ES2312568T3 - Combinaciones antineoplasicas que comprenden cci-779 (derivado de rapamicina) junto con gemcitabina o fluoruracilo. - Google Patents

Abstract

Utilización de una combinación constituida por 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2metilpropiónico [CCI-779]; un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina; y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.

Description

Combinaciones antineoplásicas que comprenden CCI-779 (derivado de rapamicina) junto con gemcitabina o fluorouracilo.

La presente invención se refiere a combinaciones antineoplásicas, más particularmente a la utilización de combinaciones de un inhibidor de mTOR (42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico (CCI-779)) y un agente antineoplásico antimetabolito seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina en el tratamiento de neoplasias.

Antecedentes de la invención

La rapamicina es un antibiótico triénico macrocíclico producido por Streptomyces hygroscopicus, que demostró tener actividad antifúngica, especialmente contra Candida albicans, tanto in vitro como in vivo [C. Vezina et al., J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H. A. Baker et al., J. Antibiot. 31, 539 (1978); patente US nº 3.929.992 y patente US nº 3.993.749]. Además, la rapamicina sola (Patente US nº 4.885.171) o en combinación con picibanil (Patente US nº 4.401.653) ha demostrado tener actividad antitumoral.

Los efectos inmunosupresores de la rapamicina se han descrito en FASEB 3, 3411 (1989). La ciclosporina A y el FK-506, otras moléculas macrocíclicas, han demostrado asimismo ser eficaces como agentes inmunosupresores, y, por consiguiente, útiles en la prevención del rechazo de trasplantes [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R. Y. Calne et al., Lancet 1183 (1978) y patente US nº 5.100.899]. R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)] describieron que la rapamicina era eficaz en el modelo de encefalomielitis alérgica experimental, un modelo de esclerosis múltiple; en el modelo de artritis con adyuvantes, un modelo de artritis reumatoide; y que inhibía de forma eficaz la formación de anticuerpos de tipo IgE.

La rapamicina es útil también para la prevención o el tratamiento del lupus eritematoso sistémico [Patente US nº 5.078.999], inflamación pulmonar [Patente US nº 5.080.899], diabetes mellitus dependiente de insulina [Patente US nº 5.321.009], trastornos de la piel tales como psoriasis [Patente US nº 5.286.730], trastornos intestinales [Patente US nº 5.286.731], proliferación de las células musculares lisas y engrosamiento de la íntima tras lesión vascular [Patentes US n^{os} 5.288.711 y 5.516.781], leucemia/linfoma de células T del adulto [Solicitud de patente europea nº 525.960 A1], inflamación ocular [Patente US nº 5.387.589], carcinomas malignos [Patente US nº 5.206.018], enfermedad cardíaca inflamatoria [Patente US nº 5.496.832] y anemia [Patente US nº 5.561.138].

El 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico (CCI-779) es un éster de rapamicina que ha demostrado tener efectos significativos inhibidores del crecimiento de tumores tanto en modelos in vitro como in vivo. La preparación y la utilización de hidroxiésteres de rapamicina, incluido CCI-779, se describen en la patente US nº 5.362.718.

El CCI-779 tiene propiedades citostáticas, en vez de citotóxicas, y puede retrasar el tiempo hasta la progresión de los tumores o el tiempo hasta la recidiva del tumor. Se considera que el CCI-779 tiene un mecanismo de acción similar al del sirolimús. El CCI-779 se une a la proteína citoplásmica FKBP formando un complejo que inhibe la enzima mTOR (la diana de la rapamicina en los mamíferos, también denominada proteína asociada a FKBP12-rapamicina [FRAP]). La inhibición de la actividad quinasa de mTOR provoca la inhibición de diversas rutas de transducción de señales, incluidas la proliferación celular estimulada por citocinas, la traducción de los ARNm de varias proteínas fundamentales para la regulación de la fase G1 del ciclo celular, y la transcripción inducida por IL-2, dando lugar a una inhibición de la progresión del ciclo celular de G1 a S. El mecanismo de acción del CCI-779 que da lugar al bloqueo de la transición de la fase G1 \rightarrow S es nuevo en un fármaco antineoplásico.

Se ha comprobado que el CCI-779 inhibe in vitro la proliferación de células tumorales de diversos tipos histológicos. Entre las líneas más sensibles a CCI-779 se encontraban las derivadas de cáncer del sistema nervioso central (SNC), leucemia (linfocitos T), cáncer de mama, cáncer de próstata y melanoma. El compuesto paralizaba las células en la fase G1 del ciclo celular.

