RO112506B1 - Peptide cu activitate organo-protectoare - Google Patents
Peptide cu activitate organo-protectoare Download PDFInfo
- Publication number
- RO112506B1 RO112506B1 RO94-00101A RO9400101A RO112506B1 RO 112506 B1 RO112506 B1 RO 112506B1 RO 9400101 A RO9400101 A RO 9400101A RO 112506 B1 RO112506 B1 RO 112506B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- pro
- leu
- gly
- amino acid
- represented
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 18
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 24
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 claims description 16
- BOJYMMBYBNOOGG-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BOJYMMBYBNOOGG-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 13
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 claims description 11
- OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N Leu-Glu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N 0.000 claims description 8
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 8
- BEQGFMIBZFNROK-JGVFFNPUSA-N Gly-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)O BEQGFMIBZFNROK-JGVFFNPUSA-N 0.000 claims description 6
- APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 6
- CGSOWZUPLOKYOR-AVGNSLFASA-N Pro-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 CGSOWZUPLOKYOR-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims description 6
- 230000036244 malformation Effects 0.000 claims description 6
- BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 5
- NAPNAGZWHQHZLG-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N NAPNAGZWHQHZLG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims description 5
- DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DCBSZJJHOTXMHY-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 5
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002669 organ and tissue protective effect Effects 0.000 claims description 5
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 4
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 4
- 244000191761 Sida cordifolia Species 0.000 claims description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 4
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N Gly-Arg-Pro Natural products NCC(=O)NC(CCNC(=N)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 claims description 3
- MRYUJHGPZQNOAD-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MRYUJHGPZQNOAD-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N Asp-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- BKOIIURTQAJHAT-GUBZILKMSA-N Asp-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 BKOIIURTQAJHAT-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061459 Gastrointestinal ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 2
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 claims 2
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710150192 Beta-secretase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 claims 1
- HEEWEZGQMLZMFE-RKGINYAYSA-N CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CN)CCC1 Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CN)CCC1 HEEWEZGQMLZMFE-RKGINYAYSA-N 0.000 claims 1
- DBALDZKOTNSBFM-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DBALDZKOTNSBFM-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 claims 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 22
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 10
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 9
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 9
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine Chemical compound C1N(C)CCC(C=2C=CC=CC=2)=C1 PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101001135571 Mus musculus Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 2 Proteins 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 6
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 6
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 6
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 5
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- -1 aliphatic amino acid Chemical class 0.000 description 5
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 5
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000009132 Catalepsy Diseases 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 3
- 206010047853 Waxy flexibility Diseases 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000779819 Syncarpia glomulifera Species 0.000 description 2
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 2
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000005595 deprotonation Effects 0.000 description 2
- 238000010537 deprotonation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 2
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000001739 pinus spp. Substances 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940036248 turpentine Drugs 0.000 description 2
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWRZIZXBOLBCON-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethenamine Chemical compound NC=CC1=CC=CC=C1 UWRZIZXBOLBCON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 240000006705 Pistacia terebinthus Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010081750 Reticulin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010044522 Traumatic haematoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N [(1R)-3-morpholin-4-yl-1-phenylpropyl] N-[(3S)-2-oxo-5-phenyl-1,3-dihydro-1,4-benzodiazepin-3-yl]carbamate Chemical compound O=C1[C@H](N=C(C2=C(N1)C=CC=C2)C1=CC=CC=C1)NC(O[C@H](CCN1CCOCC1)C1=CC=CC=C1)=O YTAHJIFKAKIKAV-XNMGPUDCSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydron;bromide Chemical compound Br.CC(O)=O MNZMECMQTYGSOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003501 anti-edematous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000373 effect on fracture Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000001158 estrous effect Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000010352 nasal breathing Effects 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000003071 polychlorinated biphenyls Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Prezenta invenție se referă la peptide cu activitate organo-protectoare, care au o activitate biologică superioară, de aceleși tip cu a produsului natural BPC.
Se cunoaște o peptidă biologic activă, cu activitate organo-protectoare, care a fost izolată din corpul uman sau animal și denumită BPC ( Body Protecting Compound = compus care protejează corpul) și care este descrisă în EP 0432400 și publicată: P. Sikiric et al., Exp. Clin. Gastroenterol., 1, 15-26, 1991. Această proteină are o greutate moleculară ridicată, de aproximativ 40.000 + 5.000 Daltoni, cu o structură numai parțial determinată. Acest compus are un spectru foarte larg de activități biologice, ca: hepatoprotector, antiviral, antiedemic, activitate antiinflamatoare generală, activitate antimalignă și altele. Este utilizată în terapia bolilor citate, în plus, în terapia bolilor și a tulburărilor sistemului nervos, a tulburărilor de etiologie dopaminergică, în tratamentul fecundității și în medicina veterinară. Acest spectru larg de activitate este, probabil, o consecință a structurii nedeterminate și chiar a purității sau omogenității insuficiente a compusului izolat BPC.
Problema pe care o rezolvă invenția este obținerea unor peptide sintetice cu 8 până la 15 resturi de aminoacid pe lanț, cu greutate moleculară între 900 și 1600 Daltoni, care au activitate biologică a compusului natural care protejează corpul BPC, dar au selectivitate mărită. Aceste noi peptide sunt produse mai economic și sunt mai puțin supuse efectului reacțiilor secundare, deoarece ele conțin mai puține resturi de aminoacid decât BPC.
Invenția înlătură dezavantajele peptidelor cunoscute, prin aceea că aceste peptide cu activitate organo-protectoare cuprind 8 până la 15 resturi de aminoacid și sunt reprezentate prin formula generală:
Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 în care:
Xaa reprezintă un rest de aminoacid alifatic neutru, precum Ala, bAla, Leu, lle, Gly, Val, Nle, Nva;
Yaa reprezintă un rest de aminoacid bazic, precum Lys, Arg, Orn, His;
Zaa reprezintă un rest de aminoacid acid, precum Glu, Asp, Aad sau Apm; unde cel puțin unul și cel mult șapte resturi de aminoacid din regiunea 1 până la 15 pot fi omise.
