CZ281070B6 - Slučenina farmakologicky účinné pro centrální nervový systém - Google Patents

Abstract

Vynález se týká řady sloučenin obecného vzorce I a jejich solí, kde například R.sup.1 .n.a R.sup.2.n., které mohou být stejné nebo rozdílné, znamenají vždy skupinu -NR.sup.13.n.R.sup.14.n., ve které R.sup.13 .n.a R.sup.14 .n.mohou být navzájem nezávislé a znamenají atom vodíku nebo alkylovou skupinu nebo tvoří s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklický kruh, popřípadě substituovaný jednou nebo větším počtem alkylových nebo aralkylových skupin a podle potřeby obsahující další heteroatom, R.sup.3 .n.znamená atom vodíku, halogenalkylovou, alkoxymethylovou nebo alkylovou skupinu, R.sup.4 .n.znamená atom vodíku, nitroskupinu nebo atom halogenu, R.sup.5 .n.představuje atom vodíku nebo halogenu, R.sup.6 .n.znamená atom vodíku nebo halogenu, nitroskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu nebo dialkylaminoskupinu, R.sup.7 .sup..n.znamená atom vodíku nebo halogenu a R.sup.8 .n.znamená atom vodíku nebo halogenu. Sloučeniny jsou vhodné pro ošetřování nebo profylaxi neurŕ

Description

Substituovaný 5-arylpyrimidin, způsob jeho výroby a farmaceutický prostředek s jeho obsahem

Oblast techniky

Tento vynález se týká substituovaného 5-arylpyrimidinu, způsobu jejich výroby a farmaceutického prostředku s jeho obsahem.

Dosavadní stav techniky

Glutamát je povzbudivě působící aminokyselina, která plní úlohu přenašeče neuronů (neurotransmitoru). Avšak pokud jeho extracelulární koncentrace je dostatečně vysoká, glutamát působí jako silný neurotoxin, schopný ničit neurony v centrálním nervovém systému (Rothman a Olney, Prog. Brain. Res. 63, 69 /1986/). Neurotoxinový účinek glutamátu se projevuje u řady chorob centrálního nervového systému a chorobných stavů, které s tímto systémem souvisejí, včetně cerebrálního ischemického poškození a chronických neurodegenerativních chorob, jako je Alzheimerova choroba, choroby pohybového systému a Huntingtonova chorea (Meldrum, Clinical Science 68, 113-122 /1985/). Kromě toho bylo zjištěno, že se glutamát podílí i na jiných neurologických chorobách, jako je epilepsie, maniodepresivní psychóza, deprese, schizofrenie, neurologické příznaky vysokého tlaku, chronické bolesti, neuralgie trojklanného nervu a migrény.

Evropská patentová přihláška č. 89 312 723.3 (evropský patentový spis č. 0 372 934A) popisuje druhovou skupinu substituovaných fenylpyrimidinů, určených k použití při výrobě léčiva pro ošetřování nebo prevenci chorob nebo zdratvotních potíží centrálního nervového systému u savců.

Podstata vynálezu

Tento vynález skýtá 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin a jeho adiční soli s kyselinami. Dalšími předměty tohoto vynálezu jsou způsoby výroby této sloučeniny a její adiční soli s kyselinami. Konečně dalším předmětem tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek určený k použití při ošetřování nebo profylaxi neurodegenerativní choroby centrálního nervového systému u savce, které původ spočívá v nadměrném uvolňování glutamátu jako přenašeče neuronů.

4-Amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin je účinným inhibitorem extracelulárního uvolňování glutamátu a má nepatrný účinek na enzym dihydrofolát reduktázu.

Mezi vhodné adiční soli s kyselinami se zahrnují soli, které tvoří jak organické, tak anorganické kyseliny. Takové adiční soli s kyselinami budou běžně farmaceuticky přijatelné, přičemž soli, které nejsou farmaceuticky přijatelné, se mohou používat pro výrobu a čistění pyrimidinu podle tohoto vynálezu. Mezi výhodné soli se tak zahrnují soli, které tvoří kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina citrónová, kyselina vinná, kyselina fosforečná, kyselina mléčná, kyselina pyrohroznová, kyselina octová, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina maleinová, kyselina oxaloctová, kyselina methansulfonová, kyselina ethansulfonová, kyselina p-toluensulfonová,

-1CZ 281070 B6 kyselina benzensulfonová a kyselina isethionová. Soli se mohou vyrábět reakcí pyrimidinu podle tohoto vynálezu, který je ve formě volné báze, s vhodnou kyselinou.

Pyrimidin a jeho farmaceuticky přijatelné soli s kyselinou se mohou používat pro ošetřování nebo profylaxi neurodegenerativních nebo jiných neurologických chorob centrálního nervového systému, jejichž původ spočívá v nadměrném uvolňování glutamátu jako přenašeče neuronů.

Choroby mohou být buď akutní nebo chronické. Akutní stavy zahrnují cerebrální ischemické poškození, které může vznikat z různých příčin včetně mrtvičného záchvatu, zastavení srdce, chirurgického přemostění na srdci, neonatální anoxie a hypoglykemie a také z fyzického poškození nebo traumatu míchy a mozku. Chronické choroby zahrnují Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu choreu, olivopontocerebrální atrofii a choroby pohybového systému. Další neurologické stavy, které se mohou ošetřovat sloučeninou podle tohoto vynálezu zahrnují depresi, maniodepresivní psychózu, schizofrenii, chronické bolesti, epilepsii, neuralgii trojklanného nervu a migrénu.

I když je možné pyrimidin podle tohoto vynálezu podávat ve formě nezpracované chemikálie, je výhodné předkládat tuto sloučeninu jako farmaceutický prostředek. Prostředky podle vynálezu zahrnují pyrimidin podle tohoto vynálezu nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, dohromady s alespoň jedním nosičem, který je přijatelný z farmaceutického hlediska, a popřípadě dalšími přísadami. Nosič nebo větší počet nosičů musí být přijatelný v tom smyslu, že je snášenlivý s jinými složkami prostředku a není zhoubný pro svého příjemce.

Prostředky podle vynálezu zahrnují prostředky vhodné pro perorální podání, parenterální podání (včetně subkutánního, intradermálního, intramuskulárního a intravenózního podání), rektální podání a podání lokální (včetně dermálního, bukálního a sublinguálního podání), ačkoli nejvhodnější cesta může záviset například na stavu a zdravotních potížích příjemce. Prostředky mohou být obvykle přítomny ve formě jednotkové dávky a mohou se připravovat libovolnou z metod, které jsou dobře známé ve farmacii. Všechny tyto metody zahrnují stupeň, ve kterém se pyrimidin podle tohoto vynálezu nebo jeho farmaceuticky přijatelná adiční sůl s kyselinou (účinná látka) uvádí do styku s nosičem, který sestává z jedné nebo většího počtu vedlejších složek. Obecně se prostředky vyrábějí rovnoměrným a důkladným stykem účinné látky s kapalnými nosiči nebo nosiči ve formě jemně rozmělněných pevných látek nebo oběma těmito typy nosičů a potom, pokud je zapotřebí, produkt se tvaruje do požadované formy.

Prostředky podle tohoto vynálezu, vhodné pro orální podání, mohou být přítomny jako oddělené jednotky, jako jsou kapsle, kašety nebo tablety, z nichž každá obsahuje předem stanovené množství účinné látky, jako prášek nebo granule, jako roztok nebo suspenze ve vodné kapalině nebo nevodné kapalině nebo jako kapalná emulze olej ve vodě nebo kapalná emulze typu voda v oleji. Účinná látka může být také přítomna jako sousto, lektvar nebo pasta.

-2CZ 281070 B6

Tablety se mohou vyrábět lisováním nebo odléváním, popřípadě s alespoň jednou vedlejší složkou. Lisované tablety se mohou vyrábět lisováním ve vhodném zařízení z účinné látky ve volně tekoucí formě, jako z prášku nebo granulí, popřípadě po smíchání s pojivém, mazivem, inertním ředidlem, kluznou látkou, povrchově aktivní látkou nebo dispergačním prostředkem. Odlévané tablety se mohou zhotovit tvarováním ve vhodném zařízení ze směsi práškové sloučeniny roztavené s inertním kapalným ředidlem. Tablety se podle potřeby mohou povlékat nebo opatřit rýhou a mohou být upraveny tak, že umožňují pomalé nebo řízené uvolňování účinné látky v nich obsažené.

Prostředky pro parenterální podání zahrnují vodné a nevodné sterilní injekční roztoky, které obsahují antioxidační prostředky, pufry, bakteriostatika a rozpuštěné látky, které poskytují prostředky isotonické vlastnosti s krví zamýšleného příjemce a také zahrnují vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou obsahovat suspendační prostředky a zahušťovadla. Prostředky mohou být přítomny v zásobnících obsahujících jednotkovou dávku nebo více dávek, například v uzavřených ampulích nebo v lékovkách a mohou se skladovat ve vymraženém stavu (lyofilizované), kdy vyžadují pouze přídavek sterilního kapalného nosiče, například vody pro injekci, bezprostředně před použitím. Injekční roztoky nebo suspenze k okamžitému použití se mohou vyrábět ze sterilních prášků, granulí nebo tablet druhů, které byly dříve popsány.

Prostředky pro rektální použití se mohou předkládat jako čípky s obvyklými nosiči, jako je kakaové máslo nebo polyethylenglykol.

Prostředky pro lokální podání ústy, například pro bukální nebo sublinguální podání, zahrnují pokroutky, které obsahují účinnou látku v ochuceném základě, jako je sacharóza a arabská guma nebo tragant, a pastilky, které obsahují účinnou látku v základě, jakým je želatina a glycerin nebo sacharóza a arabská guma.

Výhodné prostředky ve formě jednotkové dávky jsou ty, které obsahují účinnou dávku, jako je zde uvedena dále, nebo vhodnou její část.

Mělo by se vzít v úvahu, že kromě složek podrobně uvedených svrchu, prostředky podle tohoto vynálezu mohou zahrnovat také jiné látky běžné v oboru s ohledem na typ předmětného prostředku. Například pro orální podání mohou prostředky obsahovat ochucovadla.

Tablety nebo jiné formy umožňující získání oddělených jednotek, mohou obvykle obsahovat množství 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu, které je účinné jako dávka nebo její násobek. Například jednotky obsahují od 5 do 500 mg, obvykle okolo 10 až 250 mg této sloučeniny.

4-Amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin se s výhodou používá k ošetřování chorob nebo zdravotních potíží centrálního nervového systému orálním podáním nebo jako injekce (intraparenterální nebo subkutánní). Přesné množství sloučeniny podané pacientovi bude spočívat na odpovědnosti oše

-3CZ 281070 B6 třujícího lékaře. Použitá dávka však bude závislá na řadě okolností, mimo jiné na věku a pohlaví pacienta, přesné chorobě určené k ošetřování a její obtížnosti. Tak například, když se ošetřuje pacient trpící epilepsií, rozmezí dávky bude pravděpodobně podstatně menší, než pokud se ošetřuje pacient po mrtvičném záchvatu ke zmírnění cerebrálníhc^ ischemického poškození. Také cesta podání se patrně bude měnit v závislosti na stavu pacienta a obtížnosti choroby.

4-Amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin se může podávat orálně nebo injekční cestou v dávce od 0,1 do 30 mg/kg za den. Rozmezí dávky pro dospělého člověka je obvykle od 8 do 2 400 mg za den, s výhodou od 35 do 1 050 mg za den.

Tento vynález poskytuje první způsob výroby pyrimidinu podle tohoto vynálezu nebo jeho adiční soli s kyselinou, který zahrnuje reakci sloučeniny vzorce II

HN /--\

N N-CH₂CH₂CH₃

H₂N / .(II) nebo její soli se sloučeninou obecného vzorce I

ve kterém

Y znamená kyanoskupinu a

L představuje odštépitelnou skupinu, a vzniklý pyrimidin podle tohoto vynálezu se izoluje jako volná báze nebo jako adiční sůl s kyselinou.

Příklady vhodných odštěpitelných skupin zahrnují alkoxyskupinu, například alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu, například alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, atom halogenu nebo popřípadě substituovanou aminoskupinu, napří

-4CZ 281070 B6 klad skupinu vzorce NR⁹N¹⁰, ve kterém R⁹ a R¹⁰ jsou stejné nebo rozdílné a jsou zvoleny z atomu vodíku, alkylové skupiny, arylové skupiny a aralkylové skupiny nebo R⁹ a R¹⁰ dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří heterocyklický kruh, který je popřípadě substituován alespoň jednou alkylovou skupinou a popřípadě obsahuje další heteroatom. Skupina vzorce NR⁹N¹⁰ může být například anilinoskupina, morfolinoskupina, alkylamino- skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzylaminoskupina.

