KR102308854B1

KR102308854B1 - 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 포함하는 코로나바이러스감염증-19 예방 및 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR102308854B1
Application number: KR1020210026365A
Authority: KR
Inventors: 이혁우; 손서현; 강지윤; 장휴정; 서성욱
Original assignee: 퓨쳐메디신 주식회사
Priority date: 2021-02-26
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2021-10-05
Also published as: AU2022227430A1; WO2022182054A1; EP4272747A4; CA3208876A1; US20240148769A1; CN116940366A; EP4272747A1; KR20220122441A; JP2024508827A

Abstract

본 발명은 코로나바이러스감염증-19(COVID-19) 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 화학식 A-1 또는 화학식 A-2로 표현되는 카보사이클릭 뉴클레오사이드(carbocyclic nucleoside) 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 포함하는 코로나바이러스감염증-19 예방 및 치료용 약학적 조성물 {THE PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTION AND TREATMENT OF CORONAVIRUS DISEASE-19 CONTAINING CARBOCYCLIC NUCLEOSIDES DERIVATIVES}

본 발명은 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 포함하는 코로나바이러스감염증-19 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 SARS-CoV-2에 대한 우수한 감염 저해능과 낮은 세포독성을 가져 코로나바이러스감염증-19를 예방 또는 치료하는데 활용될 수 있는 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

바이러스는 인류의 건강을 위협하는 수많은 난치병들에 대한 대표적인 원인 중 하나로서, 전 세계적으로 이를 예방 또는 치료하기 위해 막대한 자본을 투자하고 있다. 최근에는 중국 우한에서 처음 발생한 새로운 유형의 중증급성호흡증후군 코로나바이러스(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2; SARS-CoV-2)에 의한 호흡기 감염질환인 코로나바이러스감염증-19(coronavirus disease 19; COVID-19)이 전 세계로 확산되어 팬데믹(pandemic) 현상을 초래하고 있다. 따라서 이들의 증식을 억제할 수 있는 바이러스 치료제의 개발이 시급한 상황이지만, 현재 이 바이러스들을 효과적이고 안전하게 억제할 수 있는 치료제 또는 예방제가 전무한 실정이다.

한편, 항바이러스제들은 다양한 기전(mechanism)을 통해 바이러스를 억제할 수 있는데, 그 중 다음과 같은 두 가지 기전은 바이러스를 효과적으로 억제하는데 사용될 수 있는 것으로 알려져 있다.

첫 번째는, S-adenosylhomocysteine(이하, SAH) 가수분해효소(hydrolase)를 억제하는 것이다. SAH 가수분해효소는 NAD⁺를 조효소로 이용하는 테트라머(tetramer) 형태의 효소로서, SAH를 아데노신(adenosine, Ado)과 호모시스테인(homocysteine, Hcy)으로 가역적으로 가수분해하는 역할을 하며, 생체내 단백질, 지질, 핵산뿐만 아니라 히스타민, 노르에피네프린같은 체내물질들의 메틸화(methylation)에 매우 중요한 효소이다.

이러한 SAH 가수분해효소의 억제는 SAH의 축적을 유발하며, 과잉의 SAH는 순차적으로 S-adenosylmethionine(AdoMet)-dependent transmethylase의 억제 및 바이러스 mRNA의 캡핑(capping)를 억제하여 바이러스의 복제에 필요한 단백질이 제대로 만들어지지 못하게 하기 때문에, 결과적으로 항바이러스 효과를 나타내게 된다.

대부분의 동물 DNA 바이러스뿐만 아니라 RNA 바이러스도 mRNA 캡핑에 메틸화 효소(viral mRNA guanosine N7-methytransferases, O-2′-methytransferase)가 필수적이므로, SAH 가수분해효소는 광범위 항바이러스제의 개발에 있어서 필수적인 요소로 간주된다. 즉, RNA 바이러스 치료제의 개발과 SAH 가수분해효소 저해제의 개발은 높은 상관성을 갖고 있는 것으로 여겨진다.

두 번째는, 바이러스 RNA 중합효소(polymerase)를 저해하는 것이다. RNA 바이러스들은 기질인 Nucleoside-5’-triphosphate(NTP)가 RNA 중합효소(polymerase)에 의해 RNA 사슬(chain)로 삽입되어 복제된다. 따라서, RNA 중합효소를 저해하는 물질 또한 항바이러스제 역할을 할 수 있으며, 체내에서 3인산염(triphosphate)으로 전환되어 바이러스 RNA 중합효소를 선택적으로 억제하거나 바이러스 RNA 사슬로 직접 삽입되어 연쇄종결반응(chain termination)을 유도하는 물질을 이용하면 효과적인 항바이러스제를 개발할 수 있을 것으로 여겨진다.

Tetrahedron: Asymmetry, 2002, 13, 1189-1193 J. Med. Chem. 2001, 44, 3985-3993

이에, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 코로나바이러스의 일종인 SARS-CoV-2에 대한 우수한 감염 저해능과 낮은 세포독성을 갖는 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 발굴하여 전세계적으로 심각한 위험을 초래하고 있는 코로나바이러스감염증-19(COVID-19)을 예방 또는 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 코로나바이러스감염증-19(COVID-19) 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물은 하기 화학식 A-1 또는 화학식 A-2로 표현되는 카보사이클릭 뉴클레오사이드(carbocyclic nucleoside) 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

<화학식 A-1>

<화학식 A-2>

상기 화학식 A-1 또는 화학식 A-2에서, R₁ 및 R₂는 각각 독립적으로 수소 또는 불소이되 R₁ 및 R₂ 중 적어도 하나는 불소이고, B는 하기 화학식 B-1이다.

