CZ280507B6

CZ280507B6 - Pivaloyloxymethyl (1R,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4pyrro lidinylthio/-6-/(1R)-1-hydroxyethyl/-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylát

Info

Publication number: CZ280507B6
Application number: CZ932454A
Authority: CZ
Inventors: Isao Kawamoto; Masao Miyauchi; Rokuro Endo
Original assignee: Sankyo Company Limited
Priority date: 1992-11-17
Filing date: 1993-11-17
Publication date: 1996-02-14
Also published as: CA2103223A1; FI103576B1; DE69324106D1; NO934140D0; FI935063A0; HUT66001A; JP2848552B2; TW360657B; PH30464A; AU677235B2; GR3029975T3; FI103576B; AU5063193A; NO304431B1; HK1011977A1; KR940011463A; NO934140L; CN1036714C; FI935063A; ES2131560T3

Abstract

Krystalická, při skladování stálá forma pivaloyloxymethylesteru kyseliny (1R,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(1R)-1-hydroxyethyl/-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylové.ŕ

Description

Vynález se týká specifické krystalické formy pivaloyloxymethylester karbapenemového derivátu, kyseliny (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové. Vynález se také týká farmaceutického prostředku s obsahem této látky, vhodným pro perorální podání, s antibiotickým účinkem.

Dosavadní stav techniky

US patentový spis č. 5 104 867 a evropský patentový spis č. 337 637, příklad 39, popisují přípravu karbapenemového derivátu, který je příbuzný shora uvedené látce. Z obou uvedených spisů je zřejmé, že karbapenemový derivát byl získán pouze ve formě amorfního prášku. Avšak ukázalo se, že uvedená látka, získaná ve formě amorfního prášku a připravená známým způsobem se nesnadno zpracovává na farmaceutické prostředky pro perorální podání a mimoto není dostatečně stálá, zvláště při skladování po delší časové období a z tohoto důvodu má omezené praktické použití jako účinná složka farmaceutických prostředků.

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že dosud nepřipravená krystalická forma uvedené látky má zcela neočekávanou stálost a snadněji se zpracovává na farmaceutické prostředky, takže tato její forma je daleko cennější a využitelnější pro farmaceutické účely.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří tedy pivaloyloxymethyl (IR,-5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(lR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát vzorce I

v krystalické formě, s teplotou tání 189 °C, as hlavními rovinami 18,41, 9,21, 6,24, 5,28, 5,04 novení difrakcí rtg-paprsků práškovou K_alfa ^z měděné katody, lambda = 1,54 x odstupy mezi jednotlivými a 4,72 x 10⁸ cm při stametodou s použitím paprsků 10^-8 cm.

-1CZ 280507 B6

Sloučenina vzorce I je ve své krystalické formě využitelná jako sloučenina s antibakteriálnim účinkem.

Podstatu vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, obsahující antibiotikum ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem, v němž antibioticky účinnou složkou je sloučenina vzorce I ve shora popsané krystalické formě.

Tyto farmaceutické prostředky je možno užít k léčení nebo profylaxi bakteriálních infekcí u savců, například lidí. Podává se účinné množství antibiotika vzorce I v krystalické formě.

Podstatu vynálezu tvoří také způsob výroby krystalické formy sloučeniny vzorce I, který bude dále podrobněji popsán.

Popis výkresu

Další vlastnosti a výhody vynálezu budou zřejmé z následujícího podrobnějšího popisu a z příkladové části v souvislosti s připojenými výkresy, kde na obr. 1 je znázorněna difrakce rtg-paprsků krystalickou formou sloučeniny vzorce I podle vynálezu při použití paprsků K_a^f_a z měděné katody, λ = 1,54 χ 10~⁸ cm.

Na vertikální ose je uvedena difrakce v impulsech za sekundu, na horizontální ose je uvedena hodnota difrakčniho úhlu.

