CZ2001643A3 - Exprese a export inhibitorů angiogeneze ve formě imunofúzinů - Google Patents
Exprese a export inhibitorů angiogeneze ve formě imunofúzinů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2001643A3 CZ2001643A3 CZ2001643A CZ2001643A CZ2001643A3 CZ 2001643 A3 CZ2001643 A3 CZ 2001643A3 CZ 2001643 A CZ2001643 A CZ 2001643A CZ 2001643 A CZ2001643 A CZ 2001643A CZ 2001643 A3 CZ2001643 A3 CZ 2001643A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- immunoglobulin
- region
- angiostatin
- endostatin
- Prior art date
Links
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 title claims description 50
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 title claims description 50
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 141
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 132
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 84
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 75
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 75
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 73
- 108010001463 Collagen Type XVIII Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000047200 Collagen Type XVIII Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 claims description 92
- 102000012936 Angiostatins Human genes 0.000 claims description 92
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 91
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 74
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 30
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 claims description 21
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 claims description 18
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 claims description 18
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 15
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 102400001047 Endostatin Human genes 0.000 claims 10
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims 1
- 102100031162 Collagen alpha-1(XVIII) chain Human genes 0.000 abstract description 77
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 63
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 47
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 32
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 18
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 14
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 12
- HXMJXDNSFVNSEH-IHPCNDPISA-N Trp-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N HXMJXDNSFVNSEH-IHPCNDPISA-N 0.000 description 12
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 12
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 11
- 101500025937 Mus musculus Angiostatin Proteins 0.000 description 11
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 11
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 11
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 10
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 10
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 10
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 10
- XOZYYXMHMIEJET-XIRDDKMYSA-N Arg-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XOZYYXMHMIEJET-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 9
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 9
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 8
- SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 8
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 7
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- PRVVCRZLTJNPCS-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)CN=C(N)N PRVVCRZLTJNPCS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 7
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- ODWSTKXGQGYHSH-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ODWSTKXGQGYHSH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 6
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N Cys-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- LHMSYHSAAJOEBL-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O LHMSYHSAAJOEBL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 101500025915 Homo sapiens Angiostatin Proteins 0.000 description 6
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLVRTKPAIXJYOH-HOCLYGCPSA-N Trp-His-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)NCC(=O)O)N XLVRTKPAIXJYOH-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 6
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 6
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 6
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 6
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 5
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 5
- 108020005098 Anticodon Proteins 0.000 description 5
- DGFGDPVSDQPANQ-XGEHTFHBSA-N Arg-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O DGFGDPVSDQPANQ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 5
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- PZXPWHFYZXTFBI-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PZXPWHFYZXTFBI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N Asp-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MYOHQBFRJQFIDZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N Cys-Phe Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- KOYUSMBPJOVSOO-XEGUGMAKSA-N Gly-Tyr-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KOYUSMBPJOVSOO-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 5
- IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N His-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 5
- IDNNYVGVSZMQTK-IHRRRGAJSA-N His-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N IDNNYVGVSZMQTK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N Ile-Phe-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N 0.000 description 5
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 5
- CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N Phe-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 5
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 5
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 5
- DTPARJBMONKGGC-IHPCNDPISA-N Trp-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N DTPARJBMONKGGC-IHPCNDPISA-N 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 5
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 5
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N Ala-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N Ala-Leu-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N 0.000 description 4
- JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N Arg-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N Asn-His-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Asp-Ile Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N Asp-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- PKYAVRMYTBBRLS-FXQIFTODSA-N Glu-Cys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PKYAVRMYTBBRLS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- KIMXNQXJJWWVIN-AVGNSLFASA-N Glu-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O KIMXNQXJJWWVIN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- BBTCXWTXOXUNFX-IUCAKERBSA-N Gly-Met-Arg Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O BBTCXWTXOXUNFX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- YBDOQKVAGTWZMI-XIRDDKMYSA-N His-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N YBDOQKVAGTWZMI-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 4
- JDAWAWXGAUZPNJ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Glu-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N JDAWAWXGAUZPNJ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- JDCQDJVYUXNCGF-SPOWBLRKSA-N Ile-Ser-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N JDCQDJVYUXNCGF-SPOWBLRKSA-N 0.000 description 4
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 4
- ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- AUNMOHYWTAPQLA-XUXIUFHCSA-N Leu-Met-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O AUNMOHYWTAPQLA-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 4
- PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PTRKPHUGYULXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- GVKINWYYLOLEFQ-XIRDDKMYSA-N Lys-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GVKINWYYLOLEFQ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 4
- RKIIYGUHIQJCBW-SRVKXCTJSA-N Met-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RKIIYGUHIQJCBW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N Phe-Ile-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N 0.000 description 4
- YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N Phe-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N Ser-Asn-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O VAUMZJHYZQXZBQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- WTPKKLMBNBCCNL-ACZMJKKPSA-N Ser-Cys-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N WTPKKLMBNBCCNL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- QBUWQRKEHJXTOP-DCAQKATOSA-N Ser-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QBUWQRKEHJXTOP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 4
- LRZLZIUXQBIWTB-KATARQTJSA-N Ser-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRZLZIUXQBIWTB-KATARQTJSA-N 0.000 description 4
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N Ser-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 4
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 4
- WRUWXBBEFUTJOU-XGEHTFHBSA-N Thr-Met-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O WRUWXBBEFUTJOU-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 4
- AAZOYLQUEQRUMZ-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asn Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O AAZOYLQUEQRUMZ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 4
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 4
- BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 4
- AKXBNSZMYAOGLS-STQMWFEESA-N Tyr-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AKXBNSZMYAOGLS-STQMWFEESA-N 0.000 description 4
- TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- KLGFILUOTCBNLJ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Cys-Arg Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O KLGFILUOTCBNLJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 4
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 4
- 108010084758 arginyl-tyrosyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 4
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 4
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 4
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- KRQSPVKUISQQFS-FJXKBIBVSA-N Arg-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KRQSPVKUISQQFS-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 3
- QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 3
- APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N Gly-Ile-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- BXDLTKLPPKBVEL-FJXKBIBVSA-N Gly-Thr-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O BXDLTKLPPKBVEL-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 3
- LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N Gly-Thr-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N His-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 3
- FJUKMPUELVROGK-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N FJUKMPUELVROGK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- PPTAQBNUFKTJKA-BJDJZHNGSA-N Leu-Cys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PPTAQBNUFKTJKA-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 3
- WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- URHJPNHRQMQGOZ-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O URHJPNHRQMQGOZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- QKXZCUCBFPEXNK-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QKXZCUCBFPEXNK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- AHFOKDZWPPGJAZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N AHFOKDZWPPGJAZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- JHNOXVASMSXSNB-WEDXCCLWSA-N Lys-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O JHNOXVASMSXSNB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- GWADARYJIJDYRC-XGEHTFHBSA-N Met-Thr-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GWADARYJIJDYRC-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 3
- DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N Phe-Arg-Ala Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 DPUOLKQSMYLRDR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 3
- IPFXYNKCXYGSSV-KKUMJFAQSA-N Phe-Ser-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N IPFXYNKCXYGSSV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N Ser-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- COLJZWUVZIXSSS-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N COLJZWUVZIXSSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- TVPQRPNBYCRRLL-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O TVPQRPNBYCRRLL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N Ser-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OHAJHDJOCKKJLV-LKXGYXEUSA-N Thr-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OHAJHDJOCKKJLV-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 3
- KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N Thr-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N 0.000 description 3
- SMDQRGAERNMJJF-JQWIXIFHSA-N Trp-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)=CNC2=C1 SMDQRGAERNMJJF-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 3
- ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N Trp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ARKBYVBCEOWRNR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 3
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- -1 for example Proteins 0.000 description 3
- 108010037389 glutamyl-cysteinyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N Ala-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 2
- HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N Ala-Lys-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- AAWLEICNDUHIJM-MBLNEYKQSA-N Ala-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O AAWLEICNDUHIJM-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N Arg-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VXXHDZKEQNGXNU-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- JVMKBJNSRZWDBO-FXQIFTODSA-N Arg-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JVMKBJNSRZWDBO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N Arg-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N GIMTZGADWZTZGV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- NPAVRDPEFVKELR-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NPAVRDPEFVKELR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FKQITMVNILRUCQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N Asn-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- GOVUDFOGXOONFT-VEVYYDQMSA-N Asn-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GOVUDFOGXOONFT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- PCKRJVZAQZWNKM-WHFBIAKZSA-N Asn-Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O PCKRJVZAQZWNKM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N Asn-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- ALHMNHZJBYBYHS-DCAQKATOSA-N Asn-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ALHMNHZJBYBYHS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MYTHOBCLNIOFBL-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MYTHOBCLNIOFBL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N Asn-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 2
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N Asp-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O HPNDBHLITCHRSO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- OERMIMJQPQUIPK-FXQIFTODSA-N Asp-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OERMIMJQPQUIPK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N Asp-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- NYLBGYLHBDFRHL-VEVYYDQMSA-N Asp-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NYLBGYLHBDFRHL-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- LXKLDWVHXNZQGB-SRVKXCTJSA-N Asp-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O LXKLDWVHXNZQGB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N Asp-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N TZOZNVLBTAFJRW-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 2
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N Asp-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- XYPJXLLXNSAWHZ-SRVKXCTJSA-N Asp-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O XYPJXLLXNSAWHZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- GWOVSEVNXNVMMY-BPUTZDHNSA-N Asp-Trp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GWOVSEVNXNVMMY-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- UPJGYXRAPJWIHD-CIUDSAMLSA-N Cys-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPJGYXRAPJWIHD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N Cys-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- BDWIZLQVVWQMTB-XKBZYTNZSA-N Cys-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O BDWIZLQVVWQMTB-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- VPQZSNQICFCCSO-BJDJZHNGSA-N Cys-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VPQZSNQICFCCSO-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- MXZYQNJCBVJHSR-KATARQTJSA-N Cys-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CS)N)O MXZYQNJCBVJHSR-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- SCOPAVYZWHPDBA-DCAQKATOSA-N Cys-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N SCOPAVYZWHPDBA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- QQOWCDCBFFBRQH-IXOXFDKPSA-N Cys-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CS)N)O QQOWCDCBFFBRQH-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 2
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 2
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 2
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N Glu-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- GLWXKFRTOHKGIT-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GLWXKFRTOHKGIT-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- CKRUHITYRFNUKW-WDSKDSINSA-N Glu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O CKRUHITYRFNUKW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N Glu-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- ISXJHXGYMJKXOI-GUBZILKMSA-N Glu-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ISXJHXGYMJKXOI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N Glu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YGLCLCMAYUYZSG-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 YGLCLCMAYUYZSG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N Glu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- CBEUFCJRFNZMCU-SRVKXCTJSA-N Glu-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CBEUFCJRFNZMCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- WXONSNSSBYQGNN-AVGNSLFASA-N Glu-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O WXONSNSSBYQGNN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N Glu-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N Glu-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N 0.000 description 2
- QOOFKCCZZWTCEP-AVGNSLFASA-N Glu-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O QOOFKCCZZWTCEP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N Gly-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- GGEJHJIXRBTJPD-BYPYZUCNSA-N Gly-Asn-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O GGEJHJIXRBTJPD-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- ISSDODCYBOWWIP-GJZGRUSLSA-N Gly-Pro-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ISSDODCYBOWWIP-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 2
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N His-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N His-Glu-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- VBOFRJNDIOPNDO-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N VBOFRJNDIOPNDO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N His-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 101500026378 Homo sapiens Endostatin Proteins 0.000 description 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- QLRMMMQNCWBNPQ-QXEWZRGKSA-N Ile-Arg-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)O)N QLRMMMQNCWBNPQ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N Ile-Glu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- KIAOPHMUNPPGEN-PEXQALLHSA-N Ile-Gly-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KIAOPHMUNPPGEN-PEXQALLHSA-N 0.000 description 2
- RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 2
- UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N Ile-Val-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 2
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 2
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVOMPSJXSRPFJT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N Lys-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HQVDJTYKCMIWJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- QIJVAFLRMVBHMU-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QIJVAFLRMVBHMU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NKKFVJRLCCUJNA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N Lys-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- LJADEBULDNKJNK-IHRRRGAJSA-N Lys-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LJADEBULDNKJNK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N Lys-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N Lys-Thr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- WAAZECNCPVGPIV-RHYQMDGZSA-N Lys-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O WAAZECNCPVGPIV-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 2
- ZVZRQKJOQQAFCF-ULQDDVLXSA-N Lys-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ZVZRQKJOQQAFCF-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- HKRYNJSKVLZIFP-IHRRRGAJSA-N Met-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O HKRYNJSKVLZIFP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- HOLJKDOBVJDHCA-DCAQKATOSA-N Met-His-Cys Chemical compound N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HOLJKDOBVJDHCA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YJNDFEWPGLNLNH-IHRRRGAJSA-N Met-Tyr-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YJNDFEWPGLNLNH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N Phe-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N Phe-Cys-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- YDUGVDGFKNXFPL-IXOXFDKPSA-N Phe-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O YDUGVDGFKNXFPL-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 2
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 2
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 2
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N Ser-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- BLPYXIXXCFVIIF-FXQIFTODSA-N Ser-Cys-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N BLPYXIXXCFVIIF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O MOVJSUIKUNCVMG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- CAOYHZOWXFFAIR-CIUDSAMLSA-N Ser-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CAOYHZOWXFFAIR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N Ser-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N Ser-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O QNBVFKZSSRYNFX-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 2
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 2
- UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- KRPKYGOFYUNIGM-XVSYOHENSA-N Thr-Asp-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O KRPKYGOFYUNIGM-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- NQVDGKYAUHTCME-QTKMDUPCSA-N Thr-His-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O NQVDGKYAUHTCME-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 2
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 2
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- XSEPSRUDSPHMPX-KATARQTJSA-N Thr-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XSEPSRUDSPHMPX-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N Thr-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N 0.000 description 2
- WKGAAMOJPMBBMC-IXOXFDKPSA-N Thr-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O WKGAAMOJPMBBMC-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N Thr-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N Thr-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O UQCNIMDPYICBTR-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 2
- ZOCJFNXUVSGBQI-HSHDSVGOSA-N Thr-Trp-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O ZOCJFNXUVSGBQI-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 2
- PNHABSVRPFBUJY-UMPQAUOISA-N Trp-Arg-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N)O PNHABSVRPFBUJY-UMPQAUOISA-N 0.000 description 2
- LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- GZTKZDGIEBKZAH-XIRDDKMYSA-N Trp-Cys-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)N GZTKZDGIEBKZAH-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- OKAMOYTUQMIFJO-JBACZVJFSA-N Trp-Glu-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 OKAMOYTUQMIFJO-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- SCCKSNREWHMKOJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Asn-Ser Chemical compound N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SCCKSNREWHMKOJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- JWHOIHCOHMZSAR-QWRGUYRKSA-N Tyr-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JWHOIHCOHMZSAR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- MOCXXGZHHSPNEJ-AVGNSLFASA-N Tyr-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MOCXXGZHHSPNEJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- GITNQBVCEQBDQC-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GITNQBVCEQBDQC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- WPRVVBVWIUWLOH-UFYCRDLUSA-N Tyr-Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N WPRVVBVWIUWLOH-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- KWKJGBHDYJOVCR-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O KWKJGBHDYJOVCR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 2
- KLQPIEVIKOQRAW-IZPVPAKOSA-N Tyr-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O KLQPIEVIKOQRAW-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 2
- JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010019832 glycyl-asparaginyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- SNRMWKFPTMGVLM-VJANTYMQSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SNRMWKFPTMGVLM-VJANTYMQSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N Ala-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N Ala-Met-Phe Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 208000003120 Angiofibroma Diseases 0.000 description 1
- DBKNLHKEVPZVQC-LPEHRKFASA-N Arg-Ala-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O DBKNLHKEVPZVQC-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N Arg-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OSASDIVHOSJVII-WDSKDSINSA-N Arg-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OSASDIVHOSJVII-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N Arg-His-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CN=CN1 CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N Arg-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUZAXCPWMDBWEE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- DDBMKOCQWNFDBH-RHYQMDGZSA-N Arg-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O DDBMKOCQWNFDBH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N Arg-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GXMSVVBIAMWMKO-BQBZGAKWSA-N Asn-Arg-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N GXMSVVBIAMWMKO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 1
- LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N Asp-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N Asp-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N Asp-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N Asp-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100536577 Caenorhabditis elegans cct-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100177112 Caenorhabditis elegans his-70 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 206010011017 Corneal graft rejection Diseases 0.000 description 1
- OTXLNICGSXPGQF-KBIXCLLPSA-N Cys-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTXLNICGSXPGQF-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- IRDASPPCLZIERZ-XHNCKOQMSA-N Glu-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N IRDASPPCLZIERZ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CVPXINNKRTZBMO-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)CN=C(N)N CVPXINNKRTZBMO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N Glu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SRZLHYPAOXBBSB-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- YHOJJFFTSMWVGR-HJGDQZAQSA-N Glu-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YHOJJFFTSMWVGR-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- ZIYGTCDTJJCDDP-JYJNAYRXSA-N Glu-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZIYGTCDTJJCDDP-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N Glu-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- QVXWAFZDWRLXTI-NWLDYVSISA-N Glu-Thr-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O QVXWAFZDWRLXTI-NWLDYVSISA-N 0.000 description 1
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N Gly-Arg-Pro Natural products NCC(=O)NC(CCNC(=N)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O KKBWDNZXYLGJEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N Gly-Asn-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- QSVCIFZPGLOZGH-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QSVCIFZPGLOZGH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N Gly-Glu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MBOAPAXLTUSMQI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QPCVIQJVRGXUSA-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QPCVIQJVRGXUSA-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N Gly-His-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 1
- BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N Gly-Lys-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FXGRXIATVXUAHO-WEDXCCLWSA-N Gly-Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN FXGRXIATVXUAHO-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZNPRMNDAFQKATM-LKTVYLICSA-N His-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZNPRMNDAFQKATM-LKTVYLICSA-N 0.000 description 1
- MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N His-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- KWBISLAEQZUYIC-UWJYBYFXSA-N His-His-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N KWBISLAEQZUYIC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DGLAHESNTJWGDO-SRVKXCTJSA-N His-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N DGLAHESNTJWGDO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BRQKGRLDDDQWQJ-MBLNEYKQSA-N His-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BRQKGRLDDDQWQJ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- XHQYFGPIRUHQIB-PBCZWWQYSA-N His-Thr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 XHQYFGPIRUHQIB-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N His-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NURNJECQNNCRBK-FLBSBUHZSA-N Ile-Thr-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NURNJECQNNCRBK-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 206010065630 Iris neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 208000002260 Keloid Diseases 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYUBOFCTGPZFSA-WDSOQIARSA-N Leu-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 XYUBOFCTGPZFSA-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N Leu-Met-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241001677568 Leutea Species 0.000 description 1
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 description 1
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N Lys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N 0.000 description 1
- FHIAJWBDZVHLAH-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHIAJWBDZVHLAH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- SQJSXOQXJYAVRV-SRVKXCTJSA-N Lys-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N SQJSXOQXJYAVRV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N Lys-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DIBZLYZXTSVGLN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- CFOLERIRBUAYAD-HOCLYGCPSA-N Lys-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O CFOLERIRBUAYAD-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- DSWOTZCVCBEPOU-IUCAKERBSA-N Met-Arg-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCNC(N)=N DSWOTZCVCBEPOU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HLQWFLJOJRFXHO-CIUDSAMLSA-N Met-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HLQWFLJOJRFXHO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GMMLGMFBYCFCCX-KZVJFYERSA-N Met-Thr-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GMMLGMFBYCFCCX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 101500026380 Mus musculus Endostatin Proteins 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 201000004404 Neurofibroma Diseases 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037765 Periostin Human genes 0.000 description 1
- 101710199268 Periostin Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N Phe-Phe-Leu-Tyr Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N Phe-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N Phe-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GLJZDMZJHFXJQG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MHHQQZIFLWFZGR-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MHHQQZIFLWFZGR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 description 1
- 101710102802 Runt-related transcription factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N Ser-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N Ser-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N Ser-His Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HMRAQFJFTOLDKW-GUBZILKMSA-N Ser-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMRAQFJFTOLDKW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DOSZISJPMCYEHT-NAKRPEOUSA-N Ser-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DOSZISJPMCYEHT-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RXSWQCATLWVDLI-XGEHTFHBSA-N Ser-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RXSWQCATLWVDLI-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O QPPYAWVLAVXISR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- ZWSZBWAFDZRBNM-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZWSZBWAFDZRBNM-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- FGBLCMLXHRPVOF-IHRRRGAJSA-N Ser-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FGBLCMLXHRPVOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PZHJLTWGMYERRJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PZHJLTWGMYERRJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N Thr-Ala-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 1
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- VGYBYGQXZJDZJU-XQXXSGGOSA-N Thr-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VGYBYGQXZJDZJU-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N Thr-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N 0.000 description 1
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- AHOLTQCAVBSUDP-PPCPHDFISA-N Thr-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AHOLTQCAVBSUDP-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- UJQVSMNQMQHVRY-KZVJFYERSA-N Thr-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UJQVSMNQMQHVRY-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- PCMDGXKXVMBIFP-VEVYYDQMSA-N Thr-Met-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PCMDGXKXVMBIFP-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- YJVJPJPHHFOVMG-VEVYYDQMSA-N Thr-Met-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O YJVJPJPHHFOVMG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N Thr-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000390203 Trachoma Species 0.000 description 1
- VISUNEBASWEMCU-SZMVWBNQSA-N Trp-Glu-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)N VISUNEBASWEMCU-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- YXONONCLMLHWJX-SZMVWBNQSA-N Trp-Glu-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YXONONCLMLHWJX-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- HXNVJPQADLRHGR-JBACZVJFSA-N Trp-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N HXNVJPQADLRHGR-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N Tyr-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FFCRCJZJARTYCG-KKUMJFAQSA-N Tyr-Cys-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O FFCRCJZJARTYCG-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IWRMTNJCCMEBEX-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O IWRMTNJCCMEBEX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N Tyr-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYLHVUCSTXXKBS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- BMOFUVHDBROBSE-DCAQKATOSA-N Val-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N BMOFUVHDBROBSE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108010015470 glycyl-arginyl-glycyl-glutamyl-seryl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010001064 glycyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000001117 keloid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010077158 leucinyl-arginyl-tryptophan Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 201000003142 neovascular glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000008979 rubeosis iridis Diseases 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010033670 threonyl-aspartyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010044325 trachoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
- C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález obecně popisuje přípravky a způsoby využitelné pro produkci a použití fúzních proteinů zahrnujících nějaký inhibitor angiogeneze. Ještě přesněji lze říci, že vynález popisuje přípravky a způsoby využitelné pro produkci a použití fúzních proteinů označovaných jako imunofúziny, kde tyto proteiny zahrnují imunoglobulinovou oblast Fc a nějaký inhibitor angiogeneze.
Dosavadní stav techniky
Byly objeveny dva účinné inhibitory angiogeneze, a to angiostatin (O'Reilly a další, Cell, 79:315, 1994) a endostatin (O'Reilly a další, Cell, 88:277, 1997) a bylo zjištěno, že tyto sloučeniny jsou přirozeně produkovány primárními nádory. Oba zmíněné proteiny jsou specifickými inhibitory proliferace endotheliálních buněk a růst nádorů inhibují tím, že blokují angiogenezi (vytváření nových krevních kapilár vyživujících nádory). Následné studie prokázaly, že tyto inhibitory angiogeneze. nevykazují toxické účinky ani ve vysokých dávkách, a že mohou potlačovat růst metastáz a u primárních nádorů vyvolat regresi do dormantního stavu. Bylo zjištěno, že oba tyto inhibitory jsou proteolytickými fragmenty podstatně větších intaktních molekul. Angiostatin byl identifikován jako fragment plazminogenu a endostatin jako fragment kolagenu XVIII.
• ·
Oba zmíněné proteiny vyvolaly velký zájem v oblasti výzkumu rakoviny, a to vzhledem k jejich schopnosti potlačovat na myším modelu růst mnoha rozdílných typů nádorů bez pozorovatelných nežádoucích vedlejšich.účinků nebo vzniku rezistence. Při tradičně používané chemoterapeutické intervenci dochází k selekci rezistentních klonů buněk a to především v důsledku nestability genomu rakovinných buněk. Cílem terapií využívajících inhibitory angiogeneze však nejsou buňky nádorové, ale normální buňky endotheliální, které podporují růst nádorů. Vzhledem k tomu, že endotheliální buňky jsou geneticky stabilní, je možné, že terapie využívající inhibitory angiogeneze budou vznikem rezistence zatíženy v daleko menší míře. Provedené studie naznačují, že u myší vystavených dlouhodobému terapeutickému působení endostatinu (s antiangiogenním účinkem) nedošlo ke vzniku rezistence vůči této látce. Opakované léčebné cykly s využitím endostatinu vedly u myší k prodloužení doby dormance nádorů a při ukončení terapie nebyla pozorována recidiva onemocnění (Boehm a další, Nátuře, 390:440, 1997).
I přes slibné výsledky experimentů prováděných na myším modelu nebylo možné v expresívních systémech E.coli, bakulovirech, kvasinkách a savčích buňkách připravit v komerčně výhodných množstvích rozpustný, aktivní angiostatin vhodný pro klinické testování. Výsledkem exprese v E.coli byly nerozpustné proteinové agregáty nedefinovatelného složení, které nemohly být použity k injekční aplikaci do organizmu lidí. Jiné postupy, jako například bakulovirový expresívní systém nebo expresívní systémy využívající savčí buňky, produkovaly pouze velmi malá množství rekombinantnich proteinů (O'Reilly a další, Cell, 88:277, 1997).
