CZ20004525A3 - Analogy inzulínu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto analogy - Google Patents
Analogy inzulínu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto analogy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20004525A3 CZ20004525A3 CZ20004525A CZ20004525A CZ20004525A3 CZ 20004525 A3 CZ20004525 A3 CZ 20004525A3 CZ 20004525 A CZ20004525 A CZ 20004525A CZ 20004525 A CZ20004525 A CZ 20004525A CZ 20004525 A3 CZ20004525 A3 CZ 20004525A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- insulin
- glu
- gly
- leu
- cys
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 234
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 3
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 17
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 73
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 73
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 70
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 70
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 49
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 38
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 35
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 34
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 30
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 claims description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 21
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 19
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 18
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 15
- MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 14
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 claims description 13
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 claims description 13
- RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N Ala-Leu-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N 0.000 claims description 12
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 12
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 claims description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 11
- RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N Gly-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 10
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 9
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 8
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims description 8
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 claims description 6
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 6
- HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N Met-Ala-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 6
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 6
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 claims description 6
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 claims description 6
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 claims description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 6
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 claims description 5
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 5
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 5
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 claims description 5
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 claims description 5
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 5
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims description 5
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 claims description 5
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N Cys-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N Gly-Ala-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC([O-])=O UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- BIAKMWKJMQLZOJ-ZKWXMUAHSA-N His-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(O)=O BIAKMWKJMQLZOJ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 4
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- SZTTYWIUCGSURQ-AUTRQRHGSA-N Val-Glu-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SZTTYWIUCGSURQ-AUTRQRHGSA-N 0.000 claims description 4
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 claims description 4
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N Glu-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O NLKVNZUFDPWPNL-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 3
- SJPMNHCEWPTRBR-BQBZGAKWSA-N Glu-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O SJPMNHCEWPTRBR-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- RAUDKMVXNOWDLS-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RAUDKMVXNOWDLS-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 3
- FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N His-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N 0.000 claims description 3
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 3
- TVHCDSBMFQYPNA-RHYQMDGZSA-N Lys-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TVHCDSBMFQYPNA-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims description 3
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 claims description 3
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 claims description 3
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N Valylglycine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims description 3
- 108010008237 glutamyl-valyl-glycine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 claims description 3
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N 0.000 claims description 2
- VDHOMPFVSABJKU-ULQDDVLXSA-N His-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N VDHOMPFVSABJKU-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims description 2
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N Val-Glu-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N 0.000 claims description 2
- WFENBJPLZMPVAX-XVKPBYJWSA-N Val-Gly-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O WFENBJPLZMPVAX-XVKPBYJWSA-N 0.000 claims description 2
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 5
- 229940127095 analogue insulin Drugs 0.000 claims 4
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 2
- YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N Ile-Val-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N 0.000 claims 2
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N Glu-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N Glu-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 claims 1
- HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N Glu-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N 0.000 claims 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 claims 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical group [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N Phe-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N 0.000 claims 1
- LHALYDBUDCWMDY-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O LHALYDBUDCWMDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N Pro-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010025376 glycyl-glutamyl-arginyl-glycyl-phenylalanyl-phenylalanyl-tyrosine Proteins 0.000 claims 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010079413 glycyl-prolyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 claims 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 8
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 abstract description 6
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 5
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N Phe-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 4
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 3
- DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N Ile-Cys-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- -1 zinc insulin complexes Chemical class 0.000 description 3
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- IHMCQESUJVZTKW-UBHSHLNASA-N Ala-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 IHMCQESUJVZTKW-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- SLNCSSWAIDUUGF-LSJOCFKGSA-N Arg-His-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SLNCSSWAIDUUGF-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N Cys-Asn Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N Gly-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 2
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 2
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LALNXSXEYFUUDD-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LALNXSXEYFUUDD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N Val-Cys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KTDXIOQSLSGDPM-QHJSVBGUSA-N (2s,3r)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=C(O)C=C1 KTDXIOQSLSGDPM-QHJSVBGUSA-N 0.000 description 1
- XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 2-[[2-[[2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- PIPTUBPKYFRLCP-NHCYSSNCSA-N Ala-Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PIPTUBPKYFRLCP-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N Arg-Arg-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N Arg-Gly-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AUFHLLPVPSMEOG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 101100228206 Caenorhabditis elegans gly-6 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N Cys-Gly-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N Gly-Val-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWROVBNEHJSXDG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- KOPBYUSPXBQIHD-NRPADANISA-N Val-Cys-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KOPBYUSPXBQIHD-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- AHHJARQXFFGOKF-NRPADANISA-N Val-Glu-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N AHHJARQXFFGOKF-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010066829 alanyl-glutamyl-aspartylprolyine Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010073093 leucyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910001428 transition metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Analogy inzulínu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto analogy
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká analogů inzulínu, které projevují zvýšené schopnosti vázat zinek, a také komplexů inzulínu se zinkem, které ve srovnání s humánním inzulínem mají opožděný profil účinku. Dále se vynález týká způsobů přípravy těchto analogů a jejich použití zejména ve farmaceutických přípravcích k léčení Diabetes mellitus I. a II. typu.
Dosavadní stav techniky
Celosvětově trpí onemocněním Diabetes mellitus asi 120 milionů lidí. Z toho asi 12 milionů lidí trpí diabetem I. typu, přičemž pro tyto diabetiky představuje v současné době jedinou možnou terapií substituční léčba nahrazující chybějící endokrinní celoživotně, zpravidla inzulínové injekci. Ve sekreci. Postižení lidé jsou několikrát denně, závislí na srovnání s tím diabetes II. typu neznamená zásadní nedostatek inzulínu, avšak přesto v mnohých případech, zejména v pokročilém stádiu, léčení inzulínem, případně v kombinaci s perorálními antidaibetiky, představuje účinnou formu terapie.
U zdravých jedinců je uvolňování inzulínu z pankreatu přísně svázáno s hladinou glukózy v krvi. Zvýšená glykémie, ke které dochází po jídle, je urychleně kompenzována odpovídajícím zvýšením sekrece inzulínu. V lačném stavu klesá
- 2 • · • · fl • · · 4 hladina inzulínu v plazmě na bazální hodnotu, která je dostatečná k tomu, aby bylo zajištěno kontinuálně zásobování glukózou orgánů a tkání vnímavých k inzulínu a přitom produkce glukózy v játrech byla v noci udržována na nízké úrovni. Náhrada tělu vlastní sekrece inzulínu exogenním inzulínem, většinou dodávaným subkutánní injekcí, se však kvalitou zpravidla nepřibližuje výše popsané fyziologické regulaci krevní glukózy. Často dochází k vychýlení hladiny glukózy krvi směrem dolů nebo nahoru, což se v těžších případech může stát faktorem ohrožujícím život. Kromě toho po léta zvýšená hladina krevní glukózy bez počátečních příznaků představuje zvýšené zdravotní riziko. Rozsáhlá studie DCCT v USA (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group, 1993, N. Engl. J. Med. 329: 977-986) jasně ukázala, že chronické zvýšení glykémie je významně zodpovědné za rozvoj pozdních diabetických poškození. Tato pozdní diabetické poškození představují mikro- a makrovaskulární poškození, která se manifestují jako různé retino-, nefro- a nebo neuropatie vedoucí k oslepnutí, selhání ledvin a ztrátě končetin, a jsou spojeny se zvýšeným rizikem srdečních a oběhových onemocnění. Z výše uvedeného je zřejmé, že terapie diabetů musí v první řadě být zacílena na to, aby byla udržena hladina krevní glukózy ve fyziologických mezích. Podle konceptu intenzívní inzulínové terapie je toho dosaženo pomocí injekcí rychle a pomalu působících inzulínových přípravků aplikovaných několikrát denně. Rychle působící přípravky se podávají současně s jídlem, aby se postprandiální vzestup krevní glukózy. Pomalu přípravky se podávají k udržení základního přísunu inzulínu, zejména k zabezpečení přes noc, aniž by došlo k hypoglykémii.
