (m, 1H), 6,75 (m, 2H) a 6,92 (m, 2H).

-39CZ 292614 B6

Příklad 25

3-oxo-4-aza-4,7 β-dimethy 1-16a-hydroxy-5 a-androstan

Část 1: 3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16a-(4-nitrobenzyloxy)-5a-androstan

Do roztoku 178 mg (0,580 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16[3-hydroxy-5a-androstanu v 10 ml bezvodého benzenu se přidá 294 mg (1,12 mmol) trifenylfosfinu, 187 mg (1,12 mmol) kyseliny 4-nitrobenzoové a 176pl (1,12 mmol) diethylazokarboxylátu. Reakční směs se v atmosféře dusíku 1 hodinu zahřívá v lázni oleje o teplotě 80 °C. Po odstranění benzenu odpařováním za sníženého tlaku se vzniklý produkt čistí rychlou chromatografií při absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny s příměsí 404 me trifenylfosfinu. která se odstraní saponifikací podle postupu uvedeného v části 2.

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0.80 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,05 (dd, 1H) a 5,48 (m, 1H).

Část 2: 3-oxo-4-aza-4,7(3-dimethyl-16a-hydroxy-5a-androstan

Po uvedení do suspenze 404 mg výsledného produktu části 1 v 5 ml etanolu se na suspenzi působí 1,82 ml (0,728 mmol) 0,4 N roztoku hydroxidu sodného. Po 90 minutách míchání při teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje přidáním několika kapek ledové kyseliny octové a extrahuje se 100 ml ethylacetátu. Po promytí dvakrát 25 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného se vzniklý produkt se čistí rychlou chromatografií po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 20% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 319 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0.71 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,03 (dd, 1H) a 4,42 (m, 1H).

Příklad 26

3-oxo—4-aza—4,7|3-dimethyl-l 6a-(n-propyloxy)-5a-androstan

Do roztoku 20 mg (0,063 mmol) 3-oxo-4-aza—4,7[3-dimethyl-16a-hydroxy-5a-androstanu v 0,65 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 15 mg (0,126 mmol, 35% hmotnostních) hydridu draselného ve formě prášku. Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku se přidá 27 μΐ (0,315 mmol) alylbromidu a v míchání se pokračuje 2 hodiny. Po přidání dalších 15 mg hydridu draselného a 27 μΐ alylbromidu se reakční směs míchá přes noc. Směs se zředí 50 ml diethyleteru a 10 ml vody. Organický podíl se promyje 10 ml IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, 10 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se. Požadovaný produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 2% roztokem methanolu v methylenchloridu za vzniku sloučeniny, která se v 0,5 ml ethylacetátu a za přítomnosti 10% roztoku palladia na aktivním uhlí 2 hodiny hydrogenuje. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV 0,45 pm filtračního zařízení. Vzniklý produkt se čistí rychlou chromatografií po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 10% roztokem izopropanolu v hexanu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 361 (M).

-40CZ 292614 B6

400 MHz ’Η NMR (CDC1₃): δ 0,76 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 0,90 (t, 3H), 1,02 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 3,29 (t, 2H) a 3,98 (m, 1H).

Příklad 27

3-oxo-4-aza-4,16a-dimethyl-l 6p-hydroxy-5a-androstan

Do roztoku 50 mg (0,165 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstan-3,16-dionu zchlazeného na teplotu -40 °C se za stálého míchání po kapkách přidá 275 μΐ (0,825 mmol) 3,0 M roztoku methylmagneziumbromidu v diethyleteru. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, a pak se 2 hodiny míchá v atmosféře dusíku. Reakce se ukončí přidáním 25 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a dvakrát se extrahuje 50 ml methylenchloridu. Sloučené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zbytek se odpařuje. Vzniklý produkt se čistí rychlou chromatografii po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 2% roztokem methanolu a methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 319 (M).

400 MHz 'HNMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 1,31 (s, 3H), 2,90 (s, 3H) a 3,00 (dd, 1H).

Příklad 28

3-oxo-4-aza-4,7p, 16a-trimethyl-l 6p-hydroxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladu 27, za použití 4-aza-4,7fi-dimethyl5a-androstan-3,16-dionu jako výchozí sloučeniny namísto 4-aza-4-methyl-5a-androstan3,16-dionu.

Hmotové spektrum: m/z 333 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 1,01 (d, 3H), 1,30 (s, 3H), 2,90 (s, 3H) a 3,00 (dd, 1H).

Příklad 29

3-oxo-4-aza-4,16a-dimethyl-l 6[3-hydroxy-5a-androstan

Do roztoku 31 mg (0,097 mmol) 3-oxo-4-aza-4,16a-dimethyl-16P-hydroxy-5a-androstanu v 0,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 23 mg (0,194 mmol, 35 % hmotnostních) hydridu draselného ve formě prášku. Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 32 μΐ (0,485 mmol) jodmethanu a míchání pokračuje přes noc při teplotě místnosti. Směs se zředí diethyleterem a vzniklý roztok se promyje 10 ml 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové, 10 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se. Požadovaný produkt se po absorpci na silikagel čistí rychlou chromatografíí při eluci 2% roztokem methanolu a methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 333 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,88 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H) a3,17(s,3H).

-41 CZ 292614 B6

Příklad 30

3-oxo-4-aza-4,7p, 16a-trimethyl-l 6(3-methoxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 29, za použití 3-oxo-4-aza4,7p,16a-trimethyl-16p-hydroxy-5a-androstanu jako výchozí sloučeniny namísto 3-oxo—4aza-4,16a-dimethyl-l 6|3-hydroxy-5a-androstanu.

ío Hmotové spektrum: m/z 347 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 1,22 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,18 (s, 3H).

Příklad 31

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16p-methanthio-5a-androstan

Části: 3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16|3-(acetylthio)-5a-androstan

Do baňky s kulatým dnem se vloží v atmosféře dusíku 4 ml bezvodého tetrahydrofuranu a 177 mg (0,676 mmol) trifenylfosfínu. Baňky se v lázni ledu zchladí a přidá se 133 μΐ (0,676 mmol) diizopropylazodikarboxylátu. Vzniklá reakční směs se 30 minut míchá při teplotě 25 0 °C. Přidá se 108 mg (0,338 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16a-hydroxy-5a-androstanu a 49 μΐ (0,676 mmol) kyseliny thioloctové ve 2,0 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C, a pak další hodinu při teplotě místnosti. Po odpařování se vzniklý produkt čistí rychlou chromatografíí po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny s příměsí trifenylfosfínu. Směs se bez dalšího 30 čištění použila v části 2) tohoto příkladu.

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,80 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 1,00 (d, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,80 (m, 1H).

Část 2: 3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16p-(merkapto)-5a-androstan

Do roztoku 208 mg výsledné směsi části 1) ve 4,0 ml etanolu se přidá 1,8 ml (0,716 mmol) 0,4 N roztoku hydroxidu sodného. Po 1 hodině míchání při teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje přidáním několika kapek kyseliny octové, ředí se 100 ml ethylacetátu, promyje se 40 dvakrát 10 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným, odpařování a po absorpci na sloupec silikagelu se vzniklý 16-merkaptan čistí rychlou chromatografií při eluci 20% roztokem acetonu v hexanu za vzniku výsledné sloučeniny.

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 45 (dd, lH),3,28(m, 1H).

Část 3: 3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16[3-(methanthio)-5a-androstan

Do roztoku 18 mg (0,054 mmol) 3-oxo—4—aza-4,7p-dimethyl-16p-(merkapto)-5a-androstanu 50 v 0,5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá v atmosféře dusíku 3,2 mg (0,108 mmol) 80% disperze hydridu sodného v minerálním oleji. Po 15 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá 17 μΐ (0,270 mmol) jodmethanu a míchání pokračuje 3 hodiny při teplotě místnosti.

Po zředění 50 ml methylenchloridu se roztok promyje 10 ml vody a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a vzniklý zbytek se odpařuje. Vzniklý produkt se

-42CZ 292614 B6 čistí rychlou chromatografii po absorpci na sloupec silikagelu a při eluci 10% roztokem izopropanolu a hexanu za vzniku surové výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 349 (M).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 3,08 (m, 1H).

Příklad 32

3-oxo-4—aza-4,7p-dimethyl-16[3-etanthio-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 31 za použití jodetanu namísto jodmethanu v části 3).

Hmotové spektrum: m/z 363 (M).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 1,24 (t, 3H), 2,57 (q, 2H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H), 3,18 (m, 1H).

Příklad 33

3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-l 6β-( 1 -propanthio)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 31 za použití 1-jodpropanu namísto jodmethanu v části 3).

Hmotové spektrum: m/z 377 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,82 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,98 (t, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,51 (t, 2H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 3,13 (m, 1H).

Příklad 34

3-oxo-4—aza-4,7P-dimethyl-16P-etansulfonyl-5a-androstan

Do roztoku 17 mg (0,047 mmol) 3-oxo-4-aza—4,7P-dimethyl-16p-etanthio-5a-androstanu v 1,0 ml methanolu se přidá roztok 19 mg oxonu, monopersulfátové sloučeniny v 1 ml vody. Po 2 hodinách míchání při teplotě místnosti se přidá dalších 19 mg oxonu v 0,5 ml vody a směs se 10 minut míchá, a pak se zředí 25 ml vody a třikrát se extrahuje 50 ml methylenchloridu. Sloučené organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a vzniklý zbytek se odpařuje. Vzniklý produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografii při eluci 2% roztokem methanolu a methylenchloridu za vzniku surové výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 395 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 1,39 (t, 3H), 2,91 (s, 3H), 2,99 (q, 2H), 3,00 (dd, 1H), 3,41 (m, 1H).

-43CZ 292614 B6

Příklad 35

3-oxo-4-aza—4,7p-dimethyl-16(3-fluor-5a-androstan

Do roztoku 18 mg (0,056 mmol) 3-oxo-4-aza-^4,7p-dimethyl-16a-hydroxy-5a-androstanu v 0,5 ml methylenchloridu se při teplotě místnosti přidá 19 μΐ (0,144 mmol) trifluoridu diethylaminosíry. Po 1 hodině míchání při teplotě místnosti se reakční směs zředí 25 ml methylenchloridu, roztok se promyje 25 ml vody, 10 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 10 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a suší se nad síranem sodným. Vzniklý zbytek se odpařuje a po absorpci na sloupec silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 10% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 321 (M).