Krystalickou formu sloučeniny shora uvedeného vzorce I je možno charakterizovat různými fyzikálními parametry včetně teploty tání krystalů a difrakce rtg-záření. Výhodná krystalická forma podle vynálezu má typicky teplotu tání 189 °C. Tyto krystalky mají hlavní vrcholy odstupů jednotlivých rovin 18,41, 9,21, 6,24, 5,28, 5,04 a 4,72 χ 10^-8 cm při použití paprsků K_&lfa tak, jak byly shora popsány, přičemž λ = 1,54 x 10~⁸ cm.

Krystalickou formu sloučeniny vzorce I je možno připravit tak, že se přidá rozpouštědlo k pivaloyloxymethylesteru kyseliny (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-1-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové s následným aktivním nebo pasivním odstraněním rozpouštědla a promytím, sušením a izolací výsledných krystalů.

Podrobněji je možno přípravu krystalků popsat v následujících stupních:

1. Pivaloyloxymethyljodid se uvede do reakce se sodnou solí kyseliny (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-1-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová s následným zředěním směsi ethylacetátem. Zředěná směs se potom promyje vodou a zahustí, například odpařením za sníženého tlaku.

2a) Získaný odparek je možno rozpustit v silném rozpouštědle. Příkladem vhodných rozpouštědel pro použití v tomto stupni mohou být halogenované uhlovodíky, zvláště halogenované alifatické uhlovodíky, například methylenchlorid, 1,2-dichlorethan nebo chloroform, s výhodou methylen-chlorid. Dialkylsulfoxidy, například dimethylsulfoxid. Amidy, například, N,N-dimethylformamid

-2CZ 280507 B6 a Ν,Ν-dimethylacetamid, ketony, jako aceton nebo 2-butanon, s výhodou aceton a alkoholy, například methanol. Potom se k roztoku přidá slabší rozpouštědlo nebo rozpouštědlo v němž se výsledná látka nerozpouští. Příkladem slabšího rozpouštědla nebo rozpouštědla, v němž se výsledná látka nerozpouští, mohou být alkoholy, například ethanol, ethery, například diethylether, tetrahydrofuran nebo dioxan, s výhodou diethylether, dále estery, například ethylacetát, cyklické a aromatické uhlovodíky, například cyklohexan, toluen nebo benzen, s výhodou cyklohexan nebo toluen a také voda. Krystalky potom mohou být vytvořeny tak, že se směs nechá stát a rozpouštědlo se pomalu odpaří nebo odpařením alespoň části rozpouštědla za sníženého tlaku s následným stáním směsi k odpaření rozpouštědla.

2b) Je také možno postupovat tak, že se zbytek, získaný ve stupni 1 rozpustí ve směsi rozpouštědel nebo ve směsi rozpouštědla a slabého rozpouštědla nebo rozpouštědla, v němž se výsledný produkt nerozpouští, s výhodu ve směsi silného rozpouštědla a slabého rozpouštědla nebo rozpouštědla, v němž se produkt nerozpouští, například ve směsi methylénchloridu a ethanolu. Množství rozpouštědla a slabého rozpouštědla, v němž se produkt nerozpouští a poměr těchto složek v tomto stupni není kritický, pokud je rozpouštědlo a slabé rozpouštědlo nebo rozpouštědlo, v němž se produkt nerozpouští přítomno v množství a poměru, v němž může krystalizace probíhat. Bylo zjištěno, že pro tyto účely je dostatečný poměr methylénchloridu k ethanolu 4 : 1 až 1 : 4, s výhodou jde o objemový poměr 1 : 1 až 1:4. Nejvýhodnější objemový poměr je 1:1 až 1 : 2. Krystalky mohou být vytvořeny tak, že se směs nechá stát a rozpouštědlo se přirozeně odpařuje nebo tak, že se alespoň část rozpouštědla odpaří za sníženého tlaku a potom se směs nechá stát k dalšímu odpařování.

Krystalky získané ve shora uvedených stupních potom mohou být promyty, usušeny a izolovány pomocí běžných postupů. Typicky se postupuje tak, že se krystalky promyjí například ethanolem a potom suší za sníženého tlaku při teplotě 20 až 25 °C.

