CZ201599A3

CZ201599A3 - Pevné formy solí dolutegraviru a způsob jejich přípravy

Info

Publication number: CZ201599A3
Application number: CZ2015-99A
Authority: CZ
Inventors: Iva Obadalová; Ondřej Dammer; Lukáš Krejčík; Jaroslava Svobodová; Jaroslav HavlĂÄŤek
Original assignee: Zentiva, K.S.
Priority date: 2015-02-13
Filing date: 2015-02-13
Publication date: 2016-08-24
Also published as: EP3256477A1; WO2016127965A1

Abstract

Řešení se týká pevných forem solí dolutegraviru vzorce I, (4R,12aS)-N-(2,4-difluorbenzyl)-7-hydroxy-4-methyl-6,8-dioxo-3,4,6,8,12,12a-hexahydro-2H-pyridol[1´,2´:4,5]pyrazinol[2,1-b][1,3]oxazin-9-karboxamidu, způsobu jejich přípravy a použití do lékové formy. Dobře využitelné jsou například pevné formy dolutegraviru s aminy (např. diethylaminem, N,N´-dibenzylethylendiaminem, megluminem, ethanolaminem, diethanolaminem, tromethaminem, terc-butylaminem), draslíkem, hořčíkem a vápníkem. Tyto soli mohou být s výhodou použity pro zvýšení čistoty dolutegraviru a jeho stabilizaci z hlediska chemické i polymorfní čistoty.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových pevných forem solí dolutegraviru (I), (47?, 12aA)-V-(2,4-difluorobenzyl)-7-hydroxy-4-methyl-6,8-dioxo-3,4,6,8,12,12a-hexahydro-2H-pyrido[r,2':4,5]pyrazino[2,l-ó][l,3]oxazin-9-karboxamidu, způsobu jejich přípravy a použití do lékové formy. Dobře využitelné jsou například pevné formy dolutegraviru s aminy (např. diethylaminem, ΛζΑ'-dibenzylethylendiaminem, megluminem, ethanolaminem, diethanolaminem, tromethaminem, terc-butylaminem), draslíkem, hořčíkem a vápníkem. Tyto soli mohou být s výhodou použity pro zvýšení čistoty dolutegraviru a jeho stabilizaci z hlediska chemické i polymorfní čistoty.

(I)

Dolutegravir je indikován v kombinaci s dalšími antiretrovirotiky k léčbě dospělých a dospívajících pacientů ve věku nad 12 let nakažených virem lidské imunodeficience (HIV). Dolutegravir inhibuje HIV integrázu vazbou na aktivní místo integrázy a blokováním transferových postupů integrace retrovirové deoxyribonukleové kyseliny (DNA), což je důležité pro replikační cyklus HIV.

Dosavadní stav techniky

Poprvé je dolutegravir zmíněn v patentové přihlášce W02006116764, ve které není uvedeno nic bližšího k charakteru pevné formy produktu. V patentové přihlášce WO2010068253 jsou již popsány krystalické sodné soli dolutegraviru, bezvodá sul a monohydrát. Tyto soli jsou zde charakterizovány pomocí XRPD a IČ. Bezvodá sodná sul v krystalické podobě se vyskytuje i v originálním léčivém přípravku Tivicay. Poslední známá pevná forma, tj. amorfní sodná sůl dolutegraviru, je popsána v patentové přihlášce WO2013038407 pomocí metod XRPD, DSC, TGA, IČ a Ramanovy spektroskopie. Příprava jiných solí nebyla dosud publikována.

Podstata vynálezu

Dolutegravir tvoří velmi ochotně soli s aminy, například s diethylaminem, Λζ-V-dibenzylethylendiaminem, megluminem, tromethaminem, ethanolaminem, diethanolaminem, fórc-butylaminem a aminokyselinami. Amin se váže na dolutegravir vmolámím poměru amin k dolutegraviru 2:1 až 1:4, ideálně však v molámích poměrech 1:1 nebo 1:2. Dále byla také připravena draselná, hořečnatá a vápenatá sůl dolutegraviru, které mohou být dále využity pro vývoj a výrobu konkrétní lékové formy a konkrétního léčivého přípravku.

Podrobný popis vynálezu

Dolutegravir tvoří soli s alifatickými i aromatickými aminy, dále také sole draselné, hořečnaté a vápenaté. Dobře využitelné sole s aminy mohou být například diethylamin,

N, V-dibenzylethylendiamin, meglumin, tromethamin, ethanolamin, diethanolamin, terc-butylamin a celá skupina aminokyselin. Výhody solí dolutegraviru s aminy spočívají v jejich snadné přípravě a vysoké tendenci krystalovat. Dolutegravir tvoří soli s aminy velmi ochotně a vzniklé soli mají, na rozdíl od soli hořečnaté nebo vápenaté, krystalickou povahu. Využití solí dolutegraviru s aminy spočívá v možnosti zvýšení chemické čistoty během krystalizace a možných rekrystalizací. Díky tomu dochází ke stabilizaci dolutegraviru z hlediska chemické i polymorfní čistoty. V tabulce 1 jsou shrnuty chemické čistoty výchozího dolutegraviru a připravených solí dolutegraviru s aminy po první krystalizaci.

Tabulka 1: Chemická čistota dolutegraviru a jeho solí s aminy

—..	chemická čistota (HPLC)
dolutegravir (výchozí)	98,2 %
sůl dolutegraviru s diethylaminem	98,7 %
sůl dolutegraviru s N,jV'-dibenzylethylendiaminem	99,7 %
sůl dolutegraviru s ethanolaminem	98,9 %
sůl dolutegraviru s tromethaminem	99,5 %
sůl dolutegraviru s lysinem	99,0 %

Soli dolutegraviru s aminy byly také studovány pomocí zátěžových testů a následné kontroly chemické čistoty. Výsledky těchto testů jsou shrnuty v tabulce 2. Testy se soustředily na ve farmacii využívané aminy, A,jV'-dibenzylethylendiamin (benzathin), ethanolamin (olamin) a tromethamin.

