CZ2001569A3

CZ2001569A3 - Farmaceutické prostředky obsahující platinové komplexní sloučeniny a jejich použití

Info

Publication number: CZ2001569A3
Application number: CZ2001569A
Authority: CZ
Inventors: Eberhard Amtmann; Gerhard Schilling
Original assignee: Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts
Priority date: 1998-08-25
Filing date: 1999-08-25
Publication date: 2001-09-12
Also published as: CA2341701A1; HUP0103262A3; CN1398183A; MXPA01001999A; CN1224385C; PT1107751E; BR9913321A; CZ293449B6; NO20010907D0; WO2000010543A3; ES2201792T3; AU1028600A; EP1107751A2; PL346643A1; AU769882C; NO20010907L; AU769882B2; HUP0103262A2; NZ509529A; JP2002523361A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutických prostředků obsahujících platinové komplexy a jejich použití pro terapii tumorových onemocnění.

Dosavadní stav techniky

V současnosti se většinou rakovinová onemocnění před a/nebo po operaci léčí medikamentózní terapií nebo radioterapií. Při medikamentózní tumorové terapii a chemoterapii se používají sloučeniny, kterými se různým způsobem ovlivňuje rakovinový růst. U chemoterpie dochází ale často k vážným a pro pacienty nepříjemným vedlejším účinkům, jako například k vypadávání vlasů, nevolnosti, zvracení, únavě, poškození kostní dřeně a bílých krvinek. To platí zejména pro dosud používané platinové sloučeniny, jako cisplatin nebo karboplatin. Často dochází také více méně k těžkým sekundárním infekcím. Dále nereagují všechny druhy tumorů na chemoterapii, například ledvinový karcinom nebo tumory trávicího traktu.

Podstata vynálezu

Úkolem vynálezu je tak připravit účinný lék k léčbě rakovinových onemocnění. Lék má být účinný při nepatrných dávkách, být co možná nejméně toxický pro zdravé buňky a měl by mít málo vedlejších účinků. Dále má být lék také vhodný pro regionální chemoterapii s možností podávat ho ambulantně. Kromě toho má lék snížit riziko recidivy. Dále by mělo být možné skladovat lék delší dobu bez ztráty účinku.

S překvapením bylo objeveno, že komplexy z platiny a xantogenátu tvoří stabilní sloučeniny s výtečným antitumorovým účinkem.

Předmětem vynálezu jsou proto farmaceutické prostředky, které obsahují platinové komplexy obecného vzorce (I)

(!) kde znamenají skupiny a R₂ nezávisle na sobě přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku, alkenylový zbytek se 2 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku, mononocykíický nebo polycyklický alenylový zbytek s 4 až 30 atomy uhlíku nebo monocyklický nebo polycyklický aromatický zbytek s 6 až 30 atomy uhlíku, přičemž se mohou zbytky případně substituovat jedním nebo více substituenty.

R1 a R2 mohou být stejné nebo odlišné.

Významné jsou pro R1 a R₂ přímé Cm₄ -alkylové zbytky nebo C3-14 -cykloalkylové zbytky.

Zvláště významné je pro Ri a R₂ skupina CH₃CH₂.

• · · ···* · · • ·

- 3 Je možné použít každý libovolný přímý nebo rozvětvený Ci._3O -alkylový zbytek. Například jsou to skupiny methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terc.butyl, n-butyl, η-hexyl-, 2-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2methylhexyl, 2,2-dimethylpentyl, 3,3-dimethylpentyl, 3-ethylpentyl, n-oktyl,

2,2-dimethylhexyl, 3,3-dimetylhexyl, 3-methyl-3-ethylpentyl. Pro lepší rozpustnost mají přednost krátké alkylové řetězce, jako methyl, ethyl, propyl a isopropyl.

Je možné použít každý libovolný přímý nebo rozvětvený C2-30 -alkylový zbytek. Například jsou to skupiny vinyl, propenyl, isopropenyl, allyl, 2-methylallyl, butenyl nebo isobutenyl, hexenyl nebo isohexenyl, heptenyl nebo isoheptenyl, oktenyl nebo isooktenyl. Přednost mají vinyl, propenyl a isopropenyl.

Cykloalkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku může být každý libovolný cykloalkylový zbytek. Například jsou to skupiny cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklononyl nebo cyklodecyl. Přednost mají cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Cykloalkenylový zbytek se 4 až 30 atomy uhlíku může být každý libovolný cykloalkenylový zbytek. Například jsou to skupiny cyklobutenyl, cyklopentenyl nebo cyklohexenyl, cykloheptenyl, cyklooktenyl, cyklononenyl nebo cyklodecenyl. Přednost mají cyklobutenyl, cyklopentenyl nebo cyklohexenyl.

Příklady pro polycyklické alkylové a alkenylové zbytky zahrnují norbornan, adamantan nebo benzvalen.

R1 a R2 mohou být libovolné monocyklické nebo polycyklické C6-30 -alkylové zbytky. Npříklad je to karbocyklický, monocyklický zbytek, například skupina fenyl, heterocyklický, monocyklický zbytek, například skupiny thienyl, furyl, pyranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, thiazolyl, oxyzolyl, furazannyl pyrrolinyí, imidazolinyl, pyrazolinyl, thiazolinyl, triazolyl, tetrazolyl a poziční isomery heteroatomů, které tyto skupiny mohou • 9 9

999· 9 * • ·

- 4 obsahovat, zbytek sestávající z karbocyklických kondenzovaných cyklů, například naftylové skupiny nebo fenantrenylové skupiny, zbytek sestávající z kondenzovaných hetrocyklických cyklů, například benzofuranyl, benzothienyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, naphto[2,3-b]thienyl, thianthrenyl, isobenzofuranyl, chromenyl, xanthenyl, fenoxantiinyl, indolizinyl, isoindolyl, 3H-indolyl, indolyl, indazolyl, purinyl, chinolizinyl, isochinolyl, chinolyl, fathalzinyl, nafthyridinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, chinolonyl, pteridinyl, karbazolyl, βkarbolinyl, acridinyl, fenazinyl, fenothiazinyl, fenoxazinyl, indolinyl, isoindolinyl, imidazopyridyl, imidazopyridimidinyl nebo také kondenzované polycyklické systémy sestávající z heterocyklických monocyklů, například jak bylo výše definováno, například furo[2,3-b]pyrrol nebo thieno[2,3-b]furan, a zejména skupiny fenyl a furyl, jako 2-furyl, imidazolyl, jako 2-imidazolyl, pyridyl, jako 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl, pyrimidínyl, jako pyrimid-2-yl, thiazolyl, jako thiazol-2-yl, thiazolinyl, jako thiazolin-2-yl, triazolyl, triazolyl-2yl, tetrazolyl, jako tetrazol-2-yl, benzimidazolyl, jako benzimidazol-2-yl, benzothiazolyl, jako benzothiazol-2-yl, puril, jako purin-7-yl nebo chinolyl, jako

4-chinolyl.

Substituenty výše uvedených zbytků mohou být přednostně zvoleny z následující skupiny:

Hlogen: fluor, chlor, brom, jod, amino, alkylamino, dimethylamino nebo ethylamino, dialkylamino, jako dimethylamino, diethylamino, methylethylamino, přičemž každý z těchto dialkylaminozbytků případně existuje ve formě oxidu, aminoalkyl, jako aminomethyl nebo aminoethyl, dialkylaminoalkyl, jako dimethylaminomethyl nebo dimethylaminoethyl, dialkylaminoalkyloxy, jako dimethylaminoethyloxy, hydroxyl, volné esterizované karboxyskupiny, jako alkoxykarbonyl, například methoxykarbonyl nebo ethoxykarbonyl nebo převedené na sůl, například atomem sodíku nebo draslíku, • · ·*··

- 5 ·· ♦ ♦ · •9 • ·· •·

9·· alkyl s 1 až 8 atomy uhlíku, jako methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terč.-butyl, případně substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, například atomem fluoru, jako trifluormethyl, oxo, cyano, nitro, formyl, acyl, jako acetyl propionyl, butyryl, benzoyl, acyloxy, jako acetoxy nebo zbytek vzorce:

-O-CO-(CH₂)_nCO₂H, kde n = 1 až 5 alkoxy, jako methoxy, ethoxy, propyloxy, isopropyloxy, butyloxy, alkylthio, jako methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, karbamoyl, alkenyl, jako vinyl, propenyl, alkinyl, jako ethinyl, propinyl a aryl, jako fenyl, furyl, thienyl.