Výhodně se reakce sloučeniny vzorce II se sloučeninou obecného vzorce I provádí v nevodném rozpouštědle, jako v alkanolu, například v ethanolu, za zvýšené teploty (například od 50 do 100 °C). Sloučenina vzorce II se obvykle používá ve formě soli, jako svého hydrojodidu, a v tomto případě se reakce s výhodou provádí v přítomnosti báze, jako je alkoxid, například ethoxid sodný, s výhodou za varu pod zpětným chladičem. Pokud se sloučenina vzorce II používá ve formě volné báze, přídavek další báze nemusí být nezbytný.

Vynález také skýtá druhý způsob výroby pyrimidinu podle tohoto vynálezu nebo jeho adiční soli s kyselinou, který spočívá v tom, že se nechá reagovat sloučenina vzorce II nebo její sůl se sloučeninou obecného vzorce III

(III) 1 ve kterém

Y znamená kyanoskupinu, a vzniklý pyrimidin podle tohoto vynálezu se izoluje jako volná báze nebo jako adiční sůl s kyselinou.

Reakce se s výhodou provádí v nevodném rozpouštědle, například v alkanolu, jako je ethanol, za zvýšené teploty, s výhodou za varu pod zpětným chladičem.

Vynález poskytuje další, třetí způsob výroby pyrimidinu podle tohoto vynálezu nebo jeho adiční soli s kyselinou, který spočívá v reakci sloučeniny vzorce II nebo její soli se sloučeninou obecného vzorce IV

-5CZ 281070 B6 (IV)

R¹¹-⁰ ve kterém

Y znamená kyanoskupinu a

R¹⁰ a R¹¹ znamenají vždy alkylovou skupinu nebo tvoří dohromady skupinu vzorce ~(C(R₂))_n, kde n představuje číslo 2 až 4 a každý ze substituentů R znamená nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu, a vzniklý pyrimidin podle tohoto vynálezu se izoluje jako volná báze nebo jako adiční sůl s kyselinou.

Reakce se může provádět v nevodném rozpouštědle, například v ethanolu, za varu pod zpětným chladičem. Sloučenina vzorce II se obvykle používá ve formě soli, jako hydrojodidu, a v tomto případě se reakce s výhodou provádí v přítomnosti báze, jako alkoxidu, například ethoxidu sodného. Pokud se sloučenina obecného vzorce II použije ve formě volné báze, přídavek další báze nemusí být nezbytný.

Pyrimidin podle tohoto vynálezu se může izolovat jako volná báze nebo jako adiční sůl s kyselinou. Pyrimidin ve formě volné báze še může převést na adiční sůl s kyselinou standardními způsoby, například reakcí volné báze s příslušnou kyselinou ve vhodném rozpouštědle. Podobné se adiční sůl s kyselinou může převést standardními způsoby na jinou adiční sůl s kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou vyrobit známými způsoby (viz například J. Am. Chem. Soc. 73., 3763-3770 /1951/), například reakcí sloučeniny obecného vzorce III s diazomethanem nebo s alkylorthoestery (J. Am. Chem. Soc. 74, 1310-1313 /1952/) nebo kondenzací s aminem. Sloučeniny obecného vzorce III se mohou vyrobit způsoby, které jsou známé (J.Am.Chem. Soc. 73., 3763-3770 /1951/).

Sloučeniny obecného vzorce II se také mohou vyrobit standardními způsoby, například reakcí sloučeniny obecného vzorce

H,N-C(NH)-R², ^z » ve které

-6CZ 281070 B6

R² znamená alkylthioskupinu, s vhodným aminem. Reakce se s výhodou provádí za teploty místnosti ve vhodném rozpouštědle, jako ve vodě.

Příklady provedení vynálezu

Dále uvedené příklady ilustrují vynález. Jsou také uvedeny srovnávací příklady.

Srovnávací příklad 1

Způsob výroby 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilu

i) Způsob výroby 2,3,5-trichlorbenzylalkoholu

K roztoku 50 g 2,3,5-trichlorbenzaldehydu (Aldrich) v 1,0 litru ethanolu se za teploty místnosti přidá 7,00 g natriumborhydridu a výsledná směs se míchá po dobu 3,5 hodiny. Reakční směs se rychle zchladí vodou, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se poté rozdělí mezi chloroform a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se bílá pevná látka o hmotnosti 43,00 g, která má teplotu tání 90 až 93 ’C.

ii) Způsob výroby 2,3,5-trichlorbenzylbromidu

K roztoku alkoholu ve 400 ml benzenu se pod dusíkovou atmosférou přidá 126,58 g bromidu fosforitého a směs se míchá za teploty 55 až 60 °C po dobu 3,5 hodiny. Po ochlazení se směs vylije na 2 litry drceného ledu a benzenová vrstva se oddělí. Vodná fáze se třikrát promyje benzenem a spojené benzenové extrakty se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odpaří. Dostane se nahnědlá kapalina, stáním tuhnoucí, o hmotnosti 37,53 g. Tato látka má teplotu tání 40 až 42 °C.

« iii) Způsob výroby 2,3,5-trichlorfenylacetonit»ilu

Ve směsi 130 ml dimethylformamidu a 86,67 ml vody se supenduje bromid za teploty 0 °C a poté se přidá po částech 12,99 g kyanidu draselného. Po tříhodinovém míchání za teploty 30 až 35 °C se suspenze zředí vodou a extrahuje diethyletherem. Spojené etherové extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na silikagelu, za eluování hexanem až směsí 20 % etheru v hexanu se dostane požadovaná sloučenina o hmotnosti 18,52 g, která je tvořena bílou pevnou látkou. Tato sloučenina má teplotu tání 60 až 62 °C.

iv) Způsob výroby sodné soli 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-oxopropionitrilu

K roztoku ethoxidu sodného, připravenému z 0,803 g sodíku v 55 ml ethanolu, ochlazeného na ledové lázni, se pod dusíkovou atmosférou přidá 2,3,5-trichlorfenylacetonitril. Poté se přidá 5,1 ml ethylformiátu a směs se míchá za teploty místnosti přes

-7CZ 281070 B6 noc. Po dalším míchání za teploty 50 °C po dobu 2,5 hodiny se směs ochladí a filtruje. Filtrát se odpaří a odparek se trituruje diethyletherem, filtruje a vysuší. Získá se 6,82 g sloučeniny.

v) Způsob výroby 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilu

Svrchu uvedená pevná látka se rozpustí v 36 ml dimethylformamidu a k roztoku se přidají 2 ml methyljodidu. Reakční nádoba se uzavře a potom se její obsah míchá za teploty 40 'C po dobu 3 hodin. Poté se rozpouštědlo odpaří. Odparek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Organická fáze se promyje vodou, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Jako červeno hnědý olej se dostane 5,04 g surové látky, která stáním tuhne.

Srovnávací příklad 2

Způsob výroby methylthiouroniumjodidu

10,8 g thiomočoviny se rozpustí v 250 ml acetonu za teploty 50 °C. K roztoku se přidá 10 ml methyljodidu a reakční směs se míchá za teploty 50 C po dobu 4 hodin. Po ochlazení se roztok zředí 1 litrem etheru a methyljodidová sůl se odfiltruje, pr.omyje se etherem a vysuší za sníženého tlaku. Získaná sloučenina má hmotnost 29,2 g, její teplota tání činí 113 až 115 ’C.

Přiklad

Způsob výroby dimesylátu 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu g dihydrobromidu N-propylpiperazinu (Lancaster) v 15 ml vody se vede kolonou naplněnou iontoměničovou pryskyřicí (IR410, OH“ forma) (BDH) a eluuje se vodou. Eluát, který obsahuje sekundární amin, se odpaří, odparek se rozpustí v diethyletheru, vysuší síranem hořečnatým a odpaří dosucha. Získá se tak 0,6 g N-propylpiperazinu ve formě bezbarvého oleje.

Piperazin se rozpustí v 10 ml vody a poté se přidá methylthiuroniumjodid (ze srovnávacího příkladu 2). Roztok se míchá probubláváním dusíku za teploty místnosti po dobu 96 hodin. Poté se roztok odpaří za sníženého tlaku. Odparek se suspenduje v acetonu, filtruje a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 0,51 g hydrojodidu N-propylpiperazinoformamidinu, který má teplotu tání 174 až 176 °C.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připravenému z 0,052 g sodíku v 5 ml ethanolu, se přidá 0,506 g hydrojodidu N-propylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po desetiminutovém míchání přidá 0,226 g 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilu ze srovnávacího příkladu 1 a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Směs se odpaří, rozpustí v chloroformu a filtruje. Filtrát se opětovně odpaří a odparek se čistí chromatograficky na silikagelu za použití elučního činidla sestávajícího z 5% methanolu v chloroformu. Dostane se 0,26 g sloučeniny pojmenované v nadpise, ve formě volné báze.

-8CZ 281070 B6

0,26 g volné báze se rozpustí v diethyletheru a ochladí na ledové lázni. K roztoku se přidá 0,062 g kyseliny methansulfonové a reakční směs se míchá na ledové lázni po dobu jedné hodiny. Pevná látka se odfiltruje a vysuší za sníženého tlaku. Tím se dostane sůl pojmenovaná v nadpise, ve formě žluté amorfní látky, která má teplotu tání 83 °C (za rozkladu). Výtěžek činí 0,21 g.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 0,95 (t, 3H), 1,75 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 3,10 (široký dublet, 2H), 3,40 (široký triplet, 4H), 3,60 (široký dublet, 2H), 4,60 (d, 2H), 7,45 (d, IH), 7,90 (s, IH), 7,95 (d, IH) ppm.

Farmakologický účinek

Inhibice uvolňování glutamátu a inhibice jaterního DHFR u krys

4-Amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin se testuje na účinek způsobující uvolňování glutamátu, které je vyvolané veratrinem, z tenké vrstvy mozkové tkáně krysy podle protokolárního zápisu, jenž je publikován v Epilepsia 27(5) , 490-497 /1986/. Postup testování inhibice účinku DHFR je modifikací postupu, který je uveden v Biochemical Pharmacology, 20, 561-574 /1971/.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1, kde symbol IC₅₀ označuje koncentraci sloučeniny, která je příčinou 50% inhibice

a) uvolnění glutamátu vyvolaného veratrinem a

b) DHFR enzymového účinku.

Tabulka 1

IC₅₀ (μπιοί) IC₅₀ (μπιοί) uvolňování glutamátu jaterní DHFR krysy (mezní hodnota P 95) (mezní hodnota P 95)

2,17 (1,5-2,9) >100

Příklady farmaceutických prostředků

A. Injekce

Sůl 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu se rozpustí ve sterilní vodě pro injekce.

V dále uvedených příkladech farmaceutických prostředků B až D je účinnou látkou 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin nebo jeho farmaceuticky přijatelná adiční sůl s kyselinou.

B. Kapsle

-9CZ 281070 B6

Kapsle - prostředek I

Prostředek I se může připravit smícháním dále charakterizovaných složek a naplněním výsledné směsi do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.

mg/kapsle

a) účinná látka	250
b) laktóza	143
c) natriumglykolát škrobu	25
d) sterarát hořečnatý	2
celkem	420
Kapsle - prostředek II
	mq/kapsle
a) účinná látka	250
b) Macrogel 4000 BP	350
celkem	600
Kapsle se mohou připravit	roztavením Macrogelu 4000 BP, dis-
pergováním účinné látky v taveniné a naplněním vzniklé disperze
do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.
Kapsle - prostředek III (kapsle	s řízeným uvolňováním účinné lát-
ky)
	mg/kapsle
a) účinná látka	250
b) mikrokrystalické celulóza	125
c) laktóza BP	125
d) ethylcelulóza	13
celkem	513

Prostředek, tvořený kapslí s řízeným uvolňováním účinné látky, se může připravit vytlačováním smíšených složek a) až c) za použití vytlačovacího lisu, potom sferonizací a vysušením extrudátu. Vysušené pelety se povléknou ethylcelulózou (d), jako membránou řídící uvolňování a plní do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.

C. Sirup

účinná látka roztok sorbitolu glycerol benzoát sodný ochucovadlo

0,2500 g 1,5000 g 1,0000 g 0,0050 g 0,0125 ml

vyčištěná voda podle potřeby do 5,0 ml

Benzoát sodný se rozpustí v části vyčištěné vody a k vzniklému roztoku se přidá roztok sorbitolu. Poté se k získanému roztoku přidá účinná látka, která se v tomto roztoku rozpustí. Výsledný roztok se smíchá s glycerolem a potom upraví na požadovaný objem vyčištěnou vodou.