Los estudios in vivo en ratones atímicos han demostrado que el CCI-779 presenta actividad contra xenoinjertos tumorales humanos de diversos tipos histológicos. Los gliomas fueron particularmente sensibles al CCI-779, y el compuesto era activo en un modelo de glioma ortotópico en ratones atímicos. La estimulación, inducida por factores de crecimiento (derivados de plaquetas), de una línea celular de glioblastoma humano in vitro fue claramente suprimida por el CCI-779. El crecimiento de varios tumores pancreáticos humanos en ratones atímicos, así como una de dos líneas celulares de cáncer de mama estudiadas in vivo, también fue inhibido por el CCI-779.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona la utilización de combinaciones de un inhibidor de mTOR y un agente antineoplásico antimetabolito como quimioterapia antineoplásica de combinación. En particular, dichas combinaciones son útiles para el tratamiento del cáncer renal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de mama, tumor neuroendocrino del pulmón, cáncer de cuello de útero, cáncer de útero, cáncer de cabeza y cuello, glioma, cáncer pulmonar no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, linfoma, melanoma, cáncer pulmonar microcítico, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer gástrico, leucemia, cáncer colorrectal, y cáncer primario desconocido. La presente invención también proporciona combinaciones de un inhibidor de mTOR y un agente antineoplásico antimetabolito para su utilización en quimioterapia antineoplásica de combinación, en la que la dosis del inhibidor de mTOR o del agente antineoplásico antimetabolito, o de ambos, se utiliza en cantidades eficaces subterapéuticas.

Tal como se utiliza en la presente invención, el término "tratamiento" significa tratar a un mamífero que sufre una neoplasia proporcionando a dicho mamífero una cantidad eficaz de una combinación de un inhibidor de mTOR y un agente antineoplásico antimetabolito con el fin de inhibir el crecimiento de la neoplasia en dicho mamífero, erradicar la neoplasia, o paliar la dolencia del mamífero.

Tal como se utiliza en la presente invención, el término "proporcionar", cuando se refiere a proporcionar la combinación, significa administrar directamente la combinación, o administrar un profármaco, derivado o análogo de uno o de ambos componentes de la combinación, que formarán una cantidad eficaz de la combinación en el organismo.

La proteína mTOR es la diana de la rapamicina en los mamíferos, también denominada proteína asociada a FKBP12-rapamicina [FRAP]. La inhibición de la actividad quinasa de mTOR provoca la inhibición de diversas rutas de transducción de señales, incluidas la proliferación celular estimulada por citocinas, la traducción de los ARNm de varias proteínas fundamentales para la regulación de la fase G1 del ciclo celular, y la transcripción inducida por IL-2, dando lugar a una inhibición de la progresión del ciclo celular de G1 a S.

La proteína mTOR regula la actividad de por lo menos dos proteínas que participan en la traducción de proteínas específicas reguladoras del ciclo celular (Burnett, P. E., PNAS 95: 1432 (1998) e Isotani, S., J. Biol. Chem. 274: 33493 (1999)). Una de dichas proteínas, la quinasa p70s6, es fosforilada por mTOR en la serina 389 y la treonina 412. Esta fosforilación puede observarse en células tratadas con factores de crecimiento mediante análisis por inmunoelectrotransferencia de extractos de células enteras con anticuerpos específicos para el residuo de fosfoserina en la posición 389.

Tal como se utiliza en la presente invención, un "inhibidor de mTOR" significa un compuesto o ligando que inhibe la replicación de las células bloqueando la progresión del ciclo celular desde G1 a S mediante la inhibición de la fosforilación de la serina 389 de la quinasa p70s6 por mTOR.

Se puede utilizar el siguiente procedimiento estándar de análisis farmacológico para determinar si un compuesto es un inhibidor de mTOR, como se define la presente memoria. El tratamiento de células, estimuladas con factores de crecimiento, con un inhibidor de mTOR como la rapamicina bloquea completamente la fosforilación de la serina 389 como se demuestra por inmunoelectrotransferencia, y, como tal, constituye un buen ensayo para la inhibición de mTOR. De este modo, los lisados de células completas procedentes de células estimuladas con un factor de crecimiento (por ejemplo, IGF1) en cultivo en presencia de un inhibidor de mTOR no deberían mostrar una banda en un gel de acrilamida susceptible de ser marcada con anticuerpo específico para la serina 389 de p70s6K.