<화학식 B-1>

상기 화학식 B-1에서, X는 치환 또는 비치환된 아미노기(amino group)이고, Y는 수소, 싸이오페닐기(thiophenyl group), 퓨라닐기(furanyl group) 또는 피롤릴기(pyrrolyl group)이고, Z는 수소 또는 치환 또는 비치환된 알키닐기(alkynyl group)이다

상기 치환된 아미노기는 알킬(alkyl)아미노기 또는 아릴(aryl)아미노기이고, 상기 치환된 알키닐기는 알킬알키닐기 또는 아릴알키닐기일 수 있다.

상기 알킬아미노기는 -NHMe, -NHEt, -NMe₂, -NMeEt, -NEt₂, 벤질아미노(benzylamino) 또는 할로겐화벤질아미노(halogenized benzylamino)이고, 상기 아릴아미노기는 페닐아미노(phenylamino) 또는 할로겐화페닐아미노(halogenized phenylamino)이고, 상기 알킬알키닐기는 벤질에티닐(benzylethynyl) 또는 벤질프로피닐(benzylpropynyl)이고, 상기 아릴알키닐기는 페닐에티닐(phenylethynyl) 또는 페닐프로피닐(phenylpropynyl)일 수 있다.

상기 할로겐화페닐아미노기 또는 할로겐화벤질아미노기는 예를 들어, 플루오르화(fluoro), 클로린화(chloro), 브롬화(bromo) 또는 요오드화(iodo)된 페닐아미노 또는 벤질아미노일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 알키닐기는 예를 들어, 에티닐(ethynyl), 프로피닐(propynyl) 또는 부티닐(butynyl)일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

구체적으로, 상기 화학식 A-1은 하기 화학식 1-1 또는 화학식 1-2일 수 있고, 상기 화학식 A-2는 하기 화학식 2일 수 있다.

<화학식 1-1>

<화학식 1-2>

<화학식 2>

본 발명의 일 실시예에 따른 COVID-19 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물은 상술한 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 SARS-CoV-2에 대한 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 즉, 본 발명의 실시예들은 상술한 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체를 포함하는 SARS-CoV-2에 대한 항바이러스제(antiviral agent) 또는 항 SARS-CoV-2 제(anti-SARS-CoV-2 agent)일 수 있다.

항바이러스제란 바이러스의 활성, 복제 등을 억제하는 것뿐만 아니라, 바이러스에 의해 유발되는 모든 질환들의 예방 및/또는 치료 용도로도 사용될 수 있는 약학적 조성물을 의미한다.

상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염은 SARS-CoV-2에 대하여 우수한 감염 저해능과 낮은 세포독성을 가질 수 있다. 구체적으로, 상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염의 SARS-CoV-2에 대한 IC₅₀ 값은 7.5 μM 이하, CC₅₀ 값은 50 이상 및/또는 SI 값은 6.5 이상일 수 있다. 보다 구체적으로는, 상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염의 SARS-CoV-2에 대한 IC₅₀ 값이 4 μM 이하 및/또는 SI 값이 16 이상일 수 있다.

또는, 상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염은 10 μM 농도일 때 SARS-CoV-2에 대한 감염 저해율(inhibition of infection)이 70% 이상인 것일 수 있다. 이와 동시에, 생존 세포 비율(cell ratio)은 70% 이상일 수 있다. 상기 감염 저해율은 상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염을 처리하지 않은 감염되지 않은 세포들(감염도 0%) 및 감염된 세포(감염도 100%)와 비교하여 도출되는 상대적인 비율일 수 있다.

상기 화학식 A-1 또는 화학식 A-2로 표현되는 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제공될 수 있다. 염으로는 약학적으로 허용되는 다양한 유기산 또는 무기산에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 적합한 유기산으로는, 예를 들면 카복시산, 포스폰산, 술폰산, 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 글리콜산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 아디프산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 글루탐산, 아스파르트산, 말레산, 벤조산, 살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 메틸황산, 에틸황산, 도데실황산 등을 사용할 수 있고, 예를 들면 염산, 황산 등의 할로겐산 또는 인산 등을 사용할 수 있다.

다만 이에 제한되는 것은 아니며, 본 발명의 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체는 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물 형태로도 제공될 수 있다.

상기 COVID-19 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물은 전신적 또는 국부적으로 투여될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여를 위해 일반적으로 사용될 수 있는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 부형제(또는 희석제)를 사용하여 제형화될 수 있다. 이하, 부형제 및 제형 방법에 대해 구체적으로 예시하지만, 이들 예로 한정되는 것은 아니다.