Nízké výtěžky získané v použitých expresívních systémech mohou být vysvětleny skutečností, že jak endostatin tak angiostatin jsou vnitřními fragmenty mnohem větších proteinů.
Tyto zkrácené proteiny mohou být, v důsledku absence zbytků, které jsou z prekurzorových molekul odštěpeny, nesprávně sbaleny. Angiostatin například obsahuje 26 cysteinových zbytků, které vytvářejí velký počet disulfidových vazeb. Při expresi samotného angiostatinu možná není vytvořeno prostředí optimální pro vznik tohoto velkého počtu disulf idových vazeb. Rekombinantní endostatin produkovaný v E.coli v průběhu dialýzy precipitoval, což je pravděpodobně důsledkem hydrofobicity tohoto proteinu (O'Reilly a další, Cell, 88:277, 1997).
Hlavní překážkou pro použití angiostatinu a endostatinu v jejich současné formě je skutečnost, že k dosaženi požadovaného terapeutického cíle musí být do organizmu po dobu týdnů až měsíců injekčně aplikována relativně velká množství těchto proteinů. U v současnosti používaného myšího modelu je k dosažení optimální účinnosti například nutno aplikovat 20 mg/kg/den endostatinu (Boehm a další, Nátuře, 390:440, 1997). Vezmeme-li v úvahu, že je nezbytné klinické testování endostatinu a angiostatinu, pak je nutné vyvinout způsob produkce velkého množství tohoto materiálu v čistotě vhodné pro klinické použití.
Jedním ze systémů, který byl použit k expresi velkých množství fúzních proteinů v savčích buňkách, je konstrukt DNA kódující signální peptid, imunoglobulinovou oblast Fc a cílový (požadovaný) protein. Fúzní protein kódovaný tímto konstruktem je obvykle označován jako imunofúzin. Mezi cílové proteiny, který byly úspěšně exprimovány ve formě imunofúzinů patří: IL2, CD26, Tat, Rev, OSF-2, βΙΘ-Η3, receptor pro IgE, PSMA a gpl20. Tyto expresívní konstrukty jsou popsány v přihláškách US 5541087 a 5726044, které jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.
Hlavním cílem při expresi rekombinantních fúzních proteinů v savčích buňkách bylo pokusit se takové hybridní molekule udělit nějaké nové nebo užitečné vlastnosti jako například umožnit správné sbalení (tj. vytvoření správné terciární a/nebo kvartérní struktury), zvýšit rozpustnost, směrovat cytokin nebo toxin in vivo, umožnit vazbu na receptor pro Fc, fixaci komplementu, vazbu na protein A, prodloužit biologický poločas a zvýšit schopnost přecházet hematoencefalickou bariérou. Příkladem rekombinantních fúzních proteinů produkovaných v savčích buňkách jsou imunokonjugáty cytokinů (Gillies a další, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 89:1428, 1992); Gillies a další, Bioconjugate Chemistry, 4:230, 1993), imunoadhesiny (Capon a další, Nátuře, 337:525, 1989) a konjugát nervového růstového faktoru (Friden a další, Science, 339:394, 1993). Každá z následujících publikací je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.
Jedna stránka popisuje nové sekvence DNA, které usnadňují účinnou produkci a sekreci inhibitorů angiogeneze v savčích hostitelských buňkách. Druhá stránka vynálezu popisuje způsoby léčby savců s využitím nukleových kyselin kódujících, nebo aminokyselinových sekvencí definujících, inhibitory angiogeneze, včetně nepřirozených, biosyntetických nebo jiných uměle vytvořených proteinů jako například proteinů vytvořených racionálním designem.
Popis obrázků na výkresech
Cíle, charakteristické rysy a výhody předkládaného vynálezu uvedené v předcházejícím i následujícím textu, jakož i vynález sám, mohou být dokonale pochopeny z následujících výhodných provedení vynálezu a přiložených obrázků.
o ·
Obrázky 1A až 1F jsou schématickým znázorněním ukázkových fúzních proteinů inhibitorů angiogeneze zkonstruovaných s využitím údajů uvedených ve vynálezu (viz. příklady 10 až 15). Na obrázcích jsou znázorněny:
Obrázek 1Ά - fúzní protein Fc-doména kringle 1 angiostatinu
Obrázek 1B - fúzní protein Fc-vnitřní část domény kringle 1 angiostatinu
Obrázek 1C - fúzní protein Fc-endostatin-linker GlyServnitřní část domény kringle 1 angiostatinu
Obrázek ID - fúzní protein Fc-endostatin-linker GlySerdoména kringle 1 angiostatinu
Obrázek 1E - fúzní protein Fc-endostatin-linker GlySerangiostatin
Obrázek 1F - fúzní protein angiostatin-Fc-endostatin
Svislé úsečky reprezentují disulfidické vazby (nemusí být přítomny) spojující cysteinové zbytky (C) v pantové oblasti domény Fc.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje přípravky a způsoby využitelné pro produkci a použití fúzních proteinů zahrnujících nějaký inhibitor angiogeneze. Tyto fúzní proteiny mohou usnadnit expresi velkých množství biologicky aktivních proteinových inhibitorů angiogeneze. Tyto proteinové inhibitory angiogeneze mohou být následně z fúzního proteinu odštěpeny a před aplikací do organizmu nějakého savce (například člověka) smíchány s farmaceuticky přijatelným nosičem. Jinou možností je smíchat nukleotidové sekvence kódující, nebo aminokyselinové sekvence definující, fúzní proteiny zahrnující in
4 hibitor angiogeneze s nějakým farmaceuticky přijatelným nosičem a tuto směs aplikovat do organizmu savce.
Jedna stránka vynálezu popisuje molekuly nukleových kyselin, například molekuly DNA nebo RNA, kódující nějaký fúzní protein podle vynálezu. Daná molekula nukleové kyseliny kóduje signální sekvenci, Fc oblast imunoglobulinu a alespoň jeden cílový protein, v této přihlášce označovaný jako proteinový inhibitor angiogeneze, vybraný ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu a jejich kombinace. Ve výhodném provedení vynálezu kóduje molekula nukleové kyseliny postupně, ve směru 5' k 3, signální sekvenci, Fc oblast imunoglobulinu a sekvenci cílového proteinu. V jiném výhodném provedení vynálezu kóduje molekula nukleové kyseliny postupně, ve směru 5' k 3', signální sekvenci, sekvenci cílovéhó proteinu a Fc oblast imunoglobulinu.
V jiném výhodném provedení vynálezu zahrnuje Fc oblast imunoglobulinu pantovou oblast imunoglobulinu a výhodně zahrnuje alespoň jednu konstantní oblast těžkého imunoglobulinového řetězce, například konstantní doménu 2 (CH2) těžkého řetězce, konstantní doménu 3 (CH3) těžkého řetězce a volitelně dále konstantní doménu 4 (CH4) těžkého řetězce. V závislosti na typu použitého imunoglobulinu je tímto vytvořena oblast Fc. Ve výhodnějším provedení vynálezu zahrnuje Fc oblast imunoglobulinu pantovou oblast, doménu CH2 a doménu CH3. Za určitých podmínek není v Fc oblasti imunoglobulinu zastoupena alespoň doména CHi. Ačkoliv mohou být Fc oblasti imunoglobulinu odvozeny z jakékoliv třídy imunoglobulinů, například IgA, IgD, IgE, IgG a IgM, ve výhodných provedeních jsou používány Fc oblasti imunoglobulinu odvozené z třídy IgG.
V jiném výhodném provedení vynálezu může být nukleová kyselina podle vynálezu začleněna do expresívního vektoru schopného replikace a tímto vektorem mohou být následně transfekovány savčí hostitelské buňky. V jiném výhodném provedení vynález popisuje hostitelské buňky nesoucí nukleotidové sekvence podle vynálezu.
Jiná stránka vynálezu popisuje fúzní protein zahrnující Fc oblast imunoglobulinu připojenou, buď přímo peptidovou vazbou nebo prostřednictvím polypeptidového linkeru, k cílovému proteinu vybranému ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu a jejich kombinace. Cílový protein může být svým C-koncem připojen k N-konci Fc oblasti imunoglobulinu. Ve výhodnějším provedení vynálezu je nicméně cílový protein připojen svým N-koncem k C-konci Fc oblasti imunoglobulinu.
V jiném provedení vynálezu může fúzní protein podle vynálezu zahrnovat nějaký druhý cílový protein vybraný ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu a nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu. U tohoto typu konstruktu mohou být první a druhý cílový protein totožné nebo rozdílné. Ve výhodném provedení vynálezu zmíněný fúzní protein například zahrnuje první cílový protein typu angiostaťinu, Fc oblast imunoglobulinu a druhý cílový protein typu endostatinu. První a druhý cílový protein mohou být vzájemně spojeny buď přímo nebo prostřednictvím polypeptidového linkeru. V jiném uspořádání .mohou být oba cílové proteiny připojeny, buď přímo nebo prostřednictvím polypeptidového linkeru, k Fc oblasti imunoglobulinu. V tomto případě je první cílový protein připojen k N-konci Fc oblasti imunoglobulinu a druhý cílový protein připojen k C-konci Fc oblasti imunoglobulinu.
V jiném provedení vynálezu mohou být dva fúzní proteiny spojeny buď kovalentně, například disulfidovou nebo peptidovou vazbou, nebo nekovalentně, čímž je vytvořen multimerní protein. Ve výhodném provedení jsou tyto dva fúzní proteiny spojeny kovalentně prostřednictvím jedné nebo více disulfidických vazeb mezi postranními řetězci cysteinů, které se ve výhodném provedení nalézají v pantových oblastech imunoglobulinů umístěných v obou řetězcích Fc oblastí imunoglobulinů.
Ve výhodném provedení vynálezu zmíněný cílový protein zahrnuje nějaký fragment plazminogenu o molekulové hmotnosti přibližně 40 kD a volitelně rovněž zahrnuje aminokyselinou sekvenci uvedenou jako SEK. ID. Č.: 3. V jiném provedení vynálezu zmíněný cílový protein zahrnuje nějaký fragment kolagenu XVIII s aminokyselinovou sekvencí uvedenou jako SEK. ID. Č.: 1. Cílovým proteinem může být rovněž nezkrácený angiostatin nebo endostatin nebo jejich biologicky aktivní fragmenty. Zdroj cílového proteinu použitého při vytváření daných fúzních proteinů bude záviset na plánovaném použití tohoto cílového proteinu. Bude-li například cílový protein aplikován lidem, pak by tento cílový protein měl být lidského původu.
Jiná stránka vynálezu popisuje způsoby produkce fúzního proteinu zahrnujícího Fc oblast imunoglobulinů a cílový protein vybraný ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu a nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu. Tento způsob zahrnuje následující kroky: (a) vytvoření savčí buňky nesoucí DNA kódující takový fúzní protein buď s nebo bez signální sekvence; a (b) kultivaci takové buňky za účelem produkce zmíněného fúzního proteinu. Tento fúzní protein může být následně sebrán, je-li to nezbytné renaturován, a, s využitím standardních purifikačních technik v současnosti známých, vyčištěn. Za předpokladu, že ve zmíněném fúzním proteinu se mezi Fc oblastí imunoglobulinu a cílovým proteinem nalézá proteolyticky štěpitelná sekvence, pak může být cílový protein z fúzního proteinu s využitím běžně používaných proteolytických enzymů odštěpen a, je-li to nezbytné, před použitím purifikován.
Jiná stránka vynálezu popisuje způsoby léčby savců, například lidí, u kterých je žádoucí provést léčbu využívající inhibitory angiogeneze. Do rozsahu vynálezu například spadá aplikace inhibitorů angiogeneze lidem s nádorovými onemocněními. Léčba s využitím inhibitorů angiogeneze může zpomalit nebo zastavit růst nádorů a za určitých okolností může vyvolat regresi nádorů. Tato léčba může zahrnovat aplikaci inhibitoru angiogeneze do organizmu savce v množství dostačujícím ke zpomalení nebo zastavení růstu nádorů. Inhibitor angiogeneze může být aplikován ve formě fúzního proteinu nebo jako nukleová kyselina, ve výhodném provedení funkčně spojena s nějakým expresívním vektorem, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Vynález popisuje fúzní proteiny, v této přihlášce označované jako imunofúziny, které jsou využitelné k produkci komerčně výhodných množství inhibitorů angiogeneze v čistotě vhodné pro klinické použití. Před použitím mohou být tyto inhibitory angiogeneze z imunofúzních proteinů odštěpeny. Do rozsahu vynálezu nicméně rovněž spadá možnost aplikace imunofúzinů nebo nukleových kyselin kódujících imunofúziny s nějakým inhibitorem angiogeneze do organizmu savců přímo bez odštěpení.
Vynález popisuje fúzní proteiny zahrnující Fc oblast imunoglobulinu a alespoň jeden cílový protein, označovaný v této přihlášce jako inhibitor angiogeneze. Inhibitor angiogeneze je ve výhodném provedení vybrán ze skupiny zahrnuj 1 .··· ·· ··» ’·· ·* ci angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu. Je nicméně rovněž zřejmé, že ve formě fúzních proteinů stejného typu, jaký je popsán v této přihlášce, mohou být exprimovány i jiné polypeptidy schopné inhibovat angiogenezi, a to jak peptidy v současnosti známé tak objevené v budoucnosti.
Na obrázcích 1A až AF je znázorněno šest proteinových konstruktů použitelných při průmyslovém využití vynálezu. Jelikož ve výhodném provedení vynálezu jsou využívány dimerní konstrukty, všechny tyto konstrukty jsou znázorněny ve formě dimerů spojených dvojicí disulfidických vazeb mezi cysteiny přítomnými v jednotlivých podjednotkách. Tyto disulfidové můstky na obrázcích spojují dvě Fc oblasti imunoglobulinů v pantové oblasti, což je charakteristickým znakem nativních forem těchto molekul. I když konstrukty zahrnující pantovou oblast Fc úseku jsou upřednostňovány a jejich použití terapeutických agens je nadějné, do rozsahu vynálezu rovněž spadají i možnosti zesíťováni v jiných místech. Za určitých okolností mohou být rovněž produkovány dimery nebo multimery vhodné pro praktické využití vynálezu, kde tyto dimery nebo multimery jsou spojené nekovalentně, například hydrofobními interakcemi.
Jelikož jsou homodimerní konstrukty důležitými modelovými konstrukty vynálezu, jsou tyto konstrukty znázorněny Obrázku 1. Je zřejmé, že heterodimerní konstrukty jsou rovněž využitelné, ale odborníci vědí, že takové konstrukty je často velmi obtížné purifikovat. Mohou být nicméně vytvořeny konstrukty zahrnující směs homodimerů a heterodimerů, kde tyto konstrukty jsou využitelné k inhibici angiogeneze u nej různějšich druhů savců, včetně člověka. Jeden řetězec heterodimerní struktury může například zahrnovat endostatin a druhý například angiostatin.
Obrázek 1A znázorňuje dimerní konstrukt připravený postupem uvedeným v přikladu 10. Každá monomerni jednotka tohoto dimeru zahrnuje Fc oblast imunoglobulinu (1) včetně pantové oblasti, domény 0¾ a domény CH3. Přímo k C-konci Fc oblasti (1) je připojena první doména kringle angiostatinu (2) , a to jak její vnitřní tak vnější část. Obrázek 1B, ilustrující další provedení vynálezu (viz. příklad 11), zahrnuje Fc oblast totožnou s Fc oblastí na obrázku 1A, k jejímuž C-konci je tentokrát připojena pouze vnitřní část první doména kringle angiostatinu (3.) . Obrázky 1C až 1F ilustrují různé modelové proteinové konstrukty podle vynálezu. V těchto konstruktech je cílovým proteinem kombinace inhibitorů angiogeneze v tandemovém uspořádání a spojená linkerem. V konstruktu znázorněném na obrázku 1C zahrnuje cílový protein nezkrácený endostatin (4), polypeptidový linker (5) a vnitřní část první domény kringle angiostatinu (3) . Obrázek ID znázorňuje protein zahrnující Fc oblast totožnou s Fc oblastí na obrázku 1A a cílový protein zahrnující nezkrácený endostatin (4), polypeptidový linker (5) a celou první doménu kringle angiostatinu (jak vnitřní tak vnější část) (2). Konstrukt ilustrovaný obrázkem 1E se od konstruktu na obrázku ID liší tím, že na C-konci celého konstruktu je umístěn nezkrácený řetězec angiostatinu (7).
Ačkoliv obrázky 1A až 1F reprezentují konstrukty typu Fc-X, kde X je cílový protein, do rozsahu vynálezu rovněž spadají konstrukty typu X-Fc, které jsou použitelné při průmyslovém využití vynálezu. Do rozsahu vynálezu rovněž spadají proteiny podle vynálezu popsané vzorcem X-Fc-X, kde X mohou označovat totožné nebo odlišné cílové proteiny. Obrázek 1F ilustruje takový konstrukt, který ve směru od Dokonce k C-konci zahrnuje nezkrácený lidský angiostatin (7), Fc oblast lidského imunoglobulinu (6) včetně pantové oblasti a nezkrácenou doménu lidského endostatinu (4).
• 9 ·· • · · ·
• 99
Termín inhibitor angiogeneze označuje jakoukoliv molekulu, které potlačuje nebo inhibuje tvorbu nových krevních kapilár v organizmu savců. Při léčbě rakoviny inhibitory angiogeneze potlačují nebo inhibují tvorbu nových krevních kapilár v nebo na nádorech, výhodně pak v nebo na pevných nádorech. Výhodně využitelné inhibitory angiogeneze mohou být identifikovány pomocí nejrůznějších stanovení v současnosti známých a používaných. Mezi taková stanovení patří například sledování proliferace bovinních endotheliálních buněk tvořících kapiláry, stanovení na kuřecích chorioalantoických membránách (CAM) nebo stanovení na myší rohovce. V současnosti je nicméně s výhodou používáno stanovení CAM (viz. například O'Reilly a další, Cell, 79:315 až 328, 1994; a 0'Reilly a další, Cell, 88:277 až 285, 1997; tyto publikace jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.). Stručně řečeno, z oplodněných bílých vajec (3 dny po oplození) jsou vyjmuta embrya spolu s nepoškozených žloutkem a tato jsou umístěna na Petriho misky. Po třídenní inkubaci při 37°C v atmosféře 3% CO2 je na chorioalantoickou membránu každého z embryí umístěn disk z methylcelulózy obsahující předpokládaný inhibitor angiogeneze. Po přibližně 48 hodinové inkubaci jsou chorioalantoické membrány pozorovány pod mikroskopem a jsou zde sledovány známky inhibice angiogeneze.
Příkladem inhibitorů angiogeneze výhodně používaných při praktickém využití vynálezu jsou angiostatin (O'Reilly a další, Cell, 79:315 až 328, 1994; a přihlášky US 5733876, 5837682 a 5885795) a endostatin (O'Reilly a další, Cell, 88:277 až 285, 1997; a přihláška US 5854205). Jak již bylo zmíněno v předchozím textu, angiostatin i endostatin jsou specifickými inhibitory proliferace endotheliálních buněk a jsou schopny inhibovat růst nádorů tím, že blokují angioge nezi, což je tvorba nových krevních kapilár vyživujících nádory.
Angiostatin byl identifikován jako proteolytický fragment plasminogenu (O'Reilly a další, Cell, 79:315 až 328, 1994; a přihlášky US 5733876, 5837682 a 5885795; tyto publikace jsou zde uvedeny záměnou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu). Přesněji řečeno, angiostatin je vnitřní fragment plasminogenu o velikosti 38 kDa zahrnující alespoň tři domény kringle plazminogenu. Endostatin byl identifikován jako proteolytický fragment kolagenu XVIII (O'Reilly a další, Cell, 88:277 až 285, 1997; tato publikace je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu). Přesněji řečeno, endostatin je C-koncový fragment kolagenu XVIII o velikosti 20 kDa. Termíny angiostatin a endostatin označují nejenom nezkrácené proteiny, ale rovněž jejich varianty a biologicky aktivní fragmenty a rovněž biologicky aktivní fragmenty plasminogenu, respektive kolagenu XVIII. Jako biologicky aktivní fragmenty angiostatinu jsou označovány jakékoliv proteinové fragmenty plasminogenu nebo angiostatinu, které při stanovení CAM vykazují alespoň 30%, ve výhodném provedení alespoň 70% a nejvýhodněji pak přinejmenším 90% biologické aktivity nezkráceného angiostatinu. Jako biologicky aktivní fragmenty endostatinu jsou označovány jakékoliv proteinové fragmenty kolagenu XVIII nebo endostatinu, které při stanovení CMA vykazují alespoň 30%, ve výhodném provedení alespoň 70% a nejvýhodněji pak přinejmenším 90% biologické aktivity nezkráceného endostatinu.
Termín varianty zahrnuje druhové a alelické varianty, jakož i další přirozeně se vyskytující nebo nepřirozené varianty, například varianty vytvořené genovými manipulacemi, kde tyto varianty vykazují přinejmenším 70% podobnost nebo 60% identitu, výhodněji pak 75% podobnost nebo 65% identitu a nejvýhodněji alespoň 80% podobnost nebo 70% identitu s přirozeně se vyskytujícími sekvencemi endostatinu nebo angiostatinu popsanými v této přihlášce.
Skutečnost, zda-li daný polypeptid vykazuje vzhledem k referenčnímu polypeptidu požadované procento podobnosti nebo identity, je stanovena srovnáním (alignmentem) aminokyselinové sekvence testovaného polypeptidu s aminokyselinovou sekvencí referenčního polypeptidu s využitím dynamického algoritmu popsaného v publikaci Smith a Waterman, J.
Mol. Biol., 147:195 až 197, 1981 v kombinaci se substituční maticí BLOSUM62 popsanou na obrázku 2 v publikaci Henikoff a Henikoff, Aminoacid substitution matrices from protein blocks, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 89:10915 až 10919, 1992. Pro potřeby této přihlášky je vložení mezery do sekvence penalizováno hodnotou -12 a prodloužení mezery pak hodnotou -4. Počítačové programy provádějící srovnávání sekvencí (alignment) s využitím algoritmu Smith-Waterman 'a matice BLOSUM62 jako například programový balík GCG (Oxford Molecular Group, Oxford, England) jsou komerčně dostupné a odborníky často využívané.
Jakmile je provedeno srovnání kandidátní sekvence se sekvencí referenční, může být spočteno procento podobnosti. U jednotlivých aminokyselin je postupně srovnávána jejich vzájemná podobnost. Je-li v matici BLOSUM62 hodnota dvou vzájemně si přiřazených aminokyselin nulová nebo záporná, pak skóre pro tuto dvojici je nula; v.jiném případě je skóre pro tuto dvojici 1,0. Prvotní neupravené skóre podobnosti je poté součtem hodnot podobnosti pro jednotlivé dvojice aminokyselin. Neupravené skóre je následně normalizováno dělením počtem aminokyselin, v kratší ze srovnávaných sekvencí. Toto normalizované skóre odpovídá procentu podobnosti. Procento identity je počítáno obdobně. Vzájemně si přiřazené aminokyseliny jsou postupně srovnávány. Jestliže dvě ♦ 9
·· | 99 · | 9 | ||
9 9 | 9 | • | 99 | • 9 |
• | ·· | • | 9 | |
• | • | • 9 | • | 9 |
9 | 9 | • | 9 | 9 |
9999 | • 9 | 999 | • 9 |
9··
99 •9 •99 ·9 ♦ 9 vzájemně si přiřazené aminokyseliny nejsou totožné, pak hodnota identity je nulová; v opačném případě je hodnota identity rovna 1,0. Prvotní neupravené skóre identity je součtem hodnot identit aminokyselinových párů. Neupravené skóre je následně normalizováno dělením počtem aminokyselin v kratší ze srovnávaných sekvencí. Toto normalizované skóre odpovídá procentu identity. Při výpočtu procenta identity nebo podobnosti jsou inzerce a delece ignorovány. Ve stejném duchu nejsou v těchto výpočtech rovněž zahrnuty penalizace za vložení/prodloužení mezery, ačkoliv tyto jsou použity při počátečním srovnání sekvencí (alignmentu).
Cílové proteiny popsané v přihlášce jsou exprimovány ve formě fúzních proteinů s Fc oblastí nějakého imunoglobulinu. Je známo, že každá konstantní oblast těžkého imunoglobulinového řetězce se skládá ze čtyř nebo pěti domén. Tyto domény jsou označovány následovně: CHi-pantová oblast-CH2CH3-(-CH4). Sekvence DNA jednotlivých domén těžkých řetězců vykazují zkříženou homologii mezi jednotlivými třídami imunoglobulinů. Doména CH2 imunoglobulinu IgG je například homologní s doménou CH2 imunoglobulinu IgA a IgD a s doménou CH3 imunoglobulinů IgM a IgE.
Termín Fc oblast imunoglobulinu označuje C-koncovou část konstantní oblasti imunoglobulinového řetězce, výhodněji pak konstantní oblast těžkého řetězce imunoglobulinu nebo její část. Fc oblast může například zahrnovat: 1) doménu CHi, doménu CH2 a doménu CH3, 2) doménu CHi a doménu CH2, 3) doménu CHi a doménu CH3, 4) doménu CH2 a doménu CH3 nebo 5) kombinaci dvou nebo více domén a pantové oblasti imunoglobulinu. Ve výhodném provedeni vynálezu zahrnuje Fc oblast v konstruktu DNA alespoň pantovou oblast imunoglobulinu, doménu CH2 a doménu CH3 a ve výhodném provedení postrádá alespoň doménu CHi.
