CZ301377B6 - Analogy inzulínu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prípravky obsahující tyto analogy - Google Patents
Analogy inzulínu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prípravky obsahující tyto analogy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ301377B6 CZ301377B6 CZ20004525A CZ20004525A CZ301377B6 CZ 301377 B6 CZ301377 B6 CZ 301377B6 CZ 20004525 A CZ20004525 A CZ 20004525A CZ 20004525 A CZ20004525 A CZ 20004525A CZ 301377 B6 CZ301377 B6 CZ 301377B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- insulin
- ser
- glu
- cys
- ala
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 223
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 3
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 16
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims description 75
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 68
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 62
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 62
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 47
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 36
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 claims description 33
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 32
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 31
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 19
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 claims description 16
- RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N Ala-Leu-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RGQCNKIDEQJEBT-CQDKDKBSSA-N 0.000 claims description 15
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 14
- RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N Gly-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 14
- MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN MKIAPEZXQDILRR-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 14
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 14
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 claims description 13
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 claims description 13
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 claims description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 12
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 9
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims description 9
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 claims description 8
- BIAKMWKJMQLZOJ-ZKWXMUAHSA-N His-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(O)=O BIAKMWKJMQLZOJ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 7
- AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N Tyr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O AOIZTZRWMSPPAY-KAOXEZKKSA-N 0.000 claims description 7
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 6
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 claims description 6
- XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N Thr-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XFTYVCHLARBHBQ-FOHZUACHSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 6
- FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N His-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FLUVGKKRRMLNPU-CQDKDKBSSA-N 0.000 claims description 5
- HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N Met-Ala-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HUKLXYYPZWPXCC-KZVJFYERSA-N 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 5
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 5
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 5
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 4
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 claims description 4
- VDHOMPFVSABJKU-ULQDDVLXSA-N His-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N VDHOMPFVSABJKU-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims description 4
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- TVHCDSBMFQYPNA-RHYQMDGZSA-N Lys-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TVHCDSBMFQYPNA-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims description 4
- XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XBWKCYFGRXKWGO-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 4
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 claims description 4
- WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N Cys-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O WTXCNOPZMQRTNN-BWBBJGPYSA-N 0.000 claims description 3
- OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N Glu-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N Ile-Val-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N YWCJXQKATPNPOE-UKJIMTQDSA-N 0.000 claims description 3
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 3
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 claims description 3
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 3
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 3
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 claims description 3
- FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N Val-Cys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FPCIBLUVDNXPJO-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims description 3
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 FRJIAZKQGSCKPQ-FSPLSTOPSA-N 0.000 claims description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 2
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N Ile-Cys-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N DURWCDDDAWVPOP-JBDRJPRFSA-N 0.000 claims 2
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 2
- OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N Val-Glu-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N 0.000 claims 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 2
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims 2
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 claims 2
- GMVCSRBOSIUTFC-FXQIFTODSA-N Glu-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMVCSRBOSIUTFC-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N Glu-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RFTVTKBHDXCEEX-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O LBDXVCBAJJNJNN-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 8
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 abstract description 6
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical group NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 description 13
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N Phe-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O DSXPMZMSJHOKKK-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N Cys-Asn Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 5
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N Cys-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KOHBWQDSVCARMI-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 4
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 4
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 4
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 3
- HQZGVYJBRSISDT-BQBZGAKWSA-N Cys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O HQZGVYJBRSISDT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- KTDXIOQSLSGDPM-QHJSVBGUSA-N (2s,3r)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=C(O)C=C1 KTDXIOQSLSGDPM-QHJSVBGUSA-N 0.000 description 2
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O YNQMEIJEWSHOEO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GGRDJANMZPGMNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N Glu-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LKDIBBOKUAASNP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 2
- IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N Leu-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O IASQBRJGRVXNJI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- IEHDJWSAXBGJIP-RYUDHWBXSA-N Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=CC=C1 IEHDJWSAXBGJIP-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- FAAHJOLJYDXKKU-ZHDGNLTBSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-1-[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CN)C1=CC=C(O)C=C1 FAAHJOLJYDXKKU-ZHDGNLTBSA-N 0.000 description 1
- XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 2-[[2-[[2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XWTNPSHCJMZAHQ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NBTGEURICRTMGL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SLNCSSWAIDUUGF-LSJOCFKGSA-N Arg-His-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SLNCSSWAIDUUGF-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- IRRMIGDCPOPZJW-ULQDDVLXSA-N Arg-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O IRRMIGDCPOPZJW-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- PFOYSEIHFVKHNF-FXQIFTODSA-N Asn-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PFOYSEIHFVKHNF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UENPHLAAKDPZQY-XKBZYTNZSA-N Glu-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O UENPHLAAKDPZQY-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N Gly-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N Gly-Val-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GOUWCZRDTWTODO-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N Phe-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LALNXSXEYFUUDD-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LALNXSXEYFUUDD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N Ser-Thr-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PURRNJBBXDDWLX-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- XYEXCEPTALHNEV-RCWTZXSCSA-N Thr-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O XYEXCEPTALHNEV-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N Tyr-Leu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDKZJGMPZHPAJC-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- YDPFWRVQHFWBKI-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N YDPFWRVQHFWBKI-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N Valylglycine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 108010066829 alanyl-glutamyl-aspartylprolyine Proteins 0.000 description 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010073093 leucyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003538 oral antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910001428 transition metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- -1 zinc insulin complexes Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Analogy inzulínu, které projevují zvýšené schopnosti vázat zinek, a také komplexy inzulínu se zinkem, které ve srovnání s humánním inzulínem mají opoždený úcinek. Zpusob prípravy techto analogu a jejich použití zejména pro výrobu farmaceutických prípravku k lécení Diabetes mellitus I. a II. typu.
Description
Analogy inzulínu, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto analogy
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká analogů inzulínu, které projevují zvýšené schopnosti vázat zinek, a také komplexů inzulínu se zinkem, které ve srovnání s humánním inzulínem mají opožděný profil účinku. Dále se vynález týká způsobů přípravy těchto analogů ajejich použití zejména ve io farmaceutických přípravcích k léčení Diabetes mellitus I. a II. typu.
Dosavadní stav techniky i? Celosvětově trpí onemocněním Diabetes mellitus asi 120 milionů lidí. Z toho asi 12 milionů lidí trpí diabetem I. typu, přičemž pro tyto diabetiky představuje v současné době jedinou možnou terapií substituční léčba nahrazující chybějící endokrinní sekreci. Postižení lidé jsou celoživotně, zpravidla několikrát denně, závislí na inzulínové injekci. Ve srovnání stím diabetes II. typu neznamená zásadní nedostatek inzulínu, avšak přesto v mnohých případech, zejména v pokroči20 lém stadiu, léčení inzulínem, případně v kombinaci s perorálními antidiabetiky, představuje účinnou formu terapie.