Mai exact, această invenție se referă la o clasă nouă de peptide active înalt biologic, care cuprind de la 8 la 15 resturi de aminoacizi, care sunt reprezentate prin următoarea formulă structurală de bază, care utilizează drept cod pentru aminoacid trei litere, iar numerele de sub fiecare rest de aminoacid se referă la poziția restului de aminoacid pe lanțul peptidic:
Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 în care unul sau mai multe resturi de aminoacid sunt substituite.
Substituenții Xaa, Yaa și Zaa care sunt folosiți sunt reprezentați în tabelul 1 care urmează
Tabelul 1
| Resturi | Substituent |
| Xaa | un aminoacid alifatic neutru: Ala, bAla, Leu, lle, Gly, Val, Nle, Nva |
| Yaa | aminoacid bazic: Lys, Arg, Orn, His |
| Zaa | aminoacid acid : Glu, Asp, Aad, Apm |
RO 112506 Bl
Peptidele preferate sunt:
Secv. ID nr. 1
Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val55
1015
Secv. ID nr. 2
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val60
1015
Secv. ID nr. 3
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val65
1015
Totodată sunt prezentate peptide analoage care au o grupare amidică sau carboxil la atomul de carbon terminal, care au formula structurală descrisă anterior și în care cel puțin un rest aminoacid sau cel mult 7 resturi de aminoacid dîn regiunea 70 1-15 sunt omise, și cel puțin unul din resturile de aminoacid care rămân pot fi substituite în concordanță cu tabelul 1.
Peptidele preferate sunt:
Secv. ID nr. 475
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val
5 1014
Secv. ID nr. 58 o
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala Gly Leu Val
1014
Secv. ID nr. 685
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala
58
Secv. ID nr. 790
Asp Pro Pro Pro lle Arg Pro Ala Asp
59
Secv. Id nr. 895
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp
59
Peptidele cu formulele structurale descrise mai sus și în care cel puțin unul din 100 resturile de aminoacid poate fi omis și în care cel puțin unul din resturile de aminoacid care rămân pot fi substituite, așa cum este indicat în tabelul 1, sunt transformate întro formă ciclică prin formarea de noi legături CO-NH între primul și ultimul rest de aminoacid din moleculă.
Peptidele preferate sunt următoarele: 105
RO 112506 Bl
Secv. ID nr. 9
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val
| 1 i 1 | 1 2 | 5 | 10 | 13 I |
| Secv. ID nr. 10 | ||||
| Gly Glu Pro Pro | Pro Gly Arg Pro Ala | Asp | ||
| 1 ' ~ | _ | 5 9 | L |
Peptidele conform prezentei invenții au următoarele avantaje:
- au o activitate biologică egală sau mai mare decât proteina de origine BPC, în special în sensul protejării corpului;
- se obțin mai ușor;
- au lanțul peptidic mai scurt.
Aceste peptide sintetice cu structură bine definită au un mare avantaj, comparativ cu proteina BPC cu moleculă mare, numai parțial definită, care se obține numai prin proceduri dificile, din surse naturale îndoielnice.
In continuare se dau următoarele exemple de realizare a invenției, în legătură fig. 1=7, care reprezintă:
sinteza peptidei sinteza peptidei sinteza peptidei sinteza peptidei sinteza peptidei liniare cu Secv. ID nr. 4 și a peptidei ciclice cu Secv. ID nr. 9,
1,
2,
3, cu cu cu cu
Secv. Secv. Secv. Secv.
ID ID
ID
ID nr. nr. nr. nr.
4, utilizând strategia Boc;
2, utilizând strategia Fmoc;
6, utilizând strategia Ddz;
4a parțial protejată, utilizând strategia Ddz;
Șl cu
-fig.
-fig.
-fig.
- fig. 4,
- fig- 5, pornind de la petida liniară 4a protejată;
- fig. 6, spectrul UV al peptidei cu Secv. ID nr. 4 și 6 ( apă, 1 mg/ml );
- fig. 7, spectrul IR al peptidei cu Secv. ID nr. 4 și 6 [ tabletă de KBr ]..
Peptidele din această invenție sunt sintetizate folosind condensarea în trepte ( pas cu pas j a aminoacizilor pretejați, în sistem lichid omogen sau, preferabil, utilizând metoda în fază solidă.
Pentru prepararea peptidelor ciclice, sunt preparate peptide liniare protejate parțial, de lungimea dorită, cu grupări ester alchilice la carbonul terminal, care sunt convertite în azide, urmată de cuplare și protejare. In mod alternativ, peptidă liniară protejată parțial cu grupări terminale libere sunt ciclizate de difenilfosforilazidă în soluții foarte diluate.
Exemplul 1. Sinteza peptidei utilizând strategia Boc
Sinteza peptidei este realizată pornind de la 1OO mg de rășină Boc-Val-PAM,' i-:l pentru a se produce o peptidă cu grupare carboxil terminală ( PAM este achiziționată de la Apllied Biosystems substituția 0,56 meq/g este un derivat de aminostiren al acidului amino-acil-4-(oximetilj-fenilacetic). Aminoacizii Boc ( Boc = terț-butoxicarbonil] sunt condensați unul după altul pe un purtător polimeric care uitlizează diizopropilcarbodiimidă ( DIPC ) drept agent de condensare. In fiecare etapă, gruparea n o Boc este îndepărtată cu soluție 50 % de acid trifluoracetic ( TFA ) în diclormetan.
Gruparea amino este apoi deprotonizată cu diizopropiletilamină.
Conversia în fiecare treaptă trebuie să fie mai mare de 99,5 %. Dacă nu se atinge această valoare, condensarea se repetă. După sinteza completă, scindarea este realizată utilizând HF diluat ( 2 ore la 0° C ). Pentru eliminarea ionului de carboniu io este utilizat anisolul. HF este evaporat sub atmosferă de azot.
Peptidă brută este apoi obținută prin turnarea reziduului uleios în eter uscat.
Apoi, peptidă brută este purificată prin metoda HPLC cu fază inversă care utilizează o coloană 5 x 150 mm umplută cu silicagel PP-18, gradient de eluare cu un sistem de solvenți 0,1 % TFA în apă / acetonitril. Detecție : absorbție în ultraviolet la
i.-.n 225 nm.