400 MHz 'HNMR (CDC1₃): δ0,87 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 5,12 (dm, 1H).

Příklad 36

4-aza-4,7fJ-dimethyl-5a-androstan-3,17-dion (sloučenina E v schématu 5)

Část 1: 3-acetoxy-androst-5-en-17-ol

Do roztoku 100 mg (0,303 mmol) 3-acetoxy-androst-5-en-17-onu ve 3 ml etanolu se při teplotě -10 °C a za stálého míchání přidá 22,9 mg (0,606 mmol) borhydridu sodného. Po 1,5 hodině míchání se směs ředí 10 ml vody. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vzniklý zbytek se extrahuje ethylacetátem. Organický podíl se promyje vodným roztokem uhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a zahuštění vznikne surová výsledná sloučenina části 1), která se prokáže protonovou NMR.

Část 2: 3-acetoxy-androst-5-en-l 7-ol-l 7-t-butyldimethylsilyleter

Do roztoku 4,5 g (13,55 mmol) androstan-17-olu z předchozí části v 50 ml dimethylformamidu se při teplotě 23 °C přidá 2,76 g (40,65 mmol) imidazolu. Po přidání 3,063 g (20,32 mmol) tbutyldimethylsilylchloridu se reakční směs míchá za vzniku sraženiny jako pevné látky. Přidá se dalších 20 ml dimethylformamidu a směs se přes noc míchá. Po vlití do 1 1 vody se pevná látka se oddělí filtrací, promyje vodou a rozpustí se v ethylacetátu. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se za vzniku výsledné sloučeniny. Protonovou NMR se prokáže popsané složení výsledné sloučeniny části 2.

Část 3: 17-on-l 7β—ol— 17-t-butyldimethylsilyleter

Do 5,6 g (12,55 mmol) výsledné sloučeniny předchozí části 2) ve 100 ml acetonitrilu se při teplotě 23 °C přidá 3,958 g (43,92 mol) 90% roztoku t-butylperoxidu vodíku a 138 mg chromium hexakarbonylu. Vzniklá reakční směs se v atmosféře dusíku zahřívá pod refluxem 24 hodin, pak se vlije do 1 1 vody, pevná látka se oddělí filtrací a vzniklý zbytek se promyje 500 ml vody a rozpustí se ve 350 ml methylenchloridu. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se za vzniku surového produktu. Po absorpci na silikagel se chromatografií na tenké vrstvě prokáže při eluci směsí hexanu a ethylacetátu v poměru 3:1 přítomnost výchozích sloučenin. Pevná látka se čistí chroma

-44CZ 292614 B6 tografií na sloupci silikagelu při eluci 7% roztokem ethylacetátu v hexanu za vzniku výsledné sloučeniny. Protonovou NMR se prokáže popsané složení výsledné sloučeniny části 3).

Část 4: 3,7-dihydroxy-7-methyl-androst-5-en-l 7 β—ol—17-t-butyldimethylsilyleter

Do roztoku 440 mg (0,956 mmol) výsledné sloučeniny předchozí části 3) v bezvodém tetrahydrofuranu se při teplotě 0 °C po kapkách přidá během 5 až 10 minut methylmagneziumchlorid. Reakční směs se nechá 24 hodin míchat při teplotě místnosti, a pak se vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Tetrahydrofuran jako rozpouštědlo se odstraní ve vakuu avodný podíl se extrahuje ethylacetátem. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a zahustí ve vakuu za vzniku surového produktu. Výsledná sloučenina se bez dalších čištění použije v další části syntézy. Protonovou NMR se prokáže popsané složení výsledné sloučeniny části 4).

Část 5: 7-methyl-androst-4,6-dien-3-on-l7β—ol—17-t-butyldimethylsilyleter

Ve směsi 50 ml toluenu a 50 ml cyklohexanonu se rozpustí 3,5 g (7,142 mmol) výsledné sloučeniny předchozí části 4) jako Grignardova roztoku a 20 ml rozpouštědla se oddělí destilací ve vakuu. Do takto vzniklé reakční směsi se přidá 4,54 g izopropoxidu hliníku a směs se 15 hodin zahřívá pod refluxem. Směs se zchladí, ředí se ethylacetátem, promyje se vínanem sodnodraselným a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se zahustí ve vakuu. Vzniklý zbytek se destiluje s parou a vzniklý zbytek se extrahuje ethylacetátem, promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a čistí chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 5% roztokem ethylacetátu v hexanu za vzniku výsledné sloučeniny.

Část 6: 7[3-methy!-androst-5-en-3-on-17|3-ol-t-butyldimethylsilyleter

Do roztoku 370 mg výsledné sloučeniny předchozí části 5) v 5,5 ml amoniaku, 1 ml tetrahydrofuranu a 1 ml toluenu se po malých částech přidá 50 mg kovového lithia. Vznikne modrý roztok, který se 2 hodiny míchá, a pak se přidá roztok 1,2-dibromethanu ve 2 ml tetrahydrofuranu. Roztok se 10 minut míchá při teplotě -78 °C, přidá se 250 mg chloridu amonného a směs se 10 minut míchá. Přebytek amoniaku se odstraní odpařováním v proudu dusíku. Reakční směs se ředí nasyceným roztokem chloridu sodného a extrahuje se ethylacetátem. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a zahustí za vzniku surové sloučeniny, která se bez dalšího čištění použije v následující části syntézy.

Část 7: 7p-methyl-androst-4-en-3-on-17|3-ol-t-butyldimethylsilyleter

Do roztoku 432 mg výsledné sloučeniny předchozí části 6) ve 4 ml tetrahydrofuranu se pod dusíkem za stálého míchání přidá 150 μΐ DBU (l,8-diazabicyklo-[5.4.0]-undec-7-enu. Směs se 1,5 hodiny zahřívá pod refluxem, zchladí se a ředí roztokem chloridu amonného. Tetrahydrofuran jako rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se extrahuje ethylacetátem. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a zahustí za sníženého tlaku za vzniku surového produktu. Produkt se čistí chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 10% roztokem ethylacetátu v hexanu.

Část 8: kyselina 17(3-(t-butyldimethylsilyloxy)-7p-methyl-5-oxo-A-nor-3,5-sekoandrost3-ová

Do roztoku 884 mg výsledného produktu předchozí části 7) v 15 ml t-butylalkoholu se při teplotě 80 °C přidá roztok 248 mg uhličitanu sodného v 1,5 ml vody, a pak se po kapkách přidá během 15 až 20 minut směs 2,273 g jodistanu sodného s 16,8 mg manganistanu draselného v 8 ml vody. Reakční směs se 2 hodiny zahřívá při teplotě 80 °C, zchladí se, filtruje a vzniklý zbytek se promyje vodou. Extrakt se zahustí ve vakuu, okyselí se přidáním vodného roztoku kyseliny

-45CZ 292614 B6 chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Organicky podíl se promyje vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se a zahustí za vzniku surového produktu. Protonovou NMR se prokáže popsané složení výsledné sloučeniny vzorce 9).

Část 9: 4,73-dimethyl-4-aza-androst-5-en-3-on-l7 β—o 1—t—buty ldimethylsilyleter

Do roztoku 840 mg výsledného produktu předchozí části 8) v 5 ml ethylenglykolu se přidá 1,5 g octanu sodného a 737 mg methylaminhydrochloridu. Vzniklá reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě 180 °C. Směs se zchladí, ředí se vodou a extrahuje se ethylacetátem. Po sušení a zahuštění vznikne surová výsledná sloučenina. Protonovou NMR se prokáže popsané složení výsledné sloučeniny části 9).

Část 10: 4,7|3-dimethyl-4-aza-androst-5-en-3-on-17p-ol

Do roztoku 700 mg výsledné sloučeniny předchozí části 9) ve 20 ml acetonitrilu se při teplotě 0 °C přidá 500 μΐ vodného roztoku fluorovodíku. Vzniklá reakční směs se 1 hodinu míchá, přidáním vodného roztoku uhličitanu sodného se neutralizuje roztok fluorovodíku a směs se ředí vodou. Acetonitril se odstraní ve vakuu a vzniklý zbytek se extrahuje ethylacetátem. Organický podíl se suší a zahustí za vzniku surové výsledné sloučeniny, která se po absorpci na silikagel čistí preparativní chromatografií při eluci směsí chloroformu a acetonu v poměru 3:1.

Část 11: 4,7[3-dimethyl-4-aza-androst-3-on-17p-ol

Do roztoku 350 mg výsledné sloučeniny předchozí části 10) v 10 ml kyseliny octové se přidá 100 mg oxidu platičitého a vzniklá reakční směs se evakuuje a propláchne vodíkem. Směs se při teplotě místnosti přes noc protřepává při tlaku vodíku 0,28 MPa. Roztok se filtruje a zahustí a vzniklý zbytek se zpracuje ethylacetátem. Organický podíl se zahustí ve vakuu, ředí se ethylacetátem a promyje se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení a zahuštění vznikne výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: 320 (M+l).

Část 12: 4-aza-4,7p-dimethyl-5a-androstan-3,17-dion

Roztok 1,013 g (3,176 mmol) výsledné sloučeniny předchozí části 11) v 6 ml methylenchloridu se umístí do suché baňky. Do baňky se přidá 1,6 g molekulárního síra o velikosti ok 4.10^-10 m jako prášku, 0,558 g (4,76 mmol) N-methylmorfolin-N-oxidu (NMO), a následně 55 mg (0,159 mmol) tetrapropylamoniumperrutanátu (TPAP). Směs se 2 hodiny míchá, ředí se 150 ml ethylacetátu a filtruje se. Filtrát se odpaří dosucha za vzniku surového produktu, z kterého po krystalizací z ethylacetátu vznikne surová výsledná sloučenina o teplotě tání 135 až 138 °C.

Elementární analýza pro: C20H31NO2:

molekulová hmotnost = 317,48;

vypočteno: C 75,67; H 9,84; N 4,41;

nalezeno: C 75,16; H 10,22; N 4,13.

