CZ290278B6 - Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, expresní vektor na její bázi, polypeptid jí kódovaný a vakcína obsahující tento vektor nebo polypeptid - Google Patents

Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, expresní vektor na její bázi, polypeptid jí kódovaný a vakcína obsahující tento vektor nebo polypeptid Download PDF

Info

Publication number
CZ290278B6
CZ290278B6 CS1991760A CS76091A CZ290278B6 CZ 290278 B6 CZ290278 B6 CZ 290278B6 CS 1991760 A CS1991760 A CS 1991760A CS 76091 A CS76091 A CS 76091A CZ 290278 B6 CZ290278 B6 CZ 290278B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
expression vector
polypeptide
nucleic acid
acid molecule
melanoma
Prior art date
Application number
CS1991760A
Other languages
English (en)
Inventor
Alan N. Houghton
Original Assignee
Sloan-Kettering Institute For Cancer Research
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23976841&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ290278(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sloan-Kettering Institute For Cancer Research filed Critical Sloan-Kettering Institute For Cancer Research
Publication of CS76091A3 publication Critical patent/CS76091A3/cs
Publication of CZ290278B6 publication Critical patent/CZ290278B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y110/00—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
    • C12Y110/03—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with an oxygen as acceptor (1.10.3)
    • C12Y110/03001—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
    • C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
    • C12N9/0059—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
    • C12Y114/16—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced pteridine as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.16)
    • C12Y114/16002—Tyrosine 3-monooxygenase (1.14.16.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
    • C12Y114/18—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with another compound as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.18)
    • C12Y114/18001—Tyrosinase (1.14.18.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Izolovan molekula nukleov kyseliny k duj c gp75, kter zahrnuje sekvenci cDNA k duj c gp75 fragment uvedenou v popisu; polypeptid k dovan² touto molekulou; expresn vektor, obsahuj c DNA sekvenci podstatnou pro replikaci vektoru spojenou s touto molekulou, upravenou pro expresi v hostiteli; vakc na pro stimulaci nebo zv² en imunitn odpov di u subjektu, kter mu je pod na, kter obsahuje tento expresn vektor a/nebo polypeptid, · inn mno stv adjuvantu a farmaceuticky p°ijateln² nosi .\