V současnosti užívané základní inzulínové přípravky tyto požadavky splňují jen nedokonale. Zejména- často užívané vyrovnal působící • ··· ···· ··· ···· · · · · ···· · · · · · · • ····· · · ··«··· ··· · · · · · · ·· · ··· ···· ·· ··
- 3 NPH-inzulíny projevují významné maximum účinnosti a přitom mají krátkodobý účinek. To při večerní aplikaci přináší nebezpečí noční hypoglykémie a ranní hyperglykémie.
Z Evropského patentu EP 0 821006 jsou známy analogy inzulínu se zvýšenou schopností vázat zinek, které mají ve srovnání s humánním inzulínem prodloužený profil účinku. Tyto analogy se liší od humánního inzulínu změnou aminokyseliny v pozici A21 řetězce A a adicí histidinových zbytků nebo peptidů s 2 až 35 aminokyselinovými zbytky, v nichž je 1 až 5 histidinových zbytků, na pozici B30 v řetězci B inzulínu.
Podstata vynálezu
Cílem předkládaného vynálezu bylo připravit další nové analogy (analogy humánního nebo zvířecího inzulínu), které mají zvýšenou schopnost vázat zinek, vytvářejí stabilní komplex obsahující hexamer inzulínových analogů a zinku, a jeho výhodné použití pro subkutánní injekce, které ve srovnání s humánním inzulínem mají opožděný profil účinku, což umožňuje zlepšit terapii Diabetes mellitus I. a II. typu.
Analogy inzulínu jsou odvozeny z inzulínů přírodního původu, zejména humánního inzulínu (sekvence id. č. 1: řetězec A humánního inzulínu, sekvence id. č. 2: řetězec B humánního inzulínu) nebo zvířecího inzulínu buďto substitucí nebo delecí alespoň jednoho přirozeně se vyskytujícího aminokyselinového zbytku a/nebo adicí alespoň jednoho přirozeně se vyskytujícího aminokyselinového zbytku v řetězci A a/nebo řetězci B přirozeně se vyskytujícího inzulínu.
• · 9 9 9 9
9 9 9 9 • · · · · · • 9 9 9 9 • 9 • · · · ·
- 4 Vynález poskytuje analog inzulínu, nebo fyziologicky přijatelnou sůl, který má vzorec (I):
j eho (A1-A5)-Cys-Cys-R3-R9-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21
S S (I) s θ
Z-R1-R2-R3-R4-Kis-Leu-Cys- (B8-B18) -- Cys-(B20-329)-R30 kde (A1-A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (A15-A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích A15 až
A19 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (B8-B18) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B8 až B13 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu, (B20-B29) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až
B29 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu,
R8 je Thr nebo Ala,
R9 je Ser nebo Gly,
R10 je Ile nebo Val,
R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu,
R21. je Asn, Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, Glu nebo Gin,
- 5 • ·
R1 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, nebo je to atom vodíku,
R2 je VA1, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu nebo Asp,
R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
Z je atom vodíku nebo peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyselinové zbytky, z nichž 1 až 4 jsou histidinové zbytky (His), přičemž platí podmínky, že v případě, kdy Z je atom vodíku, R1 nebo R3 jsou His, Glu nebo Asp, přičemž R3 je His, když R1 je neutrální nebo negativně nabitá aminokyselin, nebo platí, že v případě, kdy Z je atom vodíku, R14 je His, Asp nebo Glu, a dále platí, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl se neodlišuje od humánního inzulínu (viz sekvence id. č. 1 a sekvence id. č. 2) pouze díky změnám aminokyselinových zbytků v pozici R3 nebo společně v pozicích R3 a R21 nebo společně v pozicích R3 a R4 ve vzorci I.
Výhodné analogy inzulínu přijatelné soli jsou ty, kde nebo jejich fyziologicky
2. R8 je Thr, R9 j
3. R1 je Phe, His,
4. R30 je Thr, Ala
5. R21 je Asn a R1
| ! Ser a R10 je Ile, |
| Asn, Asp nebo Gly, |
| nebo Ser, |
| je Phe. |
• · • · • · • · • · · » ·
- 6 6. Dalším výhodným provedením předkládaného vynálezu je analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, který se vyznačuje tim, že R2 je Val, R3 je Asn a R4 je Gin.
Dále je výhodný analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde R14 je
7. Tyr,
8. His,
9. Asp, nebo
Glu.
Dále je výhodný analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde R30 je
11. Thr,
12. Ala,
13. Ser, nebo
14. -OH.
Zvláště výhodný je analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde Z je
15. His, • ·
16. His-Ala- nebo
17. His-Ala-Ala-.
K příkladům výhodných provedení analogů inzulínu podle předkládaného vynálezu dále patří:
18. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 3)
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gíy Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Va!
Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys např. His(BO),des(B30)-humánní inzulín.
19. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 4)
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. His(BO)-humánní inzulín.
20. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 5)
His Ala Phe Va! Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. His(B-l),Ala(BO)-humánní inzulín nebo
21. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 6) • « • 4 4 * ·' 4 · · · · 4 «44
- 8 His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. His (B-2) , Ala (B-l) ,Ala (BO)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále týká způsobu přípravy analogů inzulínu nebo jejich fyziologicky přijatelných solí podle vynálezu, kterýžto způsob obsahuje konstrukci replikovatelného expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu s obecnou aminokyselinovou sekvencí podle vzorce II:
Met-X2m-(Arg)p-Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys-(B8-B13)-Cys-(B20-B29)-R30-X1n-Arg(A1 -A5)-Cys-Cys-R8-R9-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21 kde
Xxn je peptidový řetězec obsahující n aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 34,
X2m peptidový řetězec obsahující m aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 20, p je 0, 1 nebo 2,
R30 je libovolná geneticky kódovatelná aminokyselina nebo není přítomen, a
Z buďto chybí nebo je to peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyseliny obsahující 1 až 4 histidinových zbytků (His) a zbývající proměnné mají stejný význam jako v předchozím vzorci I, stejně tak jako platí předchozí pravidla, a dále způsob obsahuje expresi v hostitelských buňkách a uvolnění analogů inzulínu z jejich prekurzorů chemickými a/nebo enzymatickými metodami.
- 9 00 0« 00
0« 0 0 0 0 0 0 · 0
4 * 0 0 · 0 « 0 · • 000000 0 0 00 * · 0 000 00 0000 00 0 40« ···· 00 ·0
Výhodné hostitelské buňky jsou baktérie, zejména pak baktérie E. coli.
Výhodnými hostitelskými buňkami jsou také kvasinky, zvláště výhodné jsou buňky Saccharomyces cerevisiae.
Při expresi v E. coli vytvářejí tzv. fúzní proteiny (sekvence id. č. 7 až 9) zpravidla nerozpustné komplexy, tzv. inkluzní tělíska, která se po rozrušení buněk mohou izolovat centrifugací a pomocí chaotropních přísad (jako je např. 8M močovina nebo 6M guanidiniumchlorid) dále rozpouštět. Rozpuštěné fúzní proteiny se pak mohou podrobit sulfitolýze, při které jsou skupiny SH převedeny na S-sulfonátové skupiny (viz např. B.R.C. Marshall, A.S. Iglis, Practical Protein Chemistry - A Handbook, A. Darbre, 1986, str. 49-53). Tím se zlepší rozpustnost fúzních proteinů a usnadní další čištění, např. pomocí aniontové výměnné chromatografie nebo gelové permeační chromatografie.
