CZ2014259A3

CZ2014259A3 - Použití sloučeniny 1,3,5-triazin-2-yl fosforamidátů v syntéze sofosbuviru

Info

Publication number: CZ2014259A3
Application number: CZ2014-259A
Authority: CZ
Inventors: tefko Martin Ĺ; Stanislav Man; Stanislav Rádl
Original assignee: Zentiva, K.S.
Priority date: 2014-04-15
Filing date: 2014-04-15
Publication date: 2015-10-29
Also published as: EP3131910B1; CN106164081A; EA029775B9; WO2015158317A8; UA119169C2; MX2016013128A; WO2015158317A1; PT3131910T; EP3131910A1; CZ307789B6; EA201692065A1; EA029775B1

Abstract

Předmětné řešení se týká nového typu 1,3,5-triazin-2-yl fosforamidátů obecného vzorce I s absolutní konfigurací (S) na atomu fosforu – Sp-diastereoisomer, kde R.sup.1.n.a R.sup.2.n.mohou být nezávisle H, C1-C6 (ne)rozvětvený alkyl, C1-C6 (ne)rozvětvená alkoxy skupina, C1-C6 (ne)rozvětvená alkylsulfanyl skupina, C1-C6 (ne)rozvětvená monoalkylamino- nebo dialkylamino skupina, včetně cyklických amino skupin, například pyrrolidino, piperidino nebo morfolino skupiny, a jejich využití k výrobě biologicky účinných fosforamidátových proléčiv, zejména pak sofosbuviru vzorce II. Sofosbuvir II je nukleotidový inhibitor RNA polymerasy používaný k léčbě žloutenky typu C ve formě proléčiva, uvolňující v organismu aktivní protivirovou látku 2´-deoxy-2´-.alfa.-fluor-.beta.-C-methyluridin-5´-trifosfát.

Description

Použití sloučeniny l,3,5-triazin-2-yl fosforamidátů v syntéze sofosbuviru

Oblast techniky

Vynález se týká nového typu l,3,5-triazin-2-yl fosforamidátů obecného vzorce I s absolutní konfigurací (S> na atomu fosforu - Sp-diastereoisomer,

O

R¹

S_p- diastereoisomer (I) / °

PhO r1 kde R¹ a R² mohou být nezávisle H, C1-C6 (ne)rozvětvený alkyl, C1-C6 (ne)rozvětvená alkoxy skupina, C1-C6 (ne)rozvětvená alkylsulfanyl skupina, C1-C6 (ne)rozvětvená monoalkylamino- nebo dialkylamino skupina, včetně cyklických amino skupin, například pyrrolidino, piperidino nebo morfolino skupiny, a jejich využití k výrobě biologicky účinných fosforamidátových proléčiv, zejména pak sofosbuviru vzorce II.

(Π)

Sofosbuvir lije nukleotide vý inhibitor RNA polymerasy používaný k léčbě žloutenky typu C ve formě proléčiva, uvolňující v organismu aktivní protivirovou látku 2'-deoxy-2'-a-fluor-pC-methyluridin-5 '-trifosfát.

Dosavadní stav techniky

Dosud nej výhodnější popsané metody přípravy sofosbuviru II jsou založené na reakci spočívají v reakci fosforamidátového prekursoru (Sp diastereoisomer III) s fluorovaným derivátem IV. Reakce probíhá stereospecificky tzv. S_N2 mechanismem s inverzí konfigurace na chirálním atomu fosforu. Právě díky tomuto S_N2 mechanismu lze reakcí diastereomemě čistého intermediátu III (Sp diastereoisomeru) možné připravit diastereomemě čistý sofosbuvir II.

V literatuře byla popsána řada vhodných odstupujících skupin (LG) prekursoru III, zahrnující halogeny (Cl, Br, I), sulfonáty (např. mesylát, tosylát, triflát, kafrsulfonát) a aryloxyskupiny, s výhodou nesoucí alespoň jednu elektrony přitahující skupinu (WO2008/121634, WO2010/135569, WO2011/123645, WO2012/012465, W02014/008236). Jako nejčastěji využívané odstupující skupiny jsou zmiňovány 4-nitrofenoxy, 2-nitrofenoxy, 2,4dinitrofenoxy, 2-chlor-4-nitrofenoxy a pentafluorofenoxyskupina (J. Org. Chem. 2011, 76, 8311). Obecné schéma přípravy sofosbuviru II za použití fosforamidátového prekursoru obecného vzorce III je uvedeno ve schématu 1.

Fosforamidatový prekursor \ o

V-0 ^ÍSHN — P—LG / iís;

PhÓ

III

Sp diastereoisomer

Schéma 1.: Syntéza sofosbuviru II

Pro většinu odstupujících skupin se příslušný Sp diastereoisomer fosforamidátového prekursoru obecného vzorce III isoluje zekvimolámí (1:1) směsi diastereoisomerů štěpením (WO2010/135569) nebo chromato graficky. V případě fosforamidátů majících jako odstupující skupinu (LG) aryloxyskupinu, lze příslušný Sp diastereoisomer získat krystalizací. Patentová přihláška WO2010/135569 popisuje přípravu směsi 4-nitrofenoxy fosforamidátů obohacenou o Sp diastereomer. Surová reakční směs obsahující směs Sp a Rp diastereomery (Illa a IHb) v poměru 1:1 byla rozpuštěna ve vhodném rozpouštědle (DCM/IPE) a očkována čistým Sp diastereomerem. Produkt získaný následnou krystalizací obsahoval převážně požadovaný Sp diastereoisomer příslušného fosforamidátů lila (Sp : Rp 48.1, schéma 2).

1. PhOH

krystalizace očkování Sp

Sp: Rp : 1

IHa + IHb

Sp: Rp dr48 :1 lila

Schéma 2.

Obdobný postup, tentokráte popsaný pro pentafluorofenoxy substituovaný fosforamidát, byl popsaný v patentové přihlášce WO2011/123645. V uvedeném dokumentu byl příslušný opticky čistý Sp diastereomer IIIc (de >99%) získán v 37% celkovém výtěžku krystalizací ze surové reakční směsi, která obsahovala oba diastereomery (IIIc a Illd) v poměru 1:1 (Sp:7?p 1:1) (schéma 3).

IIIc: Illd crystal.

Sp optická čistota: >99% de

IIIc

Schéma 3.

