CZ180294A3 - Bispecific trigger molecules recognizing lymphocyte antigen cd2 and tumor-specific antigens - Google Patents
Bispecific trigger molecules recognizing lymphocyte antigen cd2 and tumor-specific antigens Download PDFInfo
- Publication number
- CZ180294A3 CZ180294A3 CZ941802A CZ180294A CZ180294A3 CZ 180294 A3 CZ180294 A3 CZ 180294A3 CZ 941802 A CZ941802 A CZ 941802A CZ 180294 A CZ180294 A CZ 180294A CZ 180294 A3 CZ180294 A3 CZ 180294A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- aicd2
- mab
- tumor
- bab
- bispecific
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 45
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 102100031547 HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Human genes 0.000 title 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 title 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 55
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 30
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims 1
- OGQSCIYDJSNCMY-UHFFFAOYSA-H iron(3+);methyl-dioxido-oxo-$l^{5}-arsane Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].C[As]([O-])([O-])=O.C[As]([O-])([O-])=O.C[As]([O-])([O-])=O OGQSCIYDJSNCMY-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 6
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2',6'-dimethylspiro[isoquinoline-4,4'-oxane]-1,3-dione;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.O=C1N(CCN(CC)CC)C(=O)C2=CC=CC=C2C21CC(C)OC(C)C2 OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 2-nitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- -1 do not modulate Proteins 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 1,4-dithiothreitol Chemical compound SCC(O)C(O)CS VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AQYNZOSCOWGGTP-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylsulfanylpyridine Chemical compound C=1C=CC=NC=1SC1=CC=CC=N1 AQYNZOSCOWGGTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 4,4'-dipyridyl disulfide Chemical compound C=1C=NC=CC=1SSC1=CC=NC=C1 UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical compound N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 description 1
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 244000117499 Colubrina elliptica Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100075837 Drosophila melanogaster Mabi gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101100273713 Homo sapiens CD2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000584314 Homo sapiens Myc target protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101150081923 IL4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000822667 Mus musculus Something about silencing protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 102100030625 Myc target protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000017488 activation-induced cell death of T cell Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N beta-D-GalpNAc-(1->4)-[alpha-Neup5Ac-(2->8)-alpha-Neup5Ac-(2->3)]-beta-D-Galp-(1->4)-beta-D-Glcp-(1<->1')-Cer(d18:1/18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol Chemical compound SC1=CC=CC=N1 WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2806—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/74—Inducing cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techniky
rrt
CD
O
Předložený vynález' se týká ňoVýčh“b ispecifických protilátkových fragmentů, které rozpoznávají lymfocytový CD2 antigen a jakékoliv různé tumorové antxigeny. Výhodně se antigenní determinant receptoru epidermélního růstového faktoru (EGP-R) použije jako tumorový antigen- Dále se vynález týká dvou nových monoklonálních protilátek nazvaných' AICD2.MÍ a AICD2;M2 a jejich kombinovaného positivního vlivu na lýzi tumoru, přičemž alespoň jednou z nich je fragment bispecifické -pr o-Vi-l-é-t-kg-.—Pro-t-i lé.tky-.a„D.ro_t i lát kov é fragmenty moh ou být účinně použity v terapii tumorů a diagnostice,
Dosavadni stav techniky
T lymfocyty jsou pravděpodobně nejúčinnější složky imunitního systému, jestliže mají být eliminovány tumorové .buňky. Nicméně většina pacientů s rakovinou neměla významné množství cytotoxických T lymfocytů (CTL) ..specificky reaktivních k jejich tumorovým buňkám (např, Knuth a spol. 1984, Frcc.Natl. Acad.Sci. (USA)·
81, 3511). Za účelem aktivace plného-lytického potenciálu CTL by měly všechny tyto buňky5 být řízeny vůči .. nádorovým bunKam, pro xtere nemají přirozenou specifitu. T buňky mohou být aktivovány k proliferaci, cytokinové sekreci a cytotoxické aktivitě vazbou monoklonělních protilátek k určitým membránovým antigenúm na povrchu těchto buněk.