U zdravých jedinců je uvolňování inzulínu z pankreatu přísně svázáno s hladinou glukózy v krvi. Zvýšená glykémie, ke které dochází pojidle, je urychlené kompenzována odpovídajícím zvýše25 ním sekrece inzulínu. V lačném stavu klesá hladina inzulínu v plazmě na bazální hodnotu, která je dostatečná k tomu, aby bylo zajištěno kontinuálně zásobování glukózou orgánů a tkání vnímavých k inzulínu a přitom produkce glukózy v játrech byla v noci udržována na nízké úrovni. Náhrada tělu vlastní sekrece inzulínu exogenním inzulínem, většinou dodávaným subkutánní injekcí, se však kvalitou zpravidla nepřibližuje výše popsané fyziologické regulaci krevní glukoso zy. Často dochází k vychýlení hladiny glukózy v krvi směrem dolů nebo nahoru, což se v těžších případech může stát faktorem ohrožujícím život. Kromě toho po léta zvýšená hladina krevní glukózy bez počátečních příznaků představuje zvýšené zdravotní riziko. Rozsáhlá studie DCCT v USA (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group, 1993, N. Engl. I Med. 329: 977-986) jasně ukázala, že chronické zvýšení glykémie je významně zodpovědné za rozvoj pozdních diabetických poškození. Tato pozdní diabetické poškození představují mikro- a makrovaskulámí poškození, která se manifestují jako různé retino-, nefro- a nebo neuropatie vedoucí k oslepnutí, selhání ledvin a ztrátě končetin, a jsou spojeny se zvýšeným rizikem srdečních a oběhových onemocnění. Z výše uvedeného je zřejmé, že terapie diabetů musí v první řadě být zacílena na to, aby byla udržena hladina krevní glukózy ve fyziologických mezích. Podle konceptu intenzivní inzulínové terapie je toho dosaženo pomocí injekcí rychle a pomalu působících inzulínových přípravků aplikovaných několikrát denně. Rychle působící přípravky se podávají současně s jídlem, aby se vyrovnal postprandiální vzestup krevní glukózy. Pomalu působící přípravky se podávají k udržení základního přísunu inzulínu, zejména k zabezpečení přes noc, aniž by došlo k hypoglykémii.
V současnosti užívané základní inzulínové přípravky tyto požadavky splňují jen nedokonale. Zejména Často užívané NPH-inzulíny projevují významné maximum účinnosti a přitom mají krátkodobý účinek. To při večerní aplikaci přináší nebezpečí noční hypoglykémie a ranní hyperglykémie.
Z Evropského patentu EP 0 821 006 jsou známy analogy inzulínu se zvýšenou schopností vázat zinek, které mají ve srovnání s humánním inzulínem prodloužený profil účinku. Tyto analogy se liší od humánního inzulínu změnou aminokyseliny v pozici A21 řetězce A a adicí histidinových zbytků nebo peptidu s 2 až 35 aminokyselinovými zbytky, v nichž je 1 až 5 histidinových zbytků, na pozici B30 v řetězci B inzulínu.
- 1 CZ 301377 B6
Podstata vynálezu
Cílem předkládaného vynálezu bylo připravit další nové analogy (analogy humánního nebo zvířecího inzulínu), které mají zvýšenou schopnost vázat zinek, vytvářejí stabilní komplex obsahující hexamer inzulínových analogů a zinku, a jeho výhodné použití pro subkutánní injekce, které ve srovnání s humánním inzulínem mají opožděný profil účinku, což umožňuje zlepšit terapii Diabetes mellitus I. a II. typu.
to Analogy inzulínu jsou odvozeny z inzulínů přírodního původu, zejména humánního inzulínu (sekvence id. č. 1: řetězec A humánního inzulínu, sekvence id. č. 2: řetězec B humánního inzulínu) nebo zvířecího inzulínu buďto substitucí, nebo delecí alespoň jednoho přirozeně se vyskytujícího aminokyselinového zbytku a/nebo adicí alespoň jednoho přirozeně se vyskytujícího aminokyselinového zbytku v řetězci A a/nebo řetězci B přirozeně se vyskytujícího inzulínu,
Vynález poskytuje analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelnou sůl, který má vzorec (I):
(A1 -A5)-Cys-Cys- R8-R9-R10-Cys-Ser-L&u-R14-(A15-A19)-Cys-R2t
S (0 s
Z-R1 -R2-R3-R4-His-Leu-Cys- (B8-B18)
S
Cys-(B20-B29)-R30
I), kde (A1-A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (A 15—A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al5 až A19 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (B8-B18) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B8 až B18 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu, (B2OB29) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až B29 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu,
R8jeThr nebo Ala,
R9 je Ser nebo Gly,
R10 je Ile nebo Val,
R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu,
-2CZ 301377 B6
R21 je Asn, Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, Glu nebo Gin,
Rl je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, neboje to atom vodíku,
R2 je Val, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu nebo Asp,
R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
Z je peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyselinové zbytky, z nichž 1 až 4 jsou histidinové zbytky (His), přičemž platí podmínka, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl se neodlišuje od humánního inzulínu (viz sekvence id. č. 1 a sekvence id. č. 2) pouze díky změnám aminokyselinových zbytků v pozici R3 nebo společně v pozicích R3 a R21 nebo společně v pozicích R3 a R4 ve vzorci I.
Výhodné analogy inzulínu nebo jejich fyziologicky přijatelné soli jsou ty, kde
2. R8 je Thr, R9 je Ser a R10 je Ile,
3. Rl je Phe, His, Asn, Asp nebo Gly,
4. R30 je Thr, Ala nebo Ser,
5. R21 je Asn a Rl je Phe.
6. Dalším výhodným provedením předkládaného vynálezu je analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, který se vyznačuje tím, že R2 je Val, R3 je Asn a R4 je Gin.
Dále je výhodný analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde R14 je
7. Tyr,
8. His,
9. Asp, nebo
10 Glu.
Dále je výhodný analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce Ϊ, kde R30je
11. Thr,
12. Ala,
13. Ser, nebo
14. -OH.
Zvláště výhodný je analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde 40 Z je
15. His,
16. His-Ala- nebo
17. His-Ala-Ala45
K příkladům výhodných provedení analogů inzulínu podle předkládaného vynálezu dále patří:
-3CZ 301377 Bó
18. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce 1, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 3)
His Phe Vsi Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Va Cys Gly Glu Arg Gly Phs Phe Tyr Thr Pro Lys např. His(B0),des(B30)-humánní inzulín.
19. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id, č. 4) io
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe TyrThr Pro Lys Thr např. His(B0)-humánní inzulín.
20. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce 1, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 5)
His Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. His(B-l),Ala(BO)-humánní inzulín nebo
21. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, podle vzorce I, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 6)
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr 25 Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. HÍs(B-2),Ala(B-l),Ala(B0)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále týká způsobu přípravy analogů inzulínu nebo jejich fyziologicky 30 přijatelných solí podle vynálezu, přičemž tento způsob obsahuje konstrukci rep li kováte 1 ného expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu s obecnou aminokyselinovou sekvencí podle vzorce II:
Met-X2m-(Arg)p-Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys-(B8-Bia)-Cys-(B20-B29)-R30-X1i,-Arg(A1 -A5)-Cys-Cys-R8-R9-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21 (II) kde
X'„ je peptidový řetězec obsahující n aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 34, 40 X2m peptidový řetězec obsahující m aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 20, pje 0, 1 nebo 2,
R30 je libovolná geneticky kódovatelná aminokyselina nebo není přítomen, a
-4CZ 301377 B6
Z je peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyseliny obsahující 1 až 4 histidinových zbytků (His) a zbývající proměnné mají stejný význam jako v předchozím vzorci I, stejně tak jako platí předchozí pravidla, a dále způsob obsahuje expresi v hostitelských buňkách a uvolnění analogů inzulínu zjejich prekurzorů chemickými a/nebo enzymatickými metodami.
Výhodné hostitelské buňky jsou baktérie, zejména pak baktérie E. coli. to
Výhodnými hostitelskými buňkami jsou také kvasinky, zvláště výhodné jsou buňky Saccharomyces cerevisiae..
Při expresi v E. coli vytvářejí tzv. fúzní proteiny (sekvence id. č. 7 až 9) zpravidla nerozpustné komplexy, tzv. inkluzní tělíska, která se po rozrušení buněk mohou izolovat centrifugací a pomocí chaotropních přísad (jako je např. 8M močovina nebo 6M guanidiniumchlorid) dále rozpouštět. Rozpuštěné fúzní proteiny se pak mohou podrobit sulfitolýze, při které jsou skupiny SH převedeny na S-sulfonátové skupiny (viz např. B. R. C. Marshall, A. S. Iglis, Practical Protein Chemistry - A Handbook, A. Darbre, 1986, str. 49-53). Tím se zlepší rozpustnost fúzních protei20 nů a usnadní další čištění, např. pomocí aniontové výměnné chromatografie nebo gelové permeační chromatografie.
