CZ293449B6

CZ293449B6 - Farmaceutické prostředky obsahující platinové komplexní sloučeniny a jejich použití

Info

Publication number: CZ293449B6
Application number: CZ2001569A
Authority: CZ
Inventors: Eberhard Amtmann; Gerhard Schilling
Original assignee: Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts
Priority date: 1998-08-25
Filing date: 1999-08-25
Publication date: 2004-04-14
Also published as: WO2000010543A2; AU1028600A; NZ509529A; WO2000010543A3; HUP0103262A2; JP2002523361A; US6881751B2; NO20010907D0; EP1107751B1; NO20010907L; PL346643A1; DE19940407A1; CA2341701A1; DE59905863D1; CN1398183A; CZ2001569A3; ES2201792T3; EP1107751A2; HUP0103262A3; AU769882B2

Abstract

Řešení se týká farmaceutických prostředků s obsahem nejméně jedné sloučeniny obecného vzorce I, kde R.sub.1.n. a R.sub.2.n. nezávisle na sobě znamenají přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku, přímý nebo rozvětvený alkenylový zbytek se 2 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkenylový zbytek se 4 až 30 atomy uhlíku nebo monocyklický nebo polycyklický aromatický zbytek se 6 až 30 atomy uhlíku, přičemž mohou být tyto zbytky případně substituovány jedním nebo více substituenty. Dále se řešení týká použití farmaceutických prostředků pro imunosupresivní terapii a pro neinvazivní tumorové terapie.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutických prostředků obsahujících platinové komplexy a jejich použití pro terapii tumorových onemocnění.

Dosavadní stav techniky

V současnosti se většinou rakovinová onemocnění před a/nebo po operaci léčí medikamentózní terapií nebo radioterapií. Při medikamentózní tumorové terapii a chemoterapii se používají sloučeniny, kterými se různým způsobem ovlivňuje rakovinový růst. U chemoterapie dochází ale často k vážným a pro pacienty nepříjemným vedlejším účinkům, jako například k vypadávání vlasů, nevolnosti, zvracení, únavě, poškození kostní dřeně a bílých krvinek. To platí zejména pro dosud používané platinové sloučeniny, jako cisplatin nebo karboplatin. Často dochází také více méně k těžkým sekundárním infekcím. Dále nereagují všechny druhy tumorů na chemoterapii, například ledvinový karcinom nebo tumory trávicího traktu.

Podstata vynálezu

Úkolem vynálezu je tak připravit účinný lék k léčbě rakovinových onemocnění. Lék má být účinný při nepatrných dávkách, být co možná nejméně toxický pro zdravé buňky a měl by mít málo vedlejších účinků. Dále má být lék také vhodný pro regionální chemoterapii s možností podávat ho ambulantně. Kromě toho má lék snížit riziko recidivy. Dále by mělo být možné skladovat lék delší dobu bez ztráty účinku.

S překvapením bylo objeveno, že komplexy z platiny a xantogenátu tvoří stabilní sloučeniny s výtečným antitumorovým účinkem.

Předmětem vynálezu jsou proto farmaceutické prostředky, které obsahují platinové komplexy obecného vzorce I

R_t—O-C^PrOc-O-R: (i),

S ^s kde znamenají skupiny Rj a R₂ nezávisle na sobě přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku, alkenylový zbytek se 2 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkenylový zbytek s 4 až 30 atomy uhlíku nebo monocyklický nebo polycyklický aromatický zbytek s 6 až 30 atomy uhlíku, přičemž se mohou zbytky případně substituovat jedním nebo více substituenty.

Ri a R2 mohou být stejné nebo odlišné.

Významné jsou pro Ri a R₂ přímé Ci_i₄-alkylové zbytky nebo C3_i₄-cykloalkylové zbytky.

Zvláště významné je pro Ri a R₂ skupina CH₃CH₂.

Je možno použít každý libovolný přímý nebo rozvětvený C]_₃o-alkylový zbytek. Například jsou to skupiny methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, izobutyl, terc-butyl, n-butyl, n-hexyl-, 2methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 2,2-dimethylpentyl, 3,3-dimethyl

-1 CZ 293449 B6 pentyl, 3-ethylpentyl, n-oktyl, 2,2-dimethylhexyl, 3,3-dimethylhexyl, 3-methyl-3-ethylpentyl.