Bispecifické protilátky (BAb) rozpoznávající s tumorem-spojené antigeny jedním vazebným raménkem a T buněčné markéry ; druhým, byly popsány jako můstkové monospecifícké CTL a maligní buňky (např. Staertz a spol. 1985, Nátuře 314, 628).
T buněčná aktivace těmito artificiálními proti-2látkami se může uskutečnit pres T buněčný receptor (TGR)/ CD3 komplex, ve kterém je TGR odpovědný za rozpoznání antigenu a GD3 epitop za transdukci signálů generovaných interakcí TCR-antigen (např. viz přehled článku, H..Nelsona, Cancer Cells, květen 1991, 163 a zde citované odkazy).
Uskutečnění buněčné aktivace může také probíhat přes CD2 antigen, glykoprotein, který je přítomen na T lymfocytech a přirozených zabíječských (NK -naturel killer) buňkách (např. Httnig a spol., Nátuře 326, pQdporujě-iiřterakďi-ěTěFtorové-bunky s přirozeným ligandem LFA3 (CD58) na cílovou buňku. Na CD2 byly identifikovány tři funkčně důležité epitopy (T11,1, T11 .2 a T11.3). Na rozdíl od CD3 antigenu, který prochází modulací během vazby protilátky- není zde až dosud zmínky o CD2 modulaci po cílení CD2 protilátkou.
Práce z poslední doby, využívající anti-CD2 protilátku pro aktivaci ukazují, že reálnou se jeví dvoustupňové aktivace via CD2 antigen. Synergicky působící anti-CD'2-specifi.ty, které byly použity pro aktivaci jsou dosud charakterizovány protilátkami jako anti T11.2 plus anti T11.1 nebo T11.2 plus anti-T11.j. Bylo popsáno, že T11.3 je kritický epitop, který se stává přístupný po aktivaci anti T11.2. Větěina protilátek dosud používaných soutěží s přirozeným CD2 ligandem LFA-3 ve vazbě (např. Bolhius a spol., 1991,
Cancer Immunol.Immunother. 34,1 a zde citované odkazy).
Je proto cílem předloženého vynálezu vyvinout nové bispecifické protilátky odvozené od protinádorových protilátek a pár synergicky působících anti-CD2 protilátek, které jsou schopny doručení cytotoxicity po dvoustupňové aktivaci při ponechání normálních cross-talk buněk via CD2/LFA3 neovlivněných.
-3Podstata vynálezu
Nyní bylo zjištěno, že nové bispecifické protilátky podle vynálezu mají následující vynikající vlastnos«t‘i: silnou aviditu k nádorovým buňkám, silnou aviditu k T buňkám,a NK buňkám, jsou nekompetitivní vůči LFA3, nesynergizují s LFA3, nemodulují, receptory, jsou vysoce specifické k NK- T-buňkém, působí pouze přes dvoustupňovou aktivaci, to znamená, že jedna BAb jako takové nemá žádný vliv na aktivaci T buněk a lyži nádorových buněk.
Objektem vynálezu je tedy bispecifické molekula použitelná pro lýzi nádorových buněk, obsahující první vazebné místo k epitopu nádorové buňky a druhé vazebné místo k epitopu CD2 antigenů, mající označení BAb<X, ΑΙ0Β2.Μί>Υ nebo BAb<X, AI0D2.M2v> Y, kde BAB znamená bispecifickou protilátku,
X je determinant protilátky rozpoznává jící nádorový antigen,
A'lCD2.Ml, AICD2.M2 jsou monoklonální protilátky rozpoznávající CD2 antigen, a
ř Y je část celé protilátky.
ř AICD2.M1 a AICD2.M2 jsou nové monoklonální protilátky, které byly získány imunizací myši s geneticky konstruovaným CD2 antigenem a izolací a purifikací protilátek ze vhodných myších hybridomových buněk (detaily viz příklady) a které jsou vysoce specifické k CD2 antigenů T- a NK buněk.