Sinteza peptidei Secv. ID nr. 4 este prezentată în fig. 1.
RO 112506 Bl
Exemplul 2. Sinteza peptidei utilizând strategia Fmoc
Pentru sinteză sunt utilizați aminoacizi protejați Fmoc Standard ( Fmoc = 9fluorenilmetiloxicarbonil-j. Funcțiunile catenei laterale sunt protejate sun formă de oterț-butil esteri (Asp, Apm, Glu, Aad ) și cu derivați Boc ( Lys ]. Primul aminoacid ( Val 165 ) este legat pe un purtător polimeric, rășină BHA ( BHA = benzhidrilamino rășină ] utilizând diizopropilimida drept agent de cuplare. In fiecare etapă gruparea protectoare Fmoc este îndepărtată cu piperidină. După aceea, al doilea aminoacid și următorii aminoacizi sunt introduși utilizând aceeași cale până când sinteza este completă. Scindarea este făcută cu un amestec de TFA / TFMSA / anisol= 2:1 7:52 ( vol/vol). ivo
Peptidă este apoi purificată utilizând metoda HPLC descrisă în exemplul 1.
Sinteza peptidei cu Secv. ID nr. 2 este ilustrată în fig. 2.
Exemplul 3. Sinteza peptidei utilizând strategia Ddz
Toți aminoacizii care sunt utilizați în această sinteză sunt protejați la funcțiunea α-amino prin Ddz ( Ddz = a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenziloxicarbonil-J. Funcțiunile catenei 175 laterale sunt protejate prin gruparea Z ( Z = benziloxicarbonil- ) pentru lizină și gruparea O-t-butilester pentru acidul aspartic și acidul glutamic. Un suport de tip Merrifield ( gel de polistiren clormetilat ramificat) cu capacitatea de 1,4 mmol/g este utilizat pentru legarea primului aminoacid - Ddz prin intermediul sării sale de Cesiu. După condensarea cu diciclohexilcarbodiimidă ( Dcc) este îndepărtată gruparea i?n protectoare în fiecare etapă cu TFA 5 % în diclormetan, urmată de spălarea și deprotonarea cu trietilamină 10 %în diclormetan. După deprotonare, este mediată următoarea etapă de cuplare, utilizând aceeași metodă. Etapa de cuplare este repetată până când secvența de peptidă este completată.
In final, peptidă este scindată de purtătorul polimeric utilizând un amestec 1-5 Hbr/TFA/anisol. După evaporarea volatilelor, peptidă abia scindată este precipitată din eter uscat și uscată. Peptidă brută este apoi purificată prin metoda HPLC, așa cum este descris în exemplul 1.
Sinteza peptidei cu Secv. ID nr. 6 este ilustrată în fig. 3.
Exemplul 4. Sinteza peptidei ciclice
Peptidă în forma parțial protejată
Obzl NO2 Obzl
Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Arg-Pro-Ala-Asp-OH este preparată înainte conform cu metodele descrise în exemplele 1 și 2.
Soluția 0,0005 molară a acestei peptide în dimetilformamidă este ciclizâtă după adăugarea difenilfosforilazidei și trietilaminei la 20 °C, timp de 12 ore. 207
Apoi acest amestec este hidrogenat cu hidrogen pe catalizator de Paladiu pe cărbune la 25 °C, timp de 8 ore.
Solventul este evaporat cu grijă și produsul brut este purificat utilizând metoda HPLC descrisă în exemplul 1.
Peptidă ciclică cu Secv. ID nr. 10 2 r
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp
5 10 este obținută cu η = 10 %.
Exemplul 5. Sinteza peptidelor liniare și ciclice utilizând strategia Boc
Aceeași strategie cu grupări protectoare Ddz este utilizată pentru obținerea peptidelor liniare și ciclice. Funcțiunile laterale sunt protejate cu gruparea Z ( lizina ) și cu grupările O-benzilester-OBzl-[ acid glutamic și acid aspartic ).
RO 112506 Bl
Purtătorul polimeric este rășina HYCRAM R ( denumire comercială a ORPEGEN, Heidelberg, DE ), care este 4-bromcrotonil-p-alanilamidometilpolistiren. Primul aminoacid ( Ddz-valina ] este legat de purtătorul polimeric prin intermediul sării sale de Cesiu.
Apoi gruparea Ddz este îndepărtată utilizând acid trifluoracetic 5 % în diclormetan și gruparea amino protonată cu diizopropiletilamină.
In etapa următoare, Ddz-glicina este cuplată la restul de Valină din matricea polimerului utilizând diizopropilcarbodiimidă (DIPC), în prezență de 1-hidroxibenztriazol.
Aceste etape sunt repetate până când lanțul peptidic este completat. Peptidă sintetizată în formă protejată este apoi scindată cu grijă de purtătorul HYCRAM R cu tetra/c/s-(trifenilfosfino)-paladiu (O), dizolvat în tetrahidrofuran anhidru în absența oxigenului. Un aditiv ca morfolina este utilizat ca moleculă acceptoare pentru gruparea alilică.
Purtătorul polimeric este filtrat și spălat cu tetrahidrofuran. Soluția de peptidă este apoi filtrată printr-o coloană scurtă de silicagel pentru a îndepărta catalizatorul de Paladiu.
Eluatul care conține peptidă cu Secv. ID nr.4a parțial protejată este uscat după evaporarea solventului în vid.
Sinteza peptidei cu Secv. ID nr. 4a parțial protejată este ilustrată în fig. 4.
Sinteza peptidei liniare cu Secv. ID nr. 4
Peptidă cu Secv. ID nr. 4a parțial protejată este dizolvată în 2,2,2-trifluoretanol și hidrogenată în prezență de Paladiu pe cărbune ( 10 % ] cu hidrogen gazos la 3D °C. Catalizatorul este filtrat și solventul este evaporat în vid. Reziduul brut este apoi purificat utilizând metoda HPLC descrisă în exemplul 1. După purificare este obținută peptidă cu Secv. ID nr. 4. Produsul este identic cu cel obținut în cadrul exemplului 1.