K převedení derivatizovaných fúzních proteinů na preproinzulín s nativní prostorovou strukturou a správně vytvořenými disulfidickými můstky (sestavení proteinu, folding) dojde ve zředěném vodném roztoku přidáním vymezeného množství SH-činidla jako je např. merkaptoetanol, cystein nebo glutathion, a následně vzdušnou oxidací. Alternativně může být rozpuštěný, nederivatizovaný fúzní protein za podobných podmínek také sestaven přímo (viz Evropské patenty EP A 0 600372, EP A 0 668292).
Preproinzulín je pak převeden omezeným proteolytickým štěpením na biologicky aktivní inzulín. K tomu se může využít trypsin, který ze sloučeniny podle vzorce II odstraňuje presekvenci Met-X2m-(Arg) p a štěpí peptidový řetězec X1n-Arg, čímž odděluje řetězce A a B. Zpravidla sekvence X1 začíná Arg, Arg2 nebo vůbec není (n=0), ta'kže po štěpení je • ·
- 10 k dispozici derivát inzulínu, který je na C-konci řetězce B prodloužen o Arg nebo Arg2. Tyto aminokyseliny mohou být odstraněny karboxypeptidázou B. Tryptické štěpení lze provést zvýšením koncentrace trypsinu nebo prodloužením reakční doby, takže je navíc štěpen Lysin(B29). V tomto případě vznikne derivát (B30)-inzulín. Inzulínové analogy získané štěpením je pak možné purifikovat standardními chromatografickými postupy (iontová výměnná chromatografie nebo chromatografie s reverzní fází) a nakonec izolovat vysrážením, krystalizací nebo jednoduše lyofilizací.
Prekurzor analogu inzulínu má výhodně sekvenci (sekvence id. č. 7)
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn např. sekvenci His (B0)-preproinzulín, nebo sekvenci (sekvence id. č. 8)
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val C.ys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala
Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys
Asn » · • · · · · ·
- 11 např. sekvenci desHis(Bl),Ala(BO)-preproinzulín, nebo sekvenci (sekvence id. č. 9)
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gíy Asn Ser Ala Arg
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys
Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn např. sekvenci desHis(B-2),Ala(B-l), Ala(BO)-preproinzulín.
Předkládaný vynález se dále týká prekurzorů inzulínových analogů podle vynálezu, zejména preproinzulínu, sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle vynálezu, expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA kódující prekurzor analogu inzulínu podle vynálezu, a také se týká hostitelských buněk, které jsou transformované takovým expresním vektorem.
Dále se předkládaný vynález týká farmaceutického přípravku, který obsahuje alespoň jeden inzulínový analog podle vynálezu a/nebo alespoň jednu jeho fyziologicky přijatelnou sůl.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje analog inzulínu podle vynálezu a/nebo jeho fyziologicky přijatelnou sůl v rozpuštěné, amorfní nebo krystalické formě.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje případně pomocné depotní látky, např. protaminsulfát, přičemž analog inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl je ve formě společně krystalizované např. s protaminsulfátem.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu případně obsahuje • · · · · · • · « « · • · · · · · • · · * · ···· ·· ··
- 12 navíc nemodifikovaný humánní inzulín a/nebo další analogy inzulínu, např. Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále týká injikovatelného roztoku s inzulínovou aktivitou, který obsahuje farmaceutický přípravek podle vynálezu v rozpuštěné formě, s obsahem 1 μg až 2 mg zinku na 1 ml, zvláště výhodně s obsahem 5 pg až 200 μg zinku na 1 ml.
Vynález se dále týká použití analogů inzulínu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí podle vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným nástupem účinku.
Cíl vynálezu byl dále splněn tím, že vynález poskytuje komplex inzulín-zinek, obsahující hexamer inzulínu a 4 až 10 iontů zinku na jeden hexamer, přičemž inzulínový hexamer obsahuje šest molekul analogů inzulínu podle vzorce I s--s (A1-A5)-Cys-Cys-R5-RS-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(Al5-A19)-Cys-R21 s s (I) s
(B8-B18) - Cys-(320-329)-R30 kde (A1-A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 • S
Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys • · • « • ·
- 13 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (A15-A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích A15 až A19 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (B8-B18) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B8 až B18 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu, (B20-B29) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až B29 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu,
RS je Thr nebo Ala,
R9 je Ser nebo Gly,
R10 je Ile nebo Val,
R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu,
R2i ]θ Asn, Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, clu nebo Gin,
Ri je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, nebo je to atom vodíku,
R2 je VA1, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu nebo Asp,
R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
Z je atom vodíku nebo peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyselinové zbytky, z nichž 1 až 4 jsou histidinové zbytky (His).
Výhodně komplex inzulín-zinek obsahuje 5 až 8 iontů zinku na jeden inzulínový hexamer.
Výhodně komplex inzulín-zinek obsahuje inzulínový hexamer, který se skládá z šesti molekul analogu inzulínu podle výše uvedeného vzorce I podle vynálezu. • ·
- 14 Komplex inzulín-zinek podle předkládaného vynálezu výhodně obsahuje řetězec B analogu inzulínu podle vzorce I, který má sekvenci (sekvence id. č. 10)
Phe Val His Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Tnr Pro Lys Thr např. His(B3)-humánní inzulín, nebo obsahuje řetězec B analogu inzulínu podle vzorce I, která má sekvenci (sekvence id. č. 11)
Phe Val Asp Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. Asp(B3)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále také týká farmaceutického přípravku, který obsahuje alespoň jeden komplex inzulín-zinek podle vynálezu a také farmaceutického přípravku, který obsahuje kyselý roztok alespoň jednoho analogu inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli s odpovídajícím množstvím iontů zinku, které umožní vytvoření komplexu inzulín-zinek podle vynálezu, přičemž analog inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl jsou výhodně výše uvedený analog podle vzorce I podle vynálezu nebo analog podle vzorce I, jehož řetězec B má sekvenci odpovídající sekvence id. č. 3, 4, 5, 10 nebo 11.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje komplex inzulín-zinek v rozpuštěné, amorfní a/nebo krystalické formě.
Předkládaný vynález se dále týká injikovatelného roztoku s inzulínovou aktivitou, který obsahuje farmaceutický přípravek podle vynálezu v rozpuštěné formě, s obsahem 1 pg až 2 mg zinku na 1 ml, zvláště výhodně s obsahem 5 pg až 200 pg zinku na 1 ml.
• · • · • *
- 15 Vynález se dále týká použití analogů inzulínu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných soli podle vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu se zpožděným nástupem účinku.
Analogy inzulínu podle předkládaného vynálezu jsou biologicky aktivní a při subkutánní aplikaci slabě kyselého, čirého roztoku obsahujícího 80 pg Zn++/ml (zinek/ml) psům projevují silně opožděný účinek. U analogů, kde je N-konec řetězce B prodloužen o histidin, tj. His(BO), např. des(B30)humánní inzulín (sekvence id. č. 3), je účinný profil silně závislý např. na množství přidaných zinečnatých iontů. Přípravek neobsahující zinek nemá žádný depotní účinek (celkový účinek po 6 až 8 hodin, viz příklad 8) a sotva se farmakodynamikou liší od běžného humánního inzulínu, přičemž po přidání zinečnatých iontů (80 pg/ml) dochází k silnému opoždění/prodloužení účinku (celkový účinek po 16 hodin, viz příklad 8) . Pozorovaný depotní účinek je také mnohem výraznější než u NPH-inzulínů. Tyto analogy mají tudíž výhodu, že farmakodynamika je prostřednictvím obsahu zinku široce regulovatelná, což u normálního humánního inzulínu není možné. Je možné také získat přípravky s rychlým nástupem účinku stejně tak jako přípravky se středně nebo silně opožděným účinkem prostřednictvím změn v obsahu zinku. Tím je také možné účinný profil přípravku uzpůsobit individuálním potřebám pacienta, a to buď použitím přípravku s odpovídajícím, předem nastaveným obsahem zinku, nebo smícháním přípravku s vysokým a nízkým obsahem zinku, které provede buďto lékař nebo sám pacient.