• 4
Ve výhodném provedení vynálezu jsou jako zdroj konstantních částí těžkých řetězců využívány ímunoglobuliny typu IgG (Igy) (podtřídy 1, 2, 3 nebo 4). Mohou být nicméně rovněž použity jiné imunoglobulinové třídy jakými jsou IgA (Iga), IgD (Ig5), IgE (Ige) a IgM (Igu). Volba vhodné konstantní oblasti těžkého řetězce imunoglobulinu je detailně diskutována v přihláškách US 5541087 a 5726044. Předpokládá se, že odborníci budou schopni zvolit vhodné sekvence konstantních oblastí těžkých řetězců imunoglobulinů z dostupných imunoglobulinových tříd a subtypů tak, aby bylo dosaženo požadovaného výsledku. Část konstruktu DNA kódující Fc oblast imunoglobulinu ve výhodném provedení zahrnuje alespoň část pantové oblasti a rovněž alespoň část domény CH3 odvozené z Fcy nebo homologních domén v imunoglobulinech typu IgA, IgD, IgE nebo IgM.
V závislosti na způsobu využití mohou být použity rovněž geny kódující konstantní oblasti z jiných živočišných druhů, například myší nebo potkanů. Oblast Fc, použitá jako fúzní partner v konstruktu DNA kódující imunofúzin, může být obecně odvozena z jakéhokoliv druhu savce. Je-li nežádoucí vyvolat v hostitelské buňce nebo organizmu imunitní odpověď vůči použité Fc oblasti, pak tato oblast může být odvozena ze stejného druhu k jakému náleží hostitelská buňka nebo živočich. Je-li například hostitelská buňka lidského původu nebo je-li hostitelem člověk, pak je použita lidská oblast Fc; obdobně je použita myší oblast Fc v případech, kdy je hostitelským živočichem myš. Využitelné jsou rovněž substituční nebo deleční mutanty oblastí F.c, kde je v doménách konstantní oblasti odstraněn nebo nahrazen jeden nebo více aminokyselinových zbytků. Jedním z příkladů je zavedení aminokyselinových substitucí v doméně CH2, čímž je vytvořen mutant se sníženou afinitou vůči receptorům pro Fc (Cole a další, J. Immunol., 159:3613, 1997). Odborník bude ♦ ·· · · · ·
9 · · · · ♦ ♦ ·2 « α · 9 9 9 99 »**· ·· ··· ··* ····♦ s využitím metod molekulární biologie schopen takové konstrukty snadno připravit.
Použití lidských Fcyl jako oblastí Fc s sebou nese řadu výhod. Bude-li například fúzní protein inhibitor angiogeneze-Fc využit jako biologický léčivý přípravek, pak doména Fcyl může v tomto proteinu vykonávat určité efektorové funkce. Mezi tyto efektorové funkce patří biologické aktivity jako například fixace komplementu, buněčná toxicita vyvolaná protilátkou, přechod přes placentu a prodloužení biologického poločasu v krevním oběhu.' Doména Fc rovněž umožňuje detekci metodou ELISA s využitím protilátek proti Fc a purifikaci s využitím vazby na protein A z mikroorganizmu Staphylococcus aureus (protein A). Při některých aplikacích je nicméně žádoucí odstranit určité efektorové funkce oblasti Fc, jako například vazbu na receptory pro Fc nebo fixaci komplementu.
V případě imunofúzinů s inhibitorem angiogeneze je jednou z funkcí oblasti Fc usnadnit správné sbalení daného inhibitoru angiogeneze tak, aby byl vytvořen aktivní inhibitor angiogeneze, a zvýšit rozpustnost aktivních částí fúzního proteinu a to přinejmenším v extracelulárním médiu. Jelikož oblast Fc je hydrofilní, pak její imunofúziny s inhibitory angiogeneze jsou, na rozdíl například od rekombinantniho endostatinu produkovaného v E.coli, rovněž snadno rozpustné (O'Reilly, Cell, 88:277, 1997). Ve všech příkladech uvedených v této přihlášce bylo dosaženo vysoké hladiny produkce imunofúzinů. Imunofúziny s inhibitory angiogeneze byly obvykle sekretovány do média v koncentracích přibližně 30 až 100 pg/ml a mohly být snadno purifikovány chromatografií na Sepharóze s navázaným proteinem A (protein A-Sepharóza). Imunofúziny s inhibitory angiogeneze mohou být rovněž rozštěpeny a dále purifikovány s využitím standardních purifikačních postupů využívajících například
499 9 •· · ··· • · ·· • ♦ · ·♦ • · 99 • 999 99 «·♦ heparin-Sepharózu, lysin-Sepharózu nebo nějaký způsob afinitní purifikace.
Mimo vysokých hladin exprese se fúzní proteiny podle vynálezu rovněž vyznačují delšími biologickými poločasy v krevním oběhu a to pravděpodobně v důsledku jejich větších molekulových hmotností. Biologický poločas fúzního proteinu lidský Fc-lidský angiostatin v krevním oběhu myší je například 33 hodin. Biologický poločas lidského angiostatinu je pro srovnání pouze 4 až 6 hodin (O'Reilly a další, Nátuře Medicine, 2:689, 1996). Předpokládá se, že angiostatin s molekulovou hmotností 40 kDa a endostatin s molekulovou hmotností 20 kDa jsou dostatečně malé, aby mohly být odstraněny filtrací v ledvinách. Naproti tomu dimerní formy Fc-angiostatin a Fc-endostatin mají molekulové hmotnosti 145 kDa, respektive 100 kDa, a to proto, že ke dvěma molekulám' angiostatinu nebo dvěma molekulám endostatinu jsou připojeny dvě oblasti Fc imunoglobulinu. Tyto dvoj vazné .. struktury mohou vykazovat vyšší vazebné afinity k receptorům pro angiostatin nebo endostatin. Je-li inhibiční aktivita angiogeneze zprostředkovaná receptorem, pak fúzní proteiny s oblastí Fc jsou při potlačení růstu nádorů potenciálně daleko účinnější než samotný monovalentní angiostatin nebo endostatin. Mimo to, jestliže angiostatin a/nebo endostatin patři do skupiny dimerních proteinových ligandů, pak připojená oblast Fc vnutí angiostatinu nebo endostatinu takové prostorové uspořádání, že dimerizace bude probíhat intramolekulárně, dimerizační rovnováha bude posunuta směrem k tvorbě dimeru a tím dojde k zesílení vazby na příslušný receptor. Standardními rekombinantními technikami manipulace DNA můžou být rovněž na vhodná místa monomerů umístěny cysteinové zbytky a vytvořením kovalentní disulfidické vazby může být dimer stabilizován.
*
44««
4
444
44 •94444 ·· • · • 4 • 4 •
• 4 4
Termín multivalentní označuje rekombinantní molekulu, která zahrnuje dvě nebo více biologicky aktivních částí. Proteinové fragmenty vytvářející multivalentní molekulu mohou být spojeny polypeptidovým řetězcem, který spojuje jednotlivé části, aniž by při tom docházelo k posunu čtecího rámce, a umožňuje všem těmto částem fungovat nezávisle..
Termín bivalentní označuje multivalentní rekombinantní molekulu, která ve fúzním konstruktu podle vynálezu zahrnuje dva cílové proteiny, například molekulu Fc-X, kde část X je nezávisle zvolená ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin nebo jejich varianty. Jelikož k imunoglobulinové oblasti Fc jsou připojeny dvě části X (oblast Fc je obvykle dimer fragmentů těžkých řetězců zahrnující přinejmenším část pantové oblasti a domény CH3 a volitelně doménu CH2) , tato molekula je bivalentní (viz. například obr. 1A). Jestliže může být fúzní konstrukt podle vynálezu popsán vzorcem Fc-X-X, pak výsledná dimerní molekula Fc je tetravalentní. Zmíněné dva proteiny vytvářející molekulu Fc-X-X mohou být spojeny peptidovým linkerem. Zdánlivá vazebná afinita mezi bivalentní molekulou a recepťorem může být vyšší než u molekuly monovalentni. Jestliže se například jedna endostatinová část fúzního proteinu Fc-endostatin váže na receptor na povrchu buněk s určitou afinitou, pak druhá endostatinová část téhož fúzního proteinu Fc-endostatin se může na receptor na téže buňce vázat s výrazně vyšší afinitou (zdánlivou afinitou). Tato skutečnost je způsobena fyzickým přiblížením druhé endostatinové části k příslušnému receptoru po navázání první endostatinové části. V případech vazby protilátky na antigen je zdánlivá afinita zvýšena přinejmenším 10000-krát.
Termíny multimerní a multimer označují stabilní spojení (asociaci) dvou nebo více polypeptidových řetězců. Tyto řetězce mohou být spojeny buď kovalentně, například di19 *
• · • 9 •9·· 99 •· ♦ ♦·
9♦
999 sulfidickou vazbou, nebo nekovalentně, například hydrofobními interakcemi. Termín multimer zahrnuje jak homomultimery, kde jsou všechny polypeptidy totožné, tak heteromultimery, v nichž jsou polypeptidy rozdílné.
Termín dimerní (molekula) je specifickým typem multimerní molekuly, v níž jsou dva proteinové polypeptidové řetězce spojeny kovalentní nebo nekovalentní vazbou. Mělo by být zřejmé, že imunoglobulinová oblast Fc (fragment Fc) je obvykle dimer fragmentů těžkých řetězců zahrnující přinejmenším část pantové oblasti a domény CH3 a volitelně doménu CH2. Je známo množství proteinových ligandů, které se na příslušné receptory vážou ve formě dimerů. Jestliže proteinový ligand X dimeruje přirozeně, pak část X v molekule Fc-X bude dimerovat daleko snadněji, protože dimerizace je koncentračně závislá. Fyzické přiblížení dvou molekul X spojených asociovanými imunoglobulinovými oblastmi Fc způsobí, že dimerizace bude probíhat intramolekulárně, dimerizační rovnováha bude posunuta směrem k tvorbě dimeru a tím dojde k zesílení vazby na příslušný receptor.
Je pochopitelné, že v přihlášce jsou k vytváření fúzních proteinů s oblastí Fc, použitelných při průmyslovém využiti vynálezu, používány metody práce s rekombinantní DNA. Fúzní konstrukty s oblastí Fc jsou ve výhodném provedení konstruovány na úrovni DNA a takto připravené DNA jsou'integrovány do expresívních vektorů a exprimovány. Tímto způsobem jsou připravovány imunofúziny. Termín vektor označuje jakoukoliv nukleovou kyselinu obsahující nukleotidové sekvence, které mohou být inkorporovány do hostitelské buňky, a zde rekombinovat s nebo se integrovat do genomu takové buňky nebo se replikovat autozomně ve formě epižomu. Mezi takové vektory patří lineární nukleové kyseliny, plazmidy, fágmidy, kosmidy, vektory na bázi RNA, virové vektory a podobně. Příkladem virových vektorů jsou retroviry, adenoviry a viry
4«·· • · · · · • ·· ·· · • ·· • ·· ·9 • ·« * · · ·· ♦ ♦ · ♦ • · ♦ · « ··· ·· asociované s adenoviry. Termíny genová exprese, exprese genu nebo exprese cílového proteinu zahrnují transkripci sekvence DNA, translaci příslušného transkriptu mRNA a sekreci fúzního proteinu s oblastí Fc.
Výhodně používaný expresívním vektorem je expresívní vektor pdCs (Lo a další, Protein Engineering, 11:495 až 500, 1998; tato citace je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.). V tomto vektoru je k transkripci genu Fc-X využíván posilovač transkripce/promotor z lidského cytomegaloviru a polyadenylační signál SV40. Sekvence posilovače transkripce a promotoru lidského cytomegaloviru byly odvozeny z nukleotidů -601 až +7 v sekvenci popsané v publikaci Boshart a další, Cell, 41:521, 1985; tato citace je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Tento vektor rovněž jako selekční markér obsahuje gen pro mutantní dihydrofolát reduktázu (Simonsen a Levinson, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 80:2495, 1983; tato citace je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu).
Vhodné hostitelské buňky mohou být transformovány nebo transfekovány sekvencemi DNA podle vynálezu a využity k expresi a sekreci cílového proteinu. Ve výhodném provedení vynálezu jsou jako hostitelské buňky využívány imortalizované hybridomové buňky, buňky myelomu NS/0, buňky 293, buňky z ovárií čínského křečka, buňky HeLa a buňky COS.
Fúzní proteiny podle vynálezu jsou ve výhodném provedení konstruovány tradičními metodami práce s rekombinantní DNA. Tyto fúzní proteiny jsou ve výhodném provedení produkovány expresí molekuly DNA kódující signální sekvenci, oblast Fc imunoglobulinu a nějaký cílový protein (v této přihlášce rovněž označován jako inhibitor angiogeneze) v hostitelských buňkách. Ve výhodném provedení tyto konstrukty, ve směru od 5' ke 3', kóduji signální sekvenci, oblast Fc imunoglobulinu a příslušný cílový protein. Alternativně mohou tyto konstrukty, ve směru od 5' ke 3', kódovat signální sekvenci, příslušný cílový protein a oblast Fc imunoglobulinu .
Termín signální sekvence, signální peptid označuje peptidovou sekvenci, která umožňuje sekreci fúzního proteinu imunoglobulinu a inhibitoru angiogeneze, a která je následně od tohoto imunofúzinu odštěpena. Signální sekvencí je polynukleotid, který kóduje aminokyselinovou sekvenci zahajující transport proteinu přes membránu endoplazmatického retikula. Mezi signální sekvence využitelné ve vynálezu patří signální sekvence z lehkých řetězců protilátek, například protilátky 14.18 (Gillies a další, J. of Immunol. Meth., 125:191 až 202, 1989), signální sekvence z těžkých řetězců protilátek, například signální sekvence z těžkého řetězce protilátky MOPC141 (Sakano a další, Nátuře, 286:5774, 1980) a jakékoliv jiné signální sekvence v současnosti známé (viz. například Watson, Nucleic Acid Res., 12:5145, 1984). Každá z těchto citací je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.
Signální sekvence jsou v současnosti dobře charakterizovány a obvykle zahrnují 16 až 30 aminokyselin; mohou nicméně zahrnovat více nebo méně aminokyselin. Typický signální peptid zahrnuje tři oblasti: Bazickou N-koncovou oblast, střední hydrofobní oblast a polárnější C-koncovou oblast. Střední hydrofobní oblast zahrnuje 4 až 12 hydrofobních aminokyselinových zbytků, které při transportu nascentního polypeptidu ukotvují signální peptid ve dvojvrstvě lipidové membrány. Následně je signální peptid obvykle v lumen endoplazmatického retikula odštěpen enzymy označovanými jako signální peptidázy. Místa potenciálního štěpení jsou obvyk22
·· | ·· | ||
• · | • | ·· | |
• | ·· | ||
• | • | • € | |
9 | • | • | |
···· | ·· | ··> |
• ·· · | ||
·· • | • · • · | ·· • |
• | • · · | • |
• | • < | • |
··· | ·· | ·« · |
le definována pravidlem (-3, -1). Typický signální peptid má tedy v oblasti -1 až -3 obvykle malé neutrální aminokyselinové zbytky a nevyskytuje se zde prolin. Příslušná signální peptidáza rozštěpí signální peptid mezi aminokyselinami -1 a +1. Signální sekvence (kódovaná příslušným úsekem DNA) může být tedy od N-konce imunofúzinu v průběhu sekrece odštěpena. Výsledkem pak je sekrece imunofúzinu zahrnujícího oblast Fc a cílový protein. Detailní popis signálních sekvencí je uveden v publikaci von Heijne, Nucleic Acid Res., 14:4683, 1986, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu.
Odborníkům je zřejmé, že volba signální sekvence vhodné pro použití ve vynálezu může vyžadovat provedeni několika rutinních experimentů, jako například určení schopnosti použité signální sekvence řídit sekreci připojeného imunofúzinu a rovněž stanovení optimální konfigurace, genomové DNA nebo cDNA, této sekvence k dosažení účinné sekrece imunofúzinů. Odborník je rovněž schopen na základě pravidel popsaných v publikaci von Heijne (citace uvedena výše) vytvořit syntetický signální peptid a standardními experimenty stanovit jeho účinnost. Signální sekvence může být rovněž označována jako signální peptid, vedoucí peptid nebo vedoucí sekvence.
Konstrukt vzniklý připojením signální sekvence k imunoglobulinové oblasti Fc je někdy v přihlášce označován jako sekretorní kazeta. Příkladem sekretorní kazety použitelné při průmyslovém využití vynálezu je polynukleotid kódující, ve směru od 5' k 3', gen pro signální sekvenci lehkého imunoglobulinového řetězce a gen pro oblast Fcyl lidského imunoglobulinu yl. Oblast Fcyl genu pro lidský imunoglobulin yl ve výhodném provedení zahrnuje alespoň část pantové oblasti a část domény CH3 nebo alternativně alespoň část pantové oblasti a část domény 0¾ a domény CH3. DNA kódující sekretorni kazetu se může nacházet v konfiguraci genomové DNA nebo cDNA.
V jiném provedení vynálezu je mezi sekvence kódující sekretorní kazetu a inhibitor angiogeneze vložena sekvence DNA kódující proteolyticky štěpitelné místo. Toto místo umožňuje proteolytické štěpení kódovaného fúzního proteinu a tudíž oddělení domény Fc od inhibitoru angiogeneze. Termín proteolyticky štěpitelné místo označuje aminokyselinové sekvence, které jsou přednostně štěpeny proteolytickými enzymy nebo jinými látkami schopnými proteolýzy. Výhodně využívaná proteolyticky štěpitelná místa zahrnují aminokyselinové sekvence, které jsou rozpoznávány proteolytickými enzymy jako například trypsinem, plasminem nebo enterokinázou K. Je známo množství dvojic štěpitelné místo/proteolytické agens. Viz. například přihláška US 5726044, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Je-li cílovým proteinem prekurzorová molekula angiostatinu, endostatinu nebo nějaké z jejich aktivních variant, pak požadovaný proteinový produkt může být štěpen endogenními proteolytickými enzymy jako například elastinem nebo plasminem nebo urokinázou.
Do rozsahu vynálezu rovněž spadají fúzní proteiny obsahující různé kombinace rekombinantního angiostatinu nebo endostatinu nebo jejich fragmentů, které mohou být připraveny ve velkých množstvích. I přes prokazatelnou účinnost při potlačování růstu nádorů není mechanizmus, kterým angiostatin a endostatin blokují angiogenezi, dokonale pochopen. Angiostatin zahrnuje několik domén typu kringle a endostatin obsahuje různé strukturní motivy, z nichž každý může být odpovědný za nebo přispívající k vazbě na proteiny endotheliálních buněk a antioangiogenní aktivitu. Do rozsahu vynálezu tudíž spadají cílové proteiny, které jsou bio24
• · logicky aktivními fragmenty angiostatinu, jako například kringle 1, kringle 2, kringle 3 a jejich kombinace, a biologicky aktivní fragmenty endostatinu, které vykazují aktivity fyziologicky podobné přirozeně se vyskytujícím nezkráceným molekulám angiostatinu nebo endostatinu.
Další provedení vynálezu popisuje bifunkční hybridní konstrukty inhibitorů angiogeneze. Termín bifunkční hybridní molekula označuje protein vytvořený kombinací dvou proteinových podjednotek, kde tyto dvě podjednotky mohou pocházet z odlišných proteinů. Každá z těchto proteinových podjednotek má svou nezávislou funkci a v dané hybridní molekule mohou být funkce těchto dvou podjednotek aditivní nebo synergické. Tyto funkční hybridní proteiny by umožnily prozkoumat synergické účinky angiostatinu a endostatinu na živočišných modelech. Ve výhodném provedeni zahrnují bifunkční hybridy alespoň dva rozdílné inhibitory angiogeneze tandemově spojné přímo nebo prostřednictvím polypeptidového linkeru. Ve výhodném provedení vynálezu například cílová sekvence kóduje alespoň část angiostatinu připojenou ve stejném čtecím rámci k části endostatinu a jak angiostatinová tak endostatinová doména vykazují anti-angiogenní aktivitu nebo inhibici angiogeneze. Tyto dvě jednotky mohou být spojeny polypeptidovým linkerem.
Termín polypeptidový linker označuje nějakou peptidovou sekvenci, která může spojovat dva proteiny nebo nějaký protein a oblast Fc. Polypeptidový linker ve výhodném provedení zahrnuje větší množství aminokyselin jakými jsou například glycin a/nebo serin. Ve výhodném provedení zahrnuje polypeptidový linker sérii peptidů obsahujících glycin a serin v počtu přibližně 10 až 15 zbytků. Viz. například přihláška US 5258698, která je zde uvedena záměnou za přenesení jejího celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Je nicméně zřejmé, že optimální délka linkeru a optimální ami ·· nokyselinové složení mohou být určeny standardními experimenty.
Bylo zjištěno, že expresí různých částí angiostatinu ve fúzi s oblastí Fc je možné dosáhnout vysokých hladin exprese. Důvodem je pravděpodobně skutečnost, že část Fc funguje jako nosič usnadňující správné sbalení polypeptidu na Ckonci. Oblast Fc může být navíc glykosylována a při fyziologické hodnotě pH je vysoce nabitá a tudíž usnadňuje solubilizaci hydrofobních proteinů.
Vynález rovněž popisuje způsoby produkce fúznich proteinů oblasti Fc a angiostatinu a endostatinu z jiných živočišných druhů. Fúzní proteiny s inhibitory angiogeneze z jiných druhů než člověk jsou vhodné pro preklinické studie inhibitorů angiogeneze, jelikož před testováním na lidech musí být účinnost a toxicita proteinových léčiv testována na živočišných modelech. Lidské proteinové sekvence nemusí na myších modelech fungovat, jelikož tyto proteiny mohou vyvolávat imunitní reakci a/nebo vykazovat odlišné farmakokinetické parametry, čímž by docházelo ke zkreslení výsledků. Ekvivalentní myší proteiny jsou tudíž pro testovaní na myších modelech nej lepší náhražkou proteinů lidských.
Srovnáni rozpustných fúznich proteinů huFchuAngiostatin, huFc-huEndostatin, muFc-muAngiostatin a muFc-muEndostatin s totožnými nerozpustnými proteiny produkovanými v expresívním systému E.coli bylo provedeno na standardním myším modelu Lewisova karcinomu plic (O'Reilly a další, Cell, 88:277, 1997). Rozpustné fúzní proteiny byly při potlačení růstu nádorů v modelu Lewisova karcinomu plic výrazně účinnější než odpovídající proteiny produkované v E.coli. Laboratorní myši jsou navíc inbredni a nádory se nevytvářejí spontánně, ale jejich tvorba je indukována. Účinnost na myších modelech tudíž nemusí korelovat s předpokládanou účinností vůči lidským nádorům. Preklinické stu die prováděné na psech. poskytnou o účinnosti těchto inhibitorů angiogeneze na spontánně vytvořené nádory daleko přesnější informace, jelikož existuje velké množství přirozeně se vyskytujících, spontánně vytvořených nádorů v organizmu psů. Způsoby produkce fúzních proteinů myší (mu) Fc-mu angiostatin, muFc-muEndostatin a psí (ca) Fc-ca angiostatin, caFc-caEndostatin podle vynálezu usnadní preklinické studie inhibitorů angiogeneze jak na myších, tak na psích systémech .
Vynález popisuje způsoby léčby potíží zprostředkovaných/doprovázených nefyziologickou angiogenezí a to aplikací DNA, RNA nebo proteinů podle vynálezu. Mezi patologické stavy doprovázené nefyziologickou angiogenezí patří například: pevné nádory, leukémie., metastázy, benigní nádory včetně hemangiomů, neurofibromů, trachomů a pyrogenních granulomů; revmatická arthritida; lupénka; poškození zrakového aparátu (diabetická retinopatie, retinopatie způsobená předčasných narozením, degenerace makuly, odvržení štěpu rohovky, neovaskulární glaukom), retrolentální fibroplazie, rubeosis iridis, Osler-Webberův syndrom; angiogeneze na srdečním svalu; neovaskularizace atherosklerotických plátů; teleangiektazie; angiofibromy kloubů hemofiliků; a granulace poranění; a nadměrná nebo abnormální stimulace endotheliálnich buněk, srůst střev, artheroskleróza, sklerodermální a hypertrofované jizvy, tj. keloidy.
Konstrukty DNA popsané v této přihlášce mohou být využitelné při genových terapiích, při nichž je gen pro angiostatin nebo endostatin zaveden do buněk jedním z mnoha způsobů, kdy například nativní DNA je spojena s promotorem nebo DNA ve virovém vektoru. Jakmile je tato DNA zavedena do buňky, gen pro angiostatin a/nebo endostatin nebo gen pro fragmenty těchto molekul je exprimován a příslušný protein je produkován in vivo a může vykonávat svou normální
biologickou funkci. Zavedení konstruktu DNA podle vynálezu do hostitelské buňky má za následek vysokou hladinu exprese příslušného fúzního proteinu. Fúzní proteiny podle vynálezu mohou být rovněž využitelné při léčbě potíží zprostředkovaných/doprovázených nefyziologickou angiogenezí a mohou vykazovat, ve srovnání s nativními inhibitory angiogeneze nebo jinými rekombinantními inhibitory angiogeneze, vyšší účinnost a to vzhledem ke skutečnosti, že imunofúzní proteiny s inhibitory angiogeneze podle vynálezu mají delší biologický poločas než samotné nativní inhibitory angiogeneze nebo jiné rekombinantni inhibitory angiogeneze. Bivalentní a dimerní formy podle vynálezu by, vzhledem k jejich bivalentní a dimerní struktuře, měly mít vyšší vazebnou afinitu. Bifunkční hybridní molekuly podle vynálezu mohou vykazovat vyšší klinickou účinnost, a to vzhledem k možným synergickým účinkům dvou odlišných inhibitorů angiogeneze spojených oblastí Fc nebo flexibilním polypeptidovým linkerem.
