CZ283320B6

CZ283320B6 - Deoxyspergualintrihydrochlorid v krystalické formě beta a způsob jeho výroby

Info

Publication number: CZ283320B6
Application number: CS902613A
Authority: CZ
Inventors: Katsushige Ikai; Makoto Moriguchi; Yoshihisa Umeda; Tetsushi Saino; Ikunoshin Kato
Original assignee: Takara Shuzo Co., Ltd.; Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 1989-05-29
Filing date: 1990-05-28
Publication date: 1998-02-18
Also published as: YU48230B; CN1017621B; ES2062363T3; TW275619B; HUT54633A; CN1047670A; CZ261390A3; AR247877A1; AU5580090A; DE69006105D1; AU626676B2; PL163358B1; DE69006105T2; EP0400889B1; TW275620B; CA2017361A1; EP0400889A1; KR900018015A; KR940005918B1; PL285375A1

Abstract

Řešení se týká deoxyspergualintrihydrochloridu v krystalické formě beta. Tato látka potlačuje imunologickou odpověď organismu. Způsob její výroby spočívá v tom, že se deoxyspergualintrihydrochlorid rozpustí ve vodném ethanolu při koncentraci ethanolu 85 až 99,5 % objemových, roztok se nechá stát 2 až 22 dnů a krystalky formy beta se oddělí. ŕ

Description

Deoxyspergualintrihydrochlorid v krystalické formě beta a způsob jeho výroby

Oblast techniky

Vynález se týká deoxyspergualintrihydrochloridu v krystalické formě beta, chemický název této látky j e N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinheptanamid)-2-hydroxyethanamitrihydrochlorid, a způsobu jeho výroby. Sloučenina má protinádorový účinek a je schopna potlačovat imunologickou odpověď organismu.

Dosavadní stav techniky

Deoxyspergualin je možno vyjádřit vzorcem I

H₂NCNH(CH₂)₆CONHCHCONH(CH₂)4NH(CH₂)₃NH₂ (I).

II

NH

OH

Tato látka je vhodná pro klinické použití pro svoji velmi dobrou protinádorovou účinnost a pro schopnost potlačovat imunologickou odpověď. Obvykle se tato látka připravuje ve formě trihydrochloridu.

Při výrobě tohoto hydrochloridu se obvykle užívá způsobu podle US patentových spisů č. 4 518 532 a 4 603 015, jde o syntetický postup při použití kondenzace 7-guanidinheptanamidu s glyoxylylspermidinem za dehydratace při použití kyseliny jako katalyzátoru.

Uvedeným způsobem se získá práškový hydrochlorid, který má některé nežádoucí vlastnosti, jako nestálost při vyšší teplotě a hygroskopičnost. Podle vynálezu je možno získat krystalický hydrochlorid, který již nemá tak výrazné nežádoucí vlastnosti, je stálejší při zvýšených teplotách a není tak hygroskopický.

Bylo prokázáno, že uvedený hydrochlorid je možno získat v krystalické formě a že krystalky mají význačně nižší hygroskopičnost, jsou stálejší při vyšší teplotě ajsou snadněji manipulovatelné než práškový nebo lyofilizovaný produkt, který se obvykle vyrábí a používá.

V průběhu přihlášky se pod pojmem práškový deoxyspergualinhydrochlorid rozumí prášek, získaný z vodné suspenze tohoto hydrochloridu sušením za sníženého tlaku nebo lyofilizací. Pod pojmem sirup, získaný z vodné suspenze se rozumí sirupovitý zbytek, získaný odpařením vodného roztoku uvedeného hydrochloridu za sníženého tlaku. Obsah vody v tomto sirupu je obvykle 30 % nebo nižší.

Krystalický deoxyspergualinhydrochlorid je málo hygroskopický a je poměrně stálý při vyšší teplotě, krystaly mají formu a nebo β.

Krystaly ve formě a je možno připravit následujícím způsobem:

Deoxyspergualinhydrochlorid je možno získat různým způsobem, jeden z těchto postupů je popsán například v příkladu 4 US patentového spisu č. 4 518 532.

V případě, že se práškový deoxyspergualinhydrochlorid nechá stát v prostředí s nízkou vlhkostí, například při relativní vlhkosti 52 % nebo nižší při vhodné teplotě, prášek krystalizuje na krystaly deoxyspergualinhydrochloridu ve formě a.

