CZ291785B6 - Adenosinový derivát a jeho použití a farmaceutická kompozice s jeho obsahem - Google Patents

Abstract

Adenosinov deriv ty obecn ho vzorce I, jejich pou it pro l en kardiovaskul rn ch onemocn n , pro zm rn n ischemick ho poÜkozen nebo zmenÜen velikosti myokardi ln ho infarktu v d sledku myokardi ln ischemie, pro sn en hladiny lipid , triglycerid nebo cholesterolu u savc a pro l en kardiovaskul rn ho onemocn n nesouc ho stopy hypertenze nebo myokardi ln ischemie, zmenÜen velikosti myokardi ln ho infarktu v d sledku myokardi ln ischemie nebo pro sn en hladiny lipid , triglycerid nebo cholesterolu u savc . Pou it t chto slou enin pro v²robu l iva proti v²Üe uveden²m onemocn n m. Zp sob p° pravy uveden²ch slou enin.\

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká adenosinových derivátů, farmaceutických kompozic obsahujících takové deriváty, jejich použití pro léčení kardiovaskulárních onemocnění charakterizovaných hypertenzí nebo myokardiální ischemií, pro zlepšení ischemického poškození nebo zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců a pro léčení kardiovaskulárního onemocnění nesoucího stopy hypertenze nebo myokardiální ischemie, zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie nebo pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců. Vynález se týká také použití adenosinových derivátů pro výrobu léku pro léčení pacienta trpícího myokardiální ischemií, pro výrobu léku pro léčení pacienta trpícího hyperlipidemií nebo hypercholeterolemií a pro léčení zmírnění ischemického poškození u pacienta, u pacienta trpícího ischemických poškozením nebo pro zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie u pacienta, který je takto postižen. Uvádějí se zde také způsoby a meziprodukty, které jsou používány pro přípravu uvedených derivátů.

Dosavadní stav techniky

Hypertenze, tedy stav zvýšeného krevního tlaku, zasahuje značnou část lidské populace. Důsledky trvající hypertenze se projeví vaskulámím poškozením očního, ledvinového, srdečního a mozkového systému a riziko těchto komplikací se zvyšuje, jak se zvyšuje krevní tlak. Základními faktory, řídícími krevní tlak, je průtokem srdcem a periferální vaskulámí rezistence, přičemž tato rezistence je predominantním obecným mechanismem, který je ovlivňován různými vlivy. Sympatetický nervový systém reguluje periferální vaskulámí odolnost různými vlivy na a- a β-adrenergní receptory, jakož i nepřímými účinky na propustnost ledvin. Terapie za použití léčiv je zaměřena na specifické složky tohoto krevního tlakového systému z hlediska regulace, s různými mechanismy působení a vlivu, zahrnují diuretika, antagonisty β-adrenergních receptorů (β-blokátorů), inhibitory enzymů konvertujících angiotensin a antagonisty vápníkových kanálků.

Diuretika typu thiazidů jsou používána při hypertenzi k redukování vaskulámí rezistence, a to vlivem na vylučování sodíku a vody. Do této skupiny patří hydrochlorothiazid, chlorothiazid, methyclothiazid a cyklothiazid, jakož i podobné, v tomto směsu účinné látky: indapamid, metolazon, a chlorthalidon. Ačkoliv zde bylo míněno, že vlivem β-blokujícího mechanizmu dochází k blokování podtypů β-adrenergických receptorů v srdci za snížení rychlosti typu srdce a kardiálního průtoku, novější β-blokující látky s vnitřní sympatomimetickou účinností (ISA, intrinsic sympathomimetic a activity), čítaje v to pindolol, acetobutolol, penbutolol a certelol, jsou účinné jako nikoli-ISA-p-blokující látky, a způsobují méně redukovanou rychlost srdečních tepů a průtok srdcem. Dalším žádoucím mechanizmem na tyto léky je inhibování průtoku ledvinami, centrální efekt, jakož i efekt na pre-synaptické β-adrenergické receptoiy s projevem inhibování norepinefrinového uvolnění.

Kardioselektivní β-blokující látky metoprolol (Lopressor-Geigy), acebutolol (Sectral-Wyeth) a atenolol (Tenormin-ICI) mají za nízkých dávek větší účinek na β-adrenergické receptory, než na subtypy β-2-adrenergických receptorů, rozmístěné v dýchacím a krevním systému. Neselektivní β-blokující látky působí na oba subtypy β-adrenergických receptorů, a sem patří propranolol (Inderal-Ayerst), timolol (Blocadren-Merck), nadolol (Corgard-Squibb), pindolol (Visken-Sandoz), penbutolol (Levaton-Hoechst-Roussel) a carteolol (Cartrol- Abbott). Opačný účinek β-blokujících látek zahrnuje asymptomatickou bradykardii, podstatné zhoršení možnosti kongrestivního srdečního selhání, poruchy gastrointestinálního traktu, zvýšené obtíže při dýchání,

-1 CZ 291785 B6 maskované symptomy hýpoglykaŠiie a deprese. Mohou způsobit zvýšení triglyceridů v séru a mohou snížit vysokou lipoproteinovou hladinu cholesterolu.

Inhibitory ACE se vyznačují prevencí tvorby angiotensinu Π a inhibují rozrušení bradykininu. Angiotensin Π je mohutným vasokonstriktorem a stimuluje rovněž vylučování aldosteronu. Tím, že dochází k blokování renin-angiotensin-aldosteronového systému, snižují tato činidla rezistenci periferálně-vaskulámí, jakož i zadržování sodíku a vody. Navíc dále Inhibitory ICE zvyšují hladiny bradykininu a prostaglandinů, endigenních vasodilátorů. Captopril (Capoten-Squibb) aEnalapril (Vasotec-Merck) jsou vedoucími ACE-inhibitoiy. Mezi nežádoucí účinky ACEinhibitorů patří vyrážka, nechutenství, proteinurie a neutropenie.

Antagonisté vápníkové cesty snižují přívod vápníku do buněk vaskulámího hladkého svalstva, výsledkem je systemická vasodilatace, která vyústí v antihypertenzní účinek. Další vlivy antagonistů vápníkové cesty zahrnují interferenci reakce angiotensinu Π a receptorů α-2-adrenergické blokády, což může přispět k odpovídajícím antihypertenzním účinkům. Antagonisté vápníkové cest nemají opačné metabolické a farmakologické účinky thiazidů nebo β-blokujících látek a mohou být proto použitelné pro pacienty, trpící diabetes, periferálním vaskulámím onemocněním nebo chronickým obatruktivním plicním onemocněním. Dva antagonisté vápníkové cesty, varapamin a diltiazem, mají vážné opačné kardiovaskulární účinky na astrioventrikulámí kondukci u pacientů s předcházejícími konduktivními abnormalitami, mohou zhoršit bradykardii, blokování srdce a kongestivní srdeční selhání. Další méně závažné účinky antagonistů vápníkové cesty zahrnují periferální edém, závratě, bolesti hlavy, pocit nevolnosti a zvracení, zvláště ve spojitosti s nifedipinem a nicardipinem.

Ke zvládnutí závažné hypertenze jsou dostupná četná další činidla. Sem patří prezosin a terazocin, antagonisté αι-adrenergického receptorů, jejichž antihypertenzní účinky jsou důsledkem vzniklé arteriální vasodilatace, dále klonidin, a₂-adrenergický agonista, působící centrálně, jakož i periferálně na inhibiční a₂-adrenergické receptory, to za snížení sympatetické odezvy. Mezi další centrálně působící látky patří melhyldopa, guanabenz a guanfacin; recerpin, který způsobuje ochuzení zásob katecholaminů; guanadrel, periferální adrenergický antagonista podobný guanethidinu s kratší dobou působení; dále přímo působící vasodilatory, jako je hydralazin a minoxidil. Tyto látky, byť účinné, jsou spojeny s pozoruhodnými symptomatickými postranními účinky, počítaje v to reflexní sympatetické stimulování a zadržování kapalin, orthostatickou hypotenzi a impotenci.

Četná antihypertenzní činidla aktivují kompenzační tlakový mechanizmus, jako je zvýšené uvolňování reninu, zvýšená sekrece aldosteronu a zvýšený sympatetický vasokonstriktorový stav, které jsou předurčeny k návratu arteriálního tlaku na hladinu před vlastní úpravou, to může vést k retenci soli a vody, edémům a posléze k toleranci vůči antihypertenzním účinkům podaných látek. Dále pak se zřetelem na různé postranní účinky, zaznamenané v souvislosti současného stavu antihypertenzních činidel a problému, které se v souvislosti s nimi objevily u speciálních tříd hypertenzních pacientů, kam patří přestárlí, černí a pacienti s chronickými onemocněními plic, cukrovkou nebo periferálními vaskulámími nesnázemi je zde třeba dalších látek pro léčení hypertenze.

Ischemie

Myokardiální ischemie je výsledkem nerovnováhy mezi přísunem myokardiálního kyslíku a jeho potřebou, a zahrnuje exercionální a vasoapastické myokardiální dysfunkce. Exercionální ischemie je obvykle připisována přítomnosti kritické arterosklerotické stenosy, což se týká silných koronárních arterií s výsledkem redukce suběndokardiálního toku. Vasospastická ischemie je spojena se spasmy různých ohnisek, což není v žádné spojitosti s námahou či stresovými situacemi. Spasmy je lépe definovat jako přerušení zvýšení vaskulámího stavu. Mechanizmus vasospasmové ischemie zahrnuje:

-2CZ 291785 B6 (i) zvýšení vaskulámího stavu v místě stenosy v důsledku uvolnění katecholaminu, (ii) přechodní intraluminální ucpání, a (iii) uvolnění vasoaktivních látek, tvořenými krevními destičkami v místě endotheliálních lesí.

Koronární cirkulace je jednotná, protože je spojena s perfusí organizmem, který generuje perfusní tlak pro veškerou cirkulaci. Takže zásah, jímž se změní stav periferální cirkulace a případné stažení bude mít značný vliv na koronární cirkulaci. Regulační složkou koronární vaskulatury 10 jsou malé koronární arterioly, jejíchž vnitřní průměr se může značně měnit. Změna vnitřního průměru je výsledkem buď vnitřní kontrakce vaskulámího hladkého svalstva (autoregulování), nebo extravaskulámího stlačení, což je důsledkem ventrikulámí kontrakce. Výsledkem terapie ischemických problémů je komplexní interakce protikladných faktorů, které určují přísun kyslíku a jeho spotřebu.

Srdeční ochrana a prevence ischemických potíží

Zásadním postojem moderní kardiologie je nalezení nových terapeutických činidel, schopných inhibovat rozsah poškození myokardu, tj. rozsah myokardiálního infarktu, což je následek akutní 20 ischemie myokardu.

Nástup trombolytické terapie (rozpuštění chuchvalečků) během posledního desetiletí je spojen se zjištěním, že včasný zásah během srdečního záchvatu může znamenat podstatné snížení poškození tkáně myokardu. Rozsáhlá klinická zjištění vedla tou dobou k uzávěrům, že trombolytická 25 terapie snižuje riziko vývoje rušivých jevů srdečního tepu a udržuje také schopnost srdce ve funkci čerpadla. Takové uchování normální funkce srdce silně snižuje na dlouho možnost úmrtí po infarktu.

Také byl zajímavý vývoj terapie s možností další ochrany myokardu, což by bylo možno kombi3Q novat s trombolytickou terapií, protože retrospektivní epidemilogické studie vedly ke zjištění, že úmrtnost během několika málo let po infarktu se zdá být ve vztahu k velikosti původního infarktu.

Při předklinických studiích infarktu, provedených na četných živočišných modelech, bylo 35 prokázáno, že četné typy farmakologicky účinných látek, jako jsou sloučeniny, blokující vápníkovou cestu, analoga prostacyklinu a látky, schopné inhibovat některé metabolické pochody, jsou schopné redukovat ischemické nesnáze na několika živočišných species.

V nejnovějších studiích bylo prokázáno, že je-li myokard vystaven na krátkou dobu ischemii 40 (přerušení toku krve do srdce) s následnou reperfuzí (obnovení krevního toku), je tím možno chránit srdce před následnými ischemickými nesnázemi, které by jinak následovaly po dalším působením ischemie po delší dobu. Tento jev byl označen jako myokardové předkondiciování a má se za to, že to lze částečně připravit uvolňování adenosinu během tohoto časového, výše zmíněného období.

Dalšími studiemi se zjistilo, že adenosin a jeho analoga snižují rozsah poškození tkáně, jako to lze pozorovat po přerušení toku krve do srdce při různých modelech ischemických nesnází na několika species, viz například Toombs C. a spol., „Myocardial protective effects of adenosine. Infarct size reduction with pretreeatment and continued receptor stimulation during ischemia“, 50 Circulation 86, 986-994 (1992), dále Thomton J. a spol., „Intravenous pretreatment with 2i-selective adenosine analogues protects the heart against infarction“, Circulation 85, 659-665 (1992), a Downey J., „Ischemie proconditioning - nature's own cardioprotective intervention“, Trends Cardiovasc.Med. 2, 170-176 (1992).

SlotiČěniny dle tohoto vynálezu napodobují předkondiciování myokardu, čímž zlepšují případné ischemické potíže nebo jsou schopny s redukcí velikosti infarktu myokardu v důsledku myokardiální ischemie a hodí se proto k použití jako kardioprotektivní činidla.

Antilipolysa

Hyperlipidemie a hypercholesterolemie jsou - jak známo - dvěma z hlavních rizikových faktorů pro aterosklerózu a koronární srdeční onemocnění, což je hlavní příčinou úmrtí a neschopnosti v západních zemích. Ačkoliv etiologie aterosklerózy je ovlivněna mnohými faktory, vývoj aterosklerózy a podmínek stavů, zahrnujících onemocnění koronárních arterií, periferální vaskulámí onemocnění a cerebrovaskulámí onemocnění jsou důsledkem omezeného průtoku krve, je ve spojitosti s abnormalitami s hladinou cholesterolu a lipidů v séru. Etiologie hypercholesterolemie a hyperlipidemie je primárně genetická, až zde mohou značně přispět další faktory, jako je přemíra pozřených nasycených tuků a cholesterolu.

Antilipolytická účinnost adenosinu a jeho analog plyne z aktivování Ai-receptorového subtypu, viz Lohse M.J. a spol., Recent Andences in Receptor Chemistry; Melchiore C. a gianella, vyd., Elsevier Science Publishiers B.V., Amsterdam 1988,107-121. Stimulování tohoto receptorového subtypu snižuje intercelulámí koncentraci cyklických AMP v adipocytech. Cyklický AMP je nutný ko-faktor pro enzymovou lipoproteinovou lipasu, která hydrolyticky štěpí triglyceridy na volné mastné kyseliny a glycerol v adipocytech, viz Egan J.J. a spol., Proč. Nati. Acac. Sci., 1992, 8357-8541. Podle toho redukce intracelulámí cyklické AMP z hlediska koncentrace v adipocytech snižuje aktivitu lipoproteinové lipasy a tedy tím i hydrolysu triglyceridů.

Zvýšený krevní tlak a zvýšený podíl lipidů v plazmě jsou dva známé rizikové faktory ve spojitosti s úmrtností v důsledku kardiovaskulárních onemocnění.

Pro pacienta, postiženého cukrovkou, je možnost mortality po kardiovaskulárním onemocnění podstatně vyšší riziko ve spojitosti s těmito faktory se dále zvyšuje, viz Bierman E.L., Arteriosclerosis and Trombosis, 1992, 647-656. Další údaje jsou vtom smyslu, že nadměrná lipolysa je charakteristikou diabetes závislé nikoli na insulinu a asi značně přispívá k rezistenci na insulin a hyperglykemii, viz Swislocki A.L., Horm. Metab. Res. 1993, 90-95.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu jako antihypertenzní a antilipolytická činidla jsou vhodné pro léčení a zlepšení rizikových faktorů jak vaskulámího, tak i metabolického, mají tedy obzvláštní cenu a použitelnost.