Tabulka 2: Chemická čistota (HPLC) solí dolutegraviru s aminy před a po zátěžových testech

	dolutegravir	dolutegravir benzathin	dolutegravir olamin	dolutegravir tromethamin
výchozí látka	98,2 %	99,7 %	98,9 %	99,5 %
80 °C, 1%RV, 72 hod	97,7 %	99,6 %	98,5 %	99,4 %
80 °C, 75%RV, 72 hod	97,4 %	99,4 %	98,3 %	99,0 %
RT, 10 dní, v přítomnosti P2O5	98,2 %	99,7 %	98,8 %	99,5 %
RT, 10 dní, v přítomnosti H2O	98,0 %	99,6 %	98,2 %	99,1 %

Tvorba solí dolutegraviru s aminy byla potvrzena analytickými metodami, RTG práškovou difrakcí, diferenční skenovací kalorimetrií a pomocí nukleární magnetické rezonance v pevné fázi. Záznam RTG práškové difrakce (XRPD) od jednotlivých solí dolutegraviru - s diethylaminem (obr. 5), s N, A-dibenzylethylendiaminem (obr. 8), s ethanolaminem (obr. 11), s tromethaminem (obr. 15) a slysinem (obr. 18) se liší od XRPD záznamu dolutegraviru (obr. 2). Stejně tak spektrum nukleární magnetické rezonance v pevné fázi (ssNMR) jednotlivých solí dolutegraviru - s diethylaminem (obr. 4), AA-dibenzylethylendiaminem (obr. 7), s ethanolaminem (obr. 10), s tromethaminem (obr. 14) a s lysinem (obr. 17) se liší od spekter ssNMR dolutegraviru (obr. 1). Pomocí diferenční skenovací kalorimetrie (DSC) byly naměřeny následující teploty tání, dolutegravir 189,5 °C (obr. 3), sůl dolutegraviru s diethylaminem 186,3 °C (obr. 6), sůl dolutegraviru s A,A'-dibenzylethylendiaminem 155,7 °C (obr. 9), sůl dolutegraviru s ethanolaminem 188,4 °C (obr. 12), sůl dolutegraviru s tromethaminem 169,5 °C °C (obr. 16) a sůl dolutegraviru s lysinem

196,5 °C (obr. 19).

Sůl dolutegraviru s ethanolaminem se může vyskytovat také v hydratované formě, XRPD na obr. 13. Tato forma byla potvrzena termogravimetrickou analýzou (TGA), podle které obsahuje 17 % vody a 14 % ethanolaminu. Bezvodá forma soli dolutegraviru s ethanolaminem obsahuje 1 % vody a 16% ethanolaminu. Sůl dolutegraviru s diethylaminem obsahuje podle TGA 1 % vody a 14 % diethylaminu. Sůl dolutegraviru s A,A-dibenzylethylendiaminem obsahuje podle TGA 2 % vody. Sůl dolutegraviru s tromethaminem obsahuje podle TGA pod 1 % vody a sůl s lysinem obsahuje 4 % vody.

Příprava soli dolutegraviru s aminem podle varianty A zahrnuje následující kroky:

al rozpuštění a/nebo disperze směsi dolutegraviru a aminu v rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel;

b/ odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku a/.

Příprava soli dolutegraviru s aminem podle varianty B zahrnuje následující kroky:

a/ rozpuštění a/nebo disperze dolutegraviru v rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel;

b/ přidání aminu v pevné formě nebo ve formě roztoku;

c/ odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku b/.

Rozpouštění nebo dispergování může ve variantách přípravy A a B probíhat v organickém rozpouštědle vybraného z Cl až C8 uhlovodíků (alifatických nebo aromatických), Cl až C4 alkoholů, Cl až C8 esterů, Cl až C8 ketonů, Cl až C6 etherů (acyklických nebo cyklických), Cl až C4 nitrilů, vody nebo v jejich směsích v rozmezí od 20 °C po teplotu varu rozpouštědla, případně rozpouštědel. S výhodou probíhá vmethanolu, ethanolu, 1-propanolu,

2-propanolu, acetonu, tetrahydrofuranu nebo v jejich směsích. Amin může být v kroku b/ ve variantě přípravy B přidán v pevné formě nebo ve formě roztoku, sůl s dolutegravirem vzniká stejně ochotně v obou případech. Následně je směs obvykle ochlazena, s výhodou na rozmezí 20 °C až 30 °C a nechána krystalovat. Sůl může být izolována buď přímo filtrací, nebo může následovat zahuštění směsi, případně odpaření rozpouštědel.

Příprava soli dolutegraviru s aminem podle varianty C probíhá přímo při formulačním procesu, s výhodou přímo při vlhké granulaci. Do homogenizátoru se kromě samotného dolutegraviru a excipientů předloží i příslušný ekvivalentní díl aminu - diethylaminu, A/vV-dibenzylethylendiaminu, megluminu, tromethaminu, ethanolaminu, diethanolaminu, /erc-butylaminu nebo lysinu. Při vlhké granulaci dochází k tvorbě soli.

Dolutegravir tvoří soli s aminy v molámích poměrech aminu k dolutegraviru v rozmezí 2:1 až 1:4, ideálně však 1:1 až 1:2.