-10CZ 281070 B6

D. Čípky mq/čípek účinná látka (63 μΐ)* tvrdý tuk, BP (Witepsol H15 - Dynamit Nobel) celkem

250

1770

2020

Účinná látka se používá ve formě prášku, ve kterém alespoň 90 % částic má průměr 63 μιη nebo menší

Jedna pětina Witepsolu H15 se roztaví v pánvi, která má plášť vyhřívaný párou, na maximální teplotu 45 °C. Účinná látka se prošije sítem s velikostí ok 200 μπι a přidá k roztavené bázi, s kterou se míchá za použití Silversonova míchadla vybaveného řeznou hlavou, až se dosáhne jemné disperze. Vzniklá disperze se udržuje za teploty 45 °C a přitom se k ní přidá zbývající Witepsol H15. Vše se míchá k zajištění homogenity. Veškerá suspenze se potom vede přes síto z nerezavějící oceli s velikostí ok 250 μπι za nepřetržitého míchání, při kterém se nechá teplota poklesnout na 40 °C. Při teplotě 38 až 40 °C se podíly o hmotnosti 2,02 g směsi plní do vhodných forem z plastické hmoty a čípky se nechají vychladnout na teplotu místnosti.

Příklad 1

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

i) Způsob výroby 3,5-dichlorfenylacetonitrilu

Smés 25 g 3,5-dichlorbenzylalkoholu (Aldrich), 100 ml thionylchloridu a 0,5 ml dimethylformamidu se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Po ochlazení se reakční směs odpaří za sníženého tlaku, odparek se vyjme etherem, promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Jako světle žlutá pevná látka se dostane 28 g 3,5-dichlorbenzylchloridu, který má teplotu tání 32 až 36 °C. Tato sloučenina se použije bez dalšího čistění.

K intenzivně míchanému roztoku 28 g 3,5-dichlorbenzylchloridu ve 150 ml dichlormethanu se přidá smés 27,5 g kyanidu draselného a 2,38 g tetrabutylamoniumhydrogensulfátu ve 110 ml vody. Po dvacetidvouhodinovém míchání za teploty místnosti se směs zředí dichlormethanem, organická fáze se promyje vodou a odpaří za sníženého tlaku, čímž se dostane olej. Filtrací po zředění toluenem přes silikagel, poté odpaření a trituraci s hexanem se dostane požadovaná sloučenina, jako bezbarvá pevná látka, která má teplotu tání 31 až 32 °C. Sloučenina má hmotnost 15,8 g.

ii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

-11CZ 281070 B6

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 2,2 g sodíku, ve 40 ml absolutního ethanolu se za teploty zpětného toku přikape směs 14,72 g 3,5-dichlorfenylacetonitrilu a 26,26 g trifluoracetátu (Aldrich). Po čtyřhodinovém míchání za teploty zpětného toku se směs ochladí ledem. Po odpaření ethanolu získaná žlutá pevná látka se opětovně rozpustí v 60 ml vody a dvakrát promyje diethyletherem. Vodná vrstva se rychle ochladí, okyselí 1-normální kyselinou chlorovodíkovou a třikrát extrahuje diethyletherem. Spojené extrakty se promyjí vodou a odpaří, aby se získal olej. Trituraci s hexanem se dostane 20 g 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxo-3-trifluormethylpropionitrilu, který tvoří bezbarvá pevná látka. Tato sloučenina se azeotropicky pětkrát zpracuje s toluenem.

K ochlazené suspenzi 1 g acylacetonitrilu v 10 ml hexanu se přidá po částech přebytek studeného roztoku diazomethanu v etheru. Po celonočním míchání za teploty místnosti se přebytek diazomethanu odstraní za sníženého tlaku, čímž se dostane surový enolether.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,12 g sodíku, ve 25 ml ethanolu, se přidá 0,5 g hydrochloridu guanidinu. Po třicetiminutovém míchání za teploty místnosti se přidá ethanolický roztok surového enoletheru, připraveného svrchu a reakční směs se míchá za teploty místnosti pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Získá se 1,28 g pevné sloučeniny, která se chromatografuje na silikagelu za použití směsi methanolu s chloroformem v poměru 1:1 jako elučního činidla. Dostane se 0,74 g požadované sloučeniny o teplotě tání 247 až 248 ’C, kterou tvoří bílá pevná látka.

H NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 7,6 (s, 1H), 7,25 (s, 2H), 6,6 (široký singlet, 2H), 6,4 (široký singlet, 2H) ppm.

Příklad 2

A

Způsob výroby 2,4-diamino-6-methyl-5-(2,3,6-trichlorfenyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby 2-(2,3,6-trichlorfenyl)-3-oxobutyronitrilu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 2,72 g sodíku, v 50 ml ethanolu se za teploty zpětného toku přikape směs 20 g 2,3,6-trichlorfenylacetonitrilu (Lancaster synthesis) a 21,5 g ethylacetátu. Po čtyřhodinovém míchání za teploty místnosti se reakční směs ochladí ledem.

Pevná látka, získaná po odpaření ethanolu za sníženého tlaku, se rozpustí v 100 ml vody a dvakrát promyje etherem. Vodná vrstva se ochladí a okyselí. Získaná látka se extrahuje etherem. Z extraktu se odpaří ether a dostane se bílá pevná látka.

ii) Způsob výroby 2,4-diamino-6-methyl-5-(2,3,6-trichlorfenyl)pyrimidinu

-12CZ 281070 B6

K suspenzi 1 g acylnitrilu v etheru se po částech přidá přebytek roztoku z diazomethanu v etheru. Po dvouhodinovém míchání za teploty místnosti se ether odpaří za sníženého tlaku a jako odparek se dostane enolether.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,32 g sodíku, ve 30 ml ethanolu se přidá 0,66 g hydrochloridu guanidinu. Po 30 minutách se přidá roztok 1 g enoletheru, popsaného svrchu v 5 ml ethanolu a poté se vše míchá a vaří pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Získá se hnědá pevná sloučenina, která se dvakrát chromatografuje na silikagelu za použití směsi methanolu s chloroformem v poměru 1:9, jako elučního činidla a na silikagelu za použití směsi ethylacetátu s chloroformem v poměru 1:1 jako elučního činidla. Dostane se požadovaná sloučenina, která má teplotu tání pod 240 C.

NMR hodnoty (rozpouštědlo: deuterovaný methanol) (δ): 8,4 (m, 2H), 6,7 (široký singlet, 2H), 6,6 (široký singlet, 2H), 2,5 (s,3H) ppm.

Příklad 3

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(4-amino-2,3,S-trichlorfenylJpyrimidinu

i) Způsob výroby 2,3,5-trichlorbenzylalkoholu

K míchanému roztoku 50 g 2,3,5-trichlorbenzaldehydu (Aldrich) v 1,0 litru ethanolu se za teploty místnosti přidá 7,00 g natriumborhydridu a výsledná směs se míchá po dobu 3,5 hodiny. Reakční směs se rychle zchladí vodou, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se poté rozdělí mezi chloroform a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se bílá pevná látka o hmotnosti 43,00 g, která má teplotu tání 90 až 93 'C.

ii) Způsob výroby 2,3,5-trichlorbenzylbromidu

K roztoku alkoholu ve 400 ml benzenu se pod dusíkovou atmosférou přidá 126,58 g bromidu fosforitého a směs se míchá za teploty 55 až 60 °C po dobu 3,5 hodiny. Po ochlazení se směs vylije na 2 litry drceného ledu a benzenová vrstva se oddělí. Vodná fáze se třikrát promyje benzenem a spojené benzenové extrakty se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odpaří. Dostane se nahnédlá kapalina, která stáním tuhne, o hmotnosti 37,53 g. Tato látka má teplotu tání 40 až 42 °C.

iii) Způsob výroby 2,3,5-trichlorfenylacetonitrilu

Ve směsi 130 ml dimethylformamidu a 86,67 ml vody se supenduje bromid za teploty 0 °C a poté se přidá po částech 12,99 g kyanidu draselného. Po tříhodinovém míchání za teploty 30 až 35 °C se suspenze zředí vodou a extrahuje diethyletherem. Spojené

-13CZ 281070 B6 etherové extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Chromátografií na silikagelu, za eluování hexanem až směsí 20 % etheru v hexanu se dostane požadovaná sloučenina o hmotnosti 18,52 g, která je tvořena bílou pevnou látkou. Tato sloučenina má teplotu tání 60 až 6^ °C.

iv) Způsob výroby sodné soli 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-oxopropionitrilu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,803 g sodíku, v 55 ml ethanolu ochlazenému na ledové lázni, se pod dusíkovou atmosférou přidá 2,3,5-trichlorfenylacetonitril. Poté se přidá 5,1 ml ethylformiátu a směs se míchá za teploty místnosti přes noc. Po dalším míchání za teploty 50 C po dobu 2,5 hodiny se směs ochladí a filtruje. Filtrát se odpaří a odparek se trituruje diethyletherem, filtruje a vysuší. Získá se 6,82 g sloučeniny.

v) Způsob výroby 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilu

Svrchu uvedená pevná látka se rozpustí v 36 ml dimethylformamidu a k roztoku se přidají 2 ml methyljodidu. Reakční nádoba se uzavře a potom se její obsah míchá za teploty 40 °C po dobu 3 hodin. Poté se rozpouštědlo odpaří. Odpaiiek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Organická fáze se promyje vodou, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Jako červenohnědý olej se dostane 5,04 g surové látky, která stáním tuhne.

vi) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 848 mg sodíku, v 52 ml ethanolu se přidá 3,20 g hydrochloridu guanidinu. Výsledná bílá suspenze se míchá za teploty místnosti po dobu 10 minut. Poté se přidá svrchu uvedený enolether a výsledná směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 3,5 hodiny. Po ochlazení se suspenze filtruje a filtrát se odpaří dosucha za sníženého tlaku. Chromatografii na silikagelu za eluování chloroformem až 3% roztokem methanolu v chloroformu se dostane požadovaná sloučenina, která se trituruje etherem a vysuší za sníženého tlaku. Výtěžek činí 2,01 g. Sloučenina má teplotu tání 246 až 249 °C.

vii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(4-nitro-2,3,5,-trichlorfenyl)pyrimidinu

Podíl sloučeniny z části vi) o hmotnosti 100 mg se rozpustí v 2,5 ml koncentrované kyseliny sírové, poté se přidá 25,8 g dusitanu sodného a roztok se míchá po dobu 3 hodin. Roztok se potom vylije na led a zalkalizuje 10-normálním roztokem hydroxidu sodného. Požadovaná sloučenina se potom třikrát extrahuje ethylacetátem, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří. Chromatografii na silikagelu za eluování ethylacetátem se dostane požadovaná sloučenina, která má teplotu tání 293 až 295 C. Výtěžek činí 40,7 mg.

viii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(4-amino-2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

-14CZ 281070 B6

350 mg sloučeniny z části vii) se rozpustí ve 20 ml ledové kyseliny octové a k roztoku se přidá 18 mg oxidu platičitého. Směs se míchá po dobu jedné hodiny pod vodíkovou atmosférou, poté se směs filtruje přes filtrační prostředek Hyflo (ochranná známka pro rozsivkovou zeminu), filtrát se odpaří a odparek se neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Sloučenina se třikrát extrahuje ethylacetátem, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří. Chromatografií odparku na silikagelu při eluování směsí 5% methanolu s ethylacetátem se dostane požadovaná sloučenina, která má teplotu tání 284 až 286 °C. Výtěžek produktu činí 260 mg.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d₆) (8): 7,55 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 6,1 - 5,9 (široký dublet, 4H - 2NH₂), 5,1 - 4,95 (široký singlet, 2H - NH₂) ppm.