K převedení derivatizovaných fuzních proteinů na preproinzulín s nativní prostorovou strukturou a správně vytvořenými disulfidickými můstky (sestavení proteinu, „folding“) dojde ve zředěném vodném roztoku přidáním vymezeného množství SH-cinidla jako je např. merkaptoetanol, cystein nebo glutathion, a následně vzdušnou oxidací. Alternativně může být rozpuštěný, nederivatizovaný fúzní protein za podobných podmínek také sestaven přímo (viz Evropské patenty EP A 0 600372, EP A 0 668292).
Preproinzulín je pak převeden omezeným proteolytickým štěpením na biologicky aktivní inzulín. K tomu se může využít trypsin, který ze sloučeniny podle vzorce II odstraňuje presekvenci MetX2m-(Arg)p a štěpí peptidový řetězec X^-Arg, čímž odděluje řetězce A a B, Zpravidla sekvence X1 začíná Arg, Arg2 nebo vůbec není (n=0), takže po štěpení je k dispozici derivát inzulínu, který je na C-konci řetězce B prodloužen o Arg nebo Arg2, Tyto aminokyseliny mohou být odstraněny karboxypeptidázou B. Tryptické štěpení lze provést zvýšením koncentrace trypsinu nebo prodloužením reakční doby, takže je navíc štěpen Lysin(B29). V tomto případě vznikne derivát (B30)-inzulín. Inzulínové analogy získané štěpením je pak možné purifikovat standardními chromatografickými postupy (iontová výměnná chromatografie nebo chromatografie s reverzní fází) a nakonec izolovat vysrážením, krystalizací nebo jednoduše lyofilizací.
Prekurzor analogu inzulínu má výhodně sekvenci (sekvence id. č. 7)
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val GIu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly GIu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg GIu Ala GIu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val GIu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala
Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu GIu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu GIu Asn Tyr Cys
Asn
-5CZ 301377 Bó např. sekvenci His(BO)-preproinzulín, nebo sekvenci (sekvence id. č. 8)
Met AJa Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser AJa Arg
His Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Va! Gly Gin Val Glu Leu Gly Giy Gly Pro Gly Ala
Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Gíu Gly Ser Leu Gin Lys Arg
Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser He Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys
Asn např. sekvenci desHis(Bl),Ala(BO)--preproinzulín, nebo sekvenci (sekvence id. č. 9)
Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Va) Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
Arg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Gíu Gly Ser Leu Gin Lys Arg Gly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys
Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn io např. sekvenci desHis(B-2),Ala(B-l),Ala(B0)-preproinzulín.
Předkládaný vynález se dále týká prekurzorů inzulínových analogů podle vynálezu, zejména prepropinzulínu, sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle vynálezu, expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA kódující prekurzor analogu inzulínu podle vynálezu, a také se týká hostitelských buněk, které jsou transformované takovým expresním vektorem.
Dále se předkládaný vynález týká farmaceutického přípravku, který obsahuje alespoň jeden inzulínový analog podle vynálezu a/nebo alespoň jednu jeho fyziologicky přijatelnou sůl.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje analog inzulínu podle vynálezu a/nebo jeho fyziologicky přijatelnou sůl v rozpuštěné, amorfní nebo krystalické formě.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje případně pomocné depotní látky, např. protaminsulfát, přičemž analog inzulínu, a/nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl je ve formě společně krystalizované např. s rotaminsulfátem.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu případně obsahuje navíc nemodifikovaný humánní inzulín a/nebo další analogy inzulínu, např. Gly(A21} - Arg(B3 l)-Arg(B32)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále týká injikovatelného roztoku s inzulínovou aktivitou, ktefy obsahuje farmaceutický přípravek podle vynálezu v rozpuštěné formě, s obsahem 1 pg až 2 mg zinku na 1 ml, zvláště výhodně s obsahem 5 až 200 pg zinku na 1 ml.
-6CZ 301377 B6
Vynález se dále týká použití analogů inzulínu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí podle vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným nástupem účinku.
Cíl vynálezu byl dále splněn tím, že vynález poskytuje komplex inzulín-zinek, obsahující hexamer inzulínu a 4 až 10 iontů zinku najeden hexamer, přičemž inzulínový hexamer obsahuje Šest molekul analogů inzulínu podle vzorce 1 (AI -A5)-Cys-Cys-R&-R9-R10-Cya-Sef-Uu-R14-{ AI 5-A19)-Cys-R21
I
0) s
Z-R1-R2-R3-R4-His-Leu-Cys- (B8-B18)
S
CyS-(B20-B29)-R30 kde (A1-A5) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (A15-A19) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích A15 až A19 v řetězci A humánního (viz sekvence id. č. 1) nebo zvířecího inzulínu, (B8-B18) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B8 až B18 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu, (B20-B29) znamená aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až B29 v řetězci B humánního (viz sekvence id. č. 2) nebo zvířecího inzulínu,
R8 je Thr nebo Ala,
R9je Ser nebo Gly,
R10 je Ile nebo Val,
R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu,
R21 je Asn, Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, Glu nebo Gin,
Rl je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, neboje to atom vodíku,
R2 je Val, Ala nebo Gly,
R3 je Asn, His, Glu nebo Asp,
R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu,
R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -OH,
-7CZ 301377 B6
Z je peptidový zbytek obsahující 1 až 4 geneticky kódovatelné aminokyselinové zbytky, z nichž 1 až 4 jsou histidinové zbytky (His).
Výhodně komplex inzulín-zinek obsahuje 5 až 8 iontů zinku najeden inzulínový hexamer.
Výhodně komplex inzulín-zinek obsahuje inzulínový hexamer, který se skládá z šesti molekul analogu inzulínu podle výše uvedeného vzorce I podle vynálezu.
Komplex inzulín-zinek podle předkládaného vynálezu výhodně obsahuje řetězec B analogu inzuio línu podle vzorce I, který má sekvenci (sekvence id. č. 10)
Phe Val His Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Vsi Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. His(B3)-humánní inzulín, nebo obsahuje řetězec B analogu inzulínu podle vzorce I, která má sekvenci (sekvence íd. ě. 11)
Phe Val Asp Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr např. Asp(B3)-humánní inzulín.
Předkládaný vynález se dále také týká farmaceutického přípravku, který obsahuje alespoň jeden komplex inzulín-zinek podle vynálezu a také farmaceutického přípravku, který obsahuje kyselý roztok alespoň jednoho analogu inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli s odpovídajícím množstvím iontů zinku, které umožní vytvoření komplexu inzulín-zinek podle vynálezu, přičemž analog inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl jsou výhodně výše uvedený analog podle vzorce I podle vynálezu nebo analog podle vzorce I, jehož řetězec B má sekvenci odpovídající sekvence id. ě. 3, 4, 5, 10 nebo 11.
Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje komplex inzulín-zinek v rozpuštěné, amorfní jo a/nebo krystalické formě.
Předkládaný vynález se dále týká injikovatelného roztoku s inzulínovou aktivitou, který obsahuje farmaceutický přípravek podle vynálezu v rozpuštěné formě, s obsahem 1 pg až 2 mg zinku na 1 ml, zvláště výhodně s obsahem 5 až 200 pg zinku na 1 ml.
Vynález se dále týká použití analogů inzulínu a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí podle vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu se zpožděným nástupem účinku.
