CZ287816B6 - Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof - Google Patents

Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof Download PDF

Info

Publication number
CZ287816B6
CZ287816B6 CZ19973905A CZ390597A CZ287816B6 CZ 287816 B6 CZ287816 B6 CZ 287816B6 CZ 19973905 A CZ19973905 A CZ 19973905A CZ 390597 A CZ390597 A CZ 390597A CZ 287816 B6 CZ287816 B6 CZ 287816B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
trp
peptide
glu
valine
acid
Prior art date
Application number
CZ19973905A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ390597A3 (cs
Inventor
Andrei Marxovich Korotkov
Vladislav Isakovich Deigin
Original Assignee
Immunotech Dev Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=20168146&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ287816(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Immunotech Dev Inc filed Critical Immunotech Dev Inc
Publication of CZ390597A3 publication Critical patent/CZ390597A3/cs
Publication of CZ287816B6 publication Critical patent/CZ287816B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0823—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nového peptidů s imunoregulačními vlastnostmi, způsobu jeho přípravy, farmaceutického prostředku jej obsahujícího a použití peptidů v lékařství, veterinářství a experimentální biochemii.
Dosavadní stav techniky
Důležitost vývoje nových neškodných imunoregulačních peptidů, které by zastavily progresivní růst takových nemocí, jako jsou maligní novotvary, sepce, chronické a latentní infekce, rozvíjející se na pozadí imunodeficitních stavů, prokazuje se velkým počtem studií v tomto oboru.
Nejobvyklejší metoda vývoje nových peptidů spočívá v izolaci aktivních peptidových frakcí z tkáňových extraktů, frakcionaci a čištění včetně izolování jednotlivých látek a jejich identifikaci (SU 1600047, SU 1638849, SU 1737798). V praktické medicíně jsou dobře známy thymusové extrakty jakožto regulátory imunních procesů, zvláště thymosinová frakce 5 (Goldstein A. L., Guna A., Latz Μ. M., Hardy H. A., White A.) a thyamalin (CH 6595 86). Extrakty obsahují látky polypeptidové povahy, jejichž výroby z přírodních surovin je omezena složitostí postupu, malými výtěžky aktivních látek a značnou růzností jejich fyzikálních a chemických charakteristik jakož i biologických vlastností. Kromě toho balastní složky přítomné v přírodních thymusových (brzlíkových) přípravcích způsobují někdy vedlejší účinky. Posléze uvedená okolnost se stává stimulem k vytvoření syntetických peptidů. Doposud bylo syntetizováno značné množství imunoregulačních peptidů: PCT/WO 089/06134, SU 1541821, SU 1518956, EP 230052, EP 406931, US 5021551, US 5013723. Každý ze syntetických peptidů má omezenou kombinaci nezbytných vlastností, je vysoce aktivní, nízkotoxický, nezpůsobuje žádné vedlejší účinky a lze je proto používat v lékařství.
Úkolem tohoto vynálezu bylo syntetizovat nové biologicky aktivní peptidy mající imunoregulační účinek.
Dalším úkolem vynálezu bylo vyvinout zcela novou technologii syntézy peptidů, která by měla minimum jednoduchých stupňů a vedla k velkým výtěžků výrobků níže uvedené struktury, což je rozhodující ve farmaceutickém průmyslu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je peptid obecného vzorce I (I) v němž
X je atom vodíku, zbytek glycinu, alaninu, leucinu, isoleucinu, valinu, N-valinu, prolinu, tyrosinu, fenylalaninu, tryptofanu, D-alaninu, D-leucinu, D-isoleucinu, D-valinu, D-N-valinu, D-prolinu, D-tyrosinu, D-fenylalaninu, D-tryptofanu, α-aminomáselné kyseliny nebo ξaminokapronové kyseliny,
A je zbytek D-glutamové kyseliny nebo iD-glutamové kyseliny a
-1 CZ 287816 B6 i
Y je zbytek glycinu, alaninu, leucinu, isoleucinu, valinu, N-valinu, prolinu, tyrosinu, fenylalaninu, tryptofanu, D-alaninu, D-leucinu, D-isoleucinu, D-valinu, D-N-valinu, D-prolinu, Dtyrosinu, D-fenylalaninu, D-tryptofanu, α-aminomáselné kyseliny, ξ-aminokapronové kyseliny, hydroxyl a aminoskupina substituovaná jednou nebo dvakrát Ci^alkylem.