Analogy inzulínu podle vynálezu mají ve srovnání s humánním* inzulínem zvýšenou afinitu k iontům zinku.
• · • · • · • ·
- 16 Humánní inzulín ve vodném neutrálním roztoku vytváří hexamery, které prostřednictvím His(BIO)-postranního řetězce komplexují dva zinečnaté ionty. Tyto dva ionty nelze odstranit dialýzou proti vodnému neutrálnímu pufru. Za stejných podmínek váží analogy podle vynálezu více než 4 zinečnaté ionty. V případě His (BO)-des(B30) - a His(B3)inzulínu je to 7 iontů zinku/hexamer a v případě Asp(B3)inzulínu bylo naměřeno 4,2 iontů zinku/hexamer (viz příklad
9) ·
Je známo, že v neutrálním roztoku zinek vytváří vysokomolekulární shluky a vede k vysrážení inzulínu. Po injekci slabě kyselého přípravku obsahujícího zinek, který obsahuje čirý rozpuštěný inzulín, dojde v důsledku neutralizace v podkožní tkáni k vytvoření komplexů inzulín-zinek a následně k precipitaci inzulínu. Z tohoto depotu se inzulín zase postupně uvolňuje do roztoku a dochází tak ke zpoždění účinku. Takové zpomalení účinku je u humánního inzulínu velmi slabé, avšak u analogů inzulínu podle vynálezu k němu dochází na základě jejich zvýšené afinity k zinku. Zvýšená vazba zinku je tudíž základem výše popsaného opoždění účinku závislého na zinku.
Předkládaný vynález se tudíž netýká je výše popsaných analogů inzulínu, ale také inzulín-zinek. Tyto komplexy se humánního inzulínu se zinkem v tom, pevně vázaného zinku. Je k vytvoření komplexů kromě příslušných komplexů odlišují od komplexů že mají vyšší podíl tedy nasnadě, že je možné zinku užít také jiné ionty přechodných kovů jako je např. kobalt nebo měď.
• · • ·
- 17 Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Konstrukce plazmidu pINT345d, který kóduje variantu
His(B3)-preproinzulínu
Patent USA č. 5358857 popisuje plazmid pINT90d. DNA tohoto plazmidu sloužila jako výchozí materiál ke konstrukci plazmidu pINT345d, který má proti původnímu plazmidu pINT90d dvě nové vlastnosti, za prvé kóduje analog preproinzulínu, který v pozici 3 řetězce B obsahuje aminokyselinu histidin místo asparaginu a bezprostředně před počátkem kódující sekvence nese sekvenci rozpoznávanou restrikčním enzymem kódující 10 aminokyselin N-konce být snadno použita pro genové přihlédne k štěpnému místu Dra3 seKvence může
BssX2, takže preproinzulínu manipulace, když se v sekvenci preproinzulínu.
Pro konstrukci plazmidu pINT345d byla DNA z plazmidu pINT90d po dvojitém naštěpení v pozici 284 bp a pozici 351 bp restrikčními enzymy Ncol a Dra3 rozdělena, takže byly získány 2 fragmenty. Po elektroforetickém rozdělení štěpné směsi byl izolován velký DNA fragment zbytkového plazmidu.
Tento DNA fragment byl pak v reakci s T4-DNA-ligázou spojen s následujícím DNA fragmentem
| Ncol | 3ssH2 | 31 | 32 | Kis | 34 | 35 | 35 | |||||||||
| 5'- | C | ATG GCA | ACA | ACA | TCA | ACA | GGA | AAT | TCG | GCG CGC | TTT | GTG | CAC | CAG | CAC | CTG |
| 3'- | CGT | TGT | TGT | AGT | TGT | CCT | TTA | AGC | CGC GCG | AAA | CAC | GTG | GTC | GTG | GAC |
B7 33 39 % Dra3
TGC GGC TCC CAC CTA - 3*
ACG CCG AGG GTG -5' • · · • · · • · · « • · · · · · • · · • · · · • * · ·
Ligační směsí byly transformovány kompetentní buňky E. coli K12 a transformované buňky byly vysety na NA-plotny obsahující 20 mg/1 ampicilinu. Plotny byly inkubovány přes noc při 37 °C. Ze vzniklých kolonií byla izolována plazmidová DNA a naštěpena restrikčním enzymem BssH2. Požadovaná DNA tím byla linearizována a tím se odlišila od DNA plazmidu pINT90d, která neobsahuje žádné štěpné místi pro BssH2 a tudíž není štěpena.
Odpovídající plazmidová DNA. ze správného klonu byla označena pINT345d.
Tato DNA byla použita jako výchozí materiál pro konstrukci variant preproinzulínu popsaných v následujících příkladech.
Příklad 2
Konstrukce plazmidu plNT342a, který kóduje variantu His (B0)-preproinzulínu
DNA z plazmidu pINT345d byla dvojitě naštěpena restrikčními enzymy Ncol a Dra.3 a po elektroforetickém rozdělení štěpné směsi byl izolován velký DNA fragment zbytkového plazmidu. Tento DNA fragment byl pak v reakci s T4-DNA-ligázou spojen s následujícím DNA. fragmentem
| His | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | Bó | 37 | 33 | 39 | 310 | |
| CG CGC | CAC | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC CTA |
| G | GTG | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GTG |
| % BssH2 | Hpal | Jj Dra3 |
Vznikl tak plazmid pINT324d, který se od výchozího plazmidu liší štěpným místem Hpal. Tento plazmid 'kóduje • « • · * · • · • · • · • · · · · · · • ·
- 19 obsahuj e v pozici
BO variantu preproinzulínu, která histidin.
| Příklad 3 | |||
| Konstrukce plazmidu pINT343d, His(Bl),Ala(BO)-preproinzulínu | který | kóduj e | variantu |
DNA fragment zbytkového plazmidu z předchozího příkladu byl v reakci s T4-DNA-ligázou spojen s následujícím DNA. fragmentem
| His | Ala | 31 | 32 | 33 | 34 | 55 | 33 | 37 | 33 | 39 | 310 311 | |
| 3'- CG CGC | CAC | GCT | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC CTA - 3' |
| 3 G | GTG | CGA | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GIG - 5' |
| 8 3ssH2 | Hpa | X | Dr a3 |
Vznikl tak plazmid pINT343d, který se, stejně jako plazmid p±NT342d, liší od výchozího· plazmidu dodatečným štěpným místem Hpal.
Příklad 4
Konstrukce plazmidu pINT344d, který kóduje variantu His (3-2),Ala(B-l), Ala(BO)-preproinzulínu
DNA v reakci fragment zbytkového s T4-DNA-ligázou plazmidu spojen s z příkladu 2 následuj ícím byl
DNA fragmentem
| · | Eis | Ala | Ala | 31 | 32 | 33 | B4 | B5 | 36 | 37 | 33 | 39 · | 310 | 311 | |
| 5'- CG CGC | CAC | GCT | GCT | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC | CTA_- | 3' |
| 3'- G | GTG | CGA | CGA | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GTG | - | 5 ' |
3ssH2 Hpal 8 Dra3
• · · · · · · • ·
- 20 Vznikl tak plazmid pINT344d, který se liší od výchozího vektoru dodatečným štěpným místem Hpal.