Description

Oblast techniky
Vynález se týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující gp75, expresního vektoru na její bázi, polypeptidu kódovaného touto molekulou a protimelanomové vakcíny obsahující tento vektor nebo polypeptid.
Dosavadní stav techniky
Molekulární identifikace imunogenních determinantů lidských rakovinných buněk poskytuje základ pro pochopení imunitní odezvy na rakovinu. U lidských melanomových buněk dosáhly dvě třídy antigenů zvláštní pozornosti při poznání imunit: 1. jednotné antigeny exprimované pouze autologními melanomovými buňkami (Old L. J. (1981) Cancer immunology: The search for specifity. G.H.A. Clowes Memoriál Lecture. Cancer Res. 41:361; Carey T.E., T. Takahashi, L. A. Resnik, H. F. Oettgen a L. J. Old (1976). Cell surface antigens of human malignant melanoma. I. Mixed hemadsorption assay for humoral immunity to cultured autologous melanoma cells. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 73:3278; Reál F. X., M. J. Mattes, A. N. Houghton, H. F. Oettgen, K. O. Lloyd a L. J. Old (1984). Class 1 (Unique) antigens of human melanoma. Identification of a 90 000 dalton cell surface glycoprotein by autologous antibody J. Exp. Med 160:1219), a 2. rozdílné antigeny normálně exprimované buňkami melanocytové linie (Houghton A. N., M. C. Taormina, H. Ikeda, T. Watanabe, H. F. Cettgen a L. J. Old. 1980. Serological survey of normál humans for natural antibody to cell surface antigens of melanoma. Proč. Nati. Acad. Sci. USA. 77:4260; Houghton A. N., M. Eisinger, A. P. Albino, J. G. Caimcross a L. J. Old (1982). Surface antigens of melanocytes and melanomas. Markers ofmelanocyt differentiation and melanoma subsets. J. Exp. Med. 156:1755; Houghton A. N., F. X. Reál, L. J. Davis, C. Cardon-Cardo a L. J. Old (1987). Phenotypic heterogeneity of melanoma: Relation to the differentiation program of melanoma cells. J. Exp. Med. 164:812). Rozdílné antigeny melanocytů byly definovány jejich vztahem k jiným dobře definovaným fenotypovým rysům exprimovaným během melanocytové diferenciace (Houghton A. N., M. Eisinger, A. P. Albino, J. G. Caimcross a L. J. Old (1982). Surface antigens of melanocytes and melanomas. Markers of melanocyte differentiation and melanoma subsets. J. Exp. Med. 156:1755; Houghton A. N., F. X. Reál, J. J. Davis, C. Cardon-Cardo a L. J. Old (1987). Phenotypic heterogeneity of melanoma: Relation to the differentiation of melanoma cells. J. Exp. Med. 164:612), nej zřetelnější jsou syntézy pigmentového melaninu v melanosomech.
Klinická pozorování potvrdila, že imunitní odezva mířená proti antigenům exprimovaným normálními pigmentovými buňkami může samozřejmě ovlivňovat metastázový melanom. Specificky, vitiligo a hypopigmentace u pacientů s melanomem byly spojeny s dobrou prognózou (Nordlund J. J., J. M. Kirkwood, B. M. Forget, G. Milton, D. M. Albert a A. B. Lemer (1983). Vitiligo in patients with metastatic melanoma: a good prognosis sign. J. Am. Acad. Dermatol. 9:689; Bystryn J. C., D. Rigel R. J. Friedman a A. Kopf (1987). Prognostic significance of hypopigmentation in malignant melanoma. Arch. Dermatol. 123:1053.) Z tohoto hlediska mohou být melanosomální protilátky rozpoznávány imunitním systémem. Toto bylo demonstrováno imunoprecipitací gp75 antigenu zautologních melanomových buněk sérovými IgG protilátkami pacienta s metastatickým melanomem (Mattes J. Μ., T. M. Thomson, L. J. Old a K. O. Lloyd (1983). A pigmentation-associated, differentitation antigen of human melanoma defined by a precipitating antibody in human sérum. Int. J. Carcer. 32:717). gp75 antigen je melanosomální polypeptid, který je nejbohatším glykoproteinem syntetizovaným pigmentovými melanocyty a melanomy. (Tai T., M. Eisinger, S. Ogata a K. O. Lloyd (1983). Glycoproteins as differentiation markers in human malignant melanoma and melanocytes. Cancer Res. 43:2773; nepublikovaná pozorování). Epidermální melanocyty, benigní pigmentované léze a primární
-1 CZ 290278 B6 a metastázové melanomy exprimují gp75, ale jiné buněčné typy ne (Thomson T. M., F. X. Reál, S. Murakami, C. Cardon-Cardo, L. J. Old a A. N. Houghton (1988). Differentiation antigens of melanocytes and melanoma: Analysis of melanosome and cell surface markers of human pigmented cells with monoclonal antibodies. J. Invest. Dermatol. 90:459). V předloženém vynálezu je doloženo, že gp75 cDNA má přibližně 90% identitu s aminokyselinovými a nukleotidovými sekvencemi odvozenými od myšího genu, znázorněnými u b (hnědého) lokusu. Hnědý lokus je místo, které determinuje barvu povlaku a ovlivňuje typ syntetizovaného melaninu, naznačující, že gp75 může regulovat nebo ovlivňovat typ syntetizovaného melaninu.
Skutečnost, že IgG protilátky v séru pacienta s metastatickým melanomem byly užity pro imunoprecipitaci gp75 demonstruje, že imunologická tolerance vůči gp75 mohla být přerušena. Vynález proto poskytuje expresní vektory, obsahující gp75 cDNA pro použití jako vakcíny proti melanomu, kde aminokyselinové sekvence peptidů byly stanoveny z gp75 polypeptidu, který byl izolován a čištěn myší monoklonální protilátkou TA99 a kde cDNA klony byly izolovány screeningem oligonukleotidy na bázi peptidových sekvencí.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, která zahrnuje sekvenci cDNA kódující gp75 fragment
GGACC AGCTT TTCTC ACATG
GCACA GGTAC CACCT CCTGC GTCTG GAGAA AGACA TGCAG GAAAT GTTGC
AAGAG CCTTC TTTCT CCCTT CCTTA CTGGA ATTTT GCAAC GGGGA AAAAT
GTCTG TGATA TCTGC ACGGA TGACT TGATG GGATC CAGAA GCAAC TTTGA
TTCCA CTCTA ATAAG CCCAA ACTCT GTCTT TTCTC AATGG CGAGT GG2CT
GTGAC TCCTT GGAAG ATTAT GATAC CCTGG GAACA CTTTG TAACA GCACC
gagga TGGGC CAATT AGGAG AAATC CAGCT GGAAA TGTGG CCAGA CCAAT
GGTGC AACGT CTTCC TGAAC CACAG GATGT CGCTC AGTGC TTGGA AGTTG
GTTTA TTTGA CACGC CTCCT TTTTA TTCCA ACTCT ACAAA CAGTT TCCGA
AACAC AGTGG AAGGT TACAG TGACC CCACG GGAAA GTATG ACCCT GCTGT
TCGAA GTCTT CACAA TTTGG CTCAT CTATT CCTGA ATGGA ACAGG GGGAC
AAACC CÁTTT GTCTT CCCAA GATCC TATTT TTGTC CTCCT GCACA CCTTC
ACAGA TGCAG TCTTT GATGA ATGGC TAAGG AGATA CAATG CTGAT ATATC
CACAT TTCCA TTGGA AAATG CCCCT ATTGG ACATA ATAGA CAATA CAACA
TGGTG CCATT CTGGC CCCCA GTCAC CAACA CAGAA ATGTT TGTTA CTGCT
CCAGA CAACC TGGGA TACAC TTATG AA.
Předmětem vynálezu je také polypeptid kódovaný molekulou izolované nukleové kyseliny popsanou výše.
Předmětem vynálezu je dále také expresní vektor, obsahující DNA sekvenci podstatnou pro replikaci vektoru spojenou s výše uvedenou molekulou nukleové kyseliny, upravenou pro expresi v hostiteli.
Ve výhodném provedení vynálezu je tímto expresním vektorem vaccinia virus nebo Imclone vektor.
Předmětem vynálezu je konečně také vakcína pro stimulaci nebo zvýšení imunitní odpovědi u subjektu, kterému je podána, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje výše uvedený expresní vektor a/nebo polypeptid, účinné množství adjuvantu a farmaceuticky přijatelný nosič.