경구 투여를 위한 고형 제형은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함할 수 있으며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 상기 화학식 A-1 또는 화학식 A-2의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제도 사용할 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제형은, 예를 들면 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 들 수 있으며, 액상 제형은 통상적으로 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 유제, 흡입제, 좌제 등을 포함할 수 있다. 주사제는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트 등과 같은 에스테르 등의 멸균된 수성 용제, 비수성 용제 및 현탁제를 포함할 수 있고, 좌제는 기제로서 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등을 포함할 수 있다. 또한, 국소 적용을 위해 본 발명의 항바이러스제를 연고나 크림으로 제형화할 수도 있다.

상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간 등의 다수의 인자에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 또한 투여 경로는 환자의 상태 및 그의 중증도에 따라 변화할 수 있다.

기타 실시예의 구체적인 사항들은 상세한 설명에 포함되어 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체는 SARS-CoV-2에 대한 우수한 감염 저해능과 낮은 세포독성을 갖기 때문에 안전하고 효과적인 코로나바이러스감염증-19(COVID-19) 예방 및 치료제로 활용될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 따른 효과는 이상에서 예시된 내용에 의해 제한되지 않으며, 더욱 다양한 효과들이 본 명세서 내에 포함되어 있다.

도 1은 본 발명의 실험예에 따른 HTS 자동화(automation)를 통한 SARS-CoV-2 감염분석 과정을 나타낸 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 실험예에 따른 384-조직배양 플레이트의 각 웰을 처리물질 및 방법별로 구분한 지도(Plate map)이다.
도 3은 본 발명의 실험예에 따른 IM 소프트웨어를 이용하여 이미지를 분석하는 원리를 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 실험예에 따라 처리된 각 플레이트를 heatmap 분석한 이미지이다.
도 5 내지 도 7은 본 발명의 실험예에 따라 화합물들을 처리한 각 웰의 감염 저해능(inhibition of infection)과 세포독성(cytotoxicity)을 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 실험예에 따라 최종 스크리닝된 3종의 화합물 10 μM을 처리한 웰들과 대조군 웰들의 공초점 현미경 이미지이다.
도 9는 본 발명의 실험예에 따라 대조군 웰들의 퍼포먼스와 Z'-factor를 분석한 그래프이다.
도 10은 본 발명의 실험예에 따른 분석을 통해 도출된 약물반응곡선(dose response curve; DRC)을 나타낸 그래프이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, '및/또는'은 언급된 아이템들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 또, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 '포함한다(comprises)' 및/또는 '포함하는(comprising)'은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. '-' 또는 '내지'를 사용하여 나타낸 수치 범위는 다른 언급이 없는 한 그 앞과 뒤에 기재된 값을 각각 하한과 상한으로서 포함하는 수치 범위를 나타낸다. '약' 또는 '대략'은 그 뒤에 기재된 값 또는 수치 범위의 20% 이내의 값 또는 수치 범위를 의미한다.

또한, 본 발명의 실시예의 구성 요소를 설명하는 데 있어서, 제1, 제2, A, B, (a), (b) 등의 용어를 사용할 수 있다. 이러한 용어는 그 구성 요소를 다른 구성 요소와 구별하기 위한 것일 뿐, 그 용어에 의해 해당 구성 요소의 본질이나 차례 또는 순서 등이 한정되지 않는다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

그리고 본 발명의 실시예를 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 실시예에 대한 이해를 방해한다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다.

본 명세서에서, '예방'이란 증상 또는 질환은 아직 없으나, 이러한 증상 또는 질환에 걸릴 수 있는 개체에서 증상 또는 질환의 발생을 억제하는 것을 의미한다.

본 명세서에서, '치료'란 개체에서 (a) 증상 또는 질환의 발전(악화)의 억제, (b) 증상 또는 질환의 경감 또는 개선, 또는 (c) 증상 또는 질환의 제거를 의미한다.

본 명세서에서, '개체'란 본 발명의 조성물을 투여하여 '예방' 또는 '치료'될 수 있는 증상 또는 질환을 가진 인간을 포함한 동물, 특히 포유류를 의미한다.

이하, 본 발명의 실시예들을 제조예와 실험예를 통해 상세하게 설명하나, 본 발명의 효과가 하기 실험예에 의해 제한되지 아니함은 자명하다.

제조예: 본 발명의 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체의 제조

제조예 1: 화학식 1-1

<물질 1>

물질 1의 제조 방법: 참조 문헌 [1] Tetrahedron: Asymmetry, 2002, 13, 1189-1193 과 [2] J. Med. Chem. 2001, 44, 3985-3993를 참고하여 합성하였다.

