PL168235B1 - Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL - Google Patents
Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL168235B1 PL168235B1 PL91289550A PL28955091A PL168235B1 PL 168235 B1 PL168235 B1 PL 168235B1 PL 91289550 A PL91289550 A PL 91289550A PL 28955091 A PL28955091 A PL 28955091A PL 168235 B1 PL168235 B1 PL 168235B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- melanoma
- vaccine
- human
- antigen
- cdna
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 22
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 title 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 40
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 claims 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 50
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 8
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 5
- 101000608782 Mus musculus Tyrosinase Proteins 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 101000606090 Homo sapiens Tyrosinase Proteins 0.000 description 4
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 4
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 4
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010050789 Hypochromasia Diseases 0.000 description 1
- 208000003367 Hypopigmentation Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010090665 Mannosyl-Glycoprotein Endo-beta-N-Acetylglucosaminidase Proteins 0.000 description 1
- 238000003820 Medium-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 description 1
- 102000051089 Melanotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 108700038051 Melanotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 229960001269 glycine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001894 hemadsorption Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003425 hypopigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N melamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(N)=N1 JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-M propane-1-sulfonate Chemical compound CCCS([O-])(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000734 protein sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y110/00—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12Y110/03—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with an oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12Y110/03001—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12N9/0059—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/16—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced pteridine as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.16)
- C12Y114/16002—Tyrosine 3-monooxygenase (1.14.16.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/18—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with another compound as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.18)
- C12Y114/18001—Tyrosinase (1.14.18.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1 . Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej stymulujacej albo wzma- gajacej wytwarzanie przeciwcial skierowanych przeciw antygenowi gp 75 w organizmie osobnika, któremu podaje sie szczepionke, znamienny tym, ze wytwarza sie polipeptyd o sekwencji, aminokwasowej wyprowadzonej z sekwencji nukleotydowej cDNA przedstawio nej w tabeli 2, skutecznie stymulujacy lub wzmagajacy wytwarzanie przeciwcial w organi zmie osobnika, dla którego przeznaczona jest szczepionka, a nastepnie wytworzony polipeptyd laczy sie ze skuteczna iloscia adiuwanta i z dopuszczalnym farmakologicznie nosnikiem. P L 168235 B 1 PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej. Szczepionka wytworzona sposobem według wynalazku, stymuluje albo wzmaga wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciw antygenowi gp 75 w organizmie osobnika, któremu się ją podaje. Służy ona do leczenia, zapobiegania rozwojowi lub do opóźniania nawrotów nowotworu, zwłaszcza czerniaka.
Identyfikacja molekularna immunogennych determinant na ludzkich komórkach nowotworowych stanowi podstawę do wyjaśnienia odpowiedzi immunologicznej na nowotwór. Przedmiotem szczególnego zainteresowania stały się dwie klasy antygenów na komórkach czerniaka ludzkiego jako cele rozpoznania immunologicznego:
l/unikalne antygeny wydzielane jedynie przez autologiczne komórki czerniaka oraz
2/ antygeny różnicowania, wydzielane normalnie przez komórki wywodzące się z melanocytów. Pierwsza klasa antygenów jest opisana przez L.J.Old’a, 1981, Cancer immunology: The search for specifity, G.H.A. Clowes Memorial Lecture. Cancer Res. 1981, 41, 361/, T.E.Carey’a i wsp. /Carey T.E., Takahashi T., Resnick L.A., Oettgen H.F. i L.J.Old: Cell surface antigens of human malignant melanoma. I.Mixed hemadsorption assay for humoral immunity to cultured autologous melanoma cells, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1976, 73 3278/,Real’a F. X. i wsp. /Real F.X., Nattes M.J., Houghton A.N., Oettgen H.F., Lloyd K.O. i Old L.J., , Class 1 /unique/ antigens of haman melanoma. Identification of a 90 000 dalton cell surgace glycoprotein by autologous antibody’ J.Exp.Med. 1984, 160, 1219/. Piśmiennictwo na temat drugiej klasy antygenów to: Houghton A.N. Taormina M.C., Ikeda H., Watanabe T., Oettgen H.F. i Old L.J. Serological survey of normal humans for natural antibody to cell surface antigens of melanoma, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1980,77,4260; Houghton A.N., Eisinger M., Albino A.P., Cairncross
J.G., i Old L.J.: Surface antigens of melanocytes and melanomas. Markers of melanocyte differentiation and melanoma subsets, J.Exp.Med., 1982,156,1755; Houghton A.N.,Real F.X., Davis L.J., Cardon-Cardo C. i Old L.J.: Phenotypic heterogeneity of melanoma: Relation to the differentiation program of melanoma cells. J.Exp.Med. 1987,164,812. Antygeny różnicowania melanocytów definiuje się na podstawie ich powiązań z innymi dobrze zdefiniowanymi cechami fenotypowymi, ujawniającymi się podczas różnicowania się melanocytów, przy czym najbardziej wyraźną cechą jest synteza barwnika melaniny w melanosomach. Zagadnienie to jest opisane w następujących pracach: Houghton A.N., Eisinger M., Albino A.P., Cairncross J.G. i Old L.J., Surface antigens of melanocytes and melanomas. Merkers of melanocyte differentiation and melanoma subsets, J.Exp.Med., 1982, 156, 1755; Houghton A.N., Real F.X., Davis L.J., Cardon-Cardo C. i Old L.J., Phenotypic heterogeneity of melanoma: Relation to the differentiation program of melanoma cells, J.Exp.Med. 1987, 164, 812.
