CZ20594A3 - Peptides with organo-protective activity and pharmaceutical preparations in which they are comprised - Google Patents
Peptides with organo-protective activity and pharmaceutical preparations in which they are comprised Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20594A3 CZ20594A3 CZ94205A CZ20594A CZ20594A3 CZ 20594 A3 CZ20594 A3 CZ 20594A3 CZ 94205 A CZ94205 A CZ 94205A CZ 20594 A CZ20594 A CZ 20594A CZ 20594 A3 CZ20594 A3 CZ 20594A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- pro
- leu
- gly
- peptide
- chain
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká nových peptidu s vysokou biologickou účinností téhož typu jako v případě známé sloučeniny BPC, avšak s kratším řetězcem aminokyselin a farmaceutických prostředků s obsahem těchto látek.
Dosavadní stav techniky
Biologicky účinná bílkovina s organoprotektivním účinkem, izolovaná z lidského nebo živočišného organismu a označená BPC (Body Protecting Compound) byla popsána v EP č.
432 400 a také v P. Sikiric a další, Exp. Clin. Gastroenterol., _1, 15-26, 1991. Tato sloučenina má velmi široké spektrum biologické účinnosti, chrání například proti vředové chorobě, má hepato prbtektivní, protivirový, antiedematosní účinek, sloučenina je obecně protizánětlivá, chrání proti vzniku zhoubných nádorů apod. Její molekulová hmotnost je vysoká, 40 000 ± 5 000, struktura je jen částečně stanovena. Bílkovinu je možno použít k léčení svrchu uvedených onemocnění, dále u poruch nervového systému, poruch dopaminergní etiologie, při chirurgických a stomatologických zákrocích, u poruch fertility a ve veterinárním lékařství. Toto široké spektrum účinnosti však může být důsledkem nedostatečně stanovené chemické struktury této látky nebo dokonce důsledkem nedostatečné čistoty nebo nedostatečné homogenity sloučeniny BPC po její izolaci.
Nyní bylo zjištěno, že některé synthetické peptidy, obsahující pouze 8 až 15 zbytků aminokyselin, s molekulovou hmotností 900 až 1600 mají biologickou účinnost BPC, avšak při zvýšené selektivitě.
Uvedené nové peptidy je možno získat daleko hospodárnějším způsobem. Tyto látky také vyvolávají daleko menší počet vedlejších reakcí vzhledem k tomu, že obsahují menší počet zbytků aminokyselin než BPC.
Podstata 'vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří nová skupina synthetických peptidů s překvapivě vysokou biologickou účinností, zvláště ve smyslu protektivního účinku na organismus. Tyto synthetické látky s velmi dobře definovanou strukturou jsou velmi výhodné ve srovnání s jen částečně definovanou vysokomolekulární bílkovinou BPC, kterou je možno získat jen vemi obtížným postupem z pochybných přírodních zdrojů.
Podstatu vynálezu tedy tvoří peptidy s organoprotektivním účinkem, obsahující 8 až 15 zbytků aminokyselin s následujícím strukturním vzorcem
Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa XYaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 kde
Xaa znamená zbytek neutrální alifatické aminokyseliny jako
Ala, bAla, LEu, Ile, Gly, VA1, Nle, Nva,
Yaa znamená zbytek bazické aminokyseliny, jako LYs, Arg,
Orn, His,
Zaa znamená zbytek kyselé aminokyseliny, jako Glu, Asp,
Aad nebo Apm, přičemž alespoň jeden ze zbytků Xaa nebo Zaa může být vynechán
Aminokyseliny jsou označeny běžnými třípismenovými kódy, pod zbytkem je vyznačena jeho poloha v řetězci peptidu.
Výhodné jsou zejména následující peptidy:
Peptid s řetězcem č. 1:
Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 10 15
Peptid s řetězcem č. 2:
Gly Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 10 15
Peptid s řetězcem č. 3:
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gyl Val 15 10 15
Podle dalšího provedení se vynález týká také analogických peptidů, zakončených na C-zakonČení amidovou nebo karboxylovou skupinou, svrchu uvedeného obecného vzorce, v němž alespoň jedna a nejvýš 7 zbytků aminokyselin v oblasti 1 až 15 je vynecháno a alespoň jeden ze zbývajících zbytků aminokyselin je substituován zbytky z následující tabulky I:
Tabulka I
Zbytek_Substituce
Xaa neutrální alifatická aminokyselina: Ala, bAla,
Leu, Ile, Gly, Val, Nle, Nva
Yaa basická aminokyselina: Lys, Arg, Orn, ríis
Zaa kyselá aminokyselina: Glu, Asp, Asd, Apm
Dále budou uvedeny některé výhodné peptidy z této skupiy:
Peptid s řetězcem č. 4:
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val 15 10 14
Peptid s řetězcem č. 5:
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ale Gly Leu Val 15 10 14
Peptid s řetězcem č. 6:
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala 1 5 8
Peptid s řetězcem č. 7:
Asp Pro Pro Pro Ile Arg Pro Ala Asp 1 5 9
Peptid s řetězcem Č, 8:
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp 15 9
Podle dalšího provedení vynálezu je možno peptidy se svrchu uvedeným strukturním vzorcem, v nichž alespoň jeden zbytek aminokyseliny je vynechán a zbývající zbytky aminokyselin mohou být nahrazeny podle tabulky I převést na cyklickou formu tvorbou nové skupiny CO-NH mezi prvním a posledním zbytkem aminokyseliny v molekule. Z těchto peptidů jsou výhodné následující sloučeniny:
Peptid s řetězcem č. 9:
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val 25 10 13
Peptid s řetězcem č. 10:
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp 2 5 9
Bylo prokázáno, Že svrchu popsané peptidy mají biologickou účinnost, která je srovnatelná nebo vyšší než biologická účinnost bílkoviny BPC.