Tento vynález se týká skupiny analog adenosinu a jejich použitelnosti při léčení hypertenze, myokardové ischemie, dále se hodí jako činidla k ochraně srdce, zlepšující ischemické nesnáze nebo rozsah infarktu myokardu v důsledku ischemie myokardu, dále se hodí jako antilipolytická činidla, snižující hladinu lipidů v plazmě, hladinu triglyceridů v plazmě a rovněž se týká způsobu přípravy těchto sloučenin i meziproduktů při jejich přípravě.

Poslední vývoj na tomto úseku.

Adenosin se vyznačuje širokým rozsahem fyziologických a farmakologických účinků, čítaje v to význačné změny kardiovaskulárních a renálních funkcí. U zvířat i lidí způsobí intravenózní injekce adenosinového nukleotidu hypotenzi.

Fyziologické a farmakologické účinky adenosinu jsou zprostředkovány specifickými receptory, umístěnými na povrchu buněk. Byly identifikovány 4 subtypy adenosinových receptorů, označené Ai, A_2a, A₂b a A₃. Receptor Ai inhibuje tvorbu cAMP potlačením aktivity adenylatové cyklasy, zatím co stimulování A₂ receptorů se projeví zvýšením aktivity adenyíátové cyklasy a zvýšením intracelulámím cAMP. Zdá se, že každý receptor zprostředkovává specifické účinky adenosinu v různých tkáních. Tak například vaskulámí působení adenosinu se zdá být zprostřed

-4CZ 291785 B6 kovánó stimulování receptorů A₂, COŽ je podporováno pozitivním porovnáním mezi generováním cAMP a vasorelaxací izolovaného vaskulámího hladkého svalstva po působení adenosinu; stimulování kardiálních Αι-receptorů redukuje generování cAMP v srdci, což přispívá k negativním dromotropním, inotropním a chronotropním kardiálním účinkům. V důsledku toho, podobně jako je tomu v případě většiny vasodilátorů, podávání adenosinu není spojeno s reflexní tachykardií.

Adenosin se také vyznačuje patrným působením na renální funkci. Intrarenální infuze adenosinu způsobí přechodný pokles renálního krevního toku a zvyšuje renální vaskulámí rezistenci; s pokračujícími infúzemi adenosinu se renální krevní tok vrátí na kontrolovanou hladinu a renální vaskulámí rezistence se sníží. Počáteční renální vasokonstrikční odezvy adenosinu nejsou způsobeny přímo vasokonstrukčním působením nukleotidu, ale zahrnují interakce mezi adenosinem a renin-angiotensinovým systémem.

Adenosin je obecně pokládán za primární fyziologický mediator reaktin hyperemie a autoregulování koronárního uspořádání v odezvu na myokardiální ischemii. Bylo již oznámeno, že koronární endothelium obsahuje adnosin A₂ receptory vázané na adenylatovou cyklasu, která se aktivuje paralelně se zvýšením koronárního toku a že kardiomyocytové receptory jsou převážně subtypy adenosinu Ai a ve spojitosti s bradykardií. Podle toho je adenosin ve vztahu k jedinečnému mechanizmu ischemické léčby.

Kardiovaskulární odezvy na adenosin mají krátkou životnost v důsledku rychlého příjmu a metabolizmu endogenního nukleosidu. Na rozdíl od toho jsou analogy adenosinu podstatně odolnější při metabolickém odbourání a zjistilo se, že vyvolávají trvalé změny arteriálního tlaku a srdečního tepu.

Bylo synteticky připraveno několik silně účinných metabolicky stabilních analog adenosinu, které se vyznačují různými stupni selektivoty pro dva receptorové subtypy. Adenosinové agonisty, které obecně mají větší selektivitu pro Ai receptory ve srovnání s A₂ receptory, tedy cyklopentyladenosin (CPA) a R-fenylisopropyladenosin (R-PIA) jsou standardními adenosinovými agonisty, u kterých se jeví nápadná selektivita pro Aj receptor (poměr A₂/Ai = 780 a 106). Naopak N-5'-ethylkarboxamidoadenosin (NECA) je silným A₂ receptorovým agonistou (Ki 12 nM), ale má stejnou afinitu pro A] receptor (Ki -6,3 nM, poměr A₂/Ai = 1,87). Až dosud byl CV-1808 nej selektivnějším dostupným A₂ agonistou (A₂/Aj = 0,19), i když sloučenina je desetkrát méně účinná než NECA svou afinitou pro A₂ receptor. Při nedávném vývoji byly nalezeny novější sloučeniny, které jsou velmi účinnými a selektivními A₂ agonisty (Ki = 3 až 8 nM pro A_b poměr A₂/Ai = 0,027 až 0,042, viz Miiller C.E., a Scior T., Pharmaceutica Acta Helv. 68, 77 až 111 (1993)).

V literatuře bylo oznámeno, že různé N6-aryl- a N6-heteroarylalkyl-substituované adenosiny a substituované (2-amino a 2-hydroxy)adenosiny se vyznačují různými farmakologickými aktivitami včetně kardiální a cirkulační aktivity, viz například brit. pat. č. 1 123 245, něm. vyl. spisy č. 2 136 624, 2 059 922 a 2 514 284, jihoafr. pat. spis č. 67/7630, pat. spis US 4 501 735, EP publ. č. 0 139 358 (popisující N6-(geminální diarylsubstituované alkyl)-adenosiny), EP pat. spis. č. EP-A 0 305 643 (uvádějící, že N6-heterocyklicky substituované adenosinové deriváty projevují kardiální vasodilatační aktivitu), něm. vyl. spis č. 2 131 938 (popisující arylaheteroarylalkylhydrazinyladenosinové deriváty), něm. vyl. spis č. 2 151013 (popisující N6aryl- a heteroaryl-substituované adenosiny), něm. vyl. spis č. 2 205 002 (popisující adenosiny s N6-substituenty s obsahem přemosťujících cyklických struktur, vázajících N6-dusíkový atom na substituenty včetně thienylu), a jihoafr. pat. spis č. 68/5477 (popisující N6-indolyl-substituované 2-hydroxyacenosiny).

V EP publ. 0 378 518 a UK přihl. 2 226 027 jsou popisovány N⁶-alky 1-2'-O-alky laděno siny s antihypertenzní účinností, podle pat. spisu US 4 843 066 má N⁶-alkyl-2',3'-di-0-alkyladenosin a látky této skupiny použitelnost jako antihypertenzní činidlo také.

-5CZ 291785 B6

Amidy a estery adenosin-5'-(N-substituované)-karboxylové kyseliny, jakož i Nl-oxidy jsou popisovány jak koronární vasodilátory, viz Stein a spol., J. Med. Chem. 23', 313-319 (1980) J. Med. Chem. 19, 1180 (1976). Adenosin-5'-karboxamidy a odpovídající Nl-oxidy jsou popisovány jako jedy pro malá zvířata, viz pat. spis US 4 167 565.

Antilipolytickou účinnost adenosinu podle Dole V.P., J. Biol. Chem. 236, 3125-3130 (1961). Inhibování lipolysy působení (R)-N⁶-fenylisopropyladenosinu je diskutováno Westerman-em E. a spol., Adipose Tissue, Regulation and Metabolic Functions, vyd. Jeanrenaud B. a Hepp D., george Thieme, Stuttgart 47-54 (1970). Jako antilipolytika jsou popisovány analoga hřmeno- a disubstituovaných adenosinů, dále pak jako látky s antihypercholesterolemickým a antihyperlipemickým účinkem pat. spis US 3 787 391, 3 817 981, 3 838 147, 3 840 521, 3 835 035, 3 851 056, 3 880 829, 3 929 763, 3 929 764, 3 988 317 a 5 032 583.

N6-Substituované deriváty adenosinu a jejich analoga, použitelné látky při gastrointestinálních nesnázích, jsou v EP přihl. 0423 776 a 0423 777.

N-6-Heterocyklylové sloučeniny, odvozené od adenosinu a odpovídajících analog a jejich použití při léčbě hypertenze a myokardiální ischemie, dále jejich použití jako kardioprotektivní činidla, která zlepšují ischemické obtíže nebo rozsah myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, jejich použití jako antilipolytická činidla, která snižují hladinu plazmových lipidů, hladinu sérových triglyceridů a hladinu plazmového cholesterolu, jsou popisovány v US přihlášce 08/316 761 z 03.10. 1994 těchže autorů, jako tohoto textu („Notice of Allowance“ odeslána 26.03 1996).

VEP publ. č. 0 378 518 a UK pat. spisu č. 2 226 027 jsou popisovány N6-alkyl-2'-O-alkyladenosiny s antihypertenzní účinností. V pat. spisu US 4 843 066 je také uvedeno, že N6-alkyl2',3'-di-O-alkyIadenosiny jsou použitelné jako antihypertezní činidla.

Amidy a estery adenosin-5'-(N-substituované)karboxylové kyseliny, jakož i odpovídající Nloxidy jsou popisovány jako koronární vasodilátory, viz Stein a spol., J. Med. Chem. 23. 313 až 319 (1980) a J. Med. Chem. 19, 1180 (1976). Adenosin-5'-karboxamidy a odpovídající Nloxidy jsou popisovány jako jedy pro malá zvířata, viz pat. spis US 4 167 565.

Antilipolytickou účinnost adenosinu podle Dole V.P., J. Biol. Chem. 236 (12), 3125 až 3130 (1961). Inhibici lipolysy působením (R)-N6-fenylisopropyladenosinu uvádí Westermann E. a spol., Adipose Tissue, Regulation and Metabolic Functions, red. Jeanrenaud B. a Hepp D., vyd. george Thieme, Stuttgart 47-54 (1970). N6-mono- a disubstituované adenosinové analogy jsou uváděny jako látky s antilipolytickým, antihypercholesterolemickým a antihyperlipemickým účinkem, viz pat. spis US 3 787 391, 3 817 981, 3 838 147, 3 840 521, 3 835 035, 3 851 056, 3 880 829, 3 929 763, 3 929 764, 3 988 317 a 5 032 583.

N6-Substituované deriváty adenosinu a jejich analogy, použitelné při poruchách gastrointestinálních motility, jsou popsány v EP pat. spisech č. 0 423 776 a 0 423 777.

N6-Heterocyklylalkylové sloučeniny, odvozené od adenosinu a jeho analogů, a jejich použití při léčbě hypertenze a myokardiální ischemie, dále jejich použití jako kardioprotektivních činidel, která zlepšují ischemické poškození nebo rozsah myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, jejich použití jako antilipolytických činidel, která snižují hladinu lipisů v plazmě, hladinu triglyceridů v séru a hladinu cholesterolu v plazmě, jsou popisovány v pat. spisu US 5 561 134 a v dokumentu WO 95/28160.

-6CZ 291785 B6

Pát. spis US 5 364 862 podaný dne 2. října 1992, stejného nabyvatele patentu jako v přítomném případě, popisuje N6-heterocyklylové deriváty adenosinu a jeho analogy a jejich použití při léčení myokardiální ischemie a hypertenze.

Má se za to, že uváděná toxicita, CNS-vlastnosti a zvýšení tepu srdce spojené s analogy adenosinu přispěly k obtížím zabraňujícím vývoji komerčních adenosinových analogů jako antihypertenzních a antiischemických činidel. Tento vynález se vztahuje na skupinu metabolicky stabilních adenosinových analogů a jejich derivátů, které mají neočekávaně žádoucí farmakologické vlastnosti, to znamená, že jde o antihypertenzní, kardioprotektivní, antiischemické a antilipolytické látky s jedinečným terapeutickým profilem.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je adenosinový derivát obecného vzorce I

(I), ve kterém

K znamená dusík, N—>0 nebo skupinu CH,

Q znamená methylenovou skupinu nebo kyslík,

Ré znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, allylovou, 2-methylallylovou, 2-butenylovou skupinu nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku a

X znamená skupinu vzorce

kde dusíkový atom kruhu ve významu X je substituován Y,

E znamená kyslík nebo síru,

Y znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou fenylem nebo naftylem, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku šíibstituovanou substituovaný fenylem nebo naftylem, kde alespoň jeden substituent je vybrán ze souboru zahrnujícího alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, aminoskupinu, nitroskupinu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, kyanoskupinu, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, halogen, hydroxyskupinu, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, merkaptoskupinu, alkylmerkapto skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, trihalogenalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, karboxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části nebo karbamoylovou skupinu, čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou skupinu obsahující jeden nebo dva atomy vybrané ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, čtyř- až desetičlennou alespoň monosubstituovanou heterocyklylovou skupinu, obsahující jeden nebo dva atomy, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, kde substituenty jsou vybrány ze souboru zahrnujícího alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu a halogen, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou skupinou, obsahující jeden neb dva atomy, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, trihalogenmethylovou skupinu, hydroxyskupinu, merkapto skupinu, alkylmerkapto skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku a nitroskupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alespoň monosubstituovanou čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou skupinou, obsahující jeden nebo dva atomy, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, kde substituenty jsou vybrány ze souboru zahrnujícího alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu a halogen, nap znamená vzájemně nezávisle nulu, 1, 2 nebo 3 za předpokladu, že součet n + p činí nejméně 1,

T znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkyl-C=O skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkyl-C=S skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, halogen, karboxylovou skupinu, skupinu vzorce

nebo r₃o-ch₂,

Ri, R₂ a R₃ znamená vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku,

A znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 20 atomy uhlíku nebo OR',

B znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 20 atomy uhlíku nebo OR,

R' a R znamená vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou fenylem nebo naftylem, karbamoylovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, dialkylkarbamoylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkyl-C=O skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, fenyloxykarbonylovou nebo naftyloxykarbonylovou skupinu substituo

-8CZ 291785 B6 váné alkylovou skupinou š 1 &ž 20 atomy uhlíku v alkylové části, fenyloxykarbonylovou nebo nafityloxykarbonylovou skupinu, nebo pokud

A a B znamená OR' nebo OR,

R' a R mohou dohromady tvořit skupinu vzorce '''O''* a s

kde Rc znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, nebo skupinu vzorce

kde Ra a Re znamenají vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku nebo spolu s atomem uhlíku, na kterém jsou vázány, mohou tvořit 1,1-cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, N-oxid, hydrát nebo solvát.

Předmětem tohoto vynálezu je také farmaceutická kompozice pro léčení kardiovaskulárních onemocnění charakterizovaných hypertenzí nebo myokardiální ischemií, jejíž podstata spočívá vtom, že obsahuje antihypertenzně účinné množství nebo antiischemicky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a farmaceuticky vhodný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu dále je farmaceutická kompozice pro zlepšení ischemického poškození nebo zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje kardioprotektivní množství sloučeniny obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu také je farmaceutická kompozice pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců, jejíž podstata spočívá vtom, že obsahuje antilipolytické množství sloučeniny obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu rovněž je farmaceutická kompozice pro léčení kardiovaskulárního onemocnění nesoucího stopy hypertenze nebo mylkardiální ischemie, zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie nebo pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu také je použití sloučeniny obecného vzorce I pro výrobu léku pro léčení pacienta trpícího hypertenzí, pro výrobu léku pro léčení pacienta trpícího myokardiální ischemií, pro výrobu léku pro léčení pacienta trpícího hyperlipidemií nebo hypercholeterolemií a pro výrobu léku pro léčení ke zmírnění ischemického poškození u pacienta, u pacienta trpícího ischemickým poškozením nebo pro zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie u pacienta, který je takto postižen.

-9CZ 291785 B6

Dálé jé uveden podrobnější popiš tohoto vynálezu v širších souvislostech.

Jestliže jsou použity zde již výše a dále v popisu tohoto vynálezu dále uvedené termíny, pokud není jinak, má se jim rozumět, že mají tyto významy:

„Acyl“ znamená přímou nebo větvenou skupinu vzorce alkyl-C=O. „Thioacyl“ znamená přímou nebo větvenou skupinu vzorce alkyl-C=S. Výhodnými acylovými a thioacylovými skupinami jsou nižší alkanoylové a nižší thioalkanoylové skupiny s 1 až asi 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku.