W oparciu o obserwacje kliniczne sugeruje się, że odpowiedź immunologiczna na antygeny wydzielane przez normalne komórki barwnikowe może mieć wpływ na przebieg czerniaka
168 235 przerzutowego. Bielactwo i niedobarwliwość u pacjentów chorych na czerniaka szczególnie kojarzy się z dobrym prognozowaniem choroby.Donosi o tym wielu autorów: Nordlund J.J., Kirkwood J.M., Forget B.M., Milton G., Albert D.M., i Lerner A.B. Vitiligo in patients with metastatic melanoma: a good prognosis sign. J.Am.Acad. Dermatol., 1983,9,689; Bystryn J.C., Rigel D., Friedman RJ. i Kopf A. Prognostic significance of hypopigmentation in malignant melanoma.Arch. Dermatol. 1987,123,1053. Po tym względem antygeny melanosomalne mogą być rozpoznawane przez układ immunologiczny. Dowodem na to jest immunoprecypitacja antygenu gp 75 z autologicznych komórek czerniaka przez przeciwciała IgG surowicy pacjentów chorych na czerniaka przerzutowego. Doświadczenie to zostało opisane przez Matters’a J.M. i wsp. (Mattes J.M., Thomson T.M., Old L.J., i Lloyd K.O., A pigmentation - associated, differentiation antigen of human melanoma defined by a precipitating antibody in human serum Int. J.Cancer. 1983, 32 717). Antygen gp 75 jest polipeptydem melanosomalnym, występującym w największej ilości jako glikoproteiną syntetyzowana przez ubarwione melanocyty i komórki czerniaka (Tai T., Eisinger M., Ogata S. i Lloyd K.O., Glycoproteins as differentiation markers in human malignant melanoma and melanocytes, Cancer Res. 1983, 43, 273; obserwacje niepublikowane). Melanocyty naskórka, łagodne zmiany zabarwione oraz czerniaki pierwotne i przerzutowe wydzielają gp 75, lecz inne typy komórek nie wydzielają tego białka (Thompson T.M., Real F.X., Murakami S., Cardon-Cardo C., Old L.J. i Houghhton A.N. Differentiation antigens of melanocytes and melanoma: Analisys of melanosome and cell surface markers of human pigmented cells with monoclonal antibodies, J.Invest.Dermatolog. 1988, 90,459). Jak wykazują badania wykonane przez twórców wynalazku, cDNA antygenu gp 75 wykazuje identyczność w około 90% z wyprowadzonymi sekwencjami aminokwasowymi i sekwencjami nukleotydowymi genu mysiego występującego w locus b (brunatne). Locus brunatnejest miejsce determinującym barwę skóry lub powłoki i wpływającym na typ syntetyzowanej melaniny, co wskazuje na to, że gp 75 może regulować lub wpływać na typ syntetyzowanej melaniny. Zjawisko immunoprecypitacji antygenu gp 75 przez przeciwciała IgG w surowicy pacjentów chorych na czerniaka przerzutowego świadczy o tym, że możliwejest przezwyciężenie tolerancji na gp 75. W celu realizacji takiego zamierzenia opracowano wektory ekspresyjne zawierające cDNA dla gp 75, przy czym określono sekwencje aminokwasowe peptydów na podstawie polipeptydu gp 75, który wyizolowano i oczyszczono z użyciem mysiego przeciwciała monoklonalnego tA99, ponadto wyizolowano klony cDNA metodą skriningu z oligonukleotydami opartymi na tych sekwencjach peptydowych.
Na figurze 1 przedstawione są wyniki immunoprecypitacji i analizy składu peptydowego białek rozpoznawanych przez mAb TA99 i surowicę AU.
A. Jednokierunkowa elektroforeza SDS-PAGE immunoprecypitatów ze znakowanych jodem 125J lizatów SK-MEL-19 strącanych przeciwciałem mAb TA99 (pasmo 1), normalnej surowicy ludzkiej (pasmo 2) i z surowicy AU z 1Π5 (pasmo 3) oraz z 10/76 (pasmo 4).
B. Pasma odpowiadające gp 75 albo gp 75 traktowanemu Endo H (częściowo zdeglikozylowanemu) wycięto z żelu SDS-poliakryloamidowego i analizowano skład peptydowy poprzez ograniczone trawienie proteazą V8 z S.aureus na SD-PAGE. Znak oznacza gp 75, znak + oznacza gp 75 częściowo zdeglikozylowany przez Endo H. Ekspozycja autoradiograficzna trwała 2 dni dla TA99 i 5 dni dla peptydów AU.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej stymulującej albo wzmagającej wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciw antygenowi gp 75 w organizmie osobnika, któremu podaje się szczepionkę polegający na tym, że wytwarza się polipeptyd o sekwencji aminokwasowej wyprowadzonej z sekwencji nukleotydowej cDNA przedstawionej w tabeli 2, skutecznie stymulujący lub wzmagający wytwarzanie przeciwciał w organizmie osobnika, dla którego przeznaczona jest szczepionka, a następnie wspomniany polipeptyd łączy się ze skuteczną ilością adiuwanta i z dopuszczalnym farmakologicznie nośnikiem. Korzystnie jak adiuwant stosuje się adiuwant wiążący gp 75.
Wyizolowano cząsteczkę kwasu nukleinowego, której sekwencja koduje sekwencje aminokwasową antygenu gp 75 lub jego fragmentu.
Sekwencję aminokwasową fragmentu gp 75 stanowią następujące sekwencje: ans-thr-valglu-gly-tyr-ser-asp-pro-thr-gly-lys-tyr-asp-pro-ala-val;
168 235 met-phe-val-thr-ala-piO-asp-asn-leu-gly-tyr-thr-tyr-glu;°raz asn-phe-asp-thr-leu-ileu-ser-pro-asn-ser-val-phe-ser.
Ponadto wyizolowano cDNA dla cząsteczki kwasu nukleinowego kodującego gp 75 jak również fragment cząsteczki cDNA dla fragmentu cząsteczki kwasu nukleinowego kodującego gp 75 wchodzącego w skład szczepionki otrzymanej sposobem według wynalazku. Fragment ten posiada sekwencję nukleotydową przedstawioną w tabeli 2. Na podstawie tej sekwencji nukleotydowej wyprowadzono sekwencję aminokwasową.
Skonstruowano także wektor ekspresyjny zawierający sekwencję DNA niezbędną do replikacji tego wektora połączoną z cząsteczką cDNA komplementarną do cząsteczki kwasu nukleinowego kodującego gp 75 lub do jej fragmentu, przystosowany do ekspresji w organizmie gospodarza. Wektorem ekspresyjnym może być wirus krowianki albo korzystnie wektor Imclone.