Sůl dolutegraviru a aminu vzniká zpravidla v minimálně 80 % výtěžku, s výhodou v 90 % výtěžku, přičemž chemická čistota, měřena HPLC, není nižší než chemická čistota vstupního dolutegraviru. Zpravidla se naopak stává, že chemická čistota soli je výrazně vyšší než čistota vstupního dolutegraviru. Sůl dolutegraviru s aminem lze tudíž s výhodou použít k čištění surového dolutegraviru.

Sůl dolutegraviru s diethylaminem vykazuje krystalickou povahu. RTG práškový záznam této soli je uveden na obrázku 5. Charakteristické píky jsou 5,5; 11,2; 14,3; 16,8; 19,1 a

24,4 ± 0,2 °2-theta. Difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15% jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3: Difrakční píky soli dolutegraviru s diethylaminem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [A = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
5,55	15,925	38,0
7,39	11,951	4,2
10,32	8,563	31,2
11,15	7,927	100,0
11,97	7,386	10,2
14,27	6,203	49,7
14,80	5,980	8,3
15,81	5,602	7,4
16,78	5,279	29,3
19,14	4,634	70,5
20,58	4,312	8,1
21,05	4,218	19,5
21,95	4,047	17,9
22,84	3,891	5,4
23,30	3,814	8,5
24,40	3,645	21,1
25,64	3,472	12,1
28,08	3,175	10,2
28,84	3,093	5,1

Sůl dolutegraviru s 7V,7V'-dibenzylethylendiaminem vykazuje krystalickou povahu. RTG práškový záznam této soli je uveden na obrázku 8. Charakteristické píky jsou 7,2; 11,2; 16,6; 18,0 21,8 a 23,6 ± 0,2 °2-theta. Difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15 % jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 4: Difrakční píky soli dolutegraviru s N, Y-dibenzylethylendiaminem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [Á = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
6,04	14,631	7,2
7,17	12,320	100,0
11,16	7,920	26,5

12,13	7,293	6,4
13,11	6,748	5,6
13,57	6,518	7,7
15,81	5,600	5,8
16,56	5,348	24,6
17,36	5,103	3,4
18,01	4,921	35,3
19,27	4,602	4,9
19,98	4,441	2,5
21,79	4,075	27,9
23,55	3,775	27,8
25,13	3,541	5,1
25,87	3,441	3,3
27,92	3,193	4,5
29,80	2,996	4,9
31,25	2,860	3,2
32,27	2,772	2,5

Sůl dolutegraviru s ethanolaminem vykazuje krystalickou povahu a může se vyskytovat v bezvodé nebo hydratované formě. RTG práškový záznam bezvodé formy této soli je uveden na obrázku 11, hydratované formy na obrázku 13. Charakteristické píky bezvodé formy soli dolutegraviru s ethanolaminem jsou 7,2; 12,5; 18,3; 19,6 a 23,4 ± 0,2 °2-theta, její difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15 % jsou uvedeny v tabulce 5. Charakteristické píky hydratované formy soli dolutegraviru s ethanolaminem jsou 6,9; 11,5; 19,7 and 22,2 ± 0,2 °2-theta, její difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15 % jsou uvedeny v tabulce 6.

Tabulka 5: Difrakční píky bezvodé soli dolutegraviru s ethanolaminem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [A = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
7,19	12,290	100,0
9,61	9,199	28,4
12,54	7,053	40,6
15,11	5,858	9,1
18,26	4,854	35,6
19,06	4,653	15,0
19,57	4,532	28,6
20,52	4,324	16,2
21,36	4,157	4,6
22,39	3,968	10,5 ______
23,42	3,795	16,4
26,19	3,400	11,6
27,90	3,196	7,1 Ί

28,53	3,127	4,7
31,35	2,852	5,2
34,34	2,609	1,7
35,12	2,553	2,5

Tabulka 6: Difrakční píky hydratované formy soli dolutegraviru s ethanolaminem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [Á = 0,l nm]	Rel. intenzita [%]
6,90	12,798	100,0
7,76	11,388	8,3
11,52	7,674	35,6
13,16	6,721	3,6
14,86	5,957	3,1
17,52	5,058	4,7
18,54	4,782	5,9
19,41	4,570	10,8
19,67	4,510	13,6
20,44	4,341	3,4
22,19	4,002	8,5
23,50	3,783	5,1
24,77	3,591	3,9
26,15	3,406	2,8
26,56	3,354	2,9
27,91	3,194	2,7
28,35	3,146	2,9

Sůl dolutegraviru s tromethaminem vykazuje krystalickou povahu. RTG práškový záznam této soli je uveden na obrázku 15. Charakteristické píky jsou 7,9; 15,6; 20,7; 22,4; 26,0 a 26,8 ± 0,2 °2-theta. Difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15% jsou uvedeny v tabulce 7.

Tabulka 7: Difrakční píky soli dolutegraviru s tromethaminem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [Á = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
5,19	17,012	6,2
7,86	11,245	100,0
10,35	8,538	103
11,42	7,741	6,2
15,55	5,694	70,2
16,11	5,496	13,8
17,66	___________5,019___________	22,5

18,91	4,690	8,3
20,19	4,394	21,0
20,69	4,289	37,6
21,00	4,226	14,5
22,43	3,961	27,0
23,34	3,808	9,4
23,73	3,747	9,6
25,05	3,553	27,0
25,99	3,426	46,1
26,77	3,328	35,7
28,29	3,152	5,7
30,62	2,918	3,0
32,15	2,782	4,0
32,69	2,737	8,3

Sůl dolutegraviru s lysinem vykazuje krystalickou povahu. RTG práškový záznam této soli je uveden na obrázku 18. Charakteristické píky jsou 7,3; 9,6; 13,8; 17,2; 23,0 a 25,4° 2theta. Difrakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15 % jsou uvedeny v tabulce 8.