„Alkyl“ znamená nasycenou alifatickou uhlovodíkovou skupinu, jež může být přímý nebo větvená a má asi 1 až asi 20 atomy uhlíku v řetězci. Výhodné alkylové skupiny mohou být přímé nebo větvené a obsahují v řetězci 1 až asi 10 atomů uhlíku. Větvením se míní, že nižší alkylová skupina, jako je methylová, ethylová nebo propylová skupina, je vázána na lineární alkylový řetězec.

„Nižší alkylová skupina“ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

„Cykloalkyl“ znamená alifatický kruh se 3 až asi 10 atomy uhlíku v kruhu. Výhodné cykloalkylové skupiny mají 4 až asi 7 uhlíkových atomů v kruhu.

„Karbamoyl“ znamená skupinu vzorce F^N-C^O. Alkylkarbamoyl a dialkylkarbamoyl mají dusíkový atom karbamoylu substituovaný 1 nebo alkylovými skupinami.

„Karboxyl“ znamená skupinu vzorce COOH.

„Alkoxy“ znamená alkyl-0 skupinu, kde alkyl má zde již výše uvedené významy s tím, že nižší alkoxylové skupiny jsou skupinami výhodnými a jako příklady lze uvést skupiny methoxylovou, ethoxylovou, n-propoxylovou, isopropoxylovou, a n-butoxylovou.

„Alkoxyalkylová skupina“ znamená alkylovou skupinu, jak byla výše popsána, substituovanou alkoxyskupinou, jak zde byla výše popsána.

,Alkoxykarbonylová skupina“ znamená skupinu alkoxy-C=0.

„Aralkyl“ znamená alkylovou skupinu, substituovanou arylovým zbytkem s tím, že aryl znamená fenyl nebo naftyl. „Substituovaná aralkylová“ nebo „substituovaná arylová“ skupina znamená že arylová skupina nebo arylová část aralkylové skupiny je substituovaná jednou či vícekráte substituenty, jako jsou skupiny alkylové, alkoxylové, aminoskupiny, nitroskupiny, skupiny karboxylové, karboalkoxylové, nitrilové, alkylaminoskupiny, halogeny, skupiny hydroxylové, hydroxyalkylové, merkaptylové, alkylmerkaptylové, trihalogenalkylové, karboxyalkylové nebo karbamoylové.

„Araloxykarbonylová skupina“ je skupina aralkyl-O-C=O.

„Aryloxykarbonylová skupina“ je skupina vzorce aryl-O-C=O.

„Karbalkoxylová skupina“ je karboxylovaná skupina, esterifikovaná alkoholem vzorce CJH^+iOH, kde N znamená celé kladné číslo od 1 do asi 6.

„Halogen“ znamená chlor, fluor, brom nebo jod.

„Heterocyklylová skupina“ je cyklická struktura se čtyřmi až deseti členy, kde jeden či více členů cyklu má jiný význam než uhlík, například znamená dusík, síru nebo kyslík. Heterocyklické skupiny mohou být aromatické či nearomatické, tedy mohou být nasycené, částečně nebo dokonale nenasycené.

-10CZ 291785 B6

Za výhodné heterocyklické skupiny je třeba pokládat tyto: pyridylovou, pyridazinylovou, pyrimidinylovou, isochinolinylovou, chinolinylovou, chinazolinylovou, imidazolylovou, pyrrolylovou, furanylovou, thienylovou, thiazolylovou, benzothiazolylovou, piperidinylovou, pyrrolidinylovou, tetrahydrofuranylovou, tetrahydropyranylovou a morfolinylovou.

„Substituovaná heterocyklylová skupina“ znamená heterocyklilovou skupinu, substituovanou jednou či vícekráte substituenty, jako jsou skupiny alkoxylové, alkylaminoskupiny, arylové, karbalkoxylové, karbamoylové, nitrilová, halogeny, heterocyklylové, trihalogenmethylové, hydroxylová, merkaptylová, alkylmerkaptylová a nitroskupina.

„Hydroxyalkylová skupina“ znamená alkylovou skupinu, substituovanou skupinou hydroxylovou. Nižší hydroxyalkylové skupiny lze označit za výhodnější a jako příklady možno uvést skupinu hydroxymethylovou, 2-hydroxyethylovou, 2-hydroxypropylovou a 3-hydroxypropylovou.

„Prodrug“ znamená látku jež může, ale také nemusí být sama aktivní, ale kterou lze změnit na biologicky aktivní chemickou látku, a to metabolicky, sulvolyticky nebo jinými fyziologickými postupy.

„Kardioprotekce“ znamená jev, kdy myokard je méně náchylný ischemickému poškození a myokardiálnímu infarktu v důsledku myokardiální ischemie.

„Zlepšení ischemických nesnází“ znamená prevenci nebo redukci ischemických nesnází v oblasti myokardu v důsledku myokardiální ischemie.

„Zlepšení rozsahu myokardiálního infarktu“ znamená buď redukci rozsahu myokardiálního infarktu, nebo prevenci myokardiálního infarktu jako následek myokardiální ischemie.

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují chirální (asymetrická) centra, vynález se týká individuálních stereoizomerů i jejich směsí. Individuální izomery se připravují nebo isolují použitím odborníkům známých postupů, nebo použitím postupů, popisovaných zde dále.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou použít ve formě volných bází, adičních solí kyselin nebo hydrátů. Všechny tyto formy spadají do rozsahu tohoto vynálezu. Použití adičních solí kyselin je jednodušší a vhodnější. V praxi to znamená, že použití soli bezprostředně zahrnuje použitelné množství ve formě báze. Kyseliny, které se dají použít při přípravě uvedených adičních solí, zahrnují hlavně ty, které při kombinaci s bázemi poskytují farmaceuticky přijatelné soli, to je takové, jejichž anionty nejsou toxické pro příjemce ve farmaceuticky podávaných dávkách, takže prospěšný účinek antihypertenzní, kardioprotektivní, antiischemický a antilipolytický, spojený s volnými bázemi, není rušen postraními účinky, připisovanými aniontu.

Ačkoliv farmaceuticky přijatelné soli sloučenin podle tohoto vynálezu lze označit za výhodné, jsou všechny adiční soli kyselin vhodné jako zdroj volných bází, i když ta či ona sůl jako taková je vhodná pouze jako meziprodukt, tedy například vznikla-li taková sůl jen pro účely čistění a identifikování, nebo je-li použita jako meziprodukt při přípravě farmaceuticky přijatelné soli postupem iontové výměny. Farmaceuticky přijatelné soli, spadající do rozsahu tohoto vynálezu, jsou odvozeny od těchto kyselin: z minerálních chlorovodíková, sírová, fosforečná a sulfamová, z organických octová, citrónová, mléčná, vinná, malonová, methansulfonová, fumarová, ethansulfonová, benzensulfonová, p-toluensulfonová, cyklohexansulfamová, chinová apod. Odpovídající adiční soli kyselin zahrnují tedy hydrochloridy, sírany, fosforečnany, sulfamáty, octany, soli kyseliny citrónová, mléčnany, vínany, methansulfonáty, fumaráty, ethansulfonáty, benzensulfonáty p-toluensulfonáty, cyklohexylsulfonáty a soli kyseliny chinové v tom kterém případě.

-11 CZ 291785 B6

Adičůí soli kyselin a sloučenin dlě tohoto vynálezu se běžně a pohodlně připravují rozpuštěním volné báze ve vodném či vodně-alkoholickém roztoku, či jiném vhodném roztoku, obsahujícím odpovídající kyselinu a izolováním soli odpařením roztoku, nebo reakci volné báze s kyselinou v organickém rozpouštědle, přičemž v tomto případě se sůl buď vyloučí samovolně, nebo se může získat odpařením roztoku.

Do rozsahu obecného vzorce I jsou zahrnuty skupiny sloučenin, které lze obecně charakterizovat jako N6-substituované adenosiny, N6-substituované karbocyklické adenosiny (nebo alternativně dihydroxy-(N6-substituované 9-adenyl)cyklopentany) a jejich N-oxidy, a dále N6-substituované Ν'-l-deazaaristeromyciny (nebo alternativně dihydroxy-(N7-substituované [4,5—bjimidazopyridyl)cyklopentany). Do rozsahu sloučenin obecného vzorce I spadají také 5'-alkylkarboxamidové deriváty adenosinů, karbocyklické adenosiny a 1-deazaaristeromyciny, deriváty sloučenin všech uvedených skupin, ve kterých jsou substituovány jedna nebo obě 2- nebo 3-hydroxyskupiny cyklopentanového kruhu, nebo v případech skupiny sloučenin cyklopentanového kruhu, nebo v případech skupiny hydroxyskupiny v polohách 2' nebo 3'. Takové deriváty mohou samy zahrnovat biologicky aktivní chemický celek, použitelný při léčení hypertenze nebo myokardiální ischemie, dále jako kardioprotektivní a antilipolytická činidla, nebo mohou působit jako prekurzoiy léčiva pro takové biologicky aktivní látky, které z nich vznikají za fyziologických podmínek.

Mezi výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu se zahrnuje adenosinový derivát obecného vzorce I, kde

K znamená dusík,

T znamená skupinu hydroxymethylovou nebo methoxymethylovou,

A a B znamená hydroxyskupiny,

X znamená skupinu vzorce

a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo farmaceuticky přijatelná sůl.

Reprezentativními sloučeninami výše uvedených výhodných sloučenin jsou (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridm-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol,

-12CZ 291785 B6 (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5 '-trifluormethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2H-( 1,2')-bipyridin-3-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-(fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4,diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-(l-pyridin-2-ylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]10 tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-4iydroxymethyl-2-[6-[l-(4-chlorfenyl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-methylpyridin-2-yI)pyrrolidin-3(S)-yIaniino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-thiofen-2-ylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-niethylmerkaptopyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-niethoxypyriinidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-yl20 amino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-chlorpyrnnidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3 R,4S, 5R)-5-hydroxymethy 1—2—[6—[ 1 -(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-2-methoxyniethyl-5-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pynOlidm-3(S)-ylammo]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxyniethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)piperidin-4-ylniino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-((3S)-pyTrolidin-3-yl-amino)purin-9-yl]]cyklopentan30 1,2-diol-dihydrochlorid, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxyniethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl] cyklopentan-1,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3R)-pyrrolidin-3-ylamino)purin-9-yl]cyklopentan1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxyinethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-540 hydroxymethylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-ylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(pyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol,

-13CZ 291785 B6 (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(chinolin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-S(S)-ylamino]purm-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4,5-bistrifluorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(fenyl)pynOlidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol,

4-[3(S)-[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-l-yl]benzonitril, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(isochinolin-l-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purm-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R}-3-[6-[l-(6-bromchinolin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-{4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlor-5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-

9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)-pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1R,2S,3R, 5R)-3-[6-[ l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(6-methoxypyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-cyklopentan-l ,2-diol, (1 R,2 S,3 R,5R)-3-[6-[ l-(4-chlorfeny l)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol,

-14CZ 291785 B6 (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyP3-[6-[l-(l-fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-(l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-l,2-diol nebo (lR,2S,3R,5R)-3-[6-(l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Mezi výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu se zahrnuje adenosinový derivát obecného vzorce I, kde

Q znamená methylenovou skupinu,

K znamená dusík,

T znamená seskupení vzorce

kde Ri znamená vodík a

R₂ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

A a B znamená hydroxyskupiny,

X znamená seskupení vzorce

a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, N-oxid, hydrát nebo solvát.

Reprezentativními sloučeninami výše uvedených výhodných sloučenin jsou ethylamid (lS,2R,3S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny, (lS)-methylpropylamid (lS,2R,3S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny a (1 R)-methylpropylamid (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[ 1 -(5 -trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

-15 CZ 291785 B6

Méži výhodné sloučeniny podlé tdhoto vynálezu se zahrnuje adenosinový derivát obecného vzorce I, kde

Q znamená methylenovou skupinu,

K znamená dusík,

T znamená skupinu hydroxymethylovou nebo methoxymethylovou

A a B znamená hydroxyskupiny,

X znamená seskupení vzorce

a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Reprezentativními sloučeninami výše uvedených výhodných sloučenin jsou (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)piperidin-4-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, dihydrochlorid (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3S)-pyrrolidm-3-ylamino)purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diolu, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridm-2-yl)pynOlidm-3(R)-ylamino]purin-9-yl] cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3R)-pyrrolidin-3-yl-amino)purin-9-yl]cyklopentan1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridm-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylammo]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(pyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R}-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(chinolin-3-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purm-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4—nitrofenyl)pyrrolidin-S(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol,

-16CZ 291785 B6 (lR,2Š,3R,5R)-3-[6-[l-(4,5-bistrifiuorpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(fenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol,

4-[3(S)-[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-l-yl]benzonitril, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(isochinolin-l-yl)pyrTolidin-3(S)-ylaniino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-bromchinolin-2-yl)pyrroIidin-3(S)-yIamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-chlorfenyl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chIor-5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yI]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2 S,3R, 5 R>—3—[ 6—[ 1 -(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(6-methoxypyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2 S,3R, 5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[ l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]-cyklopentan-l,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chIorfenyI)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(l-fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-(l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-l,2-diol nebo

- 17CZ 291785 B6 (lŘ,ÍŠ,3R,5R)-3-[6-(l-benzylpýrřčlidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Zvláště výhodnou takovou sloučeninou je (1 R,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyI-3-[6-[ l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyI-3-[6-[ l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Jinou zvláště výhodnou takovou sloučeninou je (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol nebo (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Reprezentativními sloučeninami podle tohoto vynálezu je

2-[(3S)-3-aminopyrrolidin- l-yl]-5-trifluormethylpyridin nebo

2-[(3 S)-3 -aminopyrrolidin-1 -yl]-4-trifluormethylpyridin.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu lze připravovat známými způsoby nebo ve shodě s reakčním sledem, jak je popisován dále. Výchozí látky používané pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu jsou známé nebo obchodně dostupné, nebo se dají připravovat známými postupy nebo podle specifických reakčních schémat zde popsaných.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde K znamená dusík, Q znamená kyslík a T znamená skupinu R3O-CH2, se dají připravit reakcí obchodně dostupného 6-chlorpurinribosidu s různými nesubstituovanými nebo alkylem, aralkylem, arylem, substituovaným arylem, heterocyklylem nebo substituovaným heterocyklylem substituovanými azacykloalkylaminy nebo jejich chráněnými deriváty (nadále označovány jako „vhodné výchozí aminy“), jak je na příkladech uvedeno dále.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde K znamená dusík, Q znamená kyslík a T znamená skupinu RiR₂N-C=O, se připravují podobně za použití produktu z reakčního schématu A. Při této reakci se působí na 6-chlorpurinribosid, jehož hydroxyskupiny v polohách 2' a 3' na ribosovém kruhu jsou chráněny, oxidačním činidlem, například Jonesovým činidlem, a získaná látka povahy kyselé se zpracuje buď s dicyklohexylkarbodiimidem (DCC), nebo s benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfátem (BOP-C1) za přítomnosti zvoleného aminu, čímž se dostane 5-alkylkarboxamidový derivát.

-18CZ 291785 B6

Reakční schéma A

P = chránící skupina

DCC = dicyklohexylkarbodiimid

Vhodné výchozí látky pro sloučeniny obecného vzorce I, kde K znamená dusík, Q znamená methylenovou skupinu a T znamená skupinu vzorce RiR₂N-C=O, se mohou připravovat jak to popsal Chen a spol., Tetrahedron Letters 30, 5543 až 5546 (1989). Jinak se může pro přípravu takových výchozích látek použít reakční schéma B. Při postupu podle reakčního schématu B se působí na 4-ethylkarboxamidový derivát 2,3-dihydroxycyklopentylaminu, připraveného jak to popsal Chen a spol., 3-amino-2,4-dichlorpyrimidinem. Produkt této počáteční reakce se potom zahřívá s aldehydylamidino-acetátem, například acetátem formamidinu v dioxanu a methoxyethanolu po dobu dostačující k uzavření cyklu (asi 30 minut až asi 4 hodiny), čímž se získá produkt, na který se pak obvykle působí vhodným výchozím aminem postupem, jak je dále popsáno, a tím se získá sloučenina podle tohoto vynálezu. Pořadí použitých reakcí rozhodující není. Tak například na meziprodukt, vzniklý podle reakčního schématu B, se působí vhodným aminem a následující cyklizací se dospěje k požadovanému konečnému produktu.