Pro lepší rozpustnost mají přednost krátké alkylové řetězce, jako methyl, ethyl, propyl a izopropyl.

Je možné použít každý libovolný přímý nebo rozvětvený C₂_₃o-alkylový zbytek.

Například jsou to skupiny vinyl, propenyl, izopropenyl, allyl, 2-methylallyl, butenyl nebo izobutenyl, hexenyl nebo izohexenyl, heptenyl nebo izoheptenyl, oktenyl nebo izooktenyl. Přednost mají vinyl, propenyl a izopropenyl.

Cykloalkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku může být každý libovolný cykloalkylový zbytek. Například jsou to skupiny cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklononyl nebo cyklodecyl. Přednost mají cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Cykloalkenylový zbytek se 4 až 30 atomy uhlíku může být každý libovolný cykloalkenylový zbytek. Například jsou to skupiny cyklobutenyl, cyklopentenyl nebo cyklohexenyl, cykloheptenyl, cyklooktenyl, cyklononenyl nebo cyklodecenyl. Přednost mají cyklobutenyl, cyklopentenyl, nebo cyklohexenyl.

Příklady pro polycyklické alkylové a alkenylové zbytky zahrnují norboman, adamantan nebo benzvalen.

Ri a R₂ mohou být libovolné monocyklické nebo polycyklické C^o-alkylové zbytky. Například je to karbocyklický, monocyklický zbytek, například skupina fenyl, heterocyklický, monocyklický zbytek, například skupiny thienyl, furyl, pyranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, thiazolyl, oxyzolyl, furazanyl pyrrolinyl, imidazolinyl, pyrazolinyl, thiazolinyl, triazolyl, tetrazolyl a poziční izomery heteroatomů, které tyto skupiny mohou obsahovat, zbytek sestávající z karbocyklických kondenzovaných cyklů, například naftylové skupiny nebo fenantrenylové skupiny, zbytek sestávající zkondenzovaných heterocyklických cyklů, například benzofuranyl, benzothienyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, naphto[2,3-b]thienyl, thianthrenyl, izobenzofuranyl, chromenyl, xanthenyl, fenoxantinyl, indolizinyl, izoindolyl, 3H-indolyl, indolyl, indazolyl, purinyl, chinolizinyl, izochinolyl, chinolyl, fathalzinyl, nafthyridinyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, chinolonyl, pteridinyl, karbazolyl, β-karbolinyl, acridinyl, fenazinyl, fenothiazinyl, fenoxazinyl, indolinyl, izoindolinyl, imidazopyridyl, imidazopyridimidinyl nebo také kondenzované polycyklické systémy sestávající zheterocyklických monocyklů, například jak bylo výše definováno, například furo[2,3-b]pyrrol nebo thieno[2,3-b]furan, a zejména skupiny fenyl a furyl, jako 2-furyl, imidazolyl, jako 2-imidazolyl, pyridyl, jako 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl, pyrimidinyl, jako pyrimid-2-yl, thiazolyl, jako thiazolyl-2-yl, thiazolinyl, jako thiazolin-2-yl, triazolyl, triazolyl-2-yl, tetrazolyl, jako tetrazol2-yl, benzimidazolyl, jako benzimidazol-2-yl, benzothiazolyl, jako benzothiazol-2-yl, purinyl, jako purin-7-yl nebo chinolyl, jako 4-chinolyl.

Substituenty výše uvedených zbytků mohou být přednostně zvoleny z následující skupiny:

- Halogen: fluor, chlor, brom, jod,

- amino, alkylamino, dimethylamino nebo ethylamino, dialkylamino, jako dimethylamino, diethylamino, methylethylamino, přičemž každý z těchto dialkylaminozbytků případně existuje ve formě oxidu,

-aminoalkyl, jako aminomethyl nebo aminoethyl,

- dialkylaminoalkyl, jako dimethylaminomethyl nebo dimethylaminoethyl,

- dialkylaminoalkyloxy, jako dimethylaminoethyloxy,

- hydroxyl,

-2CZ 293449 B6

- volné esterifikované karboxyskupiny, jako alkoxykarbonyl, například methoxykarbonyl nebo ethoxykarbonyl nebo převedené na sůl, například atomem sodíku nebo draslíku,