Teplota při krystalizací není omezena na určité teplotní rozmezí za předpokladu, že nepřevýší teplotu rozpadu této látky, obvykle se užívá rozmezí 0 až 30 °C. Potřebná doba je 2 až 20 dnů, obvykle 10 dnů v závislosti na množství prášku a vlhkosti.

- 1 CZ 283320 B6

Krystaly ve formě a je rovněž možno získat ze sirupu deoxyspergualinhydrochloridu. Postupuje se tak, že se vodný roztok deoxyspergualinhydrochloridu zahustí na sirup, který se pak nechá stát při nízké relativní vlhkosti, s výhodou 52 % nebo nižší, čímž dojde ke vzniku krystalků ve formě a. Může být užito svrchu uvedeného teplotního rozmezí, avšak dobu krystalizace je možno zkrátit tak, že se sirup v průběhu krystalizace míchá, nebo že se k němu přidá vhodné množství krystalů ve formě a.

Nej vhodnějším způsobem pro výrobu krystalů ve formě a je postup, při němž se k sirupu s obsahem vody 20 % nebo nižším přidá malé množství předem připravených krystalků formy a a sirup se míchá několik hodin při relativní vlhkosti 30 % nebo nižší až do ztuhnutí. Při uložení do desikátoru se silikagelem dojde k ukončení krystalizace.

Dále budou uvedeny fyzikálně-chemické vlastnosti deoxyspergualinhydrochloridu v krystalické formě a.

1. Difrakce rtg-paprsku

Bylo použito zařízení pro difrakci rtg záření (Shimadzu XD-610), opatřeného měděnou trubicí, grafitovým monochrometrem a scintilačním počítačem pro detekci, výsledky postupu jsou znázorněny na obr. 1 a shrnuty v tabulce 1.

Dále na obr. 1 je znázorněna difrakce pro krystalky formy a, na ose úseček je nanesen difřakční úhel ve stupních a na ose pořadnic intenzita v Kcps.

Tabulka 1

Difrakce krystalů ve formě d(10‘¹⁰m) I/Ii d(10'¹⁰m) I/Ii

11,78	0,46	4,04	0,76
10,64	0,53	3,90	0,91
7,49	0,34	3,78	0,76
5,03	0,36	3,50	1,00
4,72	0,51	3,39	0,95
4,39	0,84	3,12	0,64

zdroj rtg záření: měděná trubice, 40 kV, 30 mA, λ = 1,54051 filtr: grafitový monochrometr.

2. Tepelná analýza

Výsledky diferenciální tepelné analýzy (DTA) a termogravimetrie (TG), získané při použití zařízení Rigaku Denki (Model TAS-100) jsou pro krystalky formy a znázorněny na obr. 2, na ose úseček je znázorněna teplota ve stupních Celsia a na ose pořadnic hmotnost v mg nebo elektronvolty (gV).

3. Hygroskopičnost

K vyhodnocení hygroskopičnosti práškované látky a krystalků ve formě a byla zaznamenávána změna hmotnosti každého vzorku po skladování při různé relativní vlhkosti po dobu 24 hodin. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 2.

-2CZ 283320 B6

Tabulka 2

Změny hmotnosti při různé relativní vlhkosti relativní __________zvýšení hmotnosti v %

vlhkost (%)	prášek	krystalky formy a
14	1,5
31	5,9	-0,8
43	9,1	-0,4
52	12,6	-0,2
64	17,9	17,8

Z tabulky je zřejmé, že krystalky formy a neabsorbovaly vodu při relativní vlhkosti 52 % nebo nižší, což znamená velké zlepšení ve srovnání s práškovou formou.

4. Stálost při vyšší teplotě

Aby bylo možno vyhodnotit stálost krystalické formy a ve srovnání s práškovou formou při vyšší teplotě, byly vzorky skladovány po dobu 6 dnů při teplotě 50 °C a pak byly analyzovány vysokotlakou kapalinovou chromatografií, aby bylo možno zjistit množství rozložené látky. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3

Srovnání stálosti při vyšší teplotě prášek krystalky formy a množství (%)

100,0 množství po skladování množství (%) = ---------------------- x 100 .

počáteční množství

Jak je zřejmé z tabulky 3, mají krystalky ve formě a značně zlepšenou stálost při vyšší teplotě.