Tabulka 8: Difrakční píky soli dolutegraviru s lysinem

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [A = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
7,33	12,043	100,0
9,58	9,229	50,2
9,99	8,851	23,3
13,85	6,390	19,8
14,37	6,159	6,5
14,69	6,025	8,2
17,16	5,163	17,3
18,50	4,791	13,5
19,19	4,623	12,3
20,02	4,433	6,9
21,41	4,146	20,5
22,13	4,013	18,6
23,04	3,857	43,3
23,81	3,733	18,0
25,44	3,498	29,1
26,31	3,384	10,7
27,17	3,280	15,8
28,87	3,090	8,7
34,23	2,617	5,4

Dolutegravir tvoří soli i s alkalickými kovy a kovy alkalických zemin, konkrétně soli draselnou, hořečnatou a vápenatou, přičemž draselná sůl vykazuje krystalickou povahu, zatímco soli hořečnatá a vápenatá povahu amorfní. Pomocí diferenční skenovací kalorimetrie (DSC) byla naměřena teplota tání draselné soli dolutegraviru 318,6 °C.

Draselná sůl dolutegraviru vykazuje krystalickou povahu. RTG práškový záznam této soli je uveden na obrázku 20. Charakteristické píky jsou 5,2; 9,0; 16,1; 21,5 a 28,3 ± 0,2° 2-theta. Difřakční píky s relativní intenzitou vyšší než 15 % jsou uvedeny v tabulce 9.

Tabulka 9: Difřakční píky draselné soli dolutegraviru

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [Á = 0,1 nm]	Rel. intenzita [%]
5,22	16,921	88,9
6,47	13,642	10,1
7,98	11,077	54,1
9,00	9,817	100,0
9,85	8,973	16,2
11,16	7,920	15,8
12,74	6,945	11,1
13,38	6,611	9,1
13,98	6,331	13,2
14,93	5,928	11,2
16,05	5,519	23,1
18,10	4,898	14,5 ___
19,00	4,666	8,5
20,45	4,340	23,0
21,45	4,139	30,6
21,74	4,084	28,7
22,50	3,948	19,4
24,09	3,692	14,2
24,66	3,607	22,7
25,70	3,464	20,8_____
26,34	3,381	9,1
28,26	3,156	45,3
29,93	2,983	7,6
30,41	2,937	11,6

Hořečnatá a vápenatá sůl dolutegraviru vykazují amorfní povahu. RTG práškový záznam hořečnaté soli je uveden na obrázku 21.

Draselná, hořečnatá a vápenatá sůl jsou připravitelné smícháním dolutegraviru s reagentem obsahujícím draselné (K⁺), hořečnaté (Mg²⁺) nebo vápenaté (Ca²⁺) kationty. Tato příprava může probíhat samostatně, například při krystalizací, nebo až při formulačním procesu, například při vlhké granulaci. Při tvorbě soli při formulačním procesu se do homogenizátoru předloží kromě excipientů dolutegravir spolu s reagentem obsahujícím draselné (K⁺), hořečnaté (Mg²⁺) nebo vápenaté (Ca²⁺) kationty.

Pokud probíhá příprava těchto solí samostatně, v roztoku, s výhodou při krystalizací, zahrnuje následující kroky:

b/ přidání reagentu, obsahujícího draselné (K⁺), hořečnaté (Mg²⁺) nebo vápenaté (Ca²⁺) kationty, v pevné formě nebo ve formě roztoku;

c/ odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku b/.

Rozpouštění nebo dispergování může probíhat v organickém rozpouštědle vybraného z Cl až C8 uhlovodíků (alifatických nebo aromatických), Cl až C4 alkoholů, Cl až C8 esterů, Cl až C8 ketonů, Cl až C6 etherů (acyklických nebo cyklických), Cl až C4 nitrilů, vody nebo v jejich směsích v rozmezí od 20 °C po teplotu varu rozpouštědla, případně rozpouštědel. S výhodou probíhá vmethanolu, ethanolu, 1-propanolu, 2-propanolu, acetonu, vodě nebo v jejich směsích. Reagent může být v kroku b/ přidán v pevné formě nebo ve formě roztoku, sůl s dolutegravirem vzniká stejně ochotně v obou případech. Následně je směs obvykle ochlazena, s výhodou na rozmezí -20 °C až 30 °C a nechána krystalovat. Sůl může být izolována buď přímo filtrací, nebo může následovat zahuštění směsi, případně odpaření rozpouštědel.

Přehled obrázků

Obr. 1: ssNMR záznam dolutegraviru

Obr. 2: XRPD záznam dolutegraviru

Obr. 3: DSC záznam dolutegraviru

Obr. 4: ssNMR záznam soli dolutegraviru s diethylaminem

Obr. 5: XRPD záznam soli dolutegraviru s diethylaminem

Obr. 6: DSC záznam soli dolutegraviru s diethylaminem

Obr. 7: ssNMR záznam soli dolutegraviru s ΛζΝ-dibenzylethylendiaminem

Obr. 8: XRPD záznam soli dolutegraviru s X/V-dibenzylethylendiaminem

Obr. 9: DSC záznam soli dolutegraviru s N, jV-dibenzylethylendiaminem Obr. 10: ssNMR záznam bezvodé soli dolutegraviru s ethanolaminem Obr. 11: XRPD záznam bezvodé soli dolutegraviru s ethanolaminem Obr. 12: DSC záznam bezvodé soli dolutegraviru s ethanolaminem Obr. 13: XRPD záznam hydratované soli dolutegraviru s ethanolaminem