Další poměrně rozsáhlá studie se zabývala vlivem odstupující fenoxy skupiny na reaktivitu fosforamidátu v reakci s modifikovanou nukleobází (fluoro cukr), jakož i možností získat diastereomemě čistý fosforamidát Sp pomocí krystalizace. Je to již výše zmíněná práce publikovaná v J Org. Chem. 2011, 76, 8311, zabývající se zejména fenoxyskupinami typu

2.4- dinitrophenol, pentafuorophenol, 2-chloro-4-nitrophenol, 2-nitropehnol, 4-nitrophenol,

2.4- dichlorophenol. Jednou z možností jak dosáhnout zvýšení výtěžku Sp diastereoisomeru fosforamidatového prekursoru je krystalizací indukovaná dynamická resoluce. Tento postup byl poprvé popsán v WO2011/123645, kde byla s výhodou využita pentafluorfenoxy odstupující skupina umožňující zvýšit celkový výtěžek Sp diastereomeru IIIc na 53% (schéma 4).

Schéma 4. Využití krystalizací indukované dynamické resoluce při syntéze Sp diastereomeru

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je nový vylepšený způsob výroby biologicky účinných fosforamidátových proléčiv, zejména sofosbuviru vzorce II. Tato nová syntetická strategie využívá snadné dostupnosti diastereoisomemě čistých fosforamidátových prekursorů typu I jako klíčových intermediátů při průmyslové výrobě sofosbuviru vzorce II (Schéma 5).

Fosforamidatový prekursor

S_p diastereoisomer

Schéma 5. Syntéza sofosbuviru II s využitím alkyoxy-l,3,5-triazin-2-yl fosforamidatů I

Tento vynález je založen na překvapivém pozorování, že náhradou aryloxyskupiny ve vzorci III za vhodně substituovanou 1,3,5-triazin-l-yloxyskupinu struktury vzorce I, kde R a R mohou být nezávisle H, C1-C6 nerozvětvený nebo rozvětvený alkyl, C1-C6 nerozvětvená nebo rozvětvená alkoxy skupina, C1-C6 nerozvětvená nebo rozvětvená alkylsulfanyl skupina, C1-C6 nerozvětvená nebo rozvětvená monoalkylamino- nebo dialkylamino skupina, pyrrolidino skupina, piperidino skupina, nebo morfolino skupina, dále jejich stereoisomery, soli, solváty, hydráty a krystalické a amorfní formy, lze docílit jak vylepšené regioselektivní substituce (problém nastíněný v dokumentu WO2010/135569), tak zvýšení výtěžků a zjednodušení čištění finálních produktů. Vhodnou volbou skupin R , R lze kromě reaktivity výrazně ovlivnit rozpustnost 1,3,5-triazinů vzorce VI ve vodě a organických rozpouštědlech a tím právě usnadnit izolaci a čištění finálních produktů. 1,3,5-Triaziny vzorce VI substituované krátkými alkylovými skupinami C1-C2 - methoxy, ethoxy či dimethylamino nebo nesoucí polární skupiny, jako například 7V-methylpyperazino nebo trialkylamoniovou, jsou poměrně dobře rozpustné ve vodě a dají se po ukončeni reakce odstranit z reakčních směsí prostým vytřepáním z organického rozpouštědla do vody bez použití dalších činidel. Dalšími předměty předloženého vynálezu jsou následující sloučeniny:

a) Sloučenina mající strukturu vzorce la a jejíž název je isopropyl 2-(5)-[(5)-(4,6dimethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(la)

b) Sloučenina mající strukturu vzorce lb a jejíž název je isopropyl 2-(5)-((5)-(4,6diethoxy-1,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(lb)

c) Sloučenina mající strukturu vzorce Ic a jejíž název je isopropyl 2-(5)-((5/-(4,6diisopropoxy-1,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(ic)

d) Sloučenina mající strukturu vzorce Id a jejíž název je isopropyl 2-(5)-((5/-(4,6-di-tercbutoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(Id)

Vhodně zvolené uspořádání experimentu - vhodné substituenty - pak umožňuje při vodném zpracování reakční směsi převést vedlejší produkt reakce — hydroxytriazin vzorce VI do vodné fáze, zatímco produkt vzorce II zůstává v organické vrstvě, která představuje vstupní surovinu do dalšího technologického stupně - krystalizace (schéma 5).

Pokud jsou však 1,3,5-triaziny vzorce VI substituované substituenty s delšími (C3-C6) nebo rozvětvenými alkylovými řetězci (např. propoxy, isopropoxy, allyloxy, butoxy, isobutoxy, Zerc-butoxy, diethylamino), jsou pak výrazně lipofilní a proto se dobře rozpouštějí v organických rozpouštědlech. Pokud však při přípravě sofosbuviru vzorce II vzniká takovýto lipofilní triazin vzorce VI, ten poté při zpracování a promývání naopak nepřechází nebo přechází jen částečné do vodné fáze. Výše zmíněné lipofilní triaziny vzorce VI se oproti ve vodě rozpustným vzorce VI snadno odstraňují od vzorce II krystalizací, právě díky jejich vysoké rozpustnosti v organických rozpouštědlech. Toto je právě další z překvapivých výhod hydroxytriazinů vzorce VI. Hydroxytriaziny vzorce VI totiž ve srovnání s pentafluoro feno lem jako odstupující skupinou poskytují v obou případech (použití lipofilního i hydrofilního) finální produkt čistší, než při použití zmíněného pentafluorofenolu. Při použití pentafluorofenolu tento totiž v produktu stále zůstává, ať se již použije čištění krystalizací či vytřepáváním. Nej výhodnějšími skupinami R¹, R² substituovaných hydroxytriazinů vzorce VI jsou alkoxyskupiny, s výhodou mající zejména R — R je methoxy, ethoxy, propoxy, allyloxy, isopropoxy nebo fórc-butoxyskupiny.

Podle postupu popsaném v tomto vynálezu byly triaziny vzorce VI připraveny ve vysokých výtěžcích z příslušných 2,4,6-trialkoxy-l,3,5-triazinů vzorce VII získaných reakcí příslušných alkoholátů s kyanurchloridem. Přípravu vzorce VI z kyanurchloridu lze uskutečnit nejenom jako dvoukrokový proces, ale s výhodou lze tyto látky připravit ,,one-pot procesem. Vysoce selektivní substituci pouze jedné alkoxyskupiny za hydroxy skupinu je možné provádět působením hydroxidů v příslušném alkoholu, fórc-butanolu a nebo ve vodě (schéma 6).

NaOH ---►

ROH

KOH

ROH

VII VI

Schéma 6. : one-pot příprava hydroxytriazinů VI

Hlavní výhodou popsaného postupuje nízká cena výchozích surovin, což je jedno z klíčových kritérií pro průmyslové využití tohoto postupu. Mezi další nesporné výhody patří velmi snadná manipulace s triaziny vzorce VI, které jsou ve srovnání s fenolickými substráty netěkavé, nedráždivé a pevné krystalické látky bez zápachu. Z hlediska technologického postupu a jejich použití pro výrobu sofosbuviru vzorce II, představují příslušné tnaziny vzorce VI vedlejší produkt reakce (schéma 5). Díky jejich unikátním fyzikálně-chemickým vlastnostem je lze lehce oddělit z reakční směsi a následně snadno rozložit působením minerálních kyselin na netoxickou kyanurovou kyselinu. Navíc se tyto triaziny případně dají bez zbytečných rizik bezpečně spalovat. Tento postup a jejich využití pak představuje „zelenou“ alternativu k původním postupům popsaným v literatuře, používající fenolické deriváty.