Příklad 5
Exprese konstruktů kódujících varianty inzulínu
Plazmidy pINT342d, 343d a 344d byly transformovány do buněk E. coli K12 W3110. Rekombinantní baktérie, které byly získány pro každou variantu, byly fermentovány podle příkladu z patentu USA č. 5227293 a byla tak získána požadovaná výchozí surovina pro každou z inzulínových variant.
Příklad 6
Příprava His(BO),des(B30)-inzulínu
Varianty proinzulínu byly exprimovány v E. coli podle příkladu 5 a pak izolovány ve formě inkluzních tělísek centrifugací po rozrušení buněk. Inkluzní tělíska byla rozpuštěna v močovině (8 mol/1), podrobena sulfitolýze a pak přečištěna pomocí aniontové výměnné chromatografie (na Q-Sepharose) a gelové permeační chromatografie (na Sephacryl
200). Pufr použitý pro chromatografií obsahoval 4M močovinu a 50mM Tris/HCl (Tris(hydroxymethyl)aminomethan/HCl), pH 8,5. Následovala frakcionovaná eluce z iontoměniče pomocí gradientu 0 až 0,5 M NaCI. Koncentrace močoviny byla nakonec ultrafiltrací a ředěním snížena na hodnotu nižší než 1M a preproinzulín-S-sulfonát byl izolován vysrážením při- pH 4, • ·
- 21 a nakonec byl precipitát vysušen.
Pro vytvoření správných disulfidických můstků, které existují v přírodním inzulínu, byl preproinzulín-S-sulfonát v koncentraci 0,3 g/1 rozpuštěn v pufru obsahujícím 20mM glycin při pH 10,8, doplněn merkaptoetanolem (asi 25 až 50 mol/mol preproinzulínu) a míchán po celou noc při 4 °C.
Vzorek byl nakonec pomocí kyseliny fosforečné upraven na pH 3,5 a centrifugován. Preproinzulín obsažený v supernatantu byl pak úpravou pH na 8,2 přídavkem Tris (25mM) a poté přidáním trypsinu (1,5 mg/g preproinzulínu) převeden na inzulín. Průběh proteolytického štěpení byl sledován pomocí HPLC s reverzní fází. Asi po 6 hodinách obsahoval vzorek vysoký podíl His(B0),des(B30)-inzulínu. Reakce byla ukončena okyselením na pH 3,5. Pak pokračovalo čištění analogů inzulínu pomocí iontové výměnné chromatografie (S-hyper-D, Sepracor) a chromatografie s reverzní fází (PLRP-S RP300, Polymer Laboratories). Iontová výměnná chromatografie se prováděla v pufru, který obsahoval 30% 2-proanoí a 50mM kyselinu mléčnou (pH 3,5). Eluce navázaného inzulínu byla provedena pomocí lineárního gradientu 0 až 0,5M NaCl. Chromatografie s reverzní fází probíhala v 0,1% trifluoroctové kyselině, která se pro eluci míchala s rostoucím množstvím acetonitrilu. Produkt byl izolován vysrážením při pH 5,4 a pak lyofilizován.
Příklad 7
Formulace analogů inzulínu pro parenterální podávání
Přípravek podle vynálezu obsahuje 40, popřípadě 100 IE inzulínu (1 IE odpovídá přibližně 6,2 nmol), 20 mg 85% • · · ·
- 22 glycerinu, 2,7 mg m-kresolu a případně zinek++ (jako chlorid zinečnatý) ve vodném sterilním roztoku s pH 4.
Příklad 8
Účinnný profil His(BO),des(B30)-inzulínu u psů
Každý ze šesti psů (Beagl) dostal subkutánní injekci přípravku se 40 U/ml (přípravek z příkladu 7) a udaným množstvím zinku. Dávka byla 0,3 IE/kg. V dalším průběhu pokusu byla v daných časových okamžicích měřena hladina glukózy v krvi. Hodnoty byly normovány v procentech ke každé výchozí hodnotě a vyneseny do následující tabulky.
| ČAS (hod.) | 0 | 1_ | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 1 2 |
| bez Zn | 100 | 59 | 50 | 61 | 75 | 8 4 | 89 | 98 | 103 | 97 | 104 | 100 |
| 8 0 gg Zn++/ml | 100 | 97 | 83 | 75 | 65 | 56 | 51 | 58 | 68 | 72 | 78 | 82 |
Příklad 9
Vazba zinku analogy inzulínu
Inzulínový přípravek (0,3mM inzulín, 0,13M NaCl, 0,1% Fenol, 100 μg/ml zinek++ (jako chlorid zinečnatý), 25mM Tris/HCl, pH 7,4) byl extenzivně dialyzován proti neutrálnímu pufru bez zinku (3 hodin proti 0,15M NaCl, lOmM Tris/HCl pH 7,4 při teplotě místnosti, 72 hodin proti lOmM Tris/HCl pH 7,4 při 15 °C a ještě 16 hodin proti lOmM Tris/HCl pH 7,4 • · ♦ · ♦ · • · « · • · • · · · • · · ·
- 23 při 15 °C. Poté by dialyzát odsát a analyzován. Koncentrace inzulínu byla stanovena pomocí HPLC s reverzní fází a koncentrace zinku byla stanovena atomovou absorpční spektroskopií. Hodnoty pro zinek byly korigovány podle obsahu zinku kontrolních vzorků, které neobsahovaly žádný inzulín.
Vázání zinku variantami inzulínu
| Inzulín | mol Zn/mol hexamerů |
| humánní inzulín | 2,5 |
| His(B3)-inzulín | 6,9 |
| Asp(B3)-inzulín | 4/2 |
| His(BO) , des(B30)-inzulín | 6, 3 |
• ·
- 24 SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENí: protein (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 1:
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Cys Asn 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: orotein (B) POZICE: 1...30 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 2:
Phe Val Asn Gin His 1 5
Leu Cys Gly Ser His 10
Leu Val Glu Ala Leu Tyr 15
Leu Val Cys Gly Glu 20
A.rg Gly Phe Phe Tyr 25
Thr Pro Lys Thr 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein • · « · · • · · · • · · · · «
- 25 (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...30 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 3:
| His 1 | Phe | Val | Asn | Gin 5 | His | Leu Cys | Gly | Ser 10 | His | Leu* | Val | Glu Ala Leu 15 |
| Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys |
| 20 | 25 | 30 |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 31 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: crotein (B) POZICE: 1...3I (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 4:
Eis Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu 1 5 10 15
Tyr Leu Val Cys Giy Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 32 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: orotein (B) POZICE: 1...32 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 5:
• · · • · · · *
| His 1 . | Ala | Phe | Val | Asn 5 | Gin | His | Leu Cys | Gly 10 | Ser | Kis | Leu | Val | Glu 15 |
| Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly | Glu | Arg Gly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lys |
25 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 33 aminokyselin (3) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...33
| (xi) POPIS | SEKVENCE:'· SEKVENCE | S ID. Č. 6 | • | ||
| Kis | Ala Ala Phe | Val Asn Gin His Leu Cys | Gly Ser His | Leu | Val Glu |
| 1 | 5 10 | 12 | |||
| Ai 3 | Leu Tyr Leu | Val Cys Gly Glu Arg Gly | ?hs Tvc | Thr | Pro Lys |
| 20 | 25 | 30 |
Thr (2) ^INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 98 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (3) POZICE: 1...98
| (xi) POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE | S ID. | Č. | 7: | |
| Het | Ala Thr Thr Ser Thr Gly | Asn Ser Ala | Arg Kis | Phe | Val A.sn Gin |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||
| His | Leu Cys Gly Ser His Leu | Val Glu Ala | Leu Tyr | Leu | Val Cys Gly |
| 20 | 25 | 30 |
| Glu | Arg | Gly 35 | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro 40 | Lys | Thr | Arg | Arg | Glu 45 | Ala | Glu | Asp |
| Pro | Gin 50 | Val | Gly | Gin | Val | Glu 55 | Leu | Gly | Gly | Gly | Pro 60 | Gly | Ala | Gly | Ser |
| Leu 65 | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu 70 | Glu | Gly | Ser | Leu | Gin 75 | Lys | Arg | Gly | Ile | Val 80 |