Szczepionka przeznaczona do stymulowania lub wzmagania wytwarzania przeciwciał skierowanych przeciw gp 75 w organizmie, któremu ją podano, wytworzona sposobem według wynalazku, składa się z sekwencji aminokwasowej tworzącej polipeptyd wyprowadzonej z sekwencji lub z fragmentu sekwencji cząsteczki cDNA komplementarnej do cząsteczki kwasu nukleinowego kodującego gp 75, który to polipeptyd stymuluje albo wzmaga wytwarzanie przeciwciał w organizmie osobnika z adiuwanta w ilości skutecznej oraz z nośnika dopuszczalnego farmakologicznie. Można także stosować adiuwanty pochodzenia mikrobiologicznego albo inny dowolny środek farmaceutyczny.
Szczepionka wytworzona sposobem według wynalazku stymuluje albo wzmaga wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciw gp 75. Leczonemu osobnikowi podaje się powyższą szczepionkę w dawce skutecznie stymulującej lub wzmagającej wytwarzanie przeciwciał.
Leczenie nowotworów u ludzi dotkniętych tą chorobą polega na podawaniu chorym szczepionki wytworzonej sposobem według wynalazku w dawce skutecznie leczącej nowotwór, również zapobieganie rozwojowi nowotworu u ludzi dotkniętych tą chorobą polega na podawaniu chorym szczepionki wytworzonej sposobem według wynalazku w dawce skutecznie zapobiegającej rozwojowi nowotworu. Można także opóźniać nawroty nowotworu u ludzi podatnych na tę chorobę co polega na podawaniu chorym szczepionki wytworzonej sposobem według wynalazku w dawce skutecznie opóźniającej nawrót nowotworu.
Wszystkie podane powyżej metody leczenia, zapobiegania i opóźniania nawrotów nowotworu mogą być zastosowane do nowotworu takiego jak czerniak. Szczepionka wytworzona sposobem według wynalazku jest użyteczna do zapobiegania nowotworom takim jak czerniak u pacjentów o wysokim ryzyku nawrotu lub rozwojowi czerniaka pierwotnego.
W sposobie według wynalazku gp 75 jest związany z adiuwantem. Dodatkowo, przed podaniem szczepionki, pacjentowi podaje się efektywną ilość cyklofosfamidu.
Przykład. Hodowla tkankowa. Prowadzono wzrost linii komórkowej czerniaka SK-MEL-19 na podłożu MEM z dodatkiem 1% niepodstawionych aminokwasów, penicyliny i streptomycyny z tym, że zamiast płodowej surowicy bydlęcej (FBS) stosowano 10% (objętościowo) SerumPlus z firmy Hazelton Research Products Inc., Lenexa, KS.
Izolowanie i oczyszczanie gp 75: Izolowano post-iądrową frakcję błonową z linii komórek czerniaka SK-MEL-19 przez homogenizację komórek w roztworze o składzie: 20 mM Tris HCl (pH = 7,5), 5 mM MgCL i 2 mM PMSF i wirowanie (10 000xg). Błony rozpuszczono w roztworze o składzie: 20 mM Tris HCl (pH = 7,5), 3 M KCl i 5 mM EDTA i odwirowano (100 000 xg). Frakcję nierozpuszczalnego białka zawieszono w 20 mM Tris HCl (pH = 7,5) z dodatkiem 0,5% dezoksycholanu sodowego. Białka rozpuszczalne w detergencie zebrano przez odwirowanie (100 000 xg) Supernatant dializowano wobec 20 mM Tris HCl (pH = 7,5) z dodatkiem 0,15 M NaCl i 2 mM CHAPS i podano się na kolumnę Mono Q (HR 5/5, Pharmacia LKB Biotechnology Inc. Piscataway, NJ) zrównoważoną roztworem o składzie: 20 mM Tris HCl (pH = 7,5), 0,15 M NaCl i 2 mM (3- [:3^c^h^ll^r^ii^<^]pi^o]p^l^)dwumetylo-amonio] 1-propanosulfonianu (CHAPS) (bufor A). Związane białka eluowano w liniowym gradiencie 0-1,0 M NaCl w buforze A. We frakcjach oznaczono gp 75 metodą kompetytywnego hamowania. Frakcje zawierające gp 75 zebrano, dializowano wobec buforu stosowanego do kolumny Con A /10 mM Tris HCl (pH = 6,5), zawierającego 1 mM CaCl?, 1 mM MnCh i 2 mM PMSF/ i podano na
168 235 kolumnę wypełnioną Con-A-Sepharozą. Niezwiązane białka usunięto przez przemywanie buforem stosowanym do kolumny. Białka związane z kolumną Con A eluowano 0,25 M roztworem α-Dmmtyyonmnnopiranozydu w buforze kolumny Con A.
Frakcje zawierające gp 75 zebrano i dializowano wobec roztworu o składzie: 10 mM Tris HCl (pH = 7,5), 2 mM CHAPS i 2 mM PMSF (CB) i podano na kolumnę powinowactwa Affi-Gel 10 zawierającą mysie przeciwciała monoklonalne (mAb) TA99 (Thomson T.M. Mattes J.M., RouxL., OldL.J. i Lloyd K.O., Pigmentation-associated glycoprotein of human melanoma and melanocytes: Definition with a mouse monoclonal antibody. J.Inwest.Dermatol., 1985, 85, --69). Żel przemyto kolejno 6 ml: CB, CB + 1 M NaCl, CB i CB + 2 mM CHAPS. Związany gp 75 eluowano z kolumny 0,1 M roztworem chlorowodorku glicyny o pH 3,1 zawierającym 2 mM CHAPS. Oznaczanie gp 75 w próbie kompetytywnego hamowania.
Podczas oczyszczania, gp 75 monitorowano i oznaczano ilościowo na podstawie zdolności frakcji do hamowania wiązania mAb TA 99 (300 ng/ml) z komórki SK-MEL-19 utrwalonymi w mieszaninie metanol-aceton (1:1 objętościowo) w immunologicznej próbie enzymatycznej ELISA w sposób opisany przez Houghton’a A.N. i wsp (Houghton A.N., Brooks H., Cote R.J., Taormina M.C., Oettgen H.F. i Old L.J., Detection of cell surface and intracellular antigens by human monoclonal antibodies: hybrid cells derived from lymphocytes of patients with malignant melanoma, J.Exp.Med. 1983, 158, Immunoprecypitacja, elektroforeza żelowa i mapowanie peptydu.