Syntéza diastereoisomerně čistých fosforamidatu vzorce I je založena na reakci (Sj-isopropyl 2-aminopropanoátu (isopropylesteru L-alaninu) s fenyl dichlorofosfátem v přítomnosti vhodné báze ve vhodných rozpouštědlech, a následné reakci vzniklého intermediátu vzorce

V s vhodným triazinem vzorce VI (schéma 7). Jako báze vhodné pro tento reakční krok se použijí zejména báze z řad aminů, jako jsou triethylamin (Et₃N), Ν,Ν-diisopropylethylamin (DIPEA), l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-ene (DBU), l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktan (DABCO), 1-methylmorfolin, 1-ethylpiperidin, dále pak karbonáty a hydrogenkarbonáty jako Na₂CO₃, K₂CO₃, Cs₂CO₃, NaHCO₃, KHCO₃, případně acetáty NaOAc a KOAc v celé řadě rozpouštědel a jejich směsí. Ve výhodném provedení se pro tento reakční krok použijí triethylamin nebo DIPEA. Jako vhodná rozpouštědla pro tuto reakci se osvědčily zejména dichlormethan, chloroform, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, cyklopentylmethylether, dimethoxyethan, terc-butylmethyl ether (MTBE), toluen, trifluortoluen (TFT). Ve výhodném provedení se tato reakce provádí v dichlormethanu, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, cyklopentylmethyletheru. Uvedený reakční krok se provádí při teplotách od -70 °C do 20 °C, ve výhodném provedení v rozmezí od -40 °C do 0 °C. Meziprodukt vzorce V při přípravě sloučeniny vzorce I není třeba isolovat a s výhodou se generuje in situ. Následnou reakcí sloučeniny vzorce V s vhodně zvoleným triazinem vzorce

VI se obvykle získává ekvimolámí směs diastereoisomerů S_P:R_P vzorce IX v poměru 1:1. V závislosti na zvolených podmínkách však mohou vznikat i jiné poměry diastereoisomerů S_P:R_P vzorce IX. Tato reakce se provádí při teplotách -10 až 10 °C, ve výhodné provedení s výhodou při 0°C.

Hlavní výhodou postupu uvedeného výše je přímá separace cílového Sp diastereoisomerů vzorce I pomocí krystalizace. Tímto postupem je možné získat Sp diastereoisomer fosforamidátového prekursoru vzorce I v dobrých celkových výtěžcích (>50 %) a výborné optické čistotě (>99 % de) ze surové reakční směsi (schéma 7). Nej výhodnějšími skupinami

I Μ · · ♦ ·> · · * · • ··· ······ * · · · * ? · · · · · · ··««·· · · J · 4 · ·

R¹, R² sloučenin vzorce I jsou alkoxyskupiny, s výhodou mající zejména R — R je methoxy, ethoxy, propoxy, allyloxy, isopropoxy nebo terc-butoxyskupiny.

I

IX diastereoisomer™ směs

Schéma 7.: Syntéza diastereoisomemě čistých fosforamidátů I

Navíc bylo překvapivě zjištěno že tyto triazinové fosforamidáty podléhají též krystalizací indukované dynamické resoluci, takže výtěžek přímo získaného produktu vzorce I tímto způsobem lze ještě nadále zvýšit. Čistý Sp diastereomer prekurzoru vzorce I se dá připravit z Rp distereomeru, kdy se vychází z čistého Rp isomeru nebo z libovolné směsi Sp : Rp distereomerů vzorce IX, přednostně ze směsi obsahující více Rp isomeru. Působením bází jako Et₃N, DIPEA, DABCO, DBU, imidiazol, 1,2-bis(diemethylamino)ethan, 1,2bis(diethylamino)ethan, l,3-bis(diemethylamino)propan, l,3-bis(diethylamino)propan na Rp nebo libovolné směsi Sp : Rp lze dosáhnout změny absolutní konfigurace na atomu P ve vhodných rozpouštědlech, ve výhodném provedení se jako báze použije Et₃N nebo DIPEA. Mezi vhodná rozpouštědla pro krystalizací indukovanou dynamickou resoluci patří zejména ethylacetát (EtOAc), isopropyl acetát (z-PrOAc), 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran (THF), dioxan, dimethoxyethan, diethoxyethan, terc-butylmethylether (MTBE), cyklopentylmethylether, diethylether, toluen, methylethylketon (MEK), aceton, dále nepolární rozpouštědla zejména uhlovodíky obecně - pentan, hexan, heptan, cyklohexan, dekalin, methylcyklohexan, 2-methylbutan, 2-methylpentan, triethylmethan, isooktan, aromatická rozpouštědla - toluen, xylen, mesitylen, benzen, trifluortoluen (TFT) a kombinace výše uvedených rozpouštědel. Ve výhodném provedení se použije EtOAc, ž-PrOAc, 2methyltetrahydrofuran (2-MeTHF), tetrahydrofuran, hexan, heptan, cyklohexan a jejich směsi. Podmínky pro přípravu čistých Sp diastereoisomerů vzorce I dle tohoto vynálezu jsou jednoduché a vedou k vysokým výtěžkům chirálně velmi čistých produktů. Tento vynález také popisuje výhodné provedení, kde byla bez separace čistých Sp diastereoisomerů vzorce I z reakční směsi provedena krystalizací indukovaná dynamická resoluce a až následně byly tyto Sp diastereoisomery vzorce I isolovány. Nové triazinové fosforamidáty obecného vzorce I popsané v tomto patentu jsou s stabilní, dostatečně reaktivní, selektivní a obecně celkově průmyslově využitelné k výrobě biologicky účinných fosforamidátových proléčiv, zejména pak sofosbuviru vzorce II. Nej výhodnějšími skupinami R , R sloučenin vzorce I jsou alkoxy skupiny, s výhodou mající zejména R^{1 =} R² je methoxy, ethoxy, propoxy, allyloxy, isopropoxy nebo Zerc-butoxyskupiny.