Obr. 14: ssNMR záznam soli dolutegraviru s tromethaminem

Obr. 15: XRPD záznam soli dolutegraviru s tromethaminem

Obr. 16: DSC záznam soli dolutegraviru s tromethaminem

Obr. 17: ssNMR záznam soli dolutegraviru s lysinem

Obr. 18: XRPD záznam soli dolutegraviru s lysinem

Obr. 19: DSC záznam soli dolutegraviru s lysinem

Obr. 20: XRPD záznam draselné soli dolutegraviru

Obr. 21: XRPD záznam hořečnaté soli dolutegraviru

Příklady provedení

Dolutegravir byl připraven podle postupu zveřejněného v patentové přihlášce W02006116764. Chemická čistota takto připraveného dolutegraviru byla 98,2 % (HPLC). NMR spektrum v pevné fázi (Obr. 1), XRPD záznam (Obr. 2) i DSC záznam (Obr. 3) potvrzují strukturu dolutegraviru. ’H NMR (500 MHz, dmso-íZ6): δ 1.33 (d, J= 7.0 Hz, 3H); 1.54 (m, 1H); 2.00 (m, 1H); 3.89 (m, 1H); 4.03 (m, 1H); 4.35 (dd, J= 13.8 Hz, J- 5.9 Hz, 1H); 4.54 (d, J = 6.1 Hz, 2H); 4.56 (dd, J= 13.8 Hz, J= 4.0 Hz, 1H); 4.79 (m, 1H); 5.45 (dd, J- 5.7 Hz, J= 4.2 Hz, 1H); 7.06 (td, J= 8.6 Hz, J= 2.5 Hz, 1H); 7.24 (td, J= 10.3 Hz, J= 2.5 Hz, 1H); 7.38 (m, 1H); 8.50 (s, 1H); 10.36 (t, J= 5.9 Hz); 12.51 (s, 1H). ¹³C NMR (125.8 MHz, dmso-ító): δ 15.4; 29.3; 35.9; 44.9; 51.3; 62.2; 76.3; 104.0; 111.6; 115.6; 117.0; 122.6; 130.9; 140.9; 154.8; 160.3; 161.7; 162.5; 163.9; 170.5 (některé ze signálů jsou díky C-F interakcím rozštěpeny).

Příklad 1

Příprava soli dolutegraviru s diethylaminem

Dolutegravir (200 mg, 0,48 mmol) se spolu s diethylaminem (70 mg, 0,95 mmol) rozpustí za zvýšené teploty v methanolu. Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se nechá odpařit za laboratorní teploty. Bylo získáno 190 mg (81% výtěžek) krystalické soli dolutegraviru s diethylaminem v molámím poměru 1:1 (*H NMR).

Příklad 2

Příprava soli dolutegraviru s A^-dibenzylethylendiaminem

Dolutegravir (2 g, 4,77 mmol) se spolu s N.N-dibenzylethylendiaminem (1,2 g, 5,01 mmol) rozpustí za zvýšené teploty ve směsi 10 ml tetrahydrofuranu a 25 ml methanolu. Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se nechá krystalovat v lednici přes noc. Vzniklé krystaly jsou odsáty a vysušeny. Bylo získáno 2.8 g (91 % výtěžek) krystalické soli dolutegraviru s N,N'-dibenzylethylendiaminem v molámím poměru 2:1 ('H NMR).

Příklad 3

Příprava soli dolutegraviru s ethanolaminem

Dolutegravir (2 g, 4,77 mmol) se spolu s ethanolaminem (310 mg, 5,01 mmol) rozpustí za zvýšené teploty ve směsi tetrahydrofuranu a methanolu. Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se nechá krystalovat v lednici přes noc. Vzniklé krystaly jsou odsáty a vysušeny volně za laboratorní teploty. Bylo získáno 2.20 g (94 % výtěžek) hydratované formy krystalické soli dolutegraviru s ethanolaminem v molámím poměru 1:1 (^!H NMR). Pokud jsou krystaly sušeny ve vakuové sušárně při 40 °C je získána bezvodá forma krystalické soli dolutegraviru s ethanolaminem v molámím poměru 1:1 (^!H NMR).

Příklad 4

Příprava soli dolutegraviru s tromethaminem

Dolutegravir (2 g, 4,77 mmol) se spolu s tromethaminem (610 mg, 5,01 mmol) rozpustí za zvýšené teploty v methanolu. Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se nechá krystalovat v lednici přes noc. Vzniklé krystaly jsou odsáty a vysušeny. Bylo získáno 2.4 g (92% výtěžek) krystalické soli dolutegraviru s tromethaminem v molámím poměru 1:1 (*H NMR).

Příklad 5

Příprava soli dolutegraviru s terc-butylaminem

Dolutegravir (200 mg, 0,48 mmol) se spolu s terc-butylaminem (70 mg, 0,95 mmol) rozpustí za zvýšené teploty ve směsi methanolu a tetrahydrofuranu. Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se produkt nechá krystalovat v lednici. Bylo získáno 205 mg (87% výtěžek) krystalické soli dolutegraviru s terc-butylaminem v molámím poměru 1:1 (’H NMR).

Příklad 6

Příprava soli dolutegraviru s lysinem

Dolutegravir (400 mg, 0,95 mmol) se spolu s lysinem (280 mg, 1,91 mmol) rozpustí za zvýšené teploty ve směsi methanolu a vody (1:1). Čirý roztok se nechá zvolna vychladnout na laboratorní teplotu a následně se nechá krystalovat v lednici. Vzniklé krystaly jsou odsáty a vysušeny. Bylo získáno 470 mg (88 % výtěžek) krystalické soli dolutegraviru s lysinem v molámím poměru 1:1 (’HNMR).