Jodowanie frakcji białkowej SK-MEL-19 związanej na kolumnie Con-A-Sepharose metodą z użyciem chloraminy T i immunoprecypitację przeciwciałem mAb TA99 i surowicą AU wykonano w sposób opisany przez Mattes’a i wsp. (Mattes J.M., Thomson T.M., OLd L.J. i Lloyd K.O., A gigmentation-asociated, differentiation antigen of human melanoma defined by a precipitating antibody in human serum Int.J.Cancer, 1983,32,717). Białka analizowano przez elektroforezę w żelu SDS-akryloamidowym (SDS-PAGE) w sposób opisany przez LaemmlPego (Laemmli U.K., Cleavage of structural proteins during assembley of the head of bacteriophage T4 Nature, 1970, 227, 680).
W celu trawienia endoglukozydazą H (Endo H), immunoprecypitaty zawieszono w 0,4% SDS, ogrzewano do temperatury 100°C w ciągu 5 minut i trawiono jednąjednostką międzynarodową Endo H (Genzyme Corporation, Boston, MA) w 100 mM buforze cytrynianowym (pH = 5,5) w ciągu 16 godzin w temperaturze 37°C. Dwukierunkową elektroforezę z zastosowaniem amfolin o pH 5-7, produkcji LKB-Produkter, Bromma, Szwecja, przeprowadzono w sposób opisany przez O’Farrel’a (O’Farrel P.H., High resolution two-^imensional elektrophoresis of proteins, J.Biol.Chem., 1975, 250, 4007).
Mapowanie peptydów immunoprecypitatu gp 75 prowadzono metodą ograniczonej proteolizy za pomocą proteazy VB (VB protease) ze Staphylococcus aureus firmy Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, In, w SDS-PAGE według Cleveland’ a i wsp. (Cleveland D.W., Fischer S.G., Kirscher M.W. i Laemmli U.K., Peptide mapping by limited proteolysis in sodium dodecyl sulphate and analysis by gel elektrophoresis. J.Biol.Chem. 1977, 252, 1102). Sekwencjonowanie peptydów.
Sekwencjonowanie peptydu przeprowadzono w zestawie Harvard University Microchemistry Facility. Oczyszczony gp 75 (12 gg) po elektroforezie - naniesiony na filtr nitroocelulozowy trawiono proteazą VB (1:20, wagowo) w sposób podany przez Aebersold’a R. (Aebersold R.H., Leavitt J., Saavedra R.A. i Hood L.E., Internal amino acid seguence analysis of proteins separated by one- or two-dimensional gel electrophoresis after in situ protease digestion on nitrocelulose. Proc. Natl.Acad.Sci. USA, 1987, 84, 6970) i uzyskane peptydy rozdzielono na kolumnie C8 Brownlee RP-300 o wymiarach 2,1 x 190 mm, w temperaturze 38°C.
Kilka pików z trawienia proteazą VB zebrano i wysuszono. Przeprowadzono całkowitą redukcję i alkilowanie przez dodanie 50 gl 8 M mocznika w 0,4 M buforze dwuwęglanu amonowego o pH = 8,0 i 5 gl 100 mM ditiotreitolu i ogrzewano w temperaturze 50°C w ciągu 15 minut. Następnie próbkę inkubowano z 5 gl 45 mM kwasu jodooctowego w ciągu 15 minut w temperaturze pokojowej i rozcieńczono 140 gl wody destylowanej. Dalsze trawienie trypsyną zredukowanej i zalkilowanej frakcji peptydu (1:25, wagowo) prowadzono w ciągu doby w
168 235 temperaturze 37°C. Frakcje przeznaczone do sekwencjonowania naniesiono bezpośrednio na filtry ze wstępnie modyfikowanego heksadimetryną (polybrene) włókna szklanego sekwencjonowano w zestawie do sekwencjonowania białek ABI477A. Aminokwasy rozdzielono metodą HPLC w systemie on-line w zestawie ABI 120A. Dla każdego peptydu przeprowadzono minimum 20 cykli.
Powtarzalność wyników MPLC w rutynowych warunkach laboratoryjnych wynosiła 93%. Sekwencje aminokwasowe podano tylko dla tych peptydów, dla których uzyskano wyniki o najwyższej powtarzalności. Klonowanie i sekwencjonowanie cDNA dla gp 75:
Bank cDNA --konstruowano z linii komórek czerniaka SK-MEL 19. Do izolacji dwu klonów cDNA gp 75 stosowano sondy oligonukleotydowe, postępując w sposób opisany poprzednio (Bouchard B., Fuller B., Vijaysaradhi S. i Houghton A.N., Induction of pigmentarinn in mouse fibrnblattt by exprestinn of human ryrotinase, J.Exp.Med. 1989, 169, 2029). Budowa sond oligonu0leorydnwych była następująca:
5' CTCGAAGGTGAACCCAGGTTGTCGGGGGCGGTCACGAACATCTC 3’.
Metodą Sangera i wsp. (Sanger F., Nicklen S. I Coulson A.R., DNA sequencing with chain teirninating inhibitors, Proc.Natt.Atad.Sci.USA, 1977, 74,5463; Stratagene Cloning Systems. La Jolla, CA), ztekwencjonowano dwa klony cDNA (1,8 kb i 2,0 kb). Na podstawie przeprowadzonych prób stwierdzono, że zarówno mysie mAb TA99 jak i surowica AU od pacjentów z czerniakiem strącają antygen o wielkości 75 kDa, a mAb TA99 oczyszcza wstępnie antygen gp 75 strącony przez surowicę AU (Thomson T.M., Mattes J.M., Roux L., Old L.J. i Lloyd K.O. Pigmestatios-asociated glycoprotein of human melamona and meranncyres: Definition with a mouse manoclonal antibody. J.Isvesr.Deumarol. 1985, 85, 169). Chociaż mAb TA99 użyto do oczyszczania gp 75 z linii komórek czerniaka SK-MEL-19, bardzo ważne jest potwierdzenie faktu, że mAb TA99 wykrywa jedynie antygen gp 75 rozpoznawany przez surowicę AU. W poprzednich badaniach wykazaliśmy, że mAb TA99 nie reaguje z ludzką tyrozynazą glikoproteiną o wielkości 75-80 kDa, również wydzieloną w zabarwionych melanocytach (Bouchard B., Fuller R., Vijayasaradhi S. i Houghton A.N.: Induction of pigmentation in mouse fibroblast by exprettion of human ryrotinase. J.Exp.Med., 1989, 169, 2029). Jednakże na podstawie tamtych doświadczeń nie można było wykluczyć możliwości, że mAb TA99 reaguje krzyżowo z innymi polipeptydami wydzielanymi przez komórki SK-MEL-19.
