CZ20032245A3 - Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv - Google Patents
Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20032245A3 CZ20032245A3 CZ20032245A CZ20032245A CZ20032245A3 CZ 20032245 A3 CZ20032245 A3 CZ 20032245A3 CZ 20032245 A CZ20032245 A CZ 20032245A CZ 20032245 A CZ20032245 A CZ 20032245A CZ 20032245 A3 CZ20032245 A3 CZ 20032245A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- pantothenic acid
- salts
- nanofiltration
- polyvalent
- pantothenate
- Prior art date
Links
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 166
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 72
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000654 additive Substances 0.000 title description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 82
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 131
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 70
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 67
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 61
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 61
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 claims description 57
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 claims description 56
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 49
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 claims description 48
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 44
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 43
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 34
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 31
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims description 30
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 27
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 22
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 18
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 18
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 11
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 10
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 10
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 9
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical class OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 claims description 5
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010908 decantation Methods 0.000 claims description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M Aminoacetate Chemical compound NCC([O-])=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 241001112741 Bacillaceae Species 0.000 claims description 2
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 25
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 11
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 11
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 11
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 11
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- -1 alkaline earth metal salts Chemical class 0.000 description 10
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 10
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 9
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 9
- 101150079396 trpC2 gene Proteins 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 101150076071 panD gene Proteins 0.000 description 8
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 8
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 101150051152 coaX gene Proteins 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-2-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C(=O)C(O)=O QHKABHOOEWYVLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 6
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150043028 ilvD gene Proteins 0.000 description 6
- 101150081585 panB gene Proteins 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 5
- 101150048956 coaA gene Proteins 0.000 description 5
- 101150105723 ilvD1 gene Proteins 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 101150028586 panE gene Proteins 0.000 description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 101100242684 Mesorhizobium japonicum (strain LMG 29417 / CECT 9101 / MAFF 303099) panD1 gene Proteins 0.000 description 4
- 229910010413 TiO 2 Inorganic materials 0.000 description 4
- 101150109763 coaW gene Proteins 0.000 description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 101150061166 tetR gene Proteins 0.000 description 4
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 3
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 3
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 108010002447 aspartate-alpha-decarboxylase Proteins 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 3
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 3
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 3
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 3
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 3
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N (R)-pantolactone Chemical compound CC1(C)COC(=O)[C@@H]1O SERHXTVXHNVDKA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000276408 Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168 Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 101100028493 Haloferax volcanii (strain ATCC 29605 / DSM 3757 / JCM 8879 / NBRC 14742 / NCIMB 2012 / VKM B-1768 / DS2) pan2 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000003311 flocculating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 2
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003918 potentiometric titration Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- GQTHJBOWLPZUOI-FJXQXJEOSA-M sodium D-pantothenate Chemical compound [Na+].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O GQTHJBOWLPZUOI-FJXQXJEOSA-M 0.000 description 2
- 229940068459 sodium pantothenate Drugs 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- HNZZAEBYPPNVOF-DHYYHALDSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s,3s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O.CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O HNZZAEBYPPNVOF-DHYYHALDSA-N 0.000 description 1
- OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N (R)-pantoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(O)=O OTOIIPJYVQJATP-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYNUQALWYRSVHF-ABLWVSNPSA-N 5,10-methylenetetrahydrofolic acid Chemical compound C1N2C=3C(=O)NC(N)=NC=3NCC2CN1C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QYNUQALWYRSVHF-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 1
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 108700040634 Bacillus subtilis Vpr Proteins 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000149420 Bothrometopus brevis Species 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- 241000272194 Ciconiiformes Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 101100493587 Escherichia coli (strain K12) avtA gene Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241001310335 Paenibacillus lentimorbus Species 0.000 description 1
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100125907 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) ilvC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 101100056949 Wolinella succinogenes (strain ATCC 29543 / DSM 1740 / LMG 7466 / NCTC 11488 / FDC 602W) ansA gene Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000009858 acid secretion Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150050280 alsD gene Proteins 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 101150082095 ansB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000011138 biotechnological process Methods 0.000 description 1
- 101150031021 birA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 235000020299 breve Nutrition 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000005939 calcium D-pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011680 calcium D-pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical class [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001175 calcium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000002036 drum drying Methods 0.000 description 1
- 238000000909 electrodialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000009123 feedback regulation Effects 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 238000005351 foam fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 101150033780 ilvB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150090497 ilvC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150099953 ilvE gene Proteins 0.000 description 1
- 101150077793 ilvH gene Proteins 0.000 description 1
- 101150060643 ilvN gene Proteins 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000592 inorganic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920006260 polyaryletherketone Polymers 0.000 description 1
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 1
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
- B82B3/00—Manufacture or treatment of nanostructures by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
Description
Předložený vynález se týká zlepšeného způsobu výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí a použití jako přísady do zvířecích krmiv.
Dosavadní stav techniky
Jako výchozí produkt pro biosyntézu koenzymu A je D-pantothenát v rostlinném a zvířecím světě široce rozšířen. Na rozdíl od člověka, který přijímá kyselinu pantothenovou v dostatečném množství ve výživě jsou však jak u rostlin tak i u zvířat často popisovány jevy nedostatku D-pantothenátu. Dostupnost D-pantothenátu je proto značným hospodářským zájmem, obzvláště v krmivářském průmyslu.
Obvyklým způsobem se provádí výroba D-pantothenátu chemickou syntézou z D-pantolaktonu a kalcium-p-alaninátu (Ullmann s Encyclopedia of Industrial Chemistry, 6. vydání, 1999, elektronická verze, kapitola Vitamins). K přípravě D-pantolaktonu je nutné nákladné klasické štěpení racemátu přes diastereomerní soli. Výsledný prodejný produkt z chemické syntézy je většinou vápenatá sůl kyseliny D-pantothenové kalcium-D-pantothenát.
Oproti chemické syntéze má biotechnologický způsob výroby pomocí mikroorganismů výhodu v selektivní (čisté enanciomery) přípravě D-formy kyseliny pantothenové, zhodno• 4
44 4444
4 4 4 4 4 4 • 4 · · 4 4 4
4 444 404404 0 4
4 44 4 4444
04440 44 44 44 44 titelné vyššími organismy. Tím odpadá nákladné štěpení racemátu, které je nutné při chemické syntéze.
Fermentativní způsoby výroby kyseliny D-pantothenové pomocí mikroorganismů jsou běžně známy, mezi jiným z EP 0 590 857, VO 96/33283, US 6 013 492, VO 97/10340, DE 198 46 499, EP 1 001 027, EP 1 006 189, EP 1 006 192 a EP 1 006 193 .
Tak popisuje EP 1 006 189 a EP 1 001 027 způsob výroby pantothenátu, při kterém se ve fermentačním roztoku dosáhne obsah nejvýše 1 g/1 kyseliny D-pantothenové. Takový nepatrný obsah kyseliny pantothenové ve fermentačním roztoku, tedy méně než 10 % hmotnostních, vztaženo na obsah pevné látky, je však pro hospodárnou výrobu doplňků zvířecího krmivá obsahujících kyselinu D-pantothenovou nevhodný. Další nevýhodou u dosud popisovaných způsobů je, že izolace produktu z fermentačního media vyžaduje početné a nákladné zpracovatelské kroky. Hospodárný způsob výroby ve velkoprovozním technickém měřítku není zveřejněn.
Ve vykládacím spisu DE 100 16 321 se popisuje způsob fermentace k výrobě doplňků zvířecího krmivá obsahujících kyselinu D-pantothenovou. Podstatnou nevýhodou tohoto způsobu je však, stejně jako u výše uvedeného fermentativního způsobu výroby kyseliny D-pantothenové, že se mikroorganismům pomocí fermentačního media musí nutně dodávat předstupeň kyseliny pantothenové, β-alanin, aby se dosáhlo hospodárných výtěžků požadovaného produktu.
Dále popisují US 6 013 492 a VO 96/332839 zpracováni kyseliny D-pantothenové z fermentačního roztoku odfiltrováním nerozpustných podílů (příkladně buněčný materiál) z ·· ···· ·· ·· 44 ···· • · · *444 · · · • 4 4 4 4 4 4 · 4 4 • · 444 444444 4 4 • · 4 44 4 4444
444 · 4 44 44 44 kultivačního media, adsorpcí filtrátu na aktivním uhlí, následnou elucí kyseliny D-pantothenové organickým rozpouštědlem, s výhodou methanolem, neutralizací hydroxidem vápenatým a konečně krystalizací kalcium-D-pantothenátu. Podstatnými nevýhodami jsou ztráty cenného produktu, ke kterým dochází při krystalizací a rovněž používání organického rozpouštědla, které se z produktu jen těžko odstraňuje a vyvolává nutnost nákladného zpětného získávání rozpouštědla.
EP 0 590 857 popisuje způsob fermentace k výrobě kyseliny D-pantothenové, při kterém se při kultivaci mikroorganismu nutně vyžaduje dokrmování β-alaninem. Fermentační roztok se k oddělení biomasy filtruje, potom se vede přes kationtoměnič a následně přes aniontoměnič, potom se neutralizuje hydroxidem vápenatým, odpaří se, smíchá s aktivním uhlím, ještě jednou se přefiltruje a krystaluje se za přídavku methanolu a chloridu vápenatého. Výsledný produkt obsahující kalciumpantothenát vedle kyseliny D-pantothenové ve formě její vápenaté soli obsahuje ještě chlorid vápenatý v molárním poměru 1:1. K redukci obsahu chloridu vápenatého je nutná elektrodialýza s následným sušením rozstřikováním. Tento způsob má nevýhodu, že pro velký počet nákladných procesních kroků a používání organických rozpouštědel není ani ekonomický ani ekologický.
Úkolem předloženého vynálezu je dát k dispozici doplněk zvířecího krmivá obsahující kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli a rovněž jeho výrobu zlepšeným způsobem výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí, který by neměl výše uvedené nevýhody. Přitom je z ekonomických důvodů žádoucí takový způsob, při kterém se dokrmování β-alaninu výrazně redukuje nebo dokonce není nutné. Dále je žádoucí výroba kyseliny D-pantothenové ve formě jejích dvojsytných •9 9999 solí a zde především solí kovů alkalických zemin, protože dvojsytné soli mají méně hygroskopické vlastnosti než jednosytné soli kyseliny D-pantothenové a pro další použití, příkladně jako doplněk zvířecího krmivá tak mají méně výrazný sklon ke spékání.
Tento úkol byl výhodným způsobem vyřešen předloženým vynálezem.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí, vyznačující se tím, že
a) se použije nejméně jeden organismus produkující kyselinu D-pantothenovou, jehož biosyntéza kyseliny pantothenové-(pan) a/nebo isoleucin/valin-(ilv) je deregulovaná a v kultivačním mediu se fermentací tvoří nejméně 2 g/1 solí kyseliny D-pantothenové, přičemž se do kultivačního media uvádí 0 až 20 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu,
b) k vytvořenému D-pantothenátu se přidají soli, obsahující vícemocné kationty, přičemž se vytvoří vícemocné soli kyseliny D-pantothenové,
c) roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové, se zpracuje nanofiltrací, přičemž se obohatí vícemocné soli kyseliny D-pantothenové a
d) retentát nanofiltrace, obsahující vícemocné soli kyseliny pantothenové, se podrobí sušení a/nebo • ·· · ··· tvorbě formulace.
Při jedné variantě způsobu podle vynálezu je retentát z kroku c) suspenze, která obsahuje vícemocné soli kyseliny D-pantothenové.
Dále se může fermentace provádět známými způsoby šaržovým provozem, šaržovým provozem s dávkováním, opakovaným šaržovým provozem s dávkováním nebo kontinuálním způsobem vedení procesu. K neutralizaci vznikající kyseliny pantothenové se přitom využívají obvyklé pufrovací systémy, jako je příkladně fosfátový pufr s hydroxidem sodným, hydroxidem draselným nebo s amoniakem.
V další variantě způsobu podle vynálezu se v kroku a) tvoří fermantací v kultivačním mediu nejméně 10 g/1, s výhodou nejméně 20 g/1, obzvláště výhodně nejméně 40 g/1, nanejvýš výhodně nejméně 60 g/1 a zvláště nejméně 70 g/1 solí kyseliny D-pantothenové.
Podle vynálezu se formulací produkovat rozumí, že organismus může syntetizovat větší množství kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí, než je nutné pro vlastní potřebu látkové výměny. V jedné výhodné variantě podle vynálezu se nevyskytuje syntetizované množství kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí interně v buňkách, nýbrž jsou z organismu ideálním způsobem úplně vylučovány do kultivačního media. Toto vylučování může probíhat aktivně nebo pasivně známými mechanismy.