Objektem předloženého vynálezu je proto monoklonální protilátka nazvaná AICD2.M1, rozpoznávající CD2 antigen, získatelné izolací z buněčné linie 1 H 10, uložené pod přírůstkovým číslem č.DSM AGC. 2118.
-4Objektem předloženého vynálezu je také monoklonální protilátka nazvaná AICD2.M2, rozpoznávající CD2 antigen, získatelné izolací z buněčné linie 7 D 3 uložené pod označením č. DSM AGC 2119.
Nové buněčné linie produkující uvedené protilátky byly uloženy u Deutsche Sammlung ftir Mikroorganismen (DSM, Braunschweig, DE) podle Budapeštské smlouvy 23. února 1993.
_Vynález se také týká monoklonélnlch protilátek, které jsou přirozenými nebo umělými variantami nebo mutanty AICD2.M1 a AICD2.M2, které zahrnují geneticky modifikované nebo konstruované, výhodně lidské a chiměrní verze.
Bispecifickó molekula podle vynálezu obsahuje vazebné raménko AICD2.M1 nebo AICD2.K2 a další vazebné raménko protilátky, která rozpoznává jakýkoliv nádorový antigen. Volba protinádorového antigenů němé významný . vliv na účinnost bispecifické protilátky bez ohledu na aktivaci ϊ buněk a lýzi nádorových buněk. Ve výhodném provedení vynálezu je uvedené druhé vazebné raménko představováno vazebným raménkem monoklonální protinádorove protilátky MAb 425, MAb 361 nebo MAb 15, což podle vynálezu zahrnuje modifikované, výhodně humanizované nebo chimérické verze a genetický konstruované minimální fragmenty.
Objektem vynálezu je poskytnutí bispecifického protilátkového fragmentu jak je definován výše a v nárocích, kde X je protilátkový determinat odvozený od monoklonálních protilátek MAb 425, MAb 361 nebo MAb 15·
-5MAb 425 je myší monoklonální protilátka vůči dobře známé buněčné linii lidského A431 karcinomu (ATCC CPL 1555), váže se k polypeptidovému epitopu vnější domény lidského EGF-R a inhibuje vazbu EGF.MAb 425 (ATCC HB 9629), o které bylo zjištěno že zprostředkuje cytotoxícitu in vitro a potlačuje růst nádorových buněk epidermoidu a buněčných líní colorektálního karcinomu in vitro (Podek a spol,, 1987, Cancer Pes. 47, 3692). Humanizované a chimérické verze MAb 425 byly popsány ve VíO 92/15683.
_MAb 361 je lgG2a myši monoklonální protilátka_ (ATCC HB 9325) a váže se specificky ke gangliosidovému GD2 antigenu a GD3 antigenu. Tyto gangliosidy jsou značně obohaceny v melanomových nádorech (EP 0280209,
US SK 016902).
,Mb 361 vykazuje významnou hladinu cytotoxicity in vitro vůči nádorovým buňkám exprimujícím GD2 antigen (Thurin a spol. 1987, Cancer Pes.47, 1229).
MAb 15 je IgGl myší monoklonální protilátka generovaná imunizací s buňkami rakoviny lidských malých plícních buněk TKB-2 (Endo a spol., 1986, Cancer Pes. 46, 6369). Protilátka rozpoznává časnou diferenciaci antigenu.
Bispecifické protilátky podle vynálezu jsou fragmenty celých protilátek, například, F(ab')2 molekul/; nchrt m-ΐηΐ nr*n + ί T έ + ož ( 7,j tticv. okul 1 uvb ηΛη δ Pfah i mni a — kul. Na rozdíl od fragmentů celých protilátek jako je F(ab')2 a miniprotilátky mohou penetrovat do masy nádoru pevných nádorů mnohem snadněji a projevit svoji cytotoxicitu a působení buněčné lýze v nádoru. Navíc F(ab*)2 molekuly a miniprotilátky získané z myších zdrojů vykazují normálně sníženou odezvu na lidskou anti-myší protilátku (HAMA).