Příklad 4

Způsob výroby 4-amino-2-(4-methyl-l-pyrerazinyl)-6-methyl-5-(3,4,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby kyseliny 3,4,5-trichlorbenzoové

K míchanému roztoku 28 g kyseliny 4-amino-3,5-dichlorbenzoové (Lancaster synthesis) ve směsi 200 ml koncentrované kyseliny sírové a 140 ml kyseliny octové se po částech během 30 minut přidá 11,28 g dusitanu sodného. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 5 hodin a poté se pomalu přidá k intenzivně míchané suspenzi čerstvě připravené z 20 g chloridu měďného v 360 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Po celonočním míchání se sraženina odfiltruje, promyje vodou a vysuší za sníženého tlaku za teploty 100 C. Získá se 28,6 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která má teplotu tání 197 až 199 ’C.

ii) Způsob výroby 3,4,5-trichlorbenzylalkoholu

K míchanému roztoku 11,7 g kyseliny 3,4,5-trichlorbenzoové ve směsi 50 ml vysušeného tetrahydrofuranu a 25 ml trimethylborátu se pod dusíkovou atmosférou za teploty místnosti přikape 7,5 ml (přibližné 10 mol) boran-dimethylsulfidového komplexu během 45 minut. Poté se reakční směs míchá další 4 hodiny a nato se přikape během 45 minut 25 ml methanolu. Směs se míchá dalších 30 minut a poté se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v etheru, promyje 2-molárním roztokem hydroxidu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Triturací odparku s hexanem se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpise, která má teplotu tání 106 až 108 °C.

iii) Způsob výroby 3,4,5-trichlorfenylacetonitrilu

Směs 17,4 g 3,4,5-trichlorbenzylalkoholu, 75 ml thionylchloridu a 0,5 ml dimethylformamidu se míchá a vaří pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Po ochlazení se směs odpaří za sníženého tlaku, odparek se vyjme etherem, promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Získá

-15CZ 281070 B6 se 19 g 3,4,5-trichlorbenzylchloridu, který se použije bez dalšího čistění.

K intenzivně míchanému roztoku 19 g trichlorbenzylchloridu v 85 ml dichlormethanu se přidá směs 16,07 g kyanidu draselného a 1,38 g tetrabutylamoniumhydrogensulfátu v 85 ml vody. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 21 hodiny, poté se zředí dichlormethanem, organická vrstva se promyje vodou a odpaří za sníženého tlaku, čímž se dostane olej. Olej se filtruje přes silikagel s toluenem, poté odpaří a trituruje hexanem. Dostane se 11,9 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která má teplotu tání 56 až 58 ’C.

iv) Způsob výroby 4-amino-2-(4-methylpiperazinyl)-6-methyl-(3,4,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,42 g sodíku, ve 25 ml ethanolu, který je udržován za varu pod zpětným chladičem, se během 5 minut přidá směs 3,31 g 3,4,5-trichlorfenylacetonitrilu a 2,03 g ethylacetátu v 10 ml vysušeného dimethoxyethanu. Směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin, poté se ochladí na ledové lázni, okyselí se kyselinou octovou, vylije na ledovou vodu a odpaří, čímž se dostane olej. Triturací s hexanem se získá 2-(3,4,5-trichlorfenyl)-3-oxobutyronitril, tvořený bezbarvou pevnou látkou o hmotnosti 1,8 g, která se použije bez dalšího čistění.

K roztoku 3,41 g 2-(3,4,5-trichlorfenyl)-3-oxobutyronitrilu ve 100 ml etheru se po částech přidá přebytek roztoku diazomethanu v etheru. Směs se míchá po dobu 2 hodin za teploty místnosti a poté se roztok odpaří za sníženého tlaku. Dostane se 3,6 g 2-(3,4,5-trichlorfenyl)-3-methoxy-2-butennitrilu, který se použije bez dalšího čistění.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,26 g sodíku, ve 10 ml ethanolu se přidá 2,6 g hydrojodidu N-methylpiperazinoformamidinu, který je vyroben způsobem popsaným dále (příklad 10Í). K reakční směsi se po 10 minutách přidá roztok

1,8 g 2-(3,4,5-trichlorfenyl)-3-methoxy-2-butennitrilu v 15 ml absolutního ethanolu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4,5 hodiny. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku a odparek se vytřepe s 50 ml 2-molárního roztoku hydroxidu sodného. Pevný podíl se odfiltruje, promyje se vodou, rozpustí v chloroformu, opět promyje vodou a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se trituruje hexanem a poskytne 1,2 g pevné látky, která se dále čistí chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla, sestávajícího ze směsi methanolu a chloroformu v poměru 1:19 až 1:9. Dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpise, která má teplotu tání 222 až 223 ^eC. Výtěžek činí 0,92 g sloučeniny.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (8): 1,9 (S, 3H), 2,2 (S, 3H), 2,3 (m, 4H), 3,65 (m, 4H), 5,95 (široký singlet, 2H), 7,45 (s, 2H) ppm.

-16CZ 281070 B6

Příklad 5

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,4,5-trichlorfenyl)-6-methylpyrimidinu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,18 g sodíku, v 10 ml absolutního ethanolu se přidá za teploty místnosti 0,62 g hydrochloridu guanidinu. Po 15 minutách se k reakční směsi přidá roztok 2-(3,4,5-trichlorfenyl)-3-methoxy-2-butennitrilu (příklad 4iv) v 25 ml ethanolu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Odparek se supenduje v 50 ml 2-molárního roztoku hydroxidu sodného, filtruje se, promyje vodou, vysuší na vzduchu a rekrystaluje z ethanolu. Získá se tak 0,2 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která má teplotu tání 280 až 281 'C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 1,9 (s, 3H), 5,85 (široký singlet, 2H), 5,95 (široký singlet, 2H), 7,45 (s, 2H) ppm.

Příklad 6

Způsob výroby 4-amino-2-diethylamino-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 52,6 mg sodíku, v 5 ml absolutního ethanolu se přidá 0,288 g hydrochloridu 1,1-diethylguanidinu (Bader). Po 10 minutách míchání se k reakční směsi přidá 0,25 g aduktu z příkladu 3v a vzniklá směs se dále míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc a potom se filtruje. Filtrát se odpaří a čistí chromatografií na silikagelu při eluování chloroformem. Získá se 0,173 g požadované sloučeniny, která má teplotu tání 105 až 107 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (S): 1,12 - 1,3 (t, 6H), 3,52 - 3,68 (q; 4H), 4,35 - 4,58 (široký singlet, 2H), 7,23 (d, lHk, 7,48 (d, 1H), 7,82 (s, 1H) ppm.

Příklad 7

Způsob výroby 4-amino-2-(2-isopropylamino)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 52,6 mg sodíku, v 5 ml ethanolu se přidá 0,379 g sulfátu 1-isopropylguanidinu (Bader). Po 10 minutách míchání se k reakční směsi přidá 0,11 g aduktu z příkladu 3v a vzniklá směs se dále míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc a potom se filtruje. Filtrát se odpaří a odparek čistí chromatografií na silikagelu při eluování chloroformem. Získá se 86,9 mg požadované sloučeniny, která má teplotu táni 182 až 184 ’C.

-17CZ 281070 B6

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 1,18 - 1,37 (d, 6H), 4,03 - 4,25 (m, 1H), 4,45 - 4,65 (široký singlet, 2H), 4,72 - 4,88 (široký dublet, 1H), 7,23 (d, 1H), 7,5 (d, 1H), 7,77 (s, 1H) ppm.

Příklad 8

Způsob výroby 4-amino-5-(3,5-dichlorfenyl)-2-(4-methyl-l-piperazinylJpyrimidinu

i) Způsob výroby 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxopropionitrilu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,6 g sodíku, v 10 ml ethanolu se za varu pod zpětným chladičem přikape směs 4 g 3,5-dichlorfenylacetonitrilu (přiklad li) a 3,8 g ethylformiátu (Aldrich). Reakční směs se míchá 4 hodiny a poté se ochladí.

Pevná látka, získaná po odpaření ethanolu, se rozpustí ve vodě. Vzniklý roztok se dvakrát promyje etherem. Po ochlazení se tento roztok okyselí kyselinou chlorovodíkovou a látka se extrahuje etherem. Po odpaření rozpouštědla se dostane 4,35 g surové bílé pevné látky.

• ii) Způsob výroby 4-amino-5-(3,5-dichlorfenyl)-2-(4-methyl-l-piperazinyl)pyrimidinu

K roztoku 4,35 g 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxopropionitrilu ve 100 ml etheru se přidá po částech přebytek studeného roztoku diazomethanu v etheru. Směs se míchá po dobu 2 hodin za teploty místnosti a poté se rozpouštědlo odpaří. Jako odparek se dostane 4,07 g enoletheru.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,5 g sodíku, ve 20 ml ethanolu se přidá 3,5 g hydrojodidu N-methylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 30 minutách přidá roztok 4,07 g enoletheru popsaného svrchu v 15 ml ethanolu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Získaná sloučenina se čistí rekrystalizací z chloroformu. Dostane se 1,5 g požadované sloučeniny, která má teplotu tání 161,5 až 162 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 7,85 (s, 1H), 7,35 (m, 3H), 4,8 (široký singlet, 2H), 3,85 (t, 4H), 2,45 (t, 4H), 2,35 (s, 3H) ppm.

Příklad 9

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(4-jod-2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

0,305 g sloučeniny, vyrobené v příkladě 3 se rozpustí v 0,8 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 1,2 ml vody. Směs se ochladí na ledové lázni a přidá se roztok 0,096 g dusitanu sodného v 0,5 ml vody. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin, poté se přidá ke studené reakční směsi roztok 0,305 g jodidu draselného v 1,2 ml vody. Reakční směs se míchá za teploty 90 'C po dobu 2 hodin.

-18CZ 281070 B6

Získaná směs se zalkalizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličítánu sodného, sloučenina se extrahuje ethylacetátem, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří. Chromatografií na silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu a ethanolu v poméreu 15:1 se dostane požadovaná sloučenina, která má teplotu tání 290 °C za rozkladu. Výtěžek činí 88 mg vyrobené látky.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d_g) (S): 7,95 (s, 1H), 7,4 (s, 1H), 6,15 - 5,95 (široký singlet, 4H - 2NH₂) ppm.

Příklad 10

Způsob výroby 4-amino-2-(4-methyl-4-oxid-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

i) Způsob výroby hydrojodidu N-methylpiperazinoformamidinu

10,8 g thiomočoviny se rozpustí v 250 ml acetonu za teploty 50 °C. K roztoku se přidá 10 ml methyljodidu a reakční směs se míchá za teploty 50 °C po dobu 4 hodin. Po ochlazení se roztok zředí 1 litrem etheru a methyljodidová sůl se odfiltruje, promyje se etherem a vysuší za sníženého tlaku. Získaná sloučenina má teplotu tání 113 až 115 °C, její hmotnost činí 29,2 g. 5 g methyl jodidové soli se rozpustí v 30 ml vody a k roztoku se přidá N-methylpiperazin. Roztok se míchá probubláváním dusíkem za teploty místnosti po dobu 24 hodin. Roztok se poté odpaří za sníženého tlaku. Odparek se suspenduje v ethanolu, filtruje a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 4,98 g sloučeniny, která má teplotu tání 230 až 242 “C.

ii) Způsob výroby 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-4,4,4-trifluor-3-oxobutyronitrilu

K roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 1,04 g sodíku, v 60 ml ethanolu se za teploty místnosti pod dusíkovou atmosférou přidá 8,40 g 2,3,5-trichlorfenylacetonitrilu (příklad 3iii) a poté 6,57 g ethyl-trifluoracetátu. Směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozpustí ve vodě. Vodná fáze se promyje diethyletherem, který se odloží, a dále se okyselí kyselinou sírovou a extrahuje diethyletherem. Spojené etherové extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtrují a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se olej, který se trituruje petroletherem, pevná složka se odfiltruje a vysuší. Pevná látka se pětkrát azeotropicky destiluje s toluenem. Získá se tak 4,89 g sloučeniny, která má teplotu tání 160 až 163 “C.

iii) Způsob výroby 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-4,4,4-trifluor-3-

-methoxy-2-butennitrilu

K roztoku trifluormethylketonu v 39,62 ml diethyletheru se za teploty místnosti přidá 8,55 g diazomethanu (Diazald) v 79,62 ml diethyletheru. Výsledná směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc. Přebytek diazomethanu se poté odstraní působením kyseliny octové za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v diethyl-19CZ 281070 B6 etheru, vysuší se síranem* hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se tak nahnědlý olej o hmotnosti 5,20 g.

iv) Způsob výroby 4-amino-2-(4-methyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,144 g sodíku, ve 12,5 ml ethanolu se přidá 1,39 g hydrojodidu N-methylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 10 minutách míchání za teploty místnosti přidá roztok 0,85 g meziproduktu, popsaného svrchu, ve 2,5 ml ethanolu a výsledná směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4,5 hodiny. Po ochlazení se suspenze filtruje a filtrát odpaří dosucha za sníženého tlaku. Získaná látka se podrobí chromatografii na silikagelu za eluování chloroformem až směsí 4 % methanolu v chloroformu. Dostane se požadovaná sloučenina, která se trituruje petroletherem o teplotě varu 40 až 60 ’C a poté vysuší za sníženého tlaku. Získá se 0,56 g sloučeniny, která má teplotu tání 127 až 129 °C.

v) Způsob výroby 4-amino-2-(4-methyl-4-oxidpiperazinyl)-5—(2,3,5-trichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

K roztoku 0,33 g sloučeniny z části iv) ve 12 ml chloroformu se přikape roztok 0,225 g kyseliny 3-chlorperoxybenzoové v 12 ml chloroformu za udržování teploty pod 5 °C. Výsledný roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Reakční směs se třikrát promyje 1-normálním roztokem hydroxidu sodného a dvakrát vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Dostane se 0,150 g krémové zbarvené pevné látky, která má teplotu tání 185 až 188 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d_g) (δ): 2,90 (d, 2H), 3,0 (s, 3H), 3,30 (t, 2H), 3,60 (t, 2H), 4,40 (d, 2H), 6,10 (široký singlet, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,90 (s, 1H) ppm.