Přehled obrázku na výkrese
Obr. 1 Imunoprecipitace a analýza složení peptidu proteinů zjištěná mAb TA99 a AU sérem. A. Jednorozměrná SDS-PAGE imunoprecipitátů z 125I-značených lyzátů SK-MEL-19 pomocí mAb TA99 (dráha 1), normálního lidského séra (dráha 2) a AU séra z 1/75 (dráha 3) a z 10/76 (dráha 4). B. Pruhy odpovídající gp75 nebo gp75 ošetřenému Endo H (částečně deglykosylovaný) byly vyříznuty z SDS-polyakrylamidového gelu a složení peptidu bylo analyzováno limitujícím štěpením proteázou S.aureus V8 na SDS-PAGE. -, gp 75; +, gp75 částečně deglykosylovaný Endo H. Autoradiografická expozice byla 2 dny pro TA99 a 5 dnů pro AU peptidy.
Předložený vynález poskytuje izolovanou molekulu nukleové kyseliny, jejíž sekvence kóduje aminokyselinovou sekvenci gp75 nebo jeho fragment.
Aminokyselinovou sekvencí pro fragment gp75 podle jednoho provedení předloženého vynálezu je asn-thr-val-glu-tyr-ser-asp-pro-thr-gly-lys-tyr-asp-pro-ala-val. V dalším provedení je aminokyselinovou sekvencí met-phe-val-thr-ala-pro-asp-asn-leu-gly-tyr-thr-tyr-glu. V ještě dalším provedení je aminokyselinovou sekvencí asn-phe-asp-ser-thr-leu-ileu-ser-pro-asn-serval-phe-ser.
Předložený vynález dále poskytuje izolovanou cDNA molekulu molekuly nukleové kyseliny gp75, jakož i izolovanou cDNA molekulu fragmentu molekuly nukleové kyseliny pro gp75, mající nukleotidovou sekvenci uvedenou v tabulce II, a od ní odvozené aminokyselinové sekvence.
Dále tento vynález poskytuje expresní vektor, obsahující DNA sekvenci podstatnou pro replikaci vektoru spojenou s cDNA molekulou molekuly nukleové kyseliny pro gp75 nebo fragmentem adaptovaným pro expresi v hostiteli. Expresním vektorem může být virus vakcinia nebo výhodně Imclone vektor.
Tento vynález také poskytuje vakcínu pro stimulaci nebo zvýšení tvorby protilátek směrovaných proti gp75 v subjektu, kterému je vakcína podávána, obsahující expresní vektor, obsahující cDNA molekulu, v účinném množství s přísadou a farmaceuticky přijatelným nosičem. Výhodně je subjektem člověk a gp75 je vázán k přísadě. Přísadou může být mikrobiální přísada nebo jiné farmaceutické činidlo.
Dále předložený vynález poskytuje vakcínu pro stimulaci nebo zvýšení produkce protilátek směrovaných proti gp75 v subjektu, kterému je vakcína podávána. Vakcína může obsahovat aminokyselinovou sekvenci odvozenou od molekuly cDNA molekuly nukleové kyseliny pro gp75 nebo fragmentu nebo množství čištěného gp75 nebo jeho fragmentu účinného pro stimulaci nebo zvýšení produkce protilátky v subjektu, účinné množství přísady a farmaceuticky přijatelný nosič. Výhodně je subjektem člověk a gp75 je vázán k přísadě. Přísadou může být mikrobiální přísada nebo jiné farmaceutické činidlo.
Tento vynález také poskytuje způsob stimulace nebo zvýšení produkce protilátek směrovaných proti gp75 v subjektu. Způsob zahrnuje podání vakcíny podle vynálezu v dávce účinné pro stimulaci nebo zvýšení produkce protilátek subjektu.
-3CZ 290278 B6
Vynález dále poskytuje způsob léčení rakoviny u subjektu, který je rakovinou postižen. Způsob zahrnuje podávání vakcíny podle vynálezu v dávce účinné pro léčení rakoviny tomuto subjektu.
Vynález dále poskytuje způsob prevence rakoviny v subjektu postiženém rakovinou. Způsob zahrnuje podání vakcíny podle vynálezu v dávce účinné pro prevenci rakoviny tomuto subjektu. Tento vynález také poskytuje způsob zpoždění recidivy rakoviny v subjektu citlivém k rakovině. Způsob zahrnuje podání vakcíny podle vynálezu v dávce účinné pro zpoždění recidivy rakoviny tomuto subjektu.
Způsoby léčení, prevence a zpožďování recidivy rakoviny mohou byt směrovány k rakovině jako je melanom. Vakcíny jsou vhodné pro prevenci rakoviny, jako je melanom u pacientů s vysokým ohrožením recidivou nebo primárním melanomem.
V těchto metodách může gp75 být navázán na přísadu. Dále může být subjektu před podáním vakcíny podáno účinné množství cyklofosfamidu.
Materiály a metody:
Tkáňová kultura: Melanomová buněčná linie SK-MEL-19 byla kultivována vMEM plus 1 % neesenciálních aminokyselin a penicilinu a streptomycinu, stím rozdílem, že SerumPlus 10% (obj./obj.) (Hazelton Research Products lne., Lenexa, KS) bylo nahrazeno fetálním hovězím sérem (FBS).
Izolace a čištění gp75: Post-nukleová membránová frakce z membránové buněčné linie SK-MEL-19 byla izolována homogenizací ve 20 mM Tris/HCl, ph 7,5, 5 mM MgCl2, 2 mM PMSF a odstředěna při 10 000 g. Membrány byly solubilizovány ve 20 mM Tris/HCl, pH 7,5, 3M KC1 a 5 mM EDTA a odstředěny při 100 000 g. Nerozpustná proteinová frakce byla resuspendována ve 20 mM Tris/HCl, pH 7,5, 0,5% deoxycholát sodný. Detergent-rozpustné proteiny se oddělí odstředěním při 100 000 g. Supematant se dialyzuje proti 20 mM Tris/HCl, pH 7,5, 0,15 M NaCl a 2 mM CHAPS a aplikuje na Mono Q/HR 5/5, Pharmacia LKB Biotechnology lne. Pistacaway, NJ) kolonu ekvilibrovanou 20 mM Tris/HCl, ph 7,5, 0,15 M NaCl a 2 mM (3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-amonio]-l-propansulfonátem (CHAPS) (pufr A). Navázané proteiny se eluují lineárním gradientem 0-1,0 M NaCl v pufru A. Frakce jsou zkoušeny na gp75 kompetitivní inhibiční zkouškou.
Frakce, obsahující gp75 byly spojeny, dialyzovány proti Noc A kolonovému pufru (10 mM Tris/HCl, pH 7,5, obsahujícímu 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2 a 2 mM PMSF) a aplikovány na Con-A Sepharosovou kolonu. Nenavázané proteiny byly odstraněny promytím kolonovým pufrem. Proteiny navázané na Noc A byly eluovány 0,25 M a-D-methylmannopyranosidem v Noc A kolonovém pufru. Frakce, obsahující gp75 byly spojeny a dialyzovány proti 10 mM Tris/HCl, ph 7,5, 2 mM CHAPS a 2 mM PMSF (CB) a aplikovány kmyší monoklonální protilátce (mAB) TA99 (Thomson T.M., J. M. Mattes, L. Roux, L. J. Old a K. O. Lloyd (1985). Pigmentation-associated glycoprotein of human melanoma and melanocytes: Defination with a mouše monoclonal antibody. J. Invest. Dermatol. 85:169) na Affi-Gel 10 afínitní kolonu. Gel byl postupně vymýván vždy 6 ml CB, CB + 1M NaCl, CB a CB + 2 mM CHAPS. Navázaný gp75 byl z kolony eluován O,1M glycinem-HCl, pH 3,1, obsahujícím 2 mM CHAPS.
Kompetitivní inhibiční zkouška pro gp75: Během čištění byl gp75 monitorován a kvantifikován měřením schopností frakcí inhibovat vazbu 300 ng/ml mAB TA99 k SK-MEL-19 buňkám fixovaným ve směsi methanol:aceton (1:1 obj./obj.) enzymovou imunozkouškou (ELISA) (Houghton A. N., H. Brooks, R. J. Cote, M. C. Taormina, H. F. Oettgen a L. J. Old (1983). Detection of cell surface and intracellular antigens by human monoclonal antibodies: hybrid Cells derived from lymphocytes of patients with malignant melanoma. J. Exp. Med. 158:53).