-ζPreferovaným objektem vynálezu tedy je poskytnutí bispecifického protilátkového fragmentu jak je definován výše, kde Y je F(abz)2 molekula. Zvláště výhodné provedení jsou vybrána ze skupiny:
BAb-425, AICD2.M1>F(ab')2,
BAb <425, AICD2.M2> F(ab' )2,
BAb<361, AICD2.M1 >F(ab')2 BAb<361, AICD2.M2>F(abj)2 BAb < 15, AICD2.M1 >F(ab')2 BAb < 15, AICD2.M2>F(abz)2
Byly popsány různé metody pro produkci bispecifických protilátek na bázi kompletních protilátek nebo fragmentů (např, viz člének:Brissinck a spol. 1992,
Drug of the Future 17(11), 1003). Jednou cestou ke konstrukci bispecifických protilátkových fragmentů je převedení celých protilátek do (monospecifických)F(ab' )2 molekul proteolýzou, rozštěpení těchto fragmentů na Fab* molekuly a rekombinace FabMolekul s různými specifibkými až bispecifickými F(áb')2 molekulami (viz například FP 0179872 B1 ).
Objektem předloženého vynálezu je tak poskytnout způsob přípravy bispecifického proti látkového F(ab*)2 fragmentu použitelného pro lýzi nádorových buněk, obsahujícího první vazebné místo k epitopu nádorové buňky a druhé vazebné místo k epitopu CD2 antigenu enzymatickou konverzí dvou rozdílných monoklonální ch nrot.5,v - - - + _ - látek, kde každá obsahuje dva identické L (lehký řetězec )-H (těžký řetězec) poloviny molekul a spojené jednou nebo dvěma disulfidovými vazbami, do dvou F(ab*)2 molekul, rozštěpením každé F(abz)2 molekuly za reduku-τ~ jících podmínek na ^ab* thioly, derivatizacíjedné? z těchto Fab* molekul každé protilátky s thiol..aktivu jí dar. činidlem a kombinací aktivované Fab* molekuly nesoucí nádorovou specifitu: s neaktivovanou Fab'molekulou nesoucí leukocytovou speciíitu nebo vice versa za účelem získá* ní požadované bispecifická protilétkového: F(ab*)2 fragmen, tu, který se vyznaSuge že? vz monoklonálních protilátkách se AICD2.M1 a AICD2.M2' použiji jaká protilátka rozpoznávající leukocytový antigenJako enzymy vhodné pro konverzi protilátky na její molekuly mohou~Bý't použity pepsiíř^a papairL.'' ^---------některých případech jsou vhodné trypsin a bromelin^ V předloženém vynálezu se výhodně používá pepsin· Konverze disulfidových vazeb na volné SH-skupiny (Fab* molekuly) může být provedena redukujícími sloučeninami jako je dithiotreitol (DTTO, merkaptoethanol a merkaptoethylamin. Thiolavé aktivační činidla podle vynálezu^ které brání rekombinaci thiolových polomolekul, jsou 5,5'*dithiabis3(2-nitrobenzoavá kyselina) (DT1T3), 2,2*-dipyrÍdindisulfiď, 4,4*-dipyrÍdindisulfi'ď a tetrathionát/siřičitan sodný (viz také Raso a spol. 1982, Cancer Res.42, 457 a zde uvedené odkazy). Výhodně sé v postupu podle í předloženého vynálezu používá DTN3.
. Zpracování 3 thiol-áktivujícím činidlem se provádí pouze s jedním ze dvou Fab* fragmentů. V zásadě není rozdílu v tom, které ze dvou Fab' molekul se převede na aktivovaný Fab*fragment (napřř *βΡ*-ΤΝ3).. Obecně však je? labilnější Fab' fragment modifikován thiol-aktivujícím činidlem.. V předloženém případě jsou; fragmenty nesoucí proťinádoravou· specifitu o něco labilnější a proto se výhodně používají v tomto postupu. Konjugace aktivovaného Fab* derivátu volnými pantovými-SH. skupinami druhé Fab molekuly pro generování bivalentní F(ab )2 protilátky
-8probíhá spontánně při teplotách mezi 0 a 30 aC. Výtěžek čištěné protilátky F(ab*)2 je 20 až 40 % (vychází se z velých protilátek).