Krystalky podle vynálezu, získané ve shora uvedených stupních mají teplotu tání přibližně 189 ”C a vzdálenost jednotlivých rovin 18,41, 9,21, 6,24, 5,28, 5,04 a 4,72 χ 10^-8 cm při difrakci rtg-záření práškovou metodou při použití paprsků K_a^j_a z měděné katody, = 1,54 χ 10^-8 cm.

Krystalky podle vynálezu mají velmi dobrou antibakteriální účinnost proti širokému spektru gram-positivních i gram-negativních bakterií a také proti bakteriím, produkujícím cefalosporinázu, jde o účinnost, srovnatelnou s účinností sloučeniny vzorce I ve formě prásku, zvláště v případě perorálního podání.

Po inkubaci při teplotě 37 °C po dobu 1 hodiny v koňském séru byla stanovena antibakteriální účinnost krystalků podle vynálezu ředěním na agarových plotnách. Tímto způsobem bylo prokázáno, že krystalická forma podle vynálezu je účinná proti široké škále pathogenních mikroorganismů včetně gram-positivních bakterií, jako jsou Staphylococcus aureus a Enterococcus faecalis, stejně jako proti gram-negativním bakteriím, jako jsou Escherichia coli, čeleď Shigella, Klebsiolla pneumoniae, čeledi

-3CZ 280507 B6

Próteus, Serratia a Enterobacter a také proti Pseudomonas aeruginosa, stejně jako proti anaerobním bakteriím, jako je Bacteroides fragilis. Krystalickou formu je tedy možno velmi dobře využít k léčení onemocnění, způsobených těmito organismy u lidí i u jiných živočichů.

Po perorálním podání krystalické formy podle vynálezu u myší s celkovou infekcí Staphylococcus aureus nebo Escherichia coli byl výsledný léčebný účinek velmi dobrý. Mimoto bylo po perorálním podání sloučeniny vzorce I v krystalické formě možno izolovat velké množství kyseliny vzorce I z moči myší.

Krystalická forma sloučeniny vzorce I má také nižší toxicitu než sloučenina vzorce I v amorfní formě, pravděpodobně vzhledem k tomu, že krystalická forma je prostá rozkladných produktů. Krystalická forma sloučeniny vzorce I by tedy měla mít potenciálně velkou hodnotu jako léčiva pro léčení bakteriálních infekcí.

Mimoto se krystalická forma podle vynálezu nerozkládá po několikatýdenním stání při teplotě 60 °C, čímž je možno prokázat, že tato krystalická forma má daleko vyšší stálost než prášková amorfní forma, jak bude dále prokázáno v následujícím pokusu.

Krystalická forma podle vynálezu může být podávána perorálně člověku i jiným živočichům k léčení chorob, způsobených pathogenními mikroorganismy. Krystalky je možno zpracovat na jakoukoliv běžnou lékovou formu. Například pro perorální podání je možno krystaly smísit s vhodnými pomocnými látkami, přijatelnými z farmaceutického hlediska, jako jsou škrob, cukr, například laktosa nebo sacharosa, uhličitany alkalických kovů, jako uhličitan vápenatý, uhličitan draselný nebo uhličitan hořečnatý, s výhodou uhličitan vápenatý, fosfáty alkalických kovů, například fosforečnan vápenatý, hořečnatý nebo draselný, s výhodou fosforečnan vápenatý, ethery, jako polyethylenglykol, pojivá, jako arabská guma, karboxymethylcelulosa, hydroxypropylcelulosa, želatina nebo polyvinylpyrrolidon, kluzné látky, například stearan hořečnatý, mastek, laurylsiran sodný nebo polyethylenglykol a desintegrační činidlo, například kyselina alginová, soli této kyseliny nebo vápenatá sůl karboxymethylcelulosy, dále může jít o barviva, chuťové látky a sladidla. Vhodnými lékovými formami pro perorální podání krystalků podle vynálezu jsou například tablety, granuláty, kapsle, prášky a sirupy.

Dávka krystalků podle vynálezu se bude měnit v závislosti na povaze léčeného onemocnění, na příznacích choroby, závislosti na tělesné hmotnosti a stavu nemocného a také na formě podání a intervalech mezi dávkami. Avšak obecně je možno uvést, že se denní dávka pro dospělého bude pohybovat v rozmezí 50 mg až 2 g krystalků, tuto dávku je možno podat najednou nebo rozděleně dvakrát až čtyřikrát denně.