Jako příklad pro takové substituovaný zbytek je možné uvést alkylový zbytek substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, jako skupiny trifluormethyl, trifluorbutyl, pentafluorpropyl, pentafluorbutyl, pentafluorpentyl, heptafluorbutyl nebo nonafluorbutyl nebo 2-chlorethyl.

Sloučeniny výše uvedeného vzorce (I) je možné nazvat pojmem „thioplatinové sloučeniny“.

Přednostně se sloučeniny vzorce (I) vyrábějí způsobem, který se vyznačuje tím, že se známým způsobem provede výměnná reakce ligandu platinového komplexu, jako například cischlorodiamminplatin(ll), odpovídajícím xantogenátem. To je například způsob, který se vyznačuje tím, že sloučenina vzorce

- 6 S=C-SMe \

OR kde

Me je alkalický kov nebo kov alkalických zemin, a R, který se definuje stejně jako Rt a R2, reaguje s platinovým komplexem, jako cis-dichlorodiamminplatin(ll), a izoluje se získaný nový platinový komplex.

Sloučeniny vzorce (I) jsou vhodné k léčbě různých rakovinových onemocnění, jako například tumoru varlete, ovariálního karcinom, karcinomu močového měchýře, karcinomu tračníku, karcinomu prostaty, bronchiálního karcinomu malých a nemalých buněk, karcinomu oblasti hlavy a krku, karcinomu oblasti hrudníku a břicha, karcinomu děložního hrdla a endometria, sarkomu, melanomu a leukémie. Přednost má terapie malobuněčného bronchiálního karcinomu nebo kolorektálního karcinomu. Terapie se může použít také jako doprovodná terapie k radioterapii nebo před popřípadě po chirurgickém zásahu.

Sloučeniny vzorce (I) jsou dobře přijatelné. Hodnota L50 je o faktor 3 nižží než pro v tumorové terapii známý cisplatin. Při dávkování, které má dobré antitumorové účinky, se neprojevují vedlejší účinky. Zejména se nevyskytuje u thioplatinových sloučenin nefrotoxicita, která je u cisplatinu známá a obávaná. Další výhodou sloučenin podle vynálezu je, že mají široké spektrum účinnosti proti nejrůznějším tumorům a zejména působí proti tumorům, které doposud odolávaly terapii s platinovými sloučeninami (například cisplatin). Thioplatin je vhodný zejména pro pevné tumory.

Další výhodou je, že sloučeniny podle vynálezu mají vyšší účinnost v slabě kyselé než v alkalické oblasti hodnoty pH, protože mnoho tumorových tkání vykazuje spíše kyselé prostředí. Vynálezci provedli vyšetření s bis[oethyldithiokarbonytojplatnatým komplexem, platinovým koordinačním komplexem podle vzorce (I), kdetvoří platina s atomem síry komplex. Po protonizaci se štěpí reverzibilně dvě vazby síry na platinu (takže vzniká „aquakomplex“), které iniciuje zesítění DNA. Po zvýšení hodnoty pH disociují protony z atomů síry a vznikne opět inertní molekula. Je proto možné sestavit následující reakční rovnici v závislosti na hodnotě pH:

CH₃CH₂-O-C^ P< _>C-O-CH₂CH, + 2H + 3H₂O

CH3CH2-O-

SH

C-O-CH7CH3

Z této rovnice je zřejmé, že posunutí hodnoty pH do oblasti slabě kyselé způsobuje vznik vlastní reaktivní sloučeniny z „prekurzoru“ podle vzorce (I). Tento koncept se potvrdí na příkladech.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu se mmohou podávat různými způsoby, například orálně, parenterálně, kutánně, subkuánně, intravenozně, intra-muskulámě, rektálně nebo intratumorálně. Přednost má intravenozní nebo intratumorální podávání, t.zn. podávání do určených nemocných orgánů nebo oblastí těla. Farmaceutický prostředek se pacientům podává po dobu, kterou určí lékař. Farmaceutický prostředek se může podávat jak lidem tak savcům.