Materiales

\vskip1.000000\baselineskip

1

2

Métodos A. Preparación de los lisados celulares

Se cultivaron líneas celulares en medio basal óptimo enriquecido con suero de ternero fetal al 10% y penicilina/estreptomicina. Para los estudios de fosforilación las células se subcultivaron en placas de 6 pocillos. Una vez adheridas las células, se cultivaron en ausencia de suero. El tratamiento con inhibidores de mTOR duraba entre 2 y 16 horas. Después del tratamiento con los fármacos, las células se lavaron una vez con PBS (solución salina tamponada con fosfato, sin Mg++ ni Ca++) y después se lisaron en 150-200 \mul por pocillo de tampón de muestras con LDS NuPAGE. Los lisados se sonicaron brevemente y después se centrifugaron durante 15 minutos a 14.000 rpm. Los lisados se almacenaron a -80ºC hasta su utilización.

El procedimiento de análisis puede realizarse también incubando las células en medio de cultivo durante toda la noche, después de haberse adherido completamente. Los resultados con ambos grupos de condiciones deberían ser iguales para un inhibidor de mTOR.

B. Análisis por inmunoelectrotransferencia

1)

Se preparan muestras de proteínas totales transfiriendo 22,5 \mul del lisado por tubo, y añadiendo después 2,5 \mul de agente reductor de muestras NuPAGE. Se calientan las muestras a 70ºC durante 10 minutos. Se lleva a cabo la electroforesis utilizando geles NuPAGE y tampones con SDS NuPAGE.

2)

Se transfiere el gel a la membrana de nitrocelulosa con tampón de transferencia NuPAGE. Las membranas se bloquearon durante 1 hora con tampón de bloqueo (solución salina tamponada con Tris con Tween al 0,1% y leche desnatada al 5%). Se lavan las membranas 2x con tampón de lavado (solución salina tamponada con Tris con Tween al 0,1%).

3)

Las inmunoelectrotransferencias/membranas se incuban con el anticuerpo primario P-p70 S6K (T389) (1:1000) en tampón de bloqueo durante toda la noche a 4ºC en una plataforma rotatoria.

4)

Las inmunoelectrotransferencias lavan 3x durante 10 minutos cada vez con tampón de lavado, y se incuban con anticuerpo secundario (1:2.000) en tampón de bloqueo durante 1 hora a temperatura ambiente.

5)

Tras la unión del anticuerpo secundario, las inmunoelectrotransferencias se lavan, 3x durante 10 minutos cada vez con tampón de lavado, y 2x durante 1 minuto cada vez con solución salina tamponada con Tris, seguido por la detección de la quimioluminiscencia (ECL) y la exposición a películas sensibles a la quimioluminiscencia.

Como se describe en la presente memoria, se utiliza CCI-779 como inhibidor de mTOR en las combinaciones de inhibidor de mTOR y antimetabolito de la presente invención.

La preparación de CCI-779 se describe en la patente US nº 5.362.718. Cuando se utiliza CCI-779 como agente antineoplásico, está previsto que las dosis iniciales de infusión intravenosa estén comprendidas entre aproximadamente 0,1 y 100 mg/m^{2} cuando se administre en una pauta posológica de una vez al día (diariamente durante 5 días, cada 2-3 semanas), y entre aproximadamente 0,1 y 1000 mg/m^{2} cuando se administre en una pauta posológica de una vez a la semana. Las vías oral o por infusión intravenosa son las vías preferidas de administración, siendo la vía intravenosa la más preferida.

Tal como se utiliza en la presente invención, el término "antimetabolito" significa una sustancia que es estructuralmente similar a un intermediario natural fundamental (metabolito) de una ruta bioquímica para la síntesis de ADN o de ARN utilizado por el hospedador en dicha ruta, pero que actúa inhibiendo la consumación de dicha ruta (es decir, la síntesis de ADN o de ARN). Más específicamente, los antimetabolitos funcionan típicamente (1) compitiendo con metabolitos por el sitio catalítico o regulador de una enzima clave de la síntesis de ADN o de ARN, o (2) reemplazando a un metabolito que se incorpora normalmente en el ADN o en el ARN, y produciendo de este modo un ADN o un ARN que no puede replicarse. Las principales categorías de antimetabolitos incluyen (1) análogos del ácido fólico, que son inhibidores de la dihidrofolato-reductasa (DHFR); (2) análogos de purina, que imitan a las purinas naturales (adenina o guanina) pero son estructuralmente diferentes, de modo que inhiben de forma competitiva o irreversible el procesamiento nuclear del ADN o del ARN; y (3) análogos de pirimidina, que imitan a las pirimidinas naturales (citosina, timidina y uracilo) pero que son estructuralmente diferentes, de modo que inhiben en forma competitiva o irreversible el procesamiento nuclear del ADN por el ARN.

Los ejemplos siguientes son representativos de antimetabolitos de la presente invención.