Białka po immusnprecypiracji przez przeciwciała mAb TA99 i znajdujące się w surowicy AU analizowano metodą jedno- i dwukierunkowej elektroforezy SDS-PAGE oraz przez mapowanie peptydów z użyciem ograniczonej proteolizy proteazą V8 z S.aureus. Białka strącone zarówno przez mAb TA99 jak i przez przeciwciała surowicy AU mają identyczną masę cząsteczkową (75 kFa) punkt izoelektryczny (5,5-5,9) (dane nie puzedstawione)j skład peptydowy (fig. 1), co potwierdza, że TA99 i surowica AU rozpoznają tę samą cząsteczkę gp 75.
Antygen gp 75 oczyszczono w sposób opisany wyżej. Oczyszczony metodą powinowactwa gp 75 stosowano do ^^l^^e^^^jonowania peptydów. Sekwencje aminokwasowe trzech wewnętrznych peptydów uzyskano przez rozszczepienie proteolitycznych oczyszczonego gp 75 proteazą V8 i trypsyną. Sekwencje tych trzech peptydów przedstawiono w tabeli 1. Okazało się, że istnieje 90 procentowa identyczność tych sekwencji z sekwencjami aminokwasowymi wyprowadzonymi z klonu mysiego cDNA, pMT4 wyizolowanego przez Shibahara’ę i wsp. (identyczność ta występuje w pozycjach aminokwasów 247-260, 333-349 i 428-441 pMT4). (Shibahara S., Tomita Y. Sakakura T., Nagar C., Chaudhuri B., Muller R.: Cloning and exprestnn of cDNA encoding mouse tyrosinase. Nucleic Acid Res. 1986, 14, 2413). Sondy Oigonukleotydowe pochodziły z sekwencji peptydowych gp 75 i były użyte do skriningu banku cDNA skonstruowanego z linii komórkowych czerniaka ludzkiego SK-MEL-19. Z tego banku cDNA wyizolowano dwa klony cDNA, o wielkości 1,8 i 2,0 kilozasad.
Częściowe sekwencje nukleotydowe klonów cDNA (GP 75-1 i GP 75-2), z których jedną przedstawiono w tabeli 2, wykazują 88,6 procentową identyczność z pMT4 (między nukleotydami 649 a 1437, w otwartej fazie odczytu). Sekwencja aminokwasowa wyprowadzona na podstawie GP 75-1 i GP 75-2 wykazuje 93,6 procentową identyczność z sekwencją aminokwasową wyprowadzoną z pMT4 pomiędzy sekwencjami cDNA dla gp 75 a sekwencjami dla
168 235 ludzkiej tyrozynazy (Bouchard B., Fuller B., Vijayasaradhi S. i Houghton A.N.: Induction of pigmentation in mouse fibroblasts by expression of human tyrosinase J.Exp.Med. 1989, 169, 2029) pomiędzy nukleotydami 618 a 1344 dla tyrozynazy (dane nie przytoczone).
Tabela 1
Sekwencje aminokwasowe trzech peptydów pochodzących z gp 75
| 1. | Asn-Thr-Val-Glu-Glv-Tyr-Ser-Asg-Pro-Thr-Glv-Lys-Tyr-Asp-Prr)-Ala-Val |
| 2. | Me--Phe-Va--Th--Ala-Pro-Ajp--Asn-Leu-Gly-Tr--Th--Ty--Glu |
| 3 | Asn-Phe-Asp-Sre-Thr-Leu-Ileu-Ser-Pro-Asn-Ser-Val-Phe-Ser |
Podkreślono te reszty aminokwasowe, które różnią się od reszt wyprowadzonych na podstawie mysiego cDNA z pMT4 (Shibahara S., Tomita Y., Sakakura T., Nagar C., Chaudhuri B. i Muller R., Cloning and expression of cDNA encoding mouse tyrosinase. Nucleic Acid Res. 1986,14 2413).
Tabela 2
Częściowa sekwencja cDNA dla antygenu gp 75
GGACCAGCTTOTTTCACATGGCACAGGTACCACCTCCC&CGTCTGGAGAAAGACATGC
AGGAAATGriTGC^JA^CA^CCC^aTC^aTTCaC^C^tJTT^CC^aTA^^aGKAAUTTTGC^AA^CGGGGAA
AAATGTCTGTGATATCTGCACGGATGACTTiGtBGGiATCCAGAAGCAACTTTGATTCC
ACTCIAATAAGCCCAAACTCTGTCTTTTCTCAATGGCGAGTGGTCTGTGACTCCTTGG
AAGATTATGATACCCTGGGAACACTTTGTAACAGCACCGAGGATGGGCCAATTAGGAG
AAATCCAGCTGGAAATGT&G3CAGACCAATGGTGCAACGTCTTCCTGAACCACAGGAT GTCGCTCATGTCTTGGAAGTTGGTTTATTTGACACGCCTCCtTOTTTATTCCAACTCIA
CAAACAGTTTCCGAAACACAGTGGAAGGTTACAGTGACCCCACGGGAAAGTATGACCC
TGCTGTTCGAAGTCTTCACAATTTGGCTCATCTATTCCTGAATGGAACAGGGGGACAA acccatttgtcttcccaagatcctatttttgtcctcctgcacaccttcacagatgcag
TCTTtGATGGAT^CTAAGGAGAIACAATGCTGATATATCCACATTTCCATTGGAAAA
TGCCCCTATTGGACATAATAGACAACACAACATGGTGCCATTCTGGCCCCCAGTCACC
AACACAGAAATGTTTGTTACTGCTCCAGACAACCTGGGATACACTTATGAA
Ścisła homologia między ludzkim antygenem gp 75 oraz produktem wyprowadzonym z mysiego genu pMT4 rzuca pewne światło na możliwą strukturę i funkcję gp 75. Klon pMT4 wyizolowano z mysich komórek melanocytarnych (Shibahara S., Tomita Y., Sakakura T., Nagar
C., Chaudhuri B. i Muller R.: Cloning and expresión of cDNA encoding mouse tyrosinase, Nucleic Acid Res. 1986, 14, 2413).