Reakční schéma B

-19CZ 291785 B6

Různé aminy, použitelné při přípravě takových sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou připravit za použití známých postupů, nebo postupů, popisovaných zde dále.

Diastereomemí směsi sloučenin nebo meziproduktů použitelných při přípravě těchto sloučenin, se mohou dělit na jednotlivé racemické nebo opticky aktivní enantiomery způsoby známými v oboru, například chromatograficky, frakční destilací nebo frakční krystalizací solí s kyselinou D- nebo L-vinnou, dibenzoylvinnou, mandlovou nebo kafrsulfonovou.

N6-Substituované adenosiny nebo karbocyklické adenosiny podle tohoto vynálezu se dají připravit reakcí 6-chlorpurinribosidu nebo produktů podle reakčních schémat A nebo B za použití vhodných výchozích aminů, jako je příkladně doloženo v reakčním schématu C.

Reakční schéma C

kde X' a Y' jsou X a Y, jak byla definovány zde výše nebo jsou jejich chráněné deriváty.

N6-Substituované N'-alkyldeazaaristeromyciny podle tohoto vynálezu se dají připravit jak je ukázáno v reakčním schématu D.

Reakční schéma D

1) Pd/c, h₂ nebo SnCl₂

2) forinaraidin-acetát

3) odstranění chrániči skupiny

-20CZ 291785 B6

Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mohou působit jako prekurzory léčiva, zahrnují takové sloučeniny, kde hydroxyskupiny ribosy nebo cyklopentanového kruhu jsou substituovány skupinami R' a R, jak jsou definovány u obecného vzorce I výše. Ty mohou být připraveny známými postupy a jsou uvedeny příkladně na přípravách ukázaných v reakčním schématu E 5 dále.

Reakční schéma E

Zpracování dihydroxysloučeniny s esterem kyseliny chlormravenčí za přítomnosti organické báze, například triethylaminu, poskytne odpovídající bis-karbonát. Alkoxymethylenacetal se může připravit reakcí s odpovídajícím orthoesterem za přítomnosti katalytického množství kyseliny p-toluensulfonové. Karbonát je dostupný zpracováním s l,l'-karbonyldiimidazolem 15 a podobně thiokarbonát je dostupný zpracováním s thiokarbonyldiimidazolem. Alkyl- a dialkylkarbamoylové deriváty se dají získat reakcí s odpovídajícím alkylisokyanatanem nebo dialkylkarbamoylchlorídem za přítomnosti organické báze.

-21 CZ 291785 B6 ► Sloučeniny podle tohoto vynálezu, kde K znamená N->0, například N-oxidy, se mohou připravovat oxidací odpovídajícího adenosinu nebo karocyklického adenosinu za použití známých postupů, například reakcí s peroxidem vodíku v kyseliny octové.

2'-O-Alkylderiváty se dají připravit známými postupy, například reakcí vhodného výchozího aminu s 6-chlor-9-(2'-O-methyl-b-D-ribofuranosyl)-9H-purinem.

Funkční skupiny výchozích sloučenin a meziproduktů, které se používají pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu, mohou být chráněny běžnými chránícími skupinami známými v oboru. 10 Běžné chránicí skupiny pro aminové a hydroxylové funkční skupiny popisuje například Greene T.W., „Protective Groups in Organic Chemistry“, Wiley, New York (1984).

Hydroxyskupiny mohou být chráněny jako estery, jako jsou acylové deriváty, nebo formou etherů. Hydroxyskupiny na sousedících atomech uhlíku lze výhodně chránit formou ketalů nebo 15 acetalů. V praxi se hydroxyskupiny v polohách 2' a 3' výchozích sloučenin ve schématech A a B běžně chrání tvorbou 2',3'-isopropylidenových derivátů. Volné hydroxyskupiny lze například opět dostat hydrolýzou v kyselém prostředí nebo jinou solvolýzou nebo hydrogenolytickými reakcemi, běžně používanými v organické chemii.

Po syntetické přípravě se sloučeniny podle tohoto vynálezu obvykle čistí kapalinovou chromatografií za středního tlaku (MPLC) na chromatotronu, radiálně zrychlenou chromatografií na tenké vrstvě, velmi rychlou chromatografií nebo sloupcovou chromatografií na silikagelu nebo florisilové matrici s následující kiystalizací. Pro sloučeniny obecného vzorce I, kde K znamená dusí, Q znamená kyslík a T znamená skupinu vzorce R3O-CH2, zahrnují běžné rozpouštědlové 25 systémy kombinace chloroform:methanol, ethylester kyseliny octové:hexan a methylenchloridzmethanol. Eluáty je možno krystalovat z methanolu, ethanolu, ethylesteru kyseliny octové, hexanu, chloroformu atd.

Pro sloučeniny vzorce I, kde K znamená dusík, Q znamená kyslík a T znamená skupinu 30 RjRjN-OO je typickou rozpouštědlovou soustavou směs chloroformrmethanol. Krystalické podíly z eluování lze krystalovat ještě z 50% až 100% ethanolu, v případě zředění vodného.

Pro sloučeniny vzorce I, kde Q znamená methylenovou skupinu, K znamená dusík nebo skupinu CH a T znamená R1R2N-OO patří mezi typická rozpouštědla sestava methylenchloridimetha35 nol. Eluáty lze krystalovat z ethylesteru kyseliny octové, případě za přidání methanolu, ethanolu nebo hexanu.

Sloučeniny, vyžadující neutralizaci, lze neutralizovat mírnou bází, jako je hydrogenuhličitan sodný s následným promytím methylenchloridem a solankou. Produkty, které se čistí ve formě 40 oleje, se často triturují se směsí hexanu a ethanolu před konečným krystalováním.

Způsob podle tohoto vynálezu bude nyní blíže doložen a vysvětlen formou připojených příkladů.

-22CZ 291785 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava 5'-N-ethyl-2',3'-isopropyliden-N⁶-chloradenosin-5'-uronamidu ίο Stupeň 1: N⁶-Chlor-2',3'-isopropylidenadenosin

V prostředí 600 ml acetonu se míchá 2 hodiny (RT) směs 31,5 g 6-chlorpurinribosidu, 73 ml triethylesteru kyseliny orthomravenčí a 19,8 g kyseliny p-toluensulfonové. Po zahuštění reakční směsi ve vakuu se zbytek rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahuštěním filtrátu se získá ve formě bílé pevné látky l^-chlor^'^-isopropylidenadenosin.

Stupeň 2: Kyselina H⁶-chlor-2',3'-isopropylidenadenosin-5'-karboxylová

V prostředí acetonitrilu se smíchá 4,5 g (13,8 mmol) N⁶-chlor-2',3'-isopropylidenadenosinu a 0,0381 g (0,14 mmol) 4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidinyloxybenzoátu, do reakční směsi se přidá 5% roztok hydrogenuhličitanu sodného (87 %) a po částech za teploty 0 až 5 °C se vnáší 10,41 g (55,1 mmol) hydrátu bromitanu sodného. Teplota reakční směsi se nechá vystoupit na

20 °C, roztok se energicky míchá asi 3 hodiny, přidá se 10% roztok kyseliny vinné, vodný podíl se oddělí a extrahuje třikrát do ethylesteru kyseliny octové. Spojený organický roztok se promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, a to třikrát. Alkalické roztoky se spojí, vše se okyselí přidáním konc. kyseliny chlorovodíkové na pH 3 a vodný podíl se extrahuje třikrát do ethylesteru kyseliny octové. Organický podíl se spojí, vše se extrahuje solankou, vysuší se bezvodým 30 síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá bílá pevné amorfní látka, která se třikrát odpaří po přidání vždy toluenu, načež se sušením ve vakuu získá takto kyselina N⁶-chlor2',3'-isopropylidenadenosin-5'-karboxylová.

Stupeň 3: 5'-N-Ethyl-2',3'-isopropyliden-N⁶-chloradenosin-5'-uronamid

N*-Chlor-2',3'-isopropylidenadenosin-5'-karboxylová kyseliny v množství 4,4 g (12,9 mmol), 1,64 ml triethylaminu, 1,28 ml (11,7 mmol) isopropenylesteru kyseliny chlormravenčí se v prostředí 50 ml methylenchloridu po smíchání při -10 °C míchá asi 2 minuty. Do reakční směsi 40 se přidá 0,77 ml (11,7 mmol) ethylaxninu, v míchání se pokračuje minutu a reakční směs se dále roztřepává mezi methylenchlorid a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Spojené vodné podíly se protřepají třikrát s methylenchloridem, spojené organické roztoky se promyjí solankou, suší bezvodým síranem sodným a po filtraci se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá zbytek, který se čistí bleskovou chromatografii na silikagelu za eluování směsí 3% methanolu v chloroformu 45 a získá se tak 5'-N-ethyl-2',3'-isopropyliden-N⁶-chloradenosin-5'-uronamid.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃) d 8,75 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 6,20 (d, 1H), 5,50 (dd, 2H), 4,73 (d, 1H), 3,01 (m, 2H), 1,63 (s, 1H), 1,41 (s, 3H), 0,77 (t, 3H).

-23CZ 291785 B6

Příklad 2

Příprava isopropylamidu kyseliny (lS,2R,3S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)-pyrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové

Stupeň 1

V 16 ml isopropylaminu se rozpustí 15,5 g (54,6 mmol) N-BOC-5,6-dimethylendioxy-2-azabi10 cyklo[2,2,l]heptan-3-onu vzorce (i) (příprava viz stupeň 6 příkladu 3, uvedeno zde dále) a reakční směs se míchá asi 2 hodiny za teploty místnosti. Směs se odpaří ve vakuu a odparek se azeotropicky destiluje s chloroformem k získání bílé pevné látky. Ta se rozpustí v 250 ml ethylesteru kyseliny octové, roztok se ochladí na 0 °C a za chlazení se tímto roztokem probublává asi 15 minut plynný chlorovodík. Za teploty místnosti se roztok potom míchá 4 hodiny, odpaří se ve 15 vakuu, odparek se azeotropicky destiluje s methanolem, potom chloroformem a tak se získá amin ve formě soli s kyselinou chlorovodíkovou. Tato sůl se roztřepává mezi chloroform a roztok hydrogenuhličitanu sodného, vysuší, filtruje a přidá se 1 ekvivalent kyseliny benzoové. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, odparek se trituruje s etherem a očekávaný amin vzorce (ii) zde znázorněný výše se izoluje ve formě soli s kyselinou benzoovou, teplota tání 183 až 184 °C.

-24CZ 291785 B6

Stupeň 2

Příprava sloučeniny vzorce (iii)

Ve 110 ml n-butanolu se rozpustí 54 mmol produktu vzorce (ii) z příkladu 2, stupeň 1, přidá se 9,7 g 5-amino-4,6-dichlorpyrimidinu, potom 23 ml triethylaminu a reakční směs se zahřívá 18 hodin do varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení se směs zředí chloroformem a nasyceným roztokem chloridu amonného. Vodná vrstva se extrahuje třikrát chloroformem, potom dvakrát směsí 10% isopropylalkoholu v chloroformu. Organické vrstvy se spojí, vysuší bezvodým síranem sodným, filtrují a odpaří na olej vzorce (iii), který se použije bez jakéhokoli dalšího čištění v dalším stupni.

Stupeň (3)

Příprava sloučeniny vzorce (iv)

Produkt vzorce (iii) z příkladu 2, stupeň 2 zde uvedeného výše se rozpustí v 150 ml n-buty testeru kyseliny octové a přidá se 11,2 g formamidin-acetátu. Reakční směs se vyhřívá pod argonem asi 9 hodin do varu pod zpětným chladičem s přidáním tří dávek po 5,56 g formamidin-acetátu za 2,4 a 6 hodin. Po ochlazení se reakční směs zředí ethylesterem kyseliny octové, roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vodou, znovu roztokem chloridu sodného a vysuší se bezvodým síranem sodným. Odpařením ve vakuu se získá odparek, který se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 40 až 80% ethylesterem kyseliny octové v hexanu. Tím se získá chlorpurinový produkt vzorce (iv) znázorněný výše.

-25CZ 291785 B6

Stupeň 4

Příprava sloučeniny vzorce (v)

Ve 3 ml ethanolu se rozpustí 400 mg (1,05 mmol) produktu vzorce (iv) z příkladu 2, stupeň (3) uvedeného zde výše, 0,22 ml (1,57 mmol) triethylaminu a 270 mg (1,16 mmol) 2-[(3S)-3aminopyrrolidin-l-yl]-4-trifluormethylpyridinu, připraveného podle příkladu 3, stupeň 1 až 5 zde uvedeného dále. Reakční roztok se zahřívá pod argonem asi 20 hodin do varu pod zpětným ío chladičem. Směs se odpaří ve vakuu a odparek se rozdělí mezi chloroform a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát do chloroformu a spojený chloroformový roztok se po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí za nanesení vzorku ve směsi methylenchloridu a ethylesteru kyseliny octové (1:1) a seluováním 0 až 3% methanolem v ethylesteru kyseliny 15 octové. Získá se tak výše uvedený produkt vzorce (v).

Stupeň 5

Produkt příkladu 2, stupeň 4 uvedeného zde výše, se rozpustí v 2 ml směsi methanolu a tetrahydrofuranu (1:1), přidají se 3,3 ml 1,5 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a roztok se potom míchá asi 20 hodin za teploty místnosti. Reakční směs se odpaří ve vakuu a takto získaný odparek se vyjme 10 ml směsi 15% isopropylalkoholu v chloroformu, 1 ml IN roztoku hydroxidu sodného a 9 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje čtyřikrát vždy do 5 ml směsi 15% isopropylalkoholu v chloroformu. Spojená organická vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje, odpaří ve vakuu a tak se získá isopropylamid kyseliny (1 S,2R,3S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[ l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové, teplota tání 227 až 228 °C.

-26CZ 291785 B6

Příklad 3

Příprava (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin- (S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diolu

Stupeň 1

Ve 250 ml toluenu se rozpustí 20 g (232 mmol) (3S)-(-)-3-aminopyrrolidinu a 26 ml (255 mmol, 1,1 ekv.) benzaldehydu a reakční směs se zahřívá do varu pod zpětným chladičem asi 4,5 hodiny za použití Dean-Starkova nástavce. Směs se ochladí na 0 °C a k reakční směsi se přidá 55,7 g (255,2 mmol, 1,1 ekv.) di-terc.-butylkarbonátu a reakční směs se míchá za teploty místnosti, odpaří se ve vakuu a odparek se rozmíchá s roztokem hydrogensíranu draselného, následuje trojí extrakce do etheru. Vodná vrstva se alkalizuje a potom extrahuje chloroformem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a filtrát se odpaří ve vakuu k získání Nl-BOC-(3S)-(-)-3-aminopyrrolidinu.

Stupeň 2

34,25 g (183,9 mmol) produktu z příkladu 3, stupeň 1 zde uvedeného výše se rozpustí ve 200 ml methylenchloridu a přidá se 25 ml (183,9 mmol, 1 ekv.) triethylaminu. Pod dusíkem se přidá 34,7 ml (367,8 mmol, 2 ekv.) anhydridu kyseliny octové, reakční směs se míchá za teploty místnosti a roztřepává mezi roztok hydrogenuhličitanu sodného a methylenchlorid. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu. Produkt se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 2 až 8% methanolem v methylendichloridu za vzniku NI-BOC-(3S)-(-)-3-acetylaminopyrrolidinu.

Stupeň 3

Ve 400 ml methylendichloridu se rozpustí 39,2 g (171,7 mmol) produktu z příkladu 3, stupeň 2 zde popsaného výše a za chlazení na 0 °C se pod dusíkem přikapává 26,46 ml (343,4 mmol, 2 ekv.) kyseliny trifluoroctové (TFA). Reakční směs se vyhřeje do varu pod zpětným chladičem, přidá se znovu 26 ml a potom ještě 10 ml kyseliny trifluoroctové, vše se zahřívá do varu pod zpětným chladičem 3 hodiny, načež se použitá kyseliny trifluoroctová vydestiluje za vysokého vakua. Odparek se rozmíchá s alkalickou pryskyřicí Amberlite IRA-400 (dále též „alkalická pryskyřice“), po filtraci se filtrát zředí methanolem a filtruje se pomalu uvedenou alkalickou pryskyřicí. Filtrát se odpaří k získání (3S)-(-)-3-acetylaminopyrrolidinu.