Byly také provedeny farmaceutické zkoušky při použití uvedených peptidů na běžných modelech in vitro a in vivo a byly zjištěny následující farmakologické vlastnosti:
1. Žaludeční vřed, vyvolaný stresem z imobilizace
V pokuse byli použiti krysí samci kmene Wistar s hmotností 180 až 200 g. Všechna zvířata byla imobilizována břichem vzhůru na 48 hodin při teplotě místností. Bezprostředně poté byla zvířata usmrcena a poškození bylo změřeno. Byly použity peptidy s řetězci č. 4, 6 a 2 v dávce 10 ^ug nebo 10 ng/kg b.w., i.p. nebo i.g. jednu hodinu před začátkem pokusu .
Všechna podání i.g. i i.p. měla ochranný účinek, i tak nízké dávky jako 10 ng/kg b.w. poskytovaly dobrou ochranu proti poškození.
2. Cystaminový model vředu
Pro pokus byly užity bílé krysí samice kmene Wistar s hmotností 180 až 200 g. Zvířatům byl podán podkožně nebo b.w. v dávce 400 mg/kg cystaminhydrochlorid, rozpuštěný v destilované vodě. PO 24 hodinách byla zvířata usmrcena. Peptid s řetězcem č.4 byl podán v dávkách 1,0 ^ug, 100 ng a 50 ng/kg b.w., i.p. a i.g. Bylo mošno pozorovat významný ochranný účinek, závislý na velikosti dávky. Bylo možno pozorovat stejnou účinnost pro intraperitoneální í intragastrické podání účinné látky.
3. Bukální edém, vyvolaný terpentinem
K pokusu byly užity krysy kmene Wistar s hmotností 180 až 240 g, vždy 10 krys ve skupině. Terpentin byl podán do sliznice v dávce 0,02 ml/krysa. Kontrola: 0,02 ml 0,9% roztoku chloridu sodného ve vodě do sliznice, 2krát. Peptidy s řetězci 2 a 4 byly podány v dávkách 10 ^ug a 10 ng/kg i.p. a i.g. jednu hodinu před podáním terpentinu. Bukální edém byl měřen 24 hodin po podání dráždící látky. Statistická analýza byla provedena Mann-Whitneyovým testem. Sledované peptidy byly účinné v dávkách 10 ^ug(kg b.w.
-Ϊ
T · C-iii f η τ' lz· 1
J 4. > i
ÚČ'ir'ůL' n 3 lir, Ťní řp>7V
K pokusu byli použiti samci bílých krys kmene Wistar, krys s hmotností 200 až 250 g pro každý pokus. Krysy s kožními ranami byly chovány jednotlivě v oddělených klecích. Zvířata byla uvedena do lehké éterové narkózy a pak byly na kůži zad provedeny dva řezy o délce 3 cm vždy 1,5 cm od střed ní čáry. Jedna z nich byla uzavřena dvěma chirurgickými svorkami a druhá ponechána bez ošetření. Bazprostředně po provedení obou řezů byl intradermálně mezi oba řezy aplikován pep7 tid s řetězcem Č. 4 ve fysiologickém roztoku chloridu sodného v dávce 1,0 ^ug a 1,0 ng/kg b.w. nebo v případě kontrol 0,5 ml/kg fysiologického roztoku/kg.
V případě obou ran, jak po uzavření svorkami, tak bez ošetření, bylo možno pozorovat velmi dobrý hojivý účinek. Po 5 dnech bylo možno pozorovat u ošetřené skupiny mansí množství zánětlivých buněk a podstatně lépe vyvinutá retikulinová vlákna než u kontrol.
5. Účinek na pokusné spáleniny
Pro tento pokus byli použiti bílí samci kmene Wistar, v každé skupině bylo užito 10 krysích samců s hmotností 200 až 250 g. V lehké éterové narkóze byla nosní sliznice uvede na do styku na 5 sekund s kauterem. Peptid s řetězcem Č. 4 byl podán v dávce 10 ^ug/kg i.p. jednu hodinu před vyvoláním poškození. Kontrolám bylo podáno 5,0 ml/kg fysiologického roztoku i.p. Zákrok obvykle vyvolal velký otok nozder a byl obvykle smrtelný u kontrolních (avšak nikoliv u ošetřených) zvířat do devátého dne po provedení zákroku. Na rozdíl od kontrol bylo možno u ošetřených zvířat pozorovat jen velmi mírný posttraumatický otok nozder. V důsledku toho bylo nromální nosní dýchání jen málo ovlivněno a krysy proto zákrok přežily.
6. Vliv na hojení zlomenin
K pokusu byli užiti bílí krysí samci kmene Wistar s hmotností 270 až 300 g. V éterové narkóze byla rukou zlomena ve střední části levá holenní kost. Nebylo použito žádné znehybnění a zvířata se mohla volně pohybovat po kleci. Zvířata byla usmrcena 5., 8., 12. nebo 30, dne po zlomení holenní kosti.
Peptid s řetězcem č. 4 byl podán v dávce 10 ^ug/kg i.p. 1 hodinu před zlomeninou a pak jednou denně (poslední podání 24 hodin před usmrcením). Kontrolní skupině bylo podáno současně stejné objemové množství 0,9% vodného roztoku chloridu sodného, 5,0 ml/kg i.p.). V každém ze zkoumaných časových intervalů bylo možno pozorovat u všech zvířat, jimž byl podán peptid prokazatelně rachlejší hojení. U všech těchto zvířat se také vyvinul podstatně menší posttraumatický hematom než u kontrolních zvířat a také funkce se navrátila rychleji.