Aminoskupina substituovaná jednou nebo dvakrát C]_3alkylem v peptidu značí -NHCH3, -NÍCHjE -NH(CH2CH3), -N(CH2CH3)2, -NH(CH2CH2CH3) nebo -N(CH2CH2CH3)2.
Výhodnou skupinu představuje peptid podle vynálezu, obecného vzorce I, v němž X je vodík, A 10 je zbytek iD-glutamové kyseliny a Y je hydroxyl nebo aminoskupina substituovaná Ci_3alkylem.
Výhodný peptid podle tohoto vynálezu je složený ze sekvence H-iD-Glu-D-Trp-OH.
Předmětem vynálezu je také způsob přípravy peptidu shora uvedeného obecného vzorce I, 15 v němž X, A a Y mají shora uvedené významy. Podstata způsobu přípravy podle vynálezu je v tom, že se v roztoku otevře vnitřní anhydrid tributyloxykarbonylglutaminové D nebo L kyseliny působením odpovídajícího derivátu vzorce D-Trp-Y, v němž Y má shora uvedený význam, tributyloxykarbonylová skupina se odštěpí působením mravenčí kyseliny, růstem se vybuduje peptidový řetězec metodou aktivovaných esterů a směsných anhydridů a nakonec se a20 a τ-izomery chromatograficky rozdělí.
S výhodou se vnitřní anhydrid tributyloxykarbonylglutaminové D nebo L kyseliny otevře působením K-soli D-Trp-Y.
Získané izomery se chromatograficky rozdělí s výhodou po vytvoření dipeptidů glutamintryptofan.
Dalším předmětem vynálezu je farmaceutický prostředek s inhibičními účinky buněčné proliferace (chorobného bujení) a imunoregulačními účinky, podávaný pacientům před ozářením nebo 30 chemoterapií, který jako účinnou látku obsahuje v účinném množství alespoň jeden peptid podle nároků vynálezu ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Ještě jiným předmětem vynálezu je použití peptidu podle tohoto vynálezu pro výrobu léčiva k modulaci buněčné proliferace a k imunoregulaci, podávaných před ozářením nebo chemo35 terapií.
V tabulce 1 jsou uvedeny hodnoty Rn (ve směsi chloroform-methanol-32% kyselina octová 60:45:20) a Rr (ve směsi butanol-pyridin-voda-kyselina octová 5:5:4:1) pro některé analogy nových peptidů.
Tabulka 1
Peptid Rfi Rn
Abu-D-Glu-D-Trp-OH 0,32 0,53
Abu-iD-Glu-D-Trp-OH 0,29 0,49
Aca-D-Olu-D-Trp-OH 0,31 0,52
Aca-iD-Glu-D-Trp-OH 0,28 0,49
Ala-D-Glu-D-Trp-OH 0,34 0,61
Ala-iD-Glu-D-Trp-OH 0,32 0,55
D-Ala-D-Glu-D-Trp-D-Ala 0,22 0,41
D-Ala-D-Glu-D-Trp-OH 0,26 0,51
D-Ala-iD-Glu-D-Trp-D-Ala 0,25 0,50