El 5-fluorouracilo (5-FU; 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pirimidinadiona) está comercializado en forma de crema para uso tópico (FLUOROPLEX o EFUDEX), en forma de solución para uso tópico (FLUOROPLEX o EFUDEX), y en forma de inyectable que contiene 50 mg/ml de 5-fluorouracilo (ADRUCIL o flurouracilo).

\newpage

La gemcitabina (monoclorhidrato de 2'-deoxi-2',2'-difluorocitidina (isómero beta) está comercializada en forma de líquido inyectable que contiene entre 200 mg-1 g/vial (GEMZAR).

La siguiente tabla resume brevemente algunas de las dosis recomendadas para los antimetabolitos mencionados anteriormente.

3

La presente invención también cubre la utilización de un inhibidor de mTOR junto con con el antimetabolito en la que un agente modificante bioquímico es parte de una pauta quimioterapéutica. El término "agente modificante bioquímico" es bien conocido y entendido por los expertos en la materia como un agente que se administra como aditivo en un tratamiento con antimetabolito, y que sirve para potenciar su actividad antineoplásica, así como para contrarrestar los efectos secundarios del antimetabolito. La leucovorina y el levofolinato se utilizan típicamente como agentes modificantes bioquímicos para el tratamiento con metotrexato y 5-FU.

La leucovorina (ácido 5-formil-5,6,7,8-tetrahidrofólico) está comercializada en forma de líquido inyectable que contiene entre 5-10 mg/ml o 50-350 mg/vial (leucovorina de calcio o WELLCOVORIN) y en forma de comprimidos orales de 5-25 mg (leucovorina de calcio).

El levofolinato (isómero farmacológicamente activo del ácido 5-formiltetrahidrofólico) está comercializado en forma de inyectable que contiene 25-75 mg de levofolinato (ISOVORIN) o en forma de comprimidos orales de 2,5-7,5 mg (ISOVORIN).

Las combinaciones preferidas de inhibidor de mTOR y antimetabolito de la presente invención incluyen CCI-779 y gemcitabina; CCI-779 y 5-fluorouracilo; y CCI-779 junto con fluorouracilo y leucovorina. Resulta preferido que la combinación de CCI-779 y gemcitabina se utilice para el tratamiento del cáncer de páncreas, y que la combinación de CCI-779 y 5-fluorouracilo (con o sin leucovorina) se utilice para tratamiento del cáncer colorrectal.

La actividad antineoplásica de la combinación de CCI-779 y antimetabolito se confirmó en procedimientos estándares de análisis farmacológico in vitro e in vivo utilizando combinaciones de CCI-779 y gemcitabina, y de CCI-779 y 5-fluorouracilo como combinaciones representativas de la presente invención. A continuación se describen brevemente los procedimientos utilizados y los resultados obtenidos.

Se utilizaron las líneas de rabdomiosarcoma humano Rh30 y Rh1 y la línea de glioblastoma humano SJ-GBM2 para los estudios in vitro de la combinación con CCI-779 y agentes antimetabolito. Para los estudios in vivo se utilizó una línea de neuroblastoma humano (NB1643) y una línea de colon humano, GC3.

Se determinaron las curvas de respuesta a la dosis para cada uno de los fármacos en cuestión. Las líneas celulares Rh30, Rh1 y SJ-G2 se sembraron en placas de grupos de seis pocillos a densidades de 6x10^{3}, 5x10^{3} y 2,5x10^{4} células/pocillo, respectivamente. Tras un período de incubación de 24 horas, se añadieron los fármacos en FBS al 10% + RPMI 1.640 para las líneas Rh30 y Rh1, o en FBS al 15% + DME para la línea SJ-G2. Tras siete días de exposición al medio con fármaco se liberaron los núcleos tratando las células con una solución hipotónica, seguido por tratamiento con un detergente. A continuación se hizo un recuento de los núcleos en un contador Coulter. Los resultados de los experimentos se representaron gráficamente y se determinó la CI_{50} (concentración del fármaco que produce una inhibición del 50% en el crecimiento) para cada fármaco por extrapolación. Debido a que las CI_{50} variaban ligeramente entre experimentos, se utilizaron dos valores que flanqueaban la CI_{50} de cada fármaco en los estudios de interacción. El punto de interacción máxima entre dos fármacos se da cuanto están presentes en una relación 1:1 si el isobolograma tiene forma estándar. Por consiguiente, se mezcló cada una de las tres concentraciones aproximadas de CI_{50} de CCI-779 en una relación 1:1 con cada uno de los tres valores aproximados de CI_{50} de gemcitabina o de 5-FU. Así se obtuvieron nueve combinaciones 1:1 de fármacos en cada experimento, junto a tres concentraciones de CI_{50} de CCI-779 y del otro fármaco. Este protocolo daba lugar normalmente a por lo menos una combinación de cada fármaco que contenía un valor de CI_{50}. La combinación 1:1 de las concentraciones de CI_{50} de CCI-779 y de cada fármaco quimioterápico se utilizó después para calcular la aditividad, la sinergia o el antagonismo, empleando la fórmula de Berenbaum: x/X_{50}+y/Y_{50}, = 1, < 1, > 1. Si las tres concentraciones analizadas de CCI-779 solo no producían una CI equivalente a cualquiera de las tres CI del otro compuesto analizado solo, se controlaban todas las combinaciones 1:1 para comprobar si las CI se encontraban dentro de los valores adecuados de las CI de los fármacos analizados por separado. En caso afirmativo, el efecto se consideraba aditivo.