-4CZ 290278 B6
Imunoprecipitace, gelová elektroforéza a mapování peptidu: Jodace na Noc A-Sepharose navázané proteinové frakce SK-MEL-19 metodou chloraminu T a imunoprecipitace smAB TA99 a AU sérem byly provedeny jak je popsáno (Mattes J. Μ., T. M. Thomson, L. J. Old K. O. Lloyd (1983). A pigmentation-associated, differentiation antigen of human melanoma defmed by a precipitating antibody in human sérum. Int. J. Cancer. 32:717). Proteiny byly analyzovány elektroforézou na SDS-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) (Laemmli U. K. (1970). Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nátuře. 227:680). Pro štěpení endoglykosidázou H (Endo H), byly imunoprecipitáty suspendovány v 0,4% SDS, zahřívány na 100 °C po 5 minuty a štěpeny 1 mU Endo H (Genzyme Corporation, Boston, MA) ve 100 mM citrátovém pufru, pH 5,5 16 hodin při 37 °C. Dvourozměrná elektroforéza za použití ampholinů pH 5-7 (LKB-Produkter, Bromma, Švédsko) byla provedena podle O'Farrela (0'Farrel P. H (1975). High resolution two-dimensional electrophoresis ofproteins. J. Biol. Chem. 250:4007). Mapování peptidů bylo provedeno u imunoprecipitovaného gp75 limitující proteolýzou V8 proteázou Staphylococcus aureus (V8 proteáza) (Boehringer Mannheim Biochemicals. Indianopolis, IN) v SDS-PAGE podle Clevelanda a spol. (Cleveland D. W, S. G. Fischer, M. W. Kirschner a U. K. Laemmli (1977). Peptide mapping by limited proteolysis in sodium dodecyl sulfáte and analysis by gel electrophoresis. J. Biol. Chem. 252:1102).
Sekvenování peptidů: Sekvenování peptidů bylo provedeno na zařízení Harvard University Microchemistry. Čištěný gp75 (12 pg) eíektroblotovaný na nitrocelulóze byl štěpen V8 proteázou (1:20 hmotn./hmotn.) podle Aebersolda (Aebersold R. H., J. Leavitt, R. A. Saavedra a L. E. Hood (1987). Intemal amino acid sequence analysis of proteins separated by one- or two- dimensional gel electrophoresis after in situprotease digestion on nitrocellulose. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 84:6970) a výsledné peptidy byly separovány na Brownlee RP-300 2,1x100 mm C8 koloně při 38 °C. Některé píky z V8 proteazového digestu byly spojeny a sušeny. Kompletní redukce a alkylace byla provedena přídavkem 50 μΐ 8 M močoviny/0,4 M hydrogenuhličitan amonný pufrem, pH 8,0, 5 μΐ 100 mM dithiothreitolu a zahříváním na 50 °C 15 minut. Vzorek byl pak inkubován s 5 μΐ 45 mM jodoctové kyseliny po 5 minut při teplotě místnosti a zředěn 140 μΐ destilované vody. Další štěpení redukované a alkylované peptidové frakce trypsinem (1:25 hmotn./hmotn.) bylo prováděno přes noc při 37 °C. Frakce, které byly sekvenovány, byly přímo aplikovány na polybrenem precyklované filtry ze skleněných vláken a sekvenovány na ABI477A sekvenátoru proteinů. Aminokyseliny byly odděleny pomocí ABI 120A online HPLC. Pro každý peptid bylo minimálně provedeno 20 cyklů. Reprodukovatelný výtěžek HPLC za běžných laboratorních podmínek byl 93 %. Jsou uváděny aminokyselinové sekvence pouze těch peptidů s nejvyššími souhlasnými výsledky.
Klonování a sekvenování gp75 cDNA: cDNA knihovna byla konstruována zmelanomové buněčné linie SK-MEL-19 a byly použity oligonukleotidové sondy pro izolaci dvou gp75 cDNA klonů podle metod již popsaných (Bouchard Β., B. Fuller, S. Vijayasaradhi a A. N. Houghton (1989). Induction of pigmentation in mouše fibroblasts by expression of human tyrosinase. J. Exp. Med. 169:2029). Složení oligonukleotidových sond bylo: 5'CTCGAAGGTGAAGCCCAGGTTGTCGGGGGCGGTCACGAACATCTC 3'. Dva cDNA klony (1,8 kb a 2,0 kb) byly sekvenovány podle metody Sangera a spol., (Sanger F., S. Nicklen a A. R. Coulson (1977). DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proč. Nati. Acad. Sci. USA. 74:5463) (Stratagena Cloning Systems, La Jolla, CA).
Výsledky a diskuze:
Jak myší mAb TA99, tak AU sérum pacienta s melanomem sráží 75-kDa antigen a mAb přečišťuje gp75 antigen srážený AU sérem (Thomson T. M., J. M. Mattes, L. Roux, L. J. Old a K. O. Lloyd (1985). Pigmentation-associated glycoprotein of human melanoma and melanocytes: Defmition with a mouše monoclonal antibody. J. Invest. Dermatol. 85:169). Protože mAb TA99 byl použit pro čištění gp75 zmelanomové buněčné linie SK-MEL-19, je důležité potvrdit, že mAb TA99 detekuje pouze gp75 antigen rozpoznávaný AU sérem. V předcházejících studiích
-5CZ 290278 B6 autoři prokázali, že mAb TA99 nereagoval s lidskou tyrosinázou, 75-80 kDa glykoprotein je také exprimován v pigmentovaných melanocytech (Bouchard B., B. Fuller, S. Vijayasaradhi a A. N.
Houghton (1989). Introduction of pigmentation in mouše fibroblasts by expression of human tyrosinase. J. Exp. Med. 169:2029). Nicméně z těchto experimentů nebylo nalezeno pravidlo, že mAb TA99 křížově reaguje s dalšími polypeptidy exprimovanými SK-MEL-19.
Proteiny imunoprecipitované mAb TA99 a AU sérovou protilátkou byly analyzovány jednoa dvourozměrnými SDS-PAGE a peptidy byly mapovány za použití limitující proteolýzy.
S. aureus V8 proteázou. Proteiny srážené jak mAb TA99 i protilátkami AU séra mají shodnou molekulovou hmotnost (75 kDa), izoelektrický bod (5,5-5,9) (údaje neuvedeny) a složení peptidu (obr. 1), potvrzující, že TA99 a AU sérum rozpoznávají stejné gp75 molekuly.
gp75 antigen byl čištěn jak je popsáno v materiálech a metodách. Afinita čištěného gp75 byla použita pro sekvenování peptidu. Aminokyselinové sekvence tří vnitřních peptidů byly získány proteolytickým štěpením čištěného gp75 V8 proteázou a trypsinem. Sekvence tří peptidů jsou uvedeny v tabulce I. Je zde 90% shoda s aminokyselinovými sekvencemi odvozenými z klonu myší cDNA, pMT4, izolovanými Shibahara S, Y. Tomita, T. Sakakura, C. Nagar, B. Chuudhuri a R. Muller (1986). Cloning and Expression of cDNA encoding mouše tyrosinase. Nucleic Acid Res. 14:2413). Oligonukleotidové sondy byly odvozeny zpeptidových sekvencí gp75 a použity ke screeningu cDNA knihovny konstruované z lidské melanomové linie SK-MEL-19. Dva cDNA klony (1,8 kb a 2,0 kb) byly izolovány z cDNA knihovny SK-MEL-19. Částečné nukleotidové sekvence cDNA klonů (GP 75-1 a —2), jedna z nich je uvedena v tabulce II, vykazují 88,6% shodu spMT4 (mezi nukleotidy 649-1437 v otevřeném čtecím rámečku). Odvozená aminokyselinová sekvence gp75-l a -2 vykazuje 93,6% shodu s aminokyselinovou sekvencí odvozenou od pMT4 mezi aminokyselinovými zbytky 219-467. Byla zde 55,3% shoda mezi cDNA sekvencemi gp75 a lidskou tyrosinázou (Bouchard B., B. Fuller, S. Vijayasaradhi a A. N. Houghton (1989). Induction of pigmentation in mouše fibroblasts by expression of human tyrosinase. J. Exp. Med. 169:2029) mezi nukleotidy 618-1344 tyrosinázy (data neuvedena).
Tabulka I
Aminokyselinové sekvence tří peptidů odvozených od gp75
1. Asn-Thr-Val-Glu-Gly-Tyr-Ser-Asp-Pro-Thr-Gly-Lys-Tyr-Asp-Pro-Ala-Val