Příklad 7

Příprava draselné soli dolutegraviru

Dolutegravir (5,0 g, ll,92mmol) se spolu s hydroxidem draselným (23,8 mmol) rozpustí za zvýšené teploty ve směsi methanolu a vody. Následně se směs nechá vychladnout a krystalovat v lednici. Vzniklé krystaly jsou odsáty a vysušeny. Bylo získáno 4,45 g (89 % výtěžek) draselné soli dolutegraviru.

Příklad 8

Příprava hořečnaté soli dolutegraviru

Dolutegravir (500 mg, 1,19 mmol) se spolu s hydroxidem hořeěnatým (2,38 mmol) rozmíchá ve směsi methanolu a vody. Tato směs je v suspenzi míchána přes noc, následně zfiltrována a krystaly vysušeny. Bylo získáno 400 mg (80 % výtěžek) hořečnaté soli dolutegraviru.

Příklad 9

Příprava vápenaté soli dolutegraviru

Dolutegravir (500 mg, 1,19 mmol) se spolu s hydroxidem vápenatým (2,38 mmol) rozmíchá ve směsi methanolu a vody. Tato směs je míchána přes noc a následně nechána odpařit. Krystaly jsou vysušeny. Bylo získáno 490 mg (98 % výtěžek) hořečnaté soli dolutegraviru.

Příklad 10

Příprava soli dolutegraviru s TV^V-dibenzylethylendiamínem při vlhké granulaci

Do homogenizátoru byly předloženy suroviny: dolutegravir (5,2 g), 7V,7V-dibenzylethylendiamin (1,6 g), mannitol (14,6 g), mikrokrystalická celulóza (5,8 mg) a povidon (1,5 mg). Směs byla homogenizována 60 min při 20 otáčkách za minutu. Nakonec byl přidán stearylfumarát sodný (1,0 mg) a směs byla homogenizována dalších 10 min při 20 otáčkách za minutu.

Příklad 11

Příprava soli dolutegraviru s ethanolaminem při vlhké granulaci

Do homogenizátoru byly předloženy suroviny: dolutegravir (5,2 g), ethanolamin (0,4 g), mannitol (14,6 g), mikrokrystalická celulóza (5,8 mg) a povidon (1,5 mg). Směs byla homogenizována 60 min při 20 otáčkách za minutu. Nakonec byl přidán stearylfumarát sodný (1,0 mg) a směs byla homogenizována dalších 10 min při 20 otáčkách za minutu.

Příklad 12

Příprava soli dolutegraviru s tromethaminem při vlhké granulaci

Do homogenizátoru byly předloženy suroviny: dolutegravir (5,2 g), tromethamin (0,8 g), mannitol (14,6 g), mikrokrystalická celulóza (5,8 mg) a povidon (1,5 mg). Směs byla homogenizována 60 min při 20 otáčkách za minutu. Nakonec byl přidán stearylfumarát sodný (1,0 mg) a směs byla homogenizována dalších 10 min při 20 otáčkách za minutu.

Příklad 13

Farmaceutická kompozice produktu - jádra

Substance	Množství - jádro /mg/
Dolutegravir olamin	70,1
Mannitol	150,0
Mikrokrystalická celulóza	62,0
Povidon	15,5
Stearylfumarát sodný	12,4

Do homogenizátoru byly předloženy suroviny: dolutegravir olamin, mannitol, mikrokrystalická celulóza a povidon. Směs byla homogenizována 15 min při 20 otáčkách za minutu. Nakonec byl přidán stearylfumarát sodný a směs byla homogenizována další 3 min při 20 otáčkách za minutu. Výše popsaným způsobem vzniklá tabletovina byla stlačena na rotační tabletovačce a použita pro výrobu jader o přibližné hmotnosti 310 mg.

Seznam analytických metod

Měřící parametry XRPD: Difraktogramy byly naměřeny na difraktometru X'PERT PRO MPD PANalytical, použité záření CuKa (λ = 1,542 Á), excitační napětí: 45 kV, anodový proud: 40 mA, měřený rozsah: 2 - 40° 20, velikost kroku: 0,01° 20, měření probíhalo na plochém práškovém vzorku, který byl nanesen na Si destičku. Pro nastavení primární optiky byly použity programovatelné divergenční clonky s ozářenou plochou vzorku 10 mm, Sollerovy clonky 0,02 rad a protirozptylová clonka ‘Λ⁰. Pro nastavení sekundární optiky byl použit detektor

X'Celerator s maximálním otevřením detekční štěrbiny, Sollerovy clonky 0,02 rad a protirozptylová clonka 5,0 mm.

Spektra nukleární magnetické rezonance (NMR) byla naměřena na přístroji Broker Avance 500. 'H spektra byla měřena při frekvenci 500,13 MHz, ¹³C při frekvenci 125,8 MHz. Vzorek byl měřen v deuterovaném rozpouštědle uvedeném u konkrétní analýzy, standardně při 25 °C (pokud není u konkrétní analýzy uvedeno jinak). Chemický posun δ je vyjádřen jako ppm, interakční konstanty J jsou uvedeny v Hz. Spektra byla standardně referencována na zbytkový signál rozpouštědla.

Uhlíková spektra nukleární magnetické rezonance v pevném stavu (ssNMR) byla měřena na přístroji Avance 400 WB Bruker metodou CP/MAS v rotoru 4 mm při otáčkách 13 kHz, standardně při 25 °C.