D-Ala-iD-Glu-D-Trp-OH 0,25 0,51
-2CZ 287816 B6
Tabulka 1 - pokračování
Peptid Rn Rn
D—11 e~D—G1 u—D—Trp—D—Leu 0,35 0,53
D-Ile-D-Glu-D-Trp-D-OH 0,36 0,54
D-Ile-iD-Glu-D-Trp-D-Leu 0,34 0,53
D-Ile-iD-Glu-D-Trp-OH 0,27 0,52
D-Leu-D-Glu-D-Trp-OH 0,36 0,53
D-Leu-iD-Glu-D-T rp-OH 0,35 0,52
D-NVal-D-Glu-D-Trp-OH 0,33 0,51
D-NVal-iD-Glu-D-Trp-OH 0,32 0,51
D-Phe-D-Glu-D-Trp-Ala 0,37 0,56
D-Phe-iD-Glu-D-Trp-Ala 0,36 0,55
D-Pro-D-Glu-D-Trp-OH 0,38 0,58
D-Pro-iD-Glu-D-Trp-OH 0,37 0,58
D-Trp-D-Glu-D-Trp-OH 0,41 0,59
D-Trp-iD-Glu-D-Trp-OH 0,40 0,59
D-Tyr-D-Glu-D-Trp-D-Tyr 0,39 0,58
D-Tyr-iD-Glu-D-Trp-D-Tyr 0,38 0,58
D-Val-D-Glu-D-Trp-OH 0,34 0,51
D-Val-iD-Glu-D-Trp-OH 0,33 0,50
Gly-D-Glu-D-Trp-NVal 0,29 0,51
Gly-D-Glu-D-Trp-OH 0,30 0,54
Gly-iD-Glu-D-Trp-NVal 0,32 0,53
Gly-iD-Glu-D-Trp-OH 0,29 0,53
H-D-Glu-D-Trp-Abu 0,33 0,52
H-D-Glu-D-Trp-Aca 0,30 0,53
H-D—Glu-D-Trp-D—Ile 0,35 0,58
H-D-Glu-D-Trp-D-Pro 0,37 0,61
H-D-Glu-D-Trp-Gly 0,29 0,54
H-D-Glu-D-Trp-Ile 0,36 0,58
H-D-Glu-D-T rp-Leu 0,36 0,59
H-D-Glu-D-Trp-Lys 0,28 0,47
H-D-Glu-D-Trp-OH 0,36 0,56
H-D-Glu-D-Trp-Phe 0,39 0,61
H-D-Glu-D-Trp-Pro 0,38 0,59
H-D-Glu-D-Trp-Tyr 0,37 0,58
H-D-Glu-D-Trp-Val 0,38 0,61
H-iD-Glu-D-Trp-Abu 0,34 0,51
H-iD-Glu-D-Trp-Aca 0,33 0,50
H-iD-Glu-D-Trp-D-Ile 0,34 0,55
H-iD-Glu-D-Trp-D-Pro 0,36 0,58
H-iD-Glu-D-Trp-Gly 0,28 0,52
H-iD-Glu-D-Trp-Ile 0,34 0,57
H-iD-Glu-D-Trp-Leu 0,35 0,58
H-iD-Glu-D-Trp-Lys 0,27 0,45
H-iD-Glu-D-Trp-OH 0,30 0,52
H-iD-Glu-D-Trp-Phe 0,38 0,61
H-iD-Glu-D-Trp-Pro 0,37 0,60
H-iD-Glu-D-Trp-Tyr 0,35 0,58
H-iD-Glu-D-Trp-Val 0,36 0,60
Ile-D-Glu-D-Trp-D-Phe 0,42 0,68
Ile-D-Glu-D-Trp-OH 0,38 0,56
Ile-iD-Glu-D-Trp-D-Phe 0,40 0,67
-3CZ 287816 B6
I
Tabulka 1 - pokračování
Peptid Rn Rn
Ile-iD-Glu-D-Trp-OH 0,37 0,55
Leu-D-Glu-D-Trp-OH 0,35 0,62
Leu-iD-Glu-D-Trp-OH 0,27 0,57
NVal-D-Glu-D-Trp-OH 0,35 0,61
NVal-iD-Glu-D-Trp-OH 0,34 0,60
Phe-D-Glu-D-Trp-OH 0,41 0,63
Phe-iD-Glu-D-Trp-OH 0,40 0,62
Pro-D-Glu-D-Trp-OH 0,43 0,63
Pro-iD-Glu-D-T rp-OH 0,42 0,62
Trp-D-Glu-D-Trp-OH 0,45 0,68
Trp-iD-Glu-D-Trp-OH 0,44 0,67
Tyr-D-Glu-D-Trp-OH 0,42 0,64
Tyr-iD-Glu-D-Trp-OH 0,41 0,63
Val-D-Glu-D-Trp-D-Val 0,46 0,68
Val-D-Glu-D-Trp-OH 0,33 0,50
Val-iD-Glu-D-Trp-D-Val 0,44 0,66
Val-iD-Glu-D-Trp-OH 0,34 0,52
Následující příklad blíže objasňuje vynález.