2. Met-Phe-Val-Thr-Ala-Pro-Asp-Asn-Leu-Gly-Tyr-Thr-Tyr-Glu
3. Asn-Phe-Asp-Ser-Thr-Leu-Ileu-Ser-Pro-Asn-Ser-Val-Phe-Ser
Polotučná písmena: aminokyselinové zbytky, které jsou odlišné od zbytků předpovězených z myší cDNA pMT4 (Shibahara S., Y. Tomita. T. Sukakura, C. Nagar, B. Chaudhuri a R. Muller. (1986). Cloning and expression of cDNA encoding mouše tyrosinase. Nucleic Acid Res. 14:2413).
-6CZ 290278 B6
Tabulka II
Parciální cDNA sekvence gp75
GGACCAGCTTTTCTCACATGGCACAGGTACCACCTCCTGCGTCTGGAGAAAGACATGC AGGAAATGTTGCAAGAGCCTTCITTCTCCCTTCCTTACTGGAATTTTGCAACGGGGAA AAATGTCTGTGATATCTGCACGGATGACTTGATGGGATCCAGAAGCAACTTTGATTCC ACTCTAATAAGCCCAAACTCTGŤCTTTTCTCAATGGCGAGTGGTCTGTGACTCCTTGG AAGATTATGATACCCTGGGAACACTTTGTAACAGCACCGAGGATGGGCCAATTAGGAG AAATCCAGCTGGAAATGTGGCCAGACCAATGGTGCAACGTCTTCCTGAACCACAGGAT GTCGCTCAGTGCTTGGAAGTTGGTTTATTTGACACGCCTCCTTTTTATTCCAACTCTA CAAACAGTTTCCGAAACACAGTGGAAGGTTACAGTGACCCCACGGGAAAGTATGACCC TGCTGTTCGAAGTCTTCACAATTTGGCTCATCTATTCCTGAATGGAACAGGGGGACAA ACCCATTTGTCTTCCCAAGATCCTATTTTTGTCCTCCTGCACACCTTCACAGATGCAG TCTTTGATGAATGGCTAAGGAGATACAATGCTGATATATCCACATTTCCATTGGAAAA TGCCCCTATTGGACATAATAGACAATACAACATGGTGCCAŤTCTGGCCCCCAGTCACC AACACAGAAATGTTTGTTACTGCTCCAGACAACCTGGGATACACTTATGAA
Těsná homologie mezi lidským gp75 a vydedukovaným produktem myšího pNT4 genu vrhá určité světlo na možnou strukturu a funkci gp75. pMT4 klon byl izolován z myších melanocytových buněk (Shibahara S., X. Tomita. T. Sakakura, C. Nagar. B. Chaudhuri a R. Muller (1986). Cloning and expression of cDNA encoding mouše tyrosinase. Nucleic Acid Res. 14:2413). O originální pMT4 cDNA se předpokládalo, že kóduje myší tyrosinázu, která je mapována u myšího c (bílého) lokusu. Nicméně další dvě studie prokázaly, že pMT4 se liší od myší tyrosinázy (Yamamoto H., S. Takeuchi, T. Kudo, K. Makino, A. Nakata, T. Shinoda aT. Takechi (1987). Cloning and sequencing of mouše tyrosinase cDNA. Jpn. J. Genetics. 62:271; Muller G., S. Ruppert. E. Schimd a G. Schutz (1988). Functional analysis of altematively spliced tyrosinase gene transcripts. EMBO (Eur. Mol. Biol. Organ. J.) 7:2723; Jackson I. J. (1988). cDNA encoding tyrosinase-related protein maps to the brown locus in mice. Proč. Nati. Acad. Sci. USA. 85:4392). Pravděpodobně je sekvence gp75 odlišná od sekvence lidské tyrosinázy, ačkoliv je zde omezená shoda (43,1 %) mezi gp75 a odvozenou aminokyselinovou sekvencí lidské tyrosinázy (mezi aminokyselinovými zbytky 208-459). Funkce gp75 a pMT4 produktu je potvrzena zjištěním, že pMT4 je mapován k b (hnědému) lokusu myši (Jackson I. J. (1988). A cDNA encoding tyrosinase-related protein maps to the brown locus in mice. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85:4392), oblasti, která reguluje barvu srsti (Silvers W. K. (1979). Comparative genetics of coat colour in mammals. In: The Coat Colors in Mice. Springer Verlag, New York 1). Shoda mezi gp75 a dedukovanou aminokyselinovou sekvencí pMT4 umožňuje formální identifikaci produktu lidského homologu genu myšího hnědého lokusu. Vzhledem kjeho melanosomální lokalizaci a strukturní podobnosti s tyrosinázou, může gp75 molekula regulovat syntézu melaninu a determinuje typ syntetizovaného melaninu.
Bylo stanoveno, že melanosomální determinanty a další intracelulámí antigeny nejsou potenciálními cíly pro imunoterapii melanomu. Nicméně v poslední době bylo zjištěno, že intracelulámí proteiny mohou být připraveny a prezentovány jako peptidy k cytotoxickým T buňkám (CTL) buňkami poskytujícími antigen (Townsend A. R. M. a H. Bodmer (1989). Antigen recognition by class I-restricted T lymphocytes. Ann. Rev. Immunol. 7:601). Toto zjištění otevírá teoretickou možnost, že T buňka reagující proti melanomu by mohla být řízena proti molekulám exprimovaným v nádorových buňkách. Alternativně, melanosomální komponenty, které jsou normálně transportovány mimo melanocyt během maturace, by se mohly akumulovat
-7CZ 290278 B6 v extracelulámím prostoru okolo tumorových buněk, nebo by lokální tkáňová nekróza mohla vést k uvolňování a deponování v intracellámích produktech. Pro podpoření schopnosti gp75 se radioaktivně značený TA99 mAb specificky lokalizuje k lidským melanomovým transplantátům v nu/nu myši (Welt S., J. M. Mattes, R. Grando, T. M. Thomson, R. W. Leonard, P. B. Zanzonico, R. E. Bigler, S. Yeh, H. F. Oettgen a L. J. Old (1987). Monoclonal antibody to an intracellular antigen images human melanoma transplants in nu/nu mice. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 84:4200), což indikuje dostupnost antigenu k protilátce v místech tumoru.
IgG protilátky u AU pacienta s melanomem rozpoznávají determinanty na gp75, na čemž se podílejí melanomové buňky a normální melanocyty (Mattes J. Μ., T. M. Thomson, L. J. Old aK. O. Lloyd (1983). A pigmentation-associated, differentiation antigen of human melanoma defined by a precipitating antibody in human sérum. Int. J. Cancer 32:717). Z izolací cDNA klonů, které kódují gp75, by mohlo být možné studovat strategie pro aktivní imunizaci proti gp75. Jsou zde alespoň dva požadavky na účinnou indukci CTL odezev ke gp75: 1) imunitní tolerance ke gp75 musí být přerušena a 2) gp75 peptidy musí být produkovány a účinně přítomny v hlavních histokompatibilních antigenech melanomových buněk. Alternativně je možné, že diferencující antigeny melanocytů by mohly nést unikátní determinanty. Geny, kódující produkty exprimované normálními melanocyty, by mohly být mutovány nebo přestavěny během maligní transformace, generující nové epitopy pro rozpoznávání CTL a protilátek. Z tohoto hlediska nejlépe charakterizovaným jedinečným antigenem lidských melanosomových buněk je terminant melanotransferrinu, 95-97 kDa glykoprotein, exprimovaný melanocyty a melanomovými buňkami (Reál F. X., M. J. Mattes, A. N. Houghton, H. F. Oettgen, K. O. Lloyd a L. J. Old (1984). Class 1 (unique) antigens of human melanoma. Identification of 90 000 dalton cell surface glycoprotein by autologous antibody. J. Exp. Med. 160:1219; Furakawa K. S., Furakawa K., F. X. Reál, L. J. Old a K. O. Lloyd (1989). A unique antigenic epitope of human melanoma is carried on the common melanoma glycoprotein gp75/p97. J. Exp. Med. 169:585). Tuto možnost hájí i skutečnost, že genetické změny byly detekovány s vysokou četností a rozsahu v genomu lidských melanomových buněk. (Dracopoli, N. C., A. N. Houghton a L. J. Old (1985). Loss of polymorphic restriction fragments in malignant melanoma: Implications for tumor heterogeneity. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82:1470; Dracopoli N. C., B. Alhadeff, A. N. Houghton a L. J. Old (1987). Loss of heterozygosity at autosomal and x-linked loci during tumor progression in patient with melanoma. Cancer Res. 47:3995).