- alkyl s 1 až 8 atomy uhlíku, jako methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, izobutyl, zerc-butyl, případně substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, například atomem fluoru, jako trifluormethyl,

- oxo, kyano, nitro, formyl,

- acyl, jako acetyl propionyl, butyryl, benzoyl,

- acyloxy, jako acetoxy nebo zbytek vzorce:

-O-CO-(CH₂)_nCO₂H, kde η = 1 až 5

- alkoxy, jako methoxy, ethoxy, propyloxy, izopropyloxy, butyloxy,

-alkylthio, jako methylthio, ethylthio, propylthio, izopropylthio, butylthio,

- karbamoyl,

- alkenyl jako vinyl, propenyl,

- alkinyl, jako ethinyl, propinyl a

- aryl, jako fenyl, furyl, thienyl.

Jako příklad pro takový substituovaný zbytek je možno uvést alkylový zbytek substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, jako skupiny trifluormethyl, trifluorbutyl, pentafluorpropyl, pentafluorbutyl, pentafluorpentyl, heptafluorbutyl nebo nonafluorbutyl nebo 2-chlorethyl.

Sloučeniny výše uvedeného vzorce I je možné nazvat pojmem „thioplatinové sloučeniny“.

Přednostně se sloučeniny vzorce I vyrábějí způsobem, který se vyznačuje tím, že se známým způsobem provede výměnná reakce ligandu platinového komplexu, jako například cischlordiamminplatin II, odpovídajícím xantogenátem. To je například způsob, který se vyznačuje tím, že sloučenina vzorce

S=C-SMe \ OR j kde

Me je alkalický kov nebo kov alkalických zemin, a R, který se definuje stejně jako R, a R₂, reaguje s platinovým komplexem, jako cis-dichlordiamminplatin(II), a izoluje se získaný nový platinový komplex.

Sloučeniny vzorce I jsou vhodné k léčbě různých rakovinových onemocnění, jako například tumoru varlete, ovariálního karcinomu, karcinomu močového měchýře, karcinomu tračníku, karcinomu prostaty, bronchiálního karcinomu malých a nemalých buněk, karcinomu oblasti hlavy a krku, karcinomu oblasti hrudníku a břicha, karcinomu děložního hrdla a endometria, sarkomu, melanomu a leukémie. Přednost má terapie malobuněčného bronchiálního karcinomu nebo kolorektálního karcinomu. Terapie se může použít také jako doprovodná terapie k radioterapii nebo před popřípadě po chirurgickém zásahu.

Sloučeniny vzorce I jsou dobře přijatelné. Hodnota L₅o je o faktor 3 nižší než pro v tumorové terapii známý cisplatin. Při dávkování, které má dobré antitumorové účinky, se neprojevují vedlejší účinky. Zejména se nevyskytuje u thioplatinových sloučenin nefrotoxicita, která je u cisplatinu známá a obávaná. Další výhodou sloučenin podle vynálezu je, že mají široké spektrum účinnosti proti nejrůznějším tumorům a zejména působí proti tumorům, které doposud

-3CZ 293449 B6 odolávaly terapii s platinovými sloučeninami (například cisplatin). Thioplatin je vhodný zejména pro pevné tumory.

Další výhodou je, že sloučeniny podle vynálezu mají vyšší účinnost v slabě kyselé než v alkalické oblasti hodnoty pH, protože mnoho tumorových tkání vykazuje spíše kyselé prostředí. Byla provedena vyšetření s bis[o-ethyldithiokarbonylto]platnatým komplexem, platinovým koordinačním komplexem podle vzorce I, kde tvoří platina s atomem síry komplex. Po protonizaci se štěpí reverzibilně dvě vazby síry na platinu (takže vzniká „aqua-komplex“), který iniciuje zesítění DNA. Pro zvýšení hodnoty pH disociují protony z atomů síry a vznikne opět inertní molekula. Je proto možné sestavit následující reakční rovnici v závislosti na hodnotě pH:

CH₃CH,-O-C^ CHjCH) +

CHjCHj-OSH

Č-O-CHjCHj

Z této rovnice je zřejmé, že posunutí hodnoty pH do oblasti slabě kyselé způsobuje vznik vlastní reaktivní sloučeniny z „prekurzoru“ podle vzorce I. Tento koncept se potvrdí na příkladech.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu se mohou podávat různými způsoby, například orálně, parenterálně, kutánně, subkutánně, intravenózně, intra-muskulámě, rektálně nebo intratumorálně. Přednost má intravenózní nebo intratumorální podávání, tzn. podávání do určených nemocných orgánů nebo oblastí těla. Farmaceutický prostředek se pacientům podává po dobu, kterou určí lékař. Farmaceutický prostředek se může podávat, jak lidem, tak savcům.

Dávkování sloučeniny podle vynálezu určí lékař podle pacientových specifických parametrů, jako například podle stáří, hmotnosti, pohlaví, závažnosti onemocnění atd. Dávka se především pohybuje mezi 0,001 a 1000 mg/kg tělesné hmotnosti.

Podle způsobu podávání se farmaceutický prostředek formuluje ve vhodné formě, například ve formě jednoduchých nebo dražovaných tablet, tvrdých nebo měkkých želatinových kapslí, prášku pro rekonstituci před použitím, granulátů, čípků, ovula, injekčních preparátů, infuzních roztoků, pomád, krémů, gelů, mikrosféry, implantátů, které se vyrábějí obvyklým galenickým způsobem.

Sloučeniny vzorce I mohou být případně formulovány společně s dalšími účinnými látkami a s obvyklými excipienty farmaceutického složení, například podle vyrobeného preparátu mastek, arabská guma, laktóza, škrob, magnesiumstearát, kakaové máslo, vodné a nevodné nosiče, tuky živočišného nebo rostlinného původu, parafinové deriváty, glykoly (zejména polyethylenglykol), různá změkčovadla, disperzní prostředky nebo emulgátory, konzervační látky.

Pro výrobu tekutých preparátů se mohou použít aditiva jako roztok chloridu sodného, ethanol, sorbit, glycerol, olivový olej, mandlový olej, propylenglykol nebo ethylenglykol.

Přednostně se vyrábí infúzní nebo injekční roztoky. To jsou především vodné roztoky nebo suspenze, které je možné vyrábět před upotřebením, například z lyofilizovaných preparátů, které už obsahují účinnou látku nebo společně s nosičem, jako mannit, laktóza, glukóza, albumin a podobných. Roztoky pro spotřebu se sterilizují a případně smíchají s pomocnými látkami, například s konzervačními látkami, stabilizátory, emulgátory, rozpouštědly, pufry a/nebo soli na regulaci osmotického tlaku. Sterilizace se může dosáhnout sterilní filtrací filtrem s malou velikostí pórů, po které může být složení případně lyofilizováno. Může se také přidat nepatrné množství antibiotik, aby se podpořilo zachování sterility.

Výhodné je zhotovení farmaceutického prostředku podle vynálezu v jednotné dávkovači formě pro podávání savci, který vyžaduje léčbu rakoviny.

-4CZ 293449 B6

Vynález se také týká farmaceutických prostředků případně farmaceutických složení, která obsahují terapeuticky účinná množství aktivní obsahové látky (sloučeninu podle vynálezu vzorce I) společně s organickými nebo anorganickými inertními pevnými nebo tekutými farmaceuticky přijatelnými nosiči případně ředidly, která jsou vhodná pro zamýšlená podávání a která s aktivními obsahovými látkami nezpůsobí škodlivou změnu účinku.

Vynález se týká také výroby farmaceutického složení, kde se sloučenina podle vynálezu vzorce I smíchá s farmaceuticky přijatelným nosičem.