-27CZ 291785 B6

Stupeň 4

V 50 ml ethanolu se smíchají 4 g (31,2 mmol) produktu z příkladu 3, stupeň 3 zde uvedeného výše a 5,19 g (40,6 mmol) 2-chlor-5-trifluormethylpyridinu a přidá se 13 ml (93,6 mmol, 3 ekv.) triethylaminu. Reakční směs zahřívá asi 18 hodin do varu pod zpětným chladičem, odpaří se ve vakuu a odparek se rozdělí mezi methylendichlorid a roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje, odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 2 až 5% methanolem v methylendichloridu. Jako pevná látka se dostane 2-[(3S)-3-acetylaminopyrrolidin-l-yl]-5-trifluormethylpyridin.

Stupeň 5

7,52 g (27,5 mmol) produktu z příkladu 3, stupeň 4 uvedeného zde výše se uvede do styku se 75 ml 6N vodné kyseliny chlorovodíkové a směs se zahřívá asi 18 hodin do varu pod zpětným chladičem. Potom se reakční směs ochladí na teplotu místnosti, neutralizuje se přidáváním pevného hydrogenuhličitanu sodného a rozdělí mezi zředěný roztok hydroxidu sodného a methylendichlorid. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje a odpařením filtrátu ve vakuu se získá 2-[(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yl]-5trifluonnethylpyridin.

Stupeň 6

V methylendichloridu se uvede do styku 22,5 g (0,123 mol) (-)-5,6-dimethyIendioxy-2-azabicyklo[2.2.1]heptan-3-onu vzorce (vi), 1,5 g 4-dimethylaminopyridinu (DMAP), 12,4 g triethylaminu a 37,5 g di-tórc-butyldikarbonátu a reakční směs se míchá za teploty místnosti asi 18 hodin. Reakční směs se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným, filtruje se, filtrát se odpaří ve vakuu a odparek krystaluje z isopropylalkoholu. Tak se dostane N-BOC-5,6dimethylendioxy-2-azabicyklo[2.2.1]heptan-3-on vzorce (i).

-28 CZ 291785 B6

Stupeň 7

Do 400 ml methanolu se vnese 35,6 g (0,125 mol) produktu vzorce (i) z příkladu 3, stupeň 6 uvedeného zde výše, a za prudkého míchání a chlazení pod argonem se přidá ve 3 rovných dávkách během asi 2 hodin celkem 23,8 g (0,63 mol) hydridu boritosodného. Směs se odpaří ve vakuu odparek se rozdělí mezi 200 ml vody a 300 ml ethylesteru kyseliny octové. Vodná vrstva se ještě dvakrát extrahuje ethylesterem kyseliny octové, spojený organický roztok se potom promyje vodou, roztokem chloridu sodného a vysuší se bezvodým síranem sodným. Odpařením filtrátu ve vakuu se dostane N-BOC-l-amino-2,3-dimethylendioxy-4-hydroxymethylcyklopentan vzorce (vii).

Stupeň 8

(vii) (vití)

Ve 150 ml benzenu se rozpustí 50 g produktu vzorce (vii) z příkladu 3, stupeň (7) uvedeného zde výše. Poté se přidá 8,8 ml methyljodidu a 33 g oxidu stříbrného a se reakční směs se zahřívá asi 18 hodin do varu pod zpětným chladičem. Během asi 6 hodin se přidává po částech dalších 25 g oxidu stříbrného a dalších 50 ml methyljodidu a reakční směs se potom zahřívá asi 18 hodin do varu pod zpětným chladičem, filtruje se přes rozsivkovou zeminu (Celit) a filtrační koláč se promyje ethylesterem kyseliny octové. Spojené filtráty se odpaří ve vakuu a odparek se krystaluje z hexanu k získání požadované methoxymethylové sloučeniny vzorce (viii) znázorněné výše.

-29CZ 291785 B6

Stupeň 9

Ve 250 ml horkého bezvodého ethylesteru kyseliny octové se rozpustí pod argonem 31,6 g produktu vzorce (viii) z příkladu 3, stupeň 8 uvedeného zde výše. Roztok se vychladí v ledové lázni a probublává se asi 6 minut plynným chlorovodíkem. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a po tříhodinovém míchání se reakční směs odpaří ve vakuu k získání hydrochloridu požadovaného aminu vzorce (ix) zde výše znázorněného.

Stupeň 10

Ve 100 ml n-butanolu se pod argonem smíchá 24,2 g produktu vzorce (ix) z příkladu 3, stupeň 9 uvedeného výše, a 42,8 g hydrogenuhličitanu sodného, a poté se přidá 20,1 g 5-amino-4,6-dichlorpyrimidinu. Reakční směs se zahřívá asi 20 hodin do varu pod zpětným chladičem a potom odpaří se ve vakuu. Odparek se rozdělí mezi ethylester kyseliny octové a vodu. Vrstva obsahující ethylester kyseliny octové se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve směsi 30 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu, prolije se velkou kolonou pro velmi iychlou chromatografií se silikagelovou náplní, kolona se promyje 50% ethylesterem kyseliny octové v hexanu a spojené filtráty se odpaří ve vakuu k získání požadovaného pyrimidylaminocyklopentanového produktu vzorce (xi), jak je uveden zde výše.

-30CZ 291785 B6

Stupeň 11

(xi)

Pod argonem se rozpustí ve 125 ml n-butylesteru kyseliny octové 26,7 g produktu vzorce (xi) z příkladu 3, stupeň 10, a po přidání 33,5 g formamidin-acetátu se reakční směs zahřívá asi 3 hodiny do varu pod zpětným chladičem, až se chromatografováním na tenké vrstvě zjistí, že reakce proběhla kompletně. Směs se ochladí, rozdělí mezi ethylester kyseliny octové a roztok chloridu sodného a vrstva obsahující ethylester kyseliny octové se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií s eluováním 30 až 50% ethylesterem kyseliny octové v hexanu k získání chlorpurinové sloučeniny vzorce (xii) zde uvedeného výše.

Stupeň 12

Příprava sloučeniny vzorce (xiii)

(xiii)

7,75 g (22,9 mmol) produktu vzorce (xii) z příkladu 3, stupeň 11 uvedeného zde výše a 6,35 g (27,4 mmol) 2-[(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yl]-5-trifluormethylpyridinu se uvede do styku se 20 ml ethanolu a přidá se 6,33 ml triethylaminu. Reakční směs se zahřívá v uzavřené nádobě asi 4 hodiny na 105 °C. Směs se potom ochladí, odpaří ve vakuu a odparek se rozdělí mezi

-31 CZ 291785 B6 • methylenchlorid a roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se, filtrát se odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 4% methanolem v methylenchloridu, získá se tak sloučenina uvedené struktury vzorce (xiii).

Stupeň 13 ml kyseliny trifluoroctové a 10 ml vody a uvede do styku s 10,81 g (20,3 mmol) sloučeniny ío vzorce (xiii) z příkladu 3, stupeň 12 uvedeného zde výše a směs se míchá za teploty místnosti asi minut. Za vysokého vakua se vydestiluje kyselina trifluoroctová a odparek se rozdělí mezi methylenchlorid a roztok hydrogenuhličitanu sodného. Methylenchloridový roztok se promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného a přidá se isopropylalkohol a organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát odpaří ve 15 vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 5 až 10% ethanolem v methylenchloridu. Vhodné frakce se jímají, odpaří a odparek krystaluje z acetonitrilu k získání (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diolu, teplota tání 166 až 168 °C.

Příklad 4

Příprava (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidm- (R)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diolu vzorce

Smíchá se 267 mg 2-[(3R)-3-aminopyrrolidin-l-yl]-5-trifluormethylpyridinu, 331 mg 6-chlorpurinribosidu, 233 mg tri- ethylaminu a 0,5 ml ethanolu, reakční směs se potom zahřívá v uzavřené nádobě asi 5 hodin na 100°C. Reakční směs se ochladí a rozdělí mezi methylendichlorid (za přidání malého množství isopropylalkoholu) a roztok hydrogenuhličitanu sodného. 30 Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, odpaří se a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 5% methanolem v methylenchloridu. Ve formě hemihydrátu se tak připraví (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2[6—[ l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3 (R)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4diol, teplota tání 166 až 170 °C.

-32CZ 291785 B6

Příklad 5

Příprava (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]5-hydroxymethylcyklopentan-l ,2-diolu vzorce

Stupeň 1

Ve 30 ml toluenu se smíchá 1,00 g (11,6 mmol) 3(S)-(-)-3-aminopyrrolidinu, 1,35 ml (9,66 mmol) 4-brombenzotrifluoridu, 2,69 g (29 mmol) terc-butoxidu sodného a 1,01 g (1,16 mmol) PdCl₂[P(o-tolyl]₃)₂ (tato látka se připraví podle patentového spisu US 4 196 135). Reakční směs se zahřívá asi 40 minut v uzavřené nádobě na 100 °C, ochladí se, filtruje, odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografíí za eluování směsí methylenchloridu a ethanolu v poměru 10 : 1 až 7 : 1. Získá se tak l-(4-trifluormethyl)fenyl-(3S)-pyrrolidin-3ylamin.

Stupeň 2

Směs 24,7 ml (0,61 mmol) methanolu a 50 ml ethylesteru kyseliny octové se pod argonem vychladí na 0 °C, po částech se přidává 43,3 ml (0,61 mmol) acetylchloridu a roztok se potom nechá ohřát na teplotu místnosti během asi 45 minut. Znovu se vychladí v ledu a během asi 45 minut se přidává roztok 50,0 g N-BOC-l-amino-2,3-dimethylendioxy-4-hydroxymethylcyklopentanu vzorce (vii) ve lOOml ethylesteru kyseliny octové. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti a potom odpařením ve vakuu se získá očekávaný hydrochlorid aminu vzorce (xiv), jak je uveden zde výše.

-33CZ 291785 B6

Stupeň 3

Příprava sloučenin vzorce (xv)

Pod argonem se smíchá v 150 ml n-butanolu 38,9 g produktu vzorce (xiv) z příkladu 5, stupeň 2 zde uvedeného výše a 73 g hydrogenuhličitanu sodného a stupeň se míchá za teploty místnosti asi 30 minut. Přidá se 34,2 g 5-amino-4,6-dichlorpyrimidinu a reakční směs zahřívá asi 19 hodin do varu pod zpětným chladičem. Směs se odpaří ve vakuu a k odparku se přidá ethylester kyseliny octové a voda. Vodná vrstva se extrahuje ethylesterem kyseliny octové a spojený organický extrakt se promyje roztokem chloridu sodného, filtruje a odpaří ve vakuu. Odparek se velmi rychlou chromatografií za eluování s gradiengem od 30 do 100% ethylesteru kyseliny octové v hexanu, získá se tím požadovaný substituovaný chlorpyrimidinový derivát vzorce (xv), uvedený zde výše.

Stupeň 4

Příprava sloučeniny vzorce (xvi)

250 ml n-buthesteru kyseliny octové se uvede do styku se 37,9 g produktu vzorce (xv) v příkladu 5, stupeň 3 zde uvedeného výše a 25,1 g formamidin-acetátu, reakční směs se zahřívá pod argonem asi 2 hodiny do varu pod zpětným chladičem a asi po 1 hodině se přidá další podíl 12,5 g formamidin-acetátu a ještě dalších 10 g této sloučeniny za asi 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí, rozdělí mezi ethylester kyseliny octové a roztok chloridu sodného, podíl s obsahem roztoku chloridu sodného se extrahuje 3x do ethylesteru kyseliny octové. Spojený organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu. Odparek

-34CZ 291785 B6 se čistí krystalizací ze směsi ethylesteru kyseliny octové a hexanu a získá se chlorpurinový derivát vzorce (xvi) zde uvedený výše. Odparek se odpaří matečného louhu se dá čistit velmi rychlou chromatografií za eluování 80 až 100% ethylesterem kyseliny octové v hexanu ke zvýšení výtěžku.

Stupeň 5

Příprava sloučeniny vzorce (xvii)

(xvii)

Ve 20 ml ethanolu se uvede do styku 0,225 g (0,693 mmol) produktu vzorce (xvi) z příkladu 5, stupeň 4 zde uvedeného výše, 0,239 g (1,04 mmol) l-(4-trifluormethyl)fenyl-(3S)-pyrrolidin3-ylaminu ze stupně 1 zde uvedeného výše a 0,582 g (6,93 mmol) hydrogenuhličitanu sodného a reakční směs se zahřívá do varu pod zpětným chladičem asi 60 hodin. Směs se filtruje a odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování s gradientem methylenchloridu a methanol v poměru 30: 1 až 10: 1, a získá se tak pyrrolidinylamin vzorce (xvii) zde uvedeného výše.

Stupeň 6

0,234 g produktu z příkladu 5, stupeň 5 uvedeného zde výše se rozpustí v 10 ml kyseliny trifluoroctové a míchá během noci za teploty místnosti. Roztok se odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování směsí methylenchloridu a ethylesteru kyseliny octové v poměru 10 : 1, tak se získá (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-l,2-diolu, teplota tání 111 až 114 °C.

-35 CZ 291785 B6

Příklad 6

Příprava 4(S)-l-benzyl-4—[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3yl)-9H-purin-6-ylamino]pynOlidin-2-onu

(xviii)

Stupeň 1

Příprava sloučeniny vzorce (xix)

7,1 g (24,5 mmol) β-terc-butylesteru kyseliny N-terc-BOC-Z-asparagové se rozpustí ve 120 ml tetrahydrofuranu. Roztok se ochladí a 0°C a přidá se 2,73 g (27 mmol) triethylaminu a potom 2,66 g (24,5 mmol) ethylesteru kyseliny chlormravenčí. Roztok se míchá asi 30 minut, načež se přidá roztok 3,71 g (98,2 mmol) natriumborohydridu ve vodě. Reakční směsi se míchá asi 17 hodin za teploty místnosti, odpaří se ve vakuu a odparek se zředí přidáním ethylesteru kyseliny octové, načež se organická vrstva promyje IN kyselinou chlorovodíkovou, 10% roztokem uhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi lychlou chromatografií za eluování 30 až 50% ethylesterem kyseliny octové v hexanu, získá se tak 3(S)-terc-butyl-3-BOC-amino4-hydroxy-n-butanoát vzorce (xix).

-36CZ 291785 B6

Stupeň 2

Příprava sloučeniny vzorce (xx)

O (xx)

Roztok 0,73 g dimethylsulfoxidu v 9 ml methylenchloridu se vychladí na -70 °C a přikapává se 31 ml 2M roztoku dichloridu kyseliny šťavelové v methylenchloridu. Roztok se míchá asi 15 minut, načež se přidá roztok 0,85 g 3(S)-terc-butyl-3-BOC-amino-4-hydroxy-n-butanoátu vzorce (xix) v 5 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá asi 45 minut a přidá se 1,88 g triethylaminu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a po míchání během asi 30 minut se zředí přidáním ethylesteru kyseliny octové. Získaný roztok se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou, 10% roztokem uhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát odpaří ve vakuu. Získá se tak 3(S)-terc-butyl-3-BOCamino-4-oxo-n-butanoát vzorce (xx).

Stupeň 3

Produkt vzorce (xx) z příkladu 6, stupeň 2 zde uvedeného výše se rozpustí v 9 ml methanolu a přidá se 1,34 g hydrochloridu benzylaminu, potom 0,94 g triethylaminu a pak ještě 200 mg molekulárního síta 3 A (3.10'¹⁰ m). Roztok se míchá asi 45 minut a následně se přidá 0,23 g chloridu zinečnatého a 0,22 g kyanborohydridu sodného v 5 ml methanolu. Roztok se míchá asi 4 hodiny, potom se přidají 2 ml IN roztoku hydroxidu sodného a potom 10 ml vody, směs se odpaří zhruba na polovinu původního objemu a extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Roztok obsahující ethylester kyseliny octové se promyje 10% roztokem uhličitanu sodného, roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií za eluování 30 až 40% ethylesterem kyseliny octové v hexanu. Získá se tak benzylaminový derivát vzorce (xxi), uvedený zde výše.