Pokus

Stálost sloučeniny vzorce I v krystalické formě

Krystalky, získané způsobem podle následujícího příkladu 1 a amorfní prášková forma sloučeniny vzorce I, která byla připravena v podstatě způsobem, popsaným v příkladu 39 evropského

-4CZ 280507 B6 patentového spisu č. 337 637 nebo podle příkladu 16 zveřejněné japonské patentové přihlášky č. Hei 2-49783, byly skladovány v desikátoru se silikagelem při teplotě 60 °C. Stálost obou sloučenin po 7 dnech a po 28 dnech za uvedených podmínek byla určena stanovení zbývajícího množství sloučeniny. Toto stanovení bylo provedeno pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie HPLC za následujících podmínek:

sloupec: Inertsil ODS-2, průměr 4,6 x 150 mm mobilní fáze: 20 mM kyselina 3-(N-morfolino)propansulfonová jako pufr o pH 7 a methylkyanát v objemovém poměru 70 : 30.

detekce: absorpce v ultrafialovém světle při 322 nm.

Tabulka 1 sloučenina teplota trvání pokusu (dny)

C 7 28

krystalický prášek (příklad 1)	60	99,2 %	98,1 %
nekrystalický
prášek	60	91,6 %	68,2 %

Příprava krystalické formy podle vynálezu bude dále osvětlena v následujících přípravách a v příkladu provedení. V příkladu i přípravách bylo NMR-spektrum získáno při použití tetramethylsilanu jako vnitřního nebo zevního standardu, není-li uvedeno jinak.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

4,76 g sodné soli kyseliny (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové, připravené způsobem podle přípravy 6 se rozpustí ve 35 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu. K výslednému roztoku se přidá 3,60 g pivaloyloxymethyljodidu za chlazení ledem a směs se 30 minut míchá. Na konci této doby se směs zředí ethylacetátem a potom se směs promyje vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Potom se ethylacetátová vrstva zbaví vody při použití bezvodého síranu sodného a odpaří za sníženého tlaku. Výsledný produkt, získaný jako 4,54 g amorfního prášku se potom rozpustí ve směsi ethanolu a methylenchloridu v objemovém poměru 1:1, odpařením methylenchloridu za sníženého tlaku se vytvoří krystalky. Výsledné krystalky se oddělí filtrací po odstranění zbývajícího ethanolu a po usušení se získá 3,68 g bezbarvých krystalků s teplotou tání 189 ’C.

IR-spektrum (KBr) v_maxcm^-1:

-5CZ 280507 B6

336, 1 764, 1 751, 1 717, 1 691, 1 542, 1 347, 1 213, 1 160,

114, 995.

UV-spektrum (CH^CN) má maximum při 324 nm.

NMR-spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid, vnitřní standard: tetramethylsilan) ppm:

1,10 až 1,18 (15, multiplet),

2,11 (1H, dublet dubletů, J = 17,0 a 4,3 Hz),

2,78 (1H, dublet dubletů, J = 17,0 a 7,7 Hz),

3,09 (1H, dublet dubletů, J = 10,9 a 3,9 Hz),

3,25 (1H, dublet dubletů, J = 6,2 a 2,5 Hz),

3,44 až 3,48 (1H, multiplet),

3,71 (1H, dublet dubletů, J = 10,9 a 7,6 Hz),

3,94 až 4,00 (1H, multiplet),

4,04 až 4,09 (1H, multiplet),

4,23 (1H, dublet dubletů, J = 9,5 a 2,5 Hz),

5,08 (1H, dublet, J = 5,1 Hz),

5,73 (1H, dublet, J = 5,9 Hz),

5,88 (1H, dublet, J = 5,9 Hz),

7,84 (1H, singlet).

Difrakce krystalků v rtg-záření byla prováděna práškovou me-

todou při použití K_aif_a-paprsků z měděné katody, /} = 1,54 χ 10“⁸ cm, spektrum je znázorněno na obr. 1.