Tento vynález také zhamuje použití nových triazinových fosforamidátu obecného vzorce I při výrobě sofosbuviru vzorce II. Při tomto postupu lze provést aktivaci intermediátu vzorce IV působením prakticky libovolného Grignardova činidla (schéma 5). Obecně lze použít libovolné primární, sekundární a terciární magnesium chloridy, bromidy a jodidy jako jsou fórc-butyl magnesium chlorid, benzylmagnesiumchlorid, benzylmagnesiumchlorid, cyklohexylmagnesium chlorid, cyklohexylmagnesium bromid, heptylmagnesium chlorid, oktylmagnesium chlorid. Ve výhdodném provedení se použije heptylmagnesium chlorid a terc-butyl magnesium chlorid. V provedení podle tohoto vynálezu se použije Grignardovo činidlo : intermediátu vzorce IV v poměrech 1,1:1 až 2,9:1 molámích ekvivalentů, ve výhodném provedení v poměrech 1,8:1 až 2,2:1. Mezi vhodná rozpouštědla či jejich směsi patří zejména THF, 2-MeTHF, dioxan, MTBE, cyklopentylmethylether, Et₂O, dimethoxyethan, diethoxyethan, dimethoxypropan, diethoxypropan, ve výhodném provedení se použije THF, 2-MeTHF a cyklopentylmethylether. Dále bylo překvapivě zjištěno že pro dosažení vysoké konverze a regioselektivity není nutné aby byl výchozí intermediát vzorce IV před přidáním Grignardova činidla zcela rozpuštěn v použitém rozpouštědle či jejich směsi. Z průmyslového hlediska může být velkou praktickou a bezpečnostní výhodou použití takových Grignardových činidel, které uvolňují při reakci výše vroucí uhlovodíky (např. toluen, cyklohexan, heptan, oktan). Triazinové fosforamidáty vzorce I reagují velmi dobře s intermediátem vzorce IV po aktivaci Grignardovým činidlem při teplotách -20 až 20 °C, ve výhodném provedení při teplotách -10 až 10 °C. Podle postupu výroby uvedeného v tomto patentu reagují triazinové fosforamidáty vzorce I s intermediátem vzorce IV v molámích poměrech 10:1 až 1:10, ve výhodném provedení 2:1 až 1:2. Tento postup a použití triazinových fosforamidátů vzorce I při výrobě sofosbuviru vzorce II poskytuje výborné výtěžky spolu s excelentní chemickou a optickou čistotou získaného sofosbuviru. Tyto vlastnosti dávají celému procesu zjevný potenciál při průmyslové výrobě sofosbuviru vzorce II v kvalitě použitelné přímo pro výrobu finální lékové formy.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady, které ilustrují zlepšení postupu podle vynálezu, mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu:

Reakce byly rutinně sledovány pomocí HPLC Agilent 1100 sUV (PDA) detektorem vybavené kolonou Ascentis Express Cl8 (2,7 pm) (100 x 4,6 mm), při průtoku 1 ml/min, mobilní fází A: fosfátový pufr (pH ~ 3) a fází B: acetonitril (0-2 min 10 % MeCN, 2-18 min gradient 10 -> 90 % MeCN). *H, ¹³C a ³¹P NMR spektra byla zaznamenána na spektrometrech NMR Bruker Avance 250 nebo 500 MHz.

2.4.6- Trialkoxy-l,3,5-triaziny

Příklad 1

2.4.6- Trimethoxy-l,3,5-triazin vzorce Vila

NaOH ------>MeOH

Vila

Kyanurchlorid (92 g, 0,5mol) byl v malých porcích přidán do směsi NaOH (60 g, 1,5 mol) a MeOH (500 ml), při teplotě 0 - 5 °C. Po přidání veškerého kyanurchloridu byla směs míchána 2 h při 20 °C. Rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a destilační zbytek byl suspendován v H₂O (500 ml). Produkt byl odsát, promyt H₂O (2 x 40 ml) a sušen za laboratorní teploty a tlaku. 2,4,6-Trimethoxy-l,3,5-triazin vzorce Vila byl získán jako pevná bezbarvá látka (79 g, 92 %). 'H-NMR (250 MHz, DMSO-dg): 3,92 (s, 9H; 00¾) ppm. CNMR (63 MHz, DMSO-d₆): 173,1, 55,1 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 6,072 min.

Příklad 2

2,4,6-Triethoxy-l,3,5-triazin vzorce Vllb

NaOH

EtOH

Vllb

Postupem popsaným v Příkladu 1 byl získán v 93 % výtěžku 2,4,6-triethoxy-l,3,5-triazin vzorce Vllb jako pomalu krystalizující bezbarvý olej (99 g, 93 %). *H-NMR (250 MHz, DMSO-d₆): 4,34 (q, J= 7,1, 6 H; OCtf₂), 1,30 (t,J = 6,2, 18 H; CH₃) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 172,5, 63,6, 14,0 ppm. HPLC (200 nm): Rt = 11,383 min.

Příklad 3

2,4,6-Triisopropoxy-l,3,5-triazin vzorce Vile

NaOH /PrOH

Vile

Postupem popsaným v Příkladu 1 byl získán v 69 % výtěžku 2,4,6-triisoproxy-l,3,5-triazin vzorce Vile jako pevná bezbarvá látka. 'H-NMR (250 MHz, DMSO-dg): 5,35 (sept, J - 6,2, 3 H; OC/7), 1,37 (d, J= 6,2, 18 H; CH₃) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 172,6, 71,3,

21,8 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 14,625 min.

Příklad 4

2,4,6-Tri(/erc-butoxy) -1,3,5-triazin vzorce Vild

t-BuOH t-BuONa

K roztoku kyanurchloridu (1,84 g, 0,01 mol) v THF (7 ml) byl přikapán roztok rBuOK v THF (1 M, 32 ml) v průběhu 90 min při 20 °C. Reakční smě byla míchána 4 h při 20 °C a následně koncentrována za vakua. Odparek byl suspendován v H₂O (20 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, promyt vodou (3x10 ml) a následně sušen při tlaku 0,1 kPa a teplotě 20 C. Triazin vzorce Vild byl získán jako bezbarvá pevná látka v 87% (2,58 g) výtěžku. H-NMR (250 MHz, DMSO-dg): 1,53 (s, 27 H; CH₃) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 171,2, 81,8, 27,9 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 16,815 min.

2-Hydroxy-4,6-dialkoxy-triaziny

Příklad 5

4,6-Dimethoxy-l,3,5-triazin-2-ol vzorce Via

OMe

Vila

1. KOH MeOH Reflux

2. HCI H₂O

OH

Via

Směs 2,4,6-trimethoxy-l,3,5-triazinu vzorce Vila (34 g, 0,2 mol) a KOH (14 g, 0,25 mol) v MeOH (150 ml) byla zahřívána k varu 20 h. Po ochlazení na laboratorní teplotu, rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a destilační zbytek byl dán do vody (50 ml). Směs byla okyselena AcOH na pH ~6 při teplotě pod 15 °C. Vyloučený produkt odsát, promyt H₂O (2 x 35 ml) a sušen za laboratorní teploty a tlaku. 2-Hydroxy-4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin vzorce Via byl získán jako bezbarvá krystalická látka (27 g, 87 %). *H-NMR (250 MHz, DMSO-dé). 12,42 (bs, 1 H), 3,86 (s, 6 H; OCH3) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 168,1, 157,3, 55,2 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 1,475 min.