Los resultados obtenidos con el procedimiento estándar de análisis farmacológico in vitro demostraron que las combinaciones en ningún caso producían menos de un 50% de inhibición del crecimiento, lo que indicaba que las combinaciones eran por lo menos aditivas y no presentaban indicios de antagonismo.

Se sometieron ratones CBA/CaJ hembras (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME), de 4 semanas de edad a inmunodepresión por timectomía, seguido 3 semanas después por irradiación del cuerpo entero (1.200 cGy) utilizando una fuente de ^{137}Cs. Los ratones recibieron 3 x 10^{6} células nucleadas de la médula ósea en el plazo de 6-8 h tras la irradiación. Se implantaron trozos de tumores de aproximadamente 3 mm^{3} en el espacio de los flancos laterales dorsales de los ratones con el fin de iniciar el crecimiento de los tumores. Los ratones portadores de tumores fueron distribuidos de forma aleatoria en grupos de siete antes del inicio del tratamiento. Se suministraron fármacos a cada uno de los ratones portadores de tumores cuando los tumores presentaban un diámetro de aproximadamente 0,20-1 cm. El tamaño de los tumores se determinó en intervalos de 7 días, empleando un calibrador digital Vernier conectado a un ordenador. Los volúmenes de los tumores se calcularon suponiendo que tenían forma esférica y utilizando la fórmula [(\pi/6) x d^{3}], en la que d es la media del diámetro. Se administró CCI-779 en una pauta posológica de 5 días consecutivos durante 2 semanas, y repitiendo este ciclo cada 21 días durante 3 ciclos. De este modo se administró CCI-779 en los días 1-5, 8-12 (ciclo 1); 21-25, 28-32 (ciclo 2); y 42-46, 49-53 (ciclo 3). A continuación se presenta la pauta posológica para el resto de los fármacos quimioterápicos de cada estudio:

Gemcitabina en los días 1, 4, 8 solamente en el ciclo 1.

\vskip1.000000\baselineskip

La combinación de CCI-779 y gemcitabina se evaluó en un procedimiento de análisis con xenoinjerto en ratones de células de colon humano (GC3). En este procedimiento de análisis se administró CCI-779 diariamente x5 durante 2 semanas consecutivas cada 21 días durante 3 ciclos, y la gemcitabina se administró en los días 1, 4 y 8 solamente en el primer ciclo. La presencia de CCI-779 no acentuó la regresión del tumor observada en el primer ciclo de tratamiento con gemcitabina. Sin embargo, los grupos tratados con CCI-779 presentaban un retraso en el tiempo necesario para alcanzar 2-3x el volumen original del tumor antes del tratamiento (en comparación con la gemcitabina sola), lo que indica que hubo por lo menos un beneficio aditivo atribuible al tratamiento combinado.

Sobre la base de los resultados de dichos procedimientos estándares de análisis farmacológico, las combinaciones de un inhibidor de mTOR junto con un agente quimioterápico antimetabolito resultan útiles como tratamiento antineoplásico. Más particularmente, estas combinaciones son útiles para el tratamiento del carcinoma renal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de mama, tumor neuroendocrino del pulmón, cáncer de cuello de útero, cáncer de útero, cáncer de cabeza y cuello, glioma, cáncer pulmonar no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, linfoma, melanoma, cáncer pulmonar microcítico, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer gástrico, leucemia, cáncer colorrectal, y cáncer primario de origen desconocido. Dado que estas combinaciones contienen por lo menos dos agentes antineoplásicos activos, la utilización de dichas combinaciones también posibilita la utilización de combinaciones de cada uno de los agentes en las que uno o ambos agentes se utilizan en dosis eficaces subterapéuticas, con lo que se reduce la toxicidad asociada al agente quimioterápico individual.