Sinteza peptidei ciclice cu Secv. ID nr. 9
Peptidă cu Secv. ID nr. 4a protejată parțial este dizolvată în dimetilformamidă/diclormetan (1: 1], pentru a se obține o soluție O,DD1 molară. Pentru ciclizare este adăugat DIPC și HCBt și lăsate să stea la 2D °C, timp de 1D ore. Apoi soluția este concentrată la un volum mic, diluată cu 2,2,2-trifluoretanol și purificată prin trecere pe o coloană umplută cu Sephadox L.H-20. Fracțiunile care conțin peptidă ciclică cu Secv. ID nr. 9a parțial protejată sunt colectate și hidrogenate folosind Paladiu pe cărbune ( 10 % ) drept catalizator, la 3D °C, prin barbotare de hidrogen și agitare intensivă, timp de 8 ore.
Apoi catalizatorul este îndepărtat prin filtrare și soluția uscată prin evaporarea solventului în vid. Peptidă brută este purificată în mod adițional prin HPLC utilizând metoda descrisă în exemplul 1.
Peptidă ciclică pură obținută este identificată ca peptidă cu Secv. ID nr. 9.
Sinteza pe purtător polimeric HYCRAM H utilizând strategia Ddz și ciclizarea este ilustrată în fig. 4 și 5. Toate peptidele sintetizate sunt controlate din punct de vedere al purității prin metoda HPLC utilizând coloană cu silicagel RP-18 (octadecilsilanizat ] eluat cu un amestec de solvenți constituit din apă/acetonitril/acid trifluoracetic în mod uzual. In toate cazurile puritatea este mai mare de 95 %.
Peptidele sunt caracterizate prin analize ale aminocizilor ( valorile sunt cu + 1D % față de cele teoretice ], analiza de frecvență, determinarea greutății moleculare prin spectrometrie de masă FAB, spectre IR sau UV.
Astfel, în fig. 6 este prezentat spectrul UV al peptidei Secv. ID nr. 4 și 6, iar în fig. 7 spectrul IR al acelorași peptide.
Investigarea farmacologică a peptidelor din prezenta invenție este efectuată pe diferite modele in vitro și in vivo și s-a descoperit că au mai multe proprietăți farmacologice.
A. Ulcerul gastric indus prin stress de reținere în experimente sunt utilizați șobolani ( masculi) Albino Wistar cu o greutate de 180 - 200 g. Animalele sunt imobilizate în poziția culcat pe spate, timp de 48 de ore, la temperatura camerei. Imediat după aceea sunt sacrificați și sunt măsurate leziunile.
270
RO 112506 Bl
320
Peptidele cu Secv. ID nr. 4, 6 și 2 sunt aplicate, în doză de 10 pg sau 10 ng/kg greutate corp, intraperitoneal ( i.p. ) sau intragastric ( i.g. ) cu o oră înainte de procedura dăunătoare.
Atât aplicarea i.g, cât și i.p., chiar la doze mici, precum 10 ng/kg corp, determină o protecție puternică.
B. Modelul cisteaminic de ulcer
In experimente sunt utilizați șobolani (femele ] Albino Wistar cu o greutate de 180 - 200 g. Sunt aplicate subcutanat doze de 400 mg/kg corp de clorhidrat de cisteamină ( dizolvată în apă). După 24 de ore animalele sunt sacrificate. Peptidele cu Secv. ID nr. 4 sunt aplicate în doze de 1,0 pg, 100 ng și 50 ng/kg corp, intraperitoneal și intragastric. Este obținută o protecție puternică și dependentă de doză. Aceeași activitate a fost găsită atât pentru calea de administrare intraperitoneală, cât și intragastrică.
C. Edemele bucale induse de turpentină
In experimente sunt utilizați șobolani ( masculi) Albino Wistar cu o greutate de 180 - 200 g, în număr de 10 în fiecare grup. Turpentină este administrată în mucoasă, câte 0,02 ml/șobolan. Control: 0,9 % salin intramucos ( 0,02 ml/șobolan, de 2 ori). Peptidele cu Secv. ID nr. 2 și 4 sunt aplicate în doze de 10 pg și 10 ng/kg corp, intraperitoneal și intragastric, cu o oră înainte de administrarea de turpentină. Edemele bucale sunt măsurate după 24 de ore de la inducerea edemei. Analize statistice: test Mann-Whitney. Peptidele investigate sunt eficiente în doze de 10 pg /kg în greutate.
D. Chirurgie: efectul asupra inciziilor pe piele
In experimente sunt utilizați șobolani ( masculi) Albino Wistar cu o greutate de 200 - 250 g, în număr de 10 în fiecare grup.Șobolanii cu pielea rănită sunt menținuți individual în cuști separate. Pe fiecare animal, anesteziat ușor cu eter, sunt efectuate pe pielea de pe spate incizii de 3 cm, care sunt plasate paralel la o distanță de 1,5 cm de șira spinării. O rană este apoi prinsă cu două clipsuri chirurgicale și una este lăsată netratată. Peptidă cu Secv. ID nr.4, dizolvată în sare, în doză de 1,0 pg și 1,0 ng/kg corp sau în 0,5 ml/kg corp de sare de control, este aplicată intradermic între răni imediat după rănire.
Se observă un efect de vindecare evident datorat peptidelor atât asupra rănilor cu clipsuri chirurgicale, cât și asupra acelora ținute fără tratament chirurgical.
După 5 zile, grupurile tratate au avut un număr mai mic de celule inflamatorii și în mod semnificativ o mai bună dezvoltare a fibrelor de reticulină decât cele de control.
E. Efectul asupra arsurilor experimentale
In experimente sunt utilizați șobolani ( masculi ) Albino Wistar cu o greutate de 200 - 250 g, în număr de 10 în fiecare grup. Sub anestezie ușoară, mucoasa nazală este expusă la o cauterizare ( incandescentă ) fierbinte timp de 5 secunde. Peptidă cu Secv. ID nr. 4 este introdusă intraperitoneal în doze de 10 pg/kg corp. Procedura utilizată în mod uzual a condus la umflarea proeminentă a botului și a fost fatală pentru animalele de control ( dar nu și pentru animalele tratate ) în 9 zile după rănire. In contrast cu animalele de control, a fost observată numai o foarte modestă umflătură post-traumatică. In mod suplimentar, respirația normală nazală este doar ușor afectată și supraviețuirea nu este tulburată.