7. Protivirový účinek
Protivirový účinek byl sledován na novorozených myších kmene Balb-C ve stáří 24 hodin, obojího pohlaví.
Byly připraveny suspenze virů, a to: ARBO-viry TBE (Tick Borne Encephalitis), Bhania, Dengue 1, 2, 3, 4, Sinbis, West-Nile, Calovo, Hepatitis A, LCM (Lymphatic choriomeningitis) a Herpes Typ I v ředění 10 a v množství 0,02 ml/myš byly podány i.c. nebo p.o. (Hepatitis A). Vzhledem k rozdílům ve virulenci byly dávky upraveny tak, že byly srovnatelné vzhledem k v 0,02 ml i.c. (nebo p.o. v případě Hepatitis A) v ředění 1Q~2. Tímto způsobem bylo možno srovnávat průběh různých virových infekcí bez ohledu na možné naočkování různých koncentrací virů.
Peptid s řetězcem č. 4 byl užit v koncentraci 20,0 ^ug v 1 ml v 0,9% vodném roztoku chloridu sodného a byl podán pouze jednou v dávce 2,0 ^ug/kg i.c. nebo i.p.:
a) 2 hodiny před podáním viru (-2 ),
b) současně s infekcí (0).
Kontroly: tentýž objem fysiologického roztoku chloridu sodného i.c. nebo i.p.. Výsledky jsou shrnuty v tabulce II. Čísla udávají počet dnů, po nichž infikované myši uhynuly.
Tabulka II
Virus Způsob ošetření zvířat
Fysiologický roztok Synthetický fragment 4
-2hX 0* -2hx 0X
i.p. | i .c. | i.p. | i . c. | i.p. | i. c. | i.p. | i. c | ||
TBE | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Bhania | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Dengue 1 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Dengue 2 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Dengue 3 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Dengue 4 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Sinbis | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
WestNile | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
Calovo | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 15 | 15 |
Hepatitis | A+ | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
LCM | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 | |
Herpes typ žádný | 1 | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
(zdravá zvířata) | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n. d |
n.d. = nebylo stanoveno: zvířata byla pozorována po dobu dnů po aplikaci viru, nedošlo k žádnému uhynutí.
a = ARBO-viry + = perorální aplikace viru x = zvířata byla ošetřena 2 hodiny před aplikací viru (-2h) nebo současně s aplikací viru (0)
P < 0,01, užito bylo 8 myší na jednu skupinu.
8. Antidepresivní účinnost
Aby bylo možno stanovit antidepresivní účinnost, byl použit test s nuceným plaváním podle publikace Porsolt a další, Eur. J. Pharmacol., 47, 379-391, 1978.
K pokusu byli užiti krysí samci kmene Wistar s hmotností 180-240 g. Sledovaný peptid s řetězcem č. 4 byl podán první den po předběžné zkoušce a druhý den jednu hodinu před pokusem i.p.
Kontrolní skupina: fysiologický roztok chloridu sodného i.p.
Zvířata byla pozorována 5 minut. Pak byla měřena doba nehybnosti (.
Ί\ pro kontrolní skupinu byla přibližně 150 sekund, u skupiny, jíž byl podáván peptid byla pouze 50-70 sekund. Tento účinek trval velmi dlouho, po 16 dnech jej ještě bylo možno prokázat.
Závislost účinku na dávce:
yUg až 10 ng/kg: plný účinek pg/kg: stále ještě prokazatelný účinek 1 pg/kg: účinek mizí.
9. Účinek na modelu Parkinsonovy choroby
K tomuto sledování byly užity známé modely Parkinsonovy choroby (Karakola a další, Pharmacol. Toxicol., 67, 95-100, 1990), reserpinový model a model MPTP.
K pokusu byly užiti myší samci NMRI-Hannover (pro model MPTP) nebo myši obojího pohlaví (pro reserpinový model).
a) MPTP byl podán v dávce mg/kg i.p. jednou denně po šest po sobě následujících dnů a pak po další 4 po sobě následující dny ve vyšší dávce 50 mg/kg. Sledovaný peptid s řetězcem č. 4 byl podán v dávce 1,5 ^ug a 15,0 ng/kg i.p.
minut před každým podáním MPTP nebo 15 minut po nem.
b) Reseprin byl podáván v dávce 5 mg/kg i.p.. Zkoumaný peptid byl podán v dávce 10 ^ug nebo 10 ng/kg i.p. 15 minut před podáním reserpinu nebo 24 hodin po jeho podání v téže dávce.
Kontroly: stejný objem fysiologického roztoku chloridu sodného, 5 ml/kg i.p.
Po předběžném podání peptidu bylo mošno pozorovat podstatné snížení hypokinesie, rigidity (katalepsie) a třesu.
U modelu MPTP došlo po předběžném podání peptidu k daleko menšímu vývoji katalepsie, snížena byla také akinesie a vznik třesu.
V případě, že byl peptid podán 15 minut po podání MPTP, došlo k zábraně dalšího vývoje katalepsie po MPTP a výrazně byla snížena také katalepsie a třes. Obvyklá vysoká mortalita (50 %) pozorovaná po jediném podání MPTP byla snížena jak u zvířat, jimž byl peptid podán předběžně, tak u zvířat, jimž byl podán po podání MPTP.
10. Vliv peptidu na haemorrhagický šok
Ke všem pokusům byly užity krysí samice bílého kmene Wistar s hmotností 150 až 180 g.