Příklad provedení vynálezu
H-D-Glu-D-Trp-OH a H-iD-Glu-D-Trp-OH
1. Příprava Boc-D-Glu-OH
14.7 g (0,1 M) H-D-Glu-OH se rozpustí ve 200 ml destilované vody. Hodnota pH se upraví na
10.2 použitím 1M K.OH a přidá se roztok 33,0 g (0,3 M) BOC2O v dioxanu za intenzivního míchání. Použitím pH-statu se kontroluje pH. Po ukončení reakce se směs přemístí do dělicí nálevky, extrahuje z alkalického prostředí 3x 150 ml ethylacetátu, k vodné fázi se přidá pomalu 0,2% roztok kyseliny sírové až k dosažení pH rovnému 3, načež se Boc-D-Glu-OH extrahuje do vodné fáze (3x 200 ml). Organická vrstva se promyje 3x 200 ml nasyceného roztoku až do neutrálního pH, vysuší nad Na2SO4 a potom se odpaří za sníženého tlaku do olejovitého stavu. Výtěžek je 16,7 g (68 %).
2. Příprava směsi Boc-D-Glu-Trp-OH a Boc-iD-Glu-D-Trp-OH
16.7 g (0,068 M) Boc-D-Glu-OH se rozpustí ve 200 ml dimethylformamidu, ochladí na 0 °C a za míchání se přidá roztok 20,6 g (0,1 M) Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimidu ve 100 ml dimethylformamidu. Směs se míchá 4 hodiny při +4 °C a nechá se pak stát 8 hodin při teplotě místnosti. Vysrážený dicyklohexylkarbamid se oddělí filtrací a promyje 2x 50 ml dimethylformamidu. Filtrát se zahustí odpařením za sníženého tlaku na 1/2 objemu a přidá se k němu
24.3 g (0,1 M) H-D-Trp-OH za chlazení na +4 °C a intenzivního míchání. Pak se roztok nechá zahřát na teplotu místnosti. Ukončení reakce.se kontroluje tenkovrstvou chromatografií (TLC) v systému chloroform:ethylacetát:methanol 6:3:1 vymizením skvrny vnitřního anhydridu BocD-Glu-kyseliny. Zbytek dihexylkarbamidu se oddělí filtrací, dimethylformamid se odpaří za sníženého tlaku a k olejovitému zbytku se přidá 200 ml ethylacetátu a 200 ml 0,2% roztoku kyseliny sírové. Organická vrstva se oddělí, promyje do neutrálního pH nasyceným roztokem Na2SO4 a vysuší nad Na2SO4. Ethylacetátový roztok se odpaří za sníženého tlaku. Výsledná olejovitá sraženina je směs Boc-D-Glu-D-Trp-OH a Boc-iD-Glu-D-Trp-OH. Celkový výtěžek činí 25,4 g (70 %).
I
3. Příprava H-D-Glu-D-Trp-OH a H-iD-Glu-D-Trp-OH
25,4 g směsi (0,048 M) se rozpustí ve 200 ml mravenčí kyseliny a míchá 1 h při 40 °C. Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a získá se hustý olej obsahující peptidy, které se oddělí a vyčistí iontovýměnnou chromatografíí ve sloupci naplněném Sephadexem v gradientu 0,01 až 0,2M pyridin-acetátového tlumiče (pufru). Výtěžek činí 5,7 g (35 %) H-D-Glu-D-TrpOH a 5,7 g (35 %) H-iD-Glu-D-Trp-OH.
Zjistí se následující fyzikální a chemické charakteristiky peptidu:
Primární struktura Empirický vzorec Molekulová hmotnost Vzhled Rozpustnost H-D-Glu-D-Trp-OH a H-iD-Glu-D-Trp-OH C16FL0N3O5 334,35 žlutobílý nebo šedý prášek snadno rozpustný ve vodě, mírně v alkoholu, nerozpustný v chloroformu
UF spektrum v rozsahu 250 až 300 nm vykazuje minimum při 280 ±2 nm a rameno při 287 ± 2 nm.