Para proporcionar quimioterapia se utilizan típicamente múltiples agentes que tienen diferentes formas de acción, como parte de un "cóctel" quimioterápico. Está previsto que las combinaciones de la presente invención se utilicen como parte de un cóctel quimioterápico que puede contener uno o más agentes antineoplásicos en función de la naturaleza de la neoplasia que se va a tratar. Por ejemplo, la presente invención también cubre la utilización de la combinación de inhibidor de mTOR/antimetabolito empleada junto con otros agentes quimioterápicos, tales como agentes alquilantes (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, estreptozocina, melfalán, clorambucilo, carmustina, metocloretamina, lomustina, bisulfán, tiotepa, ifosfamida, o ciclofosfamida); agentes hormonales (por ejemplo, estramustina, tamoxifeno, toremifeno, anastrozol, o letrozol); antibióticos (por ejemplo, plicamicina, bleomicina, mitoxantrona, idarubicina, dactinomicina, mitomicina, doxorubicina, o daunorubicina); inmunomoduladores (por ejemplo, interferones, IL-2, o BCG); agentes antimitóticos (por ejemplo, vinblastina, vincristina, tenipósido, o vinorelbina); inhibidores de topoisomerasas (por ejemplo, topotecán, irinotecán, o etopósido); y otros agentes (por ejemplo, hidroxiurea, trastuzumab, altretamina, retuximab, paclitaxel, docetaxel, L-asparraginasa, o gemtuzumab u ozogamicina).

Tal como se utiliza en la presente invención, la pauta combinada puede administrarse de forma simultánea o puede administrarse de forma escalonada, proporcionando el inhibidor de mTOR en un momento distinto, durante el curso de la quimioterapia, del que se emplea para administrar el antimetabolito. Esta diferencia temporal entre la administración de los dos agentes puede ser de varios minutos, horas, días, semanas, o superior. Por consiguiente, el término combinación no significa necesariamente la administración al mismo tiempo o en forma de dosis unitaria, sino que cada uno de los componentes se administra durante un período de tratamiento deseado. Los agentes también pueden administrarse por vías distintas. Por ejemplo, en la combinación de un inhibidor de mTOR y un antimetabolito, se prevé que el inhibidor de mTOR se administre por vía oral o parenteral, siendo preferida la vía parenteral, mientras que el antimetabolito pueda administrarse por vía parenteral, oral, o por otros medios aceptables. Para la combinación de CCI-779 con gemcitabina, es preferible que la gemcitabina se administre por vía parenteral. Para la combinación de CCI-779 con 5-FU y leucovorina, resulta preferido que el 5-FU y la leucovorina se administren por vía parenteral. Estas combinaciones pueden administrarse diariamente, semanalmente, o incluso una vez al mes. Como es típico en las pautas posológicas quimioterapéuticas, un curso de quimioterapia puede repetirse varias semanas después, y puede seguir el mismo curso temporal para la administración de los dos agentes, o puede modificarse según la respuesta del paciente.

Por consiguiente, la presente invención también proporciona un producto que comprende el 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico [CCI-779] como inhibidor de mTOR y un agente antineoplásico antimetabolito en forma de preparación combinada para su utilización simultánea, separada o secuencial en el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.

Como es típico en la quimioterapia, las pautas terapéuticas se supervisan estrechamente por el médico encargado, teniendo en cuenta numerosos factores que incluyen la gravedad la enfermedad, la respuesta a la enfermedad, cualquier reacción tóxica relacionada con el tratamiento, la edad, el estado de salud del paciente, y otros trastornos o tratamientos concomitantes.

Sobre la base de los resultados obtenidos con las combinaciones representativas de CCI-779 y antimetabolito, se prevé que la dosis inicial por infusión i.v. del inhibidor de mTOR esté comprendida entre aproximadamente 0,1 y 100 mg/m^{2}, resulta preferido entre aproximadamente 2,5 y 70 mg/m^{2}. También resulta preferido que el inhibidor de mTOR se administre por vía i.v., típicamente durante un período de 30 minutos, y se administre aproximadamente de una vez a la semana. Las dosis iniciales del componente de antimetabolito dependerán del componente utilizado, y se basarán inicialmente en la experiencia del médico con los agentes seleccionados.

Sobre la base los resultados obtenidos con las combinaciones de CCI-779 y antimetabolito, se prevé que para la combinación de inhibidor de mTOR y gemcitabina la dosis inicial por infusión i.v. del inhibidor de mTOR estará comprendida entre aproximadamente 0,1 y 100 mg/m^{2}, resultando preferida entre aproximadamente 2,5 y 70 mg/m^{2}, y la dosis inicial por infusión i.v. de gemcitabina estará comprendida entre aproximadamente 400 y 1.500 mg/m^{2}, siendo preferible entre aproximadamente 800 y 1.000 mg/m^{2}. Está previsto inicialmente que los pacientes reciban una infusión i.v. de 30 minutos con el inhibidor de mTOR, seguida inmediatamente o precedida por una infusión i.v de 30 minutos con gemcitabina en los días 1 y 8 de un ciclo de tratamiento de 21 días. Después de uno o más ciclos de tratamiento las dosis pueden ajustarse de modo que se aumenten o disminuyan en función de los resultados obtenidos y de los efectos secundarios observados.