Dávkování sloučeniny podle vynálezu určí lékař podle pacientových specifických parametrů jako například podle stáří, hmotnosti, pohlaví, závažnosti onemocnění atd. Dávka se především pohybuje mezi 0,001 a 1000 mg/kg tělesné hmotnosti.

- 8 ······· · · ·· · · • · · · · ··· ··· · ·· ···· «· ···

Podle způsobu podávání se farmaceutický prostředek formuluje ve vhodné formě, například ve formě jednoduchých nebo dražovaných tablet, tvrdých nebo měkých želatinových kapslí, prášku pro rekonstituci před použitím, granulátů, čípků, ovula, injekčních preparátů, infuzních roztoků, pomád, krémů, gelů, mikrosféry, implantátů, které se vyrábějí obvyklým galenickým způsobem.

Sloučeniny vzorce (I) mohou být případně formulovány společně s dalšími účinnými látkami a s obvyklými excipicienty farmaceutického složení, například podle vyrobeného praparátu mastek, arabská guma, laktóza, škrob, megnesiumstearát, kakaové máslo, vodné a nevodné nosiče, tuky živočišného nebo rostlinného původu, parafinové deriváty, glykoly (zejména polyethylenglykol), různá změkčovadla, disperzní prostředky nebo emulgátory, konzervační látky.

Pro výrobu tekutých preparátů se mohou použít aditiva jako roztok chloridu sodného, ethanol, sorbit, glycerin, olivový olej, mandelový olej, propylenglykol nebo ethylenglykol.

Přednostně se vyrábí infuzní nebo injekční roztoky. To jsou především vodné roztoky nebo suspenze, které je možné vyrábět před upotřebením, například z lyofilizovaných preparátů, které už obsahují účinnou látku nebo společně s nosičem, jako mannit, laktóza, glukóza, albumin a podobných. Roztoky pro spotřebu se sterilizují a případně smíchájí s pomocnými látkami, například s konzervačními látkami, stabilizátory, emulgátory, rozpouštědly, pufry a/nebo soli na regulaci osmotického tlaku. Sterilizace se může dosáhnout sterilní filtrací filtrem s malou velikostí pórů, po které může být složení případně lyofilizováno. Může se také přidat nepatrné množství antibiotik, aby se podpořilo zachování sterility.

- 9 Výhodné je zhotovení farmaceutického prostředku podle vynálezu v jednotné dávkovači formě pro podávání savci, který vyžaduje léčbu rakoviny.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků případně farmaceutických složení, která obsahují terapeuticky účinná množství aktivní obsahové látky (sloučeninu podle vynálezu vzorce (I)) společně s organickými nebo anorganickými inertními pevnými nebo tekutými farmaceuticky přijatelnými nosiči případně ředidly, která jsou vhodná pro zamýšlená podávání, a která s aktivními obsahovými látkami nezpůsobí škodlivou změnu účinku.

Vynález se týká také výroby farmaceutického složení, které se vyznačuje tím, že se sloučenina podle vynálezu vzorce (I) smíchá s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Mezi medikamenty podle vynálezu je možné zahrnout zejména ty sloučeniny, které jsou popsány v experimentální části a zvláště ty sloučeniny, u kterých ve výše uvedeném vzorci (I) R1 a/nebo R2, které mohou být stejné nabo odlišné, znamenají skupinu methyl, ethyl, propyl nebo isopropyl.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu případně farmaceutická složení obsahují jako účinnou látku nejméně jednu z výše uvedených účinných látek. Případně mohou být do složení přijaty ještě další farmaceutické účinné látky, jako například imunosupresiva, například cyklosporin, rapamycin, 15desoxyspergualin, OKT3, azythioporin; cytokiny (například TNF), interferon atd. Dále může složení podle vynálezu obsahovat steroid nebo další cytostatika (například cisplatin, methotrexát, aminopterin, dakarbazin, nitrozo sloučeniny močoviny, fluoruracil, bleomycin, daunomycin, daunorubicin, doxorubicin, mithramycin, mitomycin C atd).