Podle vynálezu se jako organismy, produkující kyselinu
D-pantothenovou, použijí mikroorganismy. K nim patří podle vynálezu houby, kvasinky a/nebo bakterie. Podle vynálezu • · · · • · • · ft • · · • · 4 • ft » ft ·· ftft jsou výhodné houby jako příkladně Mucor nebo kvasinky, jako příkladně Saccharomyces nebo Debaromyces, s výhodou se použije Saccharomyces cerevisiae. S výhodou se podle vynálezu použijí coryneformní bakterie nebo Bacillaceae. Podle vynálezu jsou s výhodou zahrnuty příkladně bakterie druhů Corynebacterium, Escherichia, Bacillus, Arthrobacter, Bevibacterium, Pseudomonas, Salmonella, Klebsiella, Próteus, Acinetobacter nebo Rhizobium. Obzvláště výhodné jsou zde příkladně Corynebacterium glutamicum, Brevibacterium breve nebo Bacillus subtilis, B. licheniformis, B. amyloliquefaciens, B. cereus, B. lentimorbus, B. lentus, B. firmus, B. pantothenticus, B. circulans, B. coagulans, B. megaterium, B.pumilus, B. thuringiensis, B. brevis, B. stearothermophilus a další druhy bacilů ze skupiny 1, které jsou charakterizovány jejich 16sRNA nebo Actinum mycetalis. Tento výčet slouží vysvětlení a v žádném případě není pro předložený vynález limitující.
Navíc zahrnuje předložený vynález také použití geneticky změněných organismů k výrobě doplňku zvířecího krmivá podle vynálezu, obsahujícího volnou kyselinu D-pantothenovou a/nebo její soli. Takové geneticky změněné organismy se mohou příkladně izolovat chemickou mutagenezí a následnou selekcí vhodným screeningovým způsobem. Podle vynálezu jsou zahrnuty také tak zvané produkční kmeny, které jsou vhodné k výrobě produktu ve smyslu předloženého vynálezu a vykazují genetické změny z hlediska toku látkové výměny ve směru kyseliny D-pantothenové, přičemž jsou také zahrnuty změny z hlediska vylučování kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí přes buněčnou membránu. Toho je možné dosáhnout příkladně změnami v klíčových pozicích relevantních cest biosyntézy při látkové výměně použitého organismu.
• ·· · •φ φφφφ
Možné je také použití transgeních organismů, které rezultují z přenosu homologních a/nebo heterologních sekvencí nukleotidů, které jsou nutné k syntéze požadovaného produktu nebo mohou být nápomocné. Možná je přitom přeexprese a/nebo deregulace jednoho nebo několika genů jednotlivě a/nebo v kombinaci, lokalizovaných v genomu a/nebo na jeden vektor.
Transgení organismy takového druhu mohou s výhodou obsahovat dodatečné kopie a/nebo geneticky změněné geny, vybrané ze skupiny panB, panC, panD, panE a/nebo jejich kombinací a/nebo dokonce organizační jednotky, jako je operon BCD. Dále mohou být do organismů s výhodou manipulovány další cesty látkové výměny, jako příkladně cesta biosyntézy isoleucin-valin, jak se popisuje příkladně v EP 1 006 189,
EP 1 006 192, EP 1 006 193 nebo EP 1 001 027. Tím jsou ve zvýšené míře dány k dispozici výchoz! sloučeniny pro biosyntézu kyseliny pantothenové s rozvětvenými řetězci.
S výhodou se případně geny pro tuto cestu biosyntézy, to znamená ilvB, ilvN, ilvC a/nebo ilvD přeexprimují.
Navic jsou podle vynálezu do použitých organismů produkujících kyselinu pantothenovou zahrnuty genetické změny aspartát-a-dekarboxylázy (panD), příkladně přeexpresí a/nebo deregulací.
Termínem deregulace se podle vynálezu rozumí následující :
Změna nebo modifikace nejméně jednoho genu, který kóduje pro enzym při biosyntetické cestě látkové výměny, takže aktivita enzymu v mikroorganismu je změněna nebo modifikována. Výhodné je, aby nejméně jeden gen, který kóduje pro enzym při biosyntetické cestě látkové výměny byl změněn takovým způsobem, aby se produkt genu tvořil intenzivněji nebo aby • · « · · «
vykazoval zvýšenou aktivitu. Pojem deregulovaná cesta látkové výměny zahrnuje také biosyntetřekou cestu látkové výměny, při které je více jak jeden gen, který kóduje pro více jak jeden enzym změněn nebo modifikován tak, aby byly změněny nebo modifikovány aktivity více jak jednoho enzymu.
Změny nebo modifikace mohou zahrnovat, avšak nejsou omezeny na :
Odstranění endogeního promotoru nebo regulačních prvků; zavedení silných promotorů, indukovatelných promotorů nebo několika promotorů zároveň; odstranění regulačních sekvencí, takže se změní exprese genového produktu; změna chromosomální polohy genu; změna sekvence DNA v blízkosti genu nebo uvnitř genu jako je příkladně ribosomální místo vazby (RBS); zvýšení počtu kopií genu v genomu nebo různý počet kopií vnesením plasmidů; modifikace proteinů (příkladně regulačních proteinů, suppresorů, enhancerů, trankriptionelních aktivátorů a podobně), které hrají roli při transkripci genu a/nebo při translaci na produkt genu. K tomu patří také všechny další možnosti k deregulaci exprese genů podle stavu techniky jako příkladně použití antisense-oleonukleotidů nebo blokace represorových proteinů.
Deregulace může také zahrnovat změny v kódující oblasti genů, které příkladně vedou k posílení feedback-regulace v produktu genu nebo k větší nebo menší specifické aktivitě produktu genu.
Navíc jsou podle vynálezu výhodné genově technické změny na enzymech, které ovlivňují úbytek výchozích látek pro kyselinu pantothenovou a/nebo přesun kyseliny pantothenové na koenzym A. Kódující geny pro takové enzymy jsou příkladně : alsD, avtA, ilvE, ansB, coaA, coaX a další.
···· • · · • · · « ·
« ·
Tento výčet slouží vysvětlení a v žádném případě není limitující pro pro předložený vynález.
Dále jsou výhodné genově technické změny, které zajišťují celulární dostupnost kofaktorů (příkladně methylentetrahydrofolát, redox-ekvivalenty a jiné) v množství optimálním pro produkci kyseliny pantothenové.
S výhodou je dostupný β-alanin již v buňkách ve zvýšené koncentraci oproti oproti odpovídajícím geneticky nezměněným organismům a nemusí se tak přidávat do kultivačního media jako prekursor, jak se požaduje příkladně podle EP-A 0 590 857. Výhodné jsou mikroorganismy, jejichž biosyntéza kyseliny pantothenové (pan)- a/nebo isoleucin-valin-(ilv)a/nebo asparát-a-dekarboxyláza (panD) jsou deregulované.
Dále je výhodná dodatečná přeexprese ketopanthoátu-reduktázy (panE) v mikroorganismech.
Dále je podle vynálezu výhodné, jestliže případně coaA-gen, který je nutný pro syntézu koenzymu A, má sníženou aktivitu nebo (příkladně v druzích Bacillus) je zcela vyřazen. Bacillus totiž obsahuje vedle coaA další gen pro tuto enzymatickou funkci (= coaX). Také aktivita tohoto genu coaX nebo korespondujících enzymů se může změnit, s výhodou snížit, nebo dokonce deletovat, pokud coaA samotný vykazuje ještě dostatečnou, i když sníženou enzymatickou aktivitu, to znamená, že enzymatická aktivita coaA není zcela potlačena. Vedle přeexprese různých genů je výhodná také genetická manipulace oblasti promotorů těchto genů takovým způsobem, aby tato manipulace vedla k přeexpresi produktu genů.
V jedné variantě provedení předloženého vynálezu se použijí kmeny bakterií podle přílohy (PCT/US přihlášky • 9 9 9
99 9 • 9 9 · 9 99 9 • ·*9 9999«
0025993), jako je příkladně Bacillus subtilis PA 824 a/nebo jeho deriváty. V jedné výhodné variantě provedení podle vynálezu se použije ke způsobu podle vynálezu mikroorganismus Bacilllus subtilis PA 668, který se popisuje v příloze (US-Serial-Nr. 60/262 995). Tyto kmeny Bacilllus subtilis PA 824 a PA 668 se vyrobí následovně :
Vychází se z kmene Bacillus subtilis 168 (kmen Marburg ATCC 6051), který vykazuje genotyp trpC2 (Trp-), ze kterého se transdukcí Trp+ markéru (z Bacillus subtilis divoký typ V 23) vyrobí kmen PY 79. Do kmenu PY 79 se klasickými metodami genových technologií (jak popisuje příkladně Harwood,
C.R. a Cutting, S.M. (vydavatel) Molecular Biological Methods for Bacillus (1990) John Viley & Sons, Ltd.,
Chichester, Anglie) zavedou mutace ůeZía-panB a delťa-panEl.
Výsledný kmen se transformuje genomickou DNA kmene Bacillus subtilis PA 221 (genotyp P26panBCD, trpC2 (Trp-)) a genomickou DNA kmene Bacillus subtilis PA 303 (genotyp P26panEl). Výsledný kmen PA 327 má genotyp P26panBCD, P26PanEl a je tryptofaně auxotrofní (Trp-). Se kmenem Bacillus subtilis PA 327 se vloží do 10 ml kultury s mediem SVY (25 g/1 Difco Veal Infusion Broth, 5 g/1 Difco Yeast Extract, 5 g/1 glutamátu sodného, 2,7 g/1 síranu amonného ve 740 ml vody, autoklávuje se, následně se přidá 200 ml 1 M fosforečnanu draselného, pH 7,0 a 60 ml 50 %-ního sterilního roztoku glukózy), ke kterému se přidá 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu a dosáhne se titru kyseliny pantothenové až 3,0 g/1 (24 hodin).
Výroba kmene Bacillus subtilis PA 221 (genotyp P26pan BCD, trpC2 (Trp-)) se popisuje v následujícím odstavci :
• *· A • A A A
A se s pomocí sek(viz Merkel
A A
A A
A A
A A
A A
AAA
I
A • AA
Klasickými metodami genových technik venčních ionformací operonu panBCD E. coli a spol., FEMS Microbiol.Lett., 143, 1996:247-252), přičemž se vychází z Bacillus subtilis GP 275 plasmidové knihovny se klonuje operon panBCD Bacillus. Ke klonování se použije kmen E. coli BM4062 (birts) a informace, že operon Bacillus leží v blízkosti genu birA. Operon panBCD se zavede do replikovatelného plasmidu E. coli. Ke zlepšení exprese operonu panBCD se použijí silné, konstitutivní promotory Bacillus subtilis fágy SP01 (P26) a místo napojení ribosomu (= RBS) před panB-genem se nahradí artificiálním RBS. Před kazetu P2^panBCD na plasmidu se liguje fragment DNA, který leží bezprostředně upstream nativního genu panB v Bacillus. Tento plasmid se transformuje v kmenu Bacillus subtilis RL-1 (klasickou mutagenezí získaný derivát Bacillus subtilis 168 (kmen Marburg ATCC 6051), genotyp trpC2 (Trp-) a homologovou rekombinací se nahradí nativní operon panBCD operonem p2gpanBCD. Výsledný kmen se jmenuje PA 221 a má genotyp P2gpanBCD, trpC2 (Trp-). Se kmenem Bacillus subtilis PA 221 se v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 0,92 g/1 (24 hodin).
Výroba kmene Bacillus subtilis PA 303 (genotyp P26PanEl) se popisuje v následujícím odstavci :
S pomocí genové sekvence E. coli panE se analogicky klonuje sekvence Bacillus panE. Ukazuje se, že v Bacillus subtilis existují dva homology genu panE E.coli, které se označují jako panEl a panE2. Deleční analýzou se ukazuje, že gen panEl vyvolává 90 % produkce kyseliny pantothenové, zatímco delece genu panE2 nemá žádný významný efekt na produkci kyseliny pantothenové. Také zde byl analogicky ke φφφφ • φ φ • φ · φ φ • · φ • · φ φφ φφφ
klonování operonu panBCD nahrazen promotor silněji konstitutivním promotorem ^25 a místo napojení ribosomu před genem panEl se nahradí artificiálním místem vazby. Fragment P2gpanEl se klonuje do vektoru, který je vytvořen tak, aby fragment ?2gpanEl se mohl integrovat do originální pozice panEl v genomu Bacillus subtilis. Po transformaci a homologní rekombinaci se výsledný kmen jmenuje PA 303 a má genotyp P2gpanEl. Se kmenem Bacillus subtilis PA 303 se v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,66 g/1 (24 hodin).
Další konstrukce kmene se provádí transformací PA 327 plasmidem, který obsahuje operon P2gHvBNC a markerový gen pro spectinomycin. Operon P2gHvBNC integruje do pozice amyE, což bylo prokázáno pomocí PCR. Transformanty se označují jako PA 340 (genotyp P2gpanBCD, P26panEl, P2gIlvBNC, specR, trpC2 (Trp-).
Se kmenem Bacillus subtilis PA 340 se v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní pouze 5 g/1 β-alaninu dosáhne titru kyseliny pantothenové až 3,6 g/1 (24 hodin), v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní 5 g/1 β-alaninu a 5 g/1 α-ketoisovalerátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 4,1 g/1 (24 hodin).
Dále byla uvedena do kmene PA 340 deregulovaná kazeta ilvD. K tomu se plasmid, který obsahuje ilvD gen za kontroly promotoru P2g s artificiální RBS2 transformuje v PA 340. Přitom se gen P2gilvD integruje homologickou rekombinaci do originální pozice ilvD. Výsledný kmen PA 374 má genotyp P26panBCD, P26panEl, P2gilvBNC, P26ilvD’ specR a trpC2 (Trp-).