Hmotové spektrum: 318 (M+l).

Sloučeniny následujících příkladů 37 až 49 se vyrobí podle postupu uvedeného v příkladě 21, ale za použití odpovídajícího 4-fluor derivátu namísto 4-fluorbenzonitrilu.

-46CZ 292614 B6

Příklad 37

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16p-(4-methylsulfonyl-fenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 474 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 4,80 (m, IH), 6,92 (d, 2H), 7,81 (d, 2H).

Příklad 38

3-oxo-4-aza-4,7p~dimethyl-16p-(3-pyridyloxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 397 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, IH), 4,75 (m, IH), 7,21 (m, 2H), 8,22 (m, 2H).

Příklad 39

3-oxo-4-aza-4,7 β-dimethyl-16 [3-(4-feny lfenoxy)-5 a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 472 (M+l).

400 MHz 'H NMR (CDClj): δ 0,85 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, IH), 4,76 (m, IH), 6,9 (d, 2H), 7,26 (m, IH), 7,43 (m, 2H), 7,52 (m, 4H).

Příklad 40

3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16|3-(3-chlorfenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 431 (M+l).

400 MHz ^]H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 4,68 (m, IH), 6,71 (m, IH), 6,80 (m, IH), 6,88 (m, IH), 7,13 (m, IH).

Příklad 41

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16|3-(4-trifluormethoxyfenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 480 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDCI3): δ 0,85 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, IH), 4,69 (m, IH), 6,78 (m, 2H), 7,09 (m, 2H).

-47CZ 292614 B6

Příklad 42

3-oxo-4-aza—4,7P-dimethyl-16(3—(2-chlorfenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 431 (M-l).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,03 (dd, 1H), 4,80 (m, 1H), 6,81 (m. 2H), 7,24 (m, 1H), 7,32 (m, 2H).

Příklad 43

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16(3-(2-pyrazinyloxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 398 (M+l).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 5,34 (m, 1H), 8,04 (d, 2H), 8,15 (1H).

Příklad 44

3-oxo-4-aza-4,7P-dimethyl-16|3-(2-pyrimidinyloxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 398 (M-l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 5,35 (m, 1H), 6,89 (m, 1H), 8,15 (d, 2H).

Příklad 45

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-l 6β-[4-( l-pyryl)fenoxy]-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 461 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 6,30 (m, 2H), 6,84 (m, 2H), 6,96 (m, 2H), 7,25 (m, 2H).

Příklad 46

3-oxo-4-aza-4,73-dimethyl-163-(3-kyanofenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 420 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,71 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 7,32 (m, 1H).

-48CZ 292614 B6

Příklad 47

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16ú-(l-nafiyloxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 445 (M).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 1,07 (d, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,02 (dd, ÍH), 6,70 (d, ÍH), 7,32 (m, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,78 (m, ÍH), 8,24 (ÍH).

Příklad 48

3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16[3-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 445 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 1,04 (d, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 4,76 (m, ÍH), 6,62 (m, ÍH), 6,81 (m, ÍH), 7,12 (d, ÍH).

Příklad 49

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16[3-[4-(5-oxazolyl)fenoxy]-5a-androstan

Hmotové spektrum: m/z 463 (M+l).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 4,76 (m, ÍH), 6,86 (d, 2H), 7,21 (s, ÍH), 7,53 (d, 2H), 7,84 (s, ÍH).

Příklad 50

3-oxo-4-aza-4,7(3_dimethyl-16|3-(4-nitrofenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 21 za použití l-fluoro-4-nitrobenzenu namísto 4-fluorbenzonitriíu.

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,03 (dd, ÍH), 4,81 (q, ÍH), 6,87 (d, 2H), 8,17 (d, 2H).

Příklad 51

3-oxo™4~aza-4,7P-dimethyl-16p-(4~aminofenoxy)-5a-androstan

Do roztoku 163 mg (0,36 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-16[3-(4-aminofenoxy)-5aandrostanu v 8ml ethylacetátu a 8 ml methanolu se přidá 25 mg (0,23 mmol) 10% roztoku palladia na aktivním uhlí. Vzniklá reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti a v atmosféře vodíku. Po filtraci přes celit a odpařování vznikne 148 mg výsledné sloučeniny, která se použije bez dalšího čištění pro další postup syntézy.

Hmotové spektrum: m/z 411 (M+l).

-49CZ 292614 B6

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,37 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,03 (dd, 1H), 4,64 (q, 1H), 6,70 (d, 2H), 6,78 (d, 2H).

Příklad 52

3-oxo-4-aza-4,7|3-dimethyl-16|3-(4-acetylaminofenoxy)-5a-androstan

Do roztoku 48 mg (0,116 mmol) 3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16|3-(4-aminofenoxy)-5aandrostanu v 1 ml methylenchloridu a 0,037 ml (0,46 mmol) pyridinu se přidá 0.022 ml (0,23 mmol) anhydridu kyseliny octové a 5 mg (0,04 mmol) 4-N,N-dimeth> laminopyridinu (DMAP). Vzniklá reakční směs se při teplotě místnosti a v atmosféře dusíku míchá přes noc. a pak se ředí 50 ml methylenchloridu a promyje se 50 ml vody a 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se suší nad síranem sodným a odpařuje se. Surový produkt se po absorpci na tenkou vrstvu silikagelu s tloušťkou 1000 mikrometrů čistí preparativní chromatografií při eluci 5% roztokem methanolu v methylenchloridu. Vznikne 51 mg výsledné sloučeniny.

Hmotové spektrum: m/z 453 (M+l).

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,03 (dd, 1H), 4,68 (q, 1H), 6,76 (d, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,33 (d, 2H).

Příklad 53

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16p-(4-benzoylaminofenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 52, ale za použití benzoylchloridu namísto anhydridu kyseliny octové a triethylaminu namísto pyridinu a 4-N,N-dimethylaminopyridinu (DMAP).

Hmotové spektrum: m/z 513 (M+l).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 4,73 (q, 1H), 6,82 (d, 2H), 7,49 (m, 5H), 7,72 (s, 1H), 7,84 (d, 2H).

Příklad 54

3-oxo-4-aza-4,7(3-dimethyl-l 6|3-(4-methylsulfonamidofenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 52, ale za použití tosylchloridu namísto anhydridu kyseliny octové.

Hmotové spektrum: m/z 565 (M+l).

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,63 (q, 1H), 6,34 (s, 1H), 6,67 (d, 2H), 6,91 (d, 2H), 7,19 (d, 2H), 7,56 (d, 2H).

-50CZ 292614 B6

Příklad 55

3-oxo-4-aza-4-(2,4-dimethoxybenzyl)-7|3-methyl-163-hydroxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu pro výrobu sloučeniny 12 uvedené ve schématu 5. Odpovídající analog benzenu (sloučenina E ve schématu 5) se připraví podle postupu popsaného v příkladě 36, kde namísto methylaminu se použije 2,4-dimethoxybenzylamin.

Příklad 56

3-oxo-4-aza-4-(2,4-dimethoxybenzyl)-7p-methyl-16p-(4-chlorfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 23, ale za použití 3-oxo-4-aza-4(2,4-dimethoxybenzyl)-7p-methyl-l 6p-hydroxy-5a-androstanu namísto 3-oxo-4-aza-4,7p~ dimethyl-16|3-hydroxy-5a-androstanu. Výsledná sloučenina se použije bez čištění pro další postup syntézy.

Příklad 57

3-oxo-4-aza-7 β-methyl-l 6fl-(4-chlorfenoxy)-5a-androstan

Do roztoku 130 mg (0,23 mmol) 3-oxo-4-aza-4-(2,4-dimethoxybenzyl)-7β-methyl-l 6β-(4chlorfenoxy)-5a-androstanu v 1 ml methylenchloridu se přidá 1 ml kyseliny trifluoroctové. Vzniklá reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní odpařováním a zbytek se zpracuje methylenchloridem. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem uhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a odpařování vznikne surová sloučenina, která se po absorpci na tenkou vrstvu silikagelu s tloušťkou 1000 mikrometrů čistí preparativní chromatografií při eluci 20% roztokem acetonu v methylenchloridu. Vznikne výsledná sloučenina.

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,01 (d, 3H), 3,07 (dd, 1H), 4,67 (q, 1H), 5,49 (s, 1H), 6,73 (d, 2H), 7,18 (d, 2H).

Příklad 58

3-oxo-4-aza-7 β-methyl-l 6β-fenoxy-5α-androstan

Do roztoku 3-oxo-4-aza-7β-methyl-16β-(4-chlorfenoxy)-5α-androstanu v methanolu se přidá 20% roztok palladia na aktivním uhlí. Roztok se 1 den protřepává v atmosféře vodíku při tlaku 0,336 MPa. Po filtraci přes celit a odpařování se surový produkt čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 20% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,01 (d, 2H), 3,08 (dd, 1H), 4,71 (q, 1H), 5,48 (s, 1H), 6,81 (d, 2H), 6,89 (t, 1H), 7,24 (t, 2H).

-51 CZ 292614 B6

Příklad 59

3-oxo-4-aza-7P-methyl-16p-fenoxy-5a-androstan-l-en

Do roztoku 145 mg (0,35 mmol) 3-oxo-4-aza-7p-methyl-16[3-fenoxy-5a-androstanu ve 3 ml toluenu se přidá 95 mg (0,42 mmol) DDQ a 360 mg (1,4 mmol) BSTFA. Po přidání 4,04 mg (0,027 mmol) kyseliny trifluoroctové se vzniklá reakční směs míchá přes noc v atmosféře dusíku a při teplotě místnosti. Přidá se 4,06 mg (0,035 mmol) methylacetacetátu, roztok se míchá 1 hodinu, a pak se přes noc zahřívá pod refluxem. Po vlití do 75 ml roztoku vody obsahujícího 160 mg uhličitanu sodného a 120 mg bisulfitu sodného se vodný podíl třikrát extrahuje 40 ml methylenchloridu. Organické podíly se sloučí a promyjí 50 ml vody a 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a odpařování se surová sloučenina čistí rychlou chromatografíí na sloupci silikagelu při eluci 15% roztokem acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,92 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 3,34 (dd, 1H), 4,72 (q, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,80 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,82 (d, 2H), 6,89 (t, 1H), 7,24 (t, 2H).