Příklad 11

Způsob výroby dimethansulfonátu 4-amino-5-(3,5-dichlorfenyl)-6-methoxymethyl-2-(4-methyl-l-piperazinyl)pyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,7 g sodíku, v 15 ml ethanolu udržovanému za teploty varu pod zpětným chladičem, se přikape směs 5 g 3,5-dichlorfenylacetonitrilu (příklad li) a 14 g ethyl-methoxyacetátu (Aldrich). V míchání se pokračuje za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin a potom se směs ochladí na ledové lázni. Pevná látka, získaná po odpaření rozpouštědla se rozpustí v 25 ml vody. Tento roztok se dvakrát extrahuje diethyletherem.

Vodná vrstva se ochladí a okyselí kyselinou chlorovodíkovou. Produkt se extrahuje diethyletherem a spojené extrakty se promyjí vodou. Odpařením rozpouštědla se dostane 5,9 g 2-(3,5-dichlorfenyl) -4 -methoxy-3-oxobutyronitrilu, který tvoří pevná látka hnědé barvy.

-20CZ 281070 B6

K suspenzi 5,9 g acylacetonitrilu v 5,0 ml etheru se po částech přidá přebytek studeného roztoku diazomethanu v etheru. Po dvouhodinovém míchání za teploty místnosti se roztok odpaří a dostane se enolether.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,5 g sodíku, ve 40 ml ethanolu se přidá 6 g hydrojodidu N-methylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 30 minutách přidá roztok 4,69 g enoletheru popsaného svrchu v 20 ml ethanolu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku, získaná látka hnědé barvy se chromatografuje na silikagelu za použití elučního činidla sestávajícího ze směsi methanolu a chloroformu v poměru 1:9. Dostane se 0,69 g oleje, který je hnědě zbarvený.

K roztoku 0,69 g této sloučeniny ve 20 ml ethanolu se přikape roztok 0,21 g kyseliny methansulfonové ve 2 ml ethanolu. Vzniklá směs se míchá za teploty místnosti po dobu 3 hodin. Po celonočním stání se vzniklá sraženina odfiltruje a promyje novým ethanolem. Poté se provede triturace etherem a vysušení. Získá se 0,27 g požadované sloučeniny, dimethansulfonátové soli, tvořené bezbarvou látkou, která se rozkládá za teploty nad 210 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 7,3 (m, 3H), 4,5 (široký singlet, 3H), 4,05 (s, 2H),

3,85 (t, 4H), 3,3 (s, 3H), 2,45 (t, 4H), 2,35 (s, 3H) ppm.

Příklad 12

Způsob výroby 2,4-diamino-5-/4-(N,N-dimethylsulfamoyl)-2,3,5-trichlorfenyl/pyrimidinu

0,305 g sloučeniny z příkladu 3 se rozpustí v 0,8 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 1,2 ml vody. Směs se ochladí na ledové lázni a poté se k ní přidá roztok 0,096 g dusitanu sodného v 0,5 ml vody. Směs se potom míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin. K studené reakční směsi se přidá roztok 49,7 mg chloridu mědnatého a 0,97 ml kyseliny octové s obsahem 5,14 mol oxidu siřičitého. Vše se míchá za teploty 5 C po dobu 2 hodin. 250 mg vyrobené pevné látky se odfiltruje a promyje vodou.

Získaná pevná látka se rozpustí ve 4 ml tetrahydrofuranu a k roztoku se přidají 4 ml vodného dimethylaminu (25/30 % hmotnost/ objem). Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin a poté se zředí 10 ml vody. Získaná sloučenina se extrahuje ethylacetátem, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo odpaří. Chromatografií na silikagelu, při eluování směsí chloroformu s methanolem v poměru 20 : 1 se dostane požadovaná sloučenina o hmotnosti 38 mg, která má teplotu tání 201 C za rozkladu.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d_g) (δ): 8,10 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,05 - 6,00 (široký singlet, 2H - NH₂), 5,95

- 5,85 (široký singlet, 2H - NH₂), 2,7 (s, 6H) ppm. »

-21CZ 281070 B6

Příklad 13

Způsob výroby 2-amino-5-(2,3-dichlorfenyl)-4-(1-piperidinyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby kyseliny 2,3-dichlorfenyloctové

100 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové se vylije na 150 ml rozdrceného ledu. Získaný roztok se přidá k 30,6 g 2,3-dichlorfenylacetonitrilu a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Po ochlazení se směs zředí 500 ml vody a extrahuje 600 ml ethylacetátu. Organická fáze se promyje roztokem chloridu sodného a poté vysuší síranem hořečnatým. Odpařením rozpouštědla se dostane bílá pevná látka, která má hmotnost 31,3 g.

ii) Způsob výroby ethyl-(2,3-dichlorfenylacetátu)

K suspenzi kyseliny ve 200 ml ethanolu se přidá 1 ml koncentrované kyseliny sírové a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří a na odparek se působí 3 ml koncentrovaného hydroxidu amonného v 50 ml vody. Organická fáze se extrahuje dichlormethanem, vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Získá se čirá kapalina, která má hmotnost 19,88 g.

iii) Způsob výroby ethyl-2-(2,3-dichlorfenyl)-3-N-morfolinoakrylátu

Ke směsi 40,7 g esteru morfolinu a 69,24 g ethyl-orthoformiátu se přidá 0,5 ml anhydridu kyseliny octové a výsledný světle žlutý roztok se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Po ochlazení se směs odpaří za sníženého tlaku. Začne se tvořit bílá sraženina, která se odfiltruje před dalším odpařením filtrátu. Dostane se čirý olej nahnědlého odstínu. Stáním přes noc za sníženého tlaku tento olej přejde na žlutou pevnou látku o hmotnosti 34,34 g.

iv) Způsob výroby 5-(2,3-dichlorfenyl)isocytosinu •

K esteru z části iii) se přidá 26,6 g hydrochloridu guanidinu, který je suspendován v methoxyethoxidu sodném, připraveném z 6,6 g sodíku, v 150 ml 2-methoxyethanolu, a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení se směs odpaří za sníženého tlaku, odparek se zředí 100 ml vody a poté promyje 200 ml diethyletheru. Vodná fáze se okyselí kyselinou octovou a vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje ethanolem a poté diethyletherem a nakonec vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 13,48 g požadované sloučeniny.

v) Způsob výroby N¹-/4-chlor-5-(2,3-dichlorfenyl)-2-pyrimidinyl/-N²,N²-dimethylformamidinu

Ke směsi 14,4 g isocytosinu z části iv) ve 200 ml dichlormethanu se přikape během 30 minut čerstvé Vilsmeier-Haackovo činidlo, získané z 2,75 ekvivalentů sulfonylchloridu SOC1₂ a 2,58 ekvivalentů dimethylformamidu. Vzniklá směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Po ochlazení se pomalu přidá 250 ml

-22CZ 281070 B6

1-normálního roztoku hydroxidu sodného. Vodná fáze se promyje dichlormethanem a spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného a poté vysuší síranem horečnatým. Odpařením rozpouštědla a chromatografií na silikagelu při eluování ethylacetátem, se dostane 13,6 g sloučeniny, která má teplotu tání 113 až 115 °c.

ví) Způsob výroby 2-amino-4-chlor-5-(2,3-dichlorfenylJpyrimidinu

K formamidinu v 50 ml ethanolu se přidá roztok 8 ekvivalentů methylaminu v 50 ml ethanolu a směs se uzavře v Parrově reakční nádobě k proběhnutí reakce. Směs se poté míchá za teploty místnosti po dobu 5 hodin. Reakční směs se nato odpaří za sníženého tlaku a odparek se smíchá s 75 ml 1-normálního roztoku hydroxidu sodného, filtruje, promyje vodou a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 11,2 g sloučeniny, která má teplotu tání 228 až 230 ’C.

vii) Způsob výroby 2-amino-5-(2,3-dichlorfenyl)-4-(1-piperidinyl)pyrimidinu

0,1 g 2-amino-4-chlor-5-(2,3-dichlorfenyl)pyrimidinu a 0,5 ml piperidinu se míchá za teploty 60 °C v uzavřené reakční nádobě s 2 ml ethanolu po dobu 20 hodin. Výsledná směs se odpaří dosucha a surový odparek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za eluování choroformem. Produkt se suspenduje v nasyceném roztoku hydrogenuhličitanu sodného, filtruje a dobře promyje vodou. Výtěžek sloučeniny činí 0,065 g. Sloučenina má teplotu tání 187 až 189 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 7,70 (S, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 4,80 (Široký singlet, 2H), 3,25 (široký multiplet, 4H), 1,30 - 1,80 (široký multiplet, 6H) ppm.

Příklad 14

Způsob výroby 4-amino-5-(3,5-dichlorfenyl)-2-(4-methyl-l-piperazinyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 1,6 g sodíku, ve 30 ml ethanolu, udržovanému ve varu pod zpětným chladičem, se přikape směs 10 g 3,5-dichlorfenylacetonitrilu (příklad li) a 17,5 g ethyl-trifluoracetátu (Aldrich). Vše se míchá za varu po dobu 4 hodin a poté se ochladí na ledové lázni. Po odpaření ethanolu se dostane žlutá pevná látka, která se opětovně rozpustí v 50 ml vody. Získaný alkalický vodný roztok se dvakrát extrahuje diethyletherem.

Vodná vrstva se ochladí na ledové lázni a okyselí kyselinou chlorovodíkovou. Získaný produkt se třikrát extrahuje diethyletherem. Spojené extrakty se promyjí vodou a odpaří na olej, který se trituruje s hexanem. Dostane se 12,0 g 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxo-3-trifluormethylpropionitrilu, který tvoří bezbarvá pevná látka.

Ke studené suspenzi 1 g acylacetonitrilu v 70 ml hexanu se přidá po částech přebytek studeného roztoku diazomethanu v ethe

-23CZ 281070 B6 ru. Po dvouhodinovém míchání za teploty místnosti se roztok odpaří. Dostane se tak enolether.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,25 g sodíku, ve 30 ml ethanolu se přidají 3 g hydrojodidu N-methylgiperazinoformamidinu. K reakčni směsi se po 30 minutách přidá roztok 2,3 g enoletheru popsaného svrchu, v 10 ml ethanolu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Získaná látka se chromátografuje na silikagelu za použití elučního činidla sestávajícího ze směsi methanolu a chloroformu v poměru 1:9. Dostane se 2,4 g požadované sloučeniny, kterou tvoří bezbarvá pevná látka o teplotě tání 159,5 až 160 ’C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 7,25 (m, 3H), 4,65 (široký singlet, 2H), 3,85 (t, 4H), 2,45 (t, 4H), 2,35 (s, 3H) ppm.

Příklad 15

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(2,3,4,5-tetrachlorfenyl)pyrimidinu

0,3045 g 2,4-diamino-5-(4-amino-2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu (příklad 3) se rozpustí v 12,68 ml horké ledové kyseliny octové a k získanému roztoku se přidá roztok 0,097 g dusitanu sodného v 0,67 ml koncentrované kyseliny sírové. Směs se míchá po dobu 2 hodin a poté se přidá roztok 0,15 g chloridu měďného v 0,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové za teploty 60 °C. Reakčni směs se nechá ochladit, zalkalizuje se hydrogenuhličitanem sodným, extrahuje se ethylacetátem, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří. Chromatografií na silikagelu, za eluování směsí ethylacetátu a ethanolu v poměru 20 : 1 se dostane požadovaná sloučenina, která má teplotu tání 314 až 317 °C. Výtěžek činí 150 mg.

·*·Η NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-dg) (δ): 8,05 (s, 1H), 6,15 - 6,00 (2 X S, 4H - 2NH₂), 7,50 (s, H) ppm.