Záznamy diferenční skenovací kalorimetrie (DSC) byly naměřeny na přístroji DSC Pyris 1 od firmy Perkin Elmer. Navážka vzorku do standardního AI kelímku (40 pL) byla mezi 2-4 mg a rychlost ohřevu 10 °C / min. Teplotní program, který byl použit je složen z 1 stabilizační minuty na teplotě 20 °C a poté z ohřevu do 300 °C rychlostí ohřevu 10 °C/min. Jako nosný plyn byl použit 4.0 N2 o průtoku 20 ml/min.

Záznamy termogravimetrické analýzy (TGA) byly naměřeny na přístroji TGA 6 od firmy Perkin Elmer. Navážka vzorku do korundového kelímku byla 4-20 mg a rychlost ohřevu 10 °C / min. Teplotní program, který byl použit je složen z 1 stabilizační minuty na teplotě 20 C a poté z ohřevu do 250 °C rychlostí ohřevu 10 °C / min. Jako nosný plyn byl použit 4.0 N₂ o průtoku 20 ml / min.

Chemická čistota byla měřena kapalinovou chromatografií (HPLC):

Přístroj'. Waters Acquity UPLC, PDA detekce

Příprava vzorku: 4,0 mg zkoušeného vzorku rozpust te v 10,0 ml 40 /0 acetonitrilu

Kolona: - rozměr.^-1 = 0,10 m, 0 = 2,1 mm

- stacionárnífáze: Acquity BEH phenyl, 1,7 pm částice

- teplota kolony: 30 °C.

Mobilní fáze: A: 10 mM fosfátový pufr o pH 2,5

B·. methanol

Gradientová eluce:

Čas (min)	Průtok (ml / min)	% A	%B
0	0,3	70	30
15	0,3	40	60
18	0,3	10	90
20	0,3	10	90
21	0,3	70	30
23	0,3	70	30

spekrofotometr 258 nm

Detekce:

Nástřik:

μΐ

Teplota vzorku: 20 °C

Koncentrace vzorku: 0,4 mg / ml

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Draselná, hořečnatá nebo vápenatá sůl dolutegraviru nebo sůl dolutegraviru s aminem nebo jejich solvát.
2. Sůl dolutegraviru s aminem nebo její solvát podle nároku 1.

1 12
3. Sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 2, kde amin je vzorce R -NH2, R R NH nebo R'NH-CH₂CH₂-NHR², kde R¹, R² může být Cl až C8 alifatický a/nebo aromatický substituent, libovolně substituovaný hydroxylovými nebo karboxylovými skupinami, nebo její solvát.
4. Sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 3, vyznačující se tím, že amin je vybrán ze skupiny zahrnující diethylamin, 7V,7V'-dibenzylethylendiamin, ethanolamin, tromethamin, Zerc-butylamin a lysin.
5. Sůl dolutegraviru s diethylaminem podle nároku 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 5,5; 11,2; 14,3; 16,8; 19,1 a

24.4 ± 0,2 °2-theta.
6. Sůl dolutegraviru s TV.TV-dibenzylethylendiaminem podle nároku 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 7,2; 11,2; 16,6; 18,0 21,8 a 23,6 ± 0,2 °2-theta.
7. Sůl dolutegraviru s ethanolaminem podle nároku 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 7,2; 12,5; 18,3; 19,6 a

23.4 ± 0,2 °2-theta.
8. Hydratovaná forma soli dolutegraviru s ethanolaminem podle nároku 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa. 6,9, 11,5,

19,7 a 22,2 ± 0,2 °2-theta.
9. Sůl dolutegraviru s tromethaminem podle nároku 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 7,9; 15,6; 20,7; 22,4; 26,0 a

26,8 ± 0,2 °2-theta.
10. Sůl dolutegraviru s lysinem podle nároků 4, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 7,3; 9,6; 13,8; 17,2; 23,0 a 25,4° 2theta.
11. Sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 1 až 9, vyznačující se tím, že molámí poměr aminu k dolutegraviru je v rozmezí 2:1 až 1:4.
12. Sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 10, vyznačující se tím, že molámí poměr aminu k dolutegraviru je s výhodou 1:1 až 1:2.
13. Draselná sůl dolutegraviru nebo její solvát podle nároku 1.
14. Draselná sůl dolutegraviru podle nároku 13, v krystalické formě.
15. Draselná sůl dolutegraviru podle nároku 14, vykazující charakteristické reflexe v RTG práškovém záznamu s použitím záření CuKa: 5,2; 9,0; 16,1; 21,5 a 28,3 ± 0,2° 2-theta.
16. Hořečnatá sůl dolutegraviru nebo její solvát podle nároku 1.
17. Hořečnatá sůl dolutegraviru podle nároku 16, v amorfní formě.
18. Hořečnatá sůl dolutegraviru podle nároku 17, která je charakterizovaná teplotou skelného přechodu v rozmezí 231 až 234 °C.
19. Způsob přípravy soli dolutegraviru s aminem, charakterizované v nárocích 1 až 12, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:

a) rozpuštění a/nebo disperze směsi dolutegraviru a aminu v rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel;

b) odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku a).
20. Způsob přípravy soli dolutegraviru s aminem, charakterizované v nárocích 1 až 12, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:

a) rozpuštění a/nebo disperze dolutegraviru v rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel,

b) přidání aminu v pevné formě nebo ve formě roztoku;

c) odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku a).
21. Způsob přípravy soli dolutegraviru s aminem podle nároku 19 nebo 20, vyznačující se tím, že rozpouštění nebo disperse probíhá v organickém rozpouštědle vybraného z Cl až C4 alkoholů, Cl až C6 esterů, Cl až C6 ketonů, Cl ažC6 etherů (acyklických nebo cyklických) nebo v jejich směsích, s výhodou v methanolu, ethanolu, 1-propanolu nebo