Přípravky podle vynálezu mohou být do organizmu živočichů .aplikovány jakýmkoliv vhodným způsobem, přímo (například lokálně injekcí, implantátem nebo místní aplikací na postiženou tkáň) nebo systemicky (například parenterálně nebo orálně). Je-li přípravek aplikován parenterálně, například intravenózně, subkutánně, do oka, intraperitoneálně, intramuskulárně, na tkáň tváře, rektálně, vaginálně, intraorbitálně, intracerebrálně, intrakraniálně, intraspinálně, intravetrikulárně, intrathekálně, intracisternálně, intrakapsulárně, intranazálně nebo prostřednictvím aerosolu, pak ve výhodném provedení část tohoto přípravku zahrnuje vodnou suspenzi nebo roztok nebo suspenzi nebo roztok v jiné fyziologicky přijatelné kapalině. Použitý nosič nebo vehikulum jsou tudíž fyziologicky přijatelné, takže s výjimkou umožnění aplikace daného přípravku do organizmu pa28
cienta, tyto složky žádným nežádoucím způsobem neovlivňuji rovnováhu elektrolytů a/nebo objem v organizmu pacienta. Kapalné médium pro použitou sloučeninu může tudíž například zahrnovat fyziologický roztok (například 9,85% vodný roztok NaCl, 0,15 M, pH 7,0 až 7,4).
Ve výhodném provedení je na jednu aplikaci použito množství imunofúzinu v intervalu 50 ng/m2 až 1 g/m2, výhodněji pak 5 pg/m2 až 200 mg/m2 a nej výhodněji 0,1 mg/m2 až 50 mg/m2. Ve výhodném provedení je na jednu aplikaci použito množství nukleové kyseliny kódující imunofúzin v intervalu 1 pg/m2 až 10 mg/m2, výhodněji pak 20 pg/m2 až 10 mg/m2 a nejvýhodněji 400 pg/m2 až 4 mg/m2. Je zřejmé, že optimální způsoby aplikace a dávkování mohou být stanoveny na základě výsledků standardních experimentů v současnosti známých.
Příklady provedení vynálezu ' Vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které ovšem nelimitují rozsah vynálezu.
Příklad 1
Exprese huFc-huEndostatin
Lidský endostatin byl exprimován ve formě fúzního proteinu lidský Fc-lidský endostatin postupem popsaným v publikaci Lo a další, Protein Engineering, 11:495 až 500, 1998. Symbol Fc označuje Fc fragment lidského imunoglobulinu gama (sekvence DNA je uvedena jako SEK. ID. Č.: 1; aminokyselinová sekvence pak jako SEK. ID. Č.: 2). cDNA kódující endostatin (SEK. ID. Č.: 3; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 4) byla polymerázovou řetězcovou reakcí (PCR) upravena tak, aby mohla být exprimována jako fúzní protein Fc-Endo. Použitými přímými primery byl buď
9
primer 5'-CCCCGGGTAAACACAGCCACCGCGACTTCC (SEK. ID. Č.: 5; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 6) nebo primer 5'-CAAGCTTCACAGCCACCGCGACTTCC (SEK. ID. Č.: 7; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 8), kde sekvenci kódující N-konec endostatinu předcházely sekvence rozpoznávané restrikční endonukleázou Xmal, respektive Hindlll. Primer obsahující místo Xmal upravoval cDNA pro endostatin tak, aby mohla být zaligována do místa Xmal na konci domény CH3 v oblasti IgGFc. Primer obsahující místo HindlII upravoval cDNA pro endostatin tak, aby mohla být zaligována do místa HindlII ve vektoru pdCs-Fc(D4K) . Tento vektor obsahuje sekvenci Asp4-Lys rozpoznávanou enterokinázou (LaVallie a další, J. Biol. Chem., 268:23311 až 23317, 1993). Použitým reverzním primerem byl primer 5'CCTCGAGCTACTTGGAGGCAGTCATG (SEK. ID. Č.: 9), který byl navržen tak, aby okamžitě za C-konec endostatinu zavedl kodon pro ukončení translace (antikodon CTA) následovaný restrikčnim místem Xhol. Produkty amplifikované PCR byly klonovány a osekvenovány a fragment ohraničený restrikčními místy Xmal-Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-Fc štěpeného stejnou dvojicí enzymů. Obdobně byl fragment ohraničený restrikčními místy HindlII/Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-huFc(D4K) štěpeného stejnou dvojicí enzymů. Stabilní klony exprimující Fc-endo nebo Fc (D4K)-endostatin byly získány elektroporací buněk NS/0 a následnou selekcí v kultivačním médiu obsahujícím 100 nM methotrexát. Exprese proteinů byla testována metodou ELISA využívající protilátky proti lidskému Fc (Příklad 3) a potvrzena SDS-PAGE, kde byl pozorován proteinový produkt o velikosti přibližně 52 kDa. Klony produkující největší množství proteinu byly subklonovány limitním ředěním.
Příklad 2
• · 9 ·* ·
9· ·· • · · •999 ···
Kultivace buněk a transfekce
Transientní transfekce byly provedeny tak, že příslušný plazmid byl do lidských ledvinných buněk 293 zaveden koprecipitaci plazmidové DNA s fosforečnanem vápenatým (Sambrook a další, Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2. vydání, Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory, 1989) nebo lipofekcí s využitím Lipofectaminu Plus (Life Technologies, Gaithesburg, MD) postupem doporučeným výrobcem.
Stabilně transfekované klony byly připraveny elektroporací plazmidové DNA do buněk myšího myelomu NS/0. Buňky NS/0 byly kultivovány v Eaglově médiu modifikovaném podle Dulbecca doplněném 10% fetálním telecím sérem. Přibližně 5 x 105 buněk bylo jednou promyto PBS a rozsuspendováno v 0,5 ml PBS. S takto připravenými buňkami bylo následně v elektroporačni kyvetě Gene Pulser (vzdálenost elektrod 0,4 cm, BioRad, Hercules CA) po dobu 10 minut při 0°C inkubováno deset mikrogramů linearizované plazmidové DNA. Elektroporace byla provedena elektroporátorem Gene Pulser (BioRad, Hercules, CA) s nastaveními 0,25V a 500 pF. Buňky byly ponechány 10 minut na ledu a poté rozsuspendovány v kultivačním médiu a vysety na 96-ti jamkové destičky. Stabilně transfekované klony byly selektovány kultivací v médiu obsahujícím 100 nM methotrexát (MTX), který byl do média přidán dva dny po transfekcí. Selekční médium bylo měněno každé tři dny a klony rezistentní vůči methotrexátu se začaly objevovat za 2 až 3 týdny. Klony exprimující požadovaný protein byly identifikovány metodou ELISA s využitím protilátek proti Fc. Klony produkující velká množství rekombinantnich proteinů byly izolovány a namnoženy v kultivačním médiu obsahujícím 100 nM MTX.
Příklad 3
ELISA
Koncentrace proteinových produktů v supernatantech po kultivaci klonů rezistentních vůči MTX a v jiných testovaných vzorcích byly stanovovány třemi odlišnými metodami ELISA. Obsah proteinů zahrnujících lidský Fc byl stanovován metodou ELISA využívající protilátky proti lidskému Fc (huFc). Obsah proteinů zahrnujících myší Fc a psí Fc byl stanovován metodou ELISA využívající protilátky proti myšímu Fc (muFc), respektive psímu Fc (caFc). Postup ELISA využívající protilátky proti lidskému Fc je detailněji popsán v dalším textu.
A. Potahování destiček
96-ti jamkové destičky (Nunc-Immuno plate MaxiSorp™, Nalge Nunc International, Rochester, NY) byly potaženy AffiniPure Goat anti-Human IgG (H4-L) (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) v koncentraci 5 pg/ml v PBS v objemu 100 μΐ/jamka. Potažené destičky byly zakryty a inkubovány při 4°C přes noc. Následně byly destičky 4-krát promyty 0,05% Tweenem v PBS a blokovány roztokem 1% BSA/1% kozí sérum v PBS v objemu 200 μΐ/jamka. Blokování probíhalo 2 hodiny při 37°C, destičky byly následně 4-krát promyty 0,05% Tweenem v PBS a vysušeny poklepem na suché papírové ručníky.
B. Inkubace s testovaným vzorkem a sekundární protilátkou
Testované vzorky byly na vhodnou koncentraci zředěny vzorkovým pufrem obsahujícím 1% BSA/1% kozí sérum/0,05% Tween v PBS. S využitím chimérické protilátky (s lidským Fc) o známé koncentraci byla vytvořena standardní křivka. Standardní křivka byla vytvořena tak, že byla připravena
• 4 · · 9 ···· 44 444 ··· ředěni standardu ve vzorkovém pufru v intervalu 125 ng/ml až 3,9 ng/ml. Zředěné vzorky a standardy byly naneseny na destičky v objemu 100 μΐ/jamka a destičky byly následně inkubovány po dobu 2 hodináři 37 °C. Po inkubaci byly destičky 8-krát promyty 0,05% Tweenem v PBS. Následně bylo do každé jamky přidáno 100 μΐ sekundární protilátky proti lidskému IgG konjugované s křenovou peroxidázou (HRP) (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) v ředění přibližně 1:120000 ve vzorkovém pufru. Přesné ředění sekundární protilátky musí být stanoveno pro každou šarži protilátky proti lidskému IgG konjugované s HRP. Po dvouhodinové inkubaci při 37°C byly destičky 8-krát promyty 0,05% Tweenem v PBS.
C. Barvení
Roztok substrátu byl připraven rozpuštěním 30 mg (1 tableta) o-fenylendiamin dihydrochloridu (OPD) v 15 ml. pufru o složení 0,025M kyselina citrónová/0,05 M Na2HPC>4, pH 5, s čerstvě přidaným 0,03% H2O2. Do každé jamky na destičce bylo přidáno 100 μΐ tohoto substrátu. Barevná reakce probíhala v temnu 30 minut při pokojové teplotě. Trvání barevné reakce může být měněno v závislosti na variabilitě v potažení destiček, variabilitě sekundárních protilátek atp. Barevná reakce byla ukončena přídavkem 4N H2SO4 v objemu 100 μΐ/jamka. Absorbance byla detekována na čtečce destiček s nastavením odečítajícím od hodnot naměřených při vlnové délce 490 nm pozadí při vlnové délce 650 nm.
Stanoveni ELISA využívající protilátky proti muFc bylo podobné pouze s tou výjimkou, že jako primární protilátka byla použita AffiniPure Goat anti-murine IgG (H+L) (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) v koncentraci 5 μς/ml v PBS v objemu 100 μΐ/jamka; a jako sekundární protilátka, použitá v ředění 1 ku 5000, pak protilátka proti ♦ · · ♦ · · · • · · • · ♦ * • · · ·« ··· myšímu IgG (Fcy) konjugovaná s křenovou peroxidázou (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). Obdobně při stanovení ELISA využívající protilátky proti caFc byly destičky potaženy AffiniPure rabbit anti-dog IgG, specifické vůči Fc (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) v koncentraci 5 pg/ml v PBS v objemu 100 μΐ/jamka; a jako sekundární protilátka, použitá v ředění 1 ku 5000, pak protilátka proti psímu IgG (specifická vůči Fc) konjugovaná s křenovou peroxidázou (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA).
Příklad 4
Exprese huFc-huAngiostatin
Lidský angiostatin (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 10; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 11) byl exprimován ve formě fúzního proteinu lidský Fclidský angiostatin (huFc-huAngio) způsobem v podstatě identickým postupu uvedenému v Příkladu 1. cDNA kódující angiostatin (SEK. ID. Č.: 3) byla metodou PCR upravena tak, aby mohla být exprimována ve vektorech pdCs-huFc nebo pdCshuFc(D4K) . Použitými přímými primery byl buď primer 5'CCCCGGGTAAGAAAGTGTATCTCTCAGAG (SEK. ID. Č.: 12; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 13) nebo primer 5ZCCCCAAGCTTAAAGTGTATCTCTCAGAG (SEK. ID. Č.: 14; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 15), kde sekvenci kódující N-konec angiostatinu předcházely sekvence rozpoznávané restrikční endonukleázou Xmal, respektive HindlII. Použitým reverzním primerem byl primer 5'CCCCTCGAGCTACGCTTCTGTTCCTGAGCA (SEK. ID. Č.: 16), který byl navržen tak, aby okamžitě za C-konec angiostatinu zavedl kodon pro ukončení translace (antikodon CTA) následovaný restrikčním místem Xhol. Produkty amplifikované PCR byly klonovány, a osekvenovány a fragment ohraničený restrikčními místy Xmal-Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-Fc štěpeného stejnou dvojicí enzymů. Obdobně byl fragment ohraničený restrikčními místy HindlII/Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-huFc(D4K) . Stabilní klony NS/0 exprimující huFc-huAngio nebo huFc (D4K)-huAngio byly selektovány a exprese testována postupy popsanými v příkladech 2 a 3.
Příklad 5
Exprese muFc-muEndostatin
Myší endostaťin (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 17; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 18) a myší Fc (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 19; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 20) byly exprimovány ve formě fúzního proteinu myší Fc-myší endostatin (muFc-muEndo) způsobem v podstatě identickým postupu uvedeném v Příkladu 1. cDNA kódující endostatin (SEK. ID. Č.: 4) byla metodou PCR upravena tak, aby mohla být exprimována ve vektoru pdCs-muFc(D4K) . Použitým přímým primerembyl primer 5'-CCCCAAGCTTCATACTCATCAGGACTTTC (SEK. ID. Č.: 21; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 22), kde sekvenci kódující N-konec endostatinu předcházela sekvence rozpoznávaná restrikční endonukleázou HindlII. Použitým reverzním primerem byl primer 5'CCCCTCGAGCTATTTGGAGAAAGAGGTC (SEK. ID. Č.: 23), který byl navržen tak, aby okamžitě za C-konec endostatinu zavedl kodon pro ukončení translace (antikodon CTA) následovaný restrikčním místem Xhol. Produkt amplifikovaný PCR byl osekvenován a fragment kódující endostatin a ohraničený restrikčními místy HindlII/Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-muFc(D4K) . Stabilní klony NS/0 exprimující muFc(D4K)muEndo byly selektovány a exprese testována (ELISA s využitím protilátek proti muFc) postupy popsanými v příkladech 2 a 3.
Přiklad 6
Exprese muFc-muAngiostatin
Myši angiostatin (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 24; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č. : 25) byl exprimován ve- formě fúzniho proteinu myší Fc-myší angiostatin (muFc-muAngio) způsobem v podstatě identickým postupu uvedeném v Příkladu 1. cDNA kódující angiostatin (SEK. ID. Č.: 6) byla metodou PCR upravena tak, aby mohla být exprimována ve vektoru pdCs-Fc (D4K) . Použitým přímým primerem byl primer 5'CCCCAAGCTTGTGTATCTGTCAGAATGTAAGCCCTCCTGTCTCTGAGCA (SEK. ID. Č.: 26; kódované aminokyseliny uvedeny jako SEK. ID. Č.: 27), kde sekvenci kódující N-konec angiostatinu předcházela sekvence rozpoznávaná restrikční endonukleázou HindlII. Použitým reverzním primerem byl primer 5'CCCCTCGAGCTACCCTCCTGTCTCTGAGCA (SEK. ID. Č.: 28), který byl navržen tak, aby okamžitě za C-konec angiostatinu zavedl kodon pro ukončení translace (antikodon CTA) následovaný restrikčním místem Xhol (CTCGAG). Produkt amplífikovaný PCR byl osekvenován a fragment kódující angiostatin a ohraničený restrikčními místy HindlII/Xhol byl zaligován do vektoru pdCs-muFc(D4K) . Stabilní klony NS/0 exprimující muFc(D4K)muAngio byly selektovány a exprese testována (ELISA s využitím protilátek proti muFc) postupy popsanými v příkladech 2 a 3.
Příklad 7
Exprese psího Fc (caFc)
K izolaci mRNA byly využity monocyty z periferní krve psů. Po syntéze prvního řetězce cDNA s využitím reverzní transkriptázy a oligo(dT) byl psí Fc (Kazuhiko a další, JN 19920408.94-A1, 1992) amplifikován přístupem PCR. Použitým • 9 přímým primerem byl primer 5'-CCTTAAGCGAAAATGGAAGAGTTCCTCGC (SEK. ID. Č.: 29; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 30), kde sekvenci kódující pantovou oblast psího Fc předcházela sekvence rozpoznávaná restrikční endonukleázou AflII. Použitým reverzním primerem byl primer 5'CCTCGAGTCATTTACCCGGGGAATGGGAGAGGGATTTCTG (SEK. ID. Č. : 31), který za kodon pro ukončení translace (antikodon TCA) v sekvenci psího Fc zavádí restrikční místo Xhol. Tento reverzní primer rovněž do sekvence zavedl tichou mutaci, kterou bylo vzniklo restrikční místo Xmal usnadňující konstrukci vektoru pdCs-caFc (D4K) tím, že bude využito linkeruadaptoru a ligace konstruktů DNA kódujících psí endostatin a angiostatin. Expresívní vektor pdCs-caFc byl zkonstruován způsobem podobných postupu při konstrukci vektoru pdCs-huFc (Lo a další, Protein Engineering, 11:495, 1998). Fragment kódující psi Fc a ohraničený restrikčními místy AflII-XhoI byl ligován s fragmentem Xbal-AflII kódujícím signální peptid pro lehký řetězec a vektorem pdCs, štěpeným restrikčními endonukleázami Xbal-Xhol. Takto připravený expresívní vektor pdCs-caFc byl následně využit k transfekci buněk 293. Přibližně tři dny po transfekci byl supernatant purifikován chromatografií na Sepharóze s navázaných proteinem A. Exprese psího Fc (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 32; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 33) byla potvrzena SDS-PAGE a následným Western blotem využívajícím králičí protilátku proti psímu IgG konjugovanou s křenovou peroxidázou (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA).
Příklad 8
Exprese caFc-caEndostatin
K sekvenci kódující psí endostatin (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 34; aminokyselinová sekvence uvedena jako
SEK. ID. Č.: 35) byla metodou PCR přidána místa HindlII/XhoI tak, aby získaný fragment mohl být exprimován ve formě fúzního proteinu s Fc (postup je v podstatě totožný s postupem popsaným v příkladu 5). Na 3' konci byl metodou PCR za kodon kódující C-koncový lysin zaveden stop kodon a restrikční místo Notl. Na 5' konci již bylo přítomno restrikční místo DralII využitelné pro další klonování. Chemickou syntézou byl připraven oligonukleotidový duplex ohraničený kohézními konci HindlII a DralII a tento duplex byl použit k ligaci s restrikčním fragmentem DralII/XhoI kódujícím zbylou část cDNA psího endostatinu. Použitý duplex má následující sekvenci:
HindlII
5'-AGCTTCACACCCACCAGGACTTCCAGCCGGTGCTGCACCTG (SEK. ID. Č. : 36)
AGTGTGGGTGGTCCTGAAGGTCGGCCACGACGTG-5' (SEK, ID. Č.: 38)
DralII
První CAC triplet kóduje N-koncový histidinový zbytek psího endostatinu. Fragment HindlII/Xhol, kódující nezkrácený psí endostatin, může být tudíž zaligován do expresívního vektoru pdCs-caFc štěpeného restrikčními enzymy HindlII/XhoI (viz. Příklad 7). Stabilní klony NS/0 exprimující caFc-caEndo byly selektovány a exprese testována (ELISA s využitím protilátek proti caFc) postupy popsanými v příkladech 2 a 3. Proteinový produkt byl analyzován SDS-PAGE a exprese byla potvrzena Western blotem.
Příklad 9
Exprese caFc-caAngiostatin cDNA kódující nezkrácený psí angiostatin (sekvence DNA uvedena jako SEK. ID. Č.: 39; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 40) byla pro expresi ve formě fúzní ho proteinu s caFc upravena způsobem v podstatě identickým s postupy uvedenými v předchozích příkladech. Stručně vzato, na 3 konci byl metodou PCR za kodon kódující C-koncový lysin zaveden stop kodon a restrikční místo Notl. Místem Notl bylo nahrazeno místo Xhol, protože toto místo (Xhol) je rovněž přítomno uvnitř sekvence cDNA kódující psí angiostatin. Na 5' konci bylo, ve stejném čtecím rámci, před sekvenci kódující N-konec angiostatinu, zavedeno restrikční místo HindlII. Fragment HindiII/NotI, kódující nezkrácený psí angiostatin, byl následně zaligován do expresívního vektoru pdCs-caFc štěpeného restrikčními enzymy HindlII/Notl (zde bylo místo Notl zavedeno v místě Xhol ligací linkeru). Stabilní klony NS/0 exprimující caFc-caAngio byly selektovány a exprese testována (ELISA s využitím protilátek proti caFc) postupy popsanými v příkladech 2 a 3. Proteinový produkt byl analyzován SDS-PAGE a exprese byla potvrzena Western blotem.
Příklad 10
Exprese muFc-muKl z muAngio
Angiostatin zahrnuje první čtyři z pěti domén kringle přítomných v plazminogenu. Za účelem stanovení, zda-li je za pozorovanou anti-angiogenní aktivitu angiostatinu zodpovědná jakákoliv z domén kringle nebo několik domén kringle, je možné exprimovat každou doménu kringle samostatně nebo kombinace těchto domén. Aby bylo možné prokázat vhodnost oblasti Fc jako fúzního partnera, byla nejprve následujícím způsobem exprimována první doména kringle myšího angiostatinu (Kl). První doména kringle myšího angiostatinu je ukončena aminokyselinovým zbytkem Glu-87 (SEK. ID. Č.: 25). V sekvenci cDNA je na této pozici vhodné restrikční místo Nsil; tedy, po rozštěpeni cDNA restrikční endonukleázou Nsil byl čtyř nukleotidový 3'-přesah odstraněn polymerázou
T4, čímž byl vytvořen tupý konec. Ligací palindromového linkeru TGACTCGAGTCA (SEK. ID. Č.: 41) byl po směru transkripce za triplet GAA kódující Glu-87 vložen stop kodon (TGA) následovaný restrikčním místem Xhol. Fragment HindlII/XhoI kódující tento zkrácený angiostatin, tj. pouze první doménu kringle, byl následně zaligován do expresívního vektoru pdCs-muFc(D4K) . Analýza exprese prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
Příklad 11
Exprese muFc-vnitřní K1 z muAngio
Každá doména kringle obsahuje několik smyček, a to včetně vnější a vnitřní smyčky. V první doméně kringle myšího angiostatinu je vnitřní smyčka definována aminokyselinovými zbytky Cys55 a Cys79, které spoluvytvářejí disulfidovou vazbu v základně smyčky. Aminokyselinový zbytek Cys67 ve vnitřní smyčce vytváří další disulfidovou vazbu s cysteinovým zbytkem z vnější smyčky, čímž vzniká struktura kringle. Za účelem zjištění, zda-li vnitřní smyčka vykazuje antiangiogenní aktivitu, byl následujícím postupem exprimován fúzní protein muFc-vnitřní K1 (kringle 1). Metodou PCR, využívající jako templát fragment DNA kódující první doménu kringle a mutagenní primer o sekvenci 5'GGGCCTTGGAGCTACACTACA (SEK. ID. Č.: 42; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 43), byl triplet TGC kódující Cys65 zaměněn za triplet AGC kódující serin. Tato mutageneze zajišťuje, že Cys67 nebude vytvářet disulfidickou vazbu v případě, když bude vnitřní smyčka domény kringle 1 exprimována bez smyčky vnější. K zavedení restrikčního místa HindlII (ve stejném čtecím rámci) okamžitě na 5' konec kodonu pro Ser45 (AGT) . byl použit přímý primer o sek věnci 5'-GCGGATCCAAGCTTAGTACACATCCCAATGAGGG (SEK. ID. Č.: 44; aminokyselinová sekvence uvedena jako SEK. ID. Č.: 45) . Okamžitě proti směru transkripce před místo HindlII bylo zavedeno místo BamHI. Toto místo BamHI je užitečné pro ligaci do místa BamHI na konci flexibilního linkeru Ser-Gly (viz. Příklad 12). Fragment DNA ohraničený restrikčními . místy HindlII/Xhol a v myším angiostatínu kódující aminokyselinové zbytky Ser43 až Glu87 byl zaligován do expresívního vektoru pdCs-muFc(D4K) . Analýza exprese muFc-vnitřní K1 prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
Příklad 12
Exprese muFc-muEndo-GlySer linker-vnitřní K1 z muAngio Hybridní molekula muFc-muEndo-vnitřní K1 zahrnuje část muFc-muEndo připojenou k vnitřní smyčce první domény kringle myšího angiostatínu prostřednictvím polypeptidového linkeru obsahujícího glycinové a serinové zbytky. Tento konstrukt DNA byl sestaven následujícím způsobem.
Na 3' konci cDNA kódující myší endostatin je restrikční místo BspHI. Flexibilní linker glycinových a serinových aminokyselinových zbytků byl na C-konec myšího endostatinu připojen tak, že fragment HindlII/BspHI o velikosti 540-bp kódující endostatin byl ligován s dvojvláknovou strukturou (duplexem) vytvořenou z oligonukleotidů popsaných sekvencemi SEK. ID. Č.: 46 a SEK. ID. Č.: 48. Aminokyselinová sekvence kódovaná nukleotidovou sekvencí SEK. ID. Č.: 46 je uvedena jako sekvence SEK. ID. Č.: 47.