Příprava 1 (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidin

1-(1) (4S)-4-methansulfonyloxy-2-oxopyrrolidin

1,90 g (4S)-4-hydroxy-2-oxopyrrolidinu se rozpustí ve 100 ml pyridinu a k roztoku se za míchání a chlazení ledem po kapkách přidá 2,26 g methansulfonylchloridu. Výsledná směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě místnosti, potom se reakční směs odpaří za sníženého tlaku. Ke směsi se přidá 9 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom se směs znovu odpaří za sucha za sníženého tlaku. K výslednému odparku se přidá směs ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 1:1a potom se nerozpustný podíl odfiltruje a rozpustný podíl se odpaří za sníženého tlaku. Odparek, získaný z rozpustného podílu se podrobí chromatografii na sloupci s náplní 150 ml silikagelu (Měrek 9385) při použití eluce s gradientem směsi ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 9 : 1 až 4:1 jako elučním činidlem. Frakce, obsahující sloučeninu podle vynálezu byly spojeny a odpařeny za sníženého tlaku, výsledný produkt byl překrystalován ze směsi ethylacetátu a methanolu, čímž bylo získáno 2,44 g výsledného produktu ve formě krystalků s teplotou tání 137,5 až 139 C.

Optická otáčivost /alfa/²⁴ -35,5 °C (c = 1,09, methanol) IR-spektrum (KBr), v_maxcm^-1:

719, 1 697, 1 659, 1 305, 1 177, 1 171, 1 159, 963.

-6CZ 280507 B6

NMR-spektrum (400 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid) ppm:

2,28	(1H,	dublet dubletů, J = 17,6	a	1,8	Hz)
2,71	(1H,	dublet dubletů, J = 17,6	a	6,3	Hz)
3,24	(3H,	singlet),
3,37	(1H,	dublet, J = 11,9 Hz),
3,66	(1H,	dublet dubletů, J = 11,9	a	5,3	Hz)
5,31	až 5	,34 (1H, multiplet),
7,85	(1H,	široký singlet).

1-(2) (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidin

896 mg sloučeniny, získané v předchozím stupni se rozpustí v 90 ml bezvodého acetonitrilu a k roztoku se přidá 857 mg thioacetátu draselného. Potom se roztok zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem na olejové lázni s teplotou 85 °C a na této teplotě se udržuje ještě 2 hodiny. Na konci této doby se nerozpustný podíl reakční směsi odfiltruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. K odparku se přidá ethylacetát a jakýkoliv nerozpustný podíl se opět odstraní filtrací. Potom se rozpustný podíl podrobí chromatografii na silikagelu při použití gradientově eluční metody s použitím samotného ethylacetátu a směsí ethylacetátu a methanolu v objemových poměrech 98 : 2 až 96 : 4 až 94 : 6 jako elučního činidla. Požadované frakce se spojí a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 593 mg krystalického odparku. Tento odparek se nechá překrystalovat ze směsi ethylacetátu a cyklohexanu, čímž se získá 455 mg výsledné sloučeniny ve formě krystalků s teplotou tání v rozmezí 59 až 60 °C.

Optická otáčivost /alfa/²⁵ +47,3° (c = 1,33, methanol)

IR-spektrum (KBr) v_maxcm^-3.: 1 689, 1 125.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃) ppm:

2,30	(1H,	dublet dubletů,	J = 17,4	a	6,0	Hz) ,
2,35	(3H,	singlet),
2,80	(1H,	dublet dubletů,	J = 17,4	a	9,1	Hz) ,
3,31	(1H,	dublet dubletů,	J = 10,2	a	5,1	Hz) ,
3,89	(1H,	dublet dubletů,	J = 10,2	a	7,2	Hz) ,

4,15 až 4,23 (1H, multiplet), 7,27 (1H, široký singlet).