Początkowo uważano, że cDNA z pMT4 koduje mysią tyrozynazę, dla której pozycja w mapie genetycznej znajduje się w mysim locus c (albino). Późniejsze badania wykazały jednak, że pMT4 różni się od genu dla tyrozynazy mysiej (Yamamoto H., Takeuchi S., Kudo T., Makino
K., Nakata A., Shinoda A i Takeuchi T.: Cloning and sequencing of mouse tyrosinase cDNA, Japan J.Genetics, 1987, 62, 271; Muller G., Ruppert S., Schimd E. i Schutz G.: Functional analysis of alternatively spliced tyrosinase gene transcripts, Eur.Mol.Biol.Organ.J. 1988, 7, 2723; Jackson I.J.: A cDNA encoding tyrosinaserelated protein maps to the brown locus in mice, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1988, 85, 4392). Podobnie, sekwencja go 75 różni się od sekwencji ludzkiej tyrozynazy, aczkolwiek istnieje ograniczony zakres identyczności (43,1%) pomiędzy gp 75 a wyprowadzoną sekwencją aminokwasową ludzkiej tyrozynazy (pomiędzy resztami aminokwasowymi 208-459).
168 235
Funkcję gp 75 i produktu pMT4 próbuje się określić na podstawie odkrycia, że miejscem pMT4 w mapie genetycznej jest locus b (brown) u myszy (Jackson I.J.: A cDNA encoding tyrosinase-related protein mape to the brown locus in mice. Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1988, 85, 4392) a więc region, który określa barwę powłoki (Silvers W.K.: Comparative geneticsof coat colour in mammals, The Coat Colors in Mice. Springer Verlag, Nowy Jork, 1979). Homologia pomiędzy gp 75 a sekwencją aminokwasową wyprowadzoną z pMT4 pozwala na formalną identyfikację ludzkiego homologu produktu genu z mysiego locus b (brown). Opierając się na lokalizacji w melanosomach i podobieństwie strnkturalnym do tyrozynazy, można wysunąć wniosek, że cząsteczka gp 75 reguluje proces syntezy melaminy i określa typ syntetyzowanej melaniny.
Dotychczas zakładano, że determinanty melanosomalne i inne antygeny wewnątrzkomórkowe nie stanowią potencjalnego celu w immunologicznym leczeniu czerniaka. Ostatnio jednak znaleziono dowody, że wewnątrzkomórkowe białka mogą być przetwarzane do peptydów stanowiących cel dla cytotoksycznych komórek T (CTL) przez komórki będące nośnikami antygenu (Townsend A.R.M. i Bodmer H.: Antigen recognition by class I-restricted T lymphocytes, Ann.Rev.Immunol. 1989,7, 601). Odkrycie to stwarza teoretyczną możliwość ukierunkowania odpowiedzi komórki T na czerniaka przeciwko cząsteczkom wydzielanym w komórce nowotworowej. Alternatywnie, komponenty melanosomalne, które są normalnie transportowane poza melanocyty w procesie dojrzewania, mogą się akumulować w przestrzeni poza-komórkowej wokół komórek nowotworowych lub też, nekroza miejscowej tkanki może prowadzić do uwalniania i odkładania się gatunków wewnątrzkomórkowych.
Potwierdzeniem dostępności gp 75 jest fakt, że znakowany radioaktywnie TA99 mAb swoiście lokalizuje się w przeszczepach czerniaka ludzkiego w myszach nu/nu, co wskazuje, że antygen ten jest dostępny dla przeciwciała w miejscu nowotworu (Welt S., Mattes J.M., Grando R., Thomson T.M., Leonard R.W., Zanzonico P.B., Bigler R.E., Yer S., Oettgen H.F. i Old L.J.: Monoclonal antibody to an intracellular antigen images human melanoma transplants in nu/nu mice, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1987, 84, 4200).
Przeciwciała IgG u pacjentów z czerniakiem AU rozpoznają determinanty na gp 75, które są wspólne dla komórek czerniaka i dla normalnych malanocytów (Mattes J.M., Thomson T.M., Old L.J., i Lloyd K.O.: A pigmentation-associated differentiation antigen of human melanomadefined by a precipitating antibody in human serum. Int. J. Cancer, 1983, 32, 717). Izolacja klonów cDnA, które kodują gp 75 umożliwi badanie strategii aktywnej immunizacji przeciw gp 75. Istnieją co najmniej dwa warunki efektywnego indukowania odpowiedzi komórek CTL na gp 75:1 ( musi być przezwyciężona tolerancja na gp 75 i 2) peptydy gp 75 muszą być przetworzone i efektywnie prezentowane przez główne antygeny zgodności tkankowej na komórkach czerniaka. Alternatywnie, jest możliwe, że antygeny różnicowania melanocytów są nośnikami unikalnych determinant. Geny kodujące produkty wydzielane przez normalne melanocyty mogłyby być mutowane lub przegrupowywane w procesie transformacji prowadzącej do uzłośliwienia, generując nowe epitopy będące celem rozpoznawanym przez CTL i przeciwciała. W tym kontekście, najlepiej scharakteryzowanym unikalnym antygonem na komórkach ludzkiego czerniaka jest determinanta na melanotransferynie, glikoproteinie o wielkości 95-97 kDa, wydzielanej na hodowanych melanocytach i na komórkach czerniaka (Real F.X., Mattes M.J., Houghton A.N., Oettgen H.F., Llyad K.O. i Old L.J.: Class 1 (unique) antigens of human melanoma. Identyfication of a 90 000 dalton cell surface glycoprotein by antologous antibody, J.Exp.Med. 1984, 160, 1219; Furakawa K.S., Furakawa K., Real FX., Old L.J. i Lloyd K.O.: A unique antigenic epitope of human melanoma is carried on the common melanoma glycoprotein gp 75/p97 J.Exp.Med. 1989, 169 585). Na potwierdzenie tej możliwości, wykryto zmiany genetyczne występujące z dużą częstością i w szerokim rozprzestrzenianiu w genomie komórek czerniaka ludzkiego (Dracopoli N.C., Houghton A.N., i OldL.H.: Loss of polymorphic restriction fragments in malignant melanoma: Implications for tumor heterogeneity. Prof.Natl.Acad.Sci. USA 1985, 82, 1470; Dracopoli N.C., Alhadeff B., Houghton A.N. i Old
L.J.,: Loss of heterozygosity at autosomal and x-linked loci during tumor progression in a patient with melanoma, Cancer Res, 1987, 47, 3995).