2-propanolu, tetrahydrofuranu nebo v jejich směsích.
22. Způsob přípravy soli dolutegraviru s aminem podle nároku 21, vyznačující se tím, že k odstranění rozpouštědel ze směsi se přednostně použila lyofilizace, sprejové sušení nebo filtrace.
23. Způsob přípravy podle nároků 22, vyznačující se tím, že amin je vybrán ze skupiny zahrnující diethylamin, YT/'-dibenzylethylendiamin, ethanolamin, diethanolamin, meglumin, tromethamin, fórc-butylamin a lysin.
24. Způsob přípravy draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli dolutegraviru, charakterizované v nárocích 1,13 až 18, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:

a) rozpuštění a/nebo disperze dolutegraviru v rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel,

b) přidání reagentu, obsahujícího draselné (K⁺), hořečnaté (Mg ) nebo vápenaté (Ca ) kationty, v pevné formě nebo ve formě roztoku;

c) odstranění rozpouštědel ze směsi z kroku a).
25. Způsob přípravy draselné, hořečnaté a vápenaté soli dolutegraviru podle nároku 24, vyznačující se tím, že rozpouštění nebo disperse probíhá v organickém rozpouštědle vybraného z Cl až C8 uhlovodíků (alifatických nebo aromatických), Cl až C4 alkoholů, Cl až C8 esterů, Cl až C8 ketonů, Cl až C6 etherů (acyklických nebo cyklických), Cl až C4 nitrilů, ve vodě nebo v jejich směsích, s výhodou v methanolu, ethanolu, 1-propanolu,

2-propanolu, acetonu, vodě nebo v jejich směsích.
26. Způsob přípravy draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli dolutegraviru podle nároku 25, vyznačující se tím, že k odstranění rozpouštědel ze směsi se přednostně použila lyofilizace, sprej ové sušení nebo filtrace.
27. Způsob přípravy draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli dolutegraviru podle nároku 26, vyznačující se tím, že vhodným reagentem obsahující draselné (K ), hořečnaté (Mg ) nebo vápenaté (Ca²⁺) kationty jsou hydroxid draselný, hydroxid hořečnatý nebo hydroxid vápenatý.
28. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje draselnou, vápenatou, hořečnatou sůl dolutegraviru a/nebo sůl dolutegraviru s aminem nebo jejich solvát.
29. Farmaceutická kompozice podle nároku 28, obsahující draselnou sůl dolutegraviru a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný excipient.
30. Farmaceutická kompozice podle nároku 28, obsahující vápenatou sůl dolutegraviru a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný excipient.
31. Farmaceutická kompozice podle nároku 28, obsahující hořečnatou sůl dolutegraviru a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný excipient.
32. Farmaceutická kompozice podle nároku 28, obsahující sůl dolutegraviru s aminem a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný excipient.
33. Farmaceutická kompozice obsahující sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 32, vyznačující se tím, že amin je vybrán ze skupiny zahrnující diethylamin, Λζ/V'-dibenzylethylendiamin, ethanolamin, diethanolamin, meglumin, tromethamin, /erc-butylamin a lysin.
34. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 28 až 33, vyznačující se tím, že je ve formě tablety.
35. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků28 až 34, vyznačující se tím, že se použije pro léčbu retro virové infekce.
36. Farmaceutická kompozice podle nároku 35, vyznačující se tím, že retrovirová infekce je virus lidské imunodeficience (HIV).
37. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle kteréhokoliv z nároků 28 až 36, vyznačující se tím, se smíchá dolutegravir nebo jeho solvátu s aminem, přičemž za vzniku in-situ sole dolutegraviru s příslušným aminem.
38. Způsob přípravy farmaceutické kompozice, podle nároku 37, vyznačující se tím, že příslušný amin je vzorce R'-NHi, R'R²NH nebo R'NH-CHiCHi-NHR , kde R , R může být Cl až C8 alifatický a/nebo aromatický substituent, libovolně substituovaný hydroxylovými nebo karboxylovými skupinami, nebo její solvát.
39. Způsob přípravy farmaceutické kompozice, podle nároku 38, vyznačující se tím, že příslušný amin je vybrán ze skupiny zahrnující diethylamin, 7V,N-dibenzylethylendiamin, ethanolamin, tromethamin, fórc-butylamin a lysin
40. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle kteréhokoliv z nároků 28 až 36, vyznačující se tím, že se smíchá dolutegraviru nebo jeho sole s vhodnou sloučeninou obsahující draselné (K⁺), hořečnaté (Mg² ) nebo vápenaté (Ca ) kationty, přičemž za vzniku in-situ draselné, vápenaté nebo hořečnaté sole dolutegraviru.
41. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle nároku 40, vyznačující se tím, že vhodným reagentem obsahující draselné (K ), hořečnaté (Mg ) nebo vápenaté (Ca ) kationty jsou hydroxid draselný, hydroxid hořečnatý nebo hydroxid vápenatý.
42. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle kteréhokoliv z nároků 37 až 41, vyznačující se tím, že se připraví vlhkou granulací.
43. Draselná, vápenatá nebo hořečnatá sůl dolutegraviru a/nebo sůl dolutegraviru s aminem podle kteréhokoliv z nároků 1 až 18, se použije pro léčbu retrovirové infekce.
44. Draselná, vápenatá nebo hořečnatá sůl dolutegraviru a/nebo sůl dolutegraviru s aminem podle nároku 44, kde zmíněná retrovirová infekce je virus lidské imunodeficience (HIV).
45. Použití draselné, vápenaté nebo hořečnaté soli dolutegraviru a/nebo soli dolutegraviru s aminem charakterizované v nárocích 1 až 18, při způsobu přípravy dolutegraviru o vysoké chemické čistotě alespoň 99,85 % dle HPLC.