Fragment HindlII/BamHI kódující myší endostatin a linker Gly-Ser byl subklonován do standardního klonovacího vektoru. Místo BamHI bylo následně využito k zaklonování fragmentu BamHI/XhoI kódujícího vnitřní K1 z Příkladu 11. Takto
připravený fragment HindlII/Xhol kódující muEndoGlySer linker-vnitřní K1 byl zaligován do expresívního vektoru pdCs-muFc(D4K) . Analýza exprese muFc-muEndoGlySer linker-vnitřní K1 prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
Příklad 13
Exprese muFc-muEndo-GlySer linker-Kl z muAngio
Hybridní molekula muFc-muEndo-Kl zahrnuje část muFcmuEndo připojenou k první doméně kringle myšího angiostatinu prostřednictvím polypeptidového linkeru obsahujícího glycinové a serinové zbytky. Tento konstrukt DNA byl sestaven následujícím způsobem.
K ligaci BamHI konce fragmentu ohraničeného restrikčními místy HindlII/BamHI kódujícího muEndo-GlySer linker (Příklad 12) k fragmentu HindlII/Xhol kódujícímu doménu kringlel myšího angiostatinu (Příklad 10) byl využit následující adaptor:
BamHI
5' GATCCTCAGGCC | (SEK. (SEK. | ID. Č. : 4 9) ID. Č.: 50) | ||
GAGTCCGGTCGA HindlII | ||||
Tento | adaptor obsahuje | kohezní | konec HindlII | ', který ale |
po ligaci | restrikční místo | HindlII | zruší. Takto | připravený |
fragment HindlII/Xhol kódující muEndo-GlySer linker-Kl byl zaligován do expresívního vektoru pdCs-muFc(D4K) . Analýza exprese muFc-muEndo-GlySer linker-Kl prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila • ·· · vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
. Příklad 14
Exprese muFc-muEndo-GlySer linker-muAngio
Hybridní molekula muFc-muEndo-GlySer linker-muAngio zahrnuje část muFc-muEndo připojenou k myšímu angiostatinu prostřednictvím polypeptidového linkeru obsahujícího glycinové a serinové zbytky. Tento konstrukt DNA byl sestaven následujícím způsobem. Prostřednictvím adaptoru popsaného v Příkladu 13 byl BamHI konec fragmentu ohraničeného restrikčnimi místy HindlII/BamHI kódujícího muEndoGlySer linker (Příklad 12) připojen k fragmentu HindlII/XhoI kódujícímu myší angiostatin. Takto připravený fragment HindlII/Xhol kódující muFc-muEndo-GlySer linkermuAngio byl zaligován do expresivního vektoru pdCsmuFc(D4K). Analýza exprese muFc-muEndo-GlySer linker-muAngio prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
Příklad 15
Exprese huAngio-huFc-huEndo
Hybridní molekula huAngio-huFc-huEndo obsahuje lidský angiostatin připojený peptidovou vazbou k huFc-huEndo. Tento konstrukt DNA byl sestaven následujícím způsobem. Nejprve byl metodou PCR připraven fragment HindlII/Xhol kódující lidský angiostatin bez stop kodonu. Za kodonem pro poslední aminokyselinový zbytek angiostatinu okamžitě následovala sekvence CTCGAG rozpoznávaná restrikčním enzymem Xhol. S využitím adaptoru Af111/HindIII' byl 5' konec (s místem HindlII) tohoto fragmentu ligován s fragmentem Xbal/AflII kódujícímu signální peptid lehkého řetězce (Lo a další,
• ·
Protein Engineering, 11:495, 1998). Sekvence použitého adaptoru Af111/HindIII' je následující:
AflII
5' TTAAGCGGCC (SEK. ID. Č.: 51)
CGCGGGTCGA (SEK. ID. Č.: 52)
HindlII'
Tento adaptor obsahuje kohezní konec HindlII', který ale po ligaci restrikční místo HindlII zruší. Místo Xhol na 3' konci bylo prostřednictvím adaptoru Xhol'/AflII ligováno do místa AflII z fragmentu AflII/XhoI kódujícího huFc-huEndo. Sekvence použitého adaptoru XhoI'/AflII je následující:
Xhol'
5'TCGACTCCGGC (SEK. ID. Č.: 53)
GAGGCCGAATT (SEK. ID. Č. : 54)
AflII
Tento adaptor obsahuje kohezní konec Xhol', který ale po ligaci restrikční místo Xhol zruší. Takto připravený fragment Xbal/Xhol kódující signální peptid-lidský angiostatinhuFc-lidský endostatin byl zaligován do expresívního vektoru pdCs. Analýza exprese rekombinantního proteinu prováděná metodou ELISA s využitím protilátek proti muFc a SDS-PAGE potvrdila vysokou hladinu exprese jak u tranzientně, tak u stabilně transfekovaných buněk.
Příklad 16
Farmakokinětiká
V jedné sérii farmakokinetických experimentů bylo myším C57/BL6 s implantovanými nádory Lewisova karcinomu plic o objemu 100 až 200 mm3 do ocasní žíly injikováno 720 pg huFc44
huAngio na jednu myš. Objem nádorů a dávka huFc-huAngio byly zvoleny tak, aby napodobovaly protokol popsaný v publikaci O'Reilly a další, Nátuře Medicíně, 2:689, 1996. 1/2, 1, 2, 4, 8, 24 a 48 hodin po injekci byly myším retrorbitálně odebírány vzorky krve. Tyto vzorky byly analyzovány metodou ELISA s využitím protilátek proti huFc a Western blotem. Bylo zjištěno, že huFc-huAngio má v organizmu myši biologický poločas přibližně 32 hodin a analýza metodou Western blot prokázala, že více než 90% huFc-huAngio zůstává v krevním oběhu v intaktní formě.
Tyto farmakokinetické studie byly rovněž opakovány s využitím myší Swiss bez nádorů a při použití dávek 200 pg/myš. V tomto případě byl biologický poločas huFc-huAngio v organizmu myší přibližně 33 hodin.
Předkládaný vynález může být, bez odchýlení se od své podstaty nebo základních charakteristik, aplikován i jinými než popsanými způsoby. Příklady provedení vynálezu uvedené v předchozích textu by tudíž měly být považovány za toliko ilustrativní a ne jakýmkoliv způsobem limitující rozsah vynálezu. Rozsah vynálezu je tudíž definován především připojenými patentovými nároky a ne uvedeným popisem a veškeré změny, které jsou ekvivalentní údajům popsaným patentovými nároky spadají rovněž do rozsahu vynálezu.
SEZNAM SEKVENCÍ <110>
<120>
Lo, Kin-Ming
Li, Yue
Gillies, Stephen D
Exprese a export inhibitorů angiogeneze ve formě imunofúzinů
<130> | LEX-006PC |
<140> <141> | |
<150> <151> | US 60/09788 1998-08-25 |
<160> | 54 |
<170> | Patentln Ver. 2.0 |
<210> 1 <211> 696 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (.1) . . (696) <223> Fragment Fc lidského imunoglobulinu typu gama <400> 1
gag Glu 1 | ccc aaa tet | tet Ser 5 | gac Asp | aaa Lys | act Thr | cac aca | tgc Cys | cca ccg | tgč Cys | cca Pro 15 | gca Ala · | 48 | ||||
Pro Lys | Ser | His | Thr 10 | Pro | Pro | |||||||||||
cct | gaa | ctc | ctg | ggg | gga | ccg | tea | gtc | ttc | ctc | ttc | ccc | cca | aaa | ccc | 96 |
Pro | Glu | Leu | Leu | Gly | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Leu | Phe | Pro | Pro | Lys | Pro | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
i aag | gac | acc | ctc | atg | atc | tec | cgg | acc | cct | gag | gtc | aca | tgc | gtg | gtg | 144 |
Lys | Asp | Thr | Leu | Met | Ile | Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | Val | Thr | Cys | Val | Val | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
gtg | gac | gtg | age | cac | gaa | gac | cct | gag | gtc | aag | ttc | aac | tgg | tac | gtg | 192 |
Val | Asp | Val | Ser | His | Glu | Asp | Pro | Glu | Val | Lys | Phe | Asn | Trp | Tyr | Val | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
gac | ggc | gtg | gag | gtg | cat | aat | gcc | aag | aca | aag | ccg | cgg | gag | gag | cag | 240 |
Asp | Gly | Val | Glu | Val | His | Asn | Ala | Lys | Thr | Lys | Pro | Arg | Glu | Glu | Gin | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
tac | aac | age | a cg | tac | cgt | gtg | gtc | age | gtc | ctc | acc | gtc | ctg | cac | cag | 288 |
Tyr | Asn | Šer | Thr | Tyr | Arg | Val | Val | Ser | Val | Leu | Thr | Val | Leu | His | Gin | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
gac | tgg | ctg | aat | ggc | aag | gag | tac | aag | tgc | aag | gtc | tcc | aac | aaa | gcc | 336 |
Asp | Trp | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | Lys | Cys | Lys | Val | Ser | Asn | Lys | Ala | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
ctc | cca | gcc | ccc | atc | gag | aaa | acc | atc | tcc | aaa | gcc | aaa | ggg | cag | ccc | 384 |
• · ·« » » * · *
Leu | Pro | Ala 115 | Pro | Ile | Glu Lys | Thr 120 | Ile Ser Lys Ala | Lys 125 | Gly | Gin | Pro | |||||
ega | gaa | cca | cag | gtg | tac | acc | ctg | ccc | cca | tea | cgg | gag | gag | atg | acc | 432· |
Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro | Pro | Ser | Arg | Glu | Glu | Met | Thr | |
130 | 135. | 140 | ||||||||||||||
aag | aac | Cag | gtc | ágc | ctg | acc | tgc | ctg | gtc | aaa | ggc | ttc | tat | ccc | age | 480 |
Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Val | Lys | Gly | Phe | Tyr | Pro | Ser ' | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
gac | atc | gcc | gtg | gag | tgg | gag | age | aat | ggg | cag | ccg | gag | aac | aac | tac | 528 |
Asp | Ile | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn | Gly | Gin | Pro | Glu | Asn | Asn | Tyr | |
165 | .170 | 175 | ||||||||||||||
aag | acc | a cg | cct | ccc. | gtg | ctg | gac | tcc | gac | ggc | tcc | ttc | ttc | ctc | tat | 57 6 |
Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Val | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Phe | Phe | Leu | Tyr | |
180 | 185 | 190 | ||||||||||||||
age | aag | ctc | acc | gtg | gac | aag | age | agg | tgg | cag | cag | ggg | aac | gtc | ttc | 624 |
Ser | Lys | Leu | Thr | Val | Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Gin | Gly | Asn | Val | Phe | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
tea | tgc | tec | gtg | atg | cat | gág | get | ctg | cac | aac | cac | tac | acg | cag | aag | 672 |
Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr | Thr | Gin | Lys | |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
age | ctc | tec | ctg | tcc | ccg | ggt | aaa | 696 | ||||||||
Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | |||||||||
225 | 230 |
<210> 2 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2
Glu 1 | Pro | Lys | Ser | Ser 5 | Asp | Lys | Thr | His | Thr 10 | Cys | Pro | Pro | Cys | Pro 15 | Ala |
Pro | Glu | Leu | Leu 20 | Gly | Gly | Pro | Ser | Val 25 | Phe | Leu | Phe | Pro | Pro 30 | Lys | Pro |
Lys | Asp | Thr 35 | Leu | Met | Ile | Ser | Arg 40 | Thr | Pro | Glu | Val | Thr 45 | Cys | Val | Val |
Val | Asp. Val 50 | Ser | His· | Glu | Asp 55 | Pro | Glu | Val | Lys | Phe 60 | Asn | Trp | Tyr | Val | |
Asp 65 | Gly | Val | Glu | Val | His 70 | Asn | Ala | Lys | Thr | Lys 75 | Pro | Arg | Glu | Glu | Gin 80 |
Tyr | Asn | Ser | Thr | Tyr 85 | Arg | Val | Val· | Ser | Val 90 | Leu | Thr | Val | Leu | His 95 | Gin |
Asp | Trp | Leu | Asn 100 | Gly | Lys | Glu | Tyr | Lys 105 | Cys | Lys | Val | Ser | Asn 110 | Lys | Ala |
• ·
Leu | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu | Lys | Thr | Ile | Ser | • · | • · · · J.ys jGly ÍGIr | «· · řr<? | |
115 | 120 | • ♦ ·· · | • · • · | 125, J » *« · | • · | ||||||||
Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro | Pro | Šer | Arg | Glu Glu Met | Thr |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Val | Lys | Gly | Phe Tyr Pro | Ser |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
Asp | Ile | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn | Gly | Gin | Pro | Glu Asn Asn | Tyr |
165 | 170 | 175 | |||||||||||
Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Val | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Phe Phe Leu | Tyr |
180 | 185 | 190 | |||||||||||
Ser | Lys | Leu | Thr | Val | Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Gin | Gly Asn Val | Phe |
195 | 200 | 205 | |||||||||||
Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr Thr Gin | Lys |
210 | 215 | 220 | |||||||||||
Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | ||||||
225 | 230 |
<210> 3 <211> 549 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (1)..(549) <223> endostatin <400> 3
cac agc His Ser 1 | cac cgc His Arg | gac ttc cag ccg gtg | ctc cac | ctg gtt gcg | ctc Leu 15 | aac Asn | 48 | |||||||||
Asp 5 | Phe Gin | Pro | Val | Leu 10 | His | Leu | Val | Ala | ||||||||
agc | ccc | ctg | tca | ggč | ggc | atg | cgg | ggc | atc | cgc | ggg | gcc | gac | ttc | cag | 96 |
Ser | Pro | Leu | Ser | Gly | Gly | Met | Arg | Gly | Ile | Arg | Gly | Ala | Asp | Phe | Gin | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
tgc | ttc | cag | cag | gcg | cgg | gcc | gtg | ggg | ctg | gcg | ggc | acc | ttc | cgc | gcc | 144 |
Cys | Phe | Gin | Gin | Ala | Arg | Ala | Val | Gly | Leu | Ala | Gly | Thr | Phe | Arg | Ala | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
ttc | ctg | tcc | tcg | cgc | ctg | cag | gac | ctg | tac | agc | atc | gtg | cgc | cgt | gcc | 192 |
Phe | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | Gin | Asp | Leu | Tyr | Ser | Ile | Val | Arg | Arg | Ala | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
gac | cgc | gca | gcc | gtg | ccc | atc | gtc | aac | ctc | aag | gac | gag | ctg | ctg | ttt | 240 |
Asp | Arg | Ala | Ala | Val | Pro | Ile | Val | Asn | Leu | Lys | Asp | Glu | Leu. | Leu. | Phe | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
ccc | agc | tgg | gag | gct | ctg | ttc | tca | ggc | tet | gag | ggt | ccg | ctg | aag | ccc | 288 |
Pro | Ser | Trp | Glu | Ala | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser | Glu | Gly | Pro | Leu | Lys | Pro | |
85 | 90 | 95 |
·· ·« • · 4 4 | 4 4« | • ·* | ·· • · | • • 4 • | |||||||||||
• 4 · • · · · | • | • • | • · · • · | • • | |||||||||||
ggg | gca | cgc | atc | ttc | tcc | ttt | gac | ggc | aag | gaV*<ftc**ctg | c*ác | • · ccc | ttt | ||
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Lys | Asp Val Leu | Arg | His | Pro | ||
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
acc | tgg | ccc | cag | aag | agc | gtg | tgg | cat | ggc | tcg gac ccc | aac | ggg | cgc | 384 | |
Thr | Trp | Pro | Gin | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser Asp Pro | Asn | Gly | Arg | ||
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
agg | ctg | acc | gag | agc | tac | tgt | gag | acg | tgg | cgg acg gag | gct | ccc | tcg | 432 | |
Arg | Leu | Thr | Glu | Ser | Tyr | Cys | Glu | Thr | Trp | Arg Thr Glu | Ala | Pro | Ser | ||
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
gcc | acg | ggc | cag | gcc | tcc | tcg | ctg | ctg | .ggg | ggc agg ctc | ctg | ggg | cag | 480 | |
Ala | Thr | Gly | Gin | Ala | Ser | Ser | Leu | Leu | Gly | Gly Arg Leu | Leu | Gly | Gin | ||
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
agt | gcc | gcg | agc | tgc | cat | cac | gcc | tac | atc | gtg ctc tgc | att | gag | aac | 528 | |
* | Ser | Ala | Ala | Ser | Cys | His | His | Ala | Tyr | Ile | Val Leu Cys | Ile | Glu | Asn | |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
, | agc | ttc | atg | act | gcc | tcc | aag | 549 | |||||||
Ser | Phe | Met | Thr | Ala | Ser | Lys | |||||||||
180 |
<210> | 4 |
<211> | 183 |
<212> | PRT . |
<213> | Homo sapiens |
<400> | 4 |
1 His 1 | Ser His | Arg | Asp Phe Gin Pro Val Leu His Leu Val | Ala Leu Asn 15 | ||||||||||||
5 | 10 | |||||||||||||||
Ser | Pro | Leu | Ser | Gly | Gly | Met | Arg | Gly | Ile | Arg | Gly | Ala | Asp | Phe | Gin | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
Cys | Phe | Gin | Gin | Ala | Arg | Ala | Val | Gly | Leu | Ala | Gly | Thr | Phe | Arg | Ala | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
Phe | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | Gin | Asp | Leu | Tyr | Ser | Ile | Val | Arg | Arg | Ala | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
Asp | Arg | Ala | Ala | Val | Pro | Ile | Val | Asn | Leu | Lys | Asp | Glu | Leu | Leu | Phe | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
Pro | Ser | Trp | Glu | Ala | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser | Glu | Gly | Pro | Leu | Lys | Pro | |
I | 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Lys | Asp | Val | Leu | Arg | His | Pro | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
Thr | Trp | Pro | Gin | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser | Asp | Pro | Asn | Gly | Arg | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
Arg | Leu | Thr | Glu | Ser | Tyr | Cys | Glu | Thr | Trp | Arg | Thr | Glu | Ala | Pro | Ser | |
130 | 135 | 140 |
Ala 145 | Thr'Gly | Gin | Ala | Ser 150 | Ser | Leu | Leu Gly | Gly Arg 155 | Leu | Leu | Gly | Gin 160 |
Ser | Ala Ala | Ser | Čys 165 | His | His | Ala | Tyr Ile 170 | Val Leu | Cys | Ile | Glu 175 | Asn |
Ser | Phe Met | Thr | Ala | Ser | Lys |
180 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro lidský Fc-Endo <220>
<221> CDS <222> (3)..(29) <400> 5 cc ccg ggt aaa cac agc cac cgc gac ttc c 30
Pro Gly Lys His Ser His Arg Asp Phe ' 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 6
Pro Gly Lys His Ser His Arg Aso Phe
5 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro lidský Fc-Endo <220>
<221> CDS <222> (2) . .(25) <400> 7' c aag ctt cac agc cac cgc gac ttc c Lys Leu His Ser His Arg Asp Phe 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence
<400> 8 | |
Lys Leu His 1 | Ser His Arg Asp Phe 5 |
<210> 9 <211> 26 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Reverzní primer pro lidský FcEndo <400> 9 cctcgagcta cttggaggca gtcatg <210> 10 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (1) . . (1089) <223> angiostatin <400> 10
aaa Lys 1 | gtg tat | ctc tea Leu Ser 5 | gag tgcaag act ggg aat gga aag aac | tac Tyr 15 | aga Arg | 48 | ||||||||||
Val | Tyr | Glu Cys Lys | Thr | Gly 10 | Asn | Gly | Lys | Asn | ||||||||
ggg | acg | atg | tcc | aaa | aca | aaa | aat | ggc | atc | acc' | tgt | caa. | aaa | tgg | agt | 96 |
Gly | Thr | Met | Ser | Lys | Thr | Lys | Asn | Gly | Ile | Thr | Cys | Gin | Lys | Trp | Ser | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
tcc | act | tet | ccc | cac | aga | cct | aga | ttc | tea | cct | gct | aca | cac | ccc | tea | 144 |
Ser | Thr | Ser | Pro | His | Arg | Pro | Arg | Phe | Ser | Pro | Ala | Thr | His | Pro | Ser | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
gag | gga | ctg | gag | gag | aac | tac | tgc | agg | aat | cca | gac | aac | gat | ccg | cag | 192 |
Glu | Gly Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro Asp | Asn | Asp | Pro | Gin | |||
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
ggg | ccc | tgg | tgc | tat | act | act | gat | cca | gaa | aag | aga | tat | gac | tac | tgc | 240 |
Gly | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Glu | Lys | Arg | Tyr | Asp | Tyr | Cys | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
gac | att | ctt | gag | tgt | gaa | gag | gaa | tgt | atg | cát | tgc | agt | gga | gaa | aac | 288 |
Asp | Tle | Leu | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | His | Cys | Ser | Gly | Glu | Asn | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
tat | gac | ggc | aaa | att | tcc | aag | acc | atg | tet | gga | ctg | gaa | tgc | cag | gcc | 336 |
Tyr | Asp | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Met | Ser | Gly | Leu | Glu | Cys | Gin | Ala |
100
105
110
tgg gac tet | cag age cca | cac get | cat His | gga Gly | tac Tyr | att cct Ile Pro 125 | tec Ser | aaa Lys | ttt Phe | 384 | ||||||
Trp | Asp | Ser 115 | Gin | Ser Pro | His | Ala 120 | ||||||||||
cca | aac | aag | aac | ctg | aag | aag | aat | tac | tgt | cgt | aac | ccc | gat | agg | gag | 432 |
Pro | Asn | Lys | Asn | Leu | Lys | Lys | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Arg | Glu | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
ctg | cgg | cct | tgg | tgt | ttc | acc | acc | gac | ccc | aac | aag | ege | tgg | gaa | ctt | 480 |
Leu | Arg | Pro | Trp | Cys | Phe | Thr | Thr | Asp | Pro | Asn | Lys | Arg | Trp | Glu | Leu | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
tgc | gac | .atc | ccc | ege | tgc | aca | aca | cct | cca | cca | tet | tet | ggt | ccc | acc | 528 |
Cys | Asp | Ile | Pro | Arg | Cys | Thr | Thr | Pro | Pro | Pro | Ser | Ser | Gly | Pro | Thr | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
tac | cag | tgt | ctg | aag | gga | aca | ggt | gaa | aac | tat | ege | ggg | aat | gtg | get | 576 |
Tyr | Gin | Cys | Leu | Lys | Gly | Thr | Gly | Glu | Asn | Tyr | Arg | Gly | Asn | Val. | Ala | |
180' | 185 | 190 | ||||||||||||||
gtt | acc | gtt | tec | ggg | cac | acc | tgt | cag | cac | tgg | agt | gca- fcag | acc | cct | 624 | |
Val | Thr | Val | Ser | Gly | His | Thr | Cys | Gin | His | Trp | Ser | Ala | Gin | Thr | Pro | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
cac | aca | cat | aac | agg | aca | cca | gaa | aac | ttc | ccc | tgc | aaa | aat | ttg | gat | 672 |
His | Thr | His | Asn | Arg.Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Asp | ||
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
gaa | aac | tac | tgc | ege | aat | cct | gac | gga | aaa | agg | gcc | cca | tgg | tgc | cat | 720 |
Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly-Lys | Arg | Ala | Pro | Trp | cys | His ' | ||
225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||||
aca | acc | aac | age | caa | gtg | ,cgg | tgg | gag | tac | tgt | aag | ata | ccg | tec | tgt | 768 |
Thr | Thr | Asn | Ser | Gin | Val | Arg | Trp | Glu | Tyr | Cys | Lys | Ile | Pro | Ser | Cys | |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||||
gac | tec | tec | cca | gta | tec | acg | gaa | caa | ttg | get | ccc | aca | gca | cca | cct | 816 |
Asp | Ser | Ser | Pro | Val | Ser | Thr | Glu | Gin | Leu | Ala | Pro | Thr | Ala | Přo | Pro | |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||||
gag | cta | acc | cct | gtg | gtc | cag | gac | tgc | tac | cat | ggt | gat | gga | cag | age | 864 |
Glu | Leu | Thr | Pro | Val | Val | Gin | Asp | Cys | Tyr | His | Gly | Asp | Gly | Gin | Ser | |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
tac | ega | ggc | aca | tec | tec | acc | acc | acc | aca | gga | aag | aag | tgt | cag | tet | 912 |
Tyr | Arg | Gly | Thr | Ser | Ser | Thr | Thr | Thr | Thr | Gly | Lys | Lys | Cys | Gin | Ser | |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
tgg | tea | tet | atg | aca | cca | cac | cgg | cac | cag. | aag | acc | cca | gaa | aac | tac | 960 |
Trp | Ser | Ser | Meť | Thr | Pro | His | Arg | His | Gin | Lys | Thr | Pro | Glu | Asn | Tyr | |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
cca | aat | get | ggc | ctg | aca | atg | aac | tac | tgc | agg | aat | cca | gat | gcc | gat | 1008 |
Pro | Asn | Ala | Gly | Leu | Thr | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Ala | Asp' | |
325 | 330 | 335 | ||||||||||||||
aaa | ggc | ccc | tgg | tgt | ttt | acc | aca | gac | ccc | age | gtc | agg | tgg | gag | tac | 1056 |
1089
Lys Gly Pro Trp 340 | Cys | Phe | Thr Thr | Asp Pro Ser Val Arg Trp | Glu | Tyr | ||||||||||
345 | 350 | |||||||||||||||
tgc | aac | ctg | aaa | aaa | tgc | tea | gga | aca | gaa | gcg | ||||||
Cys | Asn | Leu | Lys | Lys | Cys | Ser | Gly | Thr | Glu | Ala | ||||||
355 | 360 | |||||||||||||||
<210> | 11 | |||||||||||||||
<211> | 343 | |||||||||||||||
<212> | PRT | |||||||||||||||
<213> | Homo sapiens | |||||||||||||||
<400> | 11 | |||||||||||||||
Lys | Val | Tyr | Leu | Ser | Glu | Cys | Lys | Thr | Gly | Asn | Gly | Lys | Asn | Tyr | Arg | |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||||
Gly | Thr | Met | Ser | Lys | Thr | Lys | Asn | Gly | Ile | Thr | Cys | Gin | Lys | Trp | Ser | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
Ser | Thr | Ser | Pro | His | Arg | Pro | Arg | Phe | Ser | Pro | Ala | Thr | His | Pro | Ser | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
Glu | Gly | Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys Arg | Asn | Pro | Asp | Asn | Asp | Pro | Gin | ||
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
Gly | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Glu | Lys | Arg | Tyr | Asp | Tyr | Cys | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
Asp | lije | Leu | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | His | Cys | Ser | Gly | Glu | Asn | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
Tyr Asp | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Met | Ser | Gly | Leu | Glu | Cys | Gin | Ala | ||
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
Trp | Asp | Ser | Gin | Ser | Pro | His | Ala | His | Gly | Tyr | Ile | Pro | Ser | Lys | Phe | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
Pro | Asn | Lys | Asn | Leu | Lys | Lys | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Arg | Glu | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
• | Leu | Arg | Pro | Trp | Cys | Phe | Thr | Thr | Asp | Pro | Asn | Lys | Arg | Trp | Glu | Leu |
* | 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Cys | Asp | Ile | Pro' | Arg | Cys | Thr | Thr | Pro | Pro | Pro | Ser | Ser | Gly | Pro | Thr | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
Tyr | Gin | Cys | Leu | Lys | Gly | Thr | Gly | Glu | Asn | Tyr | Arg | Gly | Asn | Val | Ala | |
180 | 185 | 190 | ||||||||||||||
Val | Thr | Val | Ser | Gly | His | Thr | Cys | Gin | His | Trp | Ser | Ala | Gin | Thr | Pro | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
His | Thr | His | Asn | Arg | Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Asp | |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Lys | Arg | Ala | Pro | Trp | Cys | His | |
225 | 230 | 235 | 240 |
44 | • 4 | • 4 X ·· | 4«· • · | ||||||||||
4 * O | 4 4 • 4 | ·. · | 4 4 | ||||||||||
Thr | Thr | Asn | Ser | Gin | Val | Arg | Trp | Glu | Tyr | Cýs Jly4 lleÍPro^Ser | ·Λ · | ||
245 | 250 | ··*· | ·· | *·* ”555 | |||||||||
Asp | Ser | Ser | Pro | Val | Ser | Thr | Glu | Gin | Leu | Ala | Pro | Thr Ala Pro | Pro |
260 | 265 | 270 | |||||||||||
Glu | Leu | Thr | Pro | Val | Val | Gin | Asp | Cys | Tyr | His | Gly | Asp Gly Gin | Ser |
275 | 280 | 285 | |||||||||||
Tyr | Arg | Gly | Thr | Ser | Ser | Thr | Thr | Thr | Thr | Gly | Lys | Lys Cys Gin | Ser |
290 | 295 | 300 | |||||||||||
Trp | Ser | Ser | Met | Thr | Pro | His | Arg | His | Gin | Lys | Thr | Pro Glu Asn | Tyr |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||
Pro | Asn | Ala | Gly | Leu | Thr | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro Asp Ala | Asp |
325 | 330 | 335 | |||||||||||
Lys | Gly | Pro | Trp | Cys | Phe | Thr | Thr | Asp | Pro | Ser | Val | Arg Trp Glu | Tyr |
340 | 345 | 350 | |||||||||||
Cys | Asn | Leu | Lys | Lys | Cys | Ser | Gly | Thr | Glu | Ala | |||
355 | 360 |
··
4»* · <210>
<211>
<212>
<213>
DNA
Uměle připravená sekvence <220>
<223>
Popis uměle připravené sekvence:
Přímý primer pro lidský Fc-Angio <220>
<221>
CDS
<222> | (2) . . ( | 29) | ||
<4 00> | 12 | |||
cc ccg | ggt aag aaa | gtg | tat ctc | |
Pro | Gly Lys Lys | Val | Tyr Leu | |
1 | 5 | |||
<210> | 13 | |||
<211> | 9 | |||
<212> | PRT | |||
<213> | Uměle | připravená | sekvence | |
<400> | 13 |
tca Ser gag Glu
Pro Gly Lys Lys Val Tyr Leu Ser Glu 1 <210> 14 <211> 28 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220> ....