<물질 2a-2c>

물질 2a, 2b의 제조 방법: 앞서 합성한 물질 1 (6 g, 24.8 mmol)을 무수 THF에 녹인 뒤, 클로로트리에틸실란 (TESCl) (16.7 mL, 99.2 mmol)을 적가하고 -78 ℃로 냉각시킨다. 냉각된 혼합물에 1.0 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드/THF 용액 (LiHMDS 1.0 M solution in THF) (50 mL, 50 mmol)을 서서히 적가한 뒤, 30 분간 동일 조건에서 반응을 잘 교반시켜 실릴 에놀 에테르화 시켜 준다. 반응이 종결되었음을 TLC로 확인한 뒤, 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (NH₄Cl) 수용액으로 반응을 종결시키고 수용액층을 아세트산 에틸로 추출한 뒤 유기층을 분액한다. 분리된 유기층을 물과 brine으로 충분히 씻어준 후, 황산 마그네슘 (MgSO₄)으로 건조시키고, 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거한 뒤 감압 농축한다. 이 농축된 잔류물을 무수 DMF에 녹인 후, 0 ℃로 냉각시킨다. 냉각된 혼합물에 1-클로로메틸-4-플루오로-1,4-디아조니아비사이클로 [2.2.2]옥탄 비스(테트라플루오로보래이트) (상표명 Selectfluor^®) (10.15 g, 28.65 mmol)를 1.5 당량 적가한 뒤 동일 조건에서 15 시간 동안 교반하게 되면 플루오로화된 화합물인 물질 2a와 2b가 각각 3:1의 비율로 생성(NMR에서 비율로 확인)된다. 반응이 종결된 것을 TLC에서 확인되면, 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (NH₄Cl) 수용액으로 반응을 종결시키고 수용액층을 아세트산 에틸로 추출한 뒤 유기층을 분액한다. 분리된 유기층을 물과 brine으로 충분히 씻어준 후, 황산 마그네슘 (MgSO₄)으로 건조시키고 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거한 뒤 감압 농축한다. 농축된 잔류물은 실리카젤 크로마토그래피등을 통하여 분리 정제하여 2a (6.591 g, 58%)와 2b (3.078 g, 27%)를 각각 얻을 수 있다.

2a: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 5.29 (dd, J = 8.2, 49.5 Hz, 1 H), 4.70 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 4.20 (dd, J = 2.4, 6.1 Hz, 1 H), 3.61 (dd, J = 1.6, 8.6 Hz, 1 H) 3.38-3.41 (m, 1 H), 2.75 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 1.41 (s, 3 H), 1.30 (s, 3 H), 1.06 (s, 9 H)

2b: ¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) 5.21-5.36 (ddd, J = 1.3, 4.5, 50.8 Hz, 1 H,), 4.55 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.50 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 3.63 (d, J = 2.2 Hz, 2 H), 2.52-2.58 (m, 1 H), 1.41 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H), 1.13 (s, 9 H)

물질 2c의 제조 방법: 위에서 합성한 물질 2a (3.29 g, 12.6 mmol)를 상기 명시된 물질 1에서 물질 2a, 2b로의 합성과정을 동일하게 진행하면 2c (2.95 g, 84%)를 합성할 수 있다.

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) 4.72 (t, J = 6.1 Hz, 1 H), 4.35-4.38 (m, 1 H), 3.68 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 3.68 (d, J = 8.6 Hz, 1 H) 3.46 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 2.67 (d, J = 17.4 Hz, 1 H), 1.42 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H), 1.05 (s, 9 H). (디올 형태로 평형을 이룬 물질로 추정되는 피크와 섞여 있음)

<물질 3a-3c>

물질 3a의 제조 방법: 물질 2a (3.33 g, 12.8 mmol)를 메탄올에 녹인 뒤, 0 ℃ 이하로 충분히 냉각시켜준다. 냉각시킨 용액에 소듐보로하이드라이드 (NaBH₄) (1.45 g, 38.4 mmol)을 천천히 첨가한다. 이후 동일 조건에서 반응을 교반시키고 TLC로 반응 종결을 확인한 뒤, 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (NH₄Cl) 수용액으로 반응을 종결시키고 수용액층을 아세트산 에틸로 추출한 뒤 유기층을 분액한다. 분리된 유기층을 물과 brine으로 충분히 씻어준 후, 황산 마그네슘 (MgSO₄)으로 건조시키고 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거한 뒤 감압 농축한다. 생성된 알코올 화합물을 실리카젤 크로마토그래피등으로 분리정제한 중간체 (2.54 g, 76%)를 무수 피리딘 (pyridine)에 녹인 뒤, 0 ℃로 냉각시켜준다. 냉각된 혼합물에 무수 트리플루오로메탄설폰산 (trifluoromethanesulfonic anhydride) (3.26 ml, 19.36 mmol)을 적가한 뒤, 동일 조건에서 30 분 교반시켜 트리플루오로메틸설폰산화 시켜준다. 반응이 종결됨을 TLC로 확인한 뒤, 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 (NH₄Cl) 수용액으로 반응을 종결시키고 수용액층을 아세트산 에틸로 추출한 뒤 유기층을 분액한다. 분리된 유기층을 물과 brine으로 충분히 씻어준 후, 황산 마그네슘 (MgSO₄)으로 건조시키고 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거한 뒤 감압 농축한다. 생성된 트리플루오로메틸설폰산화 화합물과 소듐아지드 (NaN₃) (1.89 g, 29.04 mmol)를 무수 DMF에 혼합한 뒤, 60 ℃ 로 가열상태에서 교반시켜 아지드화 시킨다. 4 시간 가량 교반한 뒤, TLC로 반응이 종결됨을 확인하고 물로 반응을 종결시킨 뒤, 수용액층을 아세트산 에틸로 추출한 뒤 유기층을 분액한다. 분리된 유기층을 물과 brine으로 충분히 씻어준 후, 황산 마그네슘 (MgSO₄)으로 건조시키고 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거한 뒤 감압 농축한다. 얻어진 아지드 화합물을 실리카젤 크로마토그래피등을 통하여 분리정제하고, 얻어진 화합물 (4.07 g, 42%)을 메탄올에 용해시킨다. 해당 용액에 팔라듐/탄소를 적당량 첨가하고 반응용기를 수소치환을 하여 수소화 반응을 진행시켜 아지드기를 아민기로 환원시킨다. 반응이 종결됨을 TLC로 확인한 뒤, 반응이 종결되면 감압여과를 통해 잔여 고체를 제거하고 감압 농축시키게 되면 원하는 물질 3a를 얻을 수 있다. 얻어진 물질 3a는 분리정제과정 없이 다음 과정으로 진행한다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) d 4.96 (dt, J =52.5, 3.3 Hz, 1 H), 4.31-4.36 (m, 2 H), 3.48-3.54 (m, 2 H), 3.27 (td, J = 4.1, 28.4 Hz, 1 H), 2.24-2.34 (m, 1 H), 1.80 (s, 2 H), 1.45 (s, 3 H), 1.26 (s, 3 H), 1.16 (s, 9 H)