Analogy inzulínu podle předkládaného vynálezu jsou biologicky aktivní a při subkutánní aplikaci slabě kyselého, čirého roztoku obsahujícího 80 pg Zn++/ml (zinek/ml) psům projevují silně opožděný účinek. U analogů, kde je N-konec řetězce B prodloužen o histidin, tj. Hi$(B0), např. des(B30)-humánní inzulín (sekvence id. č. 3), je účinný profil silně závislý např. na množství přidaných zinecnatých iontů. Přípravek neobsahující zinek nemá žádný depotní účinek (celkový úěi45 nek po 6 až 8 hodin, viz příklad 8) a sotva se farmakodynamikou liší od běžného humánního inzulínu, přičemž po přidání zinecnatých iontů (80 pg/ml) dochází k silnému opoždění/prodloužení účinku (celkový účinek po 16 hodin, viz příklad 8). Pozorovaný depotní účinek je také mnohem výraznější než u NPH-inzulínů. Tyto analogy mají tudíž výhodu, že farmakodynamika je prostřednictvím obsahu zinku široce regulovatelná, což u normálního humánního inzulínu není možné. Je možné také získat přípravky s rychlým nástupem účinku stejně tak jako přípravky se středně nebo silně opožděným účinkem prostřednictvím změn v obsahu zinku. Tím je také možné
-8CZ 301377 B6 účinný profil přípravku uzpůsobit individuálním potřebám pacienta, a to buď použitím přípravku s odpovídajícím, předem nastaveným obsahem zinku, nebo smícháním přípravku s vysokým a nízkým obsahem zinku, které provede buďto lékař, nebo sám pacient.
Analogy inzulínu podle vynálezu mají ve srovnání s humánním inzulínem zvýšenou afinitu k iontům zinku.
Humánní inzulín ve vodném neutrálním roztoku vytváří hexamery, které prostřednictvím His(B10)-postranního řetězce komplexují dva zinečnaté ionty. Tyto dva ionty nelze odstranit dialýio zou proti vodnému neutrálnímu pufru. Za stejných podmínek váží analogy podle vynálezu více než 4 zinečnaté ionty. V případě His(B0)-des(B30)- a His(B3)-inzulínu je to 7 iontů zinku/hexamer a v případě Asp(B3)-ínzulínu bylo naměřeno 4,2 iontů zinku/hexamer (viz příklad 9).
Je známo, že v neutrálním roztoku zinek vytváří vysokomolekulámí shluky a vede k vysrážení 15 inzulínu. Po injekci slabě kyselého přípravku obsahujícího zinek, který obsahuje čirý rozpuštěný inzulín, dojde v důsledku neutralizace v podkožní tkáni k vytvoření komplexů inzulín-zinek a následně k precipitaci inzulínu. Z tohoto depotu se inzulín zase postupně uvolňuje do roztoku a dochází tak ke zpoždění účinku. Takové zpomalení účinkuje u humánního inzulínu velmi slabé, avšak u analogů inzulínu podle vynálezu k němu dochází na základě jejich zvýšené afinity k zinku. Zvýšená vazba zinku je tudíž základem výše popsaného opoždění účinku závislého na zinku.
Předkládaný vynález se tudíž netýká jen výše popsaných analogů inzulínu, ale také příslušných komplexů inzulín-zinek. Tyto komplexy se odlišují od komplexů humánního inzulínu se zinkem v tom, že mají vyšší podíl pevně vázaného zinku. Je tedy nasnadě, že je možné k vytvoření komplexů kromě zinku užít také jiné ionty přechodných kovů jako je např. kobalt nebo měď.
Příklady provedení vvnálezu
Příklad 1
Konstrukce plazmidu píNT345d, který kóduje variantu His(B3)-preproinzulínu
Patent US 5 358 857 popisuje plazmid pINT90d. DNA tohoto plazmidu sloužila jako výchozí materiál ke konstrukci plazmidu pINT345d, který má proti původnímu plazmidu pINT90d dvě nové vlastnosti. Za prvé kóduje analog preproinzulínu, který v pozici 3 řetězce B obsahuje aminokyselinu histidin místo asparaginu a bezprostředně před počátkem kódující sekvence nese sekvenci rozpoznávanou restrikčním enzymem BssH2, takže sekvence kódující 10 aminokyselin N-konce preproinzulínu může být snadno použita pro genové manipulace, když se přihlédne k štěpnému místu Dra3 v sekvenci preproinzulínu.
Pro konstrukcí plazmidu pINT345d byla DNA z plazmidu pINT90d po dvojitém naštěpení v pozici 284 bp a pozici 351 bp restrikčními enzymy NcolzDra3 rozdělena, takže byly získány 2 fragmenty. Po elektroforetickém rozdělení štěpné směsí byl izolován velký DNA fragment zbytkového plazmidu.
Tento DNA fragment byl pak v reakci s T4-DNA-ligázou spojen $ následujícím DNA frag50 mentem
-9CZ 301377 B6
| Ncol | 33SH2 | 31 | 32 | KÍ3 | 34 | 35 | 36 | ||||||||||
| 5*~ | c | ATG | GCA | ACA | ACA | TCA | ACA | GGA | AAT | TCG | GCG CGC | TTT | GTG | CAC | CAG | CAC | CTG |
| 3'- | CGT | TGT | TGT | AGT | TGT | CCT | TTA | AGC | CGC GCG | AAA | CAC | GTG | GTC | GTG | GAC |
B7 3β 39 ij Dra3 TGC GGC TCC CAC CTA - 3'
ACG CCG AGG GTG -5'
Ligační směsí byly transformovány kompetentní buňky E. coli K12 a transformované buňky byly vysety na NA-plotny obsahující 20 mg/1 ampicilinu. Plotny byly inkubovány přes noc při 37 °C.
Ze vzniklých kolonií byla izolována plazmidová DNA a naštěpena restrikčním enzymem BssH2. Požadovaná DNA tím byla linearizována a tím se odlišila od DNA plazmidu pINT90d, která neobsahuje žádné štěpné místo pro BssH2 a tudíž není štěpena.
Odpovídající plazmidová DNA ze správného klonu byla označena píNT345d.
!0
Tato DNA byla použita jako výchozí materiál pro konstrukci variant preproinzulínu popsaných v následujících příkladech.
Příklad 2
Konstrukce plazmidu pINT342d, který kóduje variantu His(BOý-preproinzulínu
DNA z plazmidu pINT345d byla dvojitě naštěpena restrikčními enzymy Nco\ a Dra3 a po elek2o troforetickém rozdělení štěpné směsi byl izolován velký DNA fragment zbytkového plazmidu. Tento DNA fragment byl pak v reakci s T4-DNA-ligázou spojen s následujícím DNA fragmentem
| His | Bl | 32 | 33 | 34 | 35 | BS | B7 | BS | 39 | 310 | ||
| 5'- CG CGC | CAC | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC CTA | - 3' |
| 3'- G | GTG | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GTG | - 5** |
S93H2 Hpal 1] Dral
Vznikl tak plazmid pINT324d, který se od výchozího plazmidu liší štěpným místem HpaL Tento plazmid kóduje variantu preproinzulínu, která obsahuje v pozici BO histidin.
Příklad 3
Konstrukce plazmidu pINT343d, který kóduje variantu His(B-l),Ala(BO)-preproinzulínu
DNA fragment zbytkového plazmidu z předchozího příkladu byl v reakci s T4-DNA-ligázou 35 spojen s následujícím DNA fragmentem
| His | Ala | Bl | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 3S | 39 | 310 | 311 | ||
| CG CGC | CAC | GCT | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC | CTA | - 3* |
| 3'- G | GTC | CGA | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GTG | - 5' |
*3 33SH2 Hpal S Dra3
- 10CZ 301377 B6
Vznikl tak plazmid pINT343d, který se, stejně jako plazmid pINT342d, liší od výchozího plazmidu dodatečným štěpným místem Hpal.