Příklad 60

3-oxo-4-aza-7p-methyl-16p-(4-chlorfenoxy)-5a-androstan-l-en

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 59, ale za použití 3-oxo-4-aza-7|3methyl-16|3-(4-chlorfenoxy)-5a-androstanu namísto 3-oxo—4-aza-7|3-methyl-16p-fenoxy5a-androstanu.

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,92 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,02 (d, 2H), 3,34 (dd, 1H), 4,67 (q, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,80 (d, 1H), 6,73 (d, 2H), 6,78 (d, 1H), 7,18 (d, 2H):

Příklad 61

3-oxo-4-aza-4,7[3-dimethyl-l 6p-fenoxy-5a-androstan

Do roztoku 60 mg (0,16 mmol) 3-oxo-4-aza-7p-methyl-16p-fenoxy-5a-androstanu v 1 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 8 mg (0,21 mmol) hydridu sodného ve formě 60% disperze v minerálním oleji. Po 30 minutách míchání při teplotě místnosti se přidá pod dusíkem 40 mg (0,28 mmol) methyljodidu a v míchání se pokračuje přes noc. Směs se zředí 50 ml ethylacetátu, a vzniklý roztok se promyje 50 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové, 50 ml vody a 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Organická vrstva se suší nad síranem sodným a odpařuje. Surový produkt se po absorpci na silikagel čistí rychlou chromatografíí při eluci roztokem 10% acetonu v methylenchloridu za vzniku výsledné sloučeniny.

400 MHz ‘H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,91 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 4,72 (q, 1H), 6,81 (d, 1H), 6,89 (t, 1H), 7,24 (t, 2H).

-52CZ 292614 B6

Příklad 62

3-oxo-4-aza-4,7p-dimethyl-16|3-(4-chlorfenoxy)-5a-androstan-l-en

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 61, ale za použití 3-oxo-4-aza-7|3methyl-16(3-(4-chlorfenoxy)-5a-androst-l-enu namísto 3-oxo-4-aza-73-methyl-16p-fenoxy-5a-androstanu.

400 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,87 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,07 (d, 2H), 2,93 (s, 1H), 3,34 (dd, 1H), 4,68 (q, 1H), 5,84 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 6,73 (d, 2H), 7,18 (d, 2H).

Příklad 63

3-oxo-4-aza-4-(2,4-dimethoxybenzyl)-7p-methyl-16[3-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 56, za použití 2-chlor-4-fluortoluenu namísto l-chlor-4-fluorbenzenu. Sloučenina se použije v další části syntézy bez čištění.

Příklad 64

3- oxo-4-aza-7|3-methyl-16[3-(3-chlor-4-methylfenoxy-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 57, za použití 3-oxo-4-aza-4—(2,4— dimethoxybenzyl)-7|3-methyl-l 6(3-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5a-androstanu namísto 3-oxo-

4- aza-4-(2,4-dimethoxybenzyl)-7[3-methyl-16(3-(4-chlorfenoxy)-5a-androstanu.

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,01 (d, 3H), 2,26 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H), 4,66 (q, 1H), 5,59 (s, 1H), 6,62 (m, 1H), 6,81 (d, 1H), 7,06 (d, 1H).

Příklad 65

3-oxo-4-aza-7[3-methyl-16|3-(4-methylfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 58, za použití 3-oxo-4-aza-7|3methyl-16|3-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5a-androstanu namísto 3-oxo-4-aza-7p-methyl-l 6β(4-chlorfenoxy)-5a-androstanu.

400 MHz ‘H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,25 (s, 3H), 4,69 (q, 1H), 6,71 (d, 2H), 7,03 (d, 2H).

Příklad 66

3-oxo-4-aza-7[3-methyl-16[3-(4-methylfenoxy)-5a-androst-l-en

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 59, za použití 3-oxo-4-aza-7pmethyl-16[3-(4-inethylfenoxy)-5a-androstanu namísto 3-oxo-4-aza-7p-methyl-l όβ-fenoxy5a-androstanu.

-53CZ 292614 B6

400 MHz ’Η NMR (CDC1₃): δ 0,92 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,25 (s, 3H), 3,34 (dd, 1H), 4,68 (q, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,81 (d, 1H), 6,71 (d, 2H), 6,79 (d, 1H), 7,03 (d, 2H).

Příklad 67

3-oxo-4-aza-7 β-methyl-l 6p-(4-methylfenoxy)-5a-androstan

Sloučenina se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 61, za použití 3-oxo-4-aza-7[3methyl-16[3-(4-methylfenoxy)-5a-androstanu namísto 3-oxo—4-aza-7β-methyl-lόβ-fenoxy5a-androstanu.

400 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,91 (s, 3H). 3,05 (dd, 1H), 4,69 (q, 1H), 6,71 (d, 2H), 7,04 (d, 2H).

Příklad 68

3-oxo-4-aza-4,7P-dimethyl-16P-fluor-5a-androstan

Na sloučeninu označenou jako meziprodukt 12 (schéma 5) se při teplotě místnosti působí trifluoridem diethylaminosíry v methylenchloridu. Po čištění chromatografíí na sloupci silikagelu vznikne výsledná sloučenina s výtěžkem 64 %.

Hmotové spektrum: m/z 321 (M).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,87 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 5,12 (m, H).

Příklad 69

3- oxo-4-aza-4,7β-dimethyl-16β-kyano-5α-androstan

Sloučenina se získá přeměnou meziproduktu 25 uvedeného v přehledu 7) na derivát methansulfonový působením methansulfonylchloridem nebo roztokem anhydridu kyseliny methansulfonové v methylenchloridu za přítomnosti organické báze, jako například pyridinu, triethylaminu a

4- N,N-dimethylaminopyridinu (DMAP). Oddělení methansulfonové skupiny se dosáhne zahříváním v odpovídajícím rozpouštědle, jako jsou Ν,Ν-dimethylformamid nebo dimethylsulfoxid, za přítomnosti kyanidu sodného nebo draselného.

Příklad 70

3-oxo-4-aza-4-methy 1-16β-( l-hexyl)-5a-androstan

Část 1: 3-oxo-4-aza-4-methyl-l 6β-( l-hexenyl)-5a-androstan

Do baňky s kulatým dnem o objemu 50 ml se pod dusíkem přidá 141 mg (0,33 mmol) 1-hexyltrifenylfosfoniumbromidu a následně 1 ml čerstvě destilovaného tetrahydrofúranu. Vzniklá směs se zchladí na teplotu 0 °C a přidá se 132 ml (0,33 mmol) 2,5 M roztoku butyllithia v hexanech za vzniku světle oranžového roztoku. Roztok se 10 minut míchá při teplotě 0 °C, a pak se do roztoku vloží 50 mg (0,165 mmol) 4-aza-4-methyl-5a-androstanu-3,16-dionu v 0,5 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Po rozdělení směsi do 10 ml vody a 20 ml ethylacetátu se organické podíly oddělí, promyjí se dvakrát 10 ml 0,5N

-54CZ 292614 B6 roztoku kyseliny chlorovodíkové a nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem sodným. Vzniklý zbytek se po odpařování čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 1% roztokem methanolu a methylenchloridu. Vznikne 29,6 mg výsledné sloučeniny, která se bez dalšího čištění použije v následující části příkladu.

Část 2: 3-oxo-4-aza-4-methyl-163-(l-hexyl)-5a-androstan

Při teplotě místnosti se 1 hodinu za přítomnosti 5 mg oxidu platiny hydrogenuje roztok 22 mg výsledné sloučeniny předchozí části 1) v 0,5 ml ethylacetátu v baňce naplněné plynným vodíkem. Katalyzátor se odstraní filtrací za použití Millex-HV filtru, filtrát se odpaří a vzniklá sloučenina se čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluci 20% roztokem acetonu v hexanu za vzniku výsledné sloučeniny s výtěžkem 5,2 mg.

Hmotové spektrum: m/z 374 (M+l).

400 MHz ‘H NMR (CDC1₃): δ 2,42 (dd, 2H), 2,90 (s, 3H), 3,00 (dd, 1H).

Příklad 71

4-aza-4,7[3-dimethyl-16p-(4-chlorbenzyliden)-5a-androstan-3-on

Podle reakčního schématu 14 se zahřívá při teplotě 80 °C 1 hodinu roztok 32 mg (0,1 mmol) 4-aza-4,7P-dimethyl-5a-androstanu-3,17-dionu (příklad 11), 5 mg (1,02 ekv.) hydridu sodného, 27 mg (1,02 ekv.) diethyl-4-chlorbenzylfosfonátu a 0,5 ml dimethylformamidu. Reakční směs se zchladila, zředila se dichlormethanem a promyla se dvakrát vodou, a pak nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad bezvodým síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění vznikne požadovaný produkt, který se po absorpci na sloupec silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí hexanů a izopropanolu v poměru 4:1. Vznikne směs E/Z izomerů v poměru 5:1.

Hmotové spektrum směsi E/Z izomerů: m/z = 389.

500 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,75 (s, 3H), 0,82 (s, 3H), 0,90 (d, 3H), 2,96 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H), 6,34 (s, 0,4H), 6,41 (s, 0,6H), 7,18-7,38 (m, 5H).

Příklad 72

4-aza-4,7 β-dimethy 1-16-benzy liden-5 a-androstan-3-on

Sloučenina se vyrobí podle postupu uvedeného v předchozím příkladě 71, kde namísto diethyl— 4-chlorbenzylfosfonátu se použije diethylbenzylfosfonát.

Hmotové spektrum: m/z = 390.

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): 8 0,75 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,94 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H), 6,28 (s, 0,4H), 6,35 (s, 0,6H), 7,15 - 7,35 (m, 5H).

-55CZ 292614 B6

Příklad 73

4-aza-4,7p-dimethyl-16-(4-methylbenzyliden)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se vyrobí podle postupu uvedeného v předchozím příkladě 71, kde namísto diethyl— 4-chlorbenzylfosfonátu se použije diethyl—4-methylfosfonát.

Hmotové spektrum: m/z = 404.

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,78 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 1,1 (d, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H), 6,30 (s, 0,4H), 6,38 (s, 0,6H), 7,10 - 7,24 (m, 5H).