Mezi medikamenty podle vynálezu je možné zahrnout zejména ty sloučeniny, které jsou popsány v experimentální části a zvláště ty sloučeniny, u kterých ve výše uvedeném vzorci I Ri a/nebo R₂, které mohou být stejné nebo odlišné, znamenají skupinu methyl, ethyl, propyl nebo izopropyl.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu případně farmaceutická složení obsahují jako účinnou látku nejméně jednu z výše uvedených účinných látek. Případně mohou být do složení přijaty ještě další farmaceutické účinné látky, jako například imunosupresiva, například cyklosporin, rapamycin, 15-desoxyspergualin, muronomab CD3 (OKT3), azythioporin; cytokiny (například TNF), interferon atd. Dále může složení podle vynálezu obsahovat steroid nebo další cytostatika (například cisplatin, methotrexát, aminopterin, dakarbazin, deriváty nitromočoviny, fluoruracil, bleomycin, daunomycin, daunorubicin, doxorubicin, mithramycin, mitomycin C atd).

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1: Tumorová regrese, příp. tumorový růst po léčení bronchiálního karcinomu malých buněk sloučeninou podle vynálezu, příp. kontrolu

Obr. 2: Antitumorový účinek sloučeniny podle vynálezu na lidský tračníkový karcinom v lysé myši

Obr. 3: Účinnost cytostatik v závislosti na hodnotě pH

Obr. 4: Antitumorový účinek thioplatinu na lidský xenotransplantát

Obr. 5: Histopatologie ledviny a tenkého střeva po léčení thioplatinem a cisplatinem

Vynález se blíže objasní následujícími příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Způsob výroby diethylxantogenát platnatých komplexů (bis-[o-ethyldithio-karbonato]platinatý komplex) mmol cis-dichlordiamminplatnatý komplex se rozpustil v 600 ml destilované vody a za míchání se přidalo 10 mol methylxantogenátu draselného. Míchá se při teplotě místnosti šest hodin. Vzniklá usazenina se odfiltruje, třikrát se promyje destilovanou vodou a suší ve vakuu. Po rekrystalizaci z teplého acetonu se získá produkt ve formě žlutých krystalů o čistotě větší než 98 % a výtěžku 68 %.

-5CZ 293449 B6

Příklad 2

Vyrobí se následující farmaceutické složení:

Byly vyrobeny injekční suspenze následující formulace:

- Sloučenina příkladu 1................................................1 g

- Excipient (vodný disperzní roztok):

Benzylalkohol, polyethylenglykol 900, karboxymethylcelulóza (sodná sůl), chlorid sodným voda pro injekční preparát na jednu ampuli................................1 ml

U významných testů se zvyšuje koncentrace PEG až na 5% roztok, aby se roztok stabilizoval.

Příklad 3

Farmakologický výzkum sloučeniny podle příkladu 1

a) Antitumorové účinky na lidský bronchiální karcinom malých buněk u lysé myši

Buňky bronchiálního karcinomu (SCLC) byly implantovány pod kůži šest týdnů starým Nu/Numyším, kmen NMRI (5x10⁶ buněk v 0,1 ml roztoku kuchyňské soli). Po dvou týdnech dosáhly tumory velikosti asi 8 mm. Potom se léčilo vždy pět myší buď 0,2 ml roztokem kuchyňské soli/0,l%BSA/l% acetonu (kontrolní skupina) nebo 10 mg/kg sloučeniny podle příkladu 1 v roztoku kuchyňské soli/l%BSA/l% acetonu (léčená skupina) i.v.. Růst tumoru byl denně kontrolován. Hodnoty jsou zobrazeny v přiloženém obr. 1.

Je zřetelně vidět, že se u myší (léčená skupina) léčených sloučeninou podle příkladu 1 velikost tumoru zmenšila, zatímco u myší kontrolní skupiny růst tumoru stále stoupal.

b) Antitumorový účinek sloučeniny podle příkladu 1 na lidský karcinom tračníku u lysé myši.

Buňky tračníkového karcinomu (SW707) byly implantovány pod kůži 6 týdnů starým Nu/Numyším, kmen NMRI (5x10⁶ buněk v roztoku kuchyňské soli). Jakmile po 10 dnech dosáhly tumory velikosti ca. 10 mm, bylo léčeno vždy 6 myší buď 0,2 ml roztoku kuchyňské soli/l%BSA/l% acetonu (kontrolní skupina), 7,5 mg/kg sloučeniny podle příkladu 1 v roztoku kuchyňské soli/l%BSA/l% acetonu (léčená skupina I) i.v., nebo 10 mg/kg cisplatinu (léčená skupina II) i.v. Růst tumoru byl denně kontrolován a na obr. 2 graficky vynesen.