• · ♦ · ·· ftftftft • · · • ftftftft • · · • · · • ft ftftft ftft· • · ft • ·
Se kmenem Bacillus subtilis PA 374 v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní pouze 5 g/1 β-alaninu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 2,99 g/1 (24 hodin).
Aby bylo možné s kmenem PA 374 produkovat kyselinu pantothenovou bez dokrmování β-alaninu, byly do kmene PA 374 zavedeny dodatečné kopie genu panD kódující pro aspartát-a-dekarboxylázu. K tomu se transformuje chromosomální DNA kmene PA 401 na PA 374. Selekcí na tetracyklin se získá kmen PA 377.
Výsledný kmen PA 377 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanEl, PžgilvBNC, P2gilvD, specR, tetR a trpC2 (Trp).
Se kmenem Bacillus subtilis PA 377 v 10 ml kultury s mediem SVY bez doplňování výchozích sloučenin se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,31 g/1 (24 hodin).
Výroba kmene Bacillus subtilis PA 401 (genotyp P2gpanD) se popisuje v následujícím odstavci :
Bacillus subtilis panD se klonuje panBCD operonu do vektoru, který nese tetracyklinový markerový gen. Před panD se klonuje promotor P26 a výše popsaná artificiální RBS. Restrikčním trávením se vyrobí fragment, který obsahuje tetracyklinový markerový gen a a gen P26panD. Tento fragment se religuje a transformuje do výše popsaného kmenu PA 221. Přitom fragment integruje do genomu kmene PA 221. Výsledný kmen PA 401 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanD, tetR a trpC2 (Trp).
Se kmenem Bacillus subtilis PA 401 se v 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní 5 g/1 α-ketoisovalerátu do·· ·9·9
9
9
9
9
9999 sáhne titru kyseliny pantothenové až 0,3 g/1 (24 hodin).
V 10 ml kultury s mediem SVY, které se doplní 5 g/1 kyseliny D-pantoinové a 10 g/1 L-aspartátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 2,2 g/1 (24 hodin).
S výchozím kmenem PA 377 se transformací s chromosomální DNA kmene PY 79 generuje tryptofan-prototrofní kmen. Tento kmen PA 824 má genotyp P2gpanBCD, P2gpanEl,
P^ilvBNC, P2gilvD, specR, tetR a Trp+.
Se kmenem Bacillus subtilis PA 824 v 10 ml kultury s mediem SVY bez doplňování výchozích sloučenin se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 4,9 g/1 (48 hodin) (srovnání PA 377 : až 3,6 g/1 za 48 hodin. Přesná konstrukce kmene je popsána v příloze přihlášky PCT/US 0 025 993.
Výroba PA 668 se popisuje v následujícím odstavci :
Gen Bacillus panB se klonuje z divokého typu operonu panBCD a insertuje do vektoru, který vedle genu rezistentního na chloramfenikol obsahuje také sekvence B.subtilis vpr locus.
Silně konstitutivní promotor P26 se zavede před 5 -konec genu panB. Fragment, který obsahuje gen P2gpanB, markerový gen pro chloramfenikovou rezistenci a rovněž sekvence Bacillus subtilis vpr se získá restrikčním trávením. Isolovaný fragment se religuje a transformuje jím kmen PA 824. Získaný kmen se označuje PA 668. Genotyp PA 668 je P26panBCD, P26panEl, P26ilvBNC, P26ilvD, P26panB, specR, tetR, CmR a Trp+.
Izolují se dvě kolonie PA 668 a označí se PA 668-2A • · • · ♦ · • · · • ·
a druhá PA 668-24.
Se kmenem Bacillus subtilis PA 668-2A se v 10 ml kultury s mediem SVY bez doplňování výchozích sloučenin dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,5 g/1 ve 48 hodinách.
V 10 ml kultury doplněné 10 g/1 aspartátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 5 g/1.
Se kmenem Bacillus subtilis PA 668-24 se v 10 ml kultury s mediem SVY bez doplňování výchozích sloučenin dosáhne titru kyseliny pantothenové až 1,8 g/1 ve 48 hodinách.
V 10 ml kultury doplněné 10 g/1 L-aspartátu se dosáhne titru kyseliny pantothenové až 4,9 g/1.
Přesná konstrukce kmenů se popisuje v přílohách PCT/US-přihlášky 0025993 a v US-Serial-Nr. 60/262,995.
S výše popsaným kmenem PA 377 se při fermentací limitované glukózou v mediu SVY (25 g/1 Difco Veal Infusion Broth, 5 g/1 Difco Yeast Extract, 5 g/1 tryptofanu, 5 g/1 Na-glutamátu, 2 g/1 (NH4)2SO4, 10 g/1 KH2PO4, 20 g/1 K2HPO4, 0,1 g/1 CaCl2, 1 g/1 MgS04, 1 g/1 natriumcitrátu, 0,01 g/1 FeS04 x 7 H20 a 1 ml/1 roztoku stopových solí o následujícím složení : 0,15 g Na2Mo04 x 2 H20,
2.5 g HgBOg, 0,7 g CoCl2 x 6 H20, 0,25 g CuS04 x 5 H20,
1.6 g MnCl2 x 4 H20, 0,3 g ZnS04 x 7 H20, doplněno vodou na 1 1) se v měřítku 10 1 při kontinuálním dokrmování roztoku glukózy dosáhne za 36 hodin (48 hodin) koncentrací kyseliny pantothenové ve fermentační břečce 18 až 19 g/1 (22 až 25 g/1)
Při fermentací PA 824 limitované glukózou, tryptofan-prototrofní derivát PA 377 v mediu s kvasnicovým extraktem ·* 9 9 9 9
• 9 ··
(10 g/1 Difco Yeast Extract, 5 g/1 Na-glutamátu, 8 g/1 (NH4)2SO4, 10 g/1 KH2P04, 20 g/1 K2HP04, 0,1 g/1 CaCl2, 1 g/1 MgSO4, 1 g/1 natriumcitrátu, 0,01 g/1 FeS04 x 7 H20 a 1 ml/1 výše popsaného roztoku stopových solí) se v měřítku 10 1 při kontinuálním dokrmování roztoku glukózy dosáhne za 36 hodin, 48 hodin a 72 hodin následných koncentrací kyseliny pantothenové ve fermentační břečce : 20 g/1, 28 g/1 a 36 g/1.
Další optimalizací media se kmenem PA 824 se při fermentaci limitované glukózou dosáhne v mediu sestávajícím z 10 g/1 Difco Yeast Extract, 10 g/1 NZ-aminu A (Quest International GmbH, Erftstadt), 10 g/1 Na-glutamátu, 4 g/1 (NH4)2SO4, 10 g/1 KH2PO4, 20 g/1 K2HPO4, 0,1 g/1 CaCl2, 1 g/1 MgS04, 1 g/1 natriumcitrátu, 0,01 g/1 FeS04 x 7 H20 a 1 ml/1 výše popsaného roztoku stopových solí se v měřítku 10 1 při kontinuálním dokrmování roztoku glukózy dosáhne za 36 hodin (48 hodin) koncentrace kyseliny pantothenové ve fermanační břečce 37 g/1 (48 g/1).
Je možné další zvyšování koncentrace kyseliny pantothenové ve fermentační břečce optimalizací media, prodloužením doby fermentace, zlepšováním procesu a kmene, a rovněž kombinací jednotlivých kroků. Tak je možné dosáhnout výše popsaných koncentrací kyseliny pantothenové také fermentací kmenů, které jsou deriváty výše popsaného PA 824. Deriváty se mohou vyrábět klasickým vývojem kmene a rovněž dalšími genově technickými manipulacemi. Vývojem medií, kmenů a způsobu fermentace se může titr kyseliny pantothenové ve fermentační břečce zvýšit i nad 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 a > 90 g/1.
Podstatnou výhodou způsobu podle vynálezu je, že se
99*9
999 9
9 9
4
9
99<
9 9 9 9
fermentace provádí v kultivačním mediu, které kromě nejméně jednoho zdroje uhlíku a dusíku jako výchozích sloučenin neobsahuje žádné další předstupně (prekurzory). To znamená, že biosyntéza kyseliny D-pantothenové je nezávislá na dokrmování dalších výchozích látek. Jako takové výchozí látky se podle vynálezu rozumí příkladně β-alanin nebo L-aspartát a/nebo L-valin a/nebo α-ketoisovalerát a/nebo jejich kombinace.
V jedné výhodné variantě způsobu podle vynálezu se provádí fermentace organismů produkujících kyselinu D-pantothenovou v kultivačním mediu, které obsahuje jeden zdroj uhlíku a jeden zdroj dusíku, ke kterému se ale nepřidává žádný volný β-alanin a/nebo soli β-alaninu a to ani v průběhu fermentace. To znamená, že k výrobě kyseliny D-pantothenové v rozmezí nejméně 10 g/1 kultivačního media, s výhodou nejméně 20 g/1, obzvláště výhodně nejméně 40 g/1, zcela obzvláště výhodně nejméně 60 g/1 a obzvláště nejméně 70 g/1 není podle vynálezu nutné žádné dokrmování volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu. Nezávislost na dokrmování výchozích látek představuje obzvláště významnou ekonomickou výhodu způsobu podle vynálezu oproti známým způsobům, neboř řada výchozích látek je velmi drahá.
Přidavek β-alaninu a/nebo solí β-alaninu však není podle vynálezu vyloučen, takže se může následně výtěžek kyseliny D-pantothenové přídavkem β-alaninu a/nebo solí β-alaninu ještě dále zlepšit. Pokud se příkladně vychází z toho, že potřebné výchozí látky kyseliny pantothenové jsou k dispozici v dostatečném množství a pouze aktivita genu panD limituje další nárůst produkce kyseliny D-pantothenové, pak se může příkladně výtěžek kyseliny D-pantothenové zvýšit o dalších 50 % přídavkem volného β-alaninu a/nebo solí «9 »♦»· ·· »*»* • · · · * ti » • β · • 9 »·4 ··
9 · • · e • ·»· · • · ·» « · « · <
9 ·
9 9 9
99 β-alaninu.
V jedné výhodné variantě předloženého vynálezu se může ke kultivačnímu mediu přidat až 20 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu k dodatečnému zvýšení výtěžku kyseliny pantothenové o více jak 50 %. Výhodný je přídavek asi 15 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu ke kultivačnímu mediu.
Příklady vhodných zdrojů uhlíku podle vynálezu k použití v kultivačním mediu pro fermentací výše uvedených organismů jsou cukry, jako hydrolyzáty škrobu (mono-, di-, oligosacharidy), s výhodou glukóza nebo sacharoza a rovněž řepná melasa nebo třtinová melasa, proteiny, hydrolyzáty proteinů, sojová moučka, kukuřičná voda, tuky, volné mastné kyseliny, opětovně použité buňky z již provedených fermentací nebo jejich hydrolyzáty a rovněž kvasnicový extrakt.
Tento výčet není pro předložený vynález limitující.
Dále se předložený vynález vyznačuje s výhodou tím, že celkový obsah cukru až do konce fermentace je zredukován na minimum, protože v opačném případě je pozdější sušení a/nebo formulace fermentačního roztoku ztížena slepováním. Toho lze podle vynálezu dosáhout tím, že se fermentace vede ještě nějaký čas po spotřebování zdroje uhlíku (při kultivaci v šaržovém způsobu) nebo poté, co se přeruší přívod uhlíku (při vedení procesu šaržovým provozem s dávkováním nebo opakovaným šaržovým provozem s dávkováním) a/nebo se regujluje takovým způsobem, že koncentrace zdroje uhlíku je téměř nulová (při vedení procesu šaržovým provozem s dávkováním, opakovaným šaržovým provozem s dávkováním nebo kontinuálním způsobem).
• * • fcfcfc • · · · · · • · · · · · · ·· · • · · · · · · · · · fc · • ♦ ·«· ······ · ·
To se podle vynálezu provádí tak, že po přerušení dávkování zdroje uhlíku (příkladně roztoku cukru) se fermentace vede dále až k dosažení koncentrace rozpuštěného kyslíku (p02) na nejméně 80 %, s výhodou 90 % a obzvláště výhodně 95 % hodnoty nasycení ve fermentačním roztoku.
Příklady vhodných zdrojů dusíku je amoniak, síran amonný, močovina, proteiny, hydrolyzáty proteinů nebo kvasnicový extrakt. Ani tento výčet není pro předložený vynález limituj ící.
Dále obsahuje fermentační medium minerální soli a/nebo stopové prvky, jako jsou aminokyseliny a vitaminy. Přesná složení vhodných fermentačních medií jsou hojně známé a odborníkům dostupné.
Po inokulaci fermentačního media vhodným organismem produkujícím kyselinu D-pantothenovou (s buněčnou hustotou známou odborníkům) případně po přidání prostředku proti pěnění dochází ke kultivaci organismu. Případně nutná regulace pH hodnoty media se může provádět různými anorganickými nebo organickými louhy nebo kyselinami, jako je příkladně NaOH, KOH, amoniak, kyselina fosforečná, kyselina sírová, kyselina solná, kyselina mravenčí, kyselina jantarová, kyselina citrónová a podobně.