| Glu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn | Tyr |
£5 SO 95
Cys Asn
(.2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 39 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TY? VLÁKNA:'i ednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: orotein (B) POZICE: 1...99
| (xi) | POPIS | SEKVENCE: | SEKVENCE | S li | 3. C | . 8 : | |
| Mez 1 | Ala | Thr Thr | Ser Thr Gly 5 | Asn Ser Ala 10 | Arg | His | Ala Phe Val Asn 15 |
| Gin | His | Leu Cys 20 | Gly Ser His | Leu Val Glu 25 | Al a | Leu | Tyr Leu Val Cys 30 |
| Gly | Glu | Arg Giv 35 | Phe Phe Tyr | Thr Pro Lys 40 | Thr | Arg | Arg Glu Ala Glu 45 |
| Asp | Pro 50 | Gin Val | Gly Gin Val 5 5 | Glu Leu Gly | Gly | Gly 60 | Pro Gly Ala Gly |
| Ser 65 | Leu | Gin Pro | Leu Ala Leu 70 | Glu Gly Ser | Leu 75 | Gin | Lys Arg Gly Ile 80 |
| Val | Glu | Gin Cys | Cys Thr Ser S5 | Ile Cys Ser SO | Leu | Tyr | Gin Leu Glu Asn 95 |
Tvr Cys Asn
• · • · « · · · · · ·
- 28 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA:' 100 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENí: protein (B) POZICE: 1...100
| (Xi) POPI | S SEKVENCE | : SEKVENCE | S | ID. | Č. | 9: | |
| Met 1 | Ala Thr Thr | Ser Thr Gly 5 | Asn Ser Ala 10 | Arg | His | Ala | Ala Phe Val 15 |
| Asn | Gin His Leu 20 | Cys Gly Ser | His Leu Val 25 | Glu | Ala | Leu | Tyr Leu Val 30 |
| Cys | Gly Glu Arg 35 | Gly Phe Phe | Tyr Thr Pro 40 | Lys | Thr | Arg 45 | Arg Glu Ala |
| Glu | Asp Pro Gin 50 | Val Gly Gin 5 c | Val Glu Leu | Gly | Gly 60 | Gly | Pro Gly Ala |
| Gly 6 5 | Ser Leu Gin | Pro Leu Ala 70 | Leu Glu Gly | Ser 75 | Leu | Gin | Lys Arg Gly 80 |
| I le | Val Glu Gin | Cys Cys Thr 65 | Ser Ile Cys 50 | Ser | Leu | Tyr | Gin Leu Glu 55 |
Asn Tyr Cys Asn 100 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: orotein (B) POZICE: 1...30 • · • · * * • · · · • · » ·
- 29 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 10:
| Phe 1 | Val | His | Gin | His 5 | Leu Cys | Gly | Ser | His 10 | Leu | Val | Glu | Ala | Leu Tyr 15 |
| Leu | Val | Cys | Gly 20 | Glu | Arg Gly | Phe | Phe 25 | Tyr | Thr | Pro | Lys | Thr 30 |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLeM 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA:' jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/'O ZNAČEN í : protein (B) POZICE: 1...30
| (xi! | POPIS SEKVENCE: SEKVENCE | S | ID. | C. | 11 : | |
| Phe | Val Asp | Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu 5 ’ 10 | Val | Glu | Ala Leu 15 | |
| Leu | Val Cy s | Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr T 20 25 | Pro | Lys | Thr 30 |
»· · » ·· ··
Claims (2)
1. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, který má vzorec I
S-S (A1-A5)-Cys-Cys-R3-R9-R1Q-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21 (I)' s S
Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys- (B3-B18) - Cys-(B20-B29)-R30 kde (A.1-.A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 v řetězci A humánního nebo zvířecího inzulínu, (A.15-A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích A.15 až A19 v řetězci A humánního nebo zvířecího inzulínu, (B8-318) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích BS až B13 v řetězci B humánního nebo zvířecího inzulínu, (B2C-329) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až 329 v řetězci B humánního nebo zvířecího inzulínu,
9 9 « ·
- 31 zbytek, nebo není přítomen, nebo je to atom vodíku,
R2 je Val, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu nebo Asp,
R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
Z je atom vodíku nebo peptidový zbytek s 1 až 4 geneticky kódovatelnými aminokyselinovými zbytky, obsahující 1 až 4 histidinové zbytky (His), přičemž platí podmínky, že v případě, kdy Z je atom vodíku, R1 nebo R3 jsou His, Glu nebo Asp, přičemž R3 je His, když R1 je neutrální nebo negativně nabitá aminokyselina, nebo platí, že v případě, kdy Z je atom vodíku, R14 je His, Asp nebo Glu, a dále platí podmínka, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle vzorce I se neodlišuje od humánního inzulínu pouze samotnými změnami aminokyselinových
podle nároku 1 nebo 2, kde R1 je Phe, His, Asn, Asp nebo Gly.
4. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde R30 je Thr, Ala nebo Ser.
5. Analog inzulínu nebo jeho fyziologic-ky přijatelná sůl·
podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde R30 je Ser.
14. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde R30 je -OH.
15. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl• · • · • · • · · • · · · • · · · · · · • 9 · • · ·
9 9 9
- 33 podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, kde Z je His.
16. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, kde Z je His-Ala.
17. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, kde Z je His-AlaAla.
18. ?uialog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 15, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id.
č. 3) :
His Phe Va! Asn Gin His Leu Cys Giy Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys
19.
1U podle nároku 15, nebo jeho fyziologicky přijatelná kde řetězec B mé sekvenci (sekvence id.
č. 4) :
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Led Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Tnr
20. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 16, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id.
č. 5):
His Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
21. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 17, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 6):
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr - '
0 0 · · · · • 0 · 0 · • 000 0· 00 • · · · · · ·
- 34 22.Způsob přípravy analogu inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelné soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 vyznačující se tím, že obsahuje kroky konstrukce replikovatelného expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu s obecnou aminokyselinovou sekvenci podle vzorce II:
Met-X2m-(Afg)p-Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys-(B8-B18)-Cys-(B20-B29)-R30-X1n-Arg(A1-A5)-Cys-Cys-R3-Ser-R10-Cys-Ser-Lec-Rl4-(A15-A19)-Cys-R21 (II!
kde
X1.-! je peptidový řetězec obsahující n aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 34,
X~-, peptidový řetězec obsahující m aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 20, p je 0, 1 nebo 2,
R30 je libovolný, geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo chybí, a
Z buďto chybí nebo je to peptidový zbytek s 1 až 4 geneticky kódovatelnými aminokyselinami obsahující 1 až 4 histidinových zbytků (His) a zbývající proměnné mají stejný význam jako v nároku 1, přičemž platí i pravidla z nároku 1, a dále způsob obsahuje krok exprese v hostitelských buňkách a uvolnění analogu inzulínu z jeho prekurzoru chemickými a/nebo enzymatickými metodami.
23. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že hostitelská buňka je baktérie.
24. Způsob podle nároku 23 vyznačující se tím, že baktérie je E. coli.
• · • · • · · · · · · • · • *
- 35 25. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že hostitelská buňka je kvasinka.