Příklad 16

Způsob výroby mesylátu cís-4-amino-2-(3,5-dimethyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby hydrojodidu cis-3,5-dimethylpiperidinoformamidinu

4,5 g methyljodidové soli z příkladu 10Í se rozpustí ve 30 ml vody a k roztoku se přidá 4,71 g 2,6-dimethylpiperazinu (Aldrich). Roztok se míchá probubláváním dusíku za teploty místnosti po dobu 24 hodin. Poté se roztok odpaří za sníženého tlaku. Odparek se trituruje horkým etherem, filtruje a vysuší se za sníženého tlaku. Dostane se 5,81 g sloučeniny, která má teplotu tání 210 až 213 °c.

-24CZ 281070 B6 ii) Způsob výroby mesylátu cis-4-amino-2-C3,5-dimethyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,24 g sodíku, ve 30 ml ethanolu se přidá 2,43 g hydrojodidu cis-3,5-dimethylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 10 minutách míchání přidá roztok 1,5 g aduktu z příkladu 3v a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc a potom se filtruje. Filtrát se odpaří a odparek se čistí chromatograficky na silikagelu za použití elučního činidla sestávajícího z chloroformu až směsi 8 % methanolu v chloroformu. Dostane se 1,64 g požadované sloučeniny.

1,61 g fenylpyrimidinové báze se rozpustí v absolutním ethanolu, ochladí na teplotu 0 ’C a k roztoku se přidá 0,27 ml kyseliny methansulfonové. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2 hodin, rozpouštědlo se odpaří dosucha a odparek se trituruje diethyletherem, filtruje a vysuší. Získaný odparek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje. Dostane se 1,76 g sloučeniny, která má teplotu tání 300 až 305 ’C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 1,27 (d, 6H), 2,33 (s, 3H), 2,68 - 2,88 (široký triplet, 2H), 4,7 - 4,87 (široký dublet, 2H), 6,47 (široký singlet, 2H), 7,35 (d, IH), 7,7 (S, IH), 7,81 (d, IH) ppm.

Příklad 17

Způsob výroby dimesylátu 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperažinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenylJpyrimidinu g dihydrobromidu N-propylpiperazinu (Lancaster) v 15 ml vody se vede kolonou naplněnou iontoměničovou pryskyřicí (IR410, OH forma) (BDH) a eluuje se vodou. Sekundární amin kladné nabité části se odpaří, odparek se rozpustí v diethyletheru, vysuší síranem hořečnatým a odpaří dosucha. Získá se tak 0,6 g bezbarvého oleje, který tvoří N-propylpiperazin.

Piperazin se rozpustí v 10 ml vody a poté se přidá methylthiuroniumjodid (příklad li). Roztok se míchá probubláváním dusíku za teploty místnosti po dobu 96 hodin. Poté se roztok odpaří za sníženého tlaku. Odparek se suspenduje v acetonu, filtruje a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 0,51 g sloučeniny, která má teplotu tání 174 až 176 °C.

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,052 g sodíku, v 5 ml ethanolu se přidá 0,506 g hydrojodidu N-propylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 10 minutách míchání přidá 0,226 g enoletheru z příkladu 3v a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin. Směs se odpaří, rozpustí v chloroformu a filtruje. Filtrát se opětovně odpaří a odparek se čistí chromatograficky na silikagelu za použití elučního činidla sestávajícího z 5% methanolu v chloroformu. Dostane se 0,26 g sloučeniny pojmenované v nadpise ve formě volné báze.

-25CZ 281070 B6

0,26 g volné báze se rozpustí v diethyletheru a ochladí na ledové lázni. K roztoku se přidá 0,062 g kyseliny methansulfonové a reakční směs se míchá na ledové lázni po dobu jedné hodiny. Pevná látka se odfiltruje a vysuší za sníženého tlaku. Tím se dostane sůl pojmenovaná v nadpise, ve formě žluté amorfní látky, která má teplotu tání 83 °C za rozkladu. Výtěžek činí 0,21 g.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 0,95 (t, 3H), 1,75 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 3,10 (široký dublet,

2H), 3,40 (široký triplet, 4H), 3,60 (široký dublet, 2H), 4,60 (d, 2H), 7,45 (d, IH), 7,90 (s, IH), 7,95 (d, IH) ppm.

*

Přiklad 18

Způsob výroby 4-amino-2-(4-methyl-4-oxid-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

Roztok 0,34 g kyseliny 3-chlorperoxybenzoové v 18 ml chloroformu se přikape k roztoku 0,43 g 4-amino-2-(4-methyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu v 18 ml chloroformu, přičemž se udržuje teplota pod 5 ’C. Výsledný roztok se míchá za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Výsledná směs se třikrát promyje 1-normálním roztokem hydroxidu sodného a dvakrát vodou, vysuší se síranem hořečnatým, filtruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se trituruje vodou, filtruje, suspenduje ve vodě a lyofilizuje. Získá se 0,052 g pevné látky krémového zbarvení, která má teplotu tání 180 až 183 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d₆) (δ): 2,9 (d, 2H), 3,1 (s, 3H), 3,3 (t, 2H), 3,4 (t, 2H), 4,4 (d, 2H), 6,4 (Široký singlet, 2H), 7,3 (s, IH), 7,6 (s, IH), 7,8 (s, IH) ppm.

Příklad 19

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-2-nitrofenyl)-6-methylpyrimidinu

0,377 g 2,4-diamino-5-(3,5-dichlorfenyl)-6-methylpyrimidinu se rozpustí v 15 ml koncentrované kyseliny sírové a poté se přidá 0,15 g dusitanu draselného. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 4 hodin a potom se zředí 20 ml vody. Získaná směs se zalkalizuje koncentrovaným amoniakem a sloučenina se extrahuje ethylacetátem, vysuší síranem hořečnatým, filtruje a rozpouštědlo se odpaří. Chromatografií na silikagelu za eluování směsí ethylacetátu s ethanolem v poměru 20:1 se dostane 227 mg požadované sloučeniny, která má teplotu tání 251 až 253 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: DMSO-d₆) (δ): 8,00 (d, IH), 7,5 (d, IH), 6,15 - 5,95 (Široký dublet, 4H - 2NH₂), 1,8 (s, 3H) ppm.

Příklad 20

Způsob výroby monomesylátu 2-amino-5-(2,3-dichlorfenyl)-4-(4-methyl-l-piperazinyl)pyrimidinu

-26CZ 281070 B6

0,5 g 2-amino-4-chlor-5-(2,3-dichlorfenylJpyrimidinu (příklad 13vi) se míchá s 2,5 ml N-methylpiperazinu v 7 ml absolutního ethanolu v uzavřené nádobě za teploty 80 ’C po dobu 15 hodin. Výsledný roztok se odpaří dosucha a odparek se chromatografuje na silikagelu za eluování chloroformem a směsí 5 % methanolu v chloroformu. Surová sloučenina se suspenduje v roztoku hydrogenuhličitanu sodného, míchá, filtruje, promyje vodou a vysuší za teploty 80 °C. Dostane se tak 0,475 g sloučeniny pojmenované v nadpise .

0,232 g této sloučeniny se suspenduje v 10 ml absolutního ethanolu a roztok se ochladí na ledové lázni. K roztoku se poté přikape 0,065 g kyseliny methansulfonové a v míchání se pokračuje po dobu 30 minut. Výsledný roztok se odpaří dosucha za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí ve vodě, filtruje a lyofilizuje. Dostane se 0,12 g soli, která má teplotu tání 120 °C (nezřetelné ).

NMR hodnoty (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 2,25 (m, 7H), 3,30 (m, 4H), 4,85 (široký singlet, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,45 (dd, 1H), 7,75 (s, 1H) ppm.

Příklad 21

Způsob výroby 2-amino-5-(2,3-dichlorfenyl)-4-(N-morfolino Jpyrimidinu

0,5 g 2-amino-4-chlor-5-(2,3-dichlorfenyl)pyrimidinu (příklad 13vi) se míchá s 2,5 ml morfolinu v 7 ml absolutního ethanolu v uzavřené nádobě za teploty 80 ‘C po dobu 15 hodin. Po ochlazení se z reakční směsi oddělí bílá pevná látka. Tato látka se odfiltruje, promyje etherem a vysuší za teploty 60 °C. Surová sloučenina se rekrystaluje z 2-propanolu, vysuší za teploty 80 °C a získá se sloučenina, pojmenovaná v nadpise, která má teplotu tání 174 až 176 C. Výtěžek činí 0,27 g.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 3,25 (m, 4Jí), 3,55 (dd, 4H) , 4,85 (široký singlet, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,45 (dd, 1H), 7,77 (s, 1H) ppm.

Příklad 22

Způsob výroby 4-amino-2-(4-benzyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby hydrojodidu N-benzylpiperazinoformamidinu

Sloučenina se vyrobí analogickým způsobem jako N-methylpiperazinoformamidin (příklad 10Í) z N-benzylpiperazinu (Aldrich).

ii) Způsob výroby 4-amino-2-(4-benzyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,08 g sodíku, v 10 ml ethanolu se přidá 1,0 g hydrojodidu N-benzylpiperazinoformamidinu. K reakční směsi se po 10 minutách míchání

-27CZ 281070 B6 za teploty místnosti přidá 0,38 g 2-( 2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilu (příklad 3v) a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4,5 hodiny. Směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc, poté se odpaří, odparek se rozpustí v dichlormethanu a filtruje. Filtrát se opětovně odpaří a odparek se čistí chromatograficky na silikagelu za použití elučního činidla, tvořeného směsí chloroformu s methanolem v poměru 10 : 1. Dostane se 0,47 g sloučeniny, pojmenované v nadpise ve formě volné báze.

Volná báze se rozpustí v 10 ml ethanolu a ochladí na ledové lázni. K reakční směsi se přidá 70 μΐ kyseliny methansulfonové a roztok se míchá za teploty místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se trituruje etherem. Pevná látka se odfiltruje, rozpustí ve studené vodě a vysuší vymrazováním. Tím se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpise, ve formě své soli, kterou tvoří světle žlutá pevná látka, o teplotě tání 176 až 181 °C za rozkladu. Výtěžek činí 0,26 g.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 2,50 (t, 4H), 3,55 (s, 2H), 3,82 (t, 4H), 4,5 (široký singlet, 2H), 7,25 - 7,4 (m, 5H), 7,20 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,82 (s, 1H) ppm.

Příklad 23

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)pyrimidinu (sloučenina 25)

i) Způsob výroby methyl-(4-amino-3,5-dichlorbenzoátu)

K směsi 25 g kyseliny 4-amino-3,5-dichlorbenzoové (Aldrich) a 250 ml methanolu ochlazené na teplotu 5 °C, se přikape 3,5 ml koncentrované kyseliny sírové během 10 minut. Směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 20 hodin a poté se nechá za teploty místnosti přes víkend. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku na malý objem, pevná látka se odfiltruje, promyje se methanolem a petroletherem a nakonec se krystaluje z vodného methanolu. Získá se 24,65 g sloučeniny, která má teplotu tání 76 až 78 °C.

ii) Způsob výroby 4-amino-3,5-dichlorbenzylalkoholu

11,0 g esteru, popsaného svrchu se rozpustí v 150 ml vysušeného tetrahydrofuranu. Do vzniklého roztoku se po částech vnese 1,1 g 1ithiumborhydridu a směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po sníženého tlaku, a organická fáze se promyje sodného a 50 ml roztoku hořečnatým, odpaří dosucha Získá se 5,92 g sloučeniny, Výtěžek činí 5,92 g.

dobu 23 hodin. Po ochlazení se reakční směs odpaří za rozdělí mezi 400 ml ethylacetátu a 50 ml vody 50 ml 1-normálního roztoku hydroxidu chloridu sodného, vysuší se síranem a nakonec krystaluje z chloroformu, která má teplotu tání 107 až 109 °C.

iii) Způsob výroby 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenylacetonitrilu

-28CZ 281070 B6

Směs 17,8 g 4-amino-3,5-dichlorbenzylalkoholu, 250 ml thionylchloridu a 7,8 ml dimethylformamidu se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Po ochlazení se směs odpaří za sníženého tlaku, odparek se suspenduje v etheru a filtruje. Pevná látka se rozdělí mezi 400 ml ethylacetátu a 150 ml vody. Organická fáze se promyje 1-molárním roztokem uhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku. Dostane se 19,92 g 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)benzylchloridu, který se použije bez dalšího čistění.