Jak je uvedena výše, vynález také zahrnuje bispecifické miniprotilátky. Minoprotilétky jsou fragmenty protilátky, obsahující dva jednotlivé řetězce Fv fragmentů (scFv fragmenty jsou obvykle geneticky spojeny buď jaká VHrlinker-VL nebo jako VL-linker-VH), které jsou spojeny; autoagregacf nebo fúzi každého z nich na G-konci k pantové—obl-as-t-i— (-výhodně-)—pro-posky-tnut íf-lex i b i li.ty—a/nebo_ amfipatickému helixu pro dosažení dimerizace. Heli» může být tvarován ze čtyř-helixových svazků nebo z leucinovéhi^zipperu** (zipu) (např. Pack a Plflckthun 1992, 3iochem. 31, 1579)* Příprava miniprotilátek jak jsou definovány výše je například popsána ve WO 93-00082.
Fragmenty bispecifických protilátek podle vynálezu· byly testovány in vitro/ex vivo na následující vlastnosti; kapacita/vázat se ke specifickým nádorovým a Tbuňkém, imunomodulaci (proliferace T buněk) a cytotoxicitu (lýze nádorových buněk). Testy jsou popsány per se we standardní literatuře. Detaily a výsledky jsou uvedeny v příkladech.
Bispecifické protilátkové fragmenty podle vynálezu mohou být podávány lidským pacientů pro léčbu. Proto je objektem vynálezu poskytnutí farmaceutického přípravku, v , obsahujícího jako aktivní, složku alespoň jeden bispscifický protilátkový fragment jak je definován výše a v nárocích;, spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči, přísadami nebo ředidly.
-9Typicky fragmenty protilátky podle vynálezu budou indikovány intravenosně nebo parenterálně. Obecně dávková rozmezí pro podání bispeáifickýcfc protilátkových fragmentů; jsou dostatečně velká pro dosažení' požadovaného potlačení nádoru a účinek lýze buněk* Dávka bude záviset na věku, stavu, pohlaví a rozsahu choroby u pacienta a může se měnit od 0,1 mg/kg· do 200 mg/kg·, výhodně oď 0,1 mg/kg do 10G mg/kg/dávku v jednom nebo více denních podáních, po jeden nebo několik dnů*
Přípravky pro parenterální podání zahrnují sterilní voúné'a~n'evodné'rO''ztOky7”susp“e'nze”a”e'mulz'eT~Příkíai3yníe^’ vodných rozpouštědel jsou propylenglykol, polyethylerrglykol, přírodní oleje jako je olivový olej; a injikovatelné organické estery jako je ethyloleát a jiná rozpouštědla známá v oboru, která jsou vhodná pro tento účel. Sispecifické protilátky podle vynálezu mohou být použity v přípravku, obsahujícím fyziologicky přijatelný nosič* Příkladý takových vhodných nosičů jsou salinický roztok,
PBS, Ringerův roztok' nebo laktátovaný Ringerův roztok. Ve farmaceutických přípravcích mohou být přítomny ochranná látky a další přísady jako jsou antibiotika, antioxidamty a chelatační činidla* Sispecifické přotilétkové frag-rmenty mohou být také konjugovány známými metodami k cytokinům jako: je IL-2 za účelem podpoření jejich cytotoxicity.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou vhodné pro léčbu?, všech typů nádorů, zahrnujících melanomy, gliomy a karcinomy stejně jako nádory oběhového systému; a pevné nádory. Výhodné přípravky Obsahují bispecifický protilátkový fragment,jehož jedno vazebné raménko nese vazebná místa monoklonélních protilátek MAb 425» MAb 361 a JíAb 15.
-10Předložený vynález popisuje velmi účinnou dvoustupňovou aktivaci leukocytů podáním dvou rozdílných protilátek nebo bispecifických protilátkovýcfr fragmentů.