Krystalickou formu β deoxyspergualinhydrochloridu je možno získat způsobem, který bude dále popsán. Sloučeninu jako takovou je možno získat různými postupy, jeden z nich je popsán například v US patentovém spisu č. 4 518 532.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří deoxyspergualintrihydrochlorid v krystalické formě beta, působící následující difrakci rtg záření:

d(10'¹⁰m) I/Ij d(10'¹⁰m) I/Ii

15,77	0,32	4,14	0,70
10,91	0,42	3,66	1,00
4,88	0,39	3,31	0,52
4,67	0,53	3,21	0,51

Podstatu vynálezu tvoří rovněž způsob výroby deoxyspergualintrihydrochloridu v krystalické formě beta; postup spočívá v tom, že se deoxyspergualintrihydrochlorid rozpustí ve vodném ethanolu, nebo se uvede s vodným ethanolem do styku, při koncentraci ethanolu v roztoku 85 až 99,5 % objemových, směs se ponechá stát 2 až 20 dnů za případného míchání, načež se výsledné krystalky deoxyspergualintrihydrochloridu v beta formě oddělí.

Teplota při krystalizaci není kritická za předpokladu, že nezpůsobí rozklad deoxyspergualinhydrochloridu, obvykle se užívá teploty v rozmezí -20 až 50 °C, s výhodou 5 °C až teploty místnosti. Doba krystalizace se pohybuje v rozmezí 2 až 20 dnů v závislosti na množství hydrochloridu, obvykle je 10 dnů. Počáteční stupeň krystalizace probíhá rychleji při použití malého množství krystalků formy β, přidaných do krystalizační směsi.

Při provádění tohoto postupu je možno užít místo práškové látky vodnou suspenzi deoxyspergualinhydrochloridu. V tomto případě je nutno brát do úvahy množství vody v tomto sirupu tak, aby výsledná koncentrace ethanolu v krystalizačním systému byla 85 až 99,5 %, s výhodou 90 až 98 % objemových.

Dobu krystalizace je možno snížit mícháním směsi, pak je možno ukončit krystalizaci během několika dnů. Vytvořené krystaly formy β je možno oddělit obvyklým způsobem, například filtrací za odsávání nebo filtrací, při níž se využívá odstředivé síly.

Dále budou uvedeny fyzikálně-chemické vlastnosti krystalů formy β.

1. Difrakce rtg záření

Bylo opět použito zařízení pro sledování difrakce (Shimadzu XD-3A), opatřeného měděnou katodou, grafitovým monochrometrem a scintilačním počítačem, výsledky sledování difrakce jsou znázorněny na obr. 3 a v tabulce 4.

Na obr. 3 je znázorněna difrakce rtg záření pro krystalky formy β tak, že na ose úseček je znázorněn úhel difrakce ve stupních a na ose pořadnic intenzita v Kcps.

Tabulka 4

Difrakce rtg záření pro krystalky formy β

d(10'¹⁰m)	I/Ii	d(10‘^,0m)	Vij
15,77	0,32	4,14	0,70
10,91	0,42	3,66	1,00
4,88	0,39	3,31	0,52
4,67	0,53	3,21	0,52

zdroj záření: měděná katoda, 40 kV, 30 mA, λ = 1,54051 filtr: grafitový monochrometr

2. Tepelná analýza

Výsledky diferenciální teplotní analýzy (DTA) a termogravimetrie (TG), získané na zařízení Shimadzu (model DTG-40), jsou pro krystalickou formu β znázorněny na obr. 4. Na ose úseček je teplota ve °C, na ose pořadnic hmotnost v mg nebo elektronvolty (gV).

3. Hygroskopičnost

K vyhodnocení hygroskopičnosti prášku a krystalků formy β byla zaznamenávána změna hmotnosti každého ze vzorků po skladování 24 hodin při různé relativní vlhkosti. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 5.

-4CZ 283320 B6

Tabulka 5

Změny hmotnosti při různé relativní vlhkosti relativní __________vzestup hmotnosti v %

vlhkost (%)	prášek	krystalky formy β
31	5,9	1,7
43	9,1	2,6
52	12,6	3,8
64	17,9	7,3
76	28,3	14,0

Jak je z tabulky zřejmé, byly změny hmotnosti krystalků formy β nižší při všech hodnotách relativní vlhkosti. Mimoto se krystalky při relativní vlhkosti 64 % na rozdíl od práškované formy nerozpouštěly.