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, která zahrnuje sekvenci cDNA kódující gp75 fragment
    GGACC AGCTT TTCTC ACATG GCACA GGTAC CACCT CCTGC GTCTG GAGAA AGACA TGCAG GAAAT GTTGC AAGAG CCTTC TTTCT CCCTT CCTTA CTGGA ATTTT GCAAC GGGGA AAAAT GTCTG TGATA TCTGC ACGGA TGACT TGATG GGATC CAGAA GCAAC TTTGA TTCCA CTCTA ATAAG CCCAA ACTCT GTCTT TTCTC AATGG CGAGT GG7CT GTGAC TCCTT GGAAG ATTAT GATAC CCTGG GAACA CTTTG TAACA GCACC GAGGA TGGGC CAATT AGGAG AAATC CAGCT GGAAA TGTGG CCAGA CCAAT GGTGC AACGT CTTCC TGAAC CACAG GATGT CGCTC AGTGC TTGGA AGTTG GTTTA TTTGA CACGC CTCCT TTTTA TTCCA ACTCT ACAAA CAGTT TCCGA AACAC AGTGG AAGGT TACAG TGACC CCACG GGAAA GTATG ACCCT GCTGT TCGAA GTCTT CACAA TTTGG CTCAT CTATT CCTGA ATGGA ACAGG GGGAC AAACC CATTT GTCTT CCCAA GATCC TATTT TTGTC CTCCT GCACA CCTTC ACAGA TGCAG TCTTT GATGA ATGGC TAAGG AGATA CAATG CTGAT ATATC CACAT TTCCA TTGGA AAATG CCCCT ATTGG ACATA ATAGA CAATA CAACA TGGTG CCATT CTGGC CCCCA GTCAC CAACA CAGAA ATGTT TGTTA CTGCT CCAGA CAACC TGGGA TACAC TTATG AA.
  2. 2. Polypeptid kódovaný molekulou izolované nukleové kyseliny podle nároku 1.
  3. 3. Expresní vektor, obsahující DNA sekvenci podstatnou pro replikaci vektoru spojenou s molekulou nukleové kyseliny podle nároku 1, upravenou pro expresi v hostiteli.
  4. 4. Expresní vektor podle nároku 3, kterým je vaccinia virus.
  5. 5. Expresní vektor podle nároku 4, kterým je Imclone vektor.
  6. 6. Vakcína pro stimulaci nebo zvýšení imunitní odpovědi u subjektu, kterému je podána, vyznačující se tím,že obsahuje expresní vektor podle nároku 3, účinné množství adjuvantu a farmaceuticky přijatelný nosič.
  7. 7. Vakcína pro stimulaci nebo zvýšení imunitní odpovědi u subjektu, kterému je podána, vyznačující se tím,že obsahuje a) polypeptid podle nároku 2, b) účinné množství adjuvantu a c) farmaceuticky přijatelný nosič.
  8. 8. Vakcína pro stimulaci nebo zvýšení imunitní odpovědi u subjektu, kterému je podána, vyznačující se tím, že obsahuje a) antigenní složku zvolenou ze souboru sestávajícího z i) expresního vektoru podle nároku 3 a/nebo ii) polypeptidu podle nároku 2, b) účinné množství adjuvantu a c) farmaceuticky přijatelný nosič.
CS1991760A 1990-03-22 1991-03-21 Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, expresní vektor na její bázi, polypeptid jí kódovaný a vakcína obsahující tento vektor nebo polypeptid CZ290278B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US49743190A 1990-03-22 1990-03-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS76091A3 CS76091A3 (en) 1992-02-19
CZ290278B6 true CZ290278B6 (cs) 2002-07-17