F. Efectul asupra vindecării fracturilor
In experimente sunt utilizați șobolani ( masculi ) Albino Wistar cu o greutate de 270 - 300 g. Tibia stângă este fracturată manual în partea de mijloc a osului sub anestezie cu eter. Nu a fost utilizată nici o imobilizare și animalelor li s-a permis să se miște libere în cuști. Animalele sunt sacrificate în a 5-a zi, a 8-a, a 12-a și a 30-a zi după provocarea rănirii. Peptidă cu Secv. ID nr.4 este aplicată intraperitoneal, în doze de 10,0 pg/kg corp, cu o oră înaintea rănirii și suplimentar o dată pe zi ( ultima aplicare efectuându-se cu 24 de ore înaintea sacrificării). Grupa de control a primit
275
280
285
290
295
300
305
310
315
325
RO 112506 Bl simultan un echivolum de sare ( 0,9 %, 5,0 ml/kg corp, intraperitoneal ). A fost observată o îmbunătățire semnificativă a vitezei de vindecare la toate animalele tratate cu peptidă, la fiecare din intervalele de timp investigate. Toate animalele tratate au prezentat hematoame post-traumatice mult mai scăzute decât animalele de control și ele și-au refăcut funcțiunile lezate chiar mai repede.
G. Activitatea antivirală
Activitatea antivirală este investigată pe șoareci nou-născuți de 24 de ore, rasa BALB-C, de ambele sexe.
Sunt aplicați ARBO-viruși: TBE ( = Tick Borne Encephalitis ), Bhanis, Dengue 1, 2, 3, 4, Sinbis, West - Nile, Calovo, Hepatitis A, LCM ( Simphatic choriomeningitis ) și Herpes tip I ca suspensie de viruși la o diluție de 1CT2 ( 0,02 ml/șoarece ) acceptate în general și injectate intracutanat (i.c. ] sau perorai ( p.o. ) ( Hepatitis A ]. In funcție de diferența de virulență, dozele se ajustează astfel pentru a fi comparabile cu LD100 în 0,02 ml i.c. ( p.o.; Hepatitis A ), vaccin la diluție de 10‘2. In acest mod, se poate compara desfășurarea infecțiilor cu diferiți viruși, indiferent de inocularea posibilă a concentrațiilor diferite de virus.
Peptida cu Secv. ID nr. 4 este utilizată la o concentrație de 20,0 pg/ml în soluție de sare 0,9 % și aplicată numai o doză de 2,0 pg/kg corp intracutanat ( i.c. ) sau intraperitoneal ( i.p.):
a] cu 2 ore înainte de aplicarea virusului (-2h)
b] simultan cu infecția (O).
Control: același volum de sare i.c. sau i.p. Rezultatele sunt însumate în tabelul
2. Numerele din tabel indică perioada ( zile) în care toate grupurile de șoareci infectați cu virus, tratați cu peptidă sau sare ( control ) au sucombat.
Tabelul 2
| Infecții cu viruși | Tratament | ||||||||
| Sare | Fragment sintetic 4 | ||||||||
| -2hx | Ox | -2hx | Ox | ||||||
| i.p. | i.c. | i.p. | i.c. | i.p. | i.c. | i.p. | i.c. | ||
| TBE | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Bhania | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 1 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 2 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 3 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 4 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Sinbis | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| West Nile | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Calovo | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Hepatitis | A+ | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| LCM | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 | |
| Herpes tip 1 | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 | |
| Niciunul (sănătos) | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
RO 112506 Bl
n.d. - nedeterminat: animalele sunt observate timp de 40 de zile după aplicarea virusului. Nu a fost observată moartea.
A - ARBO-viruși + - aplicarea perorală a virușilor # - animalele sunt tratate cu 2 ore înainte de aplicarea virușilor ( -2h ) sau simultan cu administrarea virușilor (O).
vs. sare p < 0,001; 8 șoareci în fiecare grup.
H. Activitatea antidepresivă
Pentru dezvăluirea activității antidepresive este utilizat testul de înot forțat conform cu Porsolt și colaboratorii, Eur. J. Pharmacol., 47, 379-391, 1978).
Pentru acest test sunt utilizați șobolani masculi Wistar cu o greutate corporală de 180-240 g. Peptidă investigată cu Secv. ID nr. 4 este administrată în prima zi după pretestare și a doua zi cu o oră înaintea experimentului ( i.p. ).
Grup de control: sare, intraperitoneal (i.p. ). Animalele sunt observate timp de 5 minute. Este măsurat timpul de imobilitate (TJ. T; în grupa de control este de aproximativ 150 de secunde, iar în grupul tratat cu peptidă este de numai 60-70 de secunde. Acest efect este de lungă durată: după 16 zile este încă prezent. Doza de răspuns este de:
pg la 10 ng/kg: efect complet pg/kg: efect încă prezent pg/kg: efect în dispariție.
/. Efectul pe modelul bolii Parkinson
Pentru investigații sunt utilizate bine cunoscutele modele pentru boala Parkinson ( Karakola S. Și colaboratorii, Pharmacol. Toxicol, 67, 95-100, 1990 ): model resepină și model MPTP.
Sunt utilizați șoareci masculi NMRI-HANNOVER ( pentru modelul MPTP ) sau șoareci de ambele sexe ( pentru modelul resepină ).
A] MPTP este aplicat în doze de 30 mg/kg corp intraperitoneal, o dată pe zi, timp de 6 zile consecutive și apoi pentru următoarele 4 zile într-o doză mai mare de 50 mg/kg corp. Peptidă investigată având Secv. ID nr. 4 este aplicată într-o doză de 1,5 pg și 15,0 ng/kg corp intraperitoneal, 15 minute înaintea fiecărei administrări de MPTP sau 15 minute după fiecare administrare de MPTP.
B] Resepină este aplicată într-o doză de 50 mg/kg corp intraperitoneal. Peptidă testată este aplicată într-o doză de 10 pg la 10 ng/kg corp, intraperitoneal, timp de 15 minute înaintea administrării resepinei sau 24 de ore după administrarea resepinei aceeași doză.