물질 3c의 제조 방법: 위에서 합성한 물질 2c (4.95 g, 17.79 mmoL)를 상기 명시된 물질 2a에서 물질 3a로의 합성과정과 동일하게 진행하면 3c (2.98 g, 60%)를 합성할 수 있다. 단, 케톤을 알코올화 시키는 반응에서 소듐보로하이드라이드 (NaBH₄) 대신 리튬보로하이드라이드 (LiBH₄)를 사용하며, 아지드화 반응에서 소듐아지드를 10당량 사용하고 온도를 100 ℃로 올려야 하며, 교반시간을 15 시간 정도로 늘려주어야 한다.

¹H NMR (800 MHz, CDCl₃) d 4.45-4.46 (m, 1 H), 4.25-4.27 (m, 1 H), 3.58 (dd, J = 4.5, 9.2 Hz, 1 H), 3.54 (dd, J = 5.1, 9.2 Hz, 1 H), 3.35-3.38 (m, 1 H), 2.56-2.59 (m, 1 H), 1.94 (bs, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 1.28 (s, 3 H), 1.18 (s, 9 H)

<물질 4a-4c>

물질 4a의 제조 방법: 위에서 합성한 물질 3a (982 mg, 3.757 mmol)과 5-아미노-4,6-디클로로피리미딘 (5-amino-4,6-dichloropyrimidine) (1.85 g, 11.27 mmol), 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) (6.54 mL, 37.57 mmol)을 n-부탄올 (n-butanol)에 혼합시킨 뒤, 마이크로웨이브등을 사용하여 170 ℃로 가열하여 4 시간 정도 교반시킨다. 반응이 종결됨을 TLC로 확인한 뒤, 반응 혼합물을 메탄올과 같이 혼합하여 감압농축 시킨 뒤, 잔류물을 실리카젤 크로마토그래피등으로 분리정제하여 중간체 (964 mg, 66%)를 얻을 수 있다. 이 중간체를 아세트산 디에톡시메틸 (diethoxymethyl acetate)에 녹인 후, 마이크로웨이브등을 사용하여 140 ℃에서 3시간 정도 교반시킨다. 반응이 종결됨을 TLC로 확인한 뒤, 반응 혼합물을 메탄올과 같이 혼합하여 감압농축 시킨 뒤, 실리카젤 크로마토그래피등으로 분리정제하면 물질 4a (643 mg, 65%)를 얻을 수 있다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.74 (s, 1 H), 8.34 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 5.28-5.43 (dt, J = 52.8, 2.8 Hz, 1 H), 5.12-5.23 (m, 2 H), 4.61 (t, J = 5.0 Hz, 1 H), 3.65-3.69 (m, 1 H), 3.61 (t, J = 9.2 Hz, 1 H), 2.56-2.71 (m, 1 H), 1.56 (s, 3 H), 1.32 (s, 3 H), 1.17 (s, 9 H)

물질 4c의 제조 방법: 위에서 합성한 물질 3c (182 mg, 0.625 mmol)를 상기 명시된 물질 3a에서 물질 4a로의 합성과정과 동일하게 진행하면 4c (223 mg, 50%)를 합성할 수 있다. 단, 첫 번째 반응단계에서 온도를 200 ℃로 올려야 하고 교반시간을 7 시간 정도로 늘려주어야 한다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.76 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.29 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 5.26-5.37 (m, 1 H), 5.11 (t, J = 6.9 Hz, 1 H), 4.59-4.64 (m, 1 H), 3.64-3.74 (m, 2 H), 2.81-2.96 (m, 1 H), 1.58 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H), 1.20 (s, 9 H)