Účinek na haemorrhagický Šok byl sledován ve dvou sériích pokusů.
a) Zvířatům byla odebrána krev (1 ml v prvních třech minutách, pak v průběhu 2 minut zbytek) až do uhynutí. Pak byl stanoven objem krve do uhynutí v případě, že byl podán 15 minut před odběrem krve peptid s řetězcem č. 4 v dávce 10,0 /Ug nebo 10 ng/kg i.p. nebo fysiologický roztok chloridu sodného v množství 5,0 ml/kg i.p.. Po podání peptidu s řetězcem č. 4 bylo zpotřebí k uhynutí zvířete odebrat daleko větší objem krve než v případě kontrol, zejména při použití vyšší dávky peptidu.
b) Krevní tlak byl snížen odebráním řízeného množství krve a pak byl udržován po dobu 5 minut na hodnotě 30-35 mm HgPak byl nitroŽilně podán peptid s řetězcem č. 4 v dávce 10,0 /Ug nebo 10,0 ng/kg nebo 3,0 ml fysiologixkého roztoku chloridu sodného i.v. Na rozdíl od kontrol došlo po podání peptidu k podstatnému zvýšení krevního tlaku, který pak byl udržován, takže nedošlo k uhynutí zvířete.
Z uvedených pokusů tedy vyplývá, že sledovaný peptid je velmi účinný při zlepšení celkových příznaků v důsledku velké ztráty objemu krve.
11. Vliv na letální ozáření
K pokusům byly užity myši kmene NMRI-Hannover ve stáří 5 až 6 týdnů, obojího pohlaví. Synthetický peptid s řetězcem č. 4 byl podán v dávce 20 ^ug/kg i.p. jednu hodinu před nebo po ozáření. Kontrolním zvířatům byl současně podán stejný objem, 5,0 ml/kg fysiologického roztoku chloridu sodného i.p. Zdravými kontrolami byla zvířata, která nebyla ozářena a rovněž jim nebyl podán ani peptid ani fysiologický roztok.
Ozáření: Tetron 80 (Co 60, 2200 Ci). Neanestetizované myši v klecích, 16 myší ve skupině byly vystaveny záření na celém povrchu, užita byla supralethální dávka 9 Gy na ploše 20x20 cm ze vzdálenosti 80 cm.
Uhynutí zvířat bylo odečítáno dvakrát denně po dobu 30 dnů.
Všechna kontrolní zvířata uhynula v časovém rozmezí až 12 dnů (LD
100/12
).
U zdravých neozářených zvířat nebylo v průběhu této doby mošno pozorovat žádné uhynutí.
Ve srovnání s kontrolními skupinami nebylo možno pozorovat žádný rozdíl ve skupině, jíž byl podán peptid 1 hodinu po ozáření. Avšak ve skupině, jíž byl peptid podán 1 hodinu před ozářením bylo možno pozorovat podstatné prodloužení doby přežití a 70% zvýšení ve srovnání s kontrolami.
12. Účinek na vyvolané malformace
Pro všechny tyto pokusy byly užity myší samice kmene NMRI-Hannover ve stáří dvou měsíců s průměrnou hmotností 25 g bez předchozí kopulace. Pak byla u myších samic v estru uskutečněna kopulace přes noc při použití zkušených zdravých samců. Po 20 dnech březosti byly myši usmrceny.
Vitamin A byl podán v dávce 15 700 ječnotek/kg i.m. desátého dne březosti v dávce 0,05 ml/kg). Současně byl podán peptid s řetězcem č. 4 v dávce 10 ^ug nebo 10 ng/kg i.p.
Kontrolním zvířatům byl podán fysiologický roztok chloridu sodného, 5,0 ml/kg i.p.
Jako zdravé kontroly byla použita zvířata, kterým nebyl podán vitamin A, avšak byl jim podán v téže době i.p. fysiologický roztok chloridu sodného nebo roztok peptidu 4 v téže dávce.
Ve skupině zdravých zvířat (fysiologický roztok) ani ve skupině zvířat, jimž byl podáván peptid nebylo mošno pozorovat Žádné malformace.
Výsledky, které jsou shrnuty v následující tabulce III prokazují překvapivě vysoký a na velikosti dávky závislý ochranný účinek peptidu proti malformacím, vyvolaným podáváním vitaminu A.
Tabulka III - makroskopické pozorování
Ošetření | Celkový počet plodů | Celkový počet mal· formovaných plodů |
Kontroly (fys. roztok) | 55 | 0 |
Vitamin A | 54 | 36 |
Vitamin A + peptid 4 » — — /1 - | 36 | 13 |
Vitamin A + peptid 4 10 /Ug/kg | 18 | 1 |
13. Akutní toxicita
Akutní toxicita synthetických peptidů byla stanovena u myších samic s hmotností přibližně 20 g. Pro každý pokus i kontrolu bylo užito 6 zvířat.
Peptidy s řetězci 2, 3, 4 a 6 byly podány v dávkách 8, 25 a 50 mg/kg i.v. Kontrolní skupině bylo podáno 5,0 ml/kg 0,9% vodného roztoku chloridu sodného. Pak byla zvířata následujících 15 dnů pozorována na příznaky toxicity.
V použitých dávkách peptidů nebylo možno pozorovat žádné známky toxicity a žádné uhynutí. Bylo však možno pozorovat zajímavý jev významně zvýšené motility a živosti zvířat po dobu 2 hodin po podání peptidů.
Podle výsledků farmakologických zkoušek je možno uzavřít, že peptidy poskytují organismu ochranu proti stresům a chorobám a obecně normalizují funkce organismu.