Biologická aktivita nového peptidu se testuje na myších Balb/c. Buňky sleziny myší se suspendují v prostředí RPMI 1640 se 2 ml glutaminu a 5% inaktivovaného fatálního séra a potom se vnesou do mělkých misek v množství 100 mel (200 000 buněk) na 1 misku. Zkoumaný preparát se vnese na začátku kultivace. Jako mitogen se použije konkanavalin A v konečné koncentraci 2 meg na 1 misku. Misky se inkubují při 37 °C v 5% CO2 po dobu 48 hodin. Proliferace (chorobné bujení) buněk se hodnotí po vnesení 3H-thymidinu, který se přidá v dávce 5 mcg/ml 24 hodin před ukončením kultivace, pomocí scintilačního počítače a vyjádří se množstvím rozpadů za minutu (CPM). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.
Tabulka 2
Přípravek CPMIx>
Dávka preparátu, mcg/ml
1 5 10 20
iD-Glu-D-Trp Cyklosporin A 68 594 67 649 63 428 2698 20 043 574 13 222 569
Kontrola 61 467
T x) střední hodnota tří měření
U nového peptidu bylo zjištěno, že inhibuje proliferaci slezinných buněk.
Ke zjištění bezpečnosti peptidu byla provedena studie na akutní toxicitu podle metodických doporučení Farmakologického výboru ruské federace na požadavky předklinických studií celkového toxického účinku nových farmakologických látek.
Podle získaných výsledků bylo zjištěno, že při lOOOnásobné intraperitoneální dávce peptidu nenastává žádný akutní toxický efekt a s těmito dávkami nelze dosáhnout LD50.
Využitelnost vynálezu
Biologicky aktivní peptidy se mohou široce používat v lékařství a veterinářství.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptid obecného vzorce I
    X-A-D-Trp-Y (I), ío v němž
    X je atom vodíku, zbytek glycinu, alaninu, leucinu, isoleucinu, valinu, N-valinu, prolinu, tyrosinu, fenylalaninu, tryptofanu, D-alaninu, D-leucinu, D-isoleucinu, D-valinu, D-N-valinu, D-prolinu, D-tyrosinu, D-fenylalaninu, D-tryptofanu, α-aminomáselné kyseliny nebo ξ-amino15 kapronové kyseliny,
    Aje zbytek D-glutamové kyseliny nebo iD-glutamové kyseliny a
    Y je zbytek glycinu, alaninu, leucinu, isoleucinu, valinu, N-valinu, prolinu, tyrosinu,
    20 fenylalaninu, tryptofanu, D-alaninu, D-leucinu, D-isoleucinu, D-valinu, D-N-valinu, Dprolinu, D-tyrosinu, D-fenylalaninu, D-tryptofanu, α-aminomáselné kyseliny, ξ-aminokapronové kyseliny, hydroxyl a aminoskupina substituovaná jednou nebo dvakrát Ci_3alkylem.
    25
  2. 2. Peptid podle nároku 1, uvedeného obecného vzorce I, v němž aminoskupina substituovaná jednou nebo dvakrát Ci_3alkylem značí -NHCHj, -N(CH3)2, -NH(CH2CH3), -N(CH2CH3)2, -NH(CH2CH2CH3) nebo -N(CH2CH2CH3)2.
  3. 3. Peptid podle nároků 1 a 2, obecného vzorce I, v němž X je vodík, A je iD-glutamová
    30 kyselina a Y je hydroxyl nebo aminoskupina substituovaná Ci_3alkylem.
  4. 4. Peptid podle nároků 1 až 3 o sekvenci H-iD-Glu-D-Trp-OH.
  5. 5. Způsob přípravy peptidu shora uvedeného obecného vzorce I, v němž X, A a Y mají shora
    35 uvedené významy, vyznačující se tím, že se v roztoku otevře vnitřní anhydrid tributyloxykarbonylglutaminové D nebo L kyseliny působením odpovídajícího derivátu vzorce D-Trp-Y, v němž Y má shora uvedený význam, tributyloxykarbonylová skupina se odštěpí působením mravenčí kyseliny, růstem se vybuduje peptidový řetězec metodou aktivovaných i esterů a směsných anhydridů a nakonec se a- a τ-izomery chromatograficky rozdělí.