<화학식 1-1>

화학식 1-1의 제조 방법: 위에서 합성한 물질 4a (220 mg, 0.54 mmol)를 터트부탄올 (tert-butanol)에 녹인 후, 고온밀폐용기 (stainless steel bomb reactor)에 옮긴다. 혼합액에 포화 암모니아/터트부탄올(제3 부탄올)을 적가한 후, 반응용기를 밀폐시키고 120 ℃에서 15 시간 정도 교반시킨다. 반응이 종결됨을 TLC로 확인한 뒤, 반응 혼합물을 메탄올로 희석시킨 뒤 감압농축 시킨다. 농축된 잔류물은 THF에 녹인 후 혼합액에 트리플루오로아세트산 (TFA)과 물이 2:1로 혼합된 용액을 적가한다. 반응 혼합물을 60 ℃에서 15 시간 가량 교반시킨 뒤, 반응이 종결됨을 TLC로 확인하고 감압농축 시킨다. 농축된 잔류물을 실리카젤 크로마토그래피등으로 분리정제하여 최종 물질 화학식 1-1의 화합물 (66 mg, 43%)를 얻을 수 있다.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.31 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 8.23 (s, 1 H), 5.36-5.39 (m, 1 H), 5.20-5.35 (td, J = 2.8, 53.6 Hz, 1 H), 5.05-5.16 (m, 1 H), 4.66-4.69 (m, 1 H), 3.64-3.71 (m, 2 H), 2.51-2.66 (m, 1 H), 1.55 (s, 3 H), 1.35 (s, 3 H), 1.22 (s, 9 H)

제조예 2: 화학식 1-2

<화학식 1-2>

위에서 합성한 물질 4c (223 mg, 0.534 mmol)를 상기 명시된 물질 4a에서 화학식 1-1로의 합성과정과 동일하게 진행하면 화학식 1-2의 화합물 (99 mg, 61%)을 합성할 수 있다.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.29 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 5.29-5.36 (m, 2 H), 4.66 (bs, 1 H), 3.75-3.79 (m, 1 H), 3.66-3.70 (m, 1 H), 2.80-2.89 (m, 1 H), 1.57 (s, 3 H), 1.34 (s, 3 H), 1.22 (s, 9 H)

제조예 3: 화학식 2

<물질 5>

물질 5의 제조 방법: 질소가스 하에서 2,2,6,6-tetramethylpiperidine (TMP, 59.2 g, 419 mmol)을 무수 THF (170 mL)에 녹이고 -78 ℃에서 n-BuLi (285 mL, 2.5 M in hexane, 457 mmol)을 천천히 첨가하고 0 ℃에서 2시간 동안 교반시킨다. 이 반응 혼합물을 다시 -78 ℃로 낮추고, 무수 THF (110 mL)에 녹인 출발물질 6-chloro-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purine (20 g, 84 mmol)을 천천히 첨가하고 3시간 동안 교반한다. 이 반응혼합물에 THF (200 mL)에 녹인 iodine (102 g, 402 mmol)을 -78 ℃에서 천천히 첨가하고 같은 온도에서 3시간 동안 교반시킨 후 5시간에 걸쳐서 0 ℃로 온도를 서서히 올린다. 반응종결을 확인한 후 10%의 sodium thiosulfate 용액 (550 mL)과 포화 NH4Cl 수용액 (250 mL)을 가해 반응을 종결한다. 반응혼합물을 EtOAc (500 mL)으로 추출하고 무수 MgSO4로 건조하여 감압 농축한다. 남은 잔사물은 CH2Cl2/MeOH = 100/1 조건으로 flash 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 아이보리 고체형태의 원하는 목적화합물 5 (66%)를 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 5.66 (dd, J = 2.4, 10.8 Hz, 1H), 4.20 (m, 1 H), 3.74 (td, J = 2.4, 12 Hz, 1H), 3.04 (m, 1 H), 2.17 (m, 1 H), 1.62-1.91 (m, 4 H).

<물질 6>

물질 6의 제조 방법: 출발물질 5 (500 mg, 1.01 mmol)를 무수 DMF (10 mL)과 toluene (10 mL)에 잘 녹인 뒤, Bis(dibenzylideneacetone)palladium(0) (57.5 mg, 0.10 mmol), copper(I) iodide (38.4 mg, 0.20 mmol), diisopropylamine (306.60 mg, 3.03 mmol), 그리고 phenylacetylene (1.1 당량)를 넣고 충분히 교반해준다. 반응 혼합물은 질소가스 하에 상온에서 12시간 교반한다. 반응이 종결되면 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 추출하고 무수 MgSO4로 건조, 농축한다. 잔사물은 hexanes/EtOAc = 4/1 조건에서 컬럼 크로마토그래피로 정제해 목적화합물 6 (75%)를 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 7.66-7.64 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 5.88 (dd, J = 11.3, 2.1 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.80-3.74 (m, 1H), 2.92 (qd, J = 12.1, 4.0 Hz, 1H), 2.17-2.14 (m, 1H), 1.96-1.55 (m, 4H).

<물질 7>

물질 7의 제조 방법: 출발물질 6을 무수 THF (0.13 M)에 녹이고 bis(triphenylphosphine)palladium(II) dichloride, 0.1당량과 2-tributylstannylthiophene, 2 당량을 넣고 질소기체 치환 조건 하에 실온에서 교반시킨다. 위의 혼합물을 60 ℃에서 3시간 동안 가열 교반시킨 후 실온으로 온도를 낮추고 증발시킨다. 남은 물질은 칼럼 크로마토그래피(silica gel, hexanes/EtOAc, 15/1)로 분리하여 최종생성물 7을 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, DMSO) δ (ppm): 7.90 (dd, 1 H, J = 8.0, 6.8 Hz), 7.43 (m, 2 H), 7.46 (m, 3 H), 7.42 (dd, 1 H, J = 3.6, 0.8 Hz), 7.11 (dd, 1 H, J = 3.6, 1.6 Hz), 5.79 (dd, 1 H, J = 11.2, 2.4 Hz), 4.09 (d, 1 H, J = 11.2 Hz), 3.70 (m, 1 H), 3.50 (m, 1H), 2.69 (t, 2 H, J = 6.8 Hz), 2.03 (m, 2 H), 1.74 (m, 1 H).