Control: un volum egal de sare, 5 ml/kg corp, intraperitoneal.
După tratamentul cu peptidă este observată o reducere semnificativă a hipochineziei, rigidității ( catalepsiei) și tremurului.
In pretratamentul după modelul MPTP cu această peptidă este abolită dezvoltarea catalepsiei, este diminuată achinezia și apariția tremurătorii.
Posttratamentul ( după 15 minute ) previne dezvoltarea suplimentară a catalepsiei MPTP și a diminuat în mod marcant achinezia și tremurul. In mod uzual, o mortalitate înaltă ( de 50 % ) înregistrată după numai o aplicare de MPTP este scăzută la animalele pretratate cu peptidă, precum și la animalele post-tratate.
J. Efectul administrării peptidei în stare de șoc hemoragie
In toate aceste experimente sunt utilizate femele adulte de șobolani Albino Wistar cu o greutate de 150-180 g.
370
375
380
385
390
395
400
405
410
415
420
RO 112506 Bl
Efectul șocului hemoragie este investigat în două serii de experimente.
A) Animalelor li s-a luat sânge (1 ml în mai mult de 3 minute și în 2 minute restul ) până la moarte. Volumul de sânge îndepărtat care produce efectul fatal este fixat la animalele pretratate cu peptidă având Secv. ID nr. 4 (10,0 pg la 10 ng/kg corp intraperitoneal) sau la animalele tratate cu sare (5,0 ml/kg corp, intraperitoneal).
Animalele sunt pretratate cu 15 minute înainte de sângerare. Este observată o pierdere semnificativ mai mare de volum de sânge fatal la grupul tratat cu o doză mai mare de peptide.
B) Presiunea sângelui este scăzută prin îndepărtarea volumului de sânge controlat și apoi este menținută la o valoare de 30-35 mm Hg, timp de 5 minute.
Apoi peptidă cu Secv. ID nr. 4 ( 10,0 pg la 10 ng/kg corp ) sau sarea ( control, 3,0 ml/kg corp ) sunt aplicate intravenos (i.v. ).
Contrastând cu animalele de control, la animalele tratate cu peptidă au fost înregistrate valori crescute și susținute în mod semnificativ ale presiunii sângelui și abolirea completă a morții.
Deci, se pare că peptidă investigată este foarte eficientă în ameliorarea consecințelor scăderii volumului de sânge.
K. Influența asupra radiațiilor letale
In experimente sunt utilizați șoareci NMRI-HANNOVER, de 5-6 săptămâni, de ambele sexe , cu o greutate de 18-20 g. Peptidă sintetică cu Secv. ID nr. 4 este aplicată într-o doză de 20 pg/kg corp, intraperitoneal, la o oră înainte și după iradiere. Animalele de control primesc în mod simultan un echivolum de sare 0,9 % intraperitoneal ( 5,0 ml/kg ). Animalele sănătoase ținute în condiții uzuale, nesupuse tratamentului cu medicamente sau la iradiere, servesc drept animale de control al sănătății.
Iradiere: Teatron 80 ( Co 60, 2200 Ci ). Șoarecii neasteneziați, aflați în cuști, în grupe de câte 16, sunt expuși la iradierea întregului corp, cu o doză supraletală de 9 Gy pe o suprafață de iradiere de 20 x 20 cm, la o distanță de 80 cm.
Morțile sunt înregistrate de două ori pe zi, timp de 30 de zile.
Toate animalele de control au murit în 7-12 zile ( LD1OO/12 ).
Animalele de control sănătoase (neiradiate) nu au murit.
Referitor la datele de control, nu au fost observate diferențe în grupurile tratate cu peptide la o oră după iradiere. Totuși, o supraviețuire semnificativă este observată când compusul este aplicat cu o oră înaintea iradierii.
□ creștere cu 70 % la LD100 referitor la control se poate nota.
L. Influența asupra malformației induse
In toate experimentele sunt utilizați șoareci femele NMRI HANNOVER, de 2 luni, cu o greutate de 25 g, dar neexpuse anterior la cuplare. Șoarecii femelă în perioada estrus sunt împerecheate peste noapte cu șoareci masculi sănătoși apți pentru experiență. Șoarecii sunt sacrificați după 20 de zile de sarcină.
Vitamina A este aplicată în doză de 15700 U/kg corp, intramuscular (
i.m. ), în a 10-a zi de sarcină ( 0,05 ml/kg corp). Peptidă cu Secv. ID nr. 4 este aplicată într-un dozaj de 10,0 pg la 10 ng/kg corp, intraperitoneal ( i.p. ). Control: sare 5,0 ml/kg corp, intraperitoneal.
Animalele netratate cu vitamina A care au primit în același timp, intraperitoneal, sare sau peptidă cu Secv. ID nr. 4, în același dozaj, servesc drept control al sănătății.
RO 112506 Bl
Nici o malformație nu este observată în grupul sănătos tratat cu sare sau în grupul tratat cu peptidă.
Rezultatele expuse în tabelul 3 arată în mod surprinzător efectul semnificativ protector și dependent de doză al peptidei investigate, împotriva 475 malformațiilor induse de vitamina A.
Tabelul 3
Examinare macroscopică
| Tratament | Număr total de fetuși | Număr de fetuși cu malformații |
| Grupa de control (cu sare) | 55 | 0 |
| Vitamina A | 54 | 36 |
| Vitamina A + peptidă cu Secv. ID nr.4 10 ng/kg | 36 | 13 |
| Vitamina A + peptidă cu Secv. ID nr. 4 10pg/kg | 18 | 1 |
M. Toxicitate acută 490
Toxicitatea acută a peptidelor sintetice este determinată pe șoareci femele, cu o greutate de circa 20 g. Sunt utilizate grupe de animale de câte 6 pentru fiecare experiment și ca animale de control.
Peptidele cu Secv. ID nr. 2, 3, 4 și 6 se aplică într-o doză de 8, 25 și 50 mg/kg corp, intravenos ( i.v. ). Grupul de control este tratat cu sare ( 0,9 495 %, 5,0 ml/kg corp ). Animalele sunt ținute sub observație pentru semne de toxicitate timp de 15 zile.