• ··*··· · · ·

-10- .:. :

Vynález se dále objasní na obrázcích:

Obr.1:	Tumorová regrese příp. tumorový růst po léčení bronchiálního karcinomu malých buněk sloučeninou podle vynálezu příp. kontrolou
Obr.2:	Antitumorový účinek sloučeniny podle vynálezu na lidský tračníkový karcinom v lysé myši
Obr. 3:	Účinnost cytostatik v závislosti na hodnotě pH
Obr. 4:	Antitumorový účinek thioplatinu na lidský xenotransplantát
Obr. 5:	Histopatologie ledviny a tenkého střeva po léčení thioplatinem a cisplatinem

Vynález se blíže objasní následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Způsob výroby diethylxantogenát plstnatých komplexů (bis-[o ethyldithio-karbonato]platinatý komplex)

mmol cis-dichlorodiamminplatnaý komplex se rozpustil v 600 ml destilované vody a za míchání se přidalo 10 mmol kaliumethylxantogenátu. Míchá se při pokojové teplotě šest hodin. Vzniklá usazenina se odfiltruje, třikrát se promyje destilovanou vodou a suší ve vakuu. Po rekrystalizací z teplého acetonu se získá produkt ve formě žlutých krystalů.o čistotě větší než 98% a výtěžku 68%.

CH₅CH--O-cý 'ýc—O— CH₂CH₃

Příklad 2

Vyrobí se následující farmaceutické složení:

Byly vyrobeny injekční suspenze následující formulace:

Sloučenina příkladu 1 ........................................................ 1 g

Excipiens (vodný disperzní roztok):

Benzylalkohol, polyethylenglykol 900, karboxymetylceluloza (sodná sůl), chlorid sodný, voda pro injekční preparát na jednu ampuli...................................... 1 ml

U významných testů se zvyšuje koncentreace PEG až na 5% roztok, aby se roztok stabilizoval.

• · · · · · *

Λ · · · · · « ·

- 12 ······ · · « · V • · · · · · · · *· · · ·

Příklad 3

Farmakologický výzkum sloučeniny podle příkladu 1

a) Antitumorové účinky na lidský bronchiální karcinom malých buněk u lysé myši

Buňky bronchiálního karcinomu (SCLC) byly implantovány pod kůži šest týdnů starým Nu/Nu-myším, kmen NMRI (5x10⁶ buněk v 0,1 ml roztoku kuchyňské soli). Po dvou týdnech dosáhly tumory velikosti asi 8 mm. Potom se léčilo vždy pět myší buď 0,2 ml roztokem kuchyňské soli/0,1%BSA/1% acetonu (kontrolní skupina) nebo 10 mg/kg sloučeniny podle příkladu 1 v roztoku kuchyňské soli/1%BSA/1% acetonu (léčená skupina) i.v.. Růst tumoru byl denně kontrolován. Hodnoty jsou zobrazeny v přiloženém obr.1.

Je zřetelně vidět, že se u myší (léčená skupina) léčených sloučeninou podle příkladu 1 velikost tumoru zmenšila, zatímco u myší kontrolní skupiny růst tumoru stále stoupal.

b) Antitumorový účinek sloučeniny podle příkladu 1 na lidský karcinom tračníku u lysé myši.

Buňky tračníkového karcinomu (SW707) byly implantovány pod kůži 6 týdnů starým Nu/Nu-myším, kmen NMRI (5x10⁶ buněk v roztoku kuchyňské soli). Jakmile po 10 dnech dosáhly tumory velikosti ca. 10 mm, bylo léčeno vždy 6 myší buď 0,2 ml roztoku kuchyňské soli/1%BSA/1% acetonu (kontrolní skupina), 7,5 mg/kg sloučeniny podle příkladu 1 v roztoku kuchyňské soli/1%BSA/1% acetonu (léčená skupina I) i.v. nebo 10 mg/kg císplatinu

- 13 ·· · · · · · · · • * · < · · « 9 · «« ··· · · · · · · ······· · · · · · · • · « · · ··« ··· · ·· *··· »· ··· (léčená skupina II) i.v.. Růst tumoru byl denně kontrolován a na obr.2 graficky vynesen.