<물질 8>

물질 8의 제조 방법: 출발 물질 7에 무수 에탄올 (0.13 M)을 넣고 교반시킨 후, pyridinium p-toluenesulfonate, 0.2 당량을 질소가스 치환하에 실온에서 넣는다. 같은 온도에서 4시간 교반시킨 후, triethylamine (1 mL)을 넣고 반응을 종결한 뒤 증발시킨다. 반응물은 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 최종생성물 8 (60%)을 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.51-7.35 (m, 6H), 7.13 (t, J = 4.3 Hz, 1H).

<물질 9>

물질 9의 제조 방법: 출발물질 8 (0.5 mmol)를 EDC (5 mL)에 충분히 녹인 후 상온에서 N,O-bis(trimethylsilyl)acetamide(BSA) (1.44 당량)를 천천히 적가한다. 반응 혼합물은 40 ℃에서 1시간 동안 교반한 뒤, 상온에서 sugar 3 (1.2 eq)를 EDC (2 mL)에 녹여 천천히 적가한다. 이 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시킨 후 TMSOTf (0.68 당량)를 첨가하고 80 ℃로 승온하여 3시간 동안 교반한다. 반응이 종결되면 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액으로 처리하고 CH₂Cl₂로 추출한다. 잔사물은 농축하여 컬럼 크로마토그래피로 정제해 목적화합물 9 (58%)를 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.04 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.51-7.42 (m, 4H), 7.15 (t, J = 4.3 Hz, 1H), 6.41 (s, 2H), 5.95 (s, 1H), 4.93 (dd, J = 10.5, 4.1 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.08 (s, 3H).

<화학식 2>

화학식 2의 제조 방법: 출발물질 9에 무수 에탄올 (0.3 M) 넣고 교반시킨 후 trimethylamine (4 당량) 과 메틸아민 하이드로클로라이드 (1.3 당량)를 넣고 질소가스 충전하에 상온에서 교반시킨다. 같은 온도에서 24시간 교반시키고 증발시킨 후 생성된 혼합물은 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 최종물질 화학식 2 (물질 10)를 얻는다.

¹H NMR (600 MHz, MeOD) δ 7.87 (dd, J = 1.0, 3.6 Hz, 1 H), 7.63-7.67 (m, 2 H), 7.41-7.50 (m, 4 H), 7.08 (dd, J = 3.6, 5.0 Hz, 1 H), 6.22 (d, J = 6.0 Hz, 1 H), 5.46 (dd, J = 4.7, 5.8 Hz, 1 H), 4.72 (dd, J = 3.3, 9.5 Hz, 1 H), 4.05 (dd, J = 1.3, 9.5 Hz, 1 H), 3.17 (s, 3 H).

실험예: SARS-CoV-2에 대한 활성 시험

SARS-CoV-2에 대한 본 발명의 화합물들의 활성을 검증하기 위하여 상기 화합물들을 코로나 바이러스 평가모델에서 시험하였다. 이를 위해, Image Mining (IM) 소프트웨어를 사용하여 바이러스 N 단백질과 세포핵의 공초점 현미경 이미지를 분석하였으며, 각 화합물에 대한 용량반응곡선(DRC)을 생성하였다. 도 1은 이러한 실험예에 따른 HTS 자동화(automation)를 통한 SARS-CoV-2 감염분석 과정을 나타낸 흐름도로서, 구체적인 실험 방법은 다음과 같았다.

한국 질병관리본부(KCDC)로부터 SARS-CoV-2를 제공받았으며, Vero 세포는 ATCC 로부터 획득하였다.

384-조직배양 플레이트에 웰당 1.2x10⁴ 개의 Vero 세포를 접종하였다. 24 시간 후, DMSO에 2배 연속희석하여 10 포인트로 준비된 화합물들을 50 μM을 최고농도로 하여 세포에 처리하였다. 도 2는 상기 384-조직배양 플레이트의 각 웰을 처리물질 및 방법별로 구분한 지도(Plate map)이다. 도 2에서 청색 'Compound' 웰은 본 발명의 화합물들을 포함한 84종의 화합물들을 처리한 웰을 나타낸다. 상기 과정은 신뢰성 검증을 위하여 두 개의 플레이트(Replicate 1, 2)에 동일하게 수행하였다.

화합물 처리 약 1 시간 후, BSL3 시설에서 세포에 0.0125 MOI의 SARS-CoV-2를 감염시키고 37 ℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 이후 4% paraformaldehyde (PFA)로 세포를 고정한 뒤, permeabilization 하였다. 그 후 anti-SARS-CoV-2 Nucleocapsid (N) 1 차 항체를 처리하고, 488-conjugated goat anti-rabbit IgG 2 차 항체와 Hoechst 33342를 처리하여 세포를 염색하였다. 형광 발현은 대용량 이미지 분석 기기인 Operetta (Perkin Elmer)를 이용하여 이미징 하였다.