K intenzivně míchanému roztoku 19,92 g 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)benzylchloridu v 85 ml dichlormethanu se přidá směs 14,62 g kyanidu draselného a 0,5 g tetrabutylamoniumhydrogensulfátu v 85 ml vody. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 2,5 dne, poté se směs zředí dichlormethanem a organická fáze se třikrát promyje vždy 50 ml vody, vysuší se síranem hořečnatým a poté odpaří za sníženého tlaku. Dostane se olej, který se chromatografuje na silikagelu za použití směsi hexanu a etheru v poměru 7:3 jako elučního činidla. Vyčištěný 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenylacetonitril se dostane ve formě bezbarvých hranolků, po krystalizaci ze směsi hexanu a etheru v poměru 2:1. Sloučenina má teplotu tání 71 až 73 C.

iv) Způsob výroby sodné soli 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino )fenyl/-3-oxo-propionitrilu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako sodná sůl 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-oxopropionitrilu (příklad 3iv). Získá se 0,87 g vyrobené sloučeniny, která se použije bez dalšího čistění.

v) Způsob výroby 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino )fenyl/-3-methoxyakrylonitrilu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrii (příklad 3v). Získá se 0,53 g vyrobené sloučeniny, která má teplotu tání 121 až 126 C.

ví) Způsob výroby 2,4-diamino-5-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino )fenyl/pyrimidinu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 2,4-diamino-5-(2,3,5-trichlorfenyl)-6-methylpyrimidin (příklad 3vi). Získá se 0,085 g vyrobené sloučeniny, která má teplotu tání 202 až 203 vii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)pyrimidinu mg 2,4-diamino-5-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino) f enyl/pyrimidinu, 5 ml ethanolu a 1,5 ml amoniaku o specifické hmotnosti 0,880 g/cm³ se uzavře v trubce a míchá za teploty 100 °C po dobu 48 hodin. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří a odparek se krystaluje z acetonitrilu. Získá se 48 mg sloučeniny, která má teplotu tání 199 až 201 °C.

-29CZ 281070 B6

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 4,50 (široký singlet, 2H), 4,83 (široký singlet, 2H), 4,96 (široký singlet, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,60 (s, 1H) ppm.

Příklad 24

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)-6-methylpyrimidinu (sloučenina 26)

i) Způsob výroby 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenyl/-3-oxobutyronitrilu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,4 g sodíku, v 10 ml ethanolu se přidají 3,0 g 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenaminojfenylacetonitrilu a 2,58 g ethylacetátu. Směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin a poté se nechá stát přes noc za teploty místnosti. Směs se potom odpaří a odparek se rozpustí v 50 ml vody a poté promyje etherem. Vodná fáze se okyselí koncentrovanou kyselinou sírovou a výsledná pevná látka se odfiltruje a promyje vodou. Vlhká pevná látka se rozpustí v ethylacetátu a zalkalizuje zředěným roztokem hydroxidu amonného. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, odpaří za sníženého tlaku a použije bez dalšího čistění. Výtěžek činí 1,40 g.

ii) Způsob výroby 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenyl/-3-methoxy-2-butennitrilu

Sloučenina se vyrobí obdobné jako 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxy-2-butennitril (příklad lOiii). Získá se 1,44 g vyrobené sloučeniny.

iii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethyl- aminomethylenamino)fenyl/-6-methylpyrimidinu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 2,4-diamino-5-(2,3,5-trichlorfenyl)-6-methylpyrimidin (příklad lOiv) z hydrochloridu guanidinu. Získá se 0,41 g sloučeniny, která má teplotu tání 283 až 286 ’C.

iv) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(4-amino-3,5-dichlorfenyl/-6-methylpyrimidinu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 2,4-diamino-5-(3,5dichlor-4-aminofenyl)pyrimidin (příklad 23vii). Získá se 285 mg sloučeniny, která má teplotu tání 209 až 211 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 1,86 (s, 3H), 5,5 (široký singlet, 2H), 5,86 (široký singlet, 2H), 6,2 (široký singlet, 2H), 7,03 (s, 2H) ppm.

Příklad 25

Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu (sloučenina 27)

-30CZ 281070 B6

i) Způsob výroby 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino )fenyl/-4,4,4-trifluor-3-oxobutyronitrilu

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného z 0,69 g sodíku, ve 20 ml ethanolu se přidá 6,4 g 3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenylacetonitrilu a 4,43 g ethyl-trifluoracetátu. Směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 5 hodin a poté se ochladí, potom se odpaří a odparek se rozpustí v 80 ml vody a promyje etherem. Vodná fáze se okyselí koncentrovanou kyselinou sírovou a výsledná pevná látka se odfiltruje, promyje vodou a vysuší. Získá se 9,08 g produktu. Získaná pevná látka se suspenduje ve vodě, zalkalizuje zředěným roztokem hydroxidu a*monného a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpuStí v acetonu, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se nakonec suspenduje v etheru, filtruje, promyje a vysuší. Získá se 7,8 g sloučeniny, která má teplotu tání 195 až 200 °C.

ii) Způsob výroby 2-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenyl/-4,4,4-trifluor-3-methoxy-2-butennitrilu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxy-2-butennitril (příklad lOiii). Získá se 1,95 g sloučeniny.

iii) Způsob výroby 2,4-diamino-5-/3,5-dichlor-4-(N,N-dimethylaminomethylenamino)fenyl/-6-trifluormethylpyrimidinu

Sloučenina se vyrobí obdobně jako 4-amino-2-/4-methyl-l-piperazinyl-5-(2,3,5-trichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidin (příklad lOiv) z hydrochloridu guanidinu. Získá se 0,5 g sloučeniny, která má teplotu tání 239 až 241 ’C.

iv) Způsob výroby 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu

Sloučenina se vyrobí obdobným způsobem jako 2,4-diamino-5-(3,5-dichlor-4-aminofenyl)pyrimidin (příklad 23vii). Získá se 350 mg sloučeniny, která má teplotu tání 216 až 219 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 5,55 (s, 2H), 6,25 (široký singlet, 2H), 6,42 (široký singlet,

2H), 7,00 (s, 2H) ppm.

Příklad 26

Způsob výroby 4-amino-2-(4-n-butyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu (sloučenina 28)

i) Způsob výroby N-butylpiperazinu

8,8 g N-benzylpiperazinu (Aldrich) se rozpustí ve 150 ml ethanolu a k roztoku se přidá 21 g hydrogenuhličitanu sodného a 8,6 ml butyljodidu (BDH). Směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin a poté se nechá za teploty místnosti přes noc. Nerozpustný materiál se odfiltruje a filtcát se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí ve 400 ml ethylacetátu, třikrát promyje vždy 70 ml vody, vysuší síranem hořečnatým a odpaří za

-31CZ 281070 B6 sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v etheru, filtruje přes filtrační prostředek Hyflo (ochranná známka pro rozsivkovou zeminu) a opětovně odpaří. Získá se požadovaný meziprodukt, který tvoří žlutá kapalina o hmotnosti 10,43 g.

Roztok svrchu uvedeného piperazinu ve 100 ml methanolu se redukuje ve vodíkové atmosféře v přítomnosti 0,5 g 10% palladia na uhlí. Směs se filtruje a filtrát se odpaří. Získá se meziprodukt, který tvoří bezbarvý olej o hmotnosti 2,32 g a teplotě varu 40 až 44 °C/27 Pa.

ii) Způsob výroby sulfátu N-butylpiperazinoformamidinu

0,71 g butylpiperazinu se rozpustí v 10 ml vody, přidá se 0,52 g sulfátu 2-methyl-2-thiopseudomočoviny (Eastman 2-methyl-2-thiopseudourea) a roztok se míchá probubláváním dusíkem za teploty místnosti po dobu 21 hodiny. Roztok se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se trituruje isopropylalkoholem, filtruje a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 0,575 g sloučeniny, která má teplotu tání 243 až 249 C.

iii) Způsob výroby 4-amino-2-(4-n-butyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

Sloučenina se vyrobí analogicky jako 4-amino-2-(4-benzyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin (příklad 22) reakcí svrchu uvedeného formamidinu s 2-(2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilem (příklad 3v) a následujícím převedením dimesylátové soli, jejím rozpuštěním v etheru a přídavkem 2 ekvivalentů kyseliny methansulfonové. Získaná sloučenina má teplotu tání 205 °C za rozkladu.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (8): 0,95 (t, 3H), 1,38 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,36 (s, 6H), 2,36 (s, 6H), 3,1 - 3,8 (m, 9H), 4,5 - 4,65 (široký dublet, 2H), 7,5 (d, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,95 (d, 1H) ppm.

Příklad 27

Způsob výroby 4-amino-2-(4-ethyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

i) Způsob výroby hydrojodidu N-ethylpiperazinoformamidinu

Sloučenina pojmenovaná v nadpise se vyrobí analogickým způsobem jako N-methylpiperazinoformamidin (příklad lOi) z ethylpiperazinu (BASF) s výjimkou toho, že se odparek trituruje ethylacetátem. Získá se 6,9 g sloučeniny, která má teplotu tání 151 až 153 °C.

ii) Způsob výroby (N-ethylpiperazinoformamidin)acetátu

1,89 g (1-formamidino-2,5-dimethylpyrazol)acetátu (Aldrich), 1,33 g 1-ethylpiperazinu (BASF) a 1,61 ml triethylaminu se rozpustí v 25 ml dichlormethanu a míchá se za teploty místnosti po dobu 18 hodin. Bílá suspenze se odfiltruje, promyje dichlormethanem a vysuší za sníženého tlaku. Získá se tak 1,35 g sloučeniny,

-32CZ 281070 B6 která má teplotu tání 240 až 241 °C.

iii) Způsob výroby 4-amino-2-(4-ethyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,-trichlorfenyl)pyrímidínu

Tato sloučenina se vyrobí obdobným způsobem jako 4-amino-2-(4-benzyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin (příklad 22), reakcí svrchu uvedeného hydrojodidu formamidinu s 2-( 2,3,5-trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilem (příklad 3v) a následujícím převedením dimesylátové soli, jejím rozpuštěním v etheru a přídavkem 2 ekvivalentů kyseliny methansulfonové. Získaná sloučenina má teplotu tání 213 až 215 C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: deuterovaný chloroform) (δ): 1,14 (t, 3H), 2,4 - 2,6 (m, 6H), 3,84 (t, 4H), 4,55 (široký singlet, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 7,82 (s, 1H) ppm.

Příklad 28

Způsob výroby 4-amino-2-(4-isopropyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu (sloučenina 30)

i) Způsob výroby hydrojodidu N-isopropylpiperazinoformamidinu

5,03 g dihydrochloridu isopropylpiperazinu (Emka-chemie) se rozpustí v 15 ml vody, vede sloupcem naplněným pryskyřicí (IR410, OH“ forma) a eluuje se vodou. Eluent se odpaří za sníženého tlaku, odparek se rozpustí v etheru, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Jako světle žlutý olej se dostane báze o hmotnosti 1,86 g, která se použije bez dalšího čistění.

Sloučenina pojmenovaná v nadpise se připraví analogickým způsobem jako N-methylpiperazinoformamidin (příklad 10Í) za použití svrchu uvedené volné báze s tím rozdílem, že se odparek trituruje acetonem. Získá se 0,1 g sloučeniny.

ii) Způsob výroby 4-amino-2-(4-isopropyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

Sloučenina se vyrobí analogicky jako 4-amino-2-(4-benzyl-lpiperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin (příklad 22) reakcí svrchu uvedeného hydrojodidu formamidinu s 2-(2,3,5-trichlorfenyl )-3-methoxyakrylonitrilem (příklad 3v) a následujícím převedením dimesylátové soli, jejím rozpuštěním v etheru a přídavkem 2 ekvivalentů kyseliny methansulfonové. Získaná sloučenina má teplotu tání 130 °C za rozkladu.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 1,60 (d, 6H), 2,4 - 2,55 (m, 4H), 2,7 (m, 1H), 3,6 - 3,75 (m, 4H), 6,3 (široký singlet, 2H), 7,36 (d, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,80 (d, 1H) ppm.

-33CZ 281070 B6

Příklad 29

Způsob výroby 4-amino-2-(4-cyklopropyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu (sloučenina 31)

i) Způsob výroby hydrojodidu N-cyklopropylpiperazinoformamidinu

10,0 g dihydrochloridu cyklopropylpiperazinu (Emka-chemie) se rozpustí ve 20 ml vody, vede sloupcem naplněným pryskyřicí (IR410, OH forma) a eluuje se vodou. Eluent se odpaří za sníženého tlaku, odparek se rozpustí v acetonu, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Jako světle zelený olej se dostane báze o hmotnosti 4,41 g, která se použije bez dalšího čistění.