Z obr.2 je možné vyvodit, že růst tumoru se u léčené skupiny I zabrzdil, zatímco u kontrolní skupiny a léčené skupiny II je možné pozorovat stálý růst tumoru. Z toho je vidět, že sloučeniny podle vynálezu daleko překrývají cisplatin a také rozvíjejí účinnost proti tumorům, která se v takové míře u platinových sloučenin neprojevovala. Thioplatinové sloučeniny mají oproti dosavadním cytostatikům rozšířené spektrum působení.

Příklad 4

Účinnost cytostatik v závislosti na hodnotě pH

Buňky Hela byly rozprostřeny na linbrodestičkách (10⁵) a byly po 6 hodinách různými koncentracemi cisplatinu popřípadě sloučeninou podle příkladu 1 v bazálním prostředí podle Eagla, které obsahuje buď 2,2 g (pH 7,4) nebo 0,85 g (pH 6,8) uhličitanu sodného a 10% fetální telecí sérum, na 24 hodin při teplotě 37°C inkubovány v 5% CO₂ atmosféře . Počet živých buněk se určilo po zabarvení živých buněk barvivém Trypanblau v počítací komoře podle Neubauera. Výsledek je vidět z obr. 3.

Sloučenina podle příkladu 1 má překvapivě maximální účinky ve slabě kyselé oblasti, zatímco původní cytostatikum cisplatin působí lépe v alkalické oblasti. Protože tumorová tkáň prokazuje často slabě kyselou hodnotu pH, je jasné, že sloučenina podle příkladu 1 prokazuje touto vlastností vyšší účinnost než původní cytostatika.

Příklad 5

Závislost vestavby platiny na hodnotě pH

Buňky Hela (10⁷) byly rozprostřeny v petrimiskách a o 4 hodiny později byly buňky obklopeny prostředím, které obsahovalo buď 2,2 g/l (pH 7,4) nebo 0,85 g/l (pH 6,8) NaHCOs. Po úpravě na 5% CO2 atmosféru byl cisplatin nebo thioplatin upraven na konečnou koncentraci 33 μΜ. 4 hodiny po přidání platiny byla vždy jedna miska každé léčené skupiny 5 krát promyta 50 ml studeným PBS. Buňky byly z destiček seškrábnuty a obsah Pt byl stanoven metodou neutronové aktivace. K tomu byly po vymrazení do sucha vzorky a Pt-stadard na 30 minut ozařovány neutrony (5x10¹² n cm'² sec'¹). Po týdnu bylo stanoveno γ-záření 158,4 keV a 208,2 keV a stanovena koncentrace platiny pomocí standardu. Detekční limit byl 2 ng.

Na ostatních miskách byla 16 hodin po inkubaci izolována DNA extrakcí fenolem/chloroformem v doprovodu etanolové precipitace. Obsah platiny od 100 μg byl stanoven metodou neutronové aktivace.

Léčba	Obsah platiny	Obsah platiny
	Buňky celkem	DNA
	(ng/10⁷ buněk)	(ng/mg)
neléčeno, pH 6,8	< 1	< 10
neléčeno, pH 7,4	< 1	< 10
CisPt, pH 6,8	140	14,6
CisPt, pH 7,4	156	140

····»· · · · * · • · · · · · • ♦ · ···· ·

13870

1760

- 15 ThioPt, pH 6,8

ThioPt, pH 7,4

4780

3680

Z výše uvedených hodnot vyplývá, že po inkubaci thioplatinem při slabě kyselé honotě pH 6,8 bylo na DNA vázáno téměř 8 krát větší množství platiny než při inkubaci při pH 7,4. Při inkubaci cisplatinem byl vidět obrácený efekt, t.zn. 10 krát více DNA bylo vázáno při pH 7,4 na cisplatin než při pH 6,8. Přijímání platiny buňkami bylo na pH nezávislé. Celkový příjem byl totiž 30100 krát vyšší při použití thioplatinu než při cisplatinu.