Peptidy by tedy měly být účinné při prevenci a léčení řady onemocnění a poruch u lidí i u zvířat. Zejména jde o následující typy poruch:
- poruchy a onemocnění vyvolaná stresem,
- gastrointestinální vředy různého původu,
- záněty a otoky různého původu,
- poranění, spáleniny, zlomeniny kostí a obecně chirurgické choroby a zákroky,
- virové infekce,
- šok,
- Parkinsonova nemoc,
- ochrana proti poškození a záření a
- ochrana proti vzniku malformací.
Obecně je možno uvedené peptidy použít u široké škály farmaceutických prostředků v kombinaci s netoxickým farmaceutickým nosičem nebo nosným prostředímm, plnivem, netoxickým pufrem, nebo spolu s fysiologickým roztokem chloridu sod ného. Farmaceutické prostředky s obsahem uvedených peptidů je možno použít místně nebo systemicky v kapalné formě, pevné formě, polotuhé formě, ve formě injekčního roztoku, table ty, mazání, lotionu, kapsle, tablety, určené k rozpuštění pod jazykem a podobně.
-5 ~ -2
Peptidy budou obecne podávaný v dávce 10 az 10 mg/kg hmotnosti v případě systemického podání. Při místním podání bude koncentrace vyšší, například 0,1 až 0,5%.
Velmi příznivá je nepřítomnost jakýchkoliv známek toxicity až do dávek 50 mg/kg hmotnosti a také dobrá účinnost uvedených látek při perorálním podání (intragastricky).
Popsané peptidy je možno synthetizovat při použití postupné kondenzace chráněných aminokyselin v homogenním kapalném systému nebo s výhodou postupem s použitím pevné fáze. Pro přípravu cyklických peptidů se připraví částečně chráněné lineární peptidy s požadovanou délkou řetězce, například ve formě alkylesterů na C-terminálním konci s následným převedením na azid, navázáním a odstraněním ochranných skupin. Ja také možno cyklizovat částečně chráněný lineární peptid s volnými terminálními skupinami působením difenylfosforylazidu ve velmi zředěném roztoku.
Vynález bude nyní popsán ve svém praktickém provedení v následujících příkladech, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Syntéza peptidu s použitím ochranné skupiny Boc
Při syntéze paptidu bylo jako výchozí materiál užito 100 mg Boc-Val-PAM ( PAM byl získán od Applied Biosystems, substituce 0,56 meq/g, jde o derivát kyseliny aminoacyl-4(oxymethyl)-fenyloctové a aminopolystyrenu). Boc-aminokyseliny (Boc = terč.butoxykarbony1) byly jedna po druhé kondenzovány na polymerní nosič při použití diisopropylkarbodiimidu (DIPC) jako kondenzačního činidla. V každém stupni byla skupina Boc odstraněna působením 50% roztoku kyseliny trifluoroctové (TFA) v dichlormethanu. Aminoskupina pak byla podrobena deprotonaci působením diisopropylethylaminu.
Přeměna by měla být v každém stupni vyšší než 99,5 %.
V případě, že se to nepodaří, kondenzace se opakuje. Po ukončení syntézy se výsledný produkt odštěpí působením zředěné kyseliny fluorovodíkové (2 hodiny při 0 °C. Jako látka, která váže vznikající ionty se užije anisol. HF se odpaří v proudu dusíku. Surový peptid se izoluje vlitím olejovitého zbytku do bezvodého etheru.
Surový peptid se čistí vysokotlakou kapalinovou ohroma tografií HPLC v reversní fázi při použití sloupce s rozměrem 5 x 150 mm s náolní silikagelu RP-18, eluce se provádí při použití 0,1% TFA ve směsi vody a acetonitrilu. Detekce: UV absorpce při 225 nm.
Syntéza peptidu s řetězcem č. 4 je po jednotlivých stupních znázorněna na obr. 1.
Příklad 2
Syntéza peptidů při použití Fmoc
Při syntéze byly použity standardní aminokyseliny s ochrannou skupinou Fmoc (Fmoc = 9-fluorenylmethyloxykarbonyl). Skupiny na postranním řetězci byly chráněny jako 0terc.butylestery (Asp, Apm, Glu, Aad) a jako deriváty Boc (Lys). První aminokyselina (Val) byla navázána na polymer ní nosič- pryskyřici BHA (BHA = benzhydrylaminopryskyřice) při použití diisopropylkarbodiimidu jako vazného činidla.
V každém ze stupňů byla ochranná skupina Fmoc odstraněna působením piperidinu. Pak byly stejným způsobem navázány a minokyseliny jedná po druhé až do ukončení syntézy. Odštěpení bylo uskutečněno při použití směsi TFA/TFMSA/anisol v objemovém poměru 2 : 17 : 52.
Peptid byl pak čištěn při použití HPLC tak, jak bylo popsáno v příkladu 1.
Syntéza peptidu s řetězcem č. 2 je znázorněna podrob nejí na obr. 2.
Příklad 3
Syntéza peptidu při použiti Bdz
Všechny použité aminokyseliny byly v tomto případě chráněny na aminoskupine v poloze alfa s použitím skupiny Ddz (Ddz = alfa, alfa-dimethyl-3,5-dímethoxybenzyloxykarbonyl). Funkce na postranním řetězci byly chráněny skupinou Z )Z = benzyloxykarbonyl·) v,případě lysinu a skupinou O-terc.-Bu (terč.butylester) v případě kyseliny asparagové a kyseliny glutamové.