Příklad 4
Konstrukce plazmidu p(NT344d, který kóduje variantu His(B-2),Ala(B-l), Ala(BO>preproinzulínu io DNA fragment zbytkového plazmidu z příkladu 2 byl v reakci s T4-DNA-ligázou spojen s následujícím DNA fragmentem
| His | Ala | Ala | Bl | 32 | B3 | B4 | B5 | 36 | 37 | 33 | B9 | BIO 311 | |
| 5*- CG CGC | CAC | GCT | GCT | TTT | GTT | AAC | CAG | CAC | CTG | TGC | GGC | TCC | CAC CTA^- |
| 3*- G | GTG | CGA | CGA | AAA | CAA | TTG | GTC | GTG | GAC | ACG | CCG | AGG | GTG |
| h 3SSH2 | Hpal | Jj Dra3 |
Vznikl tak plazmid pINT344d, který se liší od výchozího vektoru dodatečným štěpným místem Hpal.
Příklad 5
Exprese konstruktů kódujících varianty inzulínu
Plazmidy pfNT342d, 343d a 344d byly transformovány do buněk E. coli K12 W3110. Rekombinantní baktérie, které byly získány pro každou variantu, byly fermentovány podle příkladu 4 z patentu US 5 227 293 a byla tak získána požadovaná výchozí surovina pro každou z inzulínových variant.
Příklad 6
Příprava His(B0),des(B30)~inzulínu
Varianty proinzulínu byly exprimovány v E. coli podle příkladu 5 a pak izolovány ve formě inkluzních tělísek centrifugací po rozrušení buněk. Inkluzní tělíska byla rozpuštěna v močovině (8 mol/1), podrobena sulfitolýze a pak přečištěna pomocí aniontové výměnné chromatografie (na
Q-Sepharose) a gelové permeační chromatografie (na Sephacryi S 200). Pufr použitý pro chromatografii obsahoval 4M močovinu a 50mM Tris/HCl (Tris(hydroxymethyl)aminomethan/HCl), pH 8,5. Následovala frakcionovaná eluce z iontoměniče pomocí gradientu 0 až 0,5 M NaCl. Koncentrace močoviny byla nakonec ultrafiltrací a ředěním snížena na hodnotu nižší než 1M a preproinzulín-S-sulfonát byl izolován vysrážením při pH 4, a nakonec byl precipitát vysušen.
Pro vytvoření správných dísulfidických můstků, které existují v přírodním inzulínu, byl preproinzulín-S-sulfonát v koncentraci 0,3 g/1 rozpuštěn v pufru obsahujícím 20mM glycin při pH
10,8, doplněn merkaptoetanolem (asi 25 až 50 mol/mol preproinzulínu) a míchán po celou noc při 4 °C. Vzorek byl nakonec pomocí kyseliny fosforečné upraven na pH 3,5 a centrifugován. Preproinzulín obsažený v supematantu byl pak úpravou pH na 8,2 přídavkem Tris (25mM) a poté přidáním trypsinu (1,5 mg/g preproinzulínu) převeden na inzulín. Průběh proteolytického štěpení byl sledován pomocí HPLC s reverzní fází. Asi po 6 hodinách obsahoval vzorek vysoký podíl
His(B0),des(B30)-inzulínu. Reakce byla ukončena okyselením na pH 3,5. Pak pokračovalo čištění analogů inzulínu pomocí iontové výměnné chromatografie (S-hyper-D, Sepracor) a chromatoCZ 301377 Bó graťie s reverzní fází (PLRP-S RP300, Polymer Laboratories). Iontová výměnná chromatografie se prováděla v pufru, který obsahoval 30% 2-propanol a 50mM kyselinu mléčnou (pH 3,5). Eluce navázaného inzulínu byla provedena pomocí lineárního gradientu 0 až 0,5M NaCl. Chromatografie s reverzní fází probíhala v 0.1% trifluoroctové kyselině, která se pro eluci míchala s rostoucím množstvím acetonitrilu. Produkt byl izolován vysrážením při pH 5,4 a pak lyofilizován.
Příklad 7 io
Formulace analogů inzulínu pro parenterální podávání
Přípravek podle vynálezu obsahuje 40, popřípadě 100 IE inzulínu (I ΪΕ odpovídá přibližně 6,2 nmol), 20 mg 85% glycerinu, 2,7 mg m-kresolu a případně zinek++ (jako chlorid zinečnatý) ve vodném sterilním roztoku s pH 4.
Příklad 8
Účinný profil His(B0),des(B30)-inzulínu u psu
Každý ze šesti psů (Beagl) dostal subkutánní injekci přípravku se 40 U/ml (přípravek z příkladu 7) a udaným množstvím zinku. Dávka byla 0,3 IE/kg. V dalším průběhu pokusu byla v daných časových okamžicích měřena hladina glukózy v krvi. Hodnoty byly normovány v procentech ke každé výchozí hodnotě a vyneseny do následující tabulky.
| ČAS (hod.) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 12 |
| bez Zn | 100 | 59 | 50 | 61 | 75 | 84 | 89 | 98 | 103 | 97 | 104 | 100 |
| 80 gg Zn++/ml | 100 | 97 | 83 | 75 | 65 | 56 | 51 | 58 | 68 | 72 | 78 | 32 |
Příklad 9
Vazba zinku analogy inzulínu
Inzulínový přípravek (0,3mM inzulín, 0,13M NaCl, 0,1% Fenol, 100 pg/ml zinek++ (jako chlorid 35 zinečnatý), 25mM Tris/HCl, pH 7,4) byl extenzívně dialyzován proti neutrálnímu pufru bez zinku (3 hodin proti 0,l5M NaCl, lOmM Tris/HCl pH 7,4 při teplotě místnosti, 72 hodin proti lOmM Tris/HCl pH 7,4 při 15 °C a ještě 16 hodin proti lOmM Tris/HCl pH 7,4 při 15 °C. Poté byl dialyzát odsát a analyzován. Koncentrace inzulínu byla stanovena pomocí HPLC s reverzní fází a koncentrace zinku byla stanovena atomovou absorpční spektroskopií. Hodnoty pro zinek byly korigovány podle obsahu zinku kontrolních vzorků, které neobsahovaly žádný inzulín.