Na základě pufrovacích systémů, použitých během fermentace, které mohou být, jak bylo výše popsáno příkladně NaOH, KOH, amoniak, kyselina fosforečná, kyselina sírová, kyselina solná, kyselina mravenčí, kyselina jantarová, kyselina citrónová a podobně, vyskytuje se vytvořená kyselina pantothenová ve fermentačním roztoku podle použitého pufrovacího systému ve formě dané soli (daných solí).
• · · · · · • · · · ·· ·· • · · · • · · · • · · · · * • · · «4 · ·
Vzhledem k tomu, že při tom jsou obzvláště soli kyseliny D-pantothenové ve formě svých jednomocných kationtů nevýhodné, zpracuje se fermentační roztok podle předloženého vynálezu nanofUtrácí. K tomu se nejprve k vytvořenému D-pantothenátu podle předloženého vynálezu přivedou soli, obsahující vícemocné kationty, čímž se vytvoří vícemocné soli kyseliny D-pantothenové. Podle předloženého vynálezu se může přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty, provádět v pevné formě nebo ve formě roztoku během, výhodně na konci, nebo po fermentaci v kroku a). Přívod vodného roztoku, obsahujícího vícemocné kationty, se může například provádět kontinuálně.
Dále je možno v kroku, předřazenému nanofiltraci, tedy před nanofiltrací v kroku c) způsobu podle předloženého vynálezu, provádět oddělení buněčné hmoty nebo od v roztoku vysrážených komponent. Při tom se může oddělení provádět dekantací nebo membránovou filtrací, výhodně ultrafiltraci.
V jedné variantě způsobu podle předloženého vynálezu se membránová filtrace provádí jako diafiltrace. Také zde je možno podle předloženého vynálezu provádět přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty, během nebo po membránové filtrai roztoku, obsahujícího D-pantothenát. Například se při tom provádí přivádění vodného roztoku, obsahujícího vícemocné kationty, kontinuálně.
Při oddělování buněčné hmoty a/nebo v roztoku vysrážených komponent, jako jsou například těžko rozpustné nebo nerozpustné fosfátové, popřípadě sulfátové soli, enzymy, hormony, proteiny, antibiotika, pyrogeny, viry, polysacharidy, koloidy, tensidy, pesticidy nebo jiné organické látky, probíhá oddělování za využití síly tíže, odstředivé síly, tlaku nebo vakua. Příkladné způsoby jsou mimo jiné ·· ···· • · · • · ♦ · · • · ·
dekantace, elutriace, prosévání, vzduchové třídění, třídění, filtrace, dialýza, sedimentace, mikrofiltrace, ultrafiltrace, flotace, pěnová frakcionace, gravitační úprava v těžkých kapalinách, čiření, odstřeďování nebo odsazování. Jako membránová filtrace jsou zahrnuté membránové dělící způsoby, pracující na principu tlakové diference mezi přívodní stranou a stranou permeátu, jako je mikrofiltrace nebo ultrafiltrace. Způsoby se odlišují například svojí hranicí dělení. Tak není při ultrafiltraci schopnost zachycení částeček (cut-off) jako při mikrofiltraci vztahována na velikost částeček, ale na molekulovou hmotnost, která je
O Z* v rozmezí asi ÍO-7 až 2x10° Da. Při ultraf iltraci vypadává vedle filtrátu (permeátu) takzvaný koncentrát (retentát).
Pro odděování pevných látek nebo obohacování nebo ochuzování rozpuštěných středněmolekulárních a vysokomolekulárních látek se výhodně používají asymetricky strukturované, porézní membrány.
Membrány, používané podle předloženého vynálezu, mohou být vystavěny při výhodné variantě z dělící vrstvy, která způsobuje vlastní dělení a z jednovrstvé nebo vícevrstvé nosné vrstvy, která nese dělící vrstvu a má hrubší póry, než dělící vrstva. Dělící vrstvy, jakož i nosná vrstva mohou sestávat z organických nebo anorganických polymerů, keramiky, kovu nebo uhlíku a musí být v reakčním mediu a při procesních teplotách stabilní. Příklady jsou uvedené v následující tabulce 1 , avšak tyto příklady nejsou pro předložený vynález limitující.
• · · · · · • ♦ · · • · » 9
9 9 9 9
9 9 9 9 ·· ♦··· ·» • · · · · • · · · · · · • · · · · ♦ • · · · · • · · · 0 · ·
Tabulka 1
| Dělící vrstva | Spodní struktura (hrubší než dělící vrstva) |
| Kov | kov |
| Keramika | kov, sklo, keramika nebo uhlík |
| Polymer | polymer, kov, keramika nebo keramika na kovu |
| Uhlík | uhlík, kov nebo keramika |
| Keramika: např. GC-AI2O3, γ-Αΐ2θ3, ZrCb, T1O2, SiC, směsné keramické materiály Polymer: např. PTFE, PVDF, polysulfon, polyethersulfon, polyetheretherketon, polyamid, polypropylen, polyakrylonitril |
Membrány se mohou používat ve formě hadic, trubek, kapilár, dutých vláken nebo plošných membrán v o sobě známých plošných, trubkovitých, multikanálových, kapilárních nebo vinutých modulech.
Optimální transmembránové tlaky mezi retentátem a permeátem jsou v podstatě, v závislosti na průměru pórů membrány, popřípadě hranici dělení (uváděno v jednotkách molekulové hmotnosti), mechanické stabilitě membrány a vždy podle druhu membrány, v rozmezí 0,1 až 4,0 MPa. Vyšší transmembránové tlaky vedou zpravidla k vyšším tokům permeátu. Při tom je možno v případě, při kterém je přítok (zpracovávaný roztok), přiváděn s příliš vysokým tlakem, upravit transmembránový tlak zvýšením tlaku permeátu.
Provozní teplota je závislá na stabilitě produktu a membrány. Je v rozmezí asi 20 °C až 90 °C , výhodně asi 40 °C až 70 °C . Vyšší teploty vedou k vyšším tokům permeátu. Při tom jsou použitelné například membrány podle tabulky 2 , pro předložený vynález však nejsou limitující.
• · · · · · • · · · · · ··· · · · · «· • · · ·· · · · φ φ · * · ··· ······ ·
Tabulka 2
| Výrobce | Membrána | Hranice dělení (kD) Průměr pórů (nm) |
| Atech innovations GmbH | TiO2 na a-Al2O3/l,2 | 20 kD |
| ZrO2 na a-Al2O3/l,2 | 50 nm | |
| a-Al2O3 na cc-Al2O3/l,2 | 100, 200 nm | |
| Rhodia/Orelis | ZrO2 nebo TiO2 na keramice/1,2 | 15, 50, 150 kD |
| ZrO2 na uhlík/1 | 15, 50, 150 kD | |
| ZrO2 nebo TiO2 na keramice/1,2 | 100, 200 nm | |
| Graver Technologies | TiO2 na oceli/1 | 100 nm |
| Microdyn Modulbau GmbH | homogenní PPmembrána/1 | 200 nm |
| NADIR Filtrations GmbH | polyethersulfon/3 | 5 - 150 kD |
| celulóza/3 | 5 - 100 kD | |
| polyakrylonitril/1 | 20, 40 kD | |
| polyethersulfon/1 | 40, 100 kD | |
| Berghof | polyaryletherketon na PP/1 | 5 kD |
| polysulfon na PP/1 | 5 až 20 kD | |
| polyamid na PP/1 | 20 kD | |
| Stork Friesland Β. V. | PVDF/1 | 100 nm |
| PVDF/1 | 30 nm | |
| Osmonics/Desal | modifikovaný polyakrylonitril/3 | 100 kD |
| polysulfon/3 | 4 0 nm | |
| Creavis | ZrO2 na Gt-Al2O3 a kov/'3 | 25, 8 0 nm |
| 1: surová membrána; 2: vícekanálový prvek; 3: plošná membrána pro vinuté moduly, kapsové moduly, deskové svazkové moduly nebo zvláštní moduly s pohyblivými membránami popř. s míchacími agregáty mezi membránami |
· • ·
• · ·· ····
Oddělování buněk se může podle předloženého vynálezu provádět výhodně také zvláštní formou membránové filtrace, totiž diafiltrací.
Diafiltrace se může provádět diskontinuálně tak, že se roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové vede v okruhu, obsahujícím nádrž, čerpadlo a jednu nebo více membrán a při tom jsou tlaky v membránových modulech nastaveny tak, aby vypadával permeát. Při tom se stále nebo po určitou dobu přidává voda nebo vodný roztok, který oddělovaný produkt neobsahuje nebo jej obsahuje jen v nižší koncentraci, než v okamžiku přídavku do dělícího okruhu. Vodný roztok může podle předloženého vynálezu osahovat soli vícemocných kationtů, jako jsou například halogenidy vápenaté a/nebo hořečnaté nebo jejich kombinace, výhodně chlorid vápenatý a/nebo hořečnatý.
Oddělování buněk pomocí diafiltrace se může podle předloženého vynálezu provádět také kontinuálně, přičemž je výhodně zařazeno více membránových modulů v řadě nebo je jeden nebo více čerpadlových okruhů, obsahujících membránový modul, zařazeno v řadě. Před, mezi nebo za membránovými moduly nebo čerpadlovými okruhy se může přidávat voda nebo vodný roztok, který obsahuje oddělovaný produkt v nižší koncentraci, než je v místě přídavku, přičemž stejně jako u diskontinuální varianty může vodný roztok obsahovat soli vícemocných kationtů, jako jsou například halogenidy vápenaté nebo hořečnaté nebo jejich kombinace, výhodně chlorid vápenatý a/nebo hořečnatý.
Podle předloženého vynálezu se může ultrafiltrace nebo diafiltrace provádět přímo s kapalinou vystupující z fermentace nebo po zpracování fermentační kapaliny například od• · • · • · · • · 9 99 ·
·
9 9 99
9 9 9 středěním, dekantací nebo podobnými postupy.
Pokud se podle předloženého vynálezu provádí oddělování buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent, může se provádět přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty, podle kroku b) způsobu podle předloženého vynálezu před, během nebo po ultrafiltraci nebo diafiltraci. Při jedné variantě způsobu podle předloženého vynálezu se jako vícemocné kationty přidávají například chlorid, dusičnan, hydroxid, mravenčan, octan, propionát, glycinát a/nebo laktát vápenatý a/nebo hořečnatý. Při tom se může přivádět jako 9.
vícemocný kationt například Ca v koncentraci 0,05 až 50
O . Oi mol Ca /mol D-pantothenátu, výhodně 0,2 až 2 mol Ca /mol D-pantothenátu.
V kroku c) způsobu podle předloženého vynálezu se potom zpracuje roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové, nanofiltraci, přičemž se vícemocné soli kyseliny D-pantothenové obohatí a současně se ochudí nežádoucí jednonmocné ionty, obzvláště jednomocné kationty, jako jsou například amonné, sodné nebo draselné ionty. Způsob podle předloženého vynálezu se vyznačuje tím, že se obsah jednomocných kationtů, obzvláště amonných, draselných a/nebo sodných iontů, redukuje na koncentraci 5 g/kg roztoku.
Předložený vynález zahrnuje všechny průmyslově použitelné nanofiltračni systémy. Dělení se provádívýhodně na asymetricky strukturovaných porézních membránách. Ve výhodné variantě předloženého způsobu se k tomu používají membrány, které jsou vybudované z dělící vrstvy, která způsobuje vlastní dělení látek a jednovrstvé nebo vícevrstvé nosné vrstvy, která dělící vrstvu nese a má hrubší póry než dělící vrstva. Dělící vrstvy, jakož i nosné vrstvy mohou ··· · sestávat z organických polymerů, keramiky, kovů nebo uhlíku a musí být v reakčním mediu a při procesní teplotě stabilní. Výhodné materiály pro dělicí vrstvu jsou polyamidy, polyimidy nebo polypiperaziny. Dělící vrstvy mohou mít také pozitivní nebo negativní povrchový náboj. Jako příklad anionicky funkcionalizované nanofiltrační membrány je možno uvést membránu DESAL 5 DK, avšak předložený vynález není výhradním použitím této membrány limitován.
Membrány se mohou používat ve formě hadic, trubek, kapilár, dutých vláken nebo plošných membrán v o sobě známých plošných, trubkovitých, multikanálových, kapilárních nebo vinutých modulech.
Při výhodné variantě způsobu podle předloženého vynálezu se při nanofiltraci v kroku c) použije tlakvá diference přes membránu v rozmezí 0,5 až 10,0 MPa, výhodně 2,0 až 8,0 MPa a obzvláště výhodně 4,0 až 7,0 MPa. Procesní teplota je výhodně v rozmezí 20 °C až 80 °C , výhodně 30 °C až 60 °C . Dále se může nanofiltrace provádět způsoby pro odborníky známými v jednom nebo více krocích kontinuálně nebo diskontinuálně.
Při výhodné variantě se před jedním nebo více nanofiltračními kroky přidává sůl, obsahující vícemocné kationty, v pevné formě nebo ve vodném roztoku. Podle předloženého vynálezu se přidávají vícemocné kationty jako je chlorid, dusičnan, hydroxid, mravenčan, octan, propionát, glycinát a/nebo laktát vápenatý a/nebo hořečnatý. Při tom se může jako vícemocný kationt Ca přidávat v koncentraci 0,05 až mol Ca /mol D-pantothenátu, výhodně 0,2 až 2 mol 2-4Ca /mol D-pantothenátu (vztaženo na stav po přimíšení).