-37CZ 291785 B6

Stupeň 4

Ve 12 ml směsi toluenu a kyseliny octové (v poměru 10: 1) se rozpustí 0,50 g produktu z příkladu 6, stupeň 3 uvedeného zde výše a roztok se zahřívá 90 minut do varu pod zpětným 5 chladičem. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se velmi rychlou chromatografií za eluování 25 až 35% ethylesterem kyseliny octové v methylenchloridu. Získá se tak 1-benzyl4(S)-BOC-amino-2-pyrrolidinon.

io Stupeň 5

0,64 g produktu z příkladu 6, stupeň 4 uvedeného zde výše se rozpustí ve 20 ml ethylesteru kyseliny octové a roztok se ochladí na 0 °C. Asi 5 minut se probublává roztokem plynný chlorovodík a reakční směs se dále míchá asi 18 hodin za teploty místnosti. Ether se přidá k reakční 15 směsi a pevný podíl se zachytí filtrací. Získá se hydrochlorid l-benzyl-4(S)-amino-2-pyrrolidinonu.

Stupeň 6

V 10 ml ethanolu se uvedeno styku 0,33 g chráněného chlorpurinového derivátu z příkladu 5, stupeň 4 zde uvedeného výše, 0,26 g hydrochloridu l-benzyl-4(S)-amino-2-pyrrolidinonu a 0,25 g triethylaminu a poté se asi 50 hodin nechá ve varu pod zpětným chladičem. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se rozpustí ve 20 ml IN kyseliny chlorovodíkové a míchá za 25 teploty místnosti asi 1 hodiny. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se čistí preparativní vysokotlakovou kapalinou chromatografií za eluování s gradientem 10 až 60% acetonitrilem ve vodě, s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové. λ/hodné frakce se spojí, celek se odpaří a odparek se rozpustí v 20 ml IN kyseliny chlorovodíkové, rozpouštědlo se vydestiluje ve vakuu, a to se opakuje dvakrát. Získaný odparek se rozpustí v methanolu, rozpouštědlo se vydestiluje ve vakuu 30 a triturováním odparku v etherem se získá trihydrát hydrochloridu 4(S)-l-benzyl-4—[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylaminolpyrrolidin2-onu, teplota tání 100 °C (rozklad).

Příklad 7

Příprava (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin9-yl]cyklopentan-l ,2-diolu

-38CZ 291785 B6

Stupeň 1 <

V 10 ml bezvodého methylenchloridu se rozpustí současně l,0g (7,19 mmol) 4-nitrofenolu a 3 ml (21,6 mmol) triethylaminu a roztok se ochladí na -15 °C. K reakční směsi se přidá 1,81 ml (10,8 mmol) anhydridu kyseliny trifluormethansulfonové a za uvedené teploty-15 °C se reakční směs míchá asi 30 minut. Směs se zředí methylenchloridem, promyje postupně roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografií s eluováním methylenchloridem. Ve formě světle žluté pevné látky se dostane 4—nitrofenyl-trifluormethansulfonát.

Stupeň 2

V 17 ml bezvodého methanolu se rozpustí 3,0 g (17,0 mmol) 3(S)-amino-l-benzylpyrrolidinu a 2,50 ml (17,9 mmol) triethylaminu pod dusíkem a se přikape se 2,53 ml (21,3 mmol) ethylesteru kyseliny trifluoroctové. Roztok se míchá asi 18 hodin, odpaří se ve vakuu a odparek se vyjme do methylenchloridu. Roztok se promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu k získání l-benzyl-3(S)-trifluoracetylaminopynOlidinu.

Stupeň 3

Pod dusíkem se rozpustí 4,59 g (16,7 mmol) l-benzyl-3(S)-trifluoracetylaminopyrrolidmu v 50 ml bezvodého methanolu a přidá se 3,68 g (16,7 mmol) di-terc-butylkarbonátu a 0,90 g 10% palladia na uhlí. Směs se potom míchá za přivádění vodíku za atmosférického tlaku asi 5 hodin, filtruje se potom přes rozsivkovou zeminu (Cellite^R), filtrační kláč se propláchne methanolem a filtrát se odpaří ve vakuu. Odparek se čistí velmi rychlou chromatografii za eluování 5% methanolu v methylenchloridu. Dostane se l-BOC-3(S)-trifluoracetylaminopyrrolidm.

Stupeň 4

Ve 130 ml methylenchloridu se rozpustí 4 g l-BOC-3(S)-trifluoracetylaminopyrrolidinu a přidá se 19 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se míchá asi 1 hodinu a odpaří pak ve vakuu. Odparek se rozdělí mezi methylenchlorid a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, vrstvy se oddělí a vodný podíl se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Spojený organický extrakt se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu. Dostane se tak 3(S)trifluoracetylaminopyrrolidin.

Stupeň 5

V 15 ml bezvodého acetonitrilu se rozpustí 0,423 g (1,56 mmol) 4-nitrofenyl-trifluormethansulfonátu a 0,217 ml (1,56 mmol) triethylaminu a přidá se 0,852 g (4,68 mmol) 3(S)-trifluoracetylaminopyrrolidinu. Reakční směs se zahřívá asi 18 hodin do varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení se reakční směs odpaří ve vakuu a odparek se čistí velmi rychlou chromatografii za eluování s gradientem 25 až 50 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Získá se tím l-(4-nitro)fenyl-3(S)-trifluoracetylaminopynOlidin.

-39CZ 291785 B6

Stupeň 6

Do 20 ml nasyceného roztoku uhličitanu draselného ve směsi methanolu a vody v poměru 2 : 3 se přidá 0,334 g (1,10 mmol) l-(4-nitro)fenyl-3(S)-trifluoracetylaminopyrrolidinu a směs se zahřívá asi 2 hodiny na 55 °C a poté ponechá asi 18 hodin za teploty místnosti. Reakční směs se odpaří ve vakuu a odparek se vyjme 10 ml vody. Vodný roztok se extrahuje ethylesterem kyseliny octové a organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a odpaří ve vakuu. Získá se 3(S)-amino-l-(4-nitro)fenylpyrrolidin.

Stupeň 7

V podstatě za použití postupů z příkladu 3, stupně 12 a 13 a příkladu 5, stupně 5 a 6 se připraví (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, teplota tání 119 až 120 °C, z 3(S)-amino-l-(4-nitro)fenylpyrrolidinu.

V podstatě za použití postupů z reakčních schémat a příkladů, jak zde byly výše uvedeny, se připraví z vhodných výchozích látek tyto dále uvedené sloučeniny:

Příklad 8 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-chlorpyTÍdin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 154 až 156 °C.

Příklad 9 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 153 až 156 °C.

-40CZ 291785 B6

Příklad 10 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyiTolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 187 až 190 °C.

Příklad 11 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 153 až 154 °C.

Příklad 12 (2R,3R,4S,5R)-2-Hydroxyniethyl-2-[6-[l-(4-nitrofenyl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 230 až 232 °C.

-41 CZ 291785 B6 » Příklad 13 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-(5'-trifluomiethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2H-[l,2']-bipyridinyl-3-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 113 až 116 °C.

Příklad 14 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxyniethyl-2-[6-(fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Příklad 15 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-(l-pyridin-2-ylpyrrolidin-3(S)-ylamino]purm-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 193 až 195 °C.

-42CZ 291785 B6

Příklad 16 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 121 až 124 °C.

Příklad 17 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxyniethyl-5-[6-[l-(5-methylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S>-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 164 až 166 °C.

Příklad 18 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-thiofen-2-yl-pyridin-2-yl)pyrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 190 až 192 °C.

-43CZ 291785 B6

Přiklad 19 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-methylmerkaptopyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 231 až 233 °C.

Příklad 20 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-methoxypyriniidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 251 až 253 °C.

Příklad 21 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxyinethyl-2-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pynOlidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 154 až 156 °C.

Příklad 22 (2R,3R,4S,5R)-5-Hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yI)pyrrolidin-3-ylaniino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 130 °C (rozklad).

Příklad 23 (2R,3R,4S,5R)-5-Methoxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol

Teplota tání 198 až 200 °C.

Příklad 24

Ethylamid kyseliny (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4—[6-[ 1 -(5-trifluormethylpyridin-2-y 1)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové

Teplota tání 135 až 138 °C.

-45CZ 291785 B6 ι

Příklad 25 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)piperidin-4-ylamino]purin-9-yl]5 cyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 126 až 128 °C.

io Příklad 26

Dihydrochlorid (1 R,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3 S)-pyrrolidin-3-ylamino)purin-9yl] cyklopentan-1,2-diolu

Teplota tání 160 °C (rozklad).

Příklad 27 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol

Teplota tání 175 až 177 °C.

-46CZ 291785 B6

Příklad 28 (lR,2S,3R,5R}-5-Hydroxymethyl-3-[6-((3R)-pynOlidin-3-ylainino)purin-9-yl]cyklopentan1,2-diol

Teplota tání 166 °C (rozklad).

Příklad 29 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl]pyrrolidin-3(S)-ylammo]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol

Teplota tání 110 až 111 °C.

Příklad 30

Hydrochlorid 4(R)-l-benzyl-4-[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-2-onu

Teplota tání 110 °C (rozklad).

-47CZ 291785 B6

Příklad 31 (lR,2S,3R,5S)-5-Methyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol

Teplota tání 114 až 116 °C.

Příklad 32 (lR,2S,3R,5R>-3-[6-[l-(5-Brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaínino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 169 až 171 °C.

Příklad 33 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-Chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 118 až 121 °C

-48CZ 291785 B6

Příklad 34 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-dion

Teplota tání 135 až 137 °C.

Příklad 35 (lR,2S,3R,5R)-5—Hydroxymethyl—3—[6—[1—(pyridin—2—yl)pyrrolidin—3(S)-ylamino]purin—9-

Teplota tání 110 až 112 °C.

Příklad 36 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(chinolin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-

Teplota tání 135 až 138 °C.

-49CZ 291785 B6 » Příklad 37

Příklad 38 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4,5-bis-Trifluorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 123 až 126 °C.

Příklad 39 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(fenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol

-50CZ 291785 Β6

Příklad 40

4-[3(S)-[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-Dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-l-yl]benzonitril

Teplota tání 140 °C.

Příklad 41 (lR,2S,3R,5R)-5-Hydroxymethyl-3-[6-[l-(isochinolin-l-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin9-yl]cyklopentan-l ,2-diol

Příklad 42 (lR,2S,3R,5R>-3-[6-[l-(6-Bromisochinolin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

-51 CZ 291785 B6

Příklad 43 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-Chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-yl-amino]purin-9-yl]-5-hydroxy5 methylcyklopentan-l,2-diol

Příklad 44 (lR,2S,3R,5R>-3-[6-[l-(3-Chlor-5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 140 až 143 °C.

Příklad 45 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-Chloipyrimidin-4-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 180 až 182 °C.

-52CZ 291785 B6

Příklad 46 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-Chlorpyriniidin-4-yl)pynOlidin-3(S>-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol

Příklad 47 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-Chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Příklad 48 (lR,2S,3R,5R)-5-Methoxymethyl-3-[6-[l-(6-methoxypyrimidin-4-yl)pyTrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 118 až 120 °C.

-53CZ 291785 B6 > Příklad 49 (lR,2S,3R,5R)-5-Isopropoxymethyl-3-[6-[l-{5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyiTolidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 157 až 158 °C.

Příklad 50 (lR,2S,3R,5R)-5-Isopropoxymethyl-3-[6-[l-{4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 160 až 161 °C.

-54CZ 291785 B6

Příklad 51 (1 R,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-(6-Chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 122 až 124 °C.

Příklad 52 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-Brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaminopurin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 110 až 111 °C.

Příklad 53 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-Chlorpyridin-2-yl)pyrrolidm-3(S)-yl-amiono]purin-9-yl]-5methoxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 110 až 112 °C.

-55CZ 291785 B6 » Příklad 54 (lR,2S,3R,5R)-5-Methoxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol

Teplota tání 128 °C.

Příklad 55 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-Chlorfenyl)pyrrolidm-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethy lcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 122 až 123 °C.

Příklad 56 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-Chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxy20 methylcyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 127 až 130 °C.

-56CZ 291785 B6

Příklad 57 * (1 R,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-(3-Chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]—5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol

Teplota tání 131 až 133 °C.

Příklad 58 (lR,2S,3R,5R)-5-Methoxymethyl-3-[6-(l-fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol

Teplota tání 106 °C.

Příklad 59 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-(l-Benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-l,2-diol

-57CZ 291785 B6 » Příklad 60 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-(l-BenzylpyiTolidin-3(S)-ylaniino)purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol

Příklad 61 (S)-Methylpropylamid kyseliny (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[ l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S}-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové

Teplota tání 215 °C.

-58CZ 291785 B6

Příklad 62 (R)-Methylpropylamid kyseliny (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové

Teplota tání 206 až 212 °C (rozklad).

Sloučenina podle tohoto vynálezu se hodí jako antihypertenzní činidla pro léčení vysokého krevního tlaku, protože zvyšují koronární krevní oběh, a proto jsou použitelné při léčení myokardiální ischemie, také jsou kardioprotektivními činidly použitelnými pro prevenci nebo pro snížení poškození myokardu v důsledku myokardiální chemie, a působí rovněž jako antilipolytická činidla, použitelná pro léčení hyperlipidemie a hypercholesterolemie.

Sloučeniny v rámci tohoto vynálezu projevují aktivitu při standardních testech vazby Ai/A₂ receptorů pro stanovení agonistické aktivity adenosinového receptoru u savců. Příkladné testovací postupy, které jsou vhodné pro stanovení receptorové vazby afinity sloučenin podle tohoto vynálezu jsou popsány zde dále.

A. Stanovení in vitro adenosinové receptorové vazby aktivity

Ai receptorová vazba afinita byla stanovena kompetitivním testem, založeným na ligandové náhradě Ή-CHA (cyklohexyladenosin, Research Biochemicals, lne., Natick, Mass., USA) z receptoru za použití membránového přípravku z celého krysího mozku, podle postupu, který popsal Bruns R.F. a spol., Mol. Pharmacol. 29, 331 (19786). Nespecifická vazba byla zjištěna za přítomnosti lmMtheofylinu.

A₂ receptorová vazba afinita byla stanovena podobným technickým testem, založeným na ligandové náhradě ³H-CGS 21680, co je známý A₂ receptorový specifický adenosinový agonista, z receptoru za použití membrán ze striatum krysích mozků. Nespecifická vazba byla zjištěna za přítomnosti 20 μΜ 2-chloradenosinu.

Testy byly prováděny ve skleněných testovacích trubičkách při 25 °C. Jakmile byly již jednou membrány přidány, byl obsah trubiček zvířen a inkubován na rotační třepačce při 25 °C 60 minut (Ai test) nebo 90 minut (A₂ test). Testovací trubičky byly v polovině inkubační doby napůl, obráceny a znovu blízko ku konci. Testy byly skočeny rychlou filtrací 2,4 cm filtry gF/B za použití „Brandel Cell Harvestor“. Testovací trubičky byly vymyty třikrát 50 mM vychlazeného pufřu tris-HCl (pH 7,7 nebo 7,4) stím, že filtrace byla dokončena během 15 sekund. Vlhká filtrační kolíčka byla přemístěna do skleněných scintilačních lahviček, naplněných použitím 10 ml Aquasol-u Π (New England Natural). Lahvičky byly protřepávány po dobu noci na rotační

-59CZ 291785 B6 » třepačce a potom byly přemístěny do analyzátoru kapalné scintilace na dvouminutový propočet.

Hodnoty IC50 pro receptorovou vazbu, tj. koncentrace, za které sloučenina dle tohoto vynálezu nahradila radioaktivně značenou standardní látku, byly získány konstrukcí křivky komputerovým programem (RS/I, Bolt, Neranek a Newmann, Boston, Ma, USA).