168 235
168 235
A
Mfx10'3 12 3 4
9743
AU
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.
Cena 1,50 zł
Claims (2)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej stymulującej albo wzmagającej wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciw antygenowi gp 75 w organizmie osobnika, któremu podaje się szczepionkę, znamienny tym, że wytwarza się polipeptyd o sekwencji, aminokwasowej wyprowadzonej z sekwencji nukleotydowej cDNA przedstawionej w tabeli 2, skutecznie stymulujący lub wzmagający wytwarzanie przeciwciał w organizmie osobnika, dla którego przeznaczona jest szczepionka, a następnie wytworzony polipeptyd łączy się ze skuteczną ilością adiuwanta i z dopuszczalnym farmakologicznie nośnikiem.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się adiuwant wiążący gp 75.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US49743190A | 1990-03-22 | 1990-03-22 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL289550A1 PL289550A1 (en) | 1992-07-27 |
| PL168235B1 true PL168235B1 (pl) | 1996-01-31 |
Family
ID=23976841
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL91289550A PL168235B1 (pl) | 1990-03-22 | 1991-03-22 | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL |
| PL91307929A PL169105B1 (pl) | 1990-03-22 | 1991-03-22 | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL PL |
| PL91307930A PL169168B1 (pl) | 1990-03-22 | 1991-03-22 | S p o só b wytwarzani szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL PL |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL91307929A PL169105B1 (pl) | 1990-03-22 | 1991-03-22 | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL PL |
| PL91307930A PL169168B1 (pl) | 1990-03-22 | 1991-03-22 | S p o só b wytwarzani szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL PL |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6168946B1 (pl) |
| EP (2) | EP0522078B1 (pl) |
| JP (2) | JP3336006B2 (pl) |
| AT (1) | ATE187493T1 (pl) |
| AU (1) | AU660412B2 (pl) |
| CA (1) | CA2078773C (pl) |
| CZ (1) | CZ290278B6 (pl) |
| DE (1) | DE69131829T2 (pl) |
| DK (1) | DK0522078T3 (pl) |
| ES (1) | ES2141089T3 (pl) |
| FI (1) | FI113786B (pl) |
| GR (1) | GR3032804T3 (pl) |
| HK (1) | HK1014732A1 (pl) |
| HU (1) | HU218416B (pl) |
| IE (2) | IE20000918A1 (pl) |
| NO (1) | NO311366B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ237532A (pl) |
| PL (3) | PL168235B1 (pl) |
| PT (1) | PT97103B (pl) |
| SK (1) | SK282873B6 (pl) |
| WO (1) | WO1991014775A1 (pl) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE20000918A1 (en) * | 1990-03-22 | 2001-05-30 | Sloan Kettering Inst Cancer | GP75 As a Tumor Vaccine for Melanoma |
| US7041801B1 (en) * | 1995-06-07 | 2006-05-09 | Vanderbilt University | Antibodies binding to polypeptides encoded by developmentally-regulated endothelial cell locus-1 |
| US7015312B1 (en) | 1996-02-09 | 2006-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Antibodies to the protein product encoded by ORF3 of the TRP-1 gene and compositions and kits thereof |
| US7001600B1 (en) | 1996-02-09 | 2006-02-21 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Identification of TRP-2 as a human tumor antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes |
| US6083703A (en) * | 1996-02-09 | 2000-07-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Identification of TRP-2 as a human tumor antigen recognized by cytotoxic T lymphocytes |
| US5840839A (en) * | 1996-02-09 | 1998-11-24 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein |
| AU2001241533A1 (en) * | 2000-02-15 | 2001-08-27 | The Regents Of The University Of California | A universal vaccine and method for treating cancer employing telomerase reverse transcriptase |
| US6613534B2 (en) | 2001-03-20 | 2003-09-02 | Wake Forest University Health Sciences | MAP-2 as a determinant of metastatic potential |
| US20030113919A1 (en) * | 2001-08-17 | 2003-06-19 | Aventis Pasteur, Ltd. | Immunogenic targets for melanoma |
| US20030157720A1 (en) * | 2002-02-06 | 2003-08-21 | Expression Technologies Inc. | Protein standard for estimating size and mass |
| JP5213075B2 (ja) | 2007-06-15 | 2013-06-19 | ジェネラックス・コーポレイション | 腫瘍の画像化および／または処置のための微生物 |
| US7951370B2 (en) | 2008-03-12 | 2011-05-31 | Imclone Llc | Anti-TYRP1 antibodies |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2504010B1 (fr) * | 1981-04-15 | 1985-10-25 | Sanofi Sa | Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation |
| US4808704A (en) * | 1981-09-30 | 1989-02-28 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies to cell surface antigens of human malignant melanoma |
| US4806628A (en) * | 1982-11-30 | 1989-02-21 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies against melanocytes |
| US4591572A (en) * | 1983-04-01 | 1986-05-27 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Pigmentation associated, differentiation antigen of human melanoma and autologous antibody |
| USH819H (en) * | 1984-04-30 | 1990-09-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Energy | Palladium-109 labeled anti-melanoma monoclonal antibodies |
| US4851510A (en) * | 1984-11-30 | 1989-07-25 | Wadley Technologies, Inc. | Monoclonal antibodies to novel melanoma-associated antigens |
| US4798790A (en) * | 1985-07-18 | 1989-01-17 | Sloan-Kettering Institute | Monoclonal antibody specific for a pigmentation associated antigen |
| US5141742A (en) * | 1986-02-07 | 1992-08-25 | Oncogen | Vaccines against melanoma |
| US5262177A (en) * | 1986-02-07 | 1993-11-16 | Oncogen | Recombinant viruses encoding the human melanoma-associated antigen |