Příklad 6

4,6-Diethoxy-l,3,5-triazin-2-ol vzorce VIb

1. KOH íBuOH 70°C

2. HCI H₂O

Vllb VIb

Směs 2,4,6-triethoxy-l,3,5-triazinu vzorce Vllb (21 g, 0,1 mol) a KOH (7,7 g, 0,137 mol) v tBuOH (100 ml) byla zahřívána na 70 °C 2 h. Po ochlazení na laboratorní teplotu, rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a destilační zbytek byl dán do vody (100 ml). Směs byla okyselena koncentrovanou vodnou kyselinou chlorovodíkovou na pH ~3 při teplotě pod 15 °C. Vyloučený produkt odsát, promyt H₂O (2 x 25 ml) a sušen za laboratorní teploty a tlaku. 2-Hydroxy-4,6-diethoxy-l,3,5-triazin vzorce VIb byl získán jako bezbarvá krystalická látka (15,3 g, 84 %). 'H-NMR (250 MHz, DMSO-dé): 12,31 (bs, 1 H), 4,31 (q, J= Ί,\, 4 H; CHi), 1,27 (t, J = 7,1, 6 H, CH3) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 168 (bs), 157,1, 64,1, 14,0 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 5,154 min.

Příklad 7

4,6-Diisopopoxy-l,3,5-triazin-2-ol vzorce Víc

KOH /PrOH

OH

ONO

Vlc

Směs 2,4,6-triisopropoxy-l,3,5-triazinu vzorce Vile (88 g, 0,345 mol) a KOH (24 g, 0,43 mol) v žPrOH (260 ml) byla zahřívána k varu 2 h. Po ochlazení na laboratorní teplotu, rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a destilační zbytek byl dán do vody (260 ml). Směs byla okyselena koncentrovanou vodnou kyselinou chlorovodíkovou na pH ~3 při teplotě pod 15 °C. Vyloučený produkt odsát, promyt H₂O (3 x 150 ml) a sušen za laboratorní teploty a tlaku. 2-Hydroxy-4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin vzorce Víc byl získán jako bezbarvá krystalická látka (64 g, 87 %). ^-NMR (250 MHz, DMSO-d₆): 12,19 (bs, 1H), 5,18 (sept, J=6,2, 2 H; OCH), 1,27 (d, J = 6,2, 12 H; CH3) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-dé): 167 (bs), 157,1, 71,7, 21,4 ppm. HPLC (200 nm): R_t = 7,883 min.

Příklad 8

4,6-Di(terc-butoxy)-l,3,5-triazin-2-ol vzorce Vid '0

KOH

ÍPrOH

OH

Vlld ^Vld

Směs 2,4,6-tri(terc-butoxy)-l,3,5-triazinu vzorce Vild (0,6 g, 2 mmol) a KOH (0,14 g, 2,5 mmol) v /BuOH (260 ml) byla zahřívána na 70 °C 5 h. Po ochlazení na 20 °C, směs byla zahuštěna za vakua. Odparek byl smíchán s H₂O (5 ml) a okyselen na pH ~ 6 vodným roztokem kyseliny octové (10%). Vyloučený pevný produkt byl odsát, promyt vodou (3x5 ml) a sušen za vaku (0,1 kPa) při 20 °C. Produkt vzorce Vid byl získán jako světle žlutá pevná látka v 55% (0,27 g) výtěžku. *H-NMR (250 MHz, DMSO-d₆): 11,99 (bs, 1H), 1,54 (s, 18 H; Cft) ppm. ¹³C-NMR (63 MHz, DMSO-d₆): 167 (bs), 156,5, 84 (bs), 27,8 ppm.

Fosforové intermediáty

Příklad 9

Isopropyl 2-(S)-[(5>-(4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce la

Et₃N

CH₂CI₂

Via ^la

Roztok Et₃N (55 g, 0,55 mol) vCH₂Cl₂ (300 ml) byl přikapán ke směsi isopropyl alaninu.HCl (44 g, 0,26 mol) a fenyl dichlorfosfát (57 g, 0,27 mol) v CH₂C1₂ (300 ml) při teplotě -50 až -60 °C. Po 30 min míchání při teplotě -50 až -60 °C, byla reakění směs zahřáta za 2 h na -5 °C. Do reakční směsi byl přikapán roztok 2-hydroxy-4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin2-ol vzorce Via (41 g, 0,26 mol) a Et₃N (29 g, 0,29 mol) v CH₂C1₂ (160 ml) při teplotě -10 až 0 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě -10 až 0 °C 16 h. Reakční směs byla promyta H₂O (4 x 300 ml). Rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a produkt byl krystalován za směsi diethyletheru a cyklohexanu. isopropyl 2-(S)-[(5)-(4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)fenoxy-fosforylamino] propionát (la) byl získán jako světle žlutá krystalická látka (21 g, 19 %). 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆): 7,41 (t, J= 7,9, 2 H; Ph), 7,27 (d, J= 7,3, 1 H; Ph), 7,23 (t,J=l,4, 1 H; Ph), 6,55 (dd, J = 13,0, J= 10,1, 1 Η; NH), 4,81 (sept, J = 6,3, 1 H; OCT/), 4,11 - 4,00 (m, 1 H; NH-C/7), 3,96 (s, 6 H; OCH₃), 1,24 (d, J = 7,1, 3 H; NHCHCH3), 1,14 (d, J= 6,3, 3 H; OCHC_aH₃), 1,11 (d, J= 6,3, 3 H; OCHCVA) ppm. ³¹P-NMR (101 MHz, DMSO-dó): -3,24 ppm. ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d₆): 173,3, 172,2 (d, J= 5,3), 168,3 (d, J= 2,5), 150,0 (d, J= 6,1), 129,8, 125,1, 120,2 (d,./- 4,9), 72,0, 68,0, 50,0 (d, J = 1,1), 21,26, 21,25, 19,9 (d, J - 6,6) ppm. HPLC (210 nm): R_t = 12,295 min.

Příklad 10

Isopropyl 2-(S)-[(S)-(4,6-diethoxy-l, 3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce lb

Vlb

Postupem popsaným v příkladu 9 byl získán ve 38 % výtěžku isopropyl 2-(S)-[(S)-(4,6diethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce Ib jako bezbarvá krystalická látka.