Z obr. 2 je možné vyvodit, že růst tumoru se u léčené skupiny I zabrzdil, zatímco u kontrolní skupiny a léčené skupiny II je možné pozorovat stálý růst tumoru. Z toho je vidět, že sloučeniny podle vynálezu daleko překrývají cisplatin a také rozvíjejí účinnost proti tumorům, která se v takové míře u platinových sloučenin neprojevovala. Thioplatinové sloučeniny mají oproti dosavadním cytostatikům rozšířené spektrum působení.

Příklad 4

Účinnost cytostatik v závislosti na hodnotě pH

Buňky Hela byly rozprostřeny na linbridestičkách (10⁵) a byly po 6 hodinách různými koncentracemi cisplatinu popřípadě sloučeninou podle příkladu 1 v bazálním prostředí podle Eagla, které obsahuje buď 2,2 g (pH 7,4), nebo 0,85 g (pH 6,8) uhličitanu sodného a 10% fetální telecí sérum, na 24 hodin při teplotě 37 °C inkubovány v 5% CO₂ atmosféře. Počet živých buněk se určilo po

-6CZ 293449 B6 zabarvení živých buněk barvivém Trypanblau v počítací komoře podle Neubauera. Výsledek je vidět z obr. 3.

Sloučenina podle příkladu 1 má překvapivě maximální účinky ve slabě kyselé oblasti, zatímco 5 původní cytostatikum cisplatin působí lépe v alkalické oblasti. Protože tumorová tkáň prokazuje často slabě kyselou hodnotu pH, je jasné, že sloučenina podle příkladu 1 prokazuje touto vlastností vyšší účinnost než původní cytostatika.

io Příklad 5

Závislosti vestavby platiny na hodnotě pH

Buňky Hela (10⁷) byly rozprostřeny v petrimiskách a o 4 hodiny později byly buňky obklopeny 15 prostředím, které obsahovalo buď 2,2 g/1 (pH 7,4), nebo 0,85 g/1 (pH 6,8) NaHCO₃. Po úpravě na

5% CO₂ atmosféru byl cisplatin nebo thioplatin upraven na konečnou koncentraci 33 μΜ.

hodiny po přidání platiny byla vždy jedna miska každé léčené skupiny 5 krát promyta 50 ml studeným PBS. Buňky byly z destiček seškrábnuty a obsah Pt byl stanoven metodou neutronové aktivace. Ktomu byly po vymrazení do sucha vzorky a Pt-standard na 30 minut ozařovány 20 neutrony (5xl0¹²n cm^-2 sec^-1). Po týdnu bylo stanoveno γ-záření 158,4 keV a 208,2 keV a stanovena koncentrace platiny pomocí standardu. Detekční limit byl 2 ng.

Na ostatních miskách byla 16 hodin po inkubaci izolována DNA extrakcí fenolem/chloroformem v doprovodu etanolové precipitace. Obsah platiny od 100 pg byl stanoven metodou neutronové 25 aktivace.

Léčba	Obsah platiny Buňky celkem (ng/10⁷ buněk)	Obsah platiny DNA (ng/mg)
neléčeno, pH 6,8	<1	< 10
neléčeno, pH 7,4	<1	<10
CisPt, pH 6,8	140	14,6
CisPt, pH 7,4	156	140
ThioPt, pH 6,8	4780	13870
ThioPt, pH 7,4	3680	1760

Z výše uvedených hodnot vyplývá, že po inkubaci thioplatinem při slabě kyselé hodnotě pH 6,8 bylo na DNA vázáno téměř 8 krát větší množství platiny než při inkubaci při pH 7,4. Při inkubaci 30 cisplatinem byl vidět obrácený efekt, t.zn. 10 krát více DNA bylo vázáno při pH 7,4 na cisplatin než při pH 6,8. Přijímání platiny buňkami bylo na pH nezávislé. Celkový příjem byl totiž 30-100 krát vyšší při použití thioplatinu než při cisplatinu.