Příklad 74

4-aza-4,7[3-dimethyl-16-(4-chlorbenzyl)-5a-androstan-3-on

Do roztoku 33 mg 4-aza-4,7P-dimethyl-16|3-(4-chlorbenzyliden)-5a-androstan-3-onu uvedeného v příkladě 71 ve 4 ml etanolu se přidá roztok 5% rhodia na aktivním uhlí a vzniklá černá suspenze se míchá v baňce s obsahem vodíku. Po 2 hodinách se filtrací oddělí katalyzátor, filtrát se zahustí a čistí chromatografií na sloupci silikagelu při eluci směsí hexanu a acetonu v poměru 3:1 za vzniku směsi izomerů výsledné sloučeniny v poměru 3:1.

Hmotové spektrum: m/z = 427.

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,84 (s, 3H), 0,86 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 2,92 (bs, 2,7H), 2,93 (bs, 1,3H), 2,98 (s, 3H), 3,02 (dd, 1H), 7,10 (d, 2H), 7,25 (d, 2H).

Příklad 75

4-aza-4,7[3-dimethyl-16-(4-methylbenzyl)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle stejného postupu, který se popisuje pro přípravu výsledné sloučeniny příkladu 74.

Hmotové spektrum: m/z = 408.

500 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,95 (s, 2H), 2,96 (s, 1H), 3,05 (dd, 1H), 7,06 - 7,11 (m, 4H).

Příklad 76

4-aza-4,7|3-dimethyl-16-(3-pyridylmethyl)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle stejného postupu, kteiý se popisuje pro přípravu výsledné sloučeniny příkladu 74, za použití 3-pyridylmethyIdimethylfosfonátu.

Hmotové spektrum: m/z = 395.

500 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,89 (s, 3H), 0,88 (s, 3H), 1,03 (d, 3H), 2,93 (bs, 2H), 2,94 (bs, 1H), 2,98 (s, 3H), 3,04 (dd, 1H), 7,10 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,58 (s, 1H), 8,55 (s, 2H).

-56CZ 292614 B6

Příklad 77

4-aza-4,7P~dimethyl-16a-methansulfonyl-5a-androstan-3-on

Podle reakČního schématu 13 se do roztoku 65 mg (0,2 mmol) 4-aza-4,7P-dimethyl-16a-hydroxy-5a-androstan-3-onu v bezvodém dichlormethanu přidá katalytické množství 4-N,N-dimethylaminopyridinu (DMAP) a následně 45 mg (1,1 ekv.) anhydridu kyseliny methansulfonové. Po 15 minutách se směs zředí dichlormethanem a promyje se třikrát 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové, 1M roztokem uhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad bezvodým síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění vznikne dostatečně čistá výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: m/z = 398.

500 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,78 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 1,02 (d, 3H), 2,95 (s, 3H), 3,1 (dd, 2H), 5,18 (m, 1H).

Příklad 78

4-aza-4,7p-dimethyl-16|3-thiofenoxy-5a-androstan-3-on

Do roztoku 50 μΐ (2,5 ekv.) thiofenolu v bezvodém tetrahydrofuranu se přidá 20 mg (2,6 ekv.) hydridu sodného. Po 20 minutách míchání se přidá roztok 65 mg (0,2 mmol) 4-aza-4,73~dimethyl-16a-methansulfonyl-5a-androstan-3-onu (příklad 77) v tetrahydrofuranu a vzniklá směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakce se ukončí přidáním 1M roztoku chloridu amonného a po ředění ethylacetátem se roztok promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad bezvodým síranem hořečnatým. Vzniklý zbytek se filtruje a zahustí za vzniku požadovaného produktu, který se po absorpci na sloupec silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí hexanů a izopropanolu v poměru 9:1.

Hmotové spektrum: m/z = 412.

500 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,86 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,06 (d, 3H), 2,94 (s, 3H), 3,06 (dd, 2H), 3,65 (m, 1H), 7,26 - 7,70 (m, 5H).

Příklad 79

4-aza-4,7[3-dimethyl-16P-(4-chlorthiofenoxy)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle postupu přípravy 4-aza-4,7p-dimethyl-16p-thiofenoxy-5aandrostan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 78, ale za použití 4-chlorthiofenolu namísto thiofenolu.

Hmotové spektrum: m/z = 446.

500 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,94 (s, 3H), 3,02 (dd, 2H), 3,61 (m, 1H), 7,22 (d, 2H), 7,32 (d, 2H).

-57CZ 292614 B6

Příklad 80

4-aza—4,7[3-dimethyl-16p-(4-fluorthiofenoxy)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle postupu přípravy 4-aza-4,73-dimethyl-16|3-thiofenoxy-5a-androstan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 78, ale za použití 4-fluorthiofenolu namísto thiofenolu.

Hmotové spektrum: m/z = 431.

500 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 1,05 (d, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,03 (dd, 2H), 3,51 (m, 1H), 6,99 (d, 2H), 7,35 (d, 2H).

Příklad 81

4-aza—4,7p-dimethyl-16p~(4-methylthiofenoxy)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle postupu přípravy 4-aza-4,7|3-dimethyl-16|3-thiofenoxy-5a-androstan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 78, ale za použití 4-methylthiofenolu namísto thiofenolu.

Hmotové spektrum: m/z = 426.

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,75 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 1,1 (d, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 3,02 (dd, 2H), 3,59 (m, 1H), 7,09 (d, 2H), 7,22 (d, 2H).

Příklad 82

4-aza-4,7[3-dimethyl-16p-(4-methoxythiofenoxy)-5a-androstan-3-on

Sloučenina se připraví podle postupu přípravy 4-aza-4,7p~dimethyl-16p-thiofenoxy-5a-androstan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 78, ale za použití 4-methoxythiofenolu namísto thiofenolu.

Hmotové spektrum: m/z = 443.

500 MHz *H NMR (CDC1₃): δ 0,81 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 1,18 (d, 3H), 2,93 (s, 3H), 3,02 (dd, 2H), 3,50 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 7,45 (d, 2H), 7,67 (d, 2H).

Příklad 83

4-aza-4,7p-dimethyl-16p-fenylsulfínyl-5a-androstan-3-on

Do roztoku 20 mg (0,05 mmol) 4-aza-4,7p-dimethyl-16p-thiofenoxy-5a-androstan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 78, v dichlormethanu se při teplotě 0 °C přidá 11 mg (1 ekv.) mCPBA a vzniklý roztok se 1 hodinu míchá. Po ředění dichlormethanem se vzniklý roztok promyje 1M roztokem uhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad bezvodým síranem sodným a vzniklý zbytek se po absorpci na sloupec silikagelu čistí chromatografíí. Vznikne směs diastereomerů výsledné sloučeniny v poměru 4,6:1.

Hmotové spektrum: m/z = 428.

-58CZ 292614 B6

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,83 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 1,01 (d, 3H), 2,92 (s, 3H), 3,01 (dd, 2H), 3,19 (m, 0,85H), 3,55 (m, 0,15H), 7,5 - 7,70 (m, 5H).

Příklad 84

4-aza-4,7P-dimethyl-16P-fenylsulfonyl-5a-androstan-3-on

Do roztoku 912 mg (0,03 mmol) 4-aza-4,7(3-dimethyl-16|3-fenylsulfinyl-5a-androstan-3-onu, výsledné sloučeniny příkladu 83, v dichlormethanu se přidá 9 mg (1,5 ekv.) mCPBA a vzniklý roztok se 3 hodiny míchá. Po ředění dichlormethanem se vzniklý roztok promyje 1M roztokem uhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad bezvodým síranem sodným a vzniklý zbytek jako požadovaný produkt se po absorpci na sloupec silikagelu čistí chromatografii při eluci směsí hexanů a izopropanolu v poměru 7:3.

Hmotové spektrum: m/z = 444.

500 MHz 'H NMR (CDC1₃): δ 0,85 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 1,0 (d, 3H), 2,95 (s, 3H), 3,05 (dd, 2H), 20 3,55 (m, 0,15H), 7,41 (t, 1H), 7,55 (t, 2H), 7,90 (d, 1H).

Příklad 85

3-oxo-4_aza-4,16[3-dimethyl-5a-androstan

Sloučenina se připraví z 4-aza-4,16(3-dimethylandrostan-3,17-dionu přeměnou na odpovídající 17-trifluoracetát. Redukci tohoto trifluoracetátu běžnými metodami vznikne výsledná sloučenina.

Hmotové spektrum: m/z 304 (M + 1).

400 MHz ’H NMR (CDC1₃): δ 0,76 (s, 3H), 0,85 (s, 3H), 1,04 (d, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,01 (dd, 2H).

Biologické zkoušky

Příprava 5-reduktázy z lidské prostaty a pokožky hlavy

Vzorky lidské tkáně byly zmrazený, mlety ve zmrazeném stavu a pak homogenizovány ve 40 40 mM pufru fosfátu draselného o pH 6,5 s obsahem 5 mM síranu hořečnatého, 25 mM chloridu draselného, 1 mM fenylmethylsulfonylchloridu, 1 mM dithiothreitolu DTT a 0,25 M sacharózy, k homogenizaci byl užit Potter-Elvehjemův homogenizátor. Odstředěním homogenátu při 1500 g po dobu 15 minut byla připravena surová usazenina buněčných jader. Po dvojím promytí a znovuuvedení do suspenze ve dvou objemech pufru byl přidán glycerol do konečné kon45 centrace 20 %. Suspenze enzymu byla zmrazená po jednotlivých podílech na -80 °C. Reduktáza z prostaty i z pokožky hlavy byla za těchto podmínek stálá nejméně 4 měsíce.