'H-NMR (500 MHz, DMSO-dó): 7,41(t, 7,9,2 H; Ph), 7,26 (d, J= 8,6, 1 H; Ph), 7,23 (d, J = 7,4, 1 H; Ph), 6,54 (dd, J- 13,2,/- 10,0, 1 Η; NH), 4,81 (sept, J= 6,4, 1 H; OCH), 4,39 (q, / = 7,1; 4 H, OCH₂), 4,07 - 3,97 (m, 1 H; NH-C77), 1,32 (t, J= 7,1, 6 H; 2 x OCH₂C7/₃), 1,23 (d, J = 7,1, 3 H; NHCHC//₃), 1,13 (d, J = 6,3, 3 H; OCHC_a//₃), 1,11 (d, / = 6,2, 3 H; OCHCbft) ppm. ³¹P-NMR (101 MHz, DMSO-d6): -3,34 ppm. ¹³C-NMR (126 MHz, DMSOd6): 172,7, 172,2 (d, /=5,4), 168,2 (d,/=2,3), 150,0 (d,/=6,1), 129,8, 125,1, 120,2 (d,/ = 4,9), 68,1, 64,4, 50,1 (d, / = 1,5), 21,31, 21,26, 19,9 (d, /= 6,7), 13,9 ppm. HPLC (210 nm): 7?_t= 13,954 min.

Příklad 11

Isopropyl 2-(5)-((5)-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce Ic

Vlc

Ic

Postupem popsaným v příkladu 9 byl získán ve 47 % výtěžku isopropyl 2-(5)-((5)-(4,6diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce Ic jako bezbarvá krystalická látka.

‘H-NMR (500 MHz, DMSO-dó): 7,41 (t, J= 7,9, 2 H; Ph), 7,25 (d, J= 8,6, 1 H; Ph), 7,22 (t, J = 7,5, 1 H; Ph), 6,52 (dd, J= 13,4, J = 10,0, 1 Η; NH), 5,21 (sept, J= 6,2, 1 H; N=C-OCH), 4,82 (sept, J= 6,3, 1 H; OC-OCH), 4,05 - 3,95 (m, 1 H; NH-CH), 1,312 (d, J= 6,1, 6 H; N=C-OCHC_a7/₃), 1,310 (d, J= 6,3, 6 H; N=C-OCHC_bH₃), 1,24 (d, J= 7,1, 3 H; NHCHCH₃), 1,13 (d, J= 6,2, 3 H; O=C-OCHC_aH₃), 1,10 (d, J= 6,2, 3 H; O=C-OCHC_bH₃) ppm. ³¹P-NMR (101 MHz, DMSO-dg): -3,45 ppm. ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d₆): 172,3, 172,1 (d, J = 5,6), 168,3 (d, J = 2,5), 150,0 (d, 6,1), 129,8, 125,1, 120,2 (d, J= 4,9), 72,0, 68,2, 50,0 (d,

J= 1,1), 21,38, 21,36, 21,34, 21,24,19,9 (d, J= 6,6) ppm. HPLC (210 nm): R_t = 15,272 min.

Příklad 12

Et₃N ---------»

2-Me-THF / heptan

Ic

Isopropyl 2-(5)-[(Á)-(4,6-diisoprpoxy-l ,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát (1 g) (7?p : 5p > 80 : 20) byl rozpuštěn v 2-methyltetrahydrofuranu (1 ml). K roztoku byl přidán heptan (5 ml) a DIPEA (0,2 ml). Směs byla míchána za laboratorní teploty 4 d. Vyloučený produkt byl odsát a promyt směsí 2-methyltetrahydrofuranu / heptan. Bylo získáno ve 45 % (0,454 g) isopropyl 2-(S)-[(S)-(4,6-diisopropoxy-1,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxyfosforylamino]propionátu vzorce Ic jako bezbarvá krystalická látka.

Příklad 13

Isopropyl 2-(S)-[(S)-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce Ic

Vlc ^lc

Postupem popsaným v příkladu 9 byl získán v 46% (57 g) výtěžku isopropyl 2-(S)-[(S)-(4,6diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionát vzorce Ic jako bezbarvá krystalická látka. Matečné louhy, obsahující směs 5p : Rp ~ 13 : 87, byly zahuštěny za vakua a opětovně rozpuštěny v EtOAc (51 ml). K roztoku byl pomalu přidán cyklohexan (255 ml) a následně Et₃N (10 ml). Směs byla míchána 2 dny za laboratorní teploty. Vyloučený pro produkt byl odsát a promyt směsí EtOAc / cyklohexan a sušen za vakua s výtěžkem 27 % (34 g) druhého podílu krystalického isopropyl 2-(S)-[(5ý-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce Ic.

Příklad 14

Isopropyl 2-(S)-{(S)-[4,6-di(íerc-butoxy)-l,3,5-triazin-2-oxy]-fenoxyfosforylaminojpropionát vzorce Id

Postupem popsaným v příkladu 9 byl získán v 14 % výtěžku isopropyl 2-(S)-{(S)-[4,6di(fórc-butoxy)-l,3,5-triazin-2-oxy]-fenoxy-fosforylamino}propionát (Id) jako bezbarvá krystalická látka. ^-NMR (500 MHz, DMSO-de): 7,40 (t, J ⁼ 7,9, 2 H; Ph), 7,28 (d, J — 7,3, 1 H; Ph), 7,23 (t, J= 7,4, 1 H; Ph), 6,54 (dd, J= 13,0, 10,1, 1 Η; NH), 4,81 (sept, J= 6,3,

H; OC/7), 4,11 - 4,00 (m, 1 H; NH-C77), 1,53 (s, 18 H; C(Ctt₃)₃), 1,24 (d, J= 7,1, 3 H; NHCHCft), 1,14 (d, J= 6,3, 3 H; OCHC_a#₃), 1,12 (d, J= 6,3, 3 H; OCHC_bH₃) ppm. ³¹PNMR (101 MHz, DMSO-d6): -3,48 ppm. ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-dó): 172,9, 172,2 (d, J= 5,3), 168,2 (d, J= 2,5), 150,5 (d, J= 6,1), 129,8, 125,1, 120,2 (d, J= 4,9), 81,8, 68,0, 50,3 (d, J= 1,4), 27,8, 21,30, 21,25, 19,9 (d, 6,7) ppm.