Proto*jeA objektem předloženého vynálezu poskytnutí farmaceutického kitu (A), obsahující první farmaceutický přípravek I jak je definován výše nebo v nárocích, obsahující bispecifický prbtilátkový fragment 3Ab<X, AICD2.M2 > Y a druhý oddělený farmaceutický přípravek II, obsahující MAb AICD2.H1 neba MAb^ AICD2.M1 > Y nebo 3Ab< X, AICD2.M1\Y, kde X,.Y mají uvedené významy. V tomto farmaceutickém kitu částí přípravek I je nalezen na MAb AICD2.M2 přípravek II na MAb AI0D2.M1.
Alternativně se vynález týká kitu (B), kde přípravek I je založen na MAb AICD2.M1 , zatímco přípravek II je nacházen na MAb AICD2.M2. Takto je dalším objektem předloženého vynálezu poskytnutí farmaceutického kitw, který obsahuje první farmaceutický přípravek I, obsahující bispecifický protilátkový fragment SAbc X, AICD2.M1 Y a druhý oddělený farmaceutický přípravek- II, obsahující MAb-AXCD2.M2 nebo MAb< AICD2.M2>Y nebo BAb^-X, AICD2^2>Y, kde X,Y mají uvedené významy.
Rozdíly mezi. přípravkem A a 3 nejsou normálně příliš významné. V případě MAb 425 je možno vidět, že přípravek 3, kde přípravek I je založen na MAb ÁICD2.M1 pracuje lépe.
Rozdíly v nádorových vazebných místech v přípravku ((A) nebo (B)) ta^é nejsou významné. Účinnost farmaceutických kitů podle vynálezu s ohledem na vazebnou kapacitu, imunomodulacl ýproliferaci leukocytů) a cytotoxicitu však závisí nicméně na vlivu vazebných míst bispecifických protilétkových fragmentů, které jsou derivovány z protilátek AICD2.M1 a AICD2-M2. Výhodná provedení předloženého vynálezu tak vykazují podobné vlastnosti.
-1 1Rozdíly v terapeutickém účinku přípravku II (alternativně celá protilátka, monospecifický protilátkový fragment nebo 3Ab) nejsou také příliš dramatické. Nicméně jsou preferovány přípravky II, obsahující vhodný monospecifický protilátkový fragment.
Farmaceutický kit se používá následovně. Medikélní léčba započne injikováním přípravku I z farmaceutického kitu podle předloženého vynálezu pacientovi. Sispecifická protilátka selváže podle její specifity nejen k povrchu nádoru, ale z důvodů její malé velikosti může také pe-ne t r o va fc-do-p e vné-nádor o vé-hmo ty—Padání—bi-s-pe c ifické-ha— protilátkového fragmentu; podle vynálezu: působ£ obohacení' injikovaného imunoglobulinu v lokální ploše nédo mi, ale nevede k významné imunitní' odezvě. Po individuální časové periodě (závisí na rozsahu choroby, typu nádoru;, stavu, pohlaví a věku pacienty) od několika hodin do několika dnů se podá přípravek II a imunologické odezvy jsou indukovány ihned. Přípravky I a II jsou výhodně podávány v ekvimolárních množstvích. Ex vivo experimenty ukazují, že autologní a alogean£'nádor-infiltrující lymfocyty (TIL), které jsou normálně neschopné.- indukovat významno cytotoxicitui vůči nádoru (buněčnou lýzi) mohou být vysoce aktivovány uvedeným ošetřením (obr. 6a,b, 7).
Pomocí farmaceutického kitu podle vynálezu jes také možné' čistit ex vivo nádorové buňky v preparátech kostní dřeně. 2a účelem intenzifikace cytotoxického efektu je možné přidat exogenní T-lymfocyty.