- 12CZ 301377 B6
Vázání zinku variantami inzulínu
| Inzulín | mol Zn/mol hexamerů |
| humánní inzulín | 2,5 |
| His <B3)-inzulín | 6,9 |
| Asp(B3)-inzulín | 4,2 |
| His(B0),des(B30)-inzulín | 6,8 |
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
io (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární 15 (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 1:
Cly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu 15 10 15
Glu Asn Tyr Cys Asn 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...30
-13CZ 301377 Bó (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 2:
phe Val Asn Gin His Leu Cya Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr
5 10 IS
Leu Vál Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin ίο (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1.,.30 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 3:
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu 15 10 15
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys 20 25 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 31 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE; 1...31 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 4:
His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser Hi3 Leu Val Clu Ala Leu 15 10 15
Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30
- 14CZ 301377 B6 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 32 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární ío (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...32 15 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 5:
His Ala Phe Val Asn Gin Hia Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala 15 10 15
Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 33 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: I...33 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 6:
His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Olu 15 10 15
Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys 20 25 ’ 30
Thr (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 98 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární 45 (ii) TYP MOLEKULY: protein
- 15C7. 301377 B6 (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...98 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 7:
| Het | Ala | Thr | Thr | Ser | Thr | Cly | Asn | Ser | Ala | Arg | His | Phe | Val | Asn | Gin |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| His | Leu | Cys | Cly | Ser | HÍ3 | Leu | Val | Clu | Ala | Leu | Tyr | Leu | Val | Cys | Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Clu | Arg | Cly | Phe | Phe | Tyr | Thr | Pro | Lvs | Thr | Arg | Arg | Glu | Ala | Glu | Asp |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Pro | Gin | Val | Cly | Gin | Val | Clu | Leu | Cly | Cly | Cly | Pro | Cly | Ala | Gly | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Leu | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu | Clu | Cly | Ser | Leu | cm | Lvs | Arg | Gly | Zle | Val |
| 65 | 70 | 75 | SO | ||||||||||||
| Clu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Clu | Asn | Tyr |
| 85 | 50 | 95 |
Cys Asn (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 8:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 99 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...99 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 8:
| Het 1 | Ala | Thr | Thr | Ser 5 | Thr | Gly | Asn | Ser | Ala 10 | Arg | His | Ala | Phe | Val 15 | Asn |
| Gin | His | Leu | Cys 20 | Gly | Ser | His | Leu | Val 25 | Clu | Ala | Leu | Tyr | Leu 30 | Val | Cys |
| Cly | Glu | Arg 35 | Gly | Phe | Phe | ^y r | Thr 40 | Pro | Lys | Thr | Arg | Arg 45 | Glu | Ala | Glu |
| Asp | Pro 50 | Cln | Val | Gly | Cln | Val 55 | Clu | Leu | Cly | Gly | Gly 60 | Pro | Gly | Ala | Glv |
- 16CZ 301377 B6
| Ser | Leu | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu Glu | Gly | Ser | Leu | Gin | Lys | Arg | Gly | ile |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
| val | Glu | Gin | cys | Tys | Thr | Ser Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu | Asn |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| Tyr | Cys | Asn |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 100 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární io (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...100
| (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. | Č. 9: | ||||||
| Het Ala Thr Thr | Ser Thr Gly Asn Ser | Ala Arg | His | Ala | Ala | Phe | Val |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||
| Asn Gin His Leu | Cys Gly Ser His Leu | Val Glu | Ala | Leu | Tyr | Leu | Val |
| 20 | 25 | 30 |
Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr Arg Arg Glu Ala 35 40 45
| Glu | As? Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Cly Gly Gly Pro Gly | Ala | |||||||||||||
| 50 | 55 | Ó0 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Leu | Gin | Pro | Leu | Ala | Leu | Glu | Gly | Ser | Leu | Gin | Lys | Arg | Gly |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ile | Val | Glu | Gin | Cys | Cys | Thr | Ser | Ile | Cys | Ser | Leu | Tyr | Gin | Leu | Glu |
| 85 | 50 | 55 |
Asn Tyr Cys Asn 100 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
-17CZ 301377 B6 (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...30 5 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 10:
Phe Val Hia Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Ty 15 10 15
Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30 io (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 30 aminokyselin (B) TYP: aminokyseliny (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) DALŠÍ ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...30 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S ID. Č. 11:
Pne Val Asp Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr 15 10 15
Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr 20 25 30
- 18CZ 301377 B6
Claims (55)
- PATENTOVÉ NÁROKY5 1. Analog inzulínu, nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl, který má vzorec IS-S (AVA5}-Cys-Cys-R8-R9*Rl0*Cy3-Ser-Leu-R14-{A15-A19}-Cys-R21IS (1) sZ-R1-R
- 2-R3-R4-HÍs-L0U-Cys- (B8-B18)Cys-(B20-B29)-R30 (i), kde io (A1-A5) jsou aminokyselinové zbytky v pozicích Al až A5 v řetězci A humánního nebo zvířecího inzulínu, (A15-A19) jsou aminokyselinové zbytky v pozicích A15 až A19 v řetězci A humánního nebo 15 zvířecího inzulínu, (B8-B18) jsou aminokyselinové zbytky v pozicích B8 až B18 v řetězci B humánního nebo zvířecího inzulínu,20 (B20-B29) jsou aminokyselinové zbytky v pozicích B20 až B29 v řetězci B humánního nebo
zvířecího inzulínu, R8 je Thr nebo Ala, R9 je Ser nebo Gly, R10 je Ile nebo Val, R14 je Tyr, His, Asp nebo Glu, R21 je Asn, Asp, Gly, Ser, Thr, Ala, Glu nebo Gin, Rl je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo není přítomen, neboje to atom vodíku, R2 je Val, Ala nebo Gly, R3 je Asn, His, Glu nebo Asp, R4 je Ala, Ser, Thr, Asn, Asp, Gin, Gly nebo Glu, R30 je libovolný geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek nebo -ΌΗ, Z je peptidový zbytek s I až 4 geneticky kódovatelnými aminokyselinovými zbytky, obsahující 1 až 4 histidinové zbytky (His), - 19CZ 301377 Bó přičemž platí podmínka, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle vzorce I se odlišuje od humánního inzulínu nejen změnami aminokyselinových zbytků v pozici R3 nebo v pozicích R3 v kombinaci R21 nebo R3 v kombinaci s R4 podle vzorce 1.5 2. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 1, kde R8 je Thr, R9 jeSer a R10 je He. - 3. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 1 nebo 2, kde Rl je Phe, His, Asn, Asp nebo Gly.
- 4. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde R30 je Thr, Ala nebo Ser.
- 5. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, 15 kde R21 je Asn a Rl je Phe.
- 6. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde R2 je Val, R3 je Asn a R4 je Gin.20
- 7. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde RI4 je Tyr.
- 8. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde R14 je His.
- 9. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, kde R14 je Asp.
- 10. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, 30 kdeR14jeGlu,
- 11. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde R30je Thr.35
- 12. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde R30 je Ala.
- 13. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, kde R30 je Ser.
- 14. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 a 5 až 10, kde R30je-OH.
- 15. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, 45 kde Z je His.
- 16. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, kde Z je His-Ala.50
- 17* Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle kteréhokoliv z nároků I až 14, kde Z je His-Ala-Ala.-20CZ 301377 B6
- 18. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 15, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 3):His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr 5 Thr Pro Lys
- 19. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 15, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 4):His Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr 10 Thr Pro Lys Thr
- 20. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 16, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 5):His Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Gtu Arg Gly Phe Phe |5 Tyr Thr Pro Lys Thr
- 21. Analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl podle nároku 17, kde řetězec B má sekvenci (sekvence id. č. 6):His Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe 20 Phe Tyr Thr Pro Lys Thr
- 22. Způsob přípravy analogu inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelné soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21, vyznačující se tím, že obsahuje kroky konstrukce replikovatelného expresního vektoru, který obsahuje sekvenci DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu25 s obecnou aminokyselinovou sekvencí podle vzorce II:Met· Xzm (Arg)p-Z- R1 - R2- R3- R4- His- Leu· Cys-(B8- B18)-Cys-(B20· B29)-R30· X1„- Arg· (A1 · A5)-Cys-Cys-RB-Ser-R10-Cys-Ser-Leu-R14-(A15-A19)-Cys-R21 II, kdeX‘n je peptidový řetězec obsahující n aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé Číslo 0 až 34, X2m peptidový řetězec obsahující m aminokyselinových zbytků, přičemž n je celé číslo 0 až 20,35 pjeO, l nebo 2,R30 je libovolný, geneticky kódovatelný aminokyselinový zbytek, nebo chybí, aZ je peptidový zbytek s 1 až 4 geneticky kódovatelnými aminokyselinami obsahující 1 až 4 histi40 dinových zbytků (His) a ostatní proměnné mají stejný význam jako v nároku 1, přičemž platí i podmínky z nároku 1, exprese v hostitelských buňkách a uvolnění analogů inzulínu z jeho prekurzoru chemickými 45 a/nebo enzymatickými metodami.
- 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že hostitelská buňka je baktérie.-21 CZ 301377 B6
- 24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že baktérie je E. coli.
- 25. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že hostitelská buňka je kvasinka.5
- 26, Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že kvasinka je Saccharomyces cerevisiae.