  6. 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se vnitřní anhydrid tributyloxykarbonylglutaminové D nebo L kyseliny otevře působením K-soli D-Trp-Y.
  7. 7. Způsob podle nároků 5a 6, vyznačující se tím, že se izomery chromatograficky
    45 rozdělí po vytvoření dipeptidu glutamin-tryptofan.
  8. 8. Farmaceutický prostředek s inhibičními účinky buněčné proliferace a imunoregulačními účinky, podávaný pacientům před ozářením nebo chemoterapií, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje v účinném množství alespoň jeden peptid podle nároků 1 až 3 ve
    50 spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.
  9. 9. Použití peptidu podle nároků 1 až 3 pro výrobu léčiva k modulaci buněčné proliferace.
    -6CZ 287816 B6 i
    I
  10. 10. Použití peptidu podle nároků 1 až 3 pro výrobu léčiva k imunoregulaci.
  11. 11. Použití podle nároků 9 a 10 pro výrobu léčiva podávaného před ozářením nebo chemoterapií.
CZ19973905A 1995-06-07 1996-05-06 Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof CZ287816B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU95108559A RU2107692C1 (ru) 1995-06-07 1995-06-07 Пептид и способ его получения

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ390597A3 CZ390597A3 (cs) 1998-08-12
CZ287816B6 true CZ287816B6 (en) 2001-02-14

Family

ID=20168146

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973905A CZ287816B6 (en) 1995-06-07 1996-05-06 Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5736519A (cs)
EP (1) EP0832900B1 (cs)
JP (1) JP4082522B2 (cs)
CN (1) CN1154653C (cs)
AT (1) ATE260933T1 (cs)
AU (1) AU724781B2 (cs)
BR (1) BRPI9609235B8 (cs)
CA (1) CA2222296C (cs)
CZ (1) CZ287816B6 (cs)
DE (1) DE69631762T2 (cs)
DK (1) DK0832900T3 (cs)
ES (1) ES2217311T3 (cs)
HU (1) HU228461B1 (cs)
LT (1) LT4476B (cs)
LV (1) LV12074B (cs)
PT (1) PT832900E (cs)
RU (1) RU2107692C1 (cs)
SK (1) SK281825B6 (cs)
UA (1) UA48974C2 (cs)
WO (1) WO1996040740A1 (cs)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2107691C1 (ru) * 1995-03-02 1998-03-27 Дейгин Владислав Исакович Пептид и способ его получения
US5916878A (en) * 1995-11-28 1999-06-29 Edward T. Wei γ-glutamyl and β-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith
US6159940A (en) * 1996-02-28 2000-12-12 Immunotech Developments Inc. Method for modulating hemopoiesis
DE19712633A1 (de) * 1997-03-26 1998-10-08 Laves Arzneimittel Verwendung von gamma-Aminobuttersäure als Interleukinbildungsstimulans
IL145926A0 (en) 2001-10-15 2002-07-25 Mor Research Applic Ltd Peptide epitopes of mimotopes useful in immunomodulation
US20060233863A1 (en) 2003-02-10 2006-10-19 Enzymotec Ltd. Oils enriched with diacylglycerols and phytosterol esters and unit dosage forms thereof for use in therapy
IL155136A0 (en) * 2003-02-10 2003-10-31 Enzymotec Ltd A composition for reducing blood cholesterol and triglycerides
UA80870C2 (en) * 2003-03-28 2007-11-12 Sciclone Pharmaceuticals Inc Method for treatment or prevention of aspergillus infections with thymosin alpha 1
BRPI0514244A (pt) * 2004-08-09 2008-06-03 Enzymotec Ltd produtos alimentìcios para diabéticos
RU2394576C2 (ru) 2004-08-10 2010-07-20 Энзимотек Лтд. Способы лечения, требующие фитокомпонентов