»9 ·
Způsob podle předloženého vynálezu se vyznačuje tím, že přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty v pevné formě, nebo vodného roztoku se provádí během, výhodně na konci, nebo po fermentaci v kroku a) nebo během nebo po oddělení buněk.
Podle předloženého vynálezu se může výhodně kromě toho provádět přídavek solí obsahujících vícemocné kationty během nanofiltračního kroku. Dále se může přivádění vodného roztoku, obsahujícího vícemocné kationty, provádět kontinuálně .
V další variantě způsobu podle předloženého vynálezu je možné, že při jednom nebo více krocích způsobu, předřazených nanofiltraci, vznikají roztoky s různou koncentrací produktu. Uvedené roztoky se mohou nanofiltraci dále zpracovávat tím způsobem, že se uvedené roztoky přivádějí do dále zařazených nanofiltračních kroků v pořadí se stoupající koncentrací produktu.
Podle předloženého vynálezu se výše popsaným způsobem podle předloženého vynálezu v retentátu nanofiltrace obohacují především vícemocné soli kyseliny pantothenové. V roztoku permeátu se hlavně obohacují monovalentní ionty, při použití anionicky funkcionalisovaných nanofiltračních membrán jednomocné kationty. Obsah jednomocných kationtů, obzvláště amonných, draselných a/nebo sodných iontů, v retentátu může být při tom redukován na koncentraci 5 g/kg roztoku. Podle předloženého vynálezu může být permeát nanofiltrace nebo jeho část zaváděn zpět do fermentace v kroku a) způsobu podle předloženého vynálezu. Toto zpětné přivádění permeátu nebo jeho části se může provádět kontinuálně. Výše popsané, dodatečně k nanofiltraci prováděné
9999 ·
999
9999
9 9 9 • 9 9 9 •99 999 9
9 9 9 9
99 99 kroky způsobu, slouží k předkoncentrování nebo dalšímu zakoncentrování D-pantothenátu ve formě vícemocné soli.
Další výhodou nanofiltrace, používané podle předloženého vynálezu, je to, že redukce monovalentních kationtů (v roztoku retentátu) může probíhat současně se snížením objemu retentátu. Zpracování fermentačního roztoku, obsahujícího D-pantothenát, pomocí nanofiltrace, může být tedy použito podle předloženého vynálezu jako iontoměničový a koncentrační způsob pro výrobu D-pantothenátu.
Toto vede výhodně ke zjednodušení a současně ke zvýšené eficienci následujících pracovních kroků. Příkladně se mohou podstatně zredukovat náklady na sušení v důsledku zakoncentrování .
Při výhodné formě provedení způsobu podle předloženého vynálezu se fermentační roztok zbaví buněčné hmoty odstředěním a/nebo dekantací a/nebo ultrafiltrací. Po přídavku
O .
0,05 až 50 mol (Ca )-iontů/mol iontu pantothenátu, výhodně •Ol
0,2 až 2 mol (Ca )-iontů/mol iontu pantothenátu,, které se výhodně vyskytují ve formě zředěného roztoku s 0,01 až 10 mol Ca /1 , se takto získaný roztok zavádí do nanofiltračního modulu. Tlaková diference přes membránu je v rozmezí asi 0,5 až 10,0 MPa , výhodně asi 2,0 až 8,0 MPa , obzvláště výhodně asi 4,0 až 7,0 MPa. Před nebo během nanofiltrace se může přitom k nátokové straně membrány proudícímu roztoku přidávat vodný roztok, obsahující Ca -ionty. Retentát má objem 30 až 200 % výchozího roztoku. Dále se odstraní asi 5 až 99 % , výhodně 30 až 80 % obsažených jednomocných kationtů .
Retentát, obsahující výhodně D-pantothenát vápenatý, • 999
99
9 9 9
9 9 9
- 9 9 999 • · 9 · · · • · 999 9 9 99 •9 9999
9 9 • 99 9 • · 9 9
99
D-pantothenát horečnatý nebo jejich směs, se potom podrobí sušení a/nebo formulaci. Sušení a/nebo formulace získaného roztoku, obsahujícího D-pantothenát vápenatý a/nebo horečnatý, se provádí o sobě známými způsoby, jako příkladně rozstřikovacím sušením, rozstřikovací granulací, sušením ve vířivé vrstvě, granulací ve vířivé vrstvě, sušením v bubnu nebo sušením spin-flash (Ullmann s Encyclopedia of Industrial Chemistry, 6. vydání, 1999, elektronická forma, kapitola Drying of Solid Materials). Vstupní teplota plynu při konvekčním sušení je v rozmezí 100 až 280 °C, s výhodou 120 až 210 °C. Výstupní teplota plynu je v rozmezí 50 až 180 °C, s výhodou 60 až 150 °C. K nastavení požadované velikosti částic a s tím spojenými vlastnostmi produktu se mohou jemné čátice oddělit a uvést zpět. Dále se mohou velké částice semlít v mlýně a následně rovněž zavádět zpět.
Způsob podle předloženého vynálezu má výhody v tom, že se nežádoucí kationty eficientně a prakticky úplně odstraní a současně se dosáhne redukce objemu, což zjednodušuje a zvýhodňuje následující kroky způsobu, obzvláště sušení a/nebo formulaci.. Dále nenastává žádný nebo pouze skutečně nepatrný rozklad produktu při současně vysokých výtěžcích produktu. Přívodem roztoků solí vícemocných kationtů během nebo na konci fermentace nebo během nebo na konci ultrafiltrace nebo diafiltrace nebo během kroku nanofiltrace a/nebo zpětným vedení permeátu do fermentačního roztoku se výtěžky D-pantothenátu ve formě vícemocných, výhodně dvojmocných iontů, jako je vápník nebo hořčík, dále zvyšují.
Podle vynálezu je výhodné při výše popsaném způsobu dále redukce nákladných zpracovatelských kroků, obzvláště se zřetelem na nepoužívání organických rozpouštědel při současfc· fcfcfcfc fcfc fcfcfcfc · · · · ·· · né přípravě požadovaného produktu s dobrou biologickou bonitou. Dále se podle vynálezu podstatně snižuje množství vznikajících odpadních vod. Výsledkem jsou tak další úspory na nákladných čisticích a zneškodňovacích zařízeních. Tak se vyznačuje způsob podle předloženého vynálezu obzvláště tím, že je jednodušší, méně náchylný k poruchám, méně časové náročný, výrazně ekonomičtější a tím hospodárnější, než obvyklé dosavadní způsoby.
To však nevylučuje, aby se způsob podle vynálezu neobměňoval. Výše uvedené procesní korky podle vynálezu se mohou doplnit jedním nebo několika následujícími procesními kroky, které jsou samy o sobě odborníkům známé. Zde jsou podle vynálezu zahrnuty všechny možné kombinace dodatečných procesních kroků s dosud uváděnými procesními kroky.
Tak se mohou roztoky, získané ze způsobu podle předloženého vynálezu, zbavit zárodků zahřátím (sterilizací) nebo jinými metodami, jako je příkladně pasterizace nebo sterilní filtrace.
V dalších variantách způsobu podle předloženého vynálezu se může před sušením a/nebo formulací retentátu provést nejméně jeden a/nebo kombinace následujících kroků, zahrnující lysí a/nebo usmrcení biomasy a/nebo oddělení biomasy od fermentačního roztoku a/nebo přídavek dalších přísad a/nebo koncentraci fermentačního roztoku, s výhodou odtažením vody.
Předmětem předloženého vynálezu je tak také způsob, kdy se lyse a/nebo usmrcení biohmasy provádí ještě ve fermentačním roztoku nebo teprve po oddělení biomasy od fermentačního roztoku. To se může provádět příkladně tepelným ošetřením, s výhodou při teplotě 80 až 200 °C a/nebo okyseI 999 • * • · · ·
9999 ·♦ 99 • · · · 9 9 9 • •99 9 9 9 • «99999 · · • · · 9 9 · · • · 9 9 9« «9 lením, s výhodou kyselinou sírovou nebo kyselinou solnou a/nebo enzymaticky, s výhodou pomocí lysozymu.
Možné je také, aby se oddělení obsažené buněčné hmoty provádělo přímo pomocí nanofiltrace, to znamená simultáně s výměnou jednomocných proti vícemocným kationtům.
Roztok, získaný ze zpracování nanofiltrací, se může před sušením a/nebo formulací zakoncentrovat pomocí vhodné odparky, například filmové odparky, odparky s tenkou vrstvou nebo rotační odparky. Takovéto odparky jsou vyráběné například firmami GIG (4800 Attnang Puchheim, Óstereich),
GEA Canzler (52303 Duřen, Deutschland), Diessel (31103 Hildesheim, Deutschland) a Pitton (35274 Kirchhain,
Deutschland).
Ke zlepšení barevných vlastností konečného produktu se může provést krok dodatečné filtrace, při kterém se k roztokům, získaným během procesu, přidá něco aktivního uhlí a tato suspenze se následně filtruje. Nebo se roztoky, získané během fermentace, mohou vést přes malé lože s aktivním uhlím. K tomu požadované množství aktivního uhlí je v rozmezí několika málo % hmotnostních roztoku a je na znalostech a uvážení odborníka.
Tyto filiace se mohou usnadnit, jestliže se k danému roztoku před filtrací přidá obvyklý komerční flokulační pomocný prostředek (příkladně Sedipur CF 902 nebo Sedipur CL 930 firmy BASF AG, Ludwigshafen).
V jedné výhodné formě provedení předloženého vynálezu se výsledný materiál fermentace (fermentační břečka) sterilizuje zahřátím a potom se zbaví buněčné hmoty odstředěním,
- 32 9» ·9·9 ► 9 9 » · 99» ·* 99 9999 • · · · 9 • ••99 • · · 9 9 » · • · 9 9 9 ·· 99 99 filtrací, ultrafiltrací nebo dekantací. Po přídavku 50 až 1000 mg/kg, s výhodou 100 až 200 mg/kg, komerčně dodávaného flokulačního pomocného prostředku, vztaženo na výtěžek fermentace, se filtruje přes krátké lože aktivního uhlí a písku, aby se získal roztok s vysokým obsahem D-pantothenátu, zbavený biomasy. Následně se tento zpracovaný roztok zpracuje nanofiltrací.
Následné sušení roztoku se může provádět příkladně rozstřikovacím sušením. To se může provádět v souproudu, protiproudu nebo ve smíšeném proudění. K rozprášení se mohou použít všechny známé rozprašovače, obzvláště odstředivé rozprašovače (rozprašovací disky), jednolátkové trysky nebo dvoulátkové trysky. Výhodné teplotní podmínky jsou 150 až 250 °C na vstupu do věže a 70 až 130 °C na výstupu z věže. Může se ale také sušit při vyšší nebo při nižší úrovni teploty. K dosažení velmi nízké zbytkové vlhkosti se ale může dodatečně provést další fáze sušení ve vířivém loži .
Rozstřikovací sušení se může provádět v sušárnách FSD nebo SBD (FSD : Fluidized Spray Dryer, SBD : Spray Bed Dryer), které vyrábí firma Niro (Kodaň, Dánsko) a APV-Anhydro (Kodaň, Dánsko), které představují kombinaci rozstřikovací sušárny a vířivého lože.
Při rozstřikovacím sušení se může přidat pomocný prostředek ke zlepšení tekutosti. Tím se sníží tvorba povlaků na stěnách sušárny a zlepší se i chování při tečení, zejména u jemnozrnných prášků. Jako prostředky ke zlepšení tekutosti přicházejí v úvahu obzvláště silikáty, stearáty, fosfáty a kukuřičný škrob.
·· »··· • · · · ♦ ♦ · • · · * ft· · •r ···· • · • ···
V zásadě se ale může sušení provádět také v nastřikované vířivé vrstvě, přičemž tato se může provozovat kontinuálně nebo diskontinuálně. Nastřikování roztoku se může provádět jak zeshora (Topspray), tak i zespoda (Bottomspray) nebo také ze strany (Sidespray).
Předmětem předloženého vynálezu je dále přípravek pro použití jako přísada do zvířecího krmivá a/nebo doplněk zvířecího krmivá, vyrobitelný tak, že
a) se použije nejméně jeden organismus produkující kyselinu D-pantothenovou, jehož biosyntéza kyseliny pantothenové-(pan) a/nebo isoleucin/valin-(ilv) je deregulovaná a v kultivačním mediu se fermentací tvoří nejméně 2 g/1 solí kyseliny D-pantothenové, přičemž se do kultivačního media uvádí 0 až 20 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu,
b) k vytvořenému D-pantothenátu se přidají soli, obsahující vícemocné kationty, přičemž se vytvoří vícemocné soli kyseliny D-pantothenové,
c) roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové, se zpracuje nanofiltrací, přičemž se obohatí vícemocné soli kyseliny D-pantothenové a
d) retentát nanofiltrace, obsahující vícemocné soli kyseliny pantothenové, se podrobí sušení a/nebo tvorbě formulace.