Příklad 6

Závislost cytotoxicity na hodnotě pH

Buňky byly rozprostřeny v linbromiskách a o 4 hodiny později obklopeny prostředím, které obsahovalo buď 2,2 g/l (pH 7,4) nebo 0,85 g/l (pH 6,8) NaHCC>3 . Po nastavení 5% CO2 atmosféry byl přidán cisplatin nebo thioplatin na koncentrace mezi 5 a 150 μΜ. Počet živých buněk byl stanoven o 24 hodiny později a hodnoty IC₅₀ a IC₉₉ byly odečteny z křivek odpovídajících dávkám (standartní odchylky po 10% ve všech případech).

Buněčná Typ buňky IC50 pH6,8/7,4 IC₉₉ pH6,8/7,4 IC₅₀ pH6,8/7,4 IC₉₉ pH6,8/7,4 linie cisplatin (μΜ) cisplatin (μΜ) thioplatin (μΜ) thioplatin (μΜ)

HeLa lidský kare.

dělož.hrdla 86/25 111/54

H10 lidský bronch.

5/51 16,3/>55 kare.mal.buněk 72/42 >150/90

5,1/15,4

13,2/30,8 • ♦ ·· ·· φφ « ··· · φ · · φ · · · • · · φ φ » φφφ φ φ φ φ φ ♦ φ φ φ φφ φ φ • φ φ · φ φφφ φφφ φ φφ «··· φφ φφφ

SW707	lidský kare.	90/38,4	3,7/13,2	7,5/26,4
tračníku	9,6/<4,8
CV1	kare.ledvin
	u myši	>150/>150	>150/>150	3,9/23	13,2/106
Capan2	lidský kare.
	slinivky	143/139	>150/>150	17,3/50,6	40,9/99
Dan-G	lidský kare.
	slinivky	45/36	78/72	15,4/52,8	20,9/64,5
Jurkat	lidský T buň.
	lymfom	52,5/54	120/126	6,8/21,1	13,6/132
S180	myší sarkom	63/24	>150/114	16,5/63,8	37,5/>110

Z tabulky je vidět, že cytotoxicita byla téměř u všech buněčných linií pro thioplatin při pH 6,8 mnohem lepší než při pH 7,4, zatímco u cisplatinu se získaly obrácené výsledky, t.zn. lepší účinnost při pH 7,4. Ve všech případech měl thioplatin 2 až 8 krát nižší IC₅₀ při pH 6,8 než při pH 7,4. U cisplatinu byla hodnota IC₅₀ při pH 6,8 horší než při pH 7,4 nebo neexistoval žádný prokazatelný pH efekt.

Příklad 7

Antitumorový efekt thioplatinu na lidský xenotransplantát

Odkazuje se na obr. 4

Lidské buňky H10 bronchiálního karcinomu malých buněk (A) nebo buňky

SW707 kolorektálního karcinomu (B) byly subkutánně injektovány do Nu/Numyší a o 12 dnů později, když tumory dosáhly průměru 8-10 mm, dostalo 5 myší jednotlivě injekci buď s 10% tweenu 80 (hvězdičky; = kontrola), 10 mg/kg ·· ·· ·♦ • < · · · ·

- 17 ······· 9 · * · · • · · · · · · • · · ♦ · · · · · · ♦· · cisplatin (trojhran) nebo s 10 mg/kg thioplatinu rozpuštěného na koncentraci o 1 mg/ml v 10% tweenu 80 (kvadrát). Velikosti tumorů byly satnoveny ve dvou směrech a relativní tumorový růst byl spočítán. Střední hodnoty jsou uvedeny na obr. 4.

(C): Střední tělesné hmotnosti skupiny s bronchiálním karcinomem malých buněk. Standartní odchylky byly menší než 3%.