Příprava 2 (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidin

380 mg (4S)-4-hydroxy-2-oxopyrrolidinu se uvede do suspenze ve 21 ml bezvodého tetrahydrofuranu a k suspenzi se při teplotě místnosti přidá 1,18 g trifenylfosfinu. Potom se k roztoku po kapkách přidá ještě 783 mg diethylazodikarboxylátu, přičemž teplota se udržuje na hodnotě -30 ’C. Potom se směs postupně zahřeje na teplotu 4 °C a při této teplotě se míchá ještě dalších 30 minut za vzniku homogenní směsi. Na konci této doby se reakční směs zchladí na -20 ’C a potom se ke zchlazené směsi po kapkách přidá 320 mikrolitrů kyseliny thiooctové. Výsledná směs se postupně zahřeje na teplotu, ekvivalentní teplotě při chlazení ledem

-7CZ 280507 B6 a potom se směs 1,5 hodiny při této teplotě míchá. Na konci uvedené doby se reakční směs odpaří za sníženého tlaku a odparek se podrobí chromatografii na sloupci silikagelu, užije se 60 ml silikagelu Měrek 9385 a gradientově eluční metody s použitím směsi benzenu a acetonitrilu v objemových poměrech 2:1 až 1 : 1 jako elučního činidla. Frakce s obsahem produktů se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 69 mg krystalického odparku. Tento odparek se nechá překrystalovat ze směsi ethylacetátu a cyklohexanu, čímž se získá 54 mg produktu ve formě krystalické pevné látky.

Teplota tání, optická otáčivost, IR-spektrum a NMR-spektrum sloučeniny, získané uvedeným způsobem je totožná s odpovídajícími hodnotami pro sloučeninu, získanou ve stupni 2 přípravy 1.

Příprava 3 (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidin

3-(1) (4S)—4—/(1S)-10-kafrosulfonyloxy/-2-oxopyrrolidin

011 mg 4-hydroxy-2-oxopyrrolidinu se rozpustí v 50 ml pyridinu a potom se ke směsi přidá za chlazení ledem 2,63 mg chloridu kyseliny (1S)-10-kafrosulfonové. Při uvedené teplotě se směs míchá ještě 10 minut a potom se ještě 30 minut míchá při teplotě místnosti. Na konci této doby se reakční směs odpaří za sníženého tlaku. Získaný odparek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se potom promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Potom se ethylacetátová vrstva odpaří za sníženého tlaku a získaný odparek se podrobí chromatografii na sloupci s obsahem 100 ml silikagelu Měrek 9385, chromatografie se provádí při použití gradientu tak, že se nejprve jako eluční činidlo užije ethylacetát a směs ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 95 : 5 až 9 : 1. Frakce s obsahem produktu se odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu. Roztok se nechá stát a krystalky, které se ze směsi vysráží se odfiltrují a potom se suší, čímž se získá 262 mg výsledného produktu s teplotou tání 114 až 116 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, CDC1₃) δ ppm:

0,89	(3H,	singlet),
1,10	(3H,	singlet),
1,47	(1H,	dvojitý dublet dubletů, J = 12	,5,
1,70	(1H,	dvojitý dublet dubletů, J = 13	,8,
1,97	(1H,	dublet, J = 17,5 Hz),
2,02	až 2	,17 (2H, multiplet),
2,35	až 2	,49 (2H, multiplet),
2,63	(dublet dubletů, J = 17,8 a 2,6 Hz)	1
2,79	(1H,	dublet dubletů, J = 17,8 a 6,6	Hz
3,05	(1H,	dublet, J = 15,0 Hz),
3,61	(1H,	dublet, J = 15,0 Hz),
3,66	(1H,	dublet, J = 11,9 Hz),
3,82	(1H,	dublet dubletů, J = 11,9, 6,0	Hz)
5,43	až 5	,48 (1H, multiplet),
6,01	(1H,	široký singlet).