La dozajul aplicat nu sunt observate semne de toxicitate sau de moarte. Este observat un fenomen interesant de creștere semnificativă a motilității și vioiciunii după 2 ore de la aplicarea peptidelor. 500
Urmărind rezultatele testelor de investigare farmacologică, aceste peptide prezintă activitate în sensul protejării organismului împotriva stresului și îmbolnăvirilor, în general pentru normalizarea funcțiunilor organice.
Utilizarea acestor peptide este, de asemenea, eficientă pentru prevenirea și terapia diferitelor boli și tulburări la om și la animale. Mai exact, 505 acești compuși sunt utilizați pentru tratamentul:
- tulburărilor și bolilor induse de stress,
- ulcerelor gastrointestinale de diferite etiologii;
- inflamațiilor și edemelor de diferite etiologii;
- traumelor, arsurilor, fracturilor de oase și, în general, în chirurgie; 510
- infecțiilor virale;
- șocului;
- bolii lui Parkinson;
- pentru protecția împotriva radiațiilor;
- pentru protecția împotriva malformațiilor. 515
In general, peptidele descrise pot fi utilizate într-o mare varietate de compoziții farmaceutice în combinații cu purtători farmaceutici netoxici sau vehiculi, precum o umplutură, un tampon netoxic sau o soluție de ( sare ) ser
RO 112506 Bl fiziologic. Astfel de compoziții farmaceutice pot fi utilizate topic sau sistemic și pot fi în orice formă adecvată, precum un lichid, solid, semisolid, soluție injectabilă, tabletă, unguent, loțiune, capsule, lingualete sau altele similare.
Aceste peptide pot fi în general administrate într-o doză de la 1Q5 la 1CT2 mg/kg corp, când sunt aplicate sistemic. Când se aplică topic, ele pot fi utilizate în concentrație mai mare, de exemplu de la 0,1 % la 0,5 %.
Este observată absența oricărui semn de toxicitate până la doze de 50 mg/kg corp și, de asemenea, o bună activitate a compușilor administrați perorai (intragastric).
Claims (16)
- Revendicări1. Peptide cu activitate organo-protectoare, caracterizate prin aceea că ele cuprind 8 până la 15 resturi de aminoacid și care sunt reprezentate prin formula generală:Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 în care:Xaa reprezintă un rest de aminoacid alifatic neutru, precum Ala, bAla, Leu, lle, Gly, Val, Nle, Nva;Yaa reprezintă un rest de aminoacid bazic, precum Lys, Arg, Orn, His;Zaa reprezintă un rest de aminoacid acid, precum Glu, Asp, Aad sau Apm;unde cel puțin unul și cel mult șapte resturi de aminoacid din regiunea 1 până la 15 pot fi omise.
- 2. Peptide cu activitate organo-protectoare, conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că ele cuprind 8 până la 15 resturi de aminoacid și care sunt reprezentate prin formula generală:Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa 15 10 15 în care:Xaa reprezintă un rest de aminoacid alifatic neutru, precum Ala, bAla, Leu, lle, Gly, Val, Nle, Nva;Yaa reprezintă un rest de aminoacid bazic, precum Lys, Arg, Orn, His;Zaa reprezintă un rest de aminoacid acid, precum Glu, Asp, Aad sau Apm;unde cel puțin unul din resturile Xaa sau Zaa poate fi omis.
- 3. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că molecula este ciclizată prin legătura amidică între primul și ultimul rest de aminoacid.
- 4. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 10 15RO 112506 Bl
- 5. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val 15 1015
- 6. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val 15 1015
- 7. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val1 5 1014
- 8. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala Gly Leu Val15 1014
- 9. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala1 58
- 10. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val2 5 __________________________10 13
- 11. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp2 59
- 12. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asn1 59
- 13. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Asp Pro Pro Pro lle Arg Pro Ala Asp1 59RO 112506 Bl
- 14. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că sunt reprezentate de formula:Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp1 5 9
- 15. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că se 625 utilizează în compoziții terapeutice împreună cu un purtător solid sau lichid, acceptabil farmaceutic.
- 16. Peptide conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că se utilizează pentru tratarea bolilor și tulburărilor induse de stress, inflamații,6.?c edeme, traume, arsuri, infecții virale, boli ale sistemului imunitar, boli ale sistemului nervos central, ulcere gastrointestinale de diverse etiologii, fracturi ale oaselor, în general în chirurgie și în starea de șoc, boli cerebrale și depresii, boala lui Parkinson, pentru protecția împotriva radiațiilor și a malformațiilor induse de agenți chimici și, în general, drept produși care -5 protejează organismul.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP92109145A EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1992-05-30 | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
| PCT/EP1993/001352 WO1993024521A1 (en) | 1992-05-30 | 1993-05-28 | Bpc peptides, their preparation and use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO112506B1 true RO112506B1 (ro) | 1997-10-30 |
Family
ID=8209663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO94-00101A RO112506B1 (ro) | 1992-05-30 | 1993-05-28 | Peptide cu activitate organo-protectoare |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6211151B1 (ro) |
| EP (2) | EP0572688B1 (ro) |
| JP (1) | JP2783681B2 (ro) |
| KR (1) | KR0180256B1 (ro) |
| AT (2) | ATE152734T1 (ro) |
| AU (1) | AU4319693A (ro) |
| BG (1) | BG61477B1 (ro) |
| CA (1) | CA2114313C (ro) |
| CZ (1) | CZ284972B6 (ro) |
| DE (2) | DE69219590T2 (ro) |
| DK (2) | DK0572688T3 (ro) |
| ES (2) | ES2103854T3 (ro) |
| FI (1) | FI120454B (ro) |
| GR (2) | GR3024379T3 (ro) |
| HU (1) | HU224073B1 (ro) |
| NO (1) | NO310027B1 (ro) |
| PL (1) | PL176208B1 (ro) |
| RO (1) | RO112506B1 (ro) |
| RU (1) | RU2111214C1 (ro) |
| SK (1) | SK278507B6 (ro) |
| UA (1) | UA32523C2 (ro) |