V jedné variantě předloženého vynálezu je zahrnut přípravek, který se vyznačuje tím, že před nanofiltrací v kroku c) je provedeno oddělení buněčné hmoty nebo • ft ···· ·* ftft ·· ftftftft ♦ · · ftftftft ·· · ♦ ft · · · ft ftft · · · · • ft ftftft ftftftft»· ft ft • ft · «· · · · · ft • ftftft · · · ftft · · ·· v roztoku vysrážených komponent, výhodně membránovou filtrací, obzvláště výhodně ultrafiltrací a zcela obzvláště výhodně diafiltrací. Vynález se týká dále přípravku, který se vyznačuje tím, že je vyrobitelný tak, že se během nebo po oddělení buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent přidají soli (v pevné formě nebo jako vodný roztok, obsahující vícemocné kationty. Podle předloženého vynálezu se mohou tyto soli přivádět v další variantě také během nanofiltrace.
Podle předloženého vynálezu se vyznačuje přípravek tím, že obsahuje soli kyseliny D-pantothenové v koncentraci alespoň 1 až 100 % hmotnostních, výhodně alespoň 20 až 100 % hmotnostních a obzvláště výhodně alespoň 50% hmotnostních. Předmětem předloženého vynálezu je přípravek, obsahující soli kyseliny D-pantothenové ve formě dvojmocných kationtů, výhodně jako D-pantothenát vápenatý a/nebo hořečnatý. Podle předloženého vynálezu je výhodný přípravek, který se vyznačuje tím, že obsah solí kyseliny D-pantothenové ve formě jednomocných kationtů 5 g/kg.
Podle předloženého vynálezu se výše popsaným způsobem získá D-pantothenát vápenatý a/nebo hořečnatý, který vyhovuje požadavkům na přísady do krmiv. Těmito požadavky je příkladně relativně vysoký obsah D-pantothenátu a dobrá snášenlivost cílovým organismem a rovněž biologická bonita ve smyslu vitaminový účinek produktu podle vynálezu.
Předložený vynález bude blíže vysvětlen následujícími příklady, které však pro vynález nejsou limitující.
• · • » ·
• · ·
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Do laboratorního fermentoru s míchadlem a plynovacím zařízením o obsahu 14 1 se předloží vodné fermentační medium o následujícím složení :
| Násada | Koncentrace (g/1) |
| Kvasnicový extrakt | 5 |
| Soj ová moučka | 40 |
| Natriumglutamát x H20 | 5 |
| Síran amonný | 8 |
| kh2po4 | 5 |
| k2hpo4 | 10 |
| NaH2PO4 x 2 H20 | 6,15 |
| Na2HPO4 x 2 H20 | 12 |
Po sterilizaci byly navíc přidány následující sterilní komponenty media:
• · 4 4 4 4
4 4 • 4 · 4 4
4 4
4 4
4
4
| Násada | Koncentrace (g/1) |
| Glukóza x H2O | 20 |
| Síran vápenatý | 0,1 |
| Síran hořečnatý | 1 |
| Natriumcitrát | 1 |
| FeSO4 x 7 H20 | 0,01 |
| Roztok stopových solí | 1 ml |
Roztok stopových solí má následující složení :
0,15 g Na2Mo04 x 2 H20, 2,5 g H3BO3, 0,7 g CoCl2 x 6 H20, 0,25 g CuS04 x 5 H20, 1,6 g MnCl2 x 4 H20, 0,3 g ZnS04 x 7 H20, doplněno vodou na 1 1. Přídavek roztoku stopových solí se provádí po sterilizaci. Počáteční objem kapaliny činí 5 1. Výše uvedené obsahy jsou vztaženy na tuto hodnotu.
K tomuto roztoku se přidá 100 ml očkovací kultury (OD - 10) Bacillus subtilis PA 668 a za intenzivního míchání se fermentuje při teplotě 43 °C při plynování 12 1/min.
Tento kmen se popisuje v příloze přihlášky US Serial-Nr. 60/262 995.
V průběhu 47 hodin se nadávkuje 2,1 1 sterilního vodného roztoku, jehož složení je následující :
• · · · • ·
| Násada | Koncentrace (g/1) |
| Glukóza | 800 |
| Chlorid vápenatý | 0,7 |
| Natriumglutamát x H20 | 5 |
| Natriumcitrát | 2 |
| FeSO4 x 7 H20 | 0,2 |
| Roztok stopových solí | 6 ml |
V průběhu fermentace se dávkováním 25 %-ního roztoku amoniaku případně 20 %-ní kyseliny fosforečné udržuje hodnota pH na 7,2. Amoniak zároveň slouží jako zdroj dusíku pro fermentací. Počet otáček míchadla se reguluje, přičemž obsah rozpuštěného kyslíku se udržuje na hodnotě 30 % hodnoty při nasycení. Po přerušení dávkováni zdroje uhlíku se fermentace vede dále tak dlouho, dokud obsah rozpuštěného kyslíku (p02) nedosáhne hodnoty 95 % při nasycení. Koncentrace D-pantothenátu při ukončení po 48 hodinách činí 22,8 g/1·
Analogickým způsobem je také možné vyrobit fermentační břečky, které vykazují titr kyseliny pantothenové bez dokrmování β-alaninem více jak 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 a > 90 g/1.
Příklad 2
7000 ml fermentační kapaliny, vyrobené podle příkladu 1 , se podrobí ultracentrifugaci, při které se použije keramický jednokanálový trubkový modul (firma Atech, Gladbeck, Deutschland). Při tom se použije jednak membrána s velí• · · · 9 ·
9 9 9
9 kostí pórů 20 kD (10 nm) a s velikostí pórů 50 nm.
Teplota při pokusu činí 40 °C , rychlost přechodového proudění činí 4 m/s a transmembránový tlak (TMP = [p(přítok) + p(retentát)]/2 - p(permeát)), pokud není uvedeno jinak, činí 0,1 MPa.
Na obr. 1 je uveden transmembránový tok (tok permeátu) v závislosti na faktoru zakoncentrování MK (MK(t) = mvsAet.·
Při tom je významné, že membrána s menši velikostí pórů (20 kD) má výrazně vyšší tok než membrána s větší velikostí pórů.
Příklad 3
7000 ml fermentační kapaliny, vyrobené podle příkladu 1 , se podrobí ultrafiltraci analogicky jako v příkladě 2 , přičemž použitá membrána má velikost pórů 20 kD .
Podle obr. 2 je zřejmé, že zakoncentrování s již odstředěným fermentačním roztokem je podstatně vyšší než v příkladě 2 .
Příklad 4
1000 ml vodného roztoku, obsahujícího pantothenát vápenatý (viz tab. 3, sloupec vsázka retentátu) se použije v míchané tlakové buňce s maximálním provozním obsahem asi 1,5 1. Přívodní tlak se u této buňky získá natlakováním dusíkem a proudění přes membránu se zajišťuje mícháním kotvovým míchadlem poháněným magnetem. Použije se nanofil39 • · · trační membrána DESAL 5 DK od firmy Osmonics Deutschland GmbH in Moers.
Před, mezi a po pokusech s výše uvedeným roztokem se pro přezkoušení membránové integrity provádějí testy s roztokem síranu hořečnatého (2000 hmotn. ppm).
je uvedeno v obou vpravo stojících sloupPři tom je zadržení definováno následovperm./ci, ret.; Přičemž Rj = zadržení pro perm = koncentrace komponenty i v permekoncentrace komponenty i v retentátu.
Zadržení cích tabulky 3 . ně : R· = 1 - c·
-L _L , komponentu i, c.j átu a Ci) ret =
Koncentracemi jsou míněné momentální koncentrace, přizpůsobené určitému času, ne však koncentrace ve frakcích, vyskytující se po konci pokusu. Zadržení R^ je v ideálním případě koncentračně nezávislé, což je také doloženo výpočtem uvedené hodnoty z koncentrací ve frakcích.
O i
Z tabulky 3 vyplývá, že se Ca a pantothenát zadrží z 84 %, popřípadě 99 %, to znamená že se vyskytuje v retentátu .
| MgSO, | 0108V01 | MgSO4 ! 4 | Petu» · • · • · * · · | • 4 e 4 • 1 4 · | ||||
| 02.03.01 | 01.03.01 | 28.02.01 | Datum | |||||
| Pozn. | ||||||||
| LF | panto- thenát | Na | Ca | chlor- iont | chlorid | LF | Analytika na | |
| 897 | 1519,0 | 1519,0 | 1519,0 | 1519,0 | 1519,0 | 1059 | Vsázka retentátu (g) | |
| 495 | 351,0 | 351,0 | 351, 0 | 351,0 | 351,0 | 503 | Výtěžek retentátu (g) | |
| 409 2, 43 | 1172,6 44,1 | 1172,6 | 1172,6 | 1172,6 | 1172,6 | 543 | Výtěžek permeátu (g) | |
| 0,45 | 0,41 | 0,72 | 0,201 | 2,43 | Vsázka retentátu | Výsledky analýz j | ||
| 4,51 | 188 | 0, 63 | 1,4 | 0,52 | 0,145 | 3,99 | Výtěžek retentátu | |
| 0,456 | 0 | 0,38 | 0,093 | 0,77 | 0,212 | 0,182 | Výtěžek permeátu | |
| 61,9 | začátek | Tok permeátu | ||||||
| 96 | 28,1 | 137 | střed | |||||
| 9,6 | konec | |||||||
| 1,81 | 4,33 | 4,33 | 4,33 | 4,33 | 4,33 | 2, 11 | Faktor zakončen crování MK | |
| 0, 99 | 0, 32 | 0,79 | 0, 17 | 0,17 | 1) | Výtežek | ||
| 0,91 | 1,00 | 0,35 | 0,82 | 0, 17 | 0, 18 | 0, 96 | 2) | |
| 99,0 | 23,0 | 83,8 | -22,2 | -22, 1 | 1) | Zadržení {%) | ||
| 85,3 | 100, 0 | 28, 6 | 87,0 | -18,1 | -14,4 | 94,6 | 2) |
| * » | • · | • · · | • | |
| * · » | 4 | • | • | |
| I · s | >Ό·> | • | r\j· μ-3 | |
| ti ?σ | • | » | ||
| *1 | fr Sť. | • | •r. | Cr |
| cr | 3 p | 0' | P | |
| Η' Φ | □ | P~ | ||
| 0 rt | Ω | x | ||
| 0 | x- c | Φ | 0) | |
| >< I-Í | 3 | |||
| .. SD | rť | co | ||
| • · | ti | |||
| σ | CO | 0 | ||
| φ | O l·-1 | <1 | ||
| ω | (Ό | |||
| φ | 0 | □ | ||
| 2 s | P' | |||
| Cn | Gň Q) | < | ||
| σ | 0 | |||
| x | □ | |||
| 0) n | Φ' | |||
| tr | ZT | |||
| OJ | 0 | |||
| 0 | ||||
| (T)' | Ηί | |||
| 0 | ||||
| rt~ | N | |||
| H4 | rt | |||
| 0) | 0 | |||
| x- | X | |||
| 0 | c | |||
| < | ||||
| Φ' | n | |||
| 0) | ||||
| tr | ( | |||
| c | Ό | |||
| 3< | OJ | |||
| x- | □ | |||
| >< | rf |
π>
0)' rf
C
X iQ
Q)
Q ·· ·«►· * · * · · « « • · · · · · · * * ······ · · • · 9 » » 4 t • · ·9 n t ·
Poznámky: Membrána byla nově zabudována
Analytika : Vodivost (LF) => ZAT/C [mol/kg]
Chlorid => potenciometrická titrace při ZAT/C [mol/kg]
Ca/Na/chlor-iont =>ZAZ-M320-mikroelementární analýza [g/100 g]
1) počítáno přes bilancí v retentátu
2) počítáno přes bilanci v permeátu
Příklad 5
Při zpracování vodného roztoku pantothenátu sodného (0,2 mol/1) se provede za analogických podmínek, jako je uvedeno v příkladě 4, zakoncentrován! nanofiltrací. Z tabulky 4 vyplývá, že zadržení pantothenátu je okolo 80 %.