Konečně je tedy objektem předloženého vynálezu poskytnutí metody pro čištění nádorových buněk ex vivxr v autologních transplantátech kostní dřeně pomocí farmaceutického kitu definovaného výše nebo v nárocích, popřípadě za přítomnosti dalších T-lymfocytů, kdy se začíná tak, že se buňky zpracují s přípravkem I a potom s přípravkem II, popřípadě s následujícím obvyklým stupněm čištění. Techniky
-12čištění kostní dřeně ex vivo jsou v oboru dobře známé per se.
Popis obrázků na přiložených,výkresech:
Obr.1: Syntéza BAb (schéma)
Obr.2: SDS-PAGE protilátkových fragmentů a BAb: dráha 1: markér molekulové hmotnosti dráha 2: MAb <AICD2 Jíl > F(ab')2 před redukcí DTT dráha 3: MAb < 425 >F(ab*)2 před redukcí s DTT dráha 4: MAb< AICD2.M1 >F(ab*)2 po redukci s DTT a
-:—-derivatizaci„s„DTNB-dráha 5: MAb<42?> F(ab*)2 po redukci s DTT a derivatizaci s DTFTB dráha 6: 3Ab přeď a dráha 7: BAb po čištění.
Obr.3,: Chromatografický profil. 3Ab<425, AICD2.M1> F(ab*)2 na hydroxylapatitu levá vertikální osa: optická hustota OD při 280 na, pravá vertikální' osa: koncentrace fosfátového pufru (pH=7,0), horizontální osa: eluční čas. (min). Bispecifický protilátkový fragment je reprezentován píkem II. Píky I a III jsou malá množství nečistot.
Obr.4: Kompetitivní vazba BAbs/MAbs k EGF-R:
«.a 4 1/X Ί λ λλλλ Oí 40 f\· nm V» λ n i
V C X, U ΑΛΟΑ4144 Uútl t yU Ui k/tiliV C > V A A LU f W X zontální osa: koncentrace protilátkových fragmentů v mol/1 (logaritmická stupnice), biotin-značený MAb 425 byl použit pro soutěž s neznačeným
MAb <425 >F(ab*)2 nebo BAb pro vazbu k EGF-R,
-13• BAb< 425, AICD2.Ml>F(ab')2 V BAb< 425, AICD2.M2>F(ab’)2 O- MAb< 425 >F(ab')2
Obr»5i proliferace leukocytů lidské periferní krve (PBL) vertikální 03a: % inkorporace 3H-thymidinu, horizontální osa: koncentrace protilátkových frag mentů (/ug/ml)
I
BAb< 425, AICD2.Ml>F(ab')2 + MAb <AJCD2 M2>F(abQ2 BAb< 425, AICD2.M2>F(ab}2 + MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 MAB<AICD2.M2>F(ab')2 * 7
MAb<AIGD2.Ml>F(ab’)2
MAb< 425 >F(ab')2
-1jL
Obr-6a: BAb indukovaná lýze nádoru: allogenní TIL jako efektorové buňky:
vertikální osa: % cytotoxicity, horizontální osa:
_1 = BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2 +_
MAb<AICD2.M2>F(ab')2 = MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.M2>F(ab')2 = MAb< 425 >F(ab')2
Qbr.óbt BAb indukovaná lýze nádoru:autologní TU jako efektorové buňky:
vertikální osa: % cytotoxicity, horizontální osa:
= BAb< 425, AICD2.Ml>F(ab’)2 +
MAb<AICD2.M2>F(abr)2 = BAb<425, AICD2.M2>F(ab’)2+
MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.M2>F(ab')2 = MAb< 425 >F(ab’)2
-1?vertikální linie na vrcholu sloupci: průměrná odchylka
Obr.7:3Ab zprostředlované fcílení T-buněk: a lýze nádorových buněk:
Obr. 7A a B představují kokulturu nádor infiltrujících lymfocytů (TIL) spolu s autologním! maligními buňkami při poměru efektor/cíl 4P/1. Kokultura byla iokubována 4 hodiny bez, (obr*7A, kontrola) a za přítomnosti
BAb< 425, AICD2.Ml>F(ab')2-+ MAb<AICD2.M2>F(ab)2 (20 /Ug/ml každý) (obr.7b). Za přítomnosti CD2 BAb mnoho T lymfocytů adheruje a chomáč k autologním nádorovým buňkám následně zabíjí melanomové buňky* Šipka na obr.7b označuje konjugát TIL, který rozrušuje melanomovoui buňka* Kokultura TIL a melanomových buněk byla provedena ve 24jamkových plotnách v kultivačním mediu, obsahujícími 10 % FCs* Mikrofégy byly sledovány inverzním mikroskopem: (modifikovaný fázový kontrastt , originální zvětšeni' 100).