Family

ID=23976841

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS1991760A CZ290278B6 (cs) 1990-03-22 1991-03-21 Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, expresní vektor na její bázi, polypeptid jí kódovaný a vakcína obsahující tento vektor nebo polypeptid

Country Status (21)

Country Link
US (2) US6168946B1 (cs)
EP (2) EP0522078B1 (cs)
JP (2) JP3336006B2 (cs)
AT (1) ATE187493T1 (cs)
AU (1) AU660412B2 (cs)
CA (1) CA2078773C (cs)
CZ (1) CZ290278B6 (cs)
DE (1) DE69131829T2 (cs)
DK (1) DK0522078T3 (cs)
ES (1) ES2141089T3 (cs)
FI (1) FI113786B (cs)
GR (1) GR3032804T3 (cs)
HK (1) HK1014732A1 (cs)
HU (1) HU218416B (cs)
IE (2) IE910820A1 (cs)
NO (1) NO311366B1 (cs)
NZ (1) NZ237532A (cs)
PL (3) PL169168B1 (cs)
PT (1) PT97103B (cs)
SK (1) SK282873B6 (cs)
WO (1) WO1991014775A1 (cs)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE910820A1 (en) * 1990-03-22 1991-09-25 Sloan Kettering Inst Cancer Gp75 as a tumor vaccine for melanoma
US7041801B1 (en) * 1995-06-07 2006-05-09 Vanderbilt University Antibodies binding to polypeptides encoded by developmentally-regulated endothelial cell locus-1
US6083703A (en) * 1996-02-09 2000-07-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Identification of TRP-2 as a human tumor antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes
US7015312B1 (en) 1996-02-09 2006-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Antibodies to the protein product encoded by ORF3 of the TRP-1 gene and compositions and kits thereof
US7001600B1 (en) 1996-02-09 2006-02-21 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Identification of TRP-2 as a human tumor antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes
US5840839A (en) * 1996-02-09 1998-11-24 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein
JP2004527449A (ja) * 2000-02-15 2004-09-09 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア テロメラーゼ逆転写酵素を用いる癌を治療するための万能ワクチンと方法
US6613534B2 (en) 2001-03-20 2003-09-02 Wake Forest University Health Sciences MAP-2 as a determinant of metastatic potential
US20030113919A1 (en) * 2001-08-17 2003-06-19 Aventis Pasteur, Ltd. Immunogenic targets for melanoma
US20030157720A1 (en) * 2002-02-06 2003-08-21 Expression Technologies Inc. Protein standard for estimating size and mass
EP2171071B1 (en) 2007-06-15 2015-08-05 Genelux Corporation Vaccinia virus vectors encoding a sodium-dependent transporter protein for imaging and/or treatment of tumors
CN101970500B (zh) 2008-03-12 2013-08-14 伊姆克罗尼责任有限公司 抗tyrp1抗体