Klonovaný enzym

Pro stanovení IC₅₀ byly zkoumané inhibitory 5alfa-reduktázy 1 a 2 rozpuštěny v etanolu v sériovém ředění na požadované koncentrace. 5alfa-reduktáza rekombinantního typu 1 po expresi baculovirem byla předem inkubována s inhibitorem (0,1 až 1000 nM) ve 40 mM fosforečnanu sodného o pH 7,0 s obsahem 500 mikroM NADPH, 1 mM DTT a 1 mg/ml BSA celkem 18 hodin při teplotě 4 °C. Reakce se zahájí přidáním /7-³H/T (NEN, 20 Ci/mmol) a NADPH do konečné

-59CZ 292614 B6 koncentrace 0,3 mikroM a NADPH a směs se inkubuje 90 minut při teplotě 37 °C. Podobně byla předem inkubována také rekombinantní 5alfa-reduktáza 2 z téhož zdroje s inhibitorem 1 až 10 000 nM, ve 40 mM citronanu sodného o pH 5,5 s obsahem 500 mikroM NADPH, 1 mM DTT a 1 mg/ml BSA celkem 18 hodin při teplotě 4 °C. Reakce byla zahájena přidáním /7-³H/T (NEN, 20 Ci/mmol) do 0,3 mikroM a NADPH do koncentrace 500 mikroM. Přeměna T na DHT byla sledována detektorem s následným dělením pomocí HPLC v reverzní fázi (sloupec Whatman RACH C18, průtok 1 ml/min, 0,1% TFA ve směsi vody a methanolu 42 : 58, T:doba retence 6,3 minut, DHT 9,7 minut).

Zkouška s 5alfa-reduktázou

Reakční směs pro 5alfa-reduktázu typu 1 obsahovala 40 mM fosforečnan draselný o pH 6,5, 5 mikroM /7-³H/-testosteronu, 1 mM dithiothreitolu a 500 mikroM NADPH v konečném objemu 100 mikrolitrů. V typických případech byla zkouška zahájena přidáním 50 až 100 mikrogramů homogenátu prostaty nebo 75 až 200 mikrogramů homogenátu pokožky hlavy a směs byla inkubována při 37 °C. Po 10 až 50 minutách byla reakční směs smísena k zastavení reakce s 250 mikrolitry směsi 70 % cyklohexanu a 30 % ethylacetátu s obsahem 10 mikrogramů DHT aT. Vodná a organická vrstva byly odděleny odstředěním při 14 000 ot/min v Eppendorfově mikroodstředivce. Organická fáze byla podrobena HPLC v normální fázi (sloupec 10 cm Whatman, oxid křemičitý, partisil 5, rovnovážný stav v 70 % cyklohexanu a 30 % ethylacetátu, průtok 1 ml/min, doba retence: DHT 6,8 až 7,2 minut, androstandiol 7,6 až 8,0 minut, T 9,1 až 9,7 minut. Systém pro HPLC byl tvořen zařízením Waters Model 680 pro vytvoření gradientu, vzorky byly odebírány zařízením Hitachi Model 655A, přístroj byl opatřen UV detektorem (Applied Biosystems Model A120). Přeměna T na DHT byla sledována průtokovým detektorem radioaktivity pro smísení materiálu, vytékajícího ze sloupec pro HPLC s jedním objemem scintilační kapaliny Flo Scint 1 (Radiomatic). Za popsaných podmínek byla produkce DHT lineární po dobu nejméně 25 minut. Jedinými steroidy, které bylo možno prokázat v preparátech z lidské prostaty a pokožky hlavy byly T, DHT a androstandiol.

Sledování inhibice

Sloučeniny byly rozpuštěny ve 100% etanolu. Hodnoty IC₅₀ představují koncentraci inhibitoru, jíž je zapotřebí ke snížení účinnosti enzymu na 50 % ve srovnání s kontrolou. Hodnoty IC50 byly stanoveny šestibodovou titrací, přičemž koncentrace inhibitoru se pohybovala v rozmezí 0,1 až 1000 nM.

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu byly při uvedeném testu podrobeny zkouškám na účinnost na 5alfa-reduktázu typu 1 a 2. V případě inhibice enzymu typu 1 měly sloučeniny IC₅₀ nižší než 600 nM, pro většinu sloučenin v rozmezí 0,3 až 200 nM. Pro enzym typu 2 měly tytéž látky hodnoty IC50 vyšší než 155 nM, pro většinu sloučenin vyšší než 1000 nM. Každá ze zkoumaných látek měla nejméně dvojnásobnou selektivitu pro typ 1 enzymu ve srovnání s typem 2, většina látek měla desetinásobnou nebo vyšší selektivitu pro typ 1 enzymu. Výsledky prokazují použitelnost sloučenin podle vynálezu pro léčení svrchu uvedených stavů.

Sloučeniny, uváděné jako inhibitory 5alfa-reduktázy 2 mají účinnost při zkoušce na inhibici tohoto izoenzymu, obdobně inhibitory typu 1 mají schopnost způsobit inhibici izoenzymu 1.

Zkouška s papillou lidského vlasu

Papilla je malá skupina buněk na bázi každého vlasového folikulu a obecně se uznává, že jde o skupinu buněk, která je příčinou růstu vlasů. Bylo prokázáno, že tyto skupiny buněk produkují 5alfa-reduktázu a je proto možno případné inhibitory podrobit zkouškám na buněčných kulturách těchto buněk.

-60CZ 292614 B6

Izolované buněčné kultury byly připraveny podle publikací Messenger A. G., The Culture ofDermal Papilla Cells From Human Hair Follicles, Br. J. Dermatol., 110, 685 - 689, 1984 a Itami S. a další, 5alfa-Reductase Activity In Cultured Human Dermal Papilla Cells From Beard Compared With Reticular Dermal Fibrobalsts, J. Invest. Dermatol, 94, 150 - 152, 1990. Buněčný materiál z brady a z okcipitální části vlasové pokožky dvou jednotlivců byl užit v provedení všech pokusů. Buněčný materiál byl pěstován do vytvoření souvislé vrstvy mezi 4. až 6. subkulturou. Vrstvy byly dvakrát opláchnuty fyziologickým roztokem chloridu sodného s fosfátovým pufrem, odděleny od pokožky a vloženy do zkumavky pro odstředivku. Pak byla buněčná suspenze odstředěna 10 minut při 1500ot/min při 4 °C. Usazenina byla znovu uvedena do suspenze ve 20 mM tris-HCl-pufru o pH 7,5 při 4 °C, pufr obsahoval 250 mM sacharózy, 1 mM MgCl₂ a 2 mM CaCl₂ a byl promíchán deseti průchody injekční jehlou. Surový homogenát byl pak homogenizován homogenizátorem ze skla s teflonovým povlakem a byl užit ke studiím na lokalizaci 5alfa-reduktázy. K tomuto účelu byl odstředěn 10 minut při 800 g za vzniku usazenin jader. Supernatant byl dále odstředěn 15 minut při 10 000 g za získání usazeniny mitochondrií. Pak byl supernatant odstředěn při 100 000 g 60 minut k získání usazeniny mikrosomů a cytosolu. Každá částicová frakce byla dvakrát promyta a pak znovu uvedena do suspenze v pufru.

Standardní inkubační směs obsahovala 50 nM /³H/-testosteronu, 1 mM NADPH, 100 mM citronanu sodného o pH 5,5 nebo 100 mM tris-HCl o pH 7,5 a 50 mikrolitrů buněčného homogenátu v konečném objemu 100 mikrolitrů. Každá zkumavka obsahovala 50 až 100 mikrogramů buněčné bílkoviny. Inkubace trvala 30 minut při teplotě 37 °C. V průběhu inkubace je reakce přímo úměrná reakční době. Pro zjištění optimálního pH byl užit citrátový pufr o pH 4,5 až 6,5 a tris-HCl-pufr o pH 7,0 až 9,0. Obsah bílkoviny byl stanoven podle publikace Lowry a další, Protein Measurement With The Folin Phenol Reagent, J. Biol. Chem., 193, 265-275,1951.

Po inkubaci se reakce zastaví přidáním čtyřnásobného objemu směsi chloroformu a methanolu v objemovém poměru 2 : 1 s obsahem 110 mikrogramů každého z nosných steroidů. Extrahované steroidy se analyzují chromatografií na tenké vrstvě podle publikace Gomez a další, In Vitro Metaboliym Of Testeosterone.4-¹⁴C a Delta-androstene-3,17-dione-4-^I4C- In Human Skin. Biochem., 7, 24- 32, 1968 a čistota každého steroidů se stanoví překrystalováním. Účinnost 5alfa-reduktázy se vyjádří jako souhrnné množství vytvořeného dihydrotestosteronu, androstandiolu a androstandionu. /l,2-³H/-testosteron s aktivitou 55,2 Ci/mmol se získá od New England Nuclera Corporation (Boston, MA), neznačené steroidy je možno získat od Sigma Chemical Company (St. Louis, MO). Fetální telecí sérum lze získat od Hazleton (Lenaxa, Kansas). Všechny ostatní chemické látky byly analyticky čisté.

Model akné na krysách s normální srstí

Dospělé krysy s modelem akné jsou krysy, jejichž celý hřbet pokrývá pokožka hnědé barvy s mazotokem a u nichž dochází k abnormálně zvýšené produkci mazu, jak bylo prokázáno, jde o důsledek androgenních hormonů v oběhu. Roztoky s obsahem 0,1, 0,05 až 0,025 % zvoleného inhibitoru 5alfa-reduktázy byly připraveny ve vhodném nosném prostředí, jako směsi propylenglykolu, izopropanolu, izopropylmyristátu a vody v poměru 50 : 30 : 2 : 18 a místně naneseny na hřbet dospělých krysích samců uvedeného typu krys, bylo nanášeno 0,2 ml prostředku na každé zvíře denně po dobu 4 týdnů. U kontrol bylo užito pouze nosné prostředí a mimoto bylo pět samců vykastrováno. Po dvou týdnech dochází ke zlepšení mazotoku v závislosti na použité dávce, po 4 týdnech byl dvě hodiny před usmrcením krys intraperitoneálně podán bromdeoxyuridin BrdU v dávce 200 mg/kg. Vzorky pokožky byly inkubovány s 20 mM EDTA ve fosfátovém pufru 1,5 hodin při 30 °C. Vrstva s obsahem mazových žlázek a vlasových váčků byla oddělena a fixována formalinem pro imunologické barvení BrdU. Buněčný materiál, v němž lze prokázat syntézu DNA a BrdU-pozitivní jádro je uložen na zevním okraji žlázek. Množství buněk ve fázi S se stanoví zařízením pro mikrofotografie. Při použití materiálu, fixovaného formaldehydem se zmrazené řezy barví působením 1% osmia a měří se rozměr váčku. Pozitivní inhibitor 5alfareduktázy bude při této zkoušce snižovat produkci mazu inhibicí rychlosti odlupování buněčného materiálu za současného snížení rozměru žlázek.