획득된 이미지는 내부 분석 프로그램인 Image Mining (IM) 소프트웨어를 이용하여 분석되었다. 도 3은 IM 소프트웨어를 이용하여 이미지를 분석하는 원리를 나타낸 도면이다.

웰당 총 세포수는 Hoechst 로 염색된 핵 수로 산출하였고, 감염된 세포수는 nucleocapsid 단백질을 발현하는 세포수로 산출하였다. 감염도(infection ratio)는 nucleocapsid 단백질을 발현하는 세포수/총 세포수로 계산하였다. 각 웰당 감염도는 동일한 플레이트에서 감염되지 않은 세포(mock)를 포함한 웰들의 평균 감염도를 0%로 하고 화합물이 처리되지 않은 감염세포 (0.5% DMSO group)를 포함한 웰들의 평균 감염도를 100%로 하여 노말라이제이션 되었다. 약물 농도에 따른 반응 곡선과 IC₅₀, CC₅₀ 값은 XLFit 4 (IDBS) 소프트웨어를 이용하여 Y = Bottom + (Top Bottom)/(1 + (IC₅₀/X)Hillslope) 수식을 활용해 도출하였다. 모든 IC₅₀ 와 CC₅₀ 값은 두번의 반복실험으로 측정되었고, 어세이의 신뢰도는 Z'-factor와 변동계수 백분율 (%CV)의 값으로 검증되었다.

도 4는 상기 실험예에 따라 처리된 각 플레이트를 heatmap 분석한 이미지이다. 도 5 내지 도 7은 화합물들을 처리한 각 웰의 감염 저해능(inhibition of infection)과 세포독성(cytotoxicity)을 나타낸 그래프이다.

도 4의 이미지 분석 결과와 도 5 내지 7의 그래프를 통해 감염 저해능이 70% 이상인 화합물 5종(Positives + Toxic-Positives)을 스크리닝하였으며, 그 중에서 세포독성을 나타내는 생존 세포 비율(cell ratio)이 70% 이상인 화합물 3종(Positives)을 스크리닝하였다. 도 8은 최종 스크리닝된 3종의 화합물(FM4L-038, FM2L-001, FM2L-002) 10 μM을 처리한 웰들과 대조군 웰들의 공초점 현미경 이미지이다. FM2L-001, FM2L-002 및 FM4L-038는 각각 화학식 1-1, 1-2 및 2의 화합물을 나타낸다.

한편, 도 5 및 6의 두 플레이트 간의 상관관계를 나타낸 그래프는 상기 실험이 신뢰성 있게 수행되었음을 뒷받침한다. 도 9는 대조군 웰들의 퍼포먼스와 Z'-factor를 분석한 그래프인데, Z'-factor는 양성대조군(positive control)과 음성대조군(negative control)의 mean 값과 standard deviations 값을 통해 구해지는 것으로서 0.5 이상에 해당하는 경우 신뢰성이 확립된 실험으로 판단할 수 있다. 상기 실험의 Z' factor는 0.82로 나타났기 때문에 잘 검증된 실험임을 알 수 있다.

도 10은 상기 분석을 통해 도출된 약물반응곡선(dose response curve; DRC)을 나타낸 그래프이고, 하기 표 1은 각 화합물들의 DRC를 통해 도출된 IC₅₀, CC₅₀ 및 SI 값이다. 도 10에 나타난 바와 같이, 최종 스크리닝된 본 발명의 화합물들은 SARS-CoV-2에 효능이 있는 것으로 알려진 기존의 화합물들인 클로로퀸(Chloroquine), 렘데시비르(Remdesivir) 및 로피나비르(Lopinavir)보다 훨씬 낮은 IC₅₀ 값을 나타내어 우수한 감염 저해능을 보이는 동시에 동등 수준의 CC₅₀ 값을 나타내어 SI 값도 상대적으로 높기 때문에, 더 안전하고 효과적인 SARS-CoV-2의 감염병(COVID-19) 예방 및 치료제로서 활용될 수 있다.

	IC ₅₀ (μM)	CC ₅₀ (μM)	SI
화학식 1-1	7.43	> 50	6.73
화학식 1-2	3.08	> 50	16.25
화학식 2	7.22	> 50	6.93
Chloroquine	9.71	> 150	15.44
Remdesivir	7.90	> 50	6.33
Lopinavir	20.77	> 50	2.41

이상에서 본 발명의 실시예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명을 한정하는 것이 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 실시예의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 이상에 예시되지 않은 여러 가지의 변형과 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 본 발명의 실시예에 구체적으로 나타난 각 구성 요소는 변형하여 실시할 수 있다. 그리고 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

하기 화학식 2로 표현되는 카보사이클릭 뉴클레오사이드(carbocyclic nucleoside) 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는
코로나바이러스감염증-19(COVID-19) 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
<화학식 2>
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
제1 항에 있어서,
상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염의 SARS-CoV-2에 대한 IC₅₀ 값이 7.5 μM 이하이고, CC₅₀ 값이 50 이상이며, SI 값이 6.5 이상인
COVID-19 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제7 항에 있어서,
상기 카보사이클릭 뉴클레오사이드 유도체 또는 염의 SARS-CoV-2에 대한 IC₅₀ 값이 4 μM 이하이고, SI 값이 16 이상인
COVID-19 예방 또는 치료용 약학적 조성물.