Z obrázku 4 vyplývá, že cisplatin u buněk H10 byl účinný, zatímco u kolorektálního karcinomu (SW707) se dokonce při dávce 10 mg/kg neprojevil žádný účinek. Ve stejné dávce byl thioplatin účinný u obou druhů karcinomu. Střední velikost tumoru skupiny léčené thioplatinem byla menší než u skupiny léčené cisplatinem. Thioplatinem se velikost tumoru u bronchiálního karcinomu malých buněk zmenšila na 23% kontrolní skupiny (t.zn. zmenšení na ca. 1/4 kontroly), zatímco cisplatinem byla dosažena poloviční velikost ve srovnání s kontrolou (obr.4A). V případě kolorektálního karcinomu neukázal cisplatin žádný efekt, zatímco se thioplatinem zabránilo růstu tumoru (obr. 4B).

Ztráta hmotnosti je hrubým odhadem toxických vedlejších účinků. Zatímco myši léčené cisplatinem dosáhli ztráty 12% a 13% ve 3 a 6 dni po léčení, nebyla u skupiny léčené thioplatinem zjištěna žádná ztráta hmotnosti (obr. 4C).

Příklad 8

Výzkum vlivu toxicity na ledviny a tenké střevo • ·

- 18 Odkazuje se na obr.5.

Švýcarské myši obdrželi i.p. dávku buď 15 mg/kg cisplatinu (A,C) nebo 20 mg/kg thioplatinu (B,D). O čtyři dny později byly zhotoveny histologické řezy tenkého střeva (A,B) a ledvin (C,D) a zbarveny hematoxylinem a eosinem.

U myší léčených cisplatinem ukázaly ledviny těžkou degeneraci a vakuolizaci tubuli (obr.5C). Struktura tenkého střeva byla z velké části poškozena a bylo možné vidět v lamina propria (obr. 5A) velké infiltráty. Naproti tomu nechává léčení vysokou dávkou o 10 mg/kg thioplatimríu strukturu ledvin (obr. 5D) a tenkého střeva (obr.5B) nedotčenu.

Claims

Patentové nároky

1) Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, že obsahují nejméně jednu sloučeninu obecného vzorce (I)

R,-O-<^SX^C-O-R_{2 (I)}

S S kde skupiny R^ a nezávisle na sobě znamenají přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku, přímý nebo rozvětvený alkenylový zbytek se 2 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkenylový zbytek se 4 až 30 atomy uhlíku nebo monocyklický nebo polycyklický aromatický zbytek se 6 až 30 atomy uhlíku, přičemž tyto zbytky mohou být případně substituovány jedním nebo více substituenty.
2) Farmaceutické prostředky podle nároku 1, kde ve sloučenině vzorce (I) Ri a R₂ znamenají přímý Ci.₁₄ -alkylový zbytek nebo C3-14 -cykloalkylový zbytek.
3) Farmaceutické prostředky podle nároku 1 nebo 2, kde ve sloučenině vzorce (I) znamenají Ri a R₂ skupinu CH3CH₂.
4) Farmaceutické prostředky podle nároků 1 až 3, přičemž sloučenina vzorce (I) znamená dimethylxantogenát platnatý komplex nebo diethylxantogenát platnatý komplex.
5) Farmaceutické prostředky podle nároků 1 až 4, obsahující navíc iminosupresivní sloučeninu zvolenou z cyklosporinu, rapamycinu, 15-desoxyapergualinu, OKT3 a azathioprinu.
6) Farmaceutické prostředky podle nároků 1 až 4, obsahující navíc cytokiny, interferony nebo další cytostatika.
7) Farmaceutické prostředky podle nároků 1 až 6 připravené v jednotné dávkovači formě pro podávání savci, který vyžaduje léčbu prostředkem proti rakovině.
8) Farmaceutické prostředky podle nároků 1 až 7 obsahující dále farmaceuticky přijatelný inertní nosič nebo ředidlo.
9) Použití farmaceutických prostředků podle jednoho z nároků 1 až 8 k léčbě rakovinového onemocnění.
10) Použití podle nároku 9, přičemž rakovinovým onemocněním je bronchiální karcinom malých buněk nebo karcinom tračníku.
11) Způsob výroby farmaceutických prostředků podle jednoho z nároků 1 až

8, v y z n a č u j í c í se t í m, že se sloučenina podle vzorce (I) smíchá s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.