Cílové látky

Ο_χ í PR \ Kšh °fs; 2^1-1% )—O HN—P—O—(^z N / Ξ N=č

OPh OR la-c

báze

IV rozpouštědlo

R = Me, Et, /-Pr, t-Bu

Příklad 15

Sofosbuvir vzorce II

(BuMgCI

THF

Ic IV ¹¹

K roztoku vzorce IV (2,15 g, 8,26 mmol) v THF (66 ml) byl v průběhu 1 h přikapán roztok Zerc-BuMgCl (17,35 ml, 17,35 mmol, 2,1 equiv. 1M roztok v THF) při teplotě -15 °C. Reakční směs byla míchána při -15 °C lh, v průběhu 30 min ohřátá na -5 °C a míchaná další 2h. Následně byl přikapán roztok 2-(Ó)-[(5)-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce Ic (3,99 mg, 8,26 mmol, 1 equiv) v THF (16 ml), a reakční směs míchána při —5 °C. Po 48h byl do reakční směsi přidána v průběhů 30 min 2M HC1 (100 ml) a následně EtOAc (100 ml). Organická vrstvy byla propláchnuta 2M HC1 (50 ml), 22 x 30 ml 2,5 % Na₂CO₃, vodou (50 ml), solankou (50 ml) a vysušena nad Na₂SO₄. Po oddestilování rozpouštědla za sníženého tlaku, bylo získáno 3,38 g surového produktu ve formě bílé pěny. Surový produkt byl za laboratorní teploty rozpuštěn v směsi DCM/toluen (20 ml), přidána očka II a směs vymíchaná po dobu 12h. Produkt byl odsán na fritě, promyt studeným DCM a sušen ve vakuové sušárně (40 °C, 200 Pa) po dobu 8h čímž se získalo 3,02 g (69%) sofosbuviru vzorce II ve formě bílého prášku, (čistota 99,5%, optická čistota >99,9 %) 'H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11,50 (s, 1H), 7,53 (d, 7 = 7,0 Hz, 1H), 7,33-7,36 (m, 2H), 7,18-7,21 (m, 2H), 7,117-7,20 (m, 1H), 6,03 (dd, J= 12,7, 10,4 Hz, 1H), 5,83 (d, J= 4,3 Hz, 1H), 5,51 (dd, 7=8,1, 1,6 Hz, 1H), 5,51 (dd,7= 8,1,1,6 Hz, 1H), 4,85 (hept, 7= 6,3 Hz, 1H), 4,33 (dd, 7= 11,1, 5,7 Hz, 1H), 4,20 (dt,7= 11,6, 6,0 Hz, 1H), 3,97 (dd,7=9,l, 4,7 Hz, 1H),

3,85 - 3,76 (m, 1H), 1,25 (d, J=22,6 Hz, 1H), 1,22 (d, J=6,8 Hz, 1H), 1,15 (dd, J= 6,3, 0,8 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 172,64 (d,J=5,l Hz), 162,78 (s), 150.71 (d,J=6,3 Hz), 150,47 (s), 129,67 (s), 124,63 (s), 120.09 (d, J= 4,9 Hz), 102,28 (s), 101,04 (s), 99,60 (s), 79,47 (s), 71,51 (s), 68,02 (s), 64,66 (s), 49,79 (s), 26,86 (s), 21,42 (d, J= 4,3 Hz), 19,81 (d, J= 6,5 Hz), 16,56 (d, 25,2 Hz).³¹P NMR (101 MHz, DMSO) δ 3,80 (s).HPLC (210 nm): R_t = 9,853 min.

Příklad 16

Sofosbuvir vzorce II

O _? OEt ' - N—<

OPh 'oEt

IBuMgCI

THF

lb iv ¹¹

Postupem popsaným v Příkladu 15 s použitím isopropyl 2-(5)-((5)-(4,6-diethoxy-l,3,5-triazin2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce lb byl získán v 63 % výtěžku sofosbuvir vzorce II.

Příklad 17

Sofosbuvir vzorce II

Postupem popsaným v Příkladu 15 s použitím isopropyl 2-(5)-((5)-(4,6-dimethoxy-l,3,5triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce la byl získán v 63 % výtěžku sofosbuvir vzorce II.

Příklad 18

Sofosbuvir vzorce II

OPh

OtBu

íBuMgCI

THF

II

Id

Postupem popsaným v Příkladu 15 s použitím isopropyl 2-(5)-[(5)-(4,6-di-/erc-butyl-l ,3,5triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]propionátu vzorce Id byl získán v 57 % výtěžku sofosbuvir vzorce II.

Příklad 19

Sofosbuvir vzorce II

O O/Pr ' ž N=<

OPh o/Pr

Ic IV ¹¹

K roztoku vzorce IV (344 mg, 1,32 mmol) v THF (10 ml) byl v průběhu 1 h přikapán roztok n-heptylMgCl (2,7 ml, 2,71 mmol, 2,05 equiv. 1M roztok v THF) při teplotě -15 °C. Reakční směs byla míchána při —15 °C lh, v průběhu 30 min ohřátá na —5 °C a míchaná další 2h. Následně byl přikapán roztok 2-(S)-[(S)-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxyfosforylamino]propionátu vzorce Ic (606 mg, 1,26 mmol, 0,95 equiv) v THF (2,6 ml), a reakční směs míchána při —5 °C. Po 48h byl do reakční směsi přidána v průběhů 30 min 2M HC1 (15 ml) a následně EtOAc (15 ml). Organická vrstvy byla propláchnuta 2M HC1 (5 ml), 22 x 3 ml 2,5 % Na₂CO₃, vodou (5 ml), solankou (5 ml) a vysušena nad Na₂SO₄. Po oddestilování rozpouštědla za sníženého tlaku, bylo získáno 489 mg surového produktu ve formě bílé pěny. Surový produkt byl za laboratorní teploty rozpuštěn v směsi DCM/toluen (5 ml), přidána očka II a směs vymíchaná po dobu 6h. Produkt byl odsán na fritě, promyt studeným DCM a sušen ve vakuové sušárně (40 °C, 200 Pa) po dobu 4h čímž se získalo 426 mg (61%) sofosbuviru vzorce II ve formě bílého prášku, (čistota 99,1%, optická čistota >99,9 %)

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 1,3,5-triazin-2-yl fosforamidáty obecného vzorce I,

R¹

(i) kde R¹ a R² mohou být nezávisle H, C1-C6 nerozvětvený nebo rozvětvený alkyl, ClC6 nerozvětvená nebo rozvětvená alkoxy skupina, C1-C6 nerozvětvená nebo rozvětvená alkylsulfanyl skupina, C1-C6 nerozvětvená nebo rozvětvená monoalkylamino- nebo dialkylamino skupina, pyrrolidino skupina, piperidino skupina, nebo morfolino skupina, dále jejich stereoisomery, soli, solváty, hydráty a krystalické a amorfní formy.
2. Sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že R¹ a R² jsou stejné C1-C6 nerozvětvené nebo rozvětvené alkoxyskupiny, s výhodou methoxy, ethoxy, propoxy, allyloxy, isopropoxy, nebo tert.-butoxyskupiny.
3. Sloučenina podle nároků 1 a 2, mající strukturu vzorce la a jejíž název je isopropyl 2(S)-[(S)-(4,6-dimethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(la)
4. Sloučenina podle nároků 1 a 2, mající strukturu vzorce Ib a jejíž název je isopropyl 2- (S)-[(Sý-(4,6-diethoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát o