26. Způsob podle nároku 25 vyznačující se tím, že kvasinka je Saccharomyces cerevisiae.
27. Způsob podle nároku 22 až 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 19 vyznačující se tím, že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 7) :
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Giu Ala Leu Tyr Leu Val Cys
Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala
Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys
Asn
28. Způsob podle nároku 22 až 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 20 vyznačující se tím, že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 8) :
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Ala Phe Va! Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala
Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys
Asn • · · • · · • · · · • · · · · · • · · · · • · · · ·
- 36 29.Způsob podle nároku 22 až 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 20 vyznačující se tím, že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 9) :
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Giy Phe Pne Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Va! Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys Arg Gly lle Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser lle Cys
Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
34.Sekvence DNA, která kóduje prekuzor analogu inzulínu podle nároku 30.
35.Sekvence DNA, která kóduje prekuzor analogu inzulínu podle nároku 31.
36.Sekvence DNA, která kóduje prekuzor analogu inzulínu podle nároku 32.
37.Sekvence DNA, která kóduje prekuzor analogu inzulínu podle nároku 33.
• · · · ·
- 37 38.Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 34.
39. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 35.
40. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 36.
41. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 37.
42. Hostitelské buňka, která je transformována expresním vektorem podle kteréhokoliv z nároků 38 až 41.
43. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden analog inzulínu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 a/nebo alespoň jednu jeho fyziologicky přijatelnou sůl.
44. Farmaceutický přípravek podle nároku 43 vyznačující se tím, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl je v rozpuštěné, amorfní a/nebo krystalické formě.
45.Farmaceutický přípravek podle nároku vyznačující se tím, že depotní pomocné látky.
43 nebo 44 dále obsahuje
Farmaceutický přípravek vyznačující se t látka je protaminsulfát, přičemž fyziologicky přijatelná sůl společný krystaiizát.
podle nároku 45 i m, že depotní pomocná analog inzulínu nebo jeho tvoří s protaminsulfátem
47.Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků- 43 až• · • · • · • · • · • ·
- 33 46 vyznačující se tím, že navíc obsahuje nemodifikovaný humánní inzulín.
48. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 43 až 47 vyznačující se tím, že navíc obsahuje analog inzulínu.
49. Farmaceutický přípravek podle nároku 48 vyznačující se tím, že analog inzulínu je Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32)-humánní inzulín.
50.Injikovatelný roztok s inzulínovou aktivitou vyznačující se tím, že obsahuje farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 43 až 49 v rozpuštěné formě.
Inj ikovatelný v y z n a č u 2 mg zinku na roztok jící se i ml.
podle tím, že nároku obsahuje 1 pg
Inj ikovatelný vyznačuj 200 pg zinku na roztok ící se
1 ml.
podle t i m, že nároku obsahuje 5 pg až
53.Použití analogu inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 k výrobě farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným nástupem účinku.
54.Komplex inzulín-zinek, který obsahuje inzulínový hexamer a 4 až 10 zinečnatých iontů na každý inzulínový hexamer, 'přičemž inzulínový hexamer sestává ze šesti molekul « · • · • · » · · « » · · « » · · I
I · · I • · · · • · · • « · · • · · · · · «
- 39 analogu inzulínu podle vzorce I s
l
2-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys- (33-513)
S
Cys-(B20-329)-R30 kde (AI-A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 řetězce A humánního nebo zvířecího inzulínu, (A15-A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích A15 až
A19 řetězce A humánního nebo zvířecího inzulínu, (B8-B18) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B3 až 313 řetězce B humánního nebo zvířecího inzulínu, (320-329) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích 320 až
B29 řetězce B humánního nebo zvířecího inzulínu,
R8 je Thr nebo Ala,
R9 je Ser nebo Gly,
R10 je Ile nebo Val,
R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu,
R21 je Asn, -Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, Glu nebo Gin,
R1 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, nebo je to atom vodíku, R2 je Val, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu-nebo Asp, • · • · • · ··· · · · · ···· ···· · · · · · · • ······ · · · · · · · ··· · · · · · · •· · ······· ·· ··
- 40 R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
Z je atom. vodíku nebo peptidový zbytek s 1 až 4 geneticky kódovatelnými aminokyselinovými zbytky, obsahující 1 až 4 histidinové zbytky (His).
55. Komplex inzulín-zinek podle nároku 54, který obsahuje 5 až 8 zinečnatých iontů na každý inzulínový hexamer.
56. Komplex inzulín-zinek podle nároku 54 nebo 55, kde inzulínový hexamer sestává ze šesti molekul analogu inzulínu podle vzorce I podle kteréhokoliv z nároků i až 21.
57. Komplex inzulín-zinek podle nároku 54 nebo 55, kde řetězec B analogu inzulínu podle vzorce I má sekvenci (sekvence id. č. 10):
Phe Val His Gin His Leu Cys Gly Ser His Lsu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
58. Komplex inzulín-zinek podle nároku 54 nebo 55, kde řetězec B analogu inzulínu podle vzorce I má sekvenci (sekvence id. č. il):
Pne Val Asp Gin His Lsu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
59. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden komplex inzulín-zinek podle kteréhokoliv z nároků 54 až 58.
60. Farmaceutický přípravek vyznačující s e - t i my • · • · • ·
- 41 že obsahuje kyselý roztok alespoň jednoho analogu inzulínu podle kteréhokoliv z nároků 54 až 58 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli společně s odpovídajícím množstvím zinečnatých iontů, které umožní vznik komplexu inzulín-zinek podle kteréhokoliv z nároků 54 až 58.
61.Farmaceutický přípravek podle nároku 60 vyznačující se tím, že obsahuje kyselý roztok alespoň jednoho analogu inzulínu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli společně s odpovídajícím množstvím zinečnatých iontů, které umožní vznik komplexu inzulín-zinek podle nároku 56.
přípravek podle nároku 60 ící se tím, že obsahuje kyselý jednoho analogu inzulínu podle nároku 57 jeho fyziologicky přijatelné soli společně množstvím zinečnatých iontů, které umožní inzulín-zinek podle nároku 57 nebo 58.
Farmaceutický vyznačuj roztok alespoň nebo 58 a/nebo s odpovídajícím vznik komplexu
63.Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 55 až 62 vyznačující se tím, že obsahuje komplex inzulín-zinek v rozpuštěné, amorfní a/nebo krystalické formě.
64.Injikovatelný roztok v y z n a č u j ící farmaceutický .oříoravek formě.
65.Injikovatelný roztok vyznačuj ící s inzulínovou se tím, podle nároku 63 aktivitou že obsahuje v rozpuštěné podle t í m, že nároku 64 obsahuje 1- μg až· ··· · · « ·· ·· ··· ···« ···· • · · · · · ···· • ······ · · ·· ·· · ··· ·· · · · · • · · ······· · · · ·
- 42 2 mg zinku na 1 ml.
66.Injikovateiný roztok podle nároku 65 vyznačující se tím, že obsahuje 5 μα až 200 pg zinku na 1 ml.