- 27. Způsob podle nároků 22 až 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 19, vyznačující se t í m , že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 7):ioMet Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala ArgHis Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Va! Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys ThrArg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pra Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys ArgGly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
- 28. Způsob podle nároků 22 až 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 20, vyznačující se t í m , že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 8):Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala ArgHis Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys ThrArg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gtn Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gin Lys ArgGly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
- 29. Způsob podle nároků 22 az 26 přípravy analogu inzulínu podle nároku 21, vyznačující se t í m , že prekurzor analogu inzulínu má sekvenci (sekvence id. č. 9):Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala ArgHis Ala Ala Phe Val Asn Gin His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pra Lys ThrArg Arg Glu Ala Glu Asp Pro Gin Val Gly Gin Val Glu Leu Gly Gly Gly Pra Gly Ala Gly Ser Leu Gin Pro Leu Ala LeuGlu Gly Ser Leu Gin Lys ArgGly Ile Val Glu Gin Cys Cys Thr Ser Ile CysSer Leu Tyr Gin Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
- 30. Prekurzor analogu inzulínu definovaný v nároku 22.25
- 31. Prekurzor analogu inzulínu definovaný v nároku 27.
- 32. Prekurzor analogu inzulínu definovaný v nároku 28.
- 33. Prekurzor analogu inzulínu definovaný v nároku 29.
- 34. Sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle nároku 30.
- 35. Sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle nároku 31.35
- 36. Sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle nároku 32.
- 37. Sekvence DNA, která kóduje prekurzor analogu inzulínu podle nároku 33.-22CZ 3U1377 Bť>
- 38. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 34.
- 39. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 35.
- 40. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 36.
- 41. Expresní vektor obsahující sekvenci DNA podle nároku 37.10
- 42. Izolovaná hostitelská buňka, která je transformována expresním vektorem podle kteréhokoliv z nároků 38 až 41.
- 43. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden analog inzulínu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21 a/nebo alespoň jednu jeho fyziologicky přijatelnou15 sůl.
- 44, Farmaceutický přípravek podle nároku 43, vyznačující se tím, že analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl je v rozpuštěné, amorfní a/nebo krystalické formě.20 45. Farmaceutický přípravek podle nároku 43 nebo 44, vyznačující se tím, že dále obsahuje depotní pomocné látky.46. Farmaceutický přípravek podle nároku 45, vyznačující se tím, že depotní pomocná látka je protaminsulfát, přičemž analog inzulínu nebo jeho fyziologicky přijatelná sůl25 tvoří s protaminsulfátem společný krystalizát.47. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 43 až 46, vyznačující se tím, že navíc obsahuje nemodifikovaný humánní inzulín.30 48. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 43 až 47, vyznačující se tím, že navíc obsahuje analog inzulínu.49. Farmaceutický přípravek podle nároku 48, vyznačující se tím, že analog inzulínu je Gly(A21}-Arg(B31)-Arg(B32)-humánní inzulín.50. Injikovatelný roztok sinzulínovou aktivitou, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 43 až 49 v rozpuštěné formě.51. Inj ikovatelný roztok podle nároku 50, vyznačující se tím, že obsahuje 1 pg až40 2 mg zinku na 1 ml.52. Inj ikovatelný roztok podle nároku 51, vyznačující se tím, že obsahuje 5 až 200 pg zinku na 1 ml.
- 45 53. Použití analogu inzulínu a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli podle kteréhokoliv z nároků1 až 21 k výrobě farmaceutického přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným nástupem účinku.54. Komplex inzulín-zínek, kteiý obsahuje inzulínový hexamer a 4 až 10 zinečnatých iontů na
- 50 každý inzulínový hexamer, přičemž inzulínový hexamer sestává ze šesti molekul analogu inzulínu vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 21.
- 55. Komplex inzulín-zinek podle nároku 54, který obsahuje 5 až 8 zinečnatých iontů na každý inzulínový hexamer.-23CZ 301377 B6
- 56. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden komplex inzulín-zinek podle kteréhokoliv z nároků 54 až 55.
- 57. Farmaceutický přípravek podle nároku 56, vyznačující se tím, že obsahuje5 kyselý roztok.
- 58. Farmaceutický přípravek podle nároku 57, vyznačující se tím, že obsahuje kyselý roztok analogu inzulínu podle kteréhokoliv znároků 1 až 21 a/nebo jeho fyziologicky přijatelné soli společně s odpovídajícím množstvím zinečnatých iontů, které umožní vznik komio plexu inzulín-zinek podle nároku 54.
- 59. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 56 až 58, vy znač u j í cí se tím, že obsahuje komplex inzulín-zinek v rozpuštěné, amorfní a/nebo krystalické formě.15
- 60, I nj ikovatelný roztok s inzulínovou aktivitou, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceutický přípravek podle nároku 59 v rozpuštěné formě.
- 61. Inj ikovatelný roztok podle nároku 60, vyznačující se tím, že obsahuje 1 pg až 2 mg zinku na 1 ml.
- 62. Injikovatelný roztok podle nároku 61, vyznačující se tím, že obsahuje 5 až 200 pg zinku na 1 ml.
- 63. Použití komplexu inzulín-zinek definovaného v nároku 54 nebo 55 k výrobě farmaceutické25 ho přípravku, který projevuje inzulínovou aktivitu s opožděným nástupem účinku.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19825447A DE19825447A1 (de) | 1998-06-06 | 1998-06-06 | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20004525A3 CZ20004525A3 (cs) | 2001-04-11 |
| CZ301377B6 true CZ301377B6 (cs) | 2010-02-03 |
Family
ID=7870213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20004525A CZ301377B6 (cs) | 1998-06-06 | 1999-05-21 | Analogy inzulínu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prípravky obsahující tyto analogy |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6686177B1 (cs) |
| EP (1) | EP1084248B1 (cs) |
| JP (1) | JP4402296B2 (cs) |
| KR (1) | KR100649339B1 (cs) |
| CN (1) | CN1304450B (cs) |
| AR (1) | AR019852A1 (cs) |
| AT (1) | ATE334201T1 (cs) |
| AU (1) | AU757275B2 (cs) |
| BR (1) | BR9910978A (cs) |
| CA (1) | CA2330183C (cs) |
| CZ (1) | CZ301377B6 (cs) |
| DE (2) | DE19825447A1 (cs) |
| DK (1) | DK1084248T3 (cs) |
| ES (1) | ES2268871T3 (cs) |
| HU (1) | HU228908B1 (cs) |
| MX (1) | MXPA00011456A (cs) |
| NO (1) | NO329956B1 (cs) |
| PL (1) | PL198190B1 (cs) |
| PT (1) | PT1084248E (cs) |
| RU (1) | RU2225723C2 (cs) |
| TR (1) | TR200003606T2 (cs) |
| WO (1) | WO1999064598A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200006835B (cs) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19825447A1 (de) * | 1998-06-06 | 1999-12-09 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Insulinanaloga mit erhöhter Zinkbildung |
| WO2002067969A2 (en) | 2001-02-21 | 2002-09-06 | Medtronic Minimed, Inc. | Stabilized insulin formulations |
| US20040038864A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-02-26 | Per Balschmidt | Use of dimethyl sulfone as isotonicity agent |
| US7875700B2 (en) | 2004-07-19 | 2011-01-25 | Biocon Limited | Cation complexes of insulin compound conjugates, formulation and uses thereof |
| US7833513B2 (en) | 2004-12-03 | 2010-11-16 | Rhode Island Hospital | Treatment of Alzheimer's Disease |
| AU2008313248B2 (en) * | 2007-10-16 | 2012-04-26 | Biocon Limited | An orally administerable solid pharmaceutical composition and a process thereof |
| PL2209800T3 (pl) * | 2007-11-16 | 2013-12-31 | Novo Nordisk As | Stabilne kompozycje farmaceutyczne zawierające liraglutyd i degludec |