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro lidský Fc Angio <220>
<221> CDS <222> (2)..(28) <400> 14 c ccc
Pro aag
Lys ctt
Leu aaa
Lys gtg Val tat
Tyr ctc
Leu tea Ser gag Glu <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 15
Pro Lys Leu Lys Val Tyr Leu Ser Glu
5 <210> 16 <211> 30 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Reverzní primer pro lidský FcAngio <400> 16 cccctcgagc tačgcttctg ttcctgagca
<210> | 17 | |
<21í> | 552 | |
<212> | DNA | |
<213> | Mus | musculus |
<220> | ||
<221> | CDS | |
<222> | (1) · | ..(552) |
<223> | endostatin | |
<400> | 17 |
cat His 1 | act Thr | cat His | cag Gin | gac ttt | cag Gin | cca gtg Pro Val | ctc cac ctg | gtg gcá ctg | aac Asn | ||||||
Asp 5 | Phe | Leu 10 | His | Leu | Val | Ala | .Leu 15 | ||||||||
acc | ccc | ctg | tet | gga | ggc | atg | cgt | ggt | atc | cgt | gga | gca | gat | ttc | cag |
Thr | Pro | Leu | Ser | Gly | Gly | Met | Arg | Gly | Ile | Arg | Gly | Ala | Asp | Phe | Gin |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
tgc | ttc | cag | caa | gcc | ega | gcc | gtg | ggg | ctg | tcg | ggc | acc | ttc | cgg | get |
Cys | Phe | Gin | Gin | Ala | Arg | Ala | Val | Gly | Leu | Ser | Gly | Thr | Phe | Arg | Ala |
35 | 40 | 45 |
ttc Phe | ctg tcc | tet agg ctg | cag Gin 55 | gat Asp | ctc Leu | • 9 taÝ Tyr | • · • · • · • · • • · · agc Ser | • • • • 9 9 atc Ile 60 | • • · • • • • · 9 gtg Val | 9 • 9 9 9 9 9 99 cgc Arg | • • • · • • cgt Arg | • · · • 9 9 9 9 · • 99 9 gct Ala | 192 | |||
Leu 50 | Ser | Ser | Arg | Leu | ||||||||||||
gac | cgg | ggg | tet | gtg | ccc | atc | gtc | aac | ctg | aag | gac | gag | gtg | cta | tet | 240 |
Asp Arg | Gly | Ser | Val | Pro | Ile | Val | Asn | Leu | Lys | Asp | Glu | Val | Leu | Ser | ||
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
ccc | agc | tgg | gac | tcc | ctg | ttt | tet | ggc | tcc | cag | ggt | caa | gtg | caa | ccc | 288 |
Pro | Ser | Trp | Asp | Ser | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser | Gin | Gly | Gin | Val | Gin | Pro | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
ggg | gcc | cgc | atc | ttt | tet | ttt | gac | ggc | aga | gat | gtc | ctg | aga | cac | cca | 336 |
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Arg | Asp | Val | Leu | Arg | His | Pro | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
gcc | tgg | ccg | cag | aag | agc | gta | tgg | cac | ggc | tcg | gac | ccc | agt | ggg | cgg | 384 |
Ala | Trp | Pro | Gin | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser | Asp | Pro | Ser | Gly | Arg | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
agg | ctg | atg | gag | agt | tac | tgt | gag | aca | tgg | ega | act | gaa | act | act | ggg | 432 |
Arg | Leu | Met | Glu | Ser | Tyr | Cys | Glu | Thr | Trp | Arg | Thr | Glu | Thr | Thr | Gly | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
gct | aca | ggt | cag | gcc | tcc | tcc. | ctg | ctg | tea | ggc | agg | ctc | ctg | gaa | cag | 480 |
Ala | Thr | Gly | Gin | Ala | Ser | Ser | Leu | Leu | Ser | Gly | Arg | Leu | Leu | Glu | Gin | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
aaa | gct | gcg | agc | tgc | cac | aac | agc | tac | atc | gtc | ctg | tgc | att | gag | aat | 528 |
Lys | Ala | Ala | Ser | Cys | His | Asn | Ser | Tyr | Ile | Val | Leu | Cys | Ile | Glu | Asn | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
agc | ttc | atg | acc | tet | ttc | tcc | aaa | 552 | ||||||||
Ser | Phe | Met | Thr | Ser | Phe | Ser | Lys | |||||||||
180 |
<210> 18 <211> 184 <212>.PRT <213> Mus musculus
<400> 18 His 1 | Thr | His | Gin | Asp 5 | Phe | Gin | Pro | Val | Leu 10 | His | Leu | Val | Ala | Leu 15 | Asn | |
Thr | Pro | Leu | Ser 20 | Gly. Gly | Met | Arg' | Gly 25 | Ile | Arg | Gly | Ala | Asp 30 | Phe | Gin | ||
4 | Cys | Phe | Gin 35 | Gin | Ala | Arg | Ala | Val 40 | Gly | Leu | Ser | Gly | Thr 45 | Phe | Arg | Ala |
i | Phe | Leu 50 | Ser | Ser | Arg | Leu | Gin 55 | Asp | Leu | Tyr | Ser | Ile 60 | Val | Arg | Arg | Ala |
Asp 65 | Arg | Gly | Ser | Val | Pro 70 | Ile | Val | Asn | Leu | Lys 75 | Asp | Glu | Val | Leu | Ser 80 |
• | ·· ·· • · · | • • · | • • · | • | • · • | |||||||||
• · · • · · · | • • | • • | • • · | • • | ||||||||||
Pro | Ser | Trp | Asp | Ser | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser, | Glji.VaJZjGln' | ||||
85 | 90 | 95 | ||||||||||||
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Arg | Asp Val | Leu | Arg | His | Pro |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||
Ala | Trp | Pro | Gin | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser Asp | Pro | Ser | Gly | Arg |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||
Arg | Leu | Met | Glu | Ser | Tyr | Cys | Glu | Thr | Trp | Arg Thr | Glu | Thr | Thr | Gly |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||
Ala | Thr | Gly | Gin | Ala | Ser | Ser | Leu | Leu | Ser | Gly Arg | Leu | Leu | Glu | Gin |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
Lys | Ala | Ala | Ser | Cys | His | Asn | Ser | Tyr | Ile | Val Leu | Cys | Ile | Glu | Asn |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||
Ser | Phe | Met | Thr | Ser | Phe | Ser | Lys | |||||||
180 |
<210> 19 <211> 699 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS <222> (1) . .(699) <223> Fc <400> 19
gag Glu 1 | ccc aga ggg Pro Arg Gly | ccc aca | atc Ile | aag Lys | ccc tgt | cct Pro | cca tgc | aaa Lys | tgc Cys 15 | cca Pro | 48 | |||||
Pro 5 | Thr | Pro | Cys 10 | Pro | Cys | |||||||||||
gca | cct | aac | ctc | ttg | ggt | gga | cca | tcc | gtc | ttc | atc | ttc | cct | cca | aag | 96 |
Ala | Pro | Asn | Leu | Leu | Gly | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro | Pro | Lys | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
atc | aag | gat | gta | ctc | atg | atc | tcc | ctg | age | ccc | ata | gtc | aca | tgt | gtg | 144 |
Ile | Lys | Asp | Val | Leu | Met | Ile | Ser | Leu | Ser | Pro | Ile | Val | Thr | Cys | Val | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
gtg | gtg | gat | gtg | age | gag | gat | gac | cca | gat | gtc | cag | atc | age | tgg | ttt | 192 |
Val | Val | Asp | Val | Ser | Glu Asp | Asp | Pro | Asp | Val | Gin | Ile | Ser | Trp | Phe | ||
' 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
gtg | aac | aac | gtg | gaa | gta | cac | aca | gct | cag | aca | caa | acc | cat | aga | gag | 240 |
Val | Asn | Asn | Val | Glu | Val | His | Thr | Ala | Gin | Thr | Gin | Thr | His | Arg | Glu | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
gat | tac | aac | agt | act | ctc | cgg | gtg | gtc | agt | gcc | ctc | ccc | atc | cag | cac | 288 |
Asp | Tyr | Asn | Ser | Thr | Leu | Arg | Val | Val | Ser | Ala | Leu | Pro | Ile | Gin | His | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
cag | gac | tgg | atg | agt | ggc | aag | gag | ttc | aaa | tgc | aag | gtc | aac | aac | aaa | 336 |
Gin | Asp | Trp | Met | Ser | Gly | Lys | Glu | Phe | Lys | Cys | Lys | Val | Asn | Asn | Lys |
100 105 110
gac Asp | ctc Leu | cca gcg ccc | atc gag | aga acc atc | tca Ser | aaa Lys | ccc Pro 125 | aaa Lys | ggg Gly | tca Ser | 384 | ||||
Pro Ala 115 | Pro | Ile | Glu | Arg 120 | Thr | Ile | |||||||||
gta | aga | gct cca | cag. | gta | tat | gtc | ttg | cct | cca | cca | gaa | gaa | gag | atg | 432 |
Val | Arg | Ala Pro | Gin | Val | Tyr | Val | Leu | Pro | Pro | Pro | Glu | Glu | Glu | Met | |
130 | 135 | 140. | |||||||||||||
act | aag | aaa cag | gtc | act | ctg | acc | tgc | atg | gtc | aca | gac | ttc | atg | cct | 4 80 |
Thr | Lys | Lys Gin | Val | Thr | Leu | Thr | Cys | Met | Val | Thr | Asp | Phe | Met | Pro | |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
gaa | gac | att tac | gtg.. | gag | tgg | acc | aac | aac | ggg | aaa | aca | gag | cta | aac | 528 |
Glu | Asp | Ile Tyr | Val | Glu | Trp | Thr | Asn | Asn | Gly | Lys | Thr | Glu | Leu | Asn | |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
tac | aag | aac act | gaa | cca | gtc | ctg | gac | tet | gat | ggt | tet | tac | ttc | atg | 576 |
Tyr | Lys | Asn Thr | Glu | Pro | Val | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Tyr | Phe | Met | |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
tac | agc | aag ctg | aga | gtg | gaa | aag | aag | aac | tgg | gtg | gaa | aga | aat | agc | 624 |
Tyr | Ser | Lys Leu | Arg | Val | Glu | Lys | Lys | Asn | Trp | Val | Glu | Arg' | Asn | Ser | |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
tac | tcc | tgt tca | gtg | gtc | cac | gag | ggt | ctg | cac | aat | cac | cac | acg | act | 672 |
Tyr | Ser | Cys Ser | Val | Val | His | Glu | Gly | Leu | His | Asn | His | His | Thr | Thr | |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
aag | agc | ttc tcc | cgg | acc | ccg | ggt | aaa | 699 | |||||||
Lys | Ser | Phe Ser | Arg | Thr | Pro | Gly | Lys | ||||||||
225 | 230 |
<210> 20 <211> 233 <212> PRT <213> Mus musculus
<400> 20 | |||||||
Glu Pro Arg 1 | Gly | Pro 5 | Thr | Ile | Lys | ||
Ala | Pro | Asn | Leu 20 | Leu | Gly Gly | Pro | |
Ile | Lys | Asp.Val 35 | Leu | Met | Ile | Ser 40 | |
Val | Val 50 | Asp | Val | Ser | Glu | Asp 55 | Asp |
Val 65 | Asn | Asn | Val | Glu | Val 70 | His | Thr |
Asp | Tyr | Asn | Ser | Thr 85 | Leu | Arg | Val |
Pro | Cys 10 | Pro | Pro | Cys | Lys | Cys 15 | Pro |
Ser 25 | Val | Phe | Ile | Phe | Pro 30 | Pro | Lys |
Leu | Ser | Pro | Ile | Val 45 | Thr | Cys | Val |
Pro | Asp | Val | Gin 60 | Ile | Ser | Trp | Phe |
Ala | Gin | Thr 75 | Gin | Thr | His | Arg | Glu 80 |
Val | Ser- 90 | Ala | Leu | Pro | Ile | Gin 95 | His |
Gin Asp Trp Met | Ser | Gly Lys | Glu | Phe 105 | • • Lys • • · | • · • · jfye* • · · | • • j>ys • | • • · Va§L • · · | • • · Asji 110· | ♦ • Asji • | • · • · · ií/s : • · · | ||||
100 | |||||||||||||||
Asp | Leu | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu | Arg | Thr | Ile | Ser | Lys | Pro | Lys | Gly | Ser |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Val | Arg | Ala | Pro | Gin | Val | Tyr | Val | Leu | Pro | Pro | Pro | Glu | Glu | Glu | Met |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Thr | Lys | Lys | Gin | Val | Thr | Leu | Thr | Cys | Met | Val | Thr | Asp | Phe | Met | Pro |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Glu | Asp | Ile | Tyr | Val | Glu | Trp | Thr | Asn | Asn | Gly | Lys | Thr | Glu | Leu | Asn |
165 | .170 | 175 | |||||||||||||
Tyr | Lys | Asn | Thr | Glu | Pro | Val | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Tyr | Phe | Met |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Lys | Leu | Arg | Val | Glu | Lys | Lys | Asn | Trp | Val | Glu | Arg | Asn | Ser |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Cys | Ser | Val | Val | His | Glu | Gly | Leu | His | Asn | His | His | Thr | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Lys | Ser | Phe | Ser | Arg | Thr | Pro | Gly | Lys |
225 230 <210> 21 <211> 29 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro myší Fc-Endo <220>
<221> CDS <222> (2)..(28) <400> 21 c ccc aag ctt cat Pro Lys Leu His 1 act cat cag gac ttt c
Thr His Gin Asp Phe <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 22
Pro Lys Leu His.Thr His Gin Asp Phe ' 5 <210> 23 <211> 28' <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Reverzní primer pro myší Fc-Endo <400> 23 cccctcgagc tatttggaga aagaggtc <210> 24 <211> 1086 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS <222> (1)..(1086) <223> angiostatin <400> 24
* 1 | gtg tat Val Tyr 1 | ctg tea Leu Ser | gaa tgt aag acc ggc atc ggc aac ggc tac aga | gga Gly | 48 | ||||||||||||
Glu 5 | Cys Lys | Thr Gly | Ile 10 | Gly | Asn | Gly Tyr | Arg 15 | ||||||||||
acc | atg | tcc | agg | a ca | aag | agt | ggt | gtt | gcc | tgt | caa | aag | tgg | ggt | gcc | 96 | |
Thr | Met | Ser | Arg | Thr | Lys | Ser | Gly | Val | Ala | Cys | Gin | Lys | Trp. Gly | Ala | |||
20 | 25 | 30 | |||||||||||||||
acg | ttc | ccc | cac | gta | ccc | aac | tac | tet | ccc | agt | aca | cat | ccc | aat | gag | 144 | |
Thr | Phe | Pro | His | Val | Pro | Asn | Tyr | Ser | Pro | Ser | Thr | His | Pro | Asn | Glu | ||
35 | 40 | 45 | |||||||||||||||
gga | cta | gaa | gag | aac | tac | tgt | agg | aac | cca | gac | aat | gat | .gaa | caa | ggg | 192 | |
Gly | Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Asn | Asp | Glu | Gin | Gly | ||
50 | 55 | 60 | |||||||||||||||
cct | tgg | tgc | tac | act | aca | gat | ccg | gac | aag | aga | tat | gac | tac | tgc | aac | 240 | |
Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Asp | Lys | Arg | Tyr | Asp | Tyr | Cys | Asn | ||
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||||
att | cct | gaa | tgt | gaa | gag | gaa | tgc | atg | tac | tgc | agt | gga | gaa | aag | tat | 288 | |
Ile | Pro | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | Tyr | Cys | Ser | Gly | Glu | Lys | Tyr | ||
85 | 90 | 95 | |||||||||||||||
gag | ggc | aaa | atc | tcc | aag | acc | atg | tet | gga | ctt | gac | tgc | cag | gcc | tgg | 336 | |
Glu | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Met | Ser | Gly | Leu | Asp | Cys | Gin | Ala. | Trp | ||
100 | 105 | 110 | |||||||||||||||
gat | tet | cag | agc | cca | cat | get | cat | gga | tac | atc | cct | gcc | aaa | ttt | cca | 384 | |
Asp | Ser | Gin | Ser | Pro | His | Ala | His | Gly | Tyr | Ile | Pro | Ala | Lys | Phe | Pro | ||
i | 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
· | agc | aag | aac | ctg | aag | atg | aat | tat | tgc | cac | aac | cct | gac | ggg | gag | cca | 432 |
Ser | Lys | Asn | Leu | Lys | Met | Asn | Tyr | Cys | His | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Pro | ||
130 | 135 | 140 | |||||||||||||||
agg | ccc | tgg | tgc | ttc | aca | aca | gac | ccc | acc | aaa | ege | tgg | gaa | tac | tgt | 480 |
Arg 145 | Pro | Trp Cys | Phe | Thr Thr Asp Pro Thr Lys Arg Trp Glu | Tyr | Cys 160 | ||||||||||
150 | 155 | |||||||||||||||
gac | atc | ccc | ege | tgc | aca | aca | ccc | ccg | ccc | cca | ccc | age | cca | acc | tac | 528 |
Asp | Ile | Pro | Arg | Cys | Thr | Thr | Pro | Pro | Pro | Pro | Pro | Ser | Pro | Thr | Tyr | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
caa | tgt | ctg | aaa | gga | aga | ggt | gaa. | aat | tac | ega | ggg | acc | gtg | tet | gtc | 576 |
Gin Cys | Leu | Lys | Gly | Arg | Gly | Glu | Asn. | Tyr | Arg | Gly | Thr | Val | Ser | Val | ||
180 | 185 | 190 | ||||||||||||||
acc | gtg | tet | ggg | aaa | acc | tgt | cag | ege | tgg | agt | gag | caa | acc | cct | cat | 624 |
Thr | Val | Ser | Gly | Lys | Thr | Cys | Gin | Arg | Trp | Ser | Glu | Gin | Thr | Pro | His | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
agg | cac | aac | agg | aca | cca | gaa | aat | ttc | ccc | tgc | aaa | aat | ctg | gaa | gag | 672 |
Arg | His | Asn | Arg | Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Glu | Glu | |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
aac | tac | tgc | cgg | aac | cca | gat | gga | gaa | act | gct | ccc | tgg | tgc | tat | acc | 720 |
Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Thr | Ala | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | |
225 | 230 | 235 | 240 | |||||||||||||
act | gac | age | cag | ctg | agg | tgg | gag | tac | tgt | gag | att | cca | tcc | tgc | gag | 768 |
Thr | Asp | Ser | Gin | Leu | Arg | Trp | Glu | Tyr | Cys | Glu | Ile | Pro | Ser | Cys | Glu . | |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||||
tcc | tca | gca | tca | cca | gac | cag | tca | gat | tcc | tca | gtt | cca | cca | gag | gag | 816 |
Ser | Ser | Ala | Ser | Pro | Asp | Gin | Ser | Asp | Ser | Ser | Val | Pro | Pro | Glu | Glu | |
260 | 265 | 27Q | ||||||||||||||
caa | aca | cct | gtg | gtc | cag | gaa | tgc | tac | cag | age | gat | ggg | cag | age | tat | 864 |
Gin | Thr | Pro | Val | Val | Gin | Glu | Cys | Tyr | Gin | Ser | Asp | Gly | Gin | Ser | Tyr | |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
cgg | ggt | aca | tcg | tcc | act | acc | atc | aca | ggg | aag | aag | tgc | cag | tcc | tgg | 912 |
Arg | Gly | Thr | Ser | Ser | Thr | Thr | Ile | Thr | Gly | Lys | Lys | Cys | Gin | Ser | Trp | |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
gca | gct | atg | ttt | cca | cac | agg | cat | tcg | aag | acc | cca | gag | aac | ttc | cca | 960 |
Ala | Ala | Met | Phe | Pro | His | Arg | His | Ser | Lys | Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
gat | gct | ggc | ttg | gag | atg | aac | tac | tgc | agg | aac | ccg | gat | ggt | gac | aag | 1008 |
Asp | Ala | Gly | Leu | Glu | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Asp | Lys | |
325 | 330 | 335 | ||||||||||||||
ggc | cct | tgg | tgc | tac | ačc | act | gac | ccg | age | gtc | agg. | tgg | gaa | tac | tgc | 1056 |
Gly | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Ser | Val | Arg | Trp | ' Glu | Tyr | Cys | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
aac | ctg | aag | cgg | tgc | tca | gag | aca | gga | ggg | 1086 | ||||||
Asn | Leu | Lys | Arg | Cys | Ser | Glu | Thr | Gly | Gly |
355 360
<210> 25 <211> 362, <212> PRT' <213> Mus musculus <400> 25
Val 1 | Tyr Leu Ser | Glu 5 | Cys Lys Thr Gly Ile 10 | Gly | Asn Gly | Tyr | Arg Gly 15 | ||||||||
Thr | Met | Ser | Arg | Thr | Lys- | Ser | Gly | Val | Ala | Cys | Gin | Lys | Trp | Gly | Ala· |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Thr | Phe | Pro | His | Val | Pro | Asn | Tyr | Ser | Pro | Ser | Thr | His | Pro | Asn | Glu |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gly | Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Asn | Asp | Glu | Gin | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Asp | Lys | Arg | Tyr | Asp | Tyr | Cys | Asn |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ile | Pro | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | Tyr | Cys | Ser | Gly | Glu | Lys. | Tyr |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Glu | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Met | Ser | Gly | Leu | Asp | Cys | Gin | Ala | Trp· |
100 | 105 | •110 | |||||||||||||
Asp | Ser | Gin | Ser | Pro | His | Ala | His | Gly | Tyr | Ile | Pro | Ala | Lys | Phe | Pro |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ser | Lys | Asn | Leu | Lys | Met | Asn | Tyr | Cys | His | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Pro |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Arg | Pro | Třp | Cys | Phe | Thr | Thr | Asp | Pro | Thr | Lys | Arg | Trp | Glu | Tyr | Cys |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Asp | Ile | Pro | Arg | Cys | Thr | Thr | Pro | Pro | Pro | Pro | Pro | Ser | Pro | Thr | Tyr |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Cys | Leu | Lys | Gly | Arg | Gly | Glu | Asn | Tyr | Arg | Gly | Thr | Val | Ser | Val |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Thr | Val | Ser | Gly | Lys | Thr | Cys | Gin | Arg | Trp | Ser | Glu | Gin | Thr | Pro | His |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Arg | His | Asn | Arg | Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Glu | Glu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Thr | Ala | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr |
225 | 230 | 235 | 24.0 | ||||||||||||
Thr | Asp | Ser | Gin | Leu | Arg | Trp | Glu | Tyr | Cys | Glu | Ile | Pro | Ser | Cys | Glu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ser | Ser | Ala | Ser | Pro | Asp | Gin | Ser | Asp | Ser | Ser | Val | Pro | Pro | Glu | Glu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gin | Thr | Pro | Val | Val | Gin | Glu | Cys | Tyr | Gin | Ser | Asp | Gly | Gin | Ser | Tyr |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Arg | Gly | Thr | Ser | Ser | Thr | Thr | Ile | Thr | Gly | Lys | Lys | Cys | Gin | Ser | Trp |
290 | 295 | 300 |
Ala 305 | Ala | Met | Phe | Pro | His 310 | Arg | His | Ser | Lys | Thr 315 | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro 320 |
Asp | Ala | Gly | Leu | Glu 325 | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg 330 | Asn | Pro | Asp | Gly | Asp .335 | Lys |
Gly | Pro | Trp | Cys 340 | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro 345 | Ser | Val | Arg | Trp | Glu 350 | Tyr | Cys |
Asn | Leu | Lys 355 | Arg | Cys | Ser | Glu | Thr 360 | Gly | Gly |
<210> 26 <211> 31 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro myší Fc-Angio <220>
<221> CDS <222> (2) . . (49) <400> 26 c ccc aag ctt gtg tat ctg tca gaa tgt aag Pro Lys Leu Val Tyr Leu Ser Glu Cys Lys 1 5 10 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 27
Pro Lys Leu Val Tyr Leu Ser Glu Cys Lys 15 10 <210> 28 <211> 30 f <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Reverzní primer pro myši Fc-Angio <400> 28 cccctcgagc taccctcctg tctctgagca 30 ·« • · <210> 29 <211> 29 <212> DNA 1 <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Přímý primer pro psí Fc <220>
<221> CDS <222> (3)..(29) <400> 29 cc tta agc gaa aat gga aga gtt cct cgc
Leu Ser Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg
5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 30
Leu Ser Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg
5 <210> 31 <211> 40 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: Reverzní primer pro psí Fc <400> 31 cctcgagtca tttacccggg gaatgggaga gggatttctg 40 <210> 32 <211> 702 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>
<221> CDS
<222> | (1) . | . (702 |
<223> | Fc | |
<400> | 32 |