Příklad 6

Závislost cytotoxicity na hodnotě pH

Buňky byly rozprostřeny v linbromiskách a o 4 hodiny později obklopeny prostředím, které 40 obsahovalo buď 2,2 g/1 (pH 7,4), nebo 0,85 g/1 (pH 6,8) NaHCO₃. Po nastavení 5% CO₂atmosféry byl přidán cisplatin nebo thioplatin na koncentrace mezi 5 a 150 μΜ. Počet živých buněk byl stanoven o 24 hodiny později a hodnoty IC50 a IC99 byly odečteny z křivek odpovídajících dávkám (standardní odchylky po 10 % ve všech případech).

Buněčná linie	Typ buňky	IC₅o pH6,8/7,4 cisplatin (μΜ)	IC₉₉ pH6,8/7,4 cisplatin (μΜ)	IC₅₀ pH6,8/7,4 thioplatin (μΜ)	IC₉₉ pH6,8/7,4 thioplatin (μΜ)
HeLa	lidský kare, dělož. hrdla	86/25	111/54	5/51	16,3/>55
H10	lidský bronch. karc.mal. buněk	72/74	>150/90	5,1/15,4	13,2/30,8
SW707	lidský kare, tračníku	9,6/<4,8	90/38,4	3,7/13,2	7,5/26.4
CV1	karc.ledvin u myší	>150/>150	>150/>150	3,9/23	13,2/106
Capan2	lidský kare, slinivky	143/139	>150/>150	17,3/50,6	40,9/99
Dan-G	lidský kare, slinivky	45/36	78/72	15,4/52,8	20,9/64,5
Jurkat	lidský T buň. lymfom	52,5/54	120/126	6,8/21,1	13,6/132
S180	myší sarkom	63/24	>150/114	16,5/63,8	37,5/>110

Z tabulky je vidět, že cytotoxicita byla téměř u všech buněčných linií pro thioplatin při pH 6,8 mnohem lepší než při pH 7,4, zatímco u cisplatinu se získaly obrácené výsledky, tzn. lepší účinnost při pH 7,4. Ve všech případech měl thioplatin 2 až 8 krát nižší IC₅₀ při pH 6,8 než při pH 7,4. U cisplatinu byla hodnota IC₅₀ při pH 6,8 horší než při pH 7,4 nebo neexistoval žádný prokazatelný pH efekt.

Příklad 7

Antitumorový efekt thioplatinu na lidský xenotransplantát

Odkazuje se na obr. 4

Lidské buňky H10 bronchiálního karcinomu malých buněk (A) nebo buňky SW707 kolorektálního karcinomu (B) byly subkutánně injektovány do Nu/Nu-myší a o 12 dnů později, když tumory dosáhly průměru 8 až 10 mm, dostalo 5 myší jednotlivě injekci buď s 10% tweenu 80 (hvězdičky; = kontrola), 10 mg/kg cisplatin (trojhran), nebo s 10 mg/kg thioplatinu rozpuštěného na koncentraci o 1 mg/ml v 10% tweenu 80 (kvadrát). Velikosti tumorů byly stanoveny ve dvou směrech a relativní tumorový růst byl spočítán. Střední hodnoty jsou uvedeny na obr. 4.

(C): Střední tělesné hmotnosti skupiny s bronchiálním karcinomem malých buněk. Standardní odchylky byly menší než 3%.

Z obrázku 4 vyplývá, že cisplatin u buněk H10 byl účinný, zatímco u kolorektálního karcinomu (SW707) se dokonce při dávce 10 mg/kg neprojevil žádný účinek. Ve stejné dávce byl thioplatin účinný u obou druhů karcinomu. Střední velikost tumoru skupiny léčené thioplatinem byla menší než u skupiny léčené cisplatinem. Thioplatinem se velikost tumoru u bronchiálního karcinomu malých buněk zmenšila na 23 % kontrolní skupiny (tzn. zmenšení na cca. 1/4 kontroly), zatímco cisplatinem byla dosažena poloviční velikost ve srovnání s kontrolou (obr.4A). V případě kolorektálního karcinomu neukázal cisplatin žádný efekt, zatímco se thioplatinem zabránilo růstu tumoru (obr. 4B).