| WO (1) | WO1993024521A1 (ro) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2103854T3 (es) | 1992-05-30 | 1997-10-01 | Sikiric Predrag | Peptidos con actividad organo protectiva, procedimiento para la preparacion de los mismos y su utilizacion en la terapia. |
| PL304666A1 (en) * | 1992-11-16 | 1995-01-09 | Predrag Sikiric | Peptides of organoprotective activity, method of obtaining them and their application in therapy |
| CN1166683C (zh) * | 1997-05-23 | 2004-09-15 | 普雷德拉格·西基瑞克 | 具有器官保护活性的新的bpc肽盐,其制备方法及其在治疗中的应用 |
| US6844315B2 (en) | 1998-05-20 | 2005-01-18 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Immunoregulator |
| US8680059B2 (en) | 1998-05-20 | 2014-03-25 | Biotempt B.V. | Oligopeptide acetate and formulations thereof |
| EP1138692A1 (en) | 2000-03-29 | 2001-10-04 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Fragments of human chorionic gonadotropin (hcg) as immunoregulator |
| US20030220258A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-11-27 | Robbert Benner | Treatment of ischemic events |
| US7358330B2 (en) | 2001-03-29 | 2008-04-15 | Biotempt B.V. | Immunoregulatory compositions |
| EP1300418A1 (en) * | 2001-10-04 | 2003-04-09 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Gene regulation by oligopeptides |
| USRE43279E1 (en) | 2000-03-29 | 2012-03-27 | Biotemp B.V. | Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration |
| US7560433B2 (en) | 2001-12-21 | 2009-07-14 | Biotempt B.V. | Treatment of multiple sclerosis (MS) |
| US7786084B2 (en) * | 2001-12-21 | 2010-08-31 | Biotempt B.V. | Treatment of burns |
| US7517529B2 (en) * | 2003-04-08 | 2009-04-14 | Biotempt B.V. | Treatment of type I diabetes |
| RU2252779C1 (ru) * | 2003-09-23 | 2005-05-27 | Институт Молекулярной Генетики Российской Академии Наук (Имг Ран) | Способ профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта |
| US20090227505A1 (en) * | 2004-01-07 | 2009-09-10 | Biotempt B.V. | Methods and uses for protein breakdown products |
| CN101217971B (zh) | 2005-07-05 | 2011-11-09 | 比奥滕普特公司 | 肿瘤的治疗 |
| JP5307559B2 (ja) * | 2006-03-07 | 2013-10-02 | バイオテンプト ビー．ブイ． | 放射線障害の制御の為にペプチドを使用する方法 |
| EP1864692A1 (en) * | 2006-06-07 | 2007-12-12 | Biotempt B.V. | Use of peptides for the control of radiation injury |
| WO2008100140A1 (en) * | 2007-02-12 | 2008-08-21 | Biotempt B.V. | Treatment of trauma hemorrhage with short oligopeptides |
| SI24318A (sl) | 2013-03-13 | 2014-09-30 | Diagen D.O.O. | Nove stabilne soli pentadekapeptida, postopek za njihovo pripravo, njihova uporaba za izdelavo farmacevtskih pripravkov in njihova uporaba v terapiji |
| CN113683663A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-11-23 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种机体保护多肽粗品的纯化方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8717300D0 (en) * | 1987-07-22 | 1987-08-26 | Nat Res Dev | Cyclosporins |
| CA1337781C (en) * | 1987-08-21 | 1995-12-19 | Takanori Nakamura | Polypeptide from horseshoe crab exhibiting affinity for lipopolysaccharide and method of preparation |
| YU176089A (sh) * | 1989-09-12 | 1992-09-07 | Sikirić, Predrag | Postupak za pripremu supstancije bpc i supstancija bpc |
| ES2103854T3 (es) | 1992-05-30 | 1997-10-01 | Sikiric Predrag | Peptidos con actividad organo protectiva, procedimiento para la preparacion de los mismos y su utilizacion en la terapia. |
-
1992
- 1992-05-30 ES ES92109145T patent/ES2103854T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 DE DE69219590T patent/DE69219590T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 EP EP92109145A patent/EP0572688B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 DK DK92109145.0T patent/DK0572688T3/da active
- 1992-05-30 AT AT92109145T patent/ATE152734T1/de active
-
1993
- 1993-05-28 US US08/185,883 patent/US6211151B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-05-28 WO PCT/EP1993/001352 patent/WO1993024521A1/en not_active Ceased
- 1993-05-28 CA CA002114313A patent/CA2114313C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 DE DE69312232T patent/DE69312232T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 UA UA93003868A patent/UA32523C2/uk unknown
- 1993-05-28 DK DK93912825.2T patent/DK0601154T3/da active
- 1993-05-28 RU RU94041224A patent/RU2111214C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 SK SK96-94A patent/SK278507B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 AU AU43196/93A patent/AU4319693A/en not_active Abandoned
- 1993-05-28 JP JP6500207A patent/JP2783681B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 ES ES93912825T patent/ES2107033T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 HU HU9400252A patent/HU224073B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 CZ CZ94205A patent/CZ284972B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 RO RO94-00101A patent/RO112506B1/ro unknown
- 1993-05-28 EP EP93912825A patent/EP0601154B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 PL PL93302304A patent/PL176208B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 AT AT93912825T patent/ATE155485T1/de active
-
1994
- 1994-01-26 FI FI940375A patent/FI120454B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-01-27 KR KR1019940700258A patent/KR0180256B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-01-28 BG BG98426A patent/BG61477B1/bg unknown
- 1994-01-28 NO NO940299A patent/NO310027B1/no not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-08-07 GR GR970402020T patent/GR3024379T3/el unknown
- 1997-10-01 GR GR970402552T patent/GR3024905T3/el unknown
-
1998
- 1998-12-02 US US09/203,921 patent/US6268346B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO112506B1 (ro) | Peptide cu activitate organo-protectoare | |
| CA2020838C (en) | Hemoregulatory peptides | |
| HK1004554B (en) | Hemoregulatory peptides | |
| RU2116311C1 (ru) | Пептиды, обладающие органозащитной активностью, фармакологически активная композиция | |
| HK1001004B (en) | Bpc peptides, their preparation and use | |
| AU694701B2 (en) | Peptides with organo-protective activity, their preparation and use |