Merrifieldův nosič {zesítěný chlormethylovaný polysty renový gel) s kapacitou 1,4 mmol/g byl užit pro vazbu první Ddz-amínokyseliny pres česnou sůl. Po kondenzaci s dicyklohexylkarbodiimičem DCC byla v každém stupni odstraněna ochranná skupina Ddz působením 5% roztoku TFA v dichlormethanu a pak byl materiál promyt a následovala deprotonace působením 10% triethylaminu v dichlormethanu. Po deprotonaci byl uskutečněn následující vazný stupeň stejným způsobem. Tyto stupně byly opakovány až do dokončení požadovaného peptidového řetězce.
Nakonec byl peptid odštěpen od polymerního nosiče při použití směsi HBr/TFA/anisol. Po odpaření těkavého podílu byl odštěpený peptid vysrážen z bezvodého éteru a sušen.
Pak byl surový peptid čištěn pomocí HPLC stejným způsobem jako v příkladu 1. Syntéza peptidů s řetězcem č. 6 je podrobněji znázorněna na obr. 3.
Příklad 4
Syntéza cyklického peptidů
Způsobem podle příkladu 1 nebo 2 byl předem připraven peptid v částečně chráněné formě, vzorce
OBzl
N02 OBzl
Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Arg-Pro-Ala-Asp-OH
0,0005-molární roztok tohoto peptidů v čimethylformamidu byl použit k cyklizaci přidáním difenylfosforylazidu a triethylaminu při teplotě 12 °C po dobu 12 hodin.
Pak byla směs hydrogenována vodíkem v přítomnosti pal dia na aktivním uhlí 8 hodin při teplotě 25 °C.
Rozpouštědlo bylo opatrně odpařeno a surový produkt byl čištěn při použití HPLC způsobem podle příkladu 1.
Tímto způsobem byl ve výtěžku 10 % získán cyklický peptid s řetězcem č. 10:
10
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp
Příklad 5
Syntéza lineárních a cyklických peptidů při použití Ddz
Tentýž postup jako s použitím skupiny Ddz svrchu byl použit u lineárních i cyklických peptidů. Funkce na postranním řetězci byly chráněny skupinou Z (lysin) nebo 0-benzylesterovou skupinou (kyselina glutamová a kyselina asparagová) p
Jako polymerní nosič byl použit HYCRAM (ORPEGEN, Heidleberg, SRN), jde o 4-bromkrotonyl-beta-alanylamidomethylpolystyrenovou pryskyřici. První aminokyselina (Ddz-valin) byla navázána na polymerní nosič jako česná sůl.
Pak byla skupina Ddz odstraněna při použiti kyseliny trífluoroctové (5%) v díchlormethanu a aminoskupina byla podrobena deprotonaci působením diisopropylethylaminu.
V následujícím stupni byl na zbytek valinu na polymerní matrici navázán Ddz-glycin při použití diisopropylkarbodiimidu DIPC v přítomnosti 1-hydroxybenzotriazolu.
Tyto stupně byly opakovány tak dlouho, až byl dokončen peptidový řetězec. Synthetizovaný peptid v chráněné formě
R Λ pak byl opatrně odštěpen z nosiče HYCRAM působením tetrakis-(trifenylfosfin)paladia (0), rozpuštěného v bezvodém tetrahydrofuranu v nepřítomnosti kyslíku. Jako akceptorová molekula pro allylové skupiny byl užit například morfolin.
Pck byl polymerní nosič odfiltrován a promyt tetrahyd rofuranem. Roztok peptidu pak byl zfiltrován přes krátký sloupec silikagelu k odstranění katalyzátoru (paladíum).
. Eluát, který obsahoval částečně chráněný peptid 4a byl vysušen a rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu, v němž byl produkt dosuŠen.
Syntéza lineráního peptidu s řetězcem č. 4
Částečně chráněný peptid 4a byl rozpuštěn ve 2,2,2trifluorethanolu a hydrogenován v přítomnosti 10% paladia na aktivním uhlí působením plynného vodíku při teplotě 30 °C. Pak byl katalyzátor odfiltrován a rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu. Surový odparek pak byl čištěn při použití HPLC obdobným způsobem jako v příkladu 1. Po čištění byl získán peptid s řetězcem č.4. Tento produkt byl totožný s produktem, získaným podle příkladu 1.
Syntéza cyklického peptidu s řetězcem č. 9
Částečně chráněný peptid č. 4a byl rozpuštěn ve směsi óimethylformamidu a dichlormethanu v poměru 1:1, čímž vznikl 0,001-molární roztok. K dosažení cyklizace byl přidán DIPC a HOBt a směs byla ponechána 10 hodin při teplotě 20 °C. Pak byl roztok odpařen na malý objem, zředěn 2,2,2trifluorethanolem a čištěn průchodem sloupcem s náplní Sephadexu LH-20. Frakce s obsahem částečně chráněného cyklického peptidu 9a byly odděleny a hydrogenovány v přítomnos22 ti 10% paladia na aktivním uhlí jako katalyzátoru při teplotě 30 °C za probublávání vodíkem a intensivního protřepávání clkem 8 hodin.
Pak byl katalyzátor odfiltrován a roztok byl vysušen a rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu. Surový peptid byl pak čištěn pomocí HPLC způsobem podle příkladu 1. Získaný čistý cyklický peptid měl řetězec č. 9.
. Syntéze na polymerním nosiči HYCRAM při použití Dóz a cyklizace je podrobněji znázorněna na obr. 4 a 5. Všechny synthetizované peptidy byly kontrolovány na čistotu pomocí HPLC při použití sloupce silikagelu RP-18 (oktadecylsilanizovaný sloupec), eluce se provádí směsí vody, acetonitrilu a kyseliny trifluoroctové při použití gradientu obvyklým způsobem. Ve všech případech byla čistota vyšší než 95 %.