WO2006131833A2 (en) * 2005-03-18 2006-12-14 Centre National De La Recherche Scientifique New hybrid oligomers. their preparation process and pharmaceutical compositions containing them
CA2604133C (en) * 2005-04-07 2015-12-01 Centre National De La Recherche Scientifique Compounds useful as modulators of the proteasome activity
US20100129288A1 (en) * 2005-06-28 2010-05-27 Elior Peles Gliomedin, Fragments Thereof and Methods of Using Same
RU2320364C1 (ru) * 2006-08-21 2008-03-27 Закрытое Акционерное Общество "Центр "Пептос" Способ лечения злокачественных новообразований
CA2569204A1 (en) 2006-11-28 2008-05-28 Apotex Technologies Inc. Crystalline d-isoglutamyl-d-tryptophan and the mono ammonium salt of d-isoglutamyl-d-tryptophan
CA2571645A1 (en) * 2006-12-19 2008-06-19 Apotex Technologies Inc. Pharmaceutically acceptable salts of thymodepressin and processes for their manufacture
MX2009008641A (es) 2007-02-13 2009-09-14 Sciclone Pharmaceuticals Inc Composiciones para el tratamiento o prevencion del deterioro, lesion o daño a tejido debido a enfermedad de las mucosas.
CA2579119C (en) 2007-02-16 2013-03-05 Apotex Technologies Inc. Crystalline forms of the mono-sodium salt of d-isoglutamyl-d-tryptophan
US20100150924A1 (en) * 2007-05-22 2010-06-17 Elior Peles Regulation of myelination by nectin-like (necl) molecules
RU2410391C1 (ru) * 2009-06-03 2011-01-27 Общество с ограниченной ответственностью "Пептос Фарма" Пептиды, влияющие на регенерацию кроветворной системы, и фармацевтическая композиция на их основе
AU2012234680A1 (en) * 2011-03-31 2013-10-17 Apotex Technologies Inc. Prodrugs of D-isoglutamyl-[D/L]-tryptophan
CN103502215A (zh) * 2011-03-31 2014-01-08 阿普泰克斯科技公司 D-γ-谷氨酰基-D-色氨酸和D-γ-谷氨酰基-L-色氨酸的前药
CN102417474B (zh) * 2011-09-26 2014-07-02 深圳翰宇药业股份有限公司 D-异谷氨酰基-d-色氨酸制备的新方法
RU2634258C1 (ru) * 2016-11-08 2017-10-24 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) Наполнитель для капсульного ингалятора

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3832337A (en) * 1970-07-28 1974-08-27 Squibb & Sons Inc Peptide enzyme inhibitors
GB1526367A (en) * 1976-10-12 1978-09-27 Ici Ltd Polypeptide
HU184481B (en) * 1981-10-02 1984-08-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing tripeptides for diminishing appetite
JPS5921656A (ja) * 1982-07-28 1984-02-03 Takeda Chem Ind Ltd ポリペプチド誘導体
CH659586A5 (de) * 1985-07-02 1987-02-13 Le G Ped I Arzneimittel aus dem thymus und verfahren zu dessen herstellung.
CA1286989C (en) * 1985-12-26 1991-07-30 A. Arthur Gottlieb Immunoamplifiers and related compositions
IT1216908B (it) * 1987-03-19 1990-03-14 Eniricerche Spa Analoghi retro-inversi della timopentina e dei suoi frammenti, il metodo per la loro sintesi ed il loro impiego per la preparazionedi composizioni farmaceutiche.
DE3873327D1 (de) * 1987-12-30 1992-09-03 Vsesojuznyj Kardiologitsches Arzneimittelzubereitung zur behandlung des immunmangels.
US5021551A (en) * 1989-01-18 1991-06-04 Washington University Method of enhancing peptide immunogenicity
SU1737798A1 (ru) * 1989-04-11 1995-03-20 Институт клинической иммунологии СО АМН СССР Способ получения иммуностимулирующих тимусных полипептидов
IT1230733B (it) 1989-06-30 1991-10-29 Eniricerche Spa Analoghi della timopentina retro invertita a tutti i legami, il metodo per la loro sintesi ed il loro impiego per la preparazione di composizioni farmaceutiche.