• ♦ ···« · * ·
| MgSO4 | 0108V02 | MgSO4 · • • | ^?okrřs · • » • · · * | » · » · » · • · | ||||
| 09.04.01 | 09.04.01 | 09.04.01 | Datum | |||||
| Pozn. | ||||||||
| LF | panto- thenát | Na | Ca | chlor- iont | chlorid | LF | Analytika na | |
| 805,9 | 989,40 | 989,40 | 989,40 | 989,40 | 989,40 | 807,0 | Vsázka retentátu (g) | |
| 387,0 | 230,50 | 230,50 | 230,50 | 230,50 | 230,50 | 412,2 | Výtěžek retentátu (g) | |
| 413,6 | 754,40 | 754,40 | 754,40 | 754,40 | 754,40 | 404,2 | Výtěžek permeátu (g) | |
| 2,33 | 48,7 | 0,48 | 2,33 | Vsázka retentátu | Výsled | |||
| 4,16 | 158,0 | 1,60 | 4,07 | Výtěžek retentátu | * P) 0 | |||
| 0, 321 | 13, 3 | 0, 13 | 0,126 | Výtěžek permeátu | .ýz | | |||
| 56, 6 | začátek | 1-3 0 Ό ID | ||||||
| 82,5 | 28,7 | 89, 6 | střed | rmeátu | ||||
| 10,8 | konec | |||||||
| 2, 08 | 4,29 | 4,29 | 4,29 | 4,29 | 4,29 | 1, 96 | Faktor zakoncantrování MK | |
| 0,86 | 0,76 | 0,77 | 0,89 | 1) | Výtežek | |||
| 0, 93 | 0,79 | 0,80 | 0,97 | 2) | ||||
| 79,0 | 80,8 | 82,1 | 83,0 | 1) | Zadržen | |||
| 89,8 | 83, 8 | 84, 1 | 96, 1 | 2) | H' dP |
« · * · ♦
Κ Η' CD Ob 3 rt 2 C oj h
.. .. φ
C
Φ ω
oj
H cn co o
o
Ω
H-1 NO τ
Oj n· ta ,ω Jj r· σ o c □ H
Ω ?r
Φ 0)
T
OJ
H'
O
ÉT
0J
Φ'
ΓΤ
0J ?r o
<
(th tr c
2<
?T ·<
rování vodného roztoku Na-pantothenátu 0,2 mol/L ·· ···· «· 4» t» 444 4
4 4 *44« · « « » 444« 4 44 4 · 4 4 * · 444 »1·««« · 4
4 « 44 4 4444 • · >44 44 44 «Φ 44
Poznámky: Membrána použita od 28.02.2001
Analytika : Vodivost (LF) => ZAT/C [mol/kg]
Chlorid => potenciometrická titrace při ZAT/C [mol/kg]
Ca/Na/chlor-iont =>ZAZ-M320-mikroelementární analýza [g/100 g]
1) počítáno přes bilanci v retentátu
2) počítáno přes bilanci v permeátu
Příklad 6
Zakoncentrován! ekvimolárního roztoku NaCl/CaC^ za analogických podmínek jako v příkladě 4 je shrnuto v tabulce 5. Zde je patrné, že zadržení membrány pro Ca se 41 %, popřípadě 42 % je relativně nepatrné ve srovnání s vysokým zadržením vápníku ve spojení s pantothenátem (příklad 5).
| bo- lest | 0108VT02 | 0108VT01 | h2otest · • | • ♦ · · ♦ fcfc fcfc | |||||
| 01.10.01 | 01.10.01 | 01.10.01 | 28.09.01 | Datum | |||||
| Pozn. | |||||||||
| Na+ | Ca2t | cr | Na+ | Ca2+ | Cl | Analytika na | |||
| Tok vo | 34,22 | 34,22 | 34,22 | 34,28 | 34,28 | 34,28 | Tok vc | Vsázka retentátu <g> | |
| a n< H· Cd O 0 | 11,28 | 11,28 | 11,28 | 11, 17 | 11,17 | 11,17 | CL p. Cd O o | Výtěžek retentátu (g> | |
| O \ Cd ?r nj | 23, 13 | 23,13 | 23,13 | 23,20 | 23,20 | 23,20 | Ω \ Cd | Výtěžek permeátu (g) | |
| 4,7 | 4,0 | 0,395 | 4,7 | 4,0 | 0,395 | Vsázka retentátu | | Výsled | ||
| 5,8 | 6,4 | 0,533 | 5, 6 | 6,3 | 0,548 | Výtěžek retentátu | k- *i JU E) (D | ||
| 4,1 | 2,8 | 0, 305 | 4,1 | 2,8 | 0,305 | Výtěžek permeátu | N | ||
| 286 | 280 | začátek | 0 řť Ό (D | ||||||
| 335 | 249 | 242 | 394 | střed | rmeátu | ||||
| 210 | 199 | konec | |||||||
| 3,03 | 3,03 | 3,03 | 3,07 | 3,07 | 3,07 | Faktor zakonce- ntrování | MK | ||
| 0,41 | 0,53 | 0,45 | 0,39 | 0,52 | 0, 45 | 1) | Výtežek | ||
| 0, 41 | 0,53 | 0,48 | 0,41 | 0,53 | 0,48 | 2) | |||
| 19,5 | 42,2 | 27,1 | 16, 0 | 41,1 | 29,3 | 1) | Zadržer | ||
| 21, 4 | 44,2 | 34,4 | 21, 1 | 44, 1 | 34,3 | 2) | tí (%) | |
•2 •·!φ· d' σ
φ ω
oj
Η
Cn □
| Τ» >» | ||
| CJO! | - OJ | •d |
| •š | •σ c | |
| H' d | □ | H |
| 3 rr | Ω | |
| ít c | Φ | d |
| H? | O | |
| .. 0) | rt· | cn |
| ·· | H! | |
| ω | 0 | |
| o co | ||
| *» | flJ'· | |
| O 00 | H' |
£ hd
OJ o
M
Γ+
Φ
CO
Γ+
O <
O>
O σ
c □<
Ω<
Cd
4^ ekvimolárního roztoku NaCl/CaCl
KJ • 0 0··· • 00 · · 0 · • · ··· · · · · • 0 000 004* • · 0 0 0 · ·· 0 0 0 0
0 0 0
0 0 0
0·
Poznámky: Membrána použita od 28.09.2001
Analytika: Cl“ v ekv./kg => pot. titrace při GCT/C
Ca/Na-iont =>ZAZ-M320-mikroelementární analýza
1) počítáno přes bilanci v retentátu
2) počítáno přes bilanci v permeátu.
Legenda k obrázkům a tabulkám
Obr. 1 :
Grafické znázornění transmembránového toku (tok permeátu) fermentační kapaliny při ultrafiltraci v závislosti na faktoru zakoncentrování MK za použití membrán s velikostí pórů 50 nm a 20 kD.
Obr. 2:
Grafické znázornění transmembránového toku (tok permeátu) odstředěné fermentační kapaliny při ultrafiltraci v závislosti na faktoru zakoncentrování MK za použití membrány s velikostí pórů 20 kD.
Tabulka 1:
Přehled asymetricky strukturovaných membrán pro oddělení buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent.
Tabulky. 2:
Přehled membrán a jejich vlastností pro oddělování buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent.
Tabulka 3:
Přehled analytických hodnot nanofiltrace, obzvláště se zřetelem na zadržení vápenatých iontů a pantothenátu, ve ·· ···» ·· ·© ·· ···· • · · « · · · · · · • · · ·· * · · · · · · ♦ · · * · ·»···· · · • * · · · · · · · · «· ··* «· ·· 9· ·· vodném roztoku, obsahujícím 0,1 mol/kg pantothenátu vápenatého a 0,2 mol/kg chloridu sodného.
Tabulka 4:
Přehled analytických hodnot nanofiltrace, obzvláště se zřetelem na zadržení vápenatých iontů a pantothenátu, ve vodném roztoku, obsahujícím 0,2 mol/1 pantothenátu sodného a 0,1 mol/1 chloridu vápenatého.
Tabulka 5:
Přehled analytických hodnot nanofiltrace, obzvláště se zřetelem na zadržení vápenatých iontů, ve vodném roztoku, obsahujícím ekvimolární množství chloridu sodného a chloridu vápenatého.
•9 9999 • 9 9 • 9 999 •9 9
9 9 • 9 999 ·· ·9 »9 9999 • · · · > 9 9 • 9 9 9 9 9 9
999999 9 9 • » 9 9 9 9 9
99 99 99 řvavoků
106 05 2,Hafcm ‘S
Claims (26)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí , vyznačující se tím, žea) se použije nejméně jeden organismus produkující kyselinu D-pantothenovou, jehož biosyntéza kyseliny pantothenové-(pan) a/nebo isoleucin/valin-(ilv) je deregulovaná a v kultivačním mediu se fermentací tvoří nejméně 2 g/1 solí kyseliny D-pantothenové, přičemž se do kultivačního media uvádí 0 až 20 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu,b) k vytvořenému D-pantothenátu se přidají soli, obsahující vícemocné kationty, přičemž se vytvoří vícemocné soli kyseliny D-pantothenové,c) roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové, se zpracuje nanofiltrací, přičemž se obohatí vícemocné soli kyseliny D-pantothenové ad) retentát nanofiltrace, obsahující vícemocné soli kyseliny pantothenové, se podrobí sušení a/nebo tvorbě formulace.
- 2. Způsob podle nároku1,vyznačuj ící se tím, že se do kultivačího media nepřidává volný β-alanin a/nebo sůl β-alaninu.• ft* · • ft • ft ftftftft ··· ftftftft ftft ft • ftftftft · ft· · · ft · • · ftftft ···«*· · ft • ft · ftft · ftftftft ftft ftftft ftft ftft ftft ftft
- 3. Způsob podle některého z nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se jako organismy produkující kyselinu D-pantothenovou použijí bakterie, kvasinky nebo houby.
- 4. Způsob podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se jako mikroorganismus použijí bakterie rodu Bacillaceae.
- 5. Způsob podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se použije bakterie rodu Bacillus a s výhodou druhu B. subtilis, B. licheniformis nebo B. amyloliquefaciens.
- 6. Způsob podle některého z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že se v kroku a) tvoří množství kyseliny pantothenové a/nebo jejích solí nejméně 10 g/1 kultivačního media, s výhodou nejméně 20 g/1 kultivačního media, obzvláště výhodně nejméně 40 g/1 kultivačního media a zcela obzvláště výhodně nejméně 60 g/1 kultivačního media.
- 7. Způsob podle některého z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že se před nanofiltrací v kroku c) provede oddělení buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent.
- 8. Způsob podle nároku 7 , vyznačující se tím, že se oddělování provádí dekantací nebo membránovou filtrací, výhodně ultrafiltrací.
- 9. Způsob podle některého z nároků 7 nebo 8 , vyznačující se tím, že se membránová4·· > 4 444 » 4 <» 4 I44 444 • 4 4 44 4 4 4 4 4 44 4 4 4 4 4 44 4 44444 4 4 • 4 · 4 4 4 444 44 44 4444 4444 filtrace provádí jako diafiltrace.
- 10. Způsob podle některého z nároků 1 až 9 , vyznačující se tím, že se provádí přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty v pevné formě nebo ve vodném roztoku během fermentace, výhodně na jejím konci nebo po ní v kroku a), nebo po membránové filtraci roztoku obsahujícího D-pantothenát.
- 11. Způsob podle některého z nároků 1 až 10 , vyznačující se tím, že se přídavek solí, obsahujících vícemocné kationty, provádí v pevné formě nebo ve vodném roztoku během nanofiltrace.
- 12. Způsob podle některého z nároků 1 až 11 , vyznačující se tím, že se přívod vodného roztoku, obsahujícího vícemocné kationty, provádí kontinuálně .
- 13. Způsob podle některého z nároků 1 až 12 , vyznačujíc! se tím, že se vícemocné kationty přidávají jako chlorid, dusičnan, hydroxid, mravenčan, octan, propionát, glycinát a/nebo laktát vápníku a/nebo hořčíku.
- 14. Způsob podle některého z nároků 1 až 13 , vyznačující se t 1 m , že se jako vícemocný kationt přidá Ca v koncentraci 0,05 až 50 mol Ca /mol 2 4·D-pantothenátu, výhodně 0,2 až 2 mol Ca /mol D-pantothenátu.
- 15. Způsob podle některého z nároků 1 až 14 vyznačuj ící s e t í m , že se při nanofiltraci • · 9 999 9999 • · · 9 9 9 99 9 999 9 9 9 9 9 9 9 • · 999 999999 9 9 • · · 99 9 9999 v kroku c) nastaví tlaková diference přes membránu v rozmezí 0,5 až 10,0 MPa, výhodně 2,0 až 8,0 MPa a obzvláště výhodně 4,0 až 7,0 MPa.
- 16. Způsob podle některého z nároků 1 až 15 , vyznačující se tím, že se nanofiltrací v kroku c) redukuje obsah jednomocných kationtů, obzvláště amonných, draselných a/nebo sodných iontů, na koncentraci ž 5 g/kg roztoku.
- 17. Způsob podle některého z nároků 1 až 16 , vyznačující se tím, že se permeát z kroku c) nebo jeho část zavádí zpět do fermentace v kroku a).
- 18. Způsob podle některého z nároků 1 až 17 , vyznačující se tím, že se zpětné vedení permeátu nebo jeho částí provádí kontinuálně.
- 19. Způsob podle některého z nároků 1 až 18 , vyznačující se tím, že retentát z kroku c) je suspenze obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové.
- 20. Přípravek pro použití jako přísada do zvířecího krmivá a/nebo doplněk zvířecího krmivá, vyznačující se tím, že je vyrobitelný tak, žea) se použije nejméně jeden organismus produkující kyselinu D-pantothenovou, jehož biosyntéza kyseliny pantothenové-(pan) a/nebo isoleucin/valin-(ilv) je deregulovaná a v kultivačním mediu se fermentaci tvoří nejméně 2 g/1 solí kyseliny D-pantothenové, • · • •ftft • · • · • ftftft • ftft · • ftft · • · • · • · • ftft · · • · • ftftft přičemž se do kultivačního media uvádí 0 až 20 g/1 volného β-alaninu a/nebo solí β-alaninu,b) k vytvořenému D-pantothenátu se přidají soli, obsahující vícemocné kationty, přičemž se vytvoří vícemocné soli kyseliny D-pantothenové,c) roztok, obsahující vícemocné soli kyseliny D-pantothenové, se zpracuje nanofiltrací, přičemž se obohatí vícemocné soli kyseliny D-pantothenové ad) retentát nanofiltrace, obsahující vícemocné soli kyseliny pantothenové, se podrobí sušení a/nebo tvorbě formulace.