67.Použití komplexu inzulín-zinek podle kteréhokoliv z nároků 54 až 53 k výrobě farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným. nástupem
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19825447A DE19825447A1 (de) | 1998-06-06 | 1998-06-06 | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20004525A3 true CZ20004525A3 (cs) | 2001-04-11 |
| CZ301377B6 CZ301377B6 (cs) | 2010-02-03 |
Family
ID=7870213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20004525A CZ301377B6 (cs) | 1998-06-06 | 1999-05-21 | Analogy inzulínu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prípravky obsahující tyto analogy |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6686177B1 (cs) |
| EP (1) | EP1084248B1 (cs) |
| JP (1) | JP4402296B2 (cs) |
| KR (1) | KR100649339B1 (cs) |
| CN (1) | CN1304450B (cs) |
| AR (1) | AR019852A1 (cs) |
| AT (1) | ATE334201T1 (cs) |
| AU (1) | AU757275B2 (cs) |
| BR (1) | BR9910978A (cs) |
| CA (1) | CA2330183C (cs) |
| CZ (1) | CZ301377B6 (cs) |
| DE (2) | DE19825447A1 (cs) |
| DK (1) | DK1084248T3 (cs) |
| ES (1) | ES2268871T3 (cs) |
| HU (1) | HU228908B1 (cs) |
| MX (1) | MXPA00011456A (cs) |
| NO (1) | NO329956B1 (cs) |
| PL (1) | PL198190B1 (cs) |
| PT (1) | PT1084248E (cs) |
| RU (1) | RU2225723C2 (cs) |
| TR (1) | TR200003606T2 (cs) |
| WO (1) | WO1999064598A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200006835B (cs) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| WO2002067969A2 (en) | 2001-02-21 | 2002-09-06 | Medtronic Minimed, Inc. | Stabilized insulin formulations |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| US7875700B2 (en) | 2004-07-19 | 2011-01-25 | Biocon Limited | Cation complexes of insulin compound conjugates, formulation and uses thereof |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| AU2008313248B2 (en) * | 2007-10-16 | 2012-04-26 | Biocon Limited | An orally administerable solid pharmaceutical composition and a process thereof |
| PL2209800T3 (pl) * | 2007-11-16 | 2013-12-31 | Novo Nordisk As | Stabilne kompozycje farmaceutyczne zawierające liraglutyd i degludec |
| PL219335B1 (pl) * | 2008-07-04 | 2015-04-30 | Inst Biotechnologii I Antybiotyków | Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna |
| JP5780958B2 (ja) * | 2008-07-31 | 2015-09-16 | ケイス、ウエスタン、リザーブ、ユニバーシティ | ハロゲン安定化インスリン |
| EA201201164A1 (ru) * | 2010-02-22 | 2013-04-30 | Кейз Вестерн Ризев Юнивесити | Препараты на основе аналогов инсулина пролонгированного действия в растворимой и кристаллической формах |
| PL222975B1 (pl) | 2012-05-23 | 2016-09-30 | Inst Biotechnologii I Antybiotyków | Analog insuliny lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna o przedłużonym działaniu terapeutycznym oraz zastosowanie analogu insuliny |
| FR3013049B1 (fr) | 2013-11-14 | 2015-11-13 | You-Ping Chan | Analogue de l'insuline glargine |
| US10562951B2 (en) | 2015-03-10 | 2020-02-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for preparing recombinant insulin using microfiltration |
| UY36870A (es) * | 2015-08-28 | 2017-03-31 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Análogos de insulina novedosos |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI78616C (fi) | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| DE3326472A1 (de) | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| SU1250303A1 (ru) * | 1983-12-30 | 1986-08-15 | Филиал По Разработке Готовых Лекарственных Средств Научно-Исследовательского Института По Биологическим Испытаниям Химических Соединений | Способ стабилизации суспензии цинк-инсулина кристаллического |
| DE3440988A1 (de) | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| US4569794A (en) * | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| US5008241A (en) | 1985-03-12 | 1991-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin peptides |
| DE3526995A1 (de) | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| PH25772A (en) * | 1985-08-30 | 1991-10-18 | Novo Industri As | Insulin analogues, process for their preparation |
| DE3636903A1 (de) | 1985-12-21 | 1987-07-02 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit eukaryotischem ballastanteil |
| DE3541856A1 (de) | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| RU2104305C1 (ru) * | 1986-08-29 | 1998-02-10 | Ново Нордиск А.С. | Аналоги инсулина человека, способ их получения, раствор для инъекций |
| CA1340522C (en) | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
| DE3805150A1 (de) | 1987-04-11 | 1988-10-20 | Hoechst Ag | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von polypeptiden |
| DE4012818A1 (de) | 1990-04-21 | 1991-10-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten |
| DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
| DE3739347A1 (de) | 1987-11-20 | 1989-06-01 | Hoechst Ag | Verfahren zur selektiven spaltung von fusionsproteinen |
| DK257988D0 (da) * | 1988-05-11 | 1988-05-11 | Novo Industri As | Nye peptider |
| EP0347781B1 (de) | 1988-06-23 | 1994-02-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Mini-Proinsulin, seine Herstellung und Verwendung |
| DE3827533A1 (de) | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3837825A1 (de) | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| US5358857A (en) | 1989-08-29 | 1994-10-25 | The General Hospital Corp. | Method of preparing fusion proteins |
| US5227293A (en) | 1989-08-29 | 1993-07-13 | The General Hospital Corporation | Fusion proteins, their preparation and use |
| IL95495A (en) | 1989-08-29 | 1996-10-16 | Hoechst Ag | Fusion proteins their preparation and use |
| DE59305396D1 (de) | 1992-12-02 | 1997-03-20 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Proinsulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| EP0705275B1 (en) * | 1993-06-21 | 1999-02-03 | Novo Nordisk A/S | Asp-b28 insulin crystals |
| SI0792290T1 (en) * | 1993-09-17 | 2001-12-31 | Novo Nordisk As | Acylated insulin |
| DE4405179A1 (de) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| DE59711533D1 (de) * | 1996-07-26 | 2004-05-27 | Aventis Pharma Gmbh | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
-
1998
- 1998-06-06 DE DE19825447A patent/DE19825447A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-05-21 EP EP99925023A patent/EP1084248B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 CZ CZ20004525A patent/CZ301377B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 DE DE59913711T patent/DE59913711D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 MX MXPA00011456A patent/MXPA00011456A/es not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 WO PCT/EP1999/003490 patent/WO1999064598A2/de active IP Right Grant
- 1999-05-21 RU RU2001101164/15A patent/RU2225723C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 BR BR9910978-6A patent/BR9910978A/pt active Search and Examination
- 1999-05-21 JP JP2000553588A patent/JP4402296B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 KR KR1020007013862A patent/KR100649339B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 CA CA002330183A patent/CA2330183C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 AT AT99925023T patent/ATE334201T1/de active
- 1999-05-21 TR TR2000/03606T patent/TR200003606T2/xx unknown
- 1999-05-21 CN CN998070688A patent/CN1304450B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 AU AU41454/99A patent/AU757275B2/en not_active Ceased
- 1999-05-21 PL PL345898A patent/PL198190B1/pl unknown
- 1999-05-21 HU HU0102217A patent/HU228908B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 ES ES99925023T patent/ES2268871T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 DK DK99925023T patent/DK1084248T3/da active
- 1999-05-21 US US09/701,968 patent/US6686177B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 PT PT99925023T patent/PT1084248E/pt unknown
- 1999-06-03 AR ARP990102631A patent/AR019852A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-11-22 ZA ZA200006835A patent/ZA200006835B/xx unknown
- 2000-12-05 NO NO20006177A patent/NO329956B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2529952C2 (ru) | Новые производные инсулина с сильно замедленным профилем время/действие | |
| RU2176646C2 (ru) | Инсулин и его производные с повышенной способностью связывать цинк | |
| JP5695909B2 (ja) | 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体 | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| KR100546225B1 (ko) | 신속한 작용개시를 나타내는 인슐린 유도체 | |
| CN102007143B (zh) | 具有超延迟时效特征的新型胰岛素衍生物 | |
| TW200817432A (en) | Amidated insulin glargine | |
| CZ289343B6 (cs) | Inzulinový derivát a farmaceutický prostředek pro léčení diabetes | |
| CZ20004525A3 (cs) | Analogy inzulínu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto analogy | |
| MXPA05004440A (es) | Cristales de analogos de insulina y metodo para la produccion de los mismos. | |
| HK1036808B (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| MXPA97005667A (en) | Insulin derivatives with zinc increment |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150521 |