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504010B1 (fr) * 1981-04-15 1985-10-25 Sanofi Sa Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation
US4808704A (en) * 1981-09-30 1989-02-28 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibodies to cell surface antigens of human malignant melanoma
US4806628A (en) * 1982-11-30 1989-02-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibodies against melanocytes
US4591572A (en) * 1983-04-01 1986-05-27 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Pigmentation associated, differentiation antigen of human melanoma and autologous antibody
USH819H (en) * 1984-04-30 1990-09-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Energy Palladium-109 labeled anti-melanoma monoclonal antibodies
US4851510A (en) * 1984-11-30 1989-07-25 Wadley Technologies, Inc. Monoclonal antibodies to novel melanoma-associated antigens
US4798790A (en) * 1985-07-18 1989-01-17 Sloan-Kettering Institute Monoclonal antibody specific for a pigmentation associated antigen
US5262177A (en) * 1986-02-07 1993-11-16 Oncogen Recombinant viruses encoding the human melanoma-associated antigen
US5141742A (en) * 1986-02-07 1992-08-25 Oncogen Vaccines against melanoma
US5009995A (en) * 1986-10-27 1991-04-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibodies to melanoma cells
US5059523A (en) * 1988-05-02 1991-10-22 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Cell-surface glycoproteins of human sarcomas
US5009495A (en) * 1989-05-26 1991-04-23 Williams Robert D Hinge for eyeglasses
DK0444181T3 (da) 1989-08-04 2002-02-25 Schering Ag C-erbB-2 eksternt domæne: gp75
IE910820A1 (en) * 1990-03-22 1991-09-25 Sloan Kettering Inst Cancer Gp75 as a tumor vaccine for melanoma
US5262117A (en) * 1990-10-12 1993-11-16 Centro Sviluppo Settori Impiego S.R.L. Process for preparing thermoinsulating and/or structural formed articles and products so obtained
US6180604B1 (en) * 1996-08-21 2001-01-30 Micrologix Biotech Inc. Compositions and methods for treating infections using analogues of indolicidin

Also Published As

Publication number Publication date
ES2141089T3 (es) 2000-03-16
DE69131829T2 (de) 2000-06-15
CA2078773A1 (en) 1991-09-23
US20050037462A1 (en) 2005-02-17
NZ237532A (en) 1993-03-26
CS76091A3 (en) 1992-02-19
AU660412B2 (en) 1995-06-29
SK282873B6 (sk) 2003-01-09
PT97103B (pt) 1999-02-26
PL169105B1 (pl) 1996-06-28
PL169168B1 (pl) 1996-06-28
DK0522078T3 (da) 2000-06-13
HU218416B (hu) 2000-08-28
IE20000918A1 (en) 2001-05-30
PL168235B1 (pl) 1996-01-31
EP0965640A1 (en) 1999-12-22
HUT62934A (en) 1993-06-28
JPH06501837A (ja) 1994-03-03
IE910820A1 (en) 1991-09-25
EP0522078A4 (en) 1993-05-26
CA2078773C (en) 2001-07-03
EP0522078B1 (en) 1999-12-08
WO1991014775A1 (en) 1991-10-03
EP0522078A1 (en) 1993-01-13
HK1014732A1 (en) 1999-09-30
AU7690691A (en) 1991-10-21
PL289550A1 (en) 1992-07-27
NO311366B1 (no) 2001-11-19
ATE187493T1 (de) 1999-12-15
JP2002241314A (ja) 2002-08-28
FI924222A (fi) 1992-09-21
NO923659L (no) 1992-11-06
GR3032804T3 (en) 2000-06-30
PT97103A (pt) 1991-12-31
JP3336006B2 (ja) 2002-10-21
NO923659D0 (no) 1992-09-21
DE69131829D1 (de) 2000-01-13
US6168946B1 (en) 2001-01-02
FI113786B (fi) 2004-06-15
FI924222A0 (fi) 1992-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Vijayasaradhi et al. The melanoma antigen gp75 is the human homologue of the mouse b (brown) locus gene product.
Escobedo et al. cDNA cloning of a novel 85 kd protein that has SH2 domains and regulates binding of PI3-kinase to the PDGF β-receptor
AU701105B2 (en) Colon cell and colon cancer cell associated nucleic acid molecules, protein and peptides
CZ290278B6 (cs) Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující gp75, expresní vektor na její bázi, polypeptid jí kódovaný a vakcína obsahující tento vektor nebo polypeptid
EA005140B1 (ru) Соединения и способы для лечения и диагностики рака легкого
KR20010083111A (ko) 전립선암의 치료 및 진단을 위한 조성물 및 방법
KR19990087802A (ko) 전립선암의 면역치료 및 면역진단을 위한 화합물 및 방법
CA2478413C (en) Genetic products differentially expressed in tumors and use thereof
Tanaka et al. Over‐expression of the testis‐specific gene TSGA10 in cancers and its immunogenicity
Cohen-Solal et al. Identification and characterization of mouse Rab32 by mRNA and protein expression analysis
RU2307666C2 (ru) Полинуклеотид, модулирующий пролиферацию раковых клеток (варианты), полипептид, моноклональное антитело, вектор экспрессии, клетка-хозяин, лекарственное средство для лечения пролиферативного заболевания, фармацевтическая композиция, применение полипептида для получения лекарственного средства
JP2002511271A (ja) 新規膜メタロプロテアーゼｎｅｐｉｉ及び治療において有用な阻害因子のスクリーニングのためのその使用
JP4995399B2 (ja) 切断されたｂａｒｄ１タンパク質、並びにその診断上及び治療上の利用
JP4037451B2 (ja) 大腸細胞および大腸癌細胞関連核酸分子、タンパク質およびペプチド
US20030109027A1 (en) TSLL2 gene
RO123600B1 (ro) Anticorpi policlonali anti-tirozinază umană
CA2506684A1 (en) Immunogenic epitopes for fibroblast growth factor 5 (fgf-5) presented by hla-a3 and hla-a2

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20060321