3,3 Hz),

4,6 Hz),

-8CZ 280507 B6

3-(2) (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidin

160 mg sloučeniny, získané v předchozím stupni 1 se rozpustí v 16 ml bezvodého acetonitrilu a ke vzniklému roztoku se přidá 90 mg thioacetátu draselného. Potom se směs zahřívá 5 hodin na teplotu varu pod zpětným chladičem v olejové lázni s teplotou 90 °C. Na konci uvedené doby se reakční směs zpracovává obdobným způsobem jako směs ve stupni 2 přípravy 1, čímž se získá 61 mg výsledného produktu v krystalické formě. Teplota tání, optická otáčivost, IR-spektrum a NMR-spektrum takto získané sloučeniny mají hodnoty, totožné s hodnotami pro sloučeninu, která byla získána způsobem podle přípravy 1.

Příprava 4 (4R)-4-merkapto-2-oxopyrrolidin

375 mg (4R)-4-acetylthio-2-oxopyrrolidinu, získaného podle kterékoliv ze shora uvedených příprava 1 až 3 se rozpustí v 5 ml methanolu a k výsledné směsi se za chlazení ledem přidá 2,35 ml IN roztoku methoxidu sodíku v methanolu. Potom se výsledná směs míchá ještě 20 minut při uvedené teplotě. Na konci této doby se k reakční směsi přidá ještě 2,35 ml IN vodného roztoku chlorovodíku a potom se reakční směs odpaří do sucha za sníženého tlaku. K odparku se přidá ethylacetát a jakýkoliv nerozpustný materiál se ze vzniklého roztoku odstraní filtrací. Podíl, rozpustný v ethylacetátu se potom opět odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 275 mg výsledného produktu ve formě krystalické pevné látky s teplotou tání 69,5 až 70 ’C.

Optická otáčivost /alfa/²⁴ +36,5° (c = 1,18, methanol).

IR-spektrum (KBr) v_maxcm^-1: 2 539, 1 699, 1 683.

NMR-spektrum (400 MHz, CDC1₃) δ ppm:

1,96	(1H,	dublet,	J = 7,2	Hz) ,
2,32	(1H,	dublet	dubletů,	J =	17,2,	6,8	Hz) ,
2,80	(1H,	dublet	dubletů,	J =	17,2,	8,2	Hz) ,
3,32	(1H,	dublet	dubletů,	J =	10,2,	5,6	HZ) ,
3,62	až 3	,70 (1H,	multiplet),
3,81	(1H,	dublet	dubletů,	J =	10,2,	7,3	Hz) ,
7,27	(1H,	široký	singlet)

Příprava 5

4-nitrobenzyl-(IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinyl-thio/-6-/(lR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát

000 mg 4-nitrobenzyl-(IR,5S,6S)-2-difenylfosfonyloxy-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu, připraveného podle zveřejněné japonské patentové přihlášky č. Hei 4-330085 se rozpustí v 10 ml acetonitrilu. Potom se k reakční směsi za chlazení ledem přidá roztok 200 mg (4R)-4-merkapto-2-oxopyrrolidinu (připravený podle přípravy 4) ve 3 ml acetonitrilu a 296 ml diisopropylethylaminu. Výsledná směs se jednu hodinu

-9CZ 280507 B6 míchá při uvedené teplotě a potom se nechá stát přes noc při teplotě 4 °C. Krystalická sloučenina, která se z reakční směsi vysráží v průběhu uvedené doby se oddělí filtrací a potom se suší, čímž se získá 672 mg výsledného produktu s teplotou tání 219 až 221 °C.

NMR-spektrum (270 MHz, hexadeuterovaný dimethylsulfoxid), δ ppm:

1,16	(3H,	dublet, J =6,3	Hz) ,
1,17	(3H,	dublet, J =7,3	Hz) ,
2,13	(1H,	dublet dubletů,	J = 17,1	a	4,4	HZ) ,
2,79	(1H,	dublet dubletů,	J = 17,1	a	7,8	HZ) ,
3,10	(1H,	dublet dubletů,	J = 10,8	a	3,4	HZ) ,
3,16	až 3	,35 (1H, multiplet),
3,40	až 3	,51 (1H, multiplet),
3,70	(1H,	dublet dubletů,	J = 10,7	a	7,3	HZ) ,
3,95	až 4	,12 (2H, multiplet),
4,25	(1H,	dublet dubletů,	J = 9,3 .	a	2,5	Hz) ,
5,07	(1H,	dublet, J = 5,4	Hz) ,
5,30	, 5,4	6 (2H, AB, J = 14	1,2 Hz) ,
7,71	(2H,	dublet, J =8,8	Hz) ,
8,23	(2H,	dublet, J =8,8	Hz) .