Peptidy byly charakterizovány analýzou aminokyselin (hodnoty byly v rozsahu 10 % teoretického množství), analýzou řetězce, molekulovou hmotností, stanovenou pomocí hmotové FAB spektrometrie a také pomocí UV a IR-spekter, výsledky jsou znázorněny na obr. 6 a 7.
Vynález byl osvětlen na ’ - i· ·. -·- _ -Ί ~ 4 _ ' - _ 1
UCIliUIl, JC V £>Clí\ Í.C UJ du dalších modifikací a změn, rozsahu vynálezu.
několika specifických proveU..1 Λ A 4 ň O K O
UJ ±V 11ΙΌ LiUO uu W L tmv W ς. J ·_ v -w které by rovněž spadaly do
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Peptidy s organoprotektivním účinkem, obsahující 8 až 15 zbytků aminokyselin, obecného vzorceXaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 kdeXaa znamená zbytek neutrální alifatické aminokyseliny Al bAla, Leu, Ile, Gly, Val, Nle, Nva,Yaa znamená zbytek bazické aminokyseliny Lys, Arg, Orn ne bo His,Zaa znamená 2bytek kyselé aminokyseliny Glu, Asp, Aad nebo Apm, přičemž alespoň jeden ze zbytků Xaa nebo Zaa může být vynechán .
- 2. Peptidy podle nároku 1, v nichž je molekula cyklizována amidovou vazbou mezi prvním a posledním zbytkem aminokyseliny.
- 3. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 1, vzorceLeu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 10 15
- 4. Peptid podle nároku 1, ’s řetězcem č. 2, vzorceGly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu 1 5Val
- 5. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 3, vzorceLeu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 10 15
- 6. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 4, vzorceLeu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val 15 10 14
- 7. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č.5, vzorceGly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala Gly Leu Val 15 10 14
- 8. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 6, vzorceGlu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala 1 5 8
- 9. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 9, vzorceLeu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val I_2 _5_10_13 |
- 10. Peptid podle nároku 1, s řCteTz.cem c. 10, vzorceGly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp 2 5 9
- 11. Peptid podle nároku 1, s řetězcem č. 11, vzorceGlu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asn 1 5
- 12. Farmaceutický prostředek, vyznačuj í c í se t í m, že jako svou účinnou složku obsahuje jeden nebo větší množství peptidů podle nároků 1 až 11 spolu s farmaceuticky přijatelným pevným nebo kapalným nosičem.
- 13-. Použá-tí pept4úů-po<ál-e-nároků 1 -a-a 4-1 -pr-o-léčení onemocnění a poruchy— způsobených st-re&egi,—aáně-tůu,—©Xoků^ úrazů;—spálenin, ví--vodu , ' a-l-ome-ni-n- kost i-,—šoku a-obecně stavů po—chirurgických -zákrocích·, mo-akovýoh poruch ^a- deprese,—Parkinso-novy .choroby,-k-ochraně-proti poškození zářen-ím-e proti- tnal-fopmacÍHH—vy-vo· 1-aným ehemiokým-i látkami-a obecně-jako—látek pro-·ochranu or-ganřgma-Í
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP92109145A EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1992-05-30 | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ20594A3 true CZ20594A3 (en) | 1994-12-15 |
CZ284972B6 CZ284972B6 (cs) | 1999-04-14 |
Family
ID=8209663
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ94205A CZ284972B6 (cs) | 1992-05-30 | 1993-05-28 | Peptidy s organoprotektivním účinkem a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6211151B1 (cs) |
EP (2) | EP0572688B1 (cs) |
JP (1) | JP2783681B2 (cs) |
KR (1) | KR0180256B1 (cs) |
AT (2) | ATE152734T1 (cs) |
AU (1) | AU4319693A (cs) |
BG (1) | BG61477B1 (cs) |
CA (1) | CA2114313C (cs) |
CZ (1) | CZ284972B6 (cs) |
DE (2) | DE69219590T2 (cs) |
DK (2) | DK0572688T3 (cs) |
ES (2) | ES2103854T3 (cs) |
FI (1) | FI120454B (cs) |
GR (2) | GR3024379T3 (cs) |
HK (1) | HK1001004A1 (cs) |
HU (1) | HU224073B1 (cs) |
NO (1) | NO310027B1 (cs) |
PL (1) | PL176208B1 (cs) |
RO (1) | RO112506B1 (cs) |
RU (1) | RU2111214C1 (cs) |
SK (1) | SK278507B6 (cs) |
UA (1) | UA32523C2 (cs) |
WO (1) | WO1993024521A1 (cs) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1997-05-07 | Predrag Dr.Sc. Sikiric | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
CA2127553C (en) * | 1992-11-16 | 2003-01-28 | Predrag Sikiric | Peptides with organo-protective activity, process for their preparation and their use in the therapy |
ES2229507T3 (es) * | 1997-05-23 | 2005-04-16 | Predrag Dr.Sc. Sikiric | Sales de peptidos bpc que tienen una actividad protectora del organismo, procedimiento para su obtencion y su utilizacion en terapia. |
US20030220258A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-11-27 | Robbert Benner | Treatment of ischemic events |
US8680059B2 (en) | 1998-05-20 | 2014-03-25 | Biotempt B.V. | Oligopeptide acetate and formulations thereof |
US6844315B2 (en) | 1998-05-20 | 2005-01-18 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Immunoregulator |
EP1138692A1 (en) | 2000-03-29 | 2001-10-04 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Fragments of human chorionic gonadotropin (hcg) as immunoregulator |
USRE43279E1 (en) | 2000-03-29 | 2012-03-27 | Biotemp B.V. | Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration |
EP1300418A1 (en) * | 2001-10-04 | 2003-04-09 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Gene regulation by oligopeptides |