Sloučenina pojmenovaná v nadpise se připraví analogickým způsobem jako N-methylpiperazinoformamidin (příklad 10Í), za použití svrchu uvedené volné báze s tím rozdílem, že se odparek trituruje etherem. Získá se 1,84 g sloučeniny, která má teplotu tání 127 až 133 °C za rozkladu.

ii) Způsob výroby 4-amino-2-(4-cyklopropyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu

Tato sloučenina ·se vyrobí analogicky jako 4-amino-2-(4-benzyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidin (příklad 22) reakcí svrchu uvedeného hydrojodidu formamidinu s 2-(2,3,5trichlorfenyl)-3-methoxyakrylonitrilem (příklad 3v) a následujícím převedením dimesylátové soli, jejím rozpuštěním v etheru a přídavkem 2 ekvivalentů kyseliny methansulfonové. Získaná sloučenina má teplotu tání 214 až 217 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (δ): 0,8 - 0,95 (m, 2H), 0,95 - 1,06 (m, 2H), 2,4 (s, 6H), 2,9 (m, 1H), 3,1 - 3,7 (m), 7,45 (d, 1H), 7,9 (s, 1H), 7,95 (d, 1H) ppm.

Přiklad 30

Způsob výroby dimesylátu 4-amino-2-(4-ethyl-l-piperazinyl)-5-(3,5-dichlorfenyl)-6-trifluormethylpyrimidinu sloučenina 32)

759 mg 2-(3,5-dichlorfenyl)-3-oxo-3-trifluormethylpropionitrilu (příklad lii) se rozpustí v 3,5 ml triethyl-orthoformiátu a umístní na olejovou lázeň. Teplota olejové lázně se z počátku zvyšuje, dokud nedojde k varu reakční směsi pod zpětným chladičem a dosažená teplota 146 °C se udržuje po dobu 4,5 hodiny. Těkavé produkty se potom oddestilují za sníženého tlaku a dostane se enolether o hmotnosti 868 mg, který se použije bez dalšího čistění .

K míchanému roztoku ethoxidu sodného, připraveného ze 152 mg sodíku, v 10 ml ethanolu se po částech během 10 minut přidá hydrojodid N-ethylpiperazinoformamidinu. Po desetiminutovém míchání za teploty místnosti se přidá roztok svrchu vyrobeného enoletheru v 5 ml ethanolu a reakční směs se míchá za varu pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Reakční směs se nechá stát za teploty místnosti přes noc a poté se odpaří za sníženého tlaku.

-34CZ 281070 B6

Odparek se rozpustí v dichlormethanu a filtruje. Filtrát se opět odpaří a odparek se čistí chromatografíčky na silikagelu za eluování směsí 5 % methanolu s dichlormethanem. Dostane se 674 mg požadované sloučeniny.

Volná báze se rozpustí ve směsi ethanolu s etherem a přidá se k ní 220 μΐ kyseliny methansulfonové. Výsledná sraženina se zachytí, promyje a vysuší za sníženého tlaku. Pevná látka se poté rozpustí ve vodě, filtruje a lyofilizuje na požadovanou sloučeninu, kterou tvoří bílá pevná látka o hmotnosti 695 mg. Vyrobená sloučenina má teplotu tání 256 až 257 °C.

NMR spektrální analýza (rozpouštědlo: dimethylsulfoxid) (5): 1,28 (t, 3H), 2,40 (s, 6H), 2,9 - 3,4 (m, 6H), 3,6 (široký singlet, 2H), 4,7 (široký singlet, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,68 (t, 1H) ppm.

Farmatologické účinky

Inhibice uvolňování glutamátu a inhibice jaterního DHFR u krys

U sloučenin podle tohoto vynálezu se testují účinky na uvolňování glutamátu, vyvolané veratrinem, z tenké vrstvy mozkové tkáně krysy podle protokolárního zápisu, který je popsán v Epilepsie 27(5), 490-497 /1986/. Postup testování inhibice účinku

DHFR je modifikací postupu, který je uveden v Biochemical Pharmacology, SV. 20, str. 561-574 /1971/.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1, přičemž symbol IC₅₀ označuje koncentraci sloučeniny, která je příčinou 50% inhibice

a) uvolnění glutamátu vyvolaného veratrinem a

b) DHFR enzymového účinku.

Tabulka 1

Sloučenina č. ^IC50 ^IC50 uvolňování glutamátu jaterní DHFR krysy (mezní hodnota P 95) (mezní hodnota P 95)

1	<10	4,59 (1,9-10,75)
2	<10	>100
3	2,5	(1,2-4,9) >100
4	<10	100
5	<10	<100
6	10	>100
7	<10	>100
8	0,27	(0,04-1,65)
		>100
9	<10	>100
10	>10	>100
11	<10	>100

-35CZ 281070 B6

IC₅₀ (μπιοί) jaterní DHFR krysy (mezní hodnota P 95)

Tabulka 1 (pokračování)

Sloučenina č.

IC_5Q (μπιοί) uvolňování glutamátu (mezní hodnota P 95)

12	<10	13,8	(6,9-27,3)
14	0,137	(0,026-0,79)
		>100
15	<10	>100
16	10	>100
17	’ 2,17	(1,5-2,9)>100
18	>10	>100
19	<10	5,558	(1,58-19,77)
20	10	>100
21	10	>100
22	>10	<100
25	>10	0,034	(0,013-0,08)
26	<10	0,034	(0,015-0,07)
27	10	1,54
28	<10	>100
29	2,56	(1,34-4,87)
		>100
30	<10	100
31	10	>100
32	2,43	(0,84-7,01)

>100

Příklady farmaceutických prostředků

A. Tablety

sloučenina z příkladu 1	150	mg*
laktoza	200	mg*
kukuřičný škrob	50	mg*
polyvinylpyrrolidon	4	mg*
stearát hořečnatý	4	mg*

* obsah na tabletu

Sloučenina z příkladu 1 se smíchá s laktozou a škrobem a granuluje s roztokem polyvinylpyrrolidonu ve vodě. Výsledné granule se vysuší, smíchají se stearátem hořečnatým a slisují na uvedené tablety.

B. Injekce

Injekce I

Sůl sloučeniny podle tohoto vynálezu se rozpustí ve sterilní vodě pro injekce.

IntravenózMÍ injekce - prostředek II

-36CZ 281070 B6 účinná látka 0,20 g sterilní fosfátový pufr (pH 9,0), do 10 ml neobsahující pyrogenní sloučeniny

Sloučenina z příkladu 1 ve formě své soli se rozpustí ve větší části fosfátového pufru za teploty 35 až 40 °C, potom se doplní na daný objem a filtruje přes sterilní mikroskopický filtr do sterilních lOml skleněných láhviček (typu 1), které se uzavřou sterilním a poté neprodyšným uzávěrem.

V dále uvedených příkladech může být účinnou látkou kterákoli sloučenina podle tohoto vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

C. Kapsle

Kapsle - prostředek I

Prostředek I se může připravit smícháním složek a naplněním výsledné směsi do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.

mg/kapsle

a) účinná látka	250
b) laktóza	143
c) natriumglykolát škrobu	25
d) sterarát hořečnatý	2
celkem	420

Kapsle - prostředek II mg/kapsle

a) účinná látka

b) Macrogel 4000 BP celkem

250

350

600

Kapsle se mohou připravit roztavením Macrogelu 4000 BP, dispergováním účinné látky v tavenině a naplněním vzniklé disperze do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.

Kapsle - prostředek III (kapsle s řízeným uvolňováním účinné látky) mg/kapsle

a) účinná látka250

b) mikrokrystalické celulóza125

c) laktóza BP125

d) ethylcelulóza13 celkem513

Prostředek, tvořený kapslí s řízeným uvolňováním účinné látky, se může připravit vytlačováním smíšených složek a) a c) za použití vytlačovacího lisu, potom sferonizací a vysušením extru

-37CZ 281070 B6 dátu. Vysušené pelety se povléknou ethylcelulózou (d), jako membránou, řídící uvolňování a plní do dvoudílných tvrdých želatinových kapslí.

D. Sirup účinná látka roztok sorbitolu glycerol benzoát sodný ochucovadlo vyčištěná voda

0,2500 g

1,5000 g

1,0000 g

0,0050 g

0,0125 ml podle potřeby do 5,0 ml

Benzoát sodný se rozpustí v části vyčištěné vody a k vzniklému roztoku se přidá roztok sorbitolu. Poté se k získanému roztoku přidá účinná látka, která se v tomto roztoku rozpustí. Výsledný roztok se smíchá s glycerolem a potom upraví na požadovaný objem vyčištěnou vodou.

E. Čípky mq/čípek účinná látka (63 μΐ)* tvrdý tuk, BP (Witepsol H15 - Dynamit Nobel) celkem

250

1770

2020 * Účinná látka se používá ve formě prášku, ve kterém alespoň 90 % částic má průměr 63 μπι nebo menší

Jedna pětina Witepsolu H15 se roztaví v pánvi, která má plášť vyhřívaný párou, na maximální teplotu 45 °C. Účinná látka se prošije sítem s velikostí ok 200 μπι a přidá k roztavené bází, s kterou se míchá za použití Silversonova míchadla, vybaveného řeznou hlavou, dokud se nedosáhne jemné disperze. Vzniklá disperze se udržuje za teploty 45 °C a přitom se k ni přidá zbývající Witepsol H15. Vše se míchá k zajištění homogenity. Veškerá suspenze se potom vede přes síto z nerezavějící oceli s velikostí ok 250 μπι za nepřetržitého míchání, při kterém se nechá teplota poklesnout na 40 °C. Při teplotě 38 až 40 °C se podíly o hmotnosti 2,02 g směsi plní do vhodných forem z plastické hmoty a čípky se necháj í vychladnout na teplotu místnosti.

Claims (8)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. 4-Ainino-2-( 4-n-propyl-l-piperazinyl )-5- (2,3,5-trichlorfenyl)pyrimldin a jeho adiční soli s kyselinami.
2. 2. Sůl 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu podle nároku 1, kterou je sůl, vytvořená z kyseliny chlorovodíkové, kyseliny bromovodíkové, kyseliny sírové, kyseliny citrónové, kyseliny vinné, kyseliny fosforečné, kyseliny mléčné, kyseliny pyrohroznové, kyseliny octové, kyseliny jantarové, kyseliny fumarové, kyseliny maleinové, kyseliny oxaloctové, kyseliny methansulfonové, kyseliny ethansulfonové, kyseliny p-toluensulfonové, kyseliny benzensulfonové a kyseliny isethionové.
3. 3. Sůl 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu podle nároku 1, kterou je dimesylát 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu.
4. 4. Způsob výroby 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu nebo jeho adiční soli s kyselinou, vyznačující se tím, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce I ve kterém představuje odštépitelnou skupinu a

   Y znamená kyanoskupinu, se sloučeninou vzorce II

   HN /--\ y~N N-CH₂CH₂CH₃ h₂n \/ (II)

   -39CZ 281070 B6 • nebo její solí a takto vzniklý 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenylJpyrimidin se izoluje jako volná báze nebo jako jeho adiční sůl s kyselinou.
5. 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že L představuje alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku.
6. 6. Způsob výroby 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu nebo jeho adiční soli s kyselinou, vyznačující se tím, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce III (III), ve kterém

   Y znamená kyanoskupinu, se sloučeninou vzorce II, vymezenou v nároku 4, nebo s její solí a takto vzniklý 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenylJpyrimidin se izoluje jako volná báze nebo jako jeho adiční sůl s kyselinou.
7. 7. Způsob výroby 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl)pyrimidinu nebo jeho adiční soli s kyselinou, vyznačující se tím, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce IV (IV), ve kterém

   Y znamená kyanoskupinu a ^R10 ^{a R} znamenají vždy alkylovou skupinu, nebo tvoří dohromady skupinu vzorce -(C(R₂))_n, kde R znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu a n představuje celé číslo 2 až 4,

   -40CZ 281070 B6 se sloučeninou vzorce II, vymezenou v nároku 4, nebo její solí a takto vzniklý 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenylJpyrimidin se izoluje jako volná báze nebo jako jeho adiční sůl s kyselinou.
8. 8. Farmaceutický prostředek k použití při ošetřování nebo profylaxi neurodegenerativní choroby centrálního nervového systému u savce, které původ spočívá v nadměrném uvolňování glutamátu jako přenašeče neuronů, vyznačující se tím, že obsahuje 4-amino-2-(4-n-propyl-l-piperazinyl)-5-(2,3,5-trichlorfenyl )pyrimidin nebo jeho adiční sůl s kyselinou a jeden nebo větší počet farmaceuticky přijatelných nosičů.