Sobre la base los resultados obtenidos, cuando se utiliza CCI-779 en combinación con 5-FU y leucovorina, se prevé que en una pauta posológica que emplee un inhibidor de mTOR junto con 5-FU y leucovorina la dosis inicial por infusión i.v. del inhibidor de mTOR será entre aproximadamente 0,1 y 100 mg/m^{2}, siendo preferible entre aproximadamente 2,5 y 70 mg/m^{2}; la dosis inicial por infusión i.v. de leucovorina será entre aproximadamente 50 y 500 mg/m^{2}, resultando preferida aproximadamente 200 mg/m^{2}; y la dosis inicial por infusión i.v. de 5-FU será entre aproximadamente 500 y 7.500 mg/m^{2}, siendo preferible entre aproximadamente 1.000 y 5.000 mg/m^{2}. Está previsto inicialmente que la combinación se administre siguiendo la siguiente pauta posológica: los pacientes recibirán una infusión i.v. de 1 hora con leucovorina una vez a la semana durante cada una de las 6 semanas del ciclo de tratamiento; inmediatamente después de cada dosis de leucovorina se administra 5-FU en forma de infusión i.v. continua durante 24 horas. El inhibidor de mTOR se administrará comenzando el día 8 del ciclo 1, y se suministrará una vez a la semana en forma de infusión i.v. de 30 minutos. Cada ciclo de tratamiento de 6 semanas se continúa con 1 semana de descanso antes de comenzar el siguiente ciclo de tratamiento de 6 semanas. Después de uno o más ciclos de tratamiento las dosis pueden ajustarse de modo que se aumenten o disminuyan en función de los resultados obtenidos y los efectos secundarios observados.

En el caso de los antimetabolitos comercializados puede utilizarse la forma farmacéutica existente, dividiendo las dosis según sea necesario. Como alternativa, cada uno de los agentes o antimetabolitos que no están comercializados pueden formularse siguiendo prácticas farmacéuticas estándares. Las formulaciones orales que contienen los compuestos activos de la presente invención pueden comprender cualquiera de las formas orales utilizadas habitualmente, incluidos comprimidos, cápsulas, formas para administración bucofaríngea, tabletas, pastillas para chupar y líquidos, suspensiones o soluciones orales. Las cápsulas pueden contener mezclas del compuesto o compuestos activos con sustancias de relleno y/o diluyentes inertes tales como almidones aceptables desde el punto de vista farmacéutico (por ejemplo, almidón de maíz, de patata o de tapioca), azúcares, edulcorantes artificiales, celulosas en polvo, tales como celulosas cristalinas y microcristalinas, harinas, gelatinas, gomas, etc. Pueden prepararse formulaciones útiles para comprimidos utilizando métodos convencionales de compresión, granulación por vía húmeda o granulación por vía seca, utilizando diluyentes, aglutinantes, lubricantes, disgregantes, agentes modificadores de la actividad superficial (incluidos los tensioactivos) dispersantes o estabilizantes, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, que incluyen, sin limitarse a los mismos, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, lauril sulfato de sodio, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa de calcio, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido algínico, goma arábiga, goma xantana, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, sorbitol, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones desecados y azúcar en polvo. Los agentes preferidos modificadores de la actividad superficial incluyen agentes modificadores de la actividad superficial no iónicos e iónicos. Los ejemplos representativos de agentes modificadores de la actividad superficial incluyen, sin limitarse a los mismos, poloxámero 188, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetoestearílico, cera emulsionante de cetomacrogol, ésteres de sorbitán, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, silicato de magnesio y aluminio, y trietanolamina. Las formulaciones orales descritas en la presente memoria pueden utilizar formulaciones estándares de liberación retardada o controlada para alterar la absorción del compuesto o compuestos activos. La formulación oral también puede consistir en la administración del principio activo en agua o en zumo de frutas con solubilizantes o emulsionantes apropiados, según convenga.

En algunos casos puede ser deseable administrar los compuestos directamente en las vías respiratorias en forma de aerosol.

Los compuestos también pueden administrarse por vía parenteral o intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de dichos compuestos activos en forma de base libre o de sal farmacológicamente aceptable pueden prepararse en agua mezclada de forma adecuada con un tensioactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos, y mezclas de los mismos en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y utilización, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir la proliferación de microorganismos.