4. Stálost při vyšší teplotě

K vyhodnocení stálosti krystalků formy β ve srovnání se stálostí práškové formy byly vzorky skladovány 6 dnů při teplotě 50 °C, načež byly analyzovány vysokotlakou kapalinovou chromatografii, aby bylo možno zjistit podíl rozloženého materiálu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.

Tabulka 6

Srovnání stálosti při vyšší teplotě prášek krystalky formy β množství (%) 89,8 100,6 množství po skladování množství (%) = ---------------------- x 100 .

počáteční množství

Z tabulky 6 je zřejmé, že krystalky formy β mají zřetelně zlepšenou tepelnou stálost.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady.

Příklad 1

Do lahvičky s obsahem 100 mg práškového deoxyspergualinhydrochloridu se přidá 0,5 ml 95% (objemová %) vodného ethanolu a roztok se nechá stát 3 dny při teplotě 5 °C. Vytvořené krystalky se odfiltrují za sníženého tlaku a suší se rovněž za sníženého tlaku, čímž se získá 55 mg krystalků ve formě β. Při difrakci rtg záření byla získána křivka, typická pro krystalky formy β, tak jak je uvedena na obr. 3.

Příklad 2

100 ml vodného roztoku, obsahujícího 20 g deoxyspergualinhydrochloridu, se koncentruje za sníženého tlaku, čímž se získá 25 g sirupovitého zbytku. K tomuto zbytku se přidá 75 ml ethanolu a 20 mg krystalků formy β jako očkovací materiál. Pak se nechá směs stát 9 dnů při

-5CZ 283320 B6 teplotě 5 °C. Vytvořené krystalky se oddělí stejným způsobem jako v příkladu 1 a pak se usuší, čímž se získá 16 g krystalků formy β.

Příklad 3

500 ml vodného roztoku, obsahujícího 150 g deoxyspergualinhydrochloridu, se koncentruje za sníženého tlaku až na 175 g sirupovitého zbytku. K tomuto sirupovitému zbytku se přidá 1 litr ethanolu a vzniklý roztok se míchá 2 dny při teplotě 5 °C. Vytvořené krystalky se pak oddělí filtrací za současného odstředění a pak se suší za sníženého tlaku, čímž se získá celkem 129 g krystalků ve formě β.

Příklad 4 litry vodného roztoku s obsahem 950 g deoxyspergualinhydrochloridu se odpaří za sníženého tlaku až na 1120 g sirupovitého zbytku. K tomuto zbytku se přidá 1,5 litru ethanolu a vzniklá suspenze se přenese do nádoby s objemem 10 litrů ke krystalizaci. Ke směsi se přidá ještě 6,5 litru ethanolu a pak za míchání 2 g krystalků formy β, načež se směs míchá ještě 4 dny při teplotě 15 °C. Pak se krystalky oddělí filtrací za odstřeďování a usuší za sníženého tlaku, čímž se získá 880 g krystalků formy β.

Krystalický deoxyspergualinhydrochlorid je nová látka se zlepšenou hygroskopičností a stálostí při vyšší teplotě, takže poskytuje lepší možnosti manipulace v průběhu zpracování na lékové formy a skladování.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Deoxyspergualintrihydrochlorid v krystalické formě beta, působící následující difrakci rtg záření

d(10’¹⁰m) I/I, d(10’¹⁰m) VIi 15,77 0,32 4,14 0,70 10,91 0,42 3,66 1,00 4,88 0,39 3,31 0,52 4,67 0,53 3,21 0,51
2. Způsob výroby deoxyspergualintrihydrochloridu v krystalické formě beta, vyznačující se tím, že se

a) deoxyspergualintrihydrochlorid rozpustí ve vodném ethanolu, nebo se uvede svodným ethanolem do styku při koncentraci ethanolu v roztoku 85 až 99,5 % objemových,

b) směs se ponechá stát 2 až 20 dnů za případného míchání, načež se

c) výsledné krystalky deoxyspergualintrihydrochloridu v beta formě oddělí.