gaa Glu 1 | aat Asn | gga Gly | aga Arg | gtt cct | cgc Arg | cca Pro | cct Pro | gat tgt Asp Cys 10 | ccc aaa | tgc Cys | cca Pro 15 | gcc Ala | 48 | |||
Val 5 | Pro | Pro | Lys | |||||||||||||
cct | gaa | atg | ctg | gga | ggg | cct | tcg | gtc | ttc | atc | ttt | ccc | ccg | aaa | ccc | 96 |
Pro | Glu | Met | Leu | Gly Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro | Pro | Lys | Pro | ||
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
aag | gac | acc | ctc | ttg | att | gcc | ega | aca | cct | gag | gtc | aca | tgt | gtg | gtg | 144 |
• • | • · • · • • · • · • · · | ·· • ·« • · • • · | • • · • • • • · « | • • · • • • • · · | • • • · • 1 | • · • · · • · • · • · »· ··· | ||||||||||
Lys | Asp | Thr | Leu | Leu | Ile | Ala | Arg | Thr | Pro | Glu | Val | Thr | Cys | Val | Val | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
gtg | gat | ctg | gga | cca | gaa | gac | cct | gag | gtg | cag | atc | agc | tgg | ttc | gtg | 192 |
Val | Asp | Leu | Gly | Pro | Glu | Asp | Pro | Glu | Val | Gin | Ile | Ser | Trp | Phe | Val | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
gac | ggt | aag | cag | atg | caa | aca | gcc | aag | act | cag | cct | cgt | gag | gag | cag | 240 |
Asp | Gly | Lys | Gin | Met | Gin | Thr | Ala | Lys | Thr | Gin | Pro | Arg | Glu | Glu | Gin | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
ttc | aat | ggc | acc | tac | cgt | gtg | gtc | agt | gtc | ctc | ccc | att | ggg | cac | cag | 288 |
Phe | Asn | Gly | Thr | Tyr Arg | Val | Val | Ser | Val | Leu | Pro | Ile | Gly | His | Gin | ||
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
gac | tgg | ctc | aag | ggg | aag | cag | ttc | acg | tgc | aaa | gtc | aac | aac | aaa | gcc | 336 |
Asp | Trp | Leu | Lys | Gly | Lys | Gin | Phe | Thr | Cys | Lys | Val | Asn | Asn | Lys | Ala | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
ctc | cca | tcc | ccg | atc | gag | agg | acc | atc | tcc | aag | gcc | aga | ggg | cag | gcc | 384 |
Leu | Pro | Ser | Pro | Ile | Glu | Arg | Thr | Ile | Ser | Lys | Ala | Arg | Gly | Gin | Ala | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
cat | cag | ccc | agt | gtg | tat | gtc | ctg | ccg | cca | tcc | cgg | gag | gag | ttg | agc | 432 |
His | Gin | Pro | Ser | Val | Tyr | Val | Leu | Pro | Pro | Ser | Arg | Glu | Glu | Leu | Ser | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
aag | aac | aca | gtc | agc | ttg | aca | tgc | ctg | atc | aaa | gac | ttc | ttc | cca | cct | 480 |
Lys | Asn | Thr | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Ile | Lys | Asp | Phe | Phe | Pro | Pro | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
gac | att | gat | gtg | gag | tgg | cag | agc | aat | gga | cag | cag | gag | čet | gag | agc | 528 |
Asp | Ile | Asp | Val | Glu | Trp | Gin | Ser | Asn | Gly | Gin | Gin | Glu | Pro | Glu | Ser | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
aag | tac | cgc | acg | acc | ccg | ccc | cag | ctg | gac | gag | gac | ggg | tcc | tac | ttc | 576 |
Lys | Tyr | Arg | Thr | Thr | Pro | Pro | Gin | Leu | Asp | Glu | Asp | Gly | Ser | Tyr | Phe | |
180 | 185 | 190 | ||||||||||||||
ctg | tac | agc | aag | ctc | tet | gtg | gac | aag | agc, | cgc | tgg | cag | cgg | gga | gac | 624 |
Leu | Tyr | Ser | Lys | Leu | Ser | Val | Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Arg | Gly | Asp | |
195 | 200 | 205 | ||||||||||||||
acc | ttc | ata | tgt | gcg | gtg | atg | cat | gaa | get | cta | cac | aac | cac | tac | aca | 672 |
Thr | Phe | Ile | Cys | Ala | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr | Thr | |
210 | 215 | 220 | ||||||||||||||
cag | aaa | tcc | ctc | tcc | cat | tet | ccg | ggt | aaa | 702 | ||||||
Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | His | Ser | Pro | Gly | Lys | |||||||
225 | 230 |
i <210> 33 <211> 234 <212> PRT <213> Canis familiaris <4.00> 33
Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala
1 . | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Pro | Glu | Met | Leu | Gly | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Ile | Phe | Pro | Pro | Lys | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Lys | Asp | Thr | Leu | Leu | Ile | Ala | Arg | Thr | Pro | Glu | Val | Thr | Cys | Val | Val |
35 | 40 | .45 | * | ||||||||||||
Val | Asp | Leu | Gly | Pro | Glu | Asp | Pro | Glu | Val | Gin | Ile | Ser | Trp | Phe | Val |
50 | ' 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Gly | Lys | Gin | Met | Gin | Thr | Ala | Lys | Thr | Gin | Pro | Arg | Glu | Glu | Gin |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Phe | Asn | Gly | Thr | Tyr | Arg | Val | Val | Ser | Val | Leu | Pro | Ile | Gly | His | Gin |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Asp | Trp | Leu | Lys | Gly | Lys | Gin | Phe | Thr | Cys | Lys | Val | Asn | Asn | Lys | Ala |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Leu | Pro | Ser | Pro | Ile | Glu | Arg | Thr | Ile | Ser | Lys | Ala | Arg | Gly | Gin | Ala |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
His | Gin | Pro | Ser | Val | Tyr | Val | Leu | Pro | Pro | Ser | Arg | Glu | Glu | Leu | Ser |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Lys | Asn | Thr | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Ile | Lys | Asp | Phe | Phe | Pro | Pro |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Asp | Ile | Asp | Val | Glu | Trp | Gin | Ser | Asn | Gly | Gin | Gin | Glu | ,,Pro | Glu | Ser |
.165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Lys | Tyr | Arg | Thr | Thr | Pro | Pro | Gin | Leu | Asp | Glu | Asp | Gly | Ser | Tyr | Phe |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Tyr | Ser | Lys | Leu | Ser | Val | Asp | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin | Arg | Gly | Asp |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Thr | Phe | Ile | Cys | Ala | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | His | Ser | Pro | Gly | Lys |
225 230 <210> 34 <211> 552 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>
<221> CDS <222> (1)..(552) <223> Endostatin <400> 34
cac | acc | cac | cag | gac | ttc | cag | ccg | gtg | ctg | cac | ctg | gtg | gcc | ctg | aac | 48 |
His | Thr | His | Gin | Asp | Phe | Gin | Pro | Val | Leu | His | Leu | Val | Ala | Leu | Asn | |
1 | 5 | 10 | 15 |
agc ccg cag ccg ggc ggc atg | ega ggc atc | cgg Arg | gga gcg Gly Ala | gac ttc Asp Phe 30 | cag Gin | 96 | ||||||||||
Ser Pro Gin Pro | Gly | Gly | Met | Arg | Gly Ile 25 | |||||||||||
20 | ||||||||||||||||
tgc | ttc | cag | cag | gcg | cgc | gcc | gcg | ggg | ctg | gcc | ggc | acc | ttc | cgg | gcc | 144 |
Cys | Phe | Gin | Gin | Ala | Arg | Ala | Ala | Gly | Leu | Ala | Gly | Thr | Phe | Arg | Ala | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
ttc | ctg | tcg | tcg | cgg | ctg | cag | gac | ctc | tac | agc | atc | gtg | cgc | cgc | gcc | 192 |
Phe | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | Gin | Asp | Leu | Tyr | Ser | Ile | Val | Arg | Arg | Ala | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
gac | cgc | acc | ggg | gtg | ccc | gtc | gtc | aac | ctc | agg | gac | gag | gtg | ctc | ttc | 240 |
Asp | Arg | Thr | Gly | Val | Pro | Val | Val | Asn | Leu | Arg | Asp | Glu | Val | Leu | Phe | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
ccc | agc | tgg | gag | gcc | tta | ttc | tcg | ggc | tcc | gag | ggc | cag | ctg | aag | ccc | 288 |
Pro | Ser | Trp | Glu | Ala | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser | Glu | Gly | Gin | Leu | Lys | Pro | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
ggg | gcc | cgc | atc | ttc | tet | ttc | gac | ggc | aga | gat | gtc | ctg | cag ,cac | ccc | 336 | |
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Arg | Asp | Val | Leu | Gin | His | Pro | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
gcc | tgg | ccc | cgg | aag | agc | gtg | tgg | cac | ggc | tcc | gac | ccc | agc | ggg | cgc | 384 |
Ala | Trp | Pro | Arg | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser | Asp | Pro | Ser | Gly | Arg | |
115 | 120 | 125 |
cgc ctg acc gac | agc.tac tgc gag | acg tgg Thr Trp | cgg acg gag gcc ccg gcg | 432 | ||||||||||||
Arg Leu Thr | Asp | Ser Tyr Cys 135 | Glu | Arg | Thr Glu Ala 140 | Pro | Ala | |||||||||
130 . | ||||||||||||||||
gcc | acc | ggg | cag | gcg | tcg | tcg | ctg | ctg | gcg | ggc | agg | ctg | ctg | gag | cag | 480 |
Ala | Thr | Gly | Gin | Ala | Ser | Ser | Leu | Leu | Ala | Gly | Arg | Leu | Leu | Glu | Gin | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
gag | gcc | gcg | agc | tgc | cgc | cac | gcc | ttc | gtg | gtg | ctc | tgc | atc | gag | aac | 528 |
Glu | Ala | Ala | Ser | Cys | Arg | His | Ala | Phe | Val | Val | Leu | Cys | Ile | Glu | Asn |
165 170 175 agc gtc atg acc tcc ttc tcc aag
Ser Val Met Thr Ser Phe Ser Lys
180
552 <210> 35 <211> 184 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 35
His 1 | Thr | His | Gin | Asp 5 | Phe | Gin |
Ser | Pro | Gin | Pro 20 | Gly | Gly | Met |
Cys | Phe | Gin | Gin | Ala | Arg | Ala |
Pro | Val | Leu 10 | His | Leu | Val | Ala | Leu 15 | Asn |
Arg | Gly 25 | Ile | Arg | Gly | Ala | Asp 30 | Phe | Gin |
Ala | Gly | Leu | Ala | Gly | Thr | Phe | Arg | Ala |
4 · « · | ·« • · | 4» · * | • · * * | • • · • | |||||||||
• « | »· • · | • • * | • · · * 4 | 9 • | |||||||||
• ···· | • · »· | «« · · | • ·· | ♦ <*> · | |||||||||
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Phe | Leu | Ser | Ser | Arg | Leu | Gin | Asp | Leu | Tyr | Ser | Ile Val | Arg Arg | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Asp | Arg | Thr Gly | Val | Pro | Val | Val | Asn | Leu | Arg | Asp Glu | Val Leu | Phe | |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Pro | Ser | Trp | Glu | Ala | Leu | Phe | Ser | Gly | Ser | Glu | Gly Gin | Leu Lys | Pro |
85 | 90 | 95 | |||||||||||
Gly | Ala | Arg | Ile | Phe | Ser | Phe | Asp | Gly | Arg | Asp | Val Leu | Gin His | Pro |
100 | 105 | 110 | |||||||||||
Ala | Trp | Pro | Arg | Lys | Ser | Val | Trp | His | Gly | Ser | Asp Pro | Ser Gly | Arg |
115 | 120 | 125 | |||||||||||
Arg | Leu | Thr | Asp | Ser | Tyr | Cys | Glu | Thr | Trp | Arg | Thr Glu | Ala Pro | Ala |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Ala | Thr | Gly | Gin | Ala | Ser | Ser | Leu | Leu | Ala | Gly | Arg Leu | Leu Glu | Gin |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
Glu | Ala | Ala | Ser | Cys | Arg | His | Ala | Phe | Val | Val | Leu Cys | Ile Glu | Asn |
165 | 170 | .· 175 | |||||||||||
Ser | Val | Met | Thr | Ser | Phe | Ser | Lys |
180 <210> 36 <211> 41 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker HindlII/Drall-I: horní řetězec <220>
<221> CDS <222> (3)..(41) <400> 36 ag ctt cac acc cac cag gac ttc cag ccg gtg ctg cac ctg
Leu His Thr His Gin Asp Phe Gin Pro Val Leu His Leu
5 10 <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 37
Leu His Thr His Gin Asp Phe Gin Pro Val Leu His Leu
10 <210> 38 <211> 34 <212> DNA
<213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvencelinker HindlII/DralII: spodní řetězec <400> 38 gtgcagcacc ggctggaagt cctggtgggt gtga <210> 39 <211> 1077 <212> DNA <213> Canis familiaris <220>
<221> CDS <222> (1)..(1077) <223> Angiostatin <400> 39
ata tat ctt | tea Ser | gag tgc aag | act gga | aat Asn 10 | ggg aaa acc | tac agg Tyr Arg 15 | ggg Gly | 48 | ||||||||
Ile 1 | Tyr Leu | Glu Cys 5 | Lys | Thr | Gly | Gly | Lys Thr | |||||||||
acc | atg | gcc | aaa | acg | aag | aat | gat | gtt | gcc | tgt | caa | aaa | tgg | agt | gac | 96 |
Thr | Met | Ala | Lys | Thr | Lys | Asn | Asp | Val | Ala | Cys | Gin | Lys | Trp | Ser | Asp | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
aat | tet | ccg | cac | aaa | cct | aac | tat | acg | cct | gag | aag | cac | ccc | ttg | gag | 144 |
Asn | Ser | Pro | His | Lys | Pro | Asn | Tyr | Thr | Pro | Glu | Lys | His | Pro | Leu | Glu | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
ggg | ctg | gag | gag | aac | tat | tgc | agg | aac. | cct | gac | aac | gac | gag | aac | ggg | 192 |
Gly | Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Asn | Asp | Glu | Asn | Gly | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
ccc | tgg | tgc | tac | acc | aca | aac | cca | gac | gtg | agg | ttc | gac | tac | tgc | aac | 240 |
Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asn | Pro | Asp | Val | Arg | Phe | Asp | Tyr | Cys | Asn | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
att | cca | gaa | tgt | gaa | gag | gaa | tgt | atg | cat | tgc | agt | ggg | gaa | aat | tat | 288 |
Ile | Pro | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | His | Cys | Ser | Gly | Glu | Asn | Tyr | |
85 | 90. | 95 | ||||||||||||||
gag | ggc | aaa | att | tcc | aag | aca | aag | tet | gga | ctc | gag | tgc | caa | gcc | tgg | 336 |
Glu | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Lys | Ser | Gly | Leu | Glu | Cys | Gin | Ala | Trp | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
aac | tet | caa | acc | cca | cat | gct | cat | gga | tat | att | cct | tcc | aaa | ttt | cca | 384 |
Asn | Ser | Gin | Thr | Pro | His | Ala | His | Gly | Tyr | Ile | Pro | Ser | Lys | Phe | Pro | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
agc | aag | aac | ttg | aag | atg | aat | tac | tgc | cgt | aac | cct | gat | ggg | gag | ccc | 432 |
Ser | Lys | Asn | Leu | Lys | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Pro | |
130 | 135 | 140 |
• ·
cgc Arg 145 | cca tgg tgt | ttc Phe | acc Thr 150 | |||
Pro | Trp | Cys | ||||
gac | att | ccc | cgc | tgt | .aca | |
Asp | Ile | Pro | Arg | Cys 165 | Thr | |
cag | tgt | ctg | aag | ggc | aga | |
Gin | Cys | Leu | Lys 180 | Gly Arg | ||
act | gtc | tet | gga | cat | aca | |
Thr | Val | Ser 195 | Gly | His | Thr | |
aag | cac | aac | agg | acc | cca | |
Lys | His 210 | .Asn | Arg | Thr | Pro | |
aac | tac | tgt | cgc | aac | cct | |
Asn 225 | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro 230 | |
acc | aac | agt | gag | gtg | agg | |
Thr | Asn | Ser | Glu | Val 245 | Arg | |
tcc | tet | cca | ata | acc | aca | |
Ser | Ser | Pro | Ile 260 | Thr | Thr. | |
cct | gaa | caa | act | cct | gtg | |
Pro | Glu | Gin 275 | Thr | Pro | Val | |
agt | tat | ega | ggc | aca | tea | |
Ser | Tyr 290 | Arg Gly | Thr | Ser | ||
tet | tgg | tea | tet | atg | aca | |
- | Ser 305 | Trp | Ser | Ser | Met | Thr 310 |
! ttc | ccg | gag | get | ggc | ctg | |
Phe | Pro | Glu | Ala | Gly 325 | Leu | |
' gac | aaa | agc | cct | tgg | tgt | |
Asp | Lys | Ser | Pro 340 | Trp | Cys | |
' ttc | tgt | aac | ttg | aga | aaa | |
Phe | Cys | Asn 355 | Leu | Arg | Lys |
atg Met | gat Asp | ccc Pro | aac aaa | cgc Arg | tgg gaa ttc tgt | 480 | ||||
Asn | Lys 155 | Trp | Glu | Phe Cys 160 | ||||||
aca | cca | cca | ccc | cct | tcg | ggc | cca | acg | tac | 528 |
Thr | Pro | Pro | Pro | Pro | Ser | Gly | Pro | Thr | Tyr | |
170 | • 175 | |||||||||
ggg | gag | agc | tac | ega | ggg | aag | gtg | tcc | gtc | 576 |
Gly | Glu | Ser | Tyr | Arg | Gly | Lys | Val | Ser | Val | |
185 | 190 | |||||||||
tgt | cag | cac | .tgg | agt | gaa | cag | acc | cct | cac | 624 |
Cys | Gin | His | Trp | Ser | Glu | Gin | Thr | Pro | His | |
200 | 205 | |||||||||
gaa | aac | ttc | cct | tgc | aaa | aat | ttg | gat | gaa | 672 |
Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Asp | Glu | |
215 | 220 | |||||||||
gat | gga | gaa | aca | get | cca | tgg | tgc | tac | aca | 720 |
Asp | Gly | Glu | Thr | Ala | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | |
235 | 240 | |||||||||
tgg | gaa | cac | tgc | cag | att | ccg | tcc | tgt | gag | 768 |
Trp | Glu | His | Cys | Gin | Ile | . -Pro | Ser | Cys | Glu | |
250 | 255' | |||||||||
gaa | tat | ttg | gat | gcc | cca | get | tea | gtg | cca | 816 |
Glu | Tyr | Leu | Asp. Ala | Pro | Ala | Ser | Val | Pro | ||
265 | 270 | |||||||||
gtc | cag | gag | tgc | tac | cac | ggc | aat | ggg | cag | 864 |
Val | Gin | Glu | Cys | Tyr | His | Gly | Asn | Gly | Gin | |
280 | 285 | |||||||||
tcc | act | act | atc | aca | gga | aga | aaa | tgt | cag | 912 |
Ser | Thr | Thr | Ile | Thr | Gly Arg | Lys | Cys | Gin | ||
295 | 300 | |||||||||
cca | cac | ega | cat | gag | aag | acc | cca | gaa | cac | 960 |
Pro | His | Arg | His | Glu | Lys | Thr | Pro | Glu | His | |
315 | 320 | |||||||||
aca | atg | aac | tac | tgc | agg | aat | ccc | gac | gcc | 1008 |
Thr | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Ala | |
330 | 335 | |||||||||
tac | acc | acc | gac | ccc | tet | gtg | cgc | tgg | gag | 1056 |
Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Ser | Val | Arg | Trp | Glu | |
345 | 350 | |||||||||
tgc | 1077 | |||||||||
Cys |
ΊΟ <210> 40 <211> 359 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 40
Ile 1 | Tyr | Leu | Ser Glu Cys 5 | Lys Thr | Gly Asn Gly Lys 10 | Thr Tyr | Arg 15 | Gly | |||||||
Thr | Met | Ala | Lys | Thr | Lys | Ásn | Asp | Val | Ala | Cys | Gin | Lys | Trp | Ser | Asp |
20 | 25 | λ | 30 | ||||||||||||
Asn | Ser | Pro | His | Lys | Pro | Asn | Tyr | Thr | Pro | Glu | Lys | His | Pro | Leu | Glu |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gly | Leu | Glu | Glu | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Asn | Asp | Glu | Asn | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr | Thr | Asn | Pro | Asp | Val | Arg | Phe | Asp | Tyr | Cys | Asn |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ile | Pro | Glu | Cys | Glu | Glu | Glu | Cys | Met | His | Cys | Ser | Gly | Glu | Asn | Tyr |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Glu | Gly | Lys | Ile | Ser | Lys | Thr | Lys | Ser | Gly | Leu | Glu | Cys | Gin | Ala | Trp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Asn | Ser | Gin | Thr | Pro | His | Ala | His | Gly | Tyr | Ile | Pro | Ser | Lys | Phe | Pro |
115 | 120 | 125. | |||||||||||||
Ser | Lys | Asn | Leu | Lys | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu. | Pro |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Arg | Pro | Trp | Cys | Phe | Thr | Met | Asp | Pro | Asn | Lys | Arg | Trp | Glu | Phe | Cys |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Asp | Ile | Pro | Arg | Cys | Thr | Thr | Pro | Pro | Pro | Pro | Ser | Gly | Pro | Thr | Tyr |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Cys | Leu | Lys | Gly Arg | Gly | Glu | Ser | Tyr | Arg | Gly | Lys | Val | Ser | Val | |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Thr | Val | Ser | Gly | His | Thr | Cys | Gin | His | Trp | Ser | Glu | Gin | Thr | Pro | His |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Lys | His | Asn | Arg | Thr | Pro | Glu | Asn | Phe | Pro | Cys | Lys | Asn | Leu | Asp | Glu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Gly | Glu | Thr | Ala | Pro | Trp | Cys | Tyr | Thr |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Asn | Ser | Glu | Val | Arg | Trp | Glu | His | Cys | Gin | Ile | Pro | Ser | Cys | Glu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ser | Ser | Pro | Ile | Thr | Thr | Glu | Tyr | Leu | Asp | Ala | Pro | Ala | Ser | Val | Pro |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Pro | Glu | Gin | Thr | Pro | Val | Val | Gin | Glu | Cys | Tyr | His | Gly | Asn | .Gly | Gin |
275 | 280 | 285 |
Ser | Tyr | Arg | Gly | Thr Ser | Ser | Thr | Thr | Ile | Thr | Gly | Arg | Lys | Cys | Gin |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||
Ser | Trp | Ser | Ser | Met Thr | Pro | His | Arg | His | Glu | Lys | Thr | Pro | Glu | His |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||
Phe | Pro | Glu | Ala | Gly. Leu | Thr | Met | Asn | Tyr | Cys | Arg | Asn | Pro | Asp | Ala |
325 · | 330 | 335 | ||||||||||||
Asp | Lys | Ser | Pro | Trp Cys | Tyr | Thr | Thr | Asp | Pro | Ser | Val | Arg | Trp | Glu |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||
Phe | Cys | Asn | Leu | Arg Lys | Cys |
355 <210> 41 <211> 12 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: palindromový linker, kde je stop kodon TGA následován restrikčním místem Xhol <400> 41 tgactcgagt ca 12 <210> 42 <211> 21 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: mutagenní primer pro myší angiostatin <220>
<221> CDS <222> (1)..(21) <400> 42 ggg cct tgg age tac act aca,
Gly Pro Trp Ser Tyr Thr Thr'
5 <210> 43 <211> 7 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> .43
Gly Pro Trp Ser Tyr Thr Thr
5 ♦ · <210> 44 <211> 34 <212> DNA ’ <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: primer použitý k zavedeni místa HindlII do myšího angiostatinu <220>
<221> CDS <222> (9)..(32) <400> 44 gcggatcc aag ctt agt aca cat ccc aat gag gg 34
Lys Leu Ser Thr His Pro Asn Glu
5 <210> 45 <211> 8 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 45
Lys Leu Ser Thr His Pro Asn Glu
5 <210> 46 <211> 59 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker BspHI/BamHI: horní řetězec <220>
<221> CDS <222> (2)..(58) <400> 46 c atg acc tet ttc tcc aaa tcg agc ggg ggc agc ggg ggc gga ggc agc 4 9 Met Thr Ser Phe Ser Lys Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 ggc ggg ggc g 59
Gly Gly Gly <210> 47 <211> 19 <212> PRT <213> Uměle připravená sekvence <400> 47
Met Thr Ser Phe Ser Lys Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 ' 15
Gly Gly Gly
<210> 48 <211> 59 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker BspHI/BamHI: spodní řetězec ,<400> 48 gatccgcccc cgccgctgcc tccgcccccg ctgcccccgc tcgatttgga gaaagaggt 59 <210> 49 <211> 12 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker BamHI/HindlII: horní řetězec ....