Las formas farmacéuticas adecuadas para su utilización en inyecciones incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser líquida, para que pueda administrarse fácilmente con jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y debe protegerse de la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El excipiente puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales.

En el contexto de la presente descripción se entiende que las administraciones transdérmicas incluyen todas las administraciones a través de la superficie corporal y los revestimientos interiores de los conductos corporales, incluidos los tejidos epiteliales y las mucosas. Dichas administraciones pueden llevarse a cabo utilizando los compuestos de la presente memoria, o las sales de los mismos farmacéuticamente aceptables, en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (por vía rectal y vaginal).

La administración por vía transdérmica puede realizarse por medio de un parche transdérmico que contiene el compuesto activo y un excipiente que es inerte para el compuesto activo, no es tóxico para la piel y permite el suministro del agente por absorción sistémica en el torrente sanguíneo a través de la piel. El excipiente puede adoptar diversas formas tales como cremas y ungüentos, pastas, geles y dispositivos oclusivos. Las cremas y ungüentos pueden ser emulsiones líquidas viscosas o semisólidas del tipo aceite en agua o agua en aceite. También pueden ser adecuadas las pastas que comprenden polvos absorbentes dispersos en petróleo o petróleo hidrófilo, que contienen el principio activo. Pueden utilizarse diversos dispositivos oclusivos para liberar el principio activo en el torrente sanguíneo, tales como una membrana semipermeable que cubra un reservorio que contiene el principio activo, con o sin excipiente, o una matriz que contiene el principio activo. Otros dispositivos oclusivos se conocen por la literatura.

Pueden prepararse formulaciones de supositorios con materiales tradicionales, incluidos manteca de cacao, con o sin adición de ceras para alterar el punto de fusión del supositorio, y glicerina. También pueden utilizarse las bases hidrosolubles de supositorios, tales como polietilenglicoles de varios pesos moleculares.

Claims (19)

1. Utilización de una combinación constituida por 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico [CCI-779]; un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina; y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que la neoplasia se trata con dosis subterapéuticamente eficaces de CCI-779, del compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina, o de ambos.

3. Utilización según la reivindicación 2, en la que la neoplasia se trata con CCI-779 en dosis subterapéuticamente eficaces.

4. Utilización según la reivindicación 2 ó 3, en la que la neoplasia se trata con el compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina en dosis subterapéuticamente eficaces.

5. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la neoplasia es una de las siguientes:

cáncer renal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de mama, tumor neuroendocrino del pulmón, cáncer de cuello de útero, cáncer de útero, cáncer de cabeza y cuello, glioma, cáncer pulmonar no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, linfoma, melanoma, cáncer pulmonar microcítico, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer gástrico, leucemia, cáncer colorrectal, o cáncer primario desconocido.

6. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la combinación incluye un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato.

7. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la combinación incluye gemcitabina.

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que la neoplasia es el cáncer de páncreas.

9. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la combinación incluye 5-fluorouracilo.

10. Utilización según la reivindicación 9, en la que la combinación incluye un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato.

11. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el medicamento comprende una cantidad eficaz de una combinación de 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico, 5-fluorouracilo, y leucovorina.

12. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que la neoplasia es el cáncer colorrectal.

13. Combinación antineoplásica que comprende una cantidad eficaz de 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico; un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina; y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato.

14. Combinación según la reivindicación 13, que incluye un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato.

15. Producto que comprende 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico; un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina; y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato, como una preparación combinada para su utilización simultánea, separada o secuencial en el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.

16. Producto según la reivindicación 15, que incluye un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato.

17. Producto según la reivindicación 15 ó 16, en el que la neoplasia es una de las siguientes:

cáncer renal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de mama, tumor neuroendocrino del pulmón, cáncer de cuello de útero, cáncer de útero, cáncer de cabeza y cuello, glioma, cáncer pulmonar no microcítico, cáncer de próstata, cáncer de páncreas, linfoma, melanoma, cáncer pulmonar microcítico, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer gástrico, leucemia, cáncer colorrectal, o cáncer primario desconocido.

18. Utilización del 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una neoplasia en un mamífero para su utilización simultánea, separada o secuencial con un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina; y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato, en el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.

19. Utilización de un compuesto seleccionado de entre 5-fluorouracilo y gemcitabina en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una neoplasia en un mamífero para su utilización simultánea, separada o secuencial con 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico y opcionalmente un agente modificante bioquímico seleccionado de entre leucovorina y levofolinato en el tratamiento de una neoplasia en un mamífero.