IT1263042B (it) * 1993-01-15 1996-07-24 Enichem Polimeri Composizione da stampaggio a base di polifenilenetere
AU7392294A (en) * 1993-07-21 1995-02-20 Vladimir Khatskelevich Khavinson Pharmaceutical with immunomodulating activity

Also Published As

Publication number Publication date
EP0832900A1 (en) 1998-04-01
LT4476B (lt) 1999-03-25
CA2222296A1 (en) 1996-12-19
LV12074B (lv) 1998-08-20
DK0832900T3 (da) 2004-06-21
JPH11513016A (ja) 1999-11-09
EP0832900B1 (en) 2004-03-03
HUP9801990A2 (hu) 1999-02-01
WO1996040740A1 (en) 1996-12-19
DE69631762T2 (de) 2005-03-10
ATE260933T1 (de) 2004-03-15
RU2107692C1 (ru) 1998-03-27
CZ390597A3 (cs) 1998-08-12
HUP9801990A3 (en) 1999-06-28
SK166997A3 (en) 1998-04-08
BR9609235A (pt) 1999-12-21
AU724781B2 (en) 2000-09-28
LV12074A (lv) 1998-06-20
CN1189837A (zh) 1998-08-05
EP0832900A4 (en) 1999-10-06
BR9609235B1 (pt) 2009-01-13
AU5707696A (en) 1996-12-30
PT832900E (pt) 2004-07-30
CN1154653C (zh) 2004-06-23
DE69631762D1 (de) 2004-04-08
JP4082522B2 (ja) 2008-04-30
LT98004A (en) 1998-10-26
CA2222296C (en) 2001-10-09
SK281825B6 (sk) 2001-08-06
BRPI9609235B8 (pt) 2016-09-27
ES2217311T3 (es) 2004-11-01
UA48974C2 (uk) 2002-09-16
HU228461B1 (en) 2013-03-28
US5736519A (en) 1998-04-07
HK1014965A1 (en) 1999-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ287816B6 (en) Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof
CN115594735B (zh) 具有抗衰老作用的肽及其组合物和用途
EP0014815A2 (de) Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte sowie pharmazeutische Präparate mit einer dieser Verbindungen
EP0818462B1 (en) Glu-trp comprising tripeptides
RU2362579C1 (ru) Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием
CN115581633B (zh) 肽类化合物在制备用于皮肤延衰修复的组合物中的新用途
US5114926A (en) Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses
US5093320A (en) Novel peptides inhibiting the maturation of t-lymphocytes and the activity of macrophages, pharmaceutical compositions containing them and process for preparing same
EP0288278A2 (en) Chemical derivatives of GHL-CU
BG98956A (bg) Съединения и продукти на реакцията на амаdоri,метод за тяхното производство и използването им
EP0269389A2 (en) Peptides
US7183430B2 (en) Compounds which can block the response to chemical substances or thermal stimuli or mediators of inflammation of nociceptors, production method thereof and compositions containing same
RU2161501C1 (ru) Способ получения пептидов, обладающих тканеспецифической активностью, и фармацевтические композиции на их основе
US4487764A (en) New peptides and a process for their preparation
US5066642A (en) Adamantyl comprising tripeptides, derivatives and hydrochlorides thereof, their preparation and use
EP0464009A2 (en) Oligopeptide derivatives of ipoxantine endowed with immunomodulating activity and pharmaceutical compositions containing same
CA2011874C (en) Sdk peptides, a preparation process of the same and therapeutic compositions containing them
US5656601A (en) Acylated splenopentins, methods for their synthesis and their use
RU2123859C1 (ru) Пептид, обладающий иммуносупрессивным свойством
HU199878B (en) Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient
WO2023077339A1 (zh) 一种四肽衍生物及其美容组合物或药用组合物和用途
CN117088941A (zh) 一种三肽衍生物及其组合物和用途
FR2559157A1 (fr) Nouvel hexapeptide, son procede d'obtention et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent
HK1014965B (en) Peptide and method of obtaining it
CS228546B2 (cs) Způsob výroby pentapeptidů

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20140506