<220>
<221> CDS <222> (3)..(11) <400> 49 ga tcc tca ggc c
Ser Ser Gly '
<210> 50 <211> 12 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker BamHI/HindlII: spodní řetězec <400> 50 agctggčctg ag <210> 51 <211> 10 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker AflII/HindlII: horní řetězec <220>
<221> CDS
<400> 51 tta agc ggc c
Leu Ser Gly <210> 52 <211> 10 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker AflII/HindlII: spodní řetězec <400> 52 agctgggcgc <210> 53 <211> 11 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker Xhol/AflII: horní řetězec <220>
<221> CDS <222> (3)..(11) <400> 53 tc gac tcc ggc Asp Ser Gly 1 <210> 54 <211> 11 <212> DNA <213> Uměle připravená sekvence <220>
<223> Popis uměle připravené sekvence: linker Xhol/AflII: spodní řetězec <400> 54' ttaagccgga g
• ·
Claims (31)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Molekula DNA kódující fúzní protein zahrnující:(a) signální sekvenci;(b) oblast Fc imunoglobulinu; a (c) sekvenci cílového proteinu vybranou ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu a jejich kombinace.
- 2. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná signální sekvence, zmíněná oblast Fc imunoglobulinu a zmíněná sekvence cílového proteinu jsou kódovány postupně ve směru 5' k
- 3' .3. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná signální sekvence, zmíněná sekvence cílového proteinu a zmíněná oblast Fc imunoglobulinu jsou kódovány postupně ve směru 5' k
- 4. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná oblast Fc imunoglobulinu zahrnuje pantovou oblast imunoglobulinu.
- 5. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná oblast Fc imunoglobulinu zahrnuje pantovou oblast imunoglobulinu a doménu konstantní části těžkého řetězce imunoglobulinu.
- 6. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná oblast Fc imunoglobulinu zahrnuje pantovou oblast a doménu CH3.
- 7. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná oblast Fc imunoglobulinu postrádá přinejmenším doménu CHi.
- 8. Molekula DNA podle nároku 1, kde zmíněná oblast Fc imunoglobulinu kóduje alespoň část imunoglobulinu typu gama.
- 9. Replikující se expresívní vektor k transfekci savčích buněk vyznačující se tím, že tento vektor obsahuje DNA podle nároku 1.
- 10. Savčí buňky vyznačující se tím, že tyto buňky obsahují DNA podle nároku 1.
- 11. Fúzní protein vyznačující se tím, že tento protein obsahuje Fc oblast imunoglobulinu a nějaký cílový protein vybraný ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu a jejich kombinace.
- 12. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že zmíněný fragment plazminogenu má molekulovou hmotnost přibližně 40 kDa a zahrnuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako SEK. ID. Č.: 3.
- 13. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že zmíněný cílový protein zahrnuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako SEK. ID. Č.: 3.
- 14. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že zmíněný fragment kolagenu XVIII zahrnuje aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako SEK. ID. Č.:
- 15. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ici se tím, že zmíněný cílový protein zahrnuje alespoň dvě molekuly vybrané ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu a nějaký fragment kolagenu XVIII, kde zmíněné dvě molekuly jsou spojeny peptidovým linkerem.
- 16. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že zmíněný cílový protein je připojen k N-konci zmíněné oblasti Fc imunoglobulinu.
- 17. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že zmíněný cílový protein je připojen k C-konci zmíněné oblasti Fc imunoglobulinu.
- 18. Multimerní protein vyznačující se tím, že tento protein zahrnuje přinejmenším dva fúzní proteiny podle nároku 11 spojené disulfidickou vazbou .
- 19. Multimerní protein podle nároku 18 vyznačující se tím, .že cílovým proteinem v alespoň jednom ze zmíněných fúzních proteinů je angiostatin a cílovým proteinem v alespoň jednom ze zmíněných fúzních proteinů je endostatin.
- 20. Multimerní protein podle nároku 18 vyznačující se tím, že cílovým proteinem v obou fúzních proteinech je angiostatin.
- 21. Multimerní • · · • · · ··· protein podle nároku 18 vyznačující se tím, že cílovým proteinem v obou fúzních proteinech je endostatin.
- 22. Fúzní protein podle nároku 11 vyznačuj ící se tím, že tento protein dále obsahuje druhý cílový protein vybraný ze skupiny zahrnující angiostatin, endostatin, nějaký fragment plazminogenu s aktivitou angiostatinu, nějaký fragment kolagenu XVIII s aktivitou endostatinu.
- 23. Fúzní protein podle nároku 22 vyznačuj ící se tím, že zmíněný druhý cílový protein je k prvnímu cílovému proteinu připojen polypeptidovým linkerem.
- 24. Fúzní protein podle nároku 22 vyznačuj ící se tím, že zmíněný první cílový protein je připojen k N-konci zmíněné oblasti Fc imunoglobulinu a zmíněný druhý cílový protein je připojen k C-konci zmíněné oblasti Fc imunoglobulinu.
- 25. Multimerní fúzní protein vyznačující se tím, že tento protein zahrnuje alespoň dva fúzní proteiny podle nároku 11, kde tyto fúzní proteiny jsou spojeny polypeptidovou vazbou.
- 26. Způsob produkce fúzního proteinu vyznačuj ící se tím, že tento způsob zahrnuje:a) vytvoření savčí buňky podle nároku 11; ab) kultivaci této savčí buňky za účelem produkce zmíněného fúzního proteinu.
- 27. Způsob podle nároku 26 vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje další krok, kterým je sesbírání zmíněného fúzního proteinu.
- 28. Způsob podle nároku 26 vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje další krok, kterým je odštěpení zmíněné oblasti Fc imunoglobulinů od zmíněného cílového proteinu.
- 29. Způsob léčby zdravotních obtíží způsobených angiogenezí vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje podání DNA podle nároku.1 do organizmu savce, u kterého je žádoucí aplikovat nějaký inhibitor angiogeneze .
- 30. Způsob léčby zdravotních obtíží způsobených angiogenezí vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje podání vektoru podle nároku 9 do organizmu savce, u kterého je žádoucí aplikovat nějaký inhibitor angiogeneze .
- 31. Způsob léčby zdravotních obtíží, které mohou být zmírněny podáním angiostatinu nebo endostatinu, vyznačující se tím, že tento způsob zahrnuje podání účinného množství fúzního proteinu podle nároku 11 do organizmu savce trpícího zmíněnou zdravotní obtíží.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US9788398P | 1998-08-25 | 1998-08-25 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2001643A3 true CZ2001643A3 (cs) | 2002-02-13 |
CZ302303B6 CZ302303B6 (cs) | 2011-02-16 |
Family
ID=22265602
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20010643A CZ302303B6 (cs) | 1998-08-25 | 1999-08-25 | Homodimerní fúzní protein vykazující inhibicní aktivitu na angiogenezi, zpusob jeho produkce, molekula DNA a replikovatelný expresní vektor |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20030139365A1 (cs) |
EP (1) | EP1107989B1 (cs) |
JP (3) | JP2002523036A (cs) |
CN (2) | CN101386651A (cs) |
AT (1) | ATE462725T1 (cs) |
AU (1) | AU761027B2 (cs) |
BR (1) | BR9913331A (cs) |
CA (1) | CA2339331C (cs) |
CZ (1) | CZ302303B6 (cs) |
DE (1) | DE69942207D1 (cs) |
DK (1) | DK1107989T3 (cs) |
ES (1) | ES2342239T3 (cs) |
HK (1) | HK1042503A1 (cs) |
HU (1) | HUP0103329A3 (cs) |
NO (1) | NO20010918L (cs) |
PL (1) | PL202057B1 (cs) |
PT (1) | PT1107989E (cs) |
RU (1) | RU2240328C2 (cs) |
WO (1) | WO2000011033A2 (cs) |
ZA (1) | ZA200101290B (cs) |
Families Citing this family (60)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU9673998A (en) * | 1997-10-01 | 1999-04-23 | G.D. Searle & Co. | Fusion proteins comprising an angiostatin moiety and their use in anti-tumor treatment |
CA2693296C (en) | 1997-12-08 | 2013-09-10 | Merck Patent Gmbh | Heterodimeric fusion proteins useful for targeted immune therapy and general immune stimulation |
US20030105294A1 (en) * | 1998-02-25 | 2003-06-05 | Stephen Gillies | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins |
BR9909583A (pt) * | 1998-04-15 | 2002-01-15 | Lexigen Pharm Corp | Aumento da resposta imune mediado por uma proteìna de fusão anticorpo-citocina por co-administração com inibidor de angiogênese |
CN101386651A (zh) * | 1998-08-25 | 2009-03-18 | 默克专利股份公司 | 表达以及分泌制管张素和内皮抑制素的免疫融合物 |
SK782002A3 (en) * | 1999-07-21 | 2003-08-05 | Lexigen Pharm Corp | FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
ATE316982T1 (de) * | 1999-08-09 | 2006-02-15 | Lexigen Pharm Corp | Mehrere zytokin-antikörper komplexen |
IL131803A0 (en) * | 1999-09-08 | 2001-03-19 | Genena Ltd | Method for improving the efficiency of cancer gene therapy |
US20050202538A1 (en) * | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
ATE336514T1 (de) * | 2000-02-11 | 2006-09-15 | Merck Patent Gmbh | Steigerung der zirkulierenden halbwertzeit von auf antikörpern basierenden fusionsproteinen |
EP1294401B1 (en) * | 2000-06-29 | 2007-08-01 | EMD Lexigen Research Center Corp. | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by combined treatment with immunocytokine uptake enhancing agents |
JP2003000268A (ja) * | 2000-08-25 | 2003-01-07 | Pfizer Prod Inc | 血管新生にかかわる疾患を診断および治療するための方法および組成物 |
EP1197550A3 (en) * | 2000-08-25 | 2002-11-20 | Pfizer Products Inc. | Methods and compositions for diagnosing and treating disorders involving angiogenesis |
US7160858B2 (en) | 2000-09-01 | 2007-01-09 | Philadelphia, Health And Education Corporation | Methods and compositions for inhibiting angiogenesis |
DK1313504T3 (da) * | 2000-09-01 | 2007-02-26 | Philadelphia Health & Educatio | Fremgangsmåder og sammensætninger til hæmning af angiogenese |
AU2002248571B2 (en) * | 2001-03-07 | 2007-01-18 | Merck Patent Gmbh | Expression technology for proteins containing a hybrid isotype antibody moiety |
WO2002079415A2 (en) * | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
JP4309662B2 (ja) * | 2001-05-03 | 2009-08-05 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 腫瘍特異的組換え抗体およびその使用 |
EP2354791A1 (en) * | 2001-12-04 | 2011-08-10 | Merck Patent GmbH | Immunocytokines with modulated selectivity |
EP1501861A4 (en) * | 2002-05-06 | 2007-06-20 | Univ Texas | TARGETED BINDING PROTEINS FOR THE ADMINISTRATION OF THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC REAGENTS |
WO2004055056A1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-07-01 | Merck Patent Gmbh | Humanized antibody (h14.18) of the mouse 14.18 antibody binding to gd2 and its fusion with il-2 |
US20050069521A1 (en) * | 2003-08-28 | 2005-03-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Enhancing the circulating half-life of interleukin-2 proteins |
US7524811B2 (en) | 2003-08-29 | 2009-04-28 | Children's Medical Center Corporation | Anti-angiogenic peptides from the N-terminus of endostatin |
DE602004015142D1 (de) | 2003-08-29 | 2008-08-28 | Childrens Medical Center | Antiangiogene peptide zur behandlung oder vorbeugung von endometriose |
BRPI0418286A (pt) | 2003-12-30 | 2007-05-02 | Merck Patent Gmbh | proteìnas de fusão de il-7 |
EP1699821B1 (en) * | 2003-12-31 | 2012-06-20 | Merck Patent GmbH | Fc-ERYTHROPOIETIN FUSION PROTEIN WITH IMPROVED PHARMACOKINETICS |
EA011859B9 (ru) | 2004-01-05 | 2013-07-30 | Емд Лексиген Ресерч Сентер Корп. | Соединения для адресной доставки препарата к ткани или органу-мишени |
JP4987484B2 (ja) | 2004-01-22 | 2012-07-25 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 補体結合が低下した抗癌抗体 |
JP2005301419A (ja) * | 2004-04-07 | 2005-10-27 | Hitachi Ltd | ディスクアレイ装置およびそのデータ処理方法 |
US7670595B2 (en) * | 2004-06-28 | 2010-03-02 | Merck Patent Gmbh | Fc-interferon-beta fusion proteins |
ES2325344B1 (es) * | 2004-11-02 | 2010-06-09 | Univ Madrid Autonoma | Inhibidores de angiogenesis multifuncionales y multivalentes. |
CA2591297C (en) * | 2004-12-09 | 2015-01-13 | Stephen D. Gillies | Il-7 variants with reduced immunogenicity |
US20070104689A1 (en) * | 2005-09-27 | 2007-05-10 | Merck Patent Gmbh | Compositions and methods for treating tumors presenting survivin antigens |
US7807409B2 (en) * | 2005-10-21 | 2010-10-05 | Roche Palo Alto Llc | Method for the recombinant expression of a polypeptide |
CN101351475B (zh) * | 2005-12-30 | 2013-05-15 | 默克专利有限公司 | 具有提高的稳定性的白细胞介素12p40变体 |
DK1966245T3 (da) | 2005-12-30 | 2011-07-18 | Merck Patent Gmbh | Anti-CD19-Antistoffer med reduceret immunogenicitet |
EP1816201A1 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-08 | CSL Behring GmbH | Modified coagulation factor VIIa with extended half-life |
KR100888022B1 (ko) * | 2006-12-21 | 2009-03-09 | 재단법인 목암생명공학연구소 | 면역글로불린 Fc와 인간 아포리포단백질(a)크링글절편의 융합단백질 LK8Fc |
US7981446B2 (en) * | 2007-11-26 | 2011-07-19 | Forhumantech. Co., Ltd. | Pharmaceutical compositions and methods for delivering nucleic acids into cells |
AT506216B1 (de) | 2008-02-13 | 2009-07-15 | Peter Dr Hernuss | Zusammensetzung zur aufnahme über mukoses gewebe |
US20120093814A1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-04-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Fusion Proteins Comprising Canine FC Portions |
CN102405230A (zh) | 2009-04-22 | 2012-04-04 | 默克专利有限公司 | 具有修饰的FcRn结合位点的抗体融合蛋白 |
KR101579318B1 (ko) * | 2010-04-29 | 2015-12-21 | 엘지전자 주식회사 | 태양 전지 및 그 제조 방법 |
WO2012178137A1 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-27 | Gillies Stephen D | Light chain immunoglobulin fusion proteins and methods of use thereof |
RU2465283C1 (ru) * | 2011-06-27 | 2012-10-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвити | Рекомбинантный гибридный полипептид, способный ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток человека in vitro, и способ его получения |
EP2561888A1 (en) * | 2011-08-23 | 2013-02-27 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Protein comprising NC-1 for treating angiogenesis-related diseases |
JP6162891B2 (ja) * | 2013-06-14 | 2017-07-12 | エルジー・ケム・リミテッド | 有機太陽電池およびその製造方法 |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
US20160126391A1 (en) * | 2014-10-31 | 2016-05-05 | Byd Company Limited | Solar cell module and manufacturing method thereof |
EP3365363A1 (en) | 2015-10-23 | 2018-08-29 | Apogenix AG | Single-chain gitr-receptor agonist proteins |
CA3002588C (en) * | 2015-10-23 | 2021-11-23 | Apogenix Ag | Single-chain cd137-receptor agonist proteins |
WO2017068192A1 (en) * | 2015-10-23 | 2017-04-27 | Apogenix Ag | Single-chain cd27-receptor agonist proteins |
WO2017093569A1 (en) | 2015-12-03 | 2017-06-08 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Means and methods for treating and diagnosing fibrosis or fibrosis-associated diseases |
US9567399B1 (en) | 2016-06-20 | 2017-02-14 | Kymab Limited | Antibodies and immunocytokines |
EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
CN109824779B (zh) * | 2017-11-23 | 2023-05-26 | 中山大学 | 一种包含IgG的Fc结构域和EB病毒包膜糖蛋白胞外域的融合蛋白 |
EP3781589B1 (en) | 2018-04-17 | 2023-10-04 | Heidelberg Biotech GmbH | Means and methods for the treatment of angiogenesis-, fibrosis- and cancer-related diseases with protein oligomers comprising nc-1-fc |
US20220047710A1 (en) * | 2018-09-12 | 2022-02-17 | Washington University | Single chain constructs |
EP4281471A1 (en) * | 2021-01-20 | 2023-11-29 | Monash University | Fusion proteins |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05271294A (ja) * | 1992-01-24 | 1993-10-19 | Japan Found Cancer Res | ヒトプロヒビチンおよびそれをコードするdna |
US5643783A (en) * | 1993-12-01 | 1997-07-01 | President And Fellows Of Harvard College | Collagen and uses therefor |
US5541087A (en) * | 1994-09-14 | 1996-07-30 | Fuji Immunopharmaceuticals Corporation | Expression and export technology of proteins as immunofusins |
US5922852A (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-13 | Oklahoma Medical Research Foundation | 3' untranslated region of the human prohibitin gene |
US6346510B1 (en) * | 1995-10-23 | 2002-02-12 | The Children's Medical Center Corporation | Therapeutic antiangiogenic endostatin compositions |
US5854205A (en) * | 1995-10-23 | 1998-12-29 | The Children's Medical Center Corporation | Therapeutic antiangiogenic compositions and methods |
KR19990066981A (ko) * | 1995-10-23 | 1999-08-16 | 윌리엄 뉴우 | 치료용 맥관형성억제 조성물 및 방법 |
BR9909583A (pt) * | 1998-04-15 | 2002-01-15 | Lexigen Pharm Corp | Aumento da resposta imune mediado por uma proteìna de fusão anticorpo-citocina por co-administração com inibidor de angiogênese |
WO1999053958A2 (en) * | 1998-04-17 | 1999-10-28 | Lexigen Pharmaceuticals Corporation | Enhancement of antibody-cytokine fusion protein mediated immune responses by co-administration with prostaglandin inhibitor |
JP2002517186A (ja) * | 1998-06-03 | 2002-06-18 | ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレイション | エンドスタチンタンパク質を含むタンパク質オリゴマー組成物およびその使用方法 |
CN101386651A (zh) * | 1998-08-25 | 2009-03-18 | 默克专利股份公司 | 表达以及分泌制管张素和内皮抑制素的免疫融合物 |
US7524811B2 (en) * | 2003-08-29 | 2009-04-28 | Children's Medical Center Corporation | Anti-angiogenic peptides from the N-terminus of endostatin |
-
1999
- 1999-08-25 CN CNA2008102106518A patent/CN101386651A/zh active Pending
- 1999-08-25 PL PL346703A patent/PL202057B1/pl unknown
- 1999-08-25 PT PT99942468T patent/PT1107989E/pt unknown
- 1999-08-25 EP EP99942468A patent/EP1107989B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-25 ES ES99942468T patent/ES2342239T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-25 AU AU55836/99A patent/AU761027B2/en not_active Ceased
- 1999-08-25 CA CA2339331A patent/CA2339331C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-25 CN CNB998124567A patent/CN100422332C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-25 RU RU2001105917/13A patent/RU2240328C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-08-25 DE DE69942207T patent/DE69942207D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-25 DK DK99942468.2T patent/DK1107989T3/da active
- 1999-08-25 BR BR9913331-8A patent/BR9913331A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-08-25 WO PCT/US1999/019329 patent/WO2000011033A2/en active IP Right Grant
- 1999-08-25 CZ CZ20010643A patent/CZ302303B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-08-25 JP JP2000566305A patent/JP2002523036A/ja active Pending
- 1999-08-25 HU HU0103329A patent/HUP0103329A3/hu unknown
- 1999-08-25 AT AT99942468T patent/ATE462725T1/de active
-
2001
- 2001-02-15 ZA ZA200101290A patent/ZA200101290B/xx unknown
- 2001-02-23 NO NO20010918A patent/NO20010918L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-06-07 HK HK02104318.5A patent/HK1042503A1/zh unknown
- 2002-11-12 US US10/292,418 patent/US20030139365A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-06-27 US US11/475,627 patent/US8206718B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-08-26 JP JP2009196091A patent/JP2009273478A/ja active Pending
-
2012
- 2012-06-26 US US13/533,250 patent/US8703908B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-03-04 JP JP2013041498A patent/JP2013128490A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ2001643A3 (cs) | Exprese a export inhibitorů angiogeneze ve formě imunofúzinů | |
JP6450365B2 (ja) | 制御性t細胞の増殖のためのインターロイキン−2ムテイン | |
KR101993714B1 (ko) | 대사 장애를 치료하는데 이용하기 위한 조성물과 방법 | |
US9078860B2 (en) | VEGF analogs | |
JP2019123711A (ja) | Pdgfおよびvegf結合部分を含む融合タンパク質ならびにその使用方法 | |
US11472864B2 (en) | Polynucleotides encoding APOA1-PON1 fusion polypeptides | |
CA2356401A1 (en) | Expression and export of anti-obesity proteins as fc fusion proteins | |
JP2003514552A (ja) | 改善された性質を有するエリトロポエチンの形態 | |
JP6676551B2 (ja) | 改変フォンウィルブランド因子 | |
KR102461210B1 (ko) | Uti 융합 단백질 | |
US20090286721A1 (en) | Targeted plasminogen activator fusion proteins as thromobolytic agents | |
JP2013253079A (ja) | 生物学的に活性なヒト尿中トリプシンインヒビターのFc融合タンパク質並びにその調製および使用 | |
CN101914161A (zh) | 抑制肿瘤生长的融合蛋白HGFα-Fc及其用途 | |
MXPA01001970A (en) | Expression and export of angiostatin and endostatin as immunofusis | |
BR112015023145B1 (pt) | Polipeptídeos contendo fc aglicosilados e anticorpo ou proteína de fusão fc |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160825 |