Ztráta hmotnosti je hrubým odhadem toxických vedlejších účinků. Zatímco myši léčené cisplatinem dosáhli ztráty 12 % a 13 % ve 3 a 6 dni po léčení, nebyla u skupiny léčené thioplatinem zjištěna žádná ztráta hmotnosti (obr. 4C).

-8CZ 293449 B6

Příklad 8

Výzkum vlivu toxicity na ledviny a tenké střevo

Odkazuje se na obr. 5.

Švýcarské myši obdrželi i.p. dávku buď 15 mg/kg cisplatinu (A,C), nebo 20 mg/kg thioplatinu (B,D). O čtyři dny později byly zhotoveny histologické řezy tenkého střeva (A,B) a ledvin (C,D) a zbarveny hematoxylinem a eosinem.

U myší léčených cisplatinem ukázaly ledviny těžkou degeneraci a vakuolizaci tubuli (obr. 5C). Struktura tenkého střeva byla z velké části poškozena a bylo možné vidět v lamina propria (obr. 5A) velké infíltráty. Naproti tomu nechává léčení vysokou dávkou o 10 mg/kg thioplatimní strukturu ledvin (obr. 5D) a tenkého střeva (obr. 5B) nedotčenu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I kde R] a R₂ nezávisle na sobě znamenají přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku, přímý nebo rozvětvený alkenylový zbytek se 2 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkylový zbytek s 3 až 30 atomy uhlíku, monocyklický nebo polycyklický alkenylový zbytek s 4 až 30 atomy uhlíku nebo monocyklický nebo polycyklický aromatický zbytek s 6 až 30 atomy uhlíku, přičemž tyto zbytky mohou být případně substituovány jedním nebo více substituenty.
2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že ve sloučenině vzorce I Ri a R₂ znamenají přímý zbytek C]_i4-alkyl nebo C₃_i₄-cykloalkyl.
3. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že ve sloučenině vzorce I R] a R₂ znamenají skupinu CH₃CH₂.
4. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků laž3, vyznačující se tím, že sloučeninou vzorce I je dimethylxantogenát platnatý komplex nebo diethylxantogenát platnatý komplex.
5. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že navíc obsahuje imunosupresivní sloučeninu, zvolenou z cyklosporinu, rapamycinu, 15deoxyspergualinu, muronomabu CD3 a azathioprinu.
6. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že navíc obsahuje cytokiny, interferon nebo další cytostatické prostředky.
7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že dalším cytostatickým prostředkem je cisplatina, methotrexat, aminopterin, dakarbacin, deriváty nitromočoviny,

-9CZ 293449 B6 fluorouracil, bleomycin, daunomycin, daunorubicin, doxorubicin, mithramycin nebo mitomycin

C.
8. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že je ve formě jednotkové dávky pro podávání savci, kteiý potřebuje léčbu prostředkem proti rakovině.
9. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků laž8, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný inertní nosič nebo ředidlo.
10. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9 pro léčbu rakovinového onemocnění.
11. Farmaceutický prostředek podle nároku 10, kde rakovinovým onemocněním jsou testikulární tumory, karcinomy vaječníku, karcinomy měchýře, karcinomy tlustého střeva, karcinomy prostaty, karcinomy malých a nemalých plicních buněk, karcinomy hlavových a krčních částí, karcinomy hrudních a břišních oblastí, karcinomy děložní sliznice a krčku, melanomy a leukemie.
12. Farmaceutický prostředek podle nároku 10, kde rakovinovým onemocněním je karcinom malých plicních buněk nebo karcinom tračníku a konečníku.
13. Použití farmaceutického prostředku podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9 pro výrobu léčiva pro léčbu rakovinového onemocnění.
14. Použití podle nároku 13, přičemž rakovinovým onemocněním jsou testikulámí tumory, karcinomy vaječníku, karcinomy měchýře, karcinomy tlustého střeva, karcinomy prostaty, karcinomy malých a nemalých plicních buněk, karcinomy hlavových a krčních částí, karcinomy hrudních a břišních oblastí, karcinomy děložní sliznice a krčku, melanomy a leukemie.
15. Použití podle nároku 10, přičemž rakovinovým onemocněním je karcinom malých plicních buněk a karcinom tračníku a konečníku.