-61 CZ 292614 B6

Dále budou uveden příklad postupu, který je možno použít pro detekci růstu vlasů.

Fotografické postupy pro detekci růstu vlasů

A. Makrofotografické postupy

Místo:

Zařízení:

ID-karta

Oblast pro hodnocení počtu vlasů

Film: Kodak-T, maximálně 24 snímků kamera: Nikon N-6000 čočka: Mikkor 60 mm f 2,8 blesk: Nikon SB-21B Macroflash registrace: běžné registrační zařízení.

Postup:

Při pořizování těchto klinických fotografií může být jedinou proměnnou veličinou počet vlasů. Typ emulze filmu, osvětlení, zaměření, expozice a vyvolávání musí zůstat stálé.

1. Oblast, v níž budou počítány vlasy se připraví tak, že se uloží malé označení o velikosti přibližně 1 mm na okraj bezvlasého úseku, bezprostředně v blízkosti středu celé oblasti při použití běžného označovacího zařízení nebo ručně pomocí jehly a inkoustu. Oblast rozměru přibližně 2,5 x 2,5 cm okolo značky se ostříhá nakrátko na délku vlasů přibližně 2 mm. Oddělené vlasy se vyfotografují po odstranění z hlavy. Ke snadnějšímu oddělení je možno použít stlačený vzduch nebo omytí pokožky etanolem.

2. Zvětšení: každá čočka zvětšovala v poměru 1 : 1,2.

Otvor: každý snímek byl vytvořen při f/22.

Film: T-max 100 (24 snímků).

3. Oblast po ostříhání vlasů byla třikrát vyfotografována při -2/3,0 a +2/3 f).

Zkušený pracovník označí pomocí pera všechny viditelné vlasy. Označení se provádí tak, že se přes fotografii položí průhledný materiál, na němž se označení provede místo na fotografii. Vytvořené bídy se pak hodnotí počítačem.

Fotografie se náhodně označí číslem. Za 6 měsíců se vypočítají výsledky původních fotografií a fotografií po 6 měsících a výsledky se hodnotí. Po 12 měsících se takto vyhodnotí původní fotografie, fotografie po 6 měsících a po 12 měsících a výsledky se opět hodnotí.

Metodika hodnocení růstu vlasů byla popsána v publikaci Olsen E. A. a Delong E., J. Američan Academy of Dermatology, sv. 23, str. 470, 1990.

B. Celkový fotografický postup

Místo: barevní karta/nemocný Id celková fotografie:

Zařízení:

Film: Kodachrom KR-64 s 24 snímky, Kamera: Nikon N-6000

Čočka: Nikkor 60 mm f 2,8

Blesk: Nikon SB-23.

-62CZ 292614 B6

Postup

Při pořizování těchto fotografií musí být jedinou proměnnou veličinou celkový vzhled oblasti. Musí být vyloučeno oblečení, nábytek, pohled na stěny a podobně.

1. Celková fotografie jsou pořízeny před sepnutím vlasů v pevné poloze, stanovení stereo- taktickým zařízením. Vlasy na hlavě nemocného se sepnou vždy stejně tak, aby nezakrývaly oblast bez vlasů.

2. Zvěšení: každá čočka zvětšovala v poměru 1 : 6.

Otvor: každá fotografie byla pořízena s otvorem f/11.

Film: Kodachrom, 24 snímků.

3. Byly provedeny tři celkové fotografie nemocného při kompenzaci O.

Vynález byl popsán v souvislosti s určitými provedením, je však zřejmé, že by bylo možno navrhnout ještě řadu modifikací rovněž spadajících do rozsahu vynálezu. Bylo by například možno uskutečnit další změny dávek v závislosti na odpovědi nemocného na léčení nebo by bylo možno použít jiný způsob podání nebo jiný nosič, tak, jak je to v oboru běžné. Je tedy zřejmé, že rozsah vynálezu nemůže být na popsaná provedení omezen.

Claims (27)

1. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty obecného vzorce I (I), kde přerušovaná čára v poloze Cj-C2 znamená, že vazba v poloze 1 a 2 může být jednoduchá nebo dvojná

R¹ znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku,

R² znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku, jeden ze symbolů

R³ a R⁴ znamená atom vodíku nebo methyl a druhý znamená

-63CZ 292614 B6

a) aminoskupinu,

b) kyanoskupinu,

c) atom fluoru,

d) methyl,

e) hydroxyskupinu,

f) -C(O)NR_bRc, kde R_b a nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl o 6 až 10 atomech uhlíku nebo aralkyl o 6 až 10 atomech uhlíku v arylové a 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, která může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, arylová skupina ve svrchu uvedeném významu může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl,

g) alkyl-X- o 1 až 10 atomech uhlíku v alkylové části,

h) alkenyl-X- o 2 až 10 atomech uhlíku v alkenylové části, přičemž alkyl o 1 až 10 atomech uhlíku v případě g) a alkenyl o 2 až 10 atomech uhlíku v případě

h) může být substituován 1 až 3 substituenty ze skupiny

i) ) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, nitroskupina, mono- di- nebo trihalogenmethyl, oxoskupina, hydroxysulfonyl nebo karboxyl, ii) ) hydroxyalkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkyloxyskupina, alkylthioskupina, alkylsulfonyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, alkyloxykarbonyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, přičemž alkylové části těchto zbytků jsou popřípadě ještě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, iii) ) arylthioskupina, aryl, ve svrchu uvedeném významu, aryloxyskupina, arylsulfonyl, aryloxykarbonyl, přičemž arylové části ve svrchu uvedeném významu jsou popřípadě ještě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, iv) ) -C(O)NR_bR_c; -14(1^)-0(0)-4^ -NR_bR_c; kde R_b a R_c mají svrchu uvedený význam,

i) aryl-Χ-, kde aryl má svrchu uvedený význam,

j) heteroaryi-X- kde heteroaryl je 5, 6 nebo 7-členný heteroaromatický kruh, který obsahuje alespoň jeden člen ze skupiny: atom kyslíku v kruhu, atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinaci těchto členů, přičemž heteroaromatický kruh může také být kondenzován s jedním benzenovým nebo dalším heteroarylovým kruhem ve svrchu uvedeném významu a mimoto může být aryl v případě i) a heteroaryl v případě j) substituován 1 až 3 substituenty ze skupiny

-64CZ 292614 B6

v) ) atom halogenu, hydroxyskupina, kyanoskupina, mono-, di- nebo trihalogenmethyl, mono-, di- nebo trihalogenmethoxyskupina, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 6 atomech uhlíku, formyl. hydrogensulfonyl, karboxyl nebo ureidoskupina, vi) ) alkyl, hydroxyalkyl, alkyloxy skupina, alkyloxyalkyl, alkylkarbonyl, alkylsulfonyl, alkylthioskupina, alkylsulfinyl, alkylsulfonamidoskupina, alkylarylsulfonamidoskupina, alkyloxykarbonyl nebo alkyloxykarbonylalkyl vždy o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylových částech, RbRcN-C(O)alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, alkanoylaminoalkyl nebo aroylaminoalkyl s alkylovými částmi vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, a arylovou částí o 6 až 10 atomech uhlíku, přičemž alkylové části jsou popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, aryl, aryloxyskupina, arylkarbonyl, arylthioskupina, arylsulfonyl, aiy lsulfinyl, arylsulfonamidoskupina, aryloxykarbonyl, kde arylová část má svrchu uvedený význam a je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl, viii) ) -QOjNRbFú, -O-C(O)-NRbRc, -N(R_b)-C(O)-R_c, -NR_bRc, R_bC(O)-N(R_€)-, kde Rb a Re mají význam, uvedený svrchu v odstavci f) nebo -N(Rb)-C(O)OR_g, kde R znamená alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl ve svrchu uvedeném významu přičemž alkylová část může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl a arylová část je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhiíku nebo trifluormethyl, dále -NÍRbj-QOJ-NRjRd, kde Rj znamená vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo aryl ve svrchu uvedeném významu přičemž alkylová a arylová část mohou být substituovány způsobem, uvedeným v odstavci f) pro symboly Rb a Rc, ix) ) heterocyklická skupina, kterou je 5. 6 nebo 7-členný kruh, obsahující alespoň jeden člen ze skupiny atom kyslíku v kruhu, atom síry v kruhu, 1 až 4 atomy dusíku v kruhu nebo kombinaci těchto členů, přičemž heterocyklický kruh je aromatický, nenasycený nebo nasycený a popřípadě kondenzovaný s benzenovým kruhem a popřípadě je heterocyklický kruh substituován 1 až 3 substituenty tak, jak byly svrchu definovány v odstavcích v)), vi)), vii)) a viii)),

k) R³ a R⁴ společně tvoří karbonyl nebo

l) R³ a R⁴ společně tvoří =CH-R_g, kde R_g má význam, uvedený v odstavci viii)) a

X se volí ze skupiny

-O-, S(O)_n- C(O)-, -CH(Re)-, C(O)-C-^X, -C(O)-N(Re)-^x, -N(Re)-C(O)-O-^x, -O-C(O)N(Re)-^x, -NCRejCÍOý-NíRe)-, -O-CH(Re)-^x, N(Re)-, kde R. znamená vodík, alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, aryl ve svrchu uvedeném významu, arylalkyl o 1 až 3 atomech uhlíku v alkylové části a arylové části ve svrchu uvedeném významu nebo heteroaryl ve svrchu uvedeném významu, popřípadě substituovaný ve významu z odstavce j), přičemž ^x znamená vazbu, kterou je skupina vázána v poloze 16 v obecném vzorci I a n znamená celé číslo 0,1 nebo 2, a jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo estery.

2. 16-Substituované-4—azaandrostanové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R¹ znamená atom vodíku nebo methyl a R² znamená atom vodíku nebo methyl.

3. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde se heteroarylová skupina volí ze skupin pyridyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl,

-65CZ 292614 B6 benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, chinolyl, izochinolyl, chinazolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbazolyl, izoxazolyl, thiazolyl, izothiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl a benzoxazolyl, přičemž tyto skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty z odstavců v)) až ix)) z nároku 1.

4. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 3, obecného vzorce I, kde heteroarylová skupina může být substituována jedním nebo dvěma substituenty z odstavců v)) až ix) ) z nároku 1.

5. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde se heterocyklická skupina volí ze skupin pyridyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, chinolyl, izochinolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbozolyl, izoxazolyl, thiazolyl, izothiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl a benzoxazolyl, přičemž tyto skupiny jsou popřípadě substituovány 1 až 3 substituenty z odstavců v)) až ix)) z nároku 1 a jejich dvojné vazby jsou popřípadě částečně nebo úplně nasyceny.

6. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 5, obecného vzorce I, kde heterocyklická skupina je popřípadě substituována jedním nebo dvěma substituenty z odstavců v)) až ix)) z nároku 1.

7. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 2, obecného vzorce I, kde jeden ze symbolů R³ a R⁴ znamená atom vodíku nebo methyl a druhý z těchto symbolů se volí ze skupiny

b) kyanoskupina,

c) atom fluoru,

e) hydroxyskupina,

g) alkyl-X- o 1 až 10 atomech uhlíku v alkylové části, kde alkylová část je popřípadě substituována arylovou skupinou o 6 až 10 atomech uhlíku a arylová část může být substituována 1 až 2 substituenty ze skupiny atom halogenu nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku,

h) alkenyl-X- o 2 až 10 atomech uhlíku v alkenylové části,

i) aryl-Χ-, s arylovou částí o 6 až 10 atomech uhlíku,

j) heteroaryl-Χ-, kde heteroarylem je 5- nebo 6-členný heteroaromatický kruh, obsahující 1 až 2 atomy dusíku v kruhu a arylová skupina v případě i) a heteroarylová skupina v případě j) je popřípadě substituována jedním nebo dvěma substituenty ze skupiny

x) ) atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, trihalogenmethyl, trihalogenmethoxyskupina, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl ve svrchu uvedeném významu, alkylsulfonyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkylarylsulfonaminoskupina o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části a 6 až 10 atomech uhlíku v arylové části, xi) ) -NRbRc nebo Rb-CfOj-NfR^)-, kde Rb a Rc nezávisle znamenají vodík, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, aryl o 6 až 10 atomech uhlíku nebo aralkyl o 1 až 6 atomech v alkylové části o 6 až 10 atomech uhlíku v arylové části, přičemž alkylová část může být substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl a arylová část je popřípadě substituována 1 až 3 substituenty ze skupiny atom halogenu, alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo trifluormethyl,

-66CZ 292614 B6 xii)) heterocyklickou skupinu s pěti členy v aromatickém kruhu, obsahující jeden atom dusíku v kruhu nebo 1 atom dusíku a 1 atom kyslíku v kruhu a

k) R³ a R⁴ společně tvoří karbonylovou skupinu,

X se volí ze skupiny

-O-, -S(O)_n- -CH(R.)-, -C(O)-N(Re)-^x, -O-C(O)-N(Re>-^x, kde Re znamená vodík, alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, aryl o 6 až 10 atomech uhlíku nebo arylalkyl o 1 až 3 atomech uhlíku v alkylové části a 6 až 10 atomech uhlíku v arylové části, * znamená vazbu, jíž je skupina připojena v poloze 16 obecného vzorce I a n znamená celé číslo 0 nebo 2.

8. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1, ze skupiny

4-aza-4,7beta-dimethyl-5alfa-androstan-3,16-dion,

4-aza-4-methy 1-5 alfa-androstan-3,16-dion,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(benzylaminokarbonyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-benzoylamino-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-allyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-OXO-4—aza-4-methyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-4-methyl-6alfa-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4—methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-(4-methylfenoxy}-5alfa-androst-l-en,

-67CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-7beta-methyl-16beta-/4-(l-pyrrol)fenoxy/-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza—4,7beta-dimethyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-A,7beta-dimethyl-16beta-allyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3,3-dimethylallyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(izo-pentoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,16beta-dimethyl-l 6beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ethyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-benzyloxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-methylthio-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propylthio)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-fluor-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-kyano-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4-methyl-l 6beta-( l-hexyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyl)-5alfa-androstan_J

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ben2yl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4—chlorbenzyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,16alfa-dimethyl-l 6beta-methoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-kyanofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-kyanofenoxy)-5alfa-androstan,

3-OXO-4—aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-nitrofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(l-naftyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(tórc-butyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-methyl-l-butyloxy)-5alfa-androstan,

-68CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(n-propyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethoxyfenoxy)-5alfa-androstan.

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ethylthio-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-ethylsulfonyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylsulfonylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(4-tolylsulfonylamino)fenoxy/-5alfa-androstan.

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-pyridyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/(4-fenyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza—4,7beta-dimethyl-16beta-(4-fluorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-pyrazinyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(5-oxyzolyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-OXO-4—aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-pyrimidinyloxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4- aza-4,7beta-dimethyl-16beta-/4-(l-pyrryl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-aminofenoxy)-5alfa—androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-acetylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-benzoylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(2-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4~aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-chlorfenoxy}-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyI-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androst-l-en,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorbenzyliden)-5alfa-androstan,

3-oxo-4~aza-4,7beta-dimethyl-16beta-benzyliden-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylbenzyliden)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorbenzyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylbenzyl)-5alfa-androstan,

-69CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(3-pyridylmethyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza—4,7beta-dimethyl-16beta-methansulfonyl)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-thiofenoxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenyl)sulfanyl-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-fluorfenyl)sulfanyl-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza—4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methylfenyl)sulfanyl-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-methoxythiofenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-fenylsulfmyl-5alfa-androstan.

3-oxo—4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-fenylsulfonyl-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-(4-trifluormethylfenox>)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza—4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-hydroxy-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7beta, 16alfa-trimethyl-l 6beta-methoxy-5alfa-androstan, a farmaceuticky přijatelné soli těchto látek.

9. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 7, obecného vzorce I, kde meziuhlíková vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1 a 2 je jednoduchá vazba, R¹ znamená methyl, R² znamená methyl, R³ znamená nesubstituovanou nebo substituovanou aryloxyskupinu, kde substituenty se volí ze skupin x)), xi)) a xii)) z nároku 7 a R⁴ znamená atom vodíku.

10. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1, ze skupiny

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-kyanofenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-~4,7-beta-dimethyl-16beta-(3-kyanofenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-nitrofenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-l 6beta-( l-naftyloxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(3-chlor-4-methylfenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-methylfenoxy)-5alfa-androstan,

3-ΟΧΟ-4—aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethylfenoxy}-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-trifluormethoxyfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-methylsulfonylfenoxy)-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-/4-(4-tolylsulfonylamino)fenoxy/-5alfa-androstan, 3-oxo-4-aza—4,7-beta-dimethyl-16beta-/(4—fenyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

-70CZ 292614 B6

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-fluorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-/4-(5-oxazolyl)fenoxy/-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethy 1-16beta-/4-( 1 -pyrroly l)fenoxy/-5 alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-aminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-acetylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-benzoylaminofenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(fenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(2-chlorfenoxy)-5alfa-androstan,

3-oxo-4-aza-4,7-beta-dimethyl-16beta-(3-chlorfenoxy)-5alfa-androstan, a farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin.

11. 16-Substituovaný-4-azaandrostanový derivát podle nároku 1, 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

12. 16-Substituované—4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I pro použití při inhibici 5-alfa-reduktázy nebo izoenzymů.

13. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1 podle nároku 1, pro použití při léčení akné vulgaris, plešatosti mužského typu, zvýšeného ochlupení u žen, benigní hyperplasie prostaty, prostatitidy a zhoubných nádorů prostaty.

14. 16-Substituované-4-azaandrostanové deriváty podle nároku 1 pro použití při léčení plešatosti mužského typu.

15. 16-Substituovaný—4-azaandrostanový derivát podle nároku 1, kterým je 3-oxo-4-aza-4,7beta-dimethyl-16beta-4-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl pro použití při léčení akné vulgaris, plešatosti mužského typu, zvýšeného ochlupení u žen, benigní hyperplasie prostaty, prostatitidy a zhoubných nádorů prostaty.

16. 16-Substituované—4-azaandrostanové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití při léčení benigní hyperplasie prostaty, prostatitidy a zhoubných nádorů prostaty.

17. Farmaceutický prostředek pro léčení akné vulgaris, plešatosti mužského typu, zvýšeného ochlupení u žen, benigní hyperplasie prostaty, prostatytidu a zhoubných nádorů prostaty, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje 16-substituované-4—azaandrostanové deriváty obecného vzorce I podle nároku 1.

18. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že dále obsahuje účinné množství inhibitoru 5alfa-reduktázy 2 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

19. Farmaceutický prostředek podle nároku 18, vyznačující se tím, že jako inhibitor 5-alfa-reduktázy obsahuje fínasterid, epristerid nebo turosterid.

-71 CZ 292614 B6

20. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že jako 16substituovaný-4-azaandrostanový derivát obecného vzorce I podle nároku 1 obsahuje 3-oxo-4aza-4,7beta-dimethyl-16-beta-(4-chlorfenoxy)-5alfa-androstan nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

21. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že dále obsahuje látku, otevírající draslíkové kanály nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl.

22. Farmaceutický prostředek podle nároku 21, vyznačující se tím, že jako látku, ío otevírající draslíkové kanály obsahuje minoxidil nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

23. Farmaceutický prostředek podle nároku 21, vy z n a č uj í c í se t í m, že dále obsahuje nosič, vhodný pro místní podání.

15

24. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že dále obsahuje retinoid nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

25. Farmaceutický prostředek podle nároku 24, vy zn ač u j í cí se t í m , že jako retinoid obsahuje tretinoin, izotretinoin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.

26. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vyznačující se tím, že dále obsahuje látku s antiandrogenním účinkem nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl.

27. Farmaceutický prostředek podle nároku 26, vyznačující se tím, že jako látku 25 s antiandrogenním účinkem obsahuje flutamid, spironolakton, kasodex nebo farmaceuticky přijatelnou sůl těchto látek.