Příprava 6 (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-5-/(IR)-1-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát sodný

390 mg sloučeniny, získané podle shora uvedené přípravy 5 se rozpustí ve směsi 19 ml tetrahydrofuranu a 18 ml 0,1M vodného roztoku fosfátového pufru. Potom se k reakční směsi přidá 300 mg katalyzátoru, a to paladia na aktivním uhlí s obsahem paladia 10 % hmot. Potom se reakční směs energicky míchá 2,5 hodiny ve vodíkové atmosféře. Na konci uvedené doby se katalyzátor z reakční směsi odstraní odfiltrováním a filtrát se dvakrát promyje diethyletherem. Potom se vodná vrstva odpaří za sníženého tlaku a výsledný odparek se podrobí chromatografii při použití 50 ml prostředku MCI GEL CHP-20P s průměrem částic 75 až 150 mikrometrů (Mitsubishi Kasei Corporation) v rovnovážném stavu ve vodě, jako eluční činidlo se užije voda. Frakce, obsahující výsledný produkt se odpaří za sníženého tlaku a odparek se lyofilizuje, čímž se získá 225 mg výsledného produktu ve formě bezbarvého prášku.

NMR-spektrum (270 MHz, deuterovaná voda) δ ppm:

1,02

1,10

2,22

2,77

3,08

3,25

3,68

3,84

4,00 (3H, dublet, J = 7,3 Hz), (3H, dublet, J = 6,6 Hz), (1H, dublet dubletů, J= (1H, dublet dubletů, J= až 3,25 (2H, multiplet), (1H, dublet dubletů, J= (1H, dublet dubletů, J= až 3,96 (1H, multiplet), až 4,12 (2H, multiplet).

17,6 a 4,4 Hz),

17,6 a 8,4 Hz),

5,9 a 2,6 Hz),

11,4 a 6,4 Hz),

-10CZ 280507 B6

Claims

1. Pivaloyloxymethyl (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát vzorce I,

COOCH₂COOC(CH₃)₃ (I) v krystalické formě, s teplotou tání 189 ’C, as hlavními odstupy mezi jednotlivými rovinami 18,41, 9,21, 6,24, 5,28, 5,04 a 4,72 χ 10^-8 cm při stanovení difrakcí rtg-paprsků práškovou metodou s použitím paprsků K_alfa z měděné katody, lambda = 1,54 χ 10^-8 cm.

2. Farmaceutický prostředek s antibiotickým účinkem, obsahující antibiotikum ve směsi s farmaceutickým nosičem nebo ředidlem, vyznačující se tím, že jako antibiotikum obsahuje pivaloyloxymethyl (lR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylát vzorce I v krystalické formě.

3. Použití pivaloyloxymethyl (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu vzorce I podle nároku 1, v krystalické formě pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo profylaxi bakteriálních infekcí u savců.

4. Způsob výroby krystalické formy pivaloyloxymethyl (1R,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(IR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu vzorce I podle nároku 1

COOCH₂COOC(CH₃)₃ vyznačující se tím, že se (I)

-11CZ 280507 B6

i) uvede do reakce pivaloyloxymethyljodid se sodnou solí kyseliny (IR,5S,6S)-2-/(4R)-2-oxo-4-pyrrolidinylthio/-6-/(lR)-l-hydroxyethyl/-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylové s následným zředěním směsi ethylacetátem a koncentrací za vzniku odparku, potom se iia) získaný odparek rozpustí v silném rozpouštědle s následným přidáním slabšího rozpouštědla nebo látky, v níž se materiál nerozpouští nebo se iib) získaný odparek rozpustí ve směsi rozpouštědel nebo ve směsi silnějšího a slabšího rozpouštědla a iii) rozpouštědlo se nechá odpařit nebo se odpařuje alespoň zčásti za sníženého tlaku za vzniku požadovaných krystalků.