(lb)
5. Sloučenina podle nároků 1 a 2, mající strukturu vzorce Ic a jejíž název je isopropyl 2(S)-[(S)-(4,6-diisopropoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(Ic)
6. Sloučenina podle nároků 1 a 2, mající strukturu vzorce Id a jejíž název je isopropyl 2(S)-[(S)-(4,6-di-terc-butoxy-l,3,5-triazin-2-oxy)-fenoxy-fosforylamino]-propionát

(Id)
7. Způsob výroby sloučenin vzorce I definované v nárocích 1 až 6,

R¹

zahrnující reakci chlorderivátu vzorce V s triazinovými deriváty vzorce VI za přítomnosti vhodné báze ve vhodných rozpouštědlech,

(V)

(VI) vyznačující se tím, že se ze vzniklé směsi diastereoisomerů sloučeniny vzorce IX buď přímou separacía/ nebo krystalizací indukovanou dynamickou resolucí a následnou separací získají jednotlivé isomery, charakterizované v nárocích 1 až 6,

přičemž výchozí sloučenina V se tvoří in situ reakcí (S)-isopropyl 2-aminopropanoatu (isopropylesteru L-alaninu) s fenyl dichlorfosfátem,
8. Způsob výroby podle nároku 7 vyznačující se tím že se vhodná báze zvolí ze skupiny obsahující triethylamin, Ν,Ν-diisopropylethylamin, l,8-diazabicyklo[5.4.0.]undec-7en, l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktan, 1-methylmorfolin, 1-ethylpiperidin, Na₂CO₃, K₂CO₃, Cs₂CO₃, NaHCO₃, KHCO₃, NaOAc a KOAc, ve výhodném provedení triethylamin nebo Ν,Ν-diisopropylethylamin.
9. Způsob výroby podle nároků 7 a 8 vyznačující se tím, že se vhodné rozpouštědlo zvolí ze skupiny obsahující dichlormethan, chloroform, tetrahydrofuran, 2methyltetrahydrofuran, cyklopentylmethylether, dimethoxyethan, methyl tetr-buty ether, toluen, trifluortoluen, ve výhodném provedení se použije dichlormethan, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, cyklopentylmethylether.
10. Způsob výroby podle nároků 7 až 9, vyznačující se tím, že ze vzniklé směsi diastereoisomerů sloučeniny vzorce I, se vyloučí ve formě krystalů Sp diastereoisomery s chirální čistotou 99 % a vyšší.

• · · · * ♦ * * “ « • ··« »··»·· · · · · • ♦ · · · * ·
11. Způsob výroby podle nároku 7 až 9, vyznačující se tím, že se získané matecne louhy po separaci chirálně velmi čistých krystalů Sp diastereoisomerů sloučeniny vzorce I, podrobí krystalizací indukované dynamické resoluci, a získá se další podíl krystalů Sp diastereoisomerů vzorce I s chirální čistotou 99 % a vyšší.
12. Způsob výroby podle nároků 7, vyznačující se tím že Sp diastereoisomery sloučeniny vzorce I se získají krystalizací indukovanou dynamickou resoluci přičemž se získá jediný podíl krystalů Sp diastereoisomerů sloučeniny vzorce I s chirální čistotou 99 % a vyšší.
13. Způsob výroby podle nároků 11 a 12, vyznačující se tím, že se krystalizací indukovaná dynamická resoluce provádí působením vhodné báze ve vhodném rozpouštědle na směsi diastereoisomerů.
14. Způsob výroby podle nároku 13, vyznačující se tím, že se jako báze použije triethylamin, Ν,Ν-diisopropylethylamin, l,8-diazabicyklo[5.4.0.]undec-7-en, 1,4diazabicyklo[2.2.2]oktan, imidiazol, 1,2-bis(diemethylamino)ethan, 1,2bis(diethylamino)ethan, 1,3-bis(diemethylamino)propan, 1,3-bis(diethylamino)propan, ve výhodném provedení pak triethylamin nebo Ν,Ν-diisopropylethylamin.
15. Způsob výroby podle nároků 13 a 14, vyznačující se tím, že se jako rozpouštědlo použije ethylacetát, isopropylacetát, 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan, diethoxyethan, zerc-butylmethylether, cyklopentylmethylether, diethylether, toluen, methylethylketon, aceton, d pentan, hexan, heptan, cyklohexan, dekalin, methylcyklohexan, 2-methylbutan, 2-methylpentan, triethylmethan, isooktan, toluen, xylen, benzen, trifluortoluen a jejich směsi, ve výhodném provedení se použije ethylacetát, isopropylacetát, 2-methyltetrahydrofuran, tetrahydrofuran, hexan, heptan, cyklohexan a jejich směsi.
16. Způsob výroby sofosbuviru vzorce II, vyznačující se tím že zahrnuje reakci ft

(II) intermediátu IV aktivovaného vhodným činidlem se sloučeninami vzorce I definovaných v nárocích 1 až 6 ve vhodném rozpouštědle při vhodné teplotě.
17. Způsob výroby sofosbuviru vzorce II podle nároku 16, vyznačující se tím že se jako aktivační činidlo použije Grignardova činidla.
18. Způsob výroby podle nároků 16 a 17, vyznačující se tím že se jako Grignardovo činidlo použije fórc-butyl magnesium chlorid, benzylmagnesiumchlorid, benzylmagnesiumchlorid, cyklohexylmagnesium chlorid, cyklohexylmagnesium bromid, heptylmagnesium chlorid, oktylmagnesium chlorid, ve výhodném provedení se použije heptylmagnesium chlorid a terc-butyl magnesium chlorid.
19. Způsob výroby podle nároků 16 až 18 vyznačující se tím, že se použije Grignardovo činidlo : intermediátu IV v poměrech 1,1:1 až 2,9:1 molámích ekvivalentů, ve výhodném provedení v poměrech 1,8:1 až 2,2:1.
20. Způsob výroby podle nároků 16 až 19 vyznačující se tím, že se jako rozpouštědlo použije tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dioxan, terc-butylmethylether, cyklopentylmethylether, diethylether, dimethoxyethan, diethoxyethan, dimethoxypropan, diethoxypropan, ve výhodném provedení se použije tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran a cyklopentylmethylether.
21. Způsob výroby podle nároků 16 až 20 vyznačující se tím, že aktivovaný intermediát IV reaguje se sloučeninami vzorce I při teplotách -20 až 20 °C, ve výhodném provedení při teplotách -10 až 10 °C.
22. Způsob výroby podle nároků 16 až 21 vyznačující se tím, že aktivovaný intermediát IV reaguje se sloučeninami vzorce I vmolámích poměrech 10:1 až 1.10, ve výhodném provedení 2:1 až 1:2.