US7358330B2 (en) | 2001-03-29 | 2008-04-15 | Biotempt B.V. | Immunoregulatory compositions |
US7786084B2 (en) | 2001-12-21 | 2010-08-31 | Biotempt B.V. | Treatment of burns |
US7517529B2 (en) * | 2003-04-08 | 2009-04-14 | Biotempt B.V. | Treatment of type I diabetes |
US20090227505A1 (en) * | 2004-01-07 | 2009-09-10 | Biotempt B.V. | Methods and uses for protein breakdown products |
AU2006266609C1 (en) | 2005-07-05 | 2011-10-27 | Biotempt B.V. | Treatment of tumors |
JP5307559B2 (ja) * | 2006-03-07 | 2013-10-02 | バイオテンプト ビー.ブイ. | 放射線障害の制御の為にペプチドを使用する方法 |
EP1864692A1 (en) * | 2006-06-07 | 2007-12-12 | Biotempt B.V. | Use of peptides for the control of radiation injury |
SG178780A1 (en) * | 2007-02-12 | 2012-03-29 | Biotempt Bv | Treatment of trauma-hemorrhage with short oligopeptides |
SI24318A (sl) | 2013-03-13 | 2014-09-30 | Diagen D.O.O. | Nove stabilne soli pentadekapeptida, postopek za njihovo pripravo, njihova uporaba za izdelavo farmacevtskih pripravkov in njihova uporaba v terapiji |
CN113683663A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-11-23 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种机体保护多肽粗品的纯化方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8717300D0 (en) * | 1987-07-22 | 1987-08-26 | Nat Res Dev | Cyclosporins |
CA1337781C (en) * | 1987-08-21 | 1995-12-19 | Takanori Nakamura | Polypeptide from horseshoe crab exhibiting affinity for lipopolysaccharide and method of preparation |
YU176089A (sh) * | 1989-09-12 | 1992-09-07 | Sikirić, Predrag | Postupak za pripremu supstancije bpc i supstancija bpc |
EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1997-05-07 | Predrag Dr.Sc. Sikiric | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
-
1992
- 1992-05-30 EP EP92109145A patent/EP0572688B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 AT AT92109145T patent/ATE152734T1/de active
- 1992-05-30 DE DE69219590T patent/DE69219590T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 ES ES92109145T patent/ES2103854T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 DK DK92109145.0T patent/DK0572688T3/da active
-
1993
- 1993-05-28 WO PCT/EP1993/001352 patent/WO1993024521A1/en active IP Right Grant
- 1993-05-28 EP EP93912825A patent/EP0601154B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 HU HU9400252A patent/HU224073B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 RU RU94041224A patent/RU2111214C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 AU AU43196/93A patent/AU4319693A/en not_active Abandoned
- 1993-05-28 AT AT93912825T patent/ATE155485T1/de active
- 1993-05-28 ES ES93912825T patent/ES2107033T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 PL PL93302304A patent/PL176208B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 UA UA93003868A patent/UA32523C2/uk unknown
- 1993-05-28 CZ CZ94205A patent/CZ284972B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 JP JP6500207A patent/JP2783681B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 RO RO94-00101A patent/RO112506B1/ro unknown
- 1993-05-28 DK DK93912825.2T patent/DK0601154T3/da active
- 1993-05-28 CA CA002114313A patent/CA2114313C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 SK SK96-94A patent/SK278507B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 DE DE69312232T patent/DE69312232T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 US US08/185,883 patent/US6211151B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-01-26 FI FI940375A patent/FI120454B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-01-27 KR KR1019940700258A patent/KR0180256B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-01-28 BG BG98426A patent/BG61477B1/bg unknown
- 1994-01-28 NO NO940299A patent/NO310027B1/no not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-08-07 GR GR970402020T patent/GR3024379T3/el unknown
- 1997-10-01 GR GR970402552T patent/GR3024905T3/el unknown
- 1997-12-29 HK HK97102674A patent/HK1001004A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-12-02 US US09/203,921 patent/US6268346B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ20594A3 (en) | Peptides with organo-protective activity and pharmaceutical preparations in which they are comprised | |
FI92326C (fi) | LHRH:n nonapeptidi- ja dekapeptidianalogeja, jotka ovat käyttökelpoisia LHRH:n antagonisteina | |
JP4191259B2 (ja) | GnRH拮抗物質 | |
EP2611825A1 (en) | Solid phase synthesis of h(gly2)glp-2 | |
AU638468B2 (en) | Hemoregulatory peptides | |
JPH02502826A (ja) | 免疫欠損状態の治療のための医薬製剤 | |
US7220725B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide and method for treating pain | |
JPH05503103A (ja) | 障害を受けた組織における血管漏洩を抑制する抗炎症ペプチド及びその組織の治療方法 | |
JP3568952B2 (ja) | 5位及び6位に修飾アミノアシル残基を有するlhrh拮抗薬 | |
JPH10501003A (ja) | 免疫調節作用を有する新規ペプチド | |
ES2282494T3 (es) | Analogos de la hormona liberadora de la hormona de crecimiento humana, su preparacion y uso. | |
RU2116311C1 (ru) | Пептиды, обладающие органозащитной активностью, фармакологически активная композиция | |
AU694701B2 (en) | Peptides with organo-protective activity, their preparation and use | |
AU678917B2 (en) | Peptides with organo-protective activity, their preparation and use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20120528 |