| PL219335B1 (pl) * | 2008-07-04 | 2015-04-30 | Inst Biotechnologii I Antybiotyków | Pochodna insuliny lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól, jej zastosowanie oraz zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna |
| JP5780958B2 (ja) * | 2008-07-31 | 2015-09-16 | ケイス、ウエスタン、リザーブ、ユニバーシティ | ハロゲン安定化インスリン |
| EA201201164A1 (ru) * | 2010-02-22 | 2013-04-30 | Кейз Вестерн Ризев Юнивесити | Препараты на основе аналогов инсулина пролонгированного действия в растворимой и кристаллической формах |
| PL222975B1 (pl) | 2012-05-23 | 2016-09-30 | Inst Biotechnologii I Antybiotyków | Analog insuliny lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna o przedłużonym działaniu terapeutycznym oraz zastosowanie analogu insuliny |
| FR3013049B1 (fr) | 2013-11-14 | 2015-11-13 | You-Ping Chan | Analogue de l'insuline glargine |
| US10562951B2 (en) | 2015-03-10 | 2020-02-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Process for preparing recombinant insulin using microfiltration |
| UY36870A (es) * | 2015-08-28 | 2017-03-31 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Análogos de insulina novedosos |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0214826A2 (en) * | 1985-08-30 | 1987-03-18 | Novo Nordisk A/S | Insulin analogues and method of preparing the same |
| WO1989010937A1 (en) * | 1988-05-11 | 1989-11-16 | Novo Nordisk A/S | Insulin analogues |
| WO1995007931A1 (en) * | 1993-09-17 | 1995-03-23 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin |
| EP0821006A2 (de) * | 1996-07-26 | 1998-01-28 | Hoechst Aktiengesellschaft | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| EP1084248A2 (de) * | 1998-06-06 | 2001-03-21 | Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH | Neue insulinanaloga mit erhöhter zinkbindung |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI78616C (fi) | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| DE3326472A1 (de) | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| SU1250303A1 (ru) * | 1983-12-30 | 1986-08-15 | Филиал По Разработке Готовых Лекарственных Средств Научно-Исследовательского Института По Биологическим Испытаниям Химических Соединений | Способ стабилизации суспензии цинк-инсулина кристаллического |
| DE3440988A1 (de) | 1984-11-09 | 1986-07-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur spaltung von peptiden und proteinen an der methionyl-bindung |
| US4569794A (en) * | 1984-12-05 | 1986-02-11 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proteins and compounds useful in such process |
| US5008241A (en) | 1985-03-12 | 1991-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin peptides |
| DE3526995A1 (de) | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3636903A1 (de) | 1985-12-21 | 1987-07-02 | Hoechst Ag | Fusionsproteine mit eukaryotischem ballastanteil |
| DE3541856A1 (de) | 1985-11-27 | 1987-06-04 | Hoechst Ag | Eukaryotische fusionsproteine, ihre herstellung und verwendung sowie mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| RU2104305C1 (ru) * | 1986-08-29 | 1998-02-10 | Ново Нордиск А.С. | Аналоги инсулина человека, способ их получения, раствор для инъекций |
| CA1340522C (en) | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
| DE3805150A1 (de) | 1987-04-11 | 1988-10-20 | Hoechst Ag | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von polypeptiden |
| DE4012818A1 (de) | 1990-04-21 | 1991-10-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten |
| DE3726655A1 (de) | 1987-08-11 | 1989-02-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten |
| DE3739347A1 (de) | 1987-11-20 | 1989-06-01 | Hoechst Ag | Verfahren zur selektiven spaltung von fusionsproteinen |
| EP0347781B1 (de) | 1988-06-23 | 1994-02-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Mini-Proinsulin, seine Herstellung und Verwendung |
| DE3827533A1 (de) | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3837825A1 (de) | 1988-11-08 | 1990-05-10 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| US5358857A (en) | 1989-08-29 | 1994-10-25 | The General Hospital Corp. | Method of preparing fusion proteins |
| US5227293A (en) | 1989-08-29 | 1993-07-13 | The General Hospital Corporation | Fusion proteins, their preparation and use |
| IL95495A (en) | 1989-08-29 | 1996-10-16 | Hoechst Ag | Fusion proteins their preparation and use |
| DE59305396D1 (de) | 1992-12-02 | 1997-03-20 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Proinsulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
| EP0705275B1 (en) * | 1993-06-21 | 1999-02-03 | Novo Nordisk A/S | Asp-b28 insulin crystals |
| DE4405179A1 (de) | 1994-02-18 | 1995-08-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur Gewinnung von Insulin mit korrekt verbundenen Cystinbrücken |
-
1998
- 1998-06-06 DE DE19825447A patent/DE19825447A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-05-21 EP EP99925023A patent/EP1084248B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 CZ CZ20004525A patent/CZ301377B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 DE DE59913711T patent/DE59913711D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 MX MXPA00011456A patent/MXPA00011456A/es not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 WO PCT/EP1999/003490 patent/WO1999064598A2/de active IP Right Grant
- 1999-05-21 RU RU2001101164/15A patent/RU2225723C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 BR BR9910978-6A patent/BR9910978A/pt active Search and Examination
- 1999-05-21 JP JP2000553588A patent/JP4402296B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 KR KR1020007013862A patent/KR100649339B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 CA CA002330183A patent/CA2330183C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 AT AT99925023T patent/ATE334201T1/de active
- 1999-05-21 TR TR2000/03606T patent/TR200003606T2/xx unknown
- 1999-05-21 CN CN998070688A patent/CN1304450B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-05-21 AU AU41454/99A patent/AU757275B2/en not_active Ceased
- 1999-05-21 PL PL345898A patent/PL198190B1/pl unknown
- 1999-05-21 HU HU0102217A patent/HU228908B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-05-21 ES ES99925023T patent/ES2268871T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 DK DK99925023T patent/DK1084248T3/da active
- 1999-05-21 US US09/701,968 patent/US6686177B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-05-21 PT PT99925023T patent/PT1084248E/pt unknown
- 1999-06-03 AR ARP990102631A patent/AR019852A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-11-22 ZA ZA200006835A patent/ZA200006835B/xx unknown
- 2000-12-05 NO NO20006177A patent/NO329956B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0214826A2 (en) * | 1985-08-30 | 1987-03-18 | Novo Nordisk A/S | Insulin analogues and method of preparing the same |
| WO1989010937A1 (en) * | 1988-05-11 | 1989-11-16 | Novo Nordisk A/S | Insulin analogues |
| WO1995007931A1 (en) * | 1993-09-17 | 1995-03-23 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin |
| EP0821006A2 (de) * | 1996-07-26 | 1998-01-28 | Hoechst Aktiengesellschaft | Insulinderivate mit erhöhter Zinkbindung |
| EP1084248A2 (de) * | 1998-06-06 | 2001-03-21 | Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH | Neue insulinanaloga mit erhöhter zinkbindung |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ying-Chi Chu a kol. (1992) J. Protein Chem. 11, 571-577 (viz abstrakt). * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2176646C2 (ru) | Инсулин и его производные с повышенной способностью связывать цинк | |
| RU2529952C2 (ru) | Новые производные инсулина с сильно замедленным профилем время/действие | |
| JP5695909B2 (ja) | 極度に遅延した時間作用プロファイルを有する新規なインスリン誘導体 | |
| JP3676573B2 (ja) | 迅速な作用発現を示す新規インスリン誘導体 | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| CN102007143B (zh) | 具有超延迟时效特征的新型胰岛素衍生物 | |
| CZ301377B6 (cs) | Analogy inzulínu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prípravky obsahující tyto analogy | |
| HK1036808B (en) | Novel insulin analogs with enhanced zinc binding | |
| MXPA98004945A (en) | New insulin derivatives with rapid initiation of efe |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150521 |