| US5009995A (en) * | 1986-10-27 | 1991-04-23 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies to melanoma cells |
| US5059523A (en) * | 1988-05-02 | 1991-10-22 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Cell-surface glycoproteins of human sarcomas |
| US5009495A (en) * | 1989-05-26 | 1991-04-23 | Williams Robert D | Hinge for eyeglasses |
| DE69033842T2 (de) | 1989-08-04 | 2002-06-20 | Schering Ag | Äusserliche domäne von c-erbb-2:gp75 |
| IE20000918A1 (en) * | 1990-03-22 | 2001-05-30 | Sloan Kettering Inst Cancer | GP75 As a Tumor Vaccine for Melanoma |
| US5262117A (en) * | 1990-10-12 | 1993-11-16 | Centro Sviluppo Settori Impiego S.R.L. | Process for preparing thermoinsulating and/or structural formed articles and products so obtained |
| US6180604B1 (en) * | 1996-08-21 | 2001-01-30 | Micrologix Biotech Inc. | Compositions and methods for treating infections using analogues of indolicidin |
-
1991
- 1991-03-12 IE IE20000918A patent/IE20000918A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-03-12 IE IE082091A patent/IE910820A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-03-21 CZ CS1991760A patent/CZ290278B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-03-21 PT PT97103A patent/PT97103B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-03-21 SK SK760-91A patent/SK282873B6/sk unknown
- 1991-03-21 NZ NZ237532A patent/NZ237532A/xx unknown
- 1991-03-22 DK DK91908003T patent/DK0522078T3/da active
- 1991-03-22 EP EP91908003A patent/EP0522078B1/en not_active Revoked
- 1991-03-22 PL PL91289550A patent/PL168235B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-03-22 EP EP99109256A patent/EP0965640A1/en not_active Withdrawn
- 1991-03-22 PL PL91307929A patent/PL169105B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-03-22 DE DE69131829T patent/DE69131829T2/de not_active Revoked
- 1991-03-22 WO PCT/US1991/001942 patent/WO1991014775A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-03-22 HU HU9203009A patent/HU218416B/hu unknown
- 1991-03-22 AU AU76906/91A patent/AU660412B2/en not_active Ceased
- 1991-03-22 JP JP50783191A patent/JP3336006B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-03-22 ES ES91908003T patent/ES2141089T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-22 CA CA002078773A patent/CA2078773C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-03-22 PL PL91307930A patent/PL169168B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-03-22 AT AT91908003T patent/ATE187493T1/de not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-09-21 NO NO19923659A patent/NO311366B1/no unknown
- 1992-09-21 FI FI924222A patent/FI113786B/fi active
-
1995
- 1995-03-24 US US08/409,794 patent/US6168946B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-12-28 HK HK98116009A patent/HK1014732A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-02-29 GR GR20000400507T patent/GR3032804T3/el not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-25 JP JP2001391870A patent/JP2002241314A/ja active Pending
-
2004
- 2004-06-25 US US10/877,489 patent/US20050037462A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vijayasaradhi et al. | The melanoma antigen gp75 is the human homologue of the mouse b (brown) locus gene product. | |
| Watanabe et al. | Tumor cell autocrine motility factor is the neuroleukin/phosphohexose isomerase polypeptide | |
| Traversari et al. | A nonapeptide encoded by human gene MAGE-1 is recognized on HLA-A1 by cytolytic T lymphocytes directed against tumor antigen MZ2-E. | |
| Shawar et al. | Specialized functions of MHC class I molecules. I. An N-formyl peptide receptor is required for construction of the class I antigen Mta. | |
| AU701105B2 (en) | Colon cell and colon cancer cell associated nucleic acid molecules, protein and peptides | |
| PL168235B1 (pl) | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwnowotworowej PL PL PL PL PL PL | |
| Lieu et al. | Molecular characterization of human Ro/SS-A antigen. Amino terminal sequence of the protein moiety of human Ro/SS-A antigen and immunological activity of a corresponding synthetic peptide. | |
| WO1997008189A9 (en) | Colon cell and colon cancer cell associated nucleic acid molecules, protein and peptides | |
| CA2478413C (en) | Genetic products differentially expressed in tumors and use thereof | |
| Berger et al. | A lymphocyte cell surface heat shock protein homologous to the endoplasmic reticulum chaperone, immunoglobulin heavy chain binding protein BIP | |
| JP2002519303A (ja) | 脂質動員性を有する糖タンパク質およびその治療的適用 | |
| JP2001512971A (ja) | 癌および腫瘍随伴性神経症候群の診断および治療におけるｕｌｉｐの使用 | |
| Furukawa et al. | A unique antigenic epitope of human melanoma is carried on the common melanoma glycoprotein gp95/p97. | |
| US7214533B2 (en) | Polynucleotide useful for modulating cancer cell proliferation | |
| Colombo et al. | cDNA cloning and Escherichia coli expression of UK114 tumor antigen | |
| AU616195B2 (en) | Lectines fixing beta-d-galactoside | |
| Labeta et al. | Biochemical analysis of a novel H-2 class I-like glycoprotein expressed in five AKR-(Gross virus) derived spontaneous T cell leukemias. | |
| JP4037451B2 (ja) | 大腸細胞および大腸癌細胞関連核酸分子、タンパク質およびペプチド | |
| AU4047199A (en) | Tgfbeta rii receptor nucleic sequence, coded peptide, and uses | |
| Hengst-Zhang et al. | Tissue and species distribution of liver type and tumor type nuclear poly (A) polymerases | |
| CA2506684A1 (en) | Immunogenic epitopes for fibroblast growth factor 5 (fgf-5) presented by hla-a3 and hla-a2 | |
| JPH09210996A (ja) | ペプチドと反応する抗体及び該抗体を用いた蛋白の測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060322 |