Ai receptorová vazba afinita byla stanovena také za použití přípravku z epididymických krysích membrán z tučných tlapek.

Membránová příprava: Krysí epididymické tučné tlaky byly homogenizovány použitím pufru 10 tohoto složení: 0,25 M sacharosy, 10 mM Tris, 2 mM kyseliny ethylendiamintetraoctové, 0,1 M fenylmethylsulfonylfluoridu a 1 pg/ml leupeptinu (200 mg hmotnostně vlhké tkáně na ml pufru). Homogenní směs byla v 50 ml odstřeďovacích skumavkách odstřeďována minutu za 1000 g (3000 otáček za minutu, bezprostřední kapalina nad sedlinou byla odebrána a následovalo odstřeďování 15 minut/38 000 g. Shluky byly resuspendovány v testovacím pufru (30 mM Tris a 1 mM 15 kyseliny ethylendiamintetraoctové, poměr 300 mg původní hmotnosti tkáně na ml testovacího pufru, a k suspenzi byly přidány 2 μΐ/ml roztoku adenosin-deaminasy (10 mg/ml), suspenze pak inkubována 30 minut při 37 °C. Suspenze byla odstřeďována 10 minut/38 000 g, shluky byly promyty jednou za použití 20 ml testovacího pufru a resuspendovány v testovacím pufru (1,2 g původní hmotnosti vlhké tkáně/ml pufru.

Test a vyhodnocení:

Trubičky byly připraveny takto: obsah trubiček: 100 μΐ membránové suspenze (příprava viz výše), 50 μΐ roztoku ³H-cyklohexyladenosinu (připraveno ředěním roztoku s obsahem asi 25 1 mCi/ml se specifickou aktivitou asi 29,9 Ci/mmol, testovací pufr na 100 mM, nadále označováno jako roztok CHA), 350 μΐ testovacího pufru; nespecifické vazné trubičky: 100 μΐ membránové suspenze, 50 μΐ roztoku CHA, 50 μΐ 100 μΜ 2-chloradenosinu v testovacím pufru, 300 μΐ testovacího pufru; trubičky se vzorky 100 μΐ membránové suspenze, 50 μΐ CHA roztoku, 50 μΐ roztoku testované sloučeniny (lze připravit sériovým ředěním testovacího pufru v roztoku 30 dimethylsulfoxidu), 300 μΐ testovacího pufru; trubičky se slepým pokusem: 50 μΐ CHA-roztoku,

450 μΐ testovacího pufru. Každá trubička byla zviřována 10 sekund, inkubována na 2 hodiny při 23 °C filtrována použitím „Brandel Filtration Unit“ za použití filtračního papíru Whatman gF/B s promytím dvakrát použitím 5 ml 50 mM Tris. Filtrační kolečka byla umístěna ve scintilačních nádobách 7 ml, které byly naplněny použitím asi 5 ml,,Ready Safe Scintillation Cocktail“ a pro35 veden propočet.

B. Stanovení vasorelaxace in viro na izolovaných koronárních arteriích prasnic.

Koronární arterie prasnic byly pořízeny z místních jatek, pečlivě rozebrány a zbaveny tuku, krve 40 i nalehlých tkání. Byla vyříznuta kolečka o šířce asi 2 až 3 mm, ta pak přenesena do vodním pláštěm vybavených tkáňových lázní (10 mm), naplněných teplým (37 °C) pufřem KrebsHenseleit, okysličeným (O2/CO2: 95%/5%), a zavěšena na věšáčcích tvaru L mezi tyčinky z nerezové oceli a přenosník síly. Složení Krebsova pufru vmM: chlorid sodný 118, chlorid draselný, 4,7, chlorid vápenatý 2,5, síran hořečnatý 1,2, dihydrogenfosforečnan draselný 45 1,2, hydrogenuhličitan sodný 25,0, glukóza 10,0. Kolečka byla udržována v rovnovážném stavu po 90 minut s častým měřením pufru za stálé tenze 5 g. Se zřetelem na zajištění nejlepšího vývoje tenze byla arteriální kolečka vystavena dvakrát účinkům 36 mM chloridu draselného a jednou 10 μΜ PGF2a, dříve než byla vystavena účinkům, 3 pm PGF2a. Když izometrická tenze dosáhla ustáleného stavu, byly do lázní přidávány zvyšující se dávky analogů adenosinu dle tohoto 50 vynálezu (obvykle 1 mM až 100 μΜ) v polovině doby. Tenze, dosažená při použití 3 μΜ byla pokládána za rovnou 100% a všechny další hodnoty byly vyjádřeny jako % tohoto maxima. Hodnoty IC50 pro relaxaci, tj. koncentraci za které sloučeniny dle tohoto vynálezu způsobí 50%-snížení tenze, byla stanovena použitím výše zmíněného komputerového programu za doplnění lineární křivky.

-60CZ 291785 B6

C. Stanovení středního arteriálního krevního tlaku (MAP, mean arterial blood pressure) a srdečního tepu (HR, heart rate) in vivo u normoteznich anestetizovaných krys a spontánně hypertenzních krys.

1. Anestetizované krysy

Normotenzní krysy byly uvedeny do anesteze pentobarbitalnatriem (50 mg/kg, i.p.) a umístěny na vyhřátém operačním stolku. Kanulky byly vsunuty do femorálních žil i cév, aby bylo možno zjistit krevní tlak a usnadnit tak i intravenózní podávání testovaných sloučenin. Zvířátka byla ponechána 10 minut po chirurgickém zákroku v klidu, nepřetržitě byl sledován průměrný arteriální tlak, zaznamenáván, srdeční tep byl monitorován za použití pulzu arteriálního tlaku pro spuštění kardiotachometru. Jakmile se ustavily a byly zaznamenány základní parametry, byly podávány zvyšující se dávky (1, 3, 10, 30, 100, 300 a 1000 pg/kg) sloučeniny, jež měla být testována, a to intravenózně. Maximální změny kardiovaskulárních parametrů byly zjišťovány po podání každé dávky adenosinového analoga. Pouze jedna sloučenina přivedla na podávání jedné kryse. Způsobilost sloučenin snížit srdeční tepy a střední arteriální tlak byla určena stanovením dávky činidla, jež byla nutná ke snížení srdečního tepu nebo arteriálního tlaku o 25 % (ED25).

2. Spontánně hypertenzní krysy (SHR, spontaneously hypertenzive rat).

Orální antihypertenzní účinnosti sloučenin podle tohoto vynálezu byla zjišťována na neovlivněných, spontánně hypertenzních krysách. Anesteze krys byla provedena pentobarbitalnatriem (50 mg/kg, i.v.). Dávkově ovládaný snímač byla implantován do břicha krysy středním řezem. Kanula snímače byla vsunuta do abdominální aorty, aby bylo možno přímo měřit krevní tlak neovlivněných SHR. Snímač byl napojen na abdomenální stěnu. Po zotavení se z chirurgického zákroku (minimálně po 7 dnech) byly krysy SHR umístěny na záznamové desce a snímač/přenos byl aktivován Arteriální tlak systolický, diastolický a střední, jakož i srdeční tep byl zaznamenáván po 90 minut na neovlivněných krysách ke zjištění stabilní základní linie. Každá z krys dostala jednu dávku sloučeniny dle tohoto vynálezu, jež se měla testovat, nebo vehikulu, a změny krevního tlaku i tepotu srdce byly monitorovány po 20 hodin, a zaznamenány.

Je-li přítok krve do srdce přerušen na krátkou časovou periodu (2 až 5 minut) s následujícím obnovením přítoku krve (reperfuse), je srdce chráněno před vznikem poranění, k němuž by došlo při přerušení přítoku krve na delší časový úsek (například 30 minut).

D. Stanovení tepotu srdce in vitro

Izolovaná srdeční komora krysy

Samci krys „Sprague-Dawley“ byli anestetizováni použitím Ketamin/Rompun, srdce byla rychle vyjmuta excisí a vložena do teplového, prokysličeného (95 % O₂/5 % CO₂ pufru Krebs-Henseleit tohoto složení vmM: chlorid sodný 118, chlorid draselný 4,7, chlorid vápenatý 2,5, síran hořečnatý 1,2, dihydrogenfosforečnan draselný 1,2, hydrogenuhličitan sodný 25,0 a glukóza 10,0, pH 7,4. Pravá, spontánně bijící srdeční komora byla odříznuta a suspendována v tkáňové lázni s vnějším vodním vybavením, to za použití drátků z nerezové oceli. Srdeční komory byly udržovány v rovnovážném stavu po 60 minut za zbývající tenze 2 g a se změnou pufru každých 5 minut po prvých 15 minut a dále pak v intervalech 5 minut. Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které se měly testovat, byly přidávány kumulativně do lázní a srdeční tep byl sledován použitím polygrafii grass Model 7D.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se vyznačují účinností při testech, použitých ke stanovení schopnosti takových látek napodobovat kardioprotektivní aktivitu myokardiálních předúpravy. Příklady testovacích postupů, které se hodí pro zjištění kardioprotektivní aktivity sloučenin dle tohoto vynálezu, jsou popisovány dále.

-61 CZ 291785 B6

E. Stanovení kardioprotektivní aktivity u krys.

1. Obecná chirurgická příprava

Dospělé krysy Sprague-Dawley byly anestetizovány inaktinem (100 mg/kg, i.p.). Trachea byla intubována a pozitivní tlakový vzdušný průchod byl dosažen použitím malého respirátoru pro zvířata. Katétry byly umístěny ve stehenní véně i arterii pro podávání sloučenin dle tohoto vynálezu, které se měly testovat ve spojitosti s měřením krevního tlaku. Incise byla provedena na io levé straně hrudníku nad pektorálním svalstvem a svalstvo bylo odtaženo, aby se obnažil čtvrtý mezižebemí prostor. Hrudník byl otevřen, srdce vyjmuto. V délce 4-0 byl proveden prolinový šev ventrilulámí stěnou blízko levé hlavní koronární arterie a použit k přerušení toku krve koronární arterii utažením posuvného uzlíčku. Na srdečním povrchu byl umístěn pulzní Doplerův průtokový sledovač (zařízení, měřící průtok krve) pro potvrzení, že koronární arterie byla vhod15 ným způsobem identifikována. Katétr byl také umístěn do levé srdeční komory k monitorování levé ventrikulámí funkce během pokusu.

2. Předběžná úprava a testovací postupy

Pro předběžnou úpravu srdce byla koronární arterie okludována (průtok přerušen) na dobu minut. Pokusný uzlíček byl umístěn, aby se obnovil průtok krve (reperfuze) na dobu 3 minut. Tento postup okluze/reperfuze byl dvakrát opakován. 5 minut po skončení konečné předúpravy byla arterie znovu okludována na 30 minut s následující reperfiizí na 3 hodiny. Byla-li testována sloučenina dle tohoto vynálezu, pak místo provedení postupu okluze/reperfuze došlo k infuzi 25 sloučeniny 30 minut před třicetiminutovou okluzní dobou. Po skončení tříhodinové reperfuzní periody byla arterie znovu uzavřena, do levého ventrikulámího katétru bylo podáno množství 1 ml barviva „Patent Blue“ a činnost srdce byla zastavena i.v. podáním roztoku chloridu draselného. Tento postup umožňuje, aby barvivo proniklo perfuzí do normálních prostorů srdce, zatím co část srdce v ischemickém stavu barvivo nepřevezme (to je tzv. rizikový prostor). Srdce se 30 rychle vyjme k analýze velikosti infarktu. Velikost infarktu se zjistí rozkrájením srdce od apaxu až dolů na 4 až 5 řezů tloušťky 1 - 2 mm. Řezy se inkubují 15 minut v roztoku 1% trifenyltetrazolia; toto vybarvení se projeví na žijící tkáni za vývoje cihlověčerveného zbarvení. Infarktem postižená tkáň se nevybarví tímto testem zbarvení a je při pohledu bělavá. Tkáňové řezy se umístí v analytické soustavě pro video známém a velikost infarktu se zjistí planimetricky.

Účinek sloučenin dle tohoto vynálezu při testování na velikost myokardiálního infarktu se tak zjistí a použije se pro kvantitativní vyhodnocení rozsahu kardioprotektivní aktivity. Výsledky jsou uvedeny v % rizikového prostoru, postiženého infarktem.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se vyznačují aktivitou při testech, použitých ze zjištění schopnos40 ti sloučenin inhibovat lipolýzu. Příkladné testovací postupy, vhodné pro stanovení antilipolytické aktivity sloučenin dle tohoto vynálezu, jsou uvedeny zde dále.

F. Stanovení antilipolytické účinnosti na krysích adipocytech.

1. Izolování adipocytů z epididymálních tukových tlapek.

Adipozní tkáň se odejme z anestetizovaných krys a promyje dvakrát v inkubačním prostředí: hydrogenuhličitan sodný, 2,09 g a kyselina ethylendiamintetraoctová 0,04 g jako disodná sůl v litru Krebs-ova pufru. Z každé krysy (300 až 350 g) se získají asi 4 ml adipozní tkáně. 50 Adipozní tkáň (35 ml) se potom rozstříhá nůžkami na malé kousíčky a po promytí použitím ml inkubačního prostředí se směsi vlije do zásobníčku injekční stříkačky 50 ml, na které je napojen krátký kousek uzavřeného vyústění místo vlastní jehly. Vodná fáze se ponechá zaschnout a podíl druhého promytí inkubačním prostředím se zavede do injekční stříkačky. Tkáň se vnese do 50 ml roztoku kolagenasy (obsahuje 90 mg kolagenasy) s 500 mg albuminu z hovězího 55 séra (BSA, bovine sérum albumin) a 1 ml 0,1 M roztoku chloridu vápenatého v 50 ml inkubační

-62CZ 291785 B6 hó prostředí v litrové nádobě. Směs se protřepává asi 60 minut za teploty v okolí 37 °C v atmosféře 95% kyslíku a 5% oxidu uhličitého k dosažení digesce tkání. Dispergované buňky se vlijí dvěma vrstvami děrované látky se opláchnou použitím 20 ml inkubačního prostředí. Buňky v uvedené nádobce se odstřeďují do dvou plastových trubiček po 30 sekund za teploty místnosti a 300 otáček za minutu. Vodná fáze se odsaje odzpoda volně se vznášejících vrstvených částeček plovoucího tuku, není k potřebě. Adipocyty se něžně vlijí do 250ml plastové nádoby, obsahující 100 ml promývacího roztoku (1 g BSA na 100 ml, inkubačního prostředí). Po mírném promíchání se postup odstřeďování opakuje. Následuje další promytí promývacím roztokem, buňky se spojí a jejich objem se zjistí pomocí graduovaného válce. Adipocyty se ředí dvojnásobným objemem testovacího pufru, inkubační prostředí (120 ml) obsahuje 1,2 g BSA a 13 mg kyseliny pyrohroznové.

2. Test lipolýzy in vitro

Test se provede v plastových scintilačních nádobkách 20 ml s tím, že celkový testovaný objem činí 4,2 ml. Inkubuje se 2,5 ml testovacího pufru, 1,5 ml zředěných adipocytů a 12,3 μΐ roztoku testované sloučeniny a 12,3 μΐ agonistů adenosinu, měřící se koncentrace, a to v třepačce po dobu 15 minut, potom se nastartuje reakce použitím roztoku norepinefrinu (40,2 μΐ) (10 nM v nosném roztoku, obsahujícím 100 ml vody, 4 mg BSA a 0,1 M kyseliny ethylendiamintetraoctové (20 μΐ) a adenosin-deaminasy (1 pg/ml, 412 ml). Po 60 minutách protřepávání je reakce skončena a nádobky se vylijí na led. Obsah každé z nádobek se přenese do skleněné trubičky 12 na 75 mm s odstřeďováním při 8 až 10 °C 20 minut za 3600 otáček za minutu. Tvrdá vrstva lipidů se odejme odsátím a vodný podíl se testuje na přítomnost glycerolu (400 μΐ ve vzorku). Pozitivní kontrola se provede za nepřítomnosti jakéhokoli adenosinového agonisty, přičemž se místo testovaného roztoku použije voda.