- 21. Přípravek podle nároku 20 , vyznačující se tím, že je vyrobitelný tak, že se před krokem c) provede oddělení buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent, výhodně membránovou filtrací, obzvláště výhodně ultrafiltrací a zcela obzvláště výhodně diafiltrací.
- 22. Přípravek podle některého z nároků 20 nebé 21 , vyznačující se tím, že se během nebo po oddělení buněčné hmoty nebo v roztoku vysrážených komponent přidají soli, obsahující vícemocné kationty.
- 23. Přípravek podle některého z nároků 20 až 22 , vyznačující se tím, že se před nebo během nanofiltrace přidají soli, obsahující vícemocné kationty.
- 24. Přípravek podle některého z nároků 20 až 23 , vyznačuj tet s e t í m , že obsahuje soli ky52 • Φ ·«·· • Φ ·ΦΦ· • · • ··· • · φ • · φ φ · · • · · φ ·· φφ seliny D-pantothenové ve formě dvojmocných kationtů, výhodně D-pantothenát vápenatý a/nebo hořečnatý.
- 25. Přípravek podle některého z nároků 20 až 24 , vyznačující se tím, že obsahuje soli kyseliny D-pantothenové v koncentrací 1 až 100 % hmotnostních, výhodně 20 až 100 % hmotnostních a obzvláště výhodně alespoň 50 % hmotnostních.
- 26. Přípravek podle některého z nároků 20 až 25 , vyznačující se tím, že obsah solí kyseliny D-pantothenové ve formě jednomocných kationtů je5 g/kg.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10108226 | 2001-02-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20032245A3 true CZ20032245A3 (cs) | 2003-11-12 |
Family
ID=7674923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20032245A CZ20032245A3 (cs) | 2001-02-21 | 2002-02-20 | Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7611872B2 (cs) |
| EP (1) | EP1385975B1 (cs) |
| JP (1) | JP2004524028A (cs) |
| KR (1) | KR20030075205A (cs) |
| CN (1) | CN1294271C (cs) |
| AT (1) | ATE350483T1 (cs) |
| AU (1) | AU2002308290A1 (cs) |
| BR (1) | BRPI0207477B1 (cs) |
| CA (1) | CA2438945A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20032245A3 (cs) |
| DE (1) | DE50209165D1 (cs) |
| EE (1) | EE200300407A (cs) |
| ES (1) | ES2278929T3 (cs) |
| HU (1) | HU230180B1 (cs) |
| IL (1) | IL157495A0 (cs) |
| IN (1) | IN2003CH01314A (cs) |
| MX (1) | MXPA03007455A (cs) |
| NO (1) | NO20033705L (cs) |
| PL (1) | PL364087A1 (cs) |
| RU (1) | RU2003128533A (cs) |
| SK (1) | SK10432003A3 (cs) |
| WO (1) | WO2002066664A2 (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10344200A1 (de) * | 2003-09-22 | 2005-05-04 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung eines D-Pantothensäure und/oder deren Salze enthaltendes Tierfuttersupplement |
| FI120590B (fi) * | 2005-10-28 | 2009-12-15 | Danisco Sweeteners Oy | Erotusmenetelmä |
| JP4615470B2 (ja) * | 2006-03-29 | 2011-01-19 | 卓郎 簑和田 | 大脳の認知力を用いた疾患治療・予防の方法および医薬 |
| DE102008031579A1 (de) * | 2008-07-03 | 2010-01-07 | Bayer Materialscience Ag | Ein hocheffizientes Gasphasenverfahren zur Modifizierung und Funktionalisierung von Kohlenstoff-Nanofasern mit Salpetersäuredampf |
| KR200449818Y1 (ko) * | 2008-07-11 | 2010-08-12 | (주)디에스피 | 의자용 허리받침대 |
| KR101105780B1 (ko) * | 2009-09-07 | 2012-01-17 | 김선환 | 요추받이가 구비된 의자용 등받이 |
| MY186792A (en) | 2016-02-04 | 2021-08-20 | Ind Tech Res Inst | Method for separating hydrolysis product of biomass |
| WO2018187324A1 (en) * | 2017-04-04 | 2018-10-11 | NNB Nutrition USA, LLC | Preparation of (r)-3-hydroxybutyric acid or its salts by one-step fermentation |
| CN112592290B (zh) * | 2020-12-14 | 2023-08-11 | 广安摩珈生物科技有限公司 | 泛酸钙粗品纯化方法 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB526267A (en) | 1938-04-01 | 1940-09-13 | Goldschmidt Ag Th | Process of applying coatings of non-ferrous metals to cast iron |
| GB562267A (en) * | 1941-08-08 | 1944-06-26 | Hoffmann La Roche | Process for the manufacture of a crystallised, non-hygroscopic calcium salt of d-pantothenic acid |
| US4891208A (en) * | 1985-04-10 | 1990-01-02 | The Liposome Company, Inc. | Steroidal liposomes |
| EP0169812B1 (de) * | 1984-07-25 | 1989-08-23 | Ciba-Geigy Ag | Phosphatidylverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
| US5993823A (en) * | 1990-12-18 | 1999-11-30 | Institut Pasteur De Lille | Cytotoxic T lymphocyte-inducing lipopeptides and methods of use |
| EP0493060A3 (en) | 1990-12-25 | 1993-04-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Production method of d-pantothenic acid and plasmids and microorganisms thereof |
| JP3710497B2 (ja) * | 1992-09-25 | 2005-10-26 | ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト | Ｄ−パント酸、ｄ−パントテン酸およびそれらの塩の製造法 |
| JPH06114948A (ja) | 1992-10-01 | 1994-04-26 | Shiimetsuto Kk | 未硬化液排出口付光硬化造形物とその造形法 |
| WO1996020208A2 (de) * | 1994-12-28 | 1996-07-04 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Neues cholesterolderivat für den liposomalen gentransfer |
| AU5287396A (en) * | 1995-04-21 | 1996-11-07 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Process for producing calcium d-pantothenate |
| SK30598A3 (en) | 1995-09-13 | 1999-01-11 | Takeda Chemical Industries Ltd | Process for producing d-pantoic acid and d-pantothenic acid or salts thereof |
| US6063428A (en) * | 1996-02-26 | 2000-05-16 | The Procter & Gamble Company | Green tea extract subjected to cation exchange treatment and nanofiltration to improve clarity and color |
| US5814498A (en) * | 1996-04-29 | 1998-09-29 | Archer Daniels Midland Company | Process for the recovery of organic acids and ammonia from their salts |
| TW391881B (en) * | 1996-09-25 | 2000-06-01 | Baxter Int | Method and apparatus for filtering suspensions of medical and biological fluids or the like |
| WO1999018228A2 (de) * | 1997-10-04 | 1999-04-15 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur mikrobiellen herstellung von aminosäuren der aspartat- und/oder glutamatfamilie und im verfahren einsetzbare mittel |
| US6129788A (en) | 1997-11-26 | 2000-10-10 | Novo Nordisk A/S | Method of producing saccharide preparations |
| AT407050B (de) * | 1997-12-29 | 2000-11-27 | Chemie Linz Gmbh | Verfahren zur herstellung von l-asparaginsäure |
| DE19846499A1 (de) | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Degussa | Verfahren zur Herstellung von Pantothensäure durch Verstärkung von für Ketopantoat-Reduktase kodierenden Nukleotidsequenzen |
| DE19855313A1 (de) * | 1998-12-01 | 2000-06-08 | Degussa | Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure durch Verstärkung des panD-Gens in Mikroorganismen |
| JP3236828B2 (ja) * | 1999-01-27 | 2001-12-10 | 雪印乳業株式会社 | 乳カルシウム組成物 |
| FR2791701B1 (fr) | 1999-04-02 | 2003-05-23 | Roquette Freres | Procede de fabrication d'un hydrolysat d'amidon a haute teneur en dextrose |
| DK1050219T3 (da) * | 1999-05-05 | 2003-03-17 | Degussa | Foderstofadditiver indeholdende D-pantothensyre og/eller salte deraf og fremgangsmåder til fremstilling deraf |
| IL148786A0 (en) | 1999-09-21 | 2002-09-12 | Basf Ag | Methods and microorganisms for production of panto-compounds |
| WO2002005747A2 (en) | 2000-07-14 | 2002-01-24 | Cadila Pharmaceuticals Limited | The process of manufacturing pharmaceutical grade tannates |
| HUP0301095A3 (en) | 2000-09-20 | 2004-04-28 | Basf Ag | Animal feed supplement containing d-pantothenic acid and/or its salts, improved method for the production thereof, and its use |
| JP4229700B2 (ja) | 2001-01-19 | 2009-02-25 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | パントテネートの産生増強のための微生物と方法 |
| WO2002072857A1 (en) * | 2001-03-09 | 2002-09-19 | Basf Aktiengesellschaft | Processes for enhanced production of pantothenate |
-
2002
- 2002-02-20 DE DE50209165T patent/DE50209165D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-20 CN CNB028052749A patent/CN1294271C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-20 EP EP02742430A patent/EP1385975B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-20 MX MXPA03007455A patent/MXPA03007455A/es unknown
- 2002-02-20 EE EEP200300407A patent/EE200300407A/xx unknown
- 2002-02-20 ES ES02742430T patent/ES2278929T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-20 CZ CZ20032245A patent/CZ20032245A3/cs unknown
- 2002-02-20 IL IL15749502A patent/IL157495A0/xx unknown
- 2002-02-20 JP JP2002566368A patent/JP2004524028A/ja active Pending
- 2002-02-20 AT AT02742430T patent/ATE350483T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-02-20 AU AU2002308290A patent/AU2002308290A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-20 HU HU0303299A patent/HU230180B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-02-20 PL PL02364087A patent/PL364087A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-02-20 RU RU2003128533/13A patent/RU2003128533A/ru not_active Application Discontinuation
- 2002-02-20 CA CA002438945A patent/CA2438945A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-20 US US10/468,564 patent/US7611872B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-02-20 KR KR20037010982A patent/KR20030075205A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-02-20 WO PCT/EP2002/001754 patent/WO2002066664A2/de active IP Right Grant
- 2002-02-20 SK SK1043-2003A patent/SK10432003A3/sk unknown
- 2002-02-20 BR BRPI0207477-0A patent/BRPI0207477B1/pt not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-08-20 NO NO20033705A patent/NO20033705L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-08-21 IN IN1314CH2003 patent/IN2003CH01314A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20030075205A (ko) | 2003-09-22 |
| HU230180B1 (hu) | 2015-09-28 |
| HUP0303299A3 (en) | 2007-09-28 |
| IL157495A0 (en) | 2004-03-28 |
| HUP0303299A2 (hu) | 2004-01-28 |
| IN2003CH01314A (en) | 2005-11-25 |
| ATE350483T1 (de) | 2007-01-15 |
| BR0207477A (pt) | 2004-08-10 |
| NO20033705D0 (no) | 2003-08-20 |
| CN1294271C (zh) | 2007-01-10 |
| PL364087A1 (en) | 2004-12-13 |
| SK10432003A3 (sk) | 2004-02-03 |
| DE50209165D1 (de) | 2007-02-15 |
| CA2438945A1 (en) | 2002-08-29 |
| CN1492933A (zh) | 2004-04-28 |
| BRPI0207477B1 (pt) | 2015-05-26 |
| ES2278929T3 (es) | 2007-08-16 |
| WO2002066664A3 (de) | 2003-12-04 |
| EP1385975A2 (de) | 2004-02-04 |
| AU2002308290A1 (en) | 2002-09-04 |
| US7611872B2 (en) | 2009-11-03 |
| NO20033705L (no) | 2003-10-16 |
| WO2002066664A2 (de) | 2002-08-29 |
| EP1385975B1 (de) | 2007-01-03 |
| MXPA03007455A (es) | 2004-07-30 |
| JP2004524028A (ja) | 2004-08-12 |
| EE200300407A (et) | 2003-12-15 |
| RU2003128533A (ru) | 2005-04-10 |
| US20040053374A1 (en) | 2004-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ20032245A3 (cs) | Způsob výroby kyseliny D-pantothenové a/nebo jejích solí jako přísady do zvířecích krmiv | |
| US7781192B2 (en) | Method for producing D-pantothenic acid and/or a salt thereof via purification by cation exchange as additive for animal food | |
| US20040050335A1 (en) | Animal feed supplement containing d-pantothenic acid and/or its salts, improved method for the production thereof, and its use | |
| US7824891B2 (en) | Method for producing D-pantothenic acid and/or salts thereof via purification by electrodialysis as an additive for animal feed | |
| US7727748B2 (en) | Method for producing D-pantothenic acid and/or salts thereof via purification by anion exchange as an additive for animal feed | |
| WO2005028659A2 (de) | Verfahren zur herstellung eines d-pantothensäure und/oder deren salze enthaltendes tierfuttersupplement |