Antilipolytická aktivita adenosinu je zprostředkována aktivováním Ai-receptorového subtypu. Selektivní agonisté A₂-receptorového subtypu, jako je CGS 21680 se neprojevují antilipolytickou účinností. Podle toho zatímco některé Αι-selektivní agonisté nemusí mít žádoucí antihypertenzní aktivitu a A₂-agonisté mohou být neúčinnými antilipolytickými činidly, sloučeniny dle tohoto vynálezu, jsou-li míchány agoniticky, se jedinečně hodí pro účinné zvládnutí obou rizikových faktorů, diskutovaných zde výše, tj. Hypertenze a Hyperlipidemie.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se obvykle podávají orálně nebo parenterálně při léčení pacientů, postižených hypertenzí, myokardiální ischemií nebo v případě pacientů, kde je nutná kardioprotektivní nebo antilipolytická terapie. Výraz „pacient“ jak je zde používán, zahrnuje lidi i další savce.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu, s výhodou ve formě nějaké soli, se mohou upravovat pro podávání jakýmkoli vhodným postupem a vynález zahrnuje do svého rozsahu farmaceutické kompozice, obsahující nejméně jednu sloučeninu dle tohoto vynálezu, vhodné k použití v lékařství nebo zvěrolékařství. Takové kompozice lze připravovat obvyklými postupy za použití jednoho či více farmaceuticky vhodných nosičů či excipientií. Vhodné nosiče zahrnují ředidla či plniva, sterilní vodná prostředí a různá netoxická organická rozpouštědla. Kompozice se může upravit do formy tablet, kapslí, prášků, vodných suspenzí či roztoků, injikovatelných roztoků, elixírů, sirupů a pod., a mohou obsahovat jedno či více činidel ze skupiny, kterou tvoří sladidla, příchutě, barvivá, konzervační činidla, vždy se zřetelem na přípravu farmaceuticky přijatelného přípravku.

Ten který nosič a jeho poměr k analogu adenosinu je dán rozpustností a chemickými vlastnostmi sloučenin, tím či oním způsobem podávání s standardizovanou farmaceutickou praxí. Tak například při výrobě tablet se mohou použít jako excipientia laktóza, sodná sůl kyseliny citrónové, uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, dále různá desintegrační činidla, jako je škrob, alginové kyseliny nebo některé komplexní křemičitany spolu s kluznými činidly, jako jsou hořečnatá sůl kyseliny stearové, sodná sůl kyseliny lauiylsírové a talek. Pro formulování kapslí patří mezi

-63CZ 291785 B6 ' výhodné farmaceutické nosiče laktóza a výšemolekulámí polyethylenglykoly. Pokud se připraví vodné suspenze pro orální podávání, může být nosičem emulgující nebo suspendující činidlo. Ředidla jako je ethanol, propylenglykol, glycerol a chloroform, jakož i jejich kombinace jsou použitelné, právě tak, jako další materiály.

Pro parenterální podávání jsou roztoky nebo suspenze těchto sloučeniny v sezamovém nebo podzemnicovém oleji použitelné právě tak, jako vodné roztoky v propylenglykolu, jakož i sterilní vodné roztoky farmaceuticky přijatelných rozpustných solí. Roztoky solí těchto sloučenin jsou zvláště použitelné pro podávání intramuskulámími nebo subkutánními injekcemi. Vodné roztoky, 10 čítaje v to roztoky solí, rozpuštěných v destilované vodě, se hodí při intravenózním injikování za předpokladu, že hodnota jejich pH je správně upravena, nebo že jsou vhodně upraveny, isotonické použitím dostačujícího množství chloridu sodného nebo glukózy a sterilizované zahříváním nebo ultrafiltrací.

Režim dávkování, který se použije při postupu dle tohoto vynálezu, je ten, kteiý zajišťuje maximální terapeutickou odezvu až do dosažení vylepšení stavu za použití minimální hladiny z hlediska účinnosti. Takže obecně řečeno dávkováním je to, kterým se dosáhne snížení krevního tlaku při léčení hypertenze, při zvyšování koronárního krevního toku při léčení myokardiální ischemie, při dosahování kardioprotektivního účinku, tj. zlepšení ischemických nesnází nebo velikosti 20 myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, nebo při dosahování antilipolytického účinku. Obecně může orální dávka činit od asi 0,1 do asi 100 (s výhodou od asi 1 do 10 mg/kg), a intravenózní dávka se může pohybovat od asi 0,01 do asi 10 mg/kg, s výhodou od asi 0,1 do 5 mg/kg. Přitom se musí vzít v úvahu volba vhodného dávkování v kterémkoli specifickém případě s ohledem na pacientovu hmotnost, celkový zdravotní stav, věk a další faktory, 25 které by mohly vyvolat odezvu na podaný lék.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou podávat tak často, jak je to třeba k dosažení a udržení požadovaného terapeutického účinku. Odezva některých pacientů může být rychlá na poměrně velké či malé dávky a vyžaduje jen malé dávkování, nebo přerušení dávkování. Na druhé straně 30 u jiných pacientů může trvat dávkování od asi jednou až čtyřikrát denně v závislosti na fyziologickém stavu pacienta. Obvykle se lék podává orálně od asi jednou do asi čtyřikrát denně. Lze předpokládat, že v případě někteiých pacientů bude třeba jen jedna nebo dvě dávky denně.

Lze také předpokládat, že tento vynález může být použitelný pro podávání injekcemi, což lze 35 použít v krajním případě pro pacienta, postiženého akutní hypertenzí nebo myokardiální ischemií, nebo v případě pacienta, u kterého se jeví nutnost kardioprotekce nebo antilipolytické terapie. Po takovém zásahu látky, použité takto při infuzi pacientovi by mělo být účinné k dosažení očekávané terapeutické odezvy.

Claims (18)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Adenosinový derivát obecného vzorce I (I), ve kterém

   K znamená dusík, N->0 nebo skupinu CH,

   Q znamená methylenovou skupinu nebo kyslík,

   Rí znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, allylovou, 2-methylallylovou, 2-butenyIovou skupinu nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku a

   X znamená skupinu vzorce kde dusíkový atom kruhu ve významu X je substituován Y,

   E znamená kyslík nebo síru,

   Y znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou fenylem nebo naftylem, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou substituovaný fenylem nebo naftylem, kde alespoň jeden substituent je vybrán ze souboru zahrnujícího alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, aminoskupinu, nitroskupinu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, kyanoskupinu, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, halogen, hydroxyskupinu, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, merkaptoskupinu, alkylmerkapto skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, trihalogenalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, karboxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části nebo karbamoylovou skupinu, čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou skupinu obsahující jeden nebo dva atomy vybrané ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, čtyř- až desetičlennou alespoň monosubstituovanou heterocyklylovou skupinu, obsahující jeden nebo dva atomy, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík

   -65CZ 291785 B6 v

   I a síru, kde substituenty jsou vybrány ze souboru zahrnujícího alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu a halogen, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou 5 skupinou, obsahující jeden nebo dva atomy, které jsou vybrány ze souboru zahrnujícího dusík, kyslík a síru, trihalogenmethylovou skupinu, hydroxyskupinu, merkapto skupinu, alkylmerkapto skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku a nitroskupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alespoň monosubstituovanou čtyř- až desetičlennou heterocyklylovou skupinou, obsahující jeden nebo dva atomy, které jsou vybrány ze souboru 10 zahrnujícího dusík, kyslík a síru, kde substituenty jsou vybrány ze souboru zahrnujícího alkoxyskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylaminoskupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu a halogen,

   15 nap znamená vzájemně nezávisle nulu, 1,2 nebo 3 za předpokladu, že součet n + p činí nejméně 1,

   T znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkyl-C=O skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkyl-C=S skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, 20 halogen, karboxylovou skupinu, skupinu vzorce nebo R₃O-CH₂,

   Ri, R₂ a R₃ znamená vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku,

   25 A znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 20 atomy uhlíku nebo OR',

   B znamená vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 30 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 20 atomy uhlíku nebo OR,

   R' a R znamená vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku substituovanou fenylem nebo naftylem, karbamoylovou 35 skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, dialkylkarbamoylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkyl-C=O skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, alkoxykarbonylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku v alkoxylové části, fenyloxykarbonylovou nebo nafiyloxykarbonylovou skupinu substituované alkylovou skupinou s 1 až 20 atomy uhlíku v alkylové části, fenyloxykarbonylovou 40 nebo nafiyloxykarbonylovou skupinu, nebo pokud

   A a B znamená OR' nebo OR,

   R' a R mohou dohromady tvořit skupinu vzorce

   -66CZ 291785 B6 kde R znamená vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku, nebo skupinu vzorce kde R<j a Re znamenají vzájemně nezávisle vodík, alkylovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku nebo spolu s atomem uhlíku, na kterém jsou vázány, mohou tvořit 1,1-cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, N-oxid, hydrát nebo solvát.
2. 2. Adenosinový derivát podle nároku 1, obecného vzorce I, kde

   K znamená dusík,

   T znamená skupinu hydroxymethylovou nebo methoxymethylovou,

   A a B znamená hydroxyskupiny,

   X znamená skupinu vzorce n

   a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo farmaceuticky přijatelná sůl.
3. 3. Derivát podle nároku 2, kterým je (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-trifluonnethylpyridm-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyI-2-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-(5'-trifluormethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2H-(l,2')-bipyridin-3-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol,

   -67CZ 291785 B6 (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-(fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4,diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyI-2-[6-(l-pyridin-2-ylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[ 1 -(5-methylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-thiofen-2-ylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S}-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(5-methylmerkaptopyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-methoxypyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-chlorpyriinidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5R)-2-methoxymethyl-5-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidni-3(S)-ylamino]purin-9-yl]tetrahydrofuran-3,4-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyI)piperidin—4~ylamino]purin-9yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-2-[6-((3S)-pyrrolidin-3-yl-ainmo)purin-9-yl]]cyklopentan-

   1.2- diol-dihydrochlorid, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-{4—nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3R)-pyrrolidÍn-3-yl-axnino)purin-9-yl]cyklopentan-

   1.2- diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-liydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-ylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxyniethyl-3-[6-[l-(pyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(chinolin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylaniino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-{4-nitrofenyl)pyrrolidin-S(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R5R)-3-[6-[l-(4,5-bistrifluorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5~ hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol,

   -68CZ 291785 B6 (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(fenyl)pyrrolidin-3(S)ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol,
4. 4-[3(S)-[9-((lR,2S,3R,5R)-l,2-dihydroxy-5-hydroxymethylcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-l-yl]benzonitril, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(isochinolin-l-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9yl] cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-bromchinolin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purm-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2 S,3R, 5R)-3-[6-[ l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3 (S)-y lamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-(3-chlor-5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)-pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylainino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(6-methoxypyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl] cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethy lcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4—chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl-5-methoxymethyIcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(l-fenylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol nebo (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol

   -69CZ 291785 B6 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

   4. Adenosinový derivát podle nároku 1, obecného vzorce I, kde

   Q znamená methylenovou skupinu,

   K znamená dusík,

   T znamená seskupení vzorce

   11 .N-C kde Rj znamená vodík a

   R₂ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

   A a B znamená hydroxyskupiny,

   X znamená skupinu vzorce a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, N-oxid, hydrát nebo solvát.
5. 5. Derivát podle nároku 4, kterým je ethylamid (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[ l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny, (1 S)-methylpropylamid (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4—[6—[ 1 -(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny a (1 R)-methylpropylamid (1 S,2R,3 S,4R)-2,3-dihydroxy-4-[6-[ l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentankarboxylové kyseliny nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
6. 6. Adenosinový derivát podle nároku 1, obecného vzorce I, kde

   Q znamená methylenovou skupinu,

   K znamená dusík,

   T znamená hydroxymethylovou nebo methoxymethylovou skupinu,

   A a B znamená hydroxyskupiny

   X znamená seskupení vzorce a součet n + p činí 3 nebo 4, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
7. 7. Derivát podle nátoku 6, kterým je (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)piperidin-4-ylamino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, dihydrochlorid (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3S)-pyrrolidin-3-ylamino)purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diolu, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyl)pyrrolidin-3-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(R)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-((3R)-pyrrolidin-3-yl-amino)purin-9-yl]cyklopentan-

   1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2S,3R, 5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[ 1 -(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3 (Sý-ylamino]purin-9-ylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(pyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(chinolin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-nitrofenyI)pyrrolidm-S(S)-ylammo]purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4,5-bistrifluorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(fenyl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol,

   -71 CZ 291785 B6

   1 4-[3 (S)- [9-((1 R,2S,3R,5R)-1,2-dihydroxy-5-hydroxymethyIcyklopent-3-yl)-9H-purin-6-ylamino]pyrrolidin-l-yl]benzonitril, (1 R,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[ 1 -(isochinolin-1 -yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9yl]cyklopentan-l ,2-diol,

   5 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-bromchinolin-2-yl)pyrrolidin-3(S}-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlor-5-trifluonnethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purinío 9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl}-pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-yIamino]purín-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol,

   15 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyrimidin-4-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pyrrolidin-3(S)-yIamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (1 R,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[ l-(6-methoxypyrimidin—4-yl)pyrrolidin-3(S)-yl20 amino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(6-chlorpyridazin-3-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol,

   25 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-brompyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(5-chlorpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]30 purin-9-yl]-cyklopentan-l,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(4-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol,

   35 (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(3-chlorfenyl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]-5-hydroxymethylcyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(l-fenylpynOlidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]cyklopentan-1,2-diol, (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[ l-( l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-hydroxymethyl40 cyklopentan-1,2-diol nebo (lR,2S,3R,5R)-3-[6-[l-(l-benzylpyrrolidin-3(S)-ylamino)purin-9-yl]-5-methoxymethylcyklopentan-1,2-diol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

   -72CZ 291785 B6
8. 8. Derivát podle nároku 6, kterým je (1 R,2S,3R, 5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[ 1 -(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3 (S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-dioI nebo (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
9. 9. Derivát podle nároku 6, kterým je (lR,2S,3R,5R)-5-methoxymethyl-3-[6-[l-(5-trifluormethylpyridin-2-yl)pyrrolidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l ,2-diol nebo (lR,2S,3R,5R)-5-hydroxymethyl-3-[6-[l-(4-trifluormethylpyridin-2-yl)pynOlidin-3(S)-ylamino]purin-9-yl]cyklopentan-l,2-diol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
10. 10. Derivát podle nároků 1 až 9, kterým je

    2-[(3 S)-3-aminopyrrolidin-1 -ylJ-5-trifluonnethylpyridin nebo

    2-[(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yl]-4—trifluormethylpyridin.
11. 11. Farmaceutická kompozice pro léčení kardiovaskulárních onemocnění charakterizovaných hypertenzí nebo myokardiální ischemií, vyznačující se tím, že obsahuje antihypertenzně účinné množství nebo antiischemicky účinné množství sloučeniny podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I a farmaceuticky vhodný nosič.
12. 12. Farmaceutická kompozice pro zmírnění ischemického poškození nebo zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie, vyznačující se tím, že obsahuje kardioprotektivní množství sloučeniny podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.
13. 13. Farmaceutická kompozice pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců, vyznačující se tím, že obsahuje antilipolytické množství sloučeniny podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.
14. 14. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčení pacienta trpícího hypertenzí.
15. 15. Použití sloučeniny některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčení pacienta trpícího myokardiální ischemií.
16. 16. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčení pacienta trpícího hyperlipidemií nebo hypercholeterolemií.
17. 17. Farmaceutická kompozice pro léčení kardiovaskulárního onemocnění nesoucího stopy hypertenze nebo myokardiální ischemie, zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie nebo pro snížení hladiny lipidů, triglyceridů nebo cholesterolu u savců, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství derivátu podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič.

    -73CZ 291785 B6
18. 18. Použití derivátu podle některého z nároků 1 až 9 obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčení/zmímění ischemického poškození u pacienta, u pacienta trpícího ischemickým poškozením nebo pro zmenšení velikosti myokardiálního infarktu v důsledku myokardiální ischemie u pacienta, který je takto postižen.