Následující příklady popisují podrobně vynález.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 ' Příprava MAbs AICD2.B1 a AICDJá2:
Balb/O myši byly imunizovány čtyřikrát ve dvou týdnech; s geneticky zpracovaným CB2. DNA sekvence lidského CD2 a její klonování bylo. popsáno Sayrem a spol. 1987, Proc.Natl* Acad.USA 84, 2941 . GD2 genové esprese byla provedena v bakulovirovém systému metodami známými v oborut (Fraser 1992,
-16Current Topics in Microbiol.Immunol. 158, 131 a zde citovaných odkazech).
Slezinné buňky imunizované myši byly izolovány a fúzovány s myelomovou buněčnou linií (Ag8.653, ATCC CRL 1580). Bybridomy byly screenovány na produkci monoklanální protilátky· testováním supernatantu? z rostoucích hybridomOf na lidských T l.ymfocytech (CD2 pozitivní) pomocí fluorescenci aktivujícího buněčného sorterui (FACS). Pozitivní hybridomy byly získány metodou limiteď dilution cloraing*. Supernatanty selektovaných hybridomů byly hodnoceny pomocí imunoprecipitace a analýzy western blot.
Izolace selektovaných monoklonálníoh protilátek byla provedena čištěním kultur supernatantů podle Eye a spol.
1978, Immunochemistry 1?, 429.
Funkční analýza CD2 antigenu pířeného k protilátkám byla provedena pomocí prolifcačního testu; (inkorporací' H-thymidinu). Dvě protilátky vybrané ze serie monoklonáiních protilátek reagují s CD2 antigenem a silně indukují' proliferaci T buněk. Tyto monoklonální protilátky byly označeny AICD2.M-1 a AICD2.M2 a uloženy u Deutsche Sammlung fttr Mikroorganismen.
Všechny použité metody byly provedeny standardními postupy. Mnoho z nich je popsáno, napříklaď, v? Antibodies, a Laboratory tóanual,, Harlow and Lané?,·. 1988, Cold Spring Karbon· a zde citovaných odkazech.
Příklad 2
Syntéza 8Ab<42?., AICD2.M1 >F(ab' )2:
Syntéza vychází z 10 mg protilátky AICD2.M1 a 10 mg
-17protilátky MAb 425· Použité protilátky byly předem aktivovány ošetřením papainem- (10 mg/ml) v pufru kyseliny citrónové, 3· mM ELTA, pH 5,5. Po proteolýse byly F(ab;)2 získány z eluátu protein A sepharosové kolony. Získání F(ab*)2 je obecná blízké 100%. Oba F(ab*)2 fragmenty jsou individuálně konvertovány na Fab* fragment zpracováním s 0,5 oM DTT po 40 min při 30 aC. Po redukčním stupni se přebytek DTT odstraní a Fab* se získá.gelovou filtrací (Superdex^OO). V nepřerušeném procesu se Fab*-TN3 derivát generuje zpracováním: MAb 425 fragmentu s 0,5; aM Ellmanova činidla (5,5*-dithia-bis-(2-nitrobenzoová kyselina) (DTN3)) při_4^.C^po—60—min.—Nagbvtek— DTH3 se odstraní gelovou filtrací. 6 mg každého kojugačního partnera (Fab*-AICD2.M1 a Fab*-TNB MAb 425) se použije pro finální konjugační krok mícháním směsi konjugačních partnerů1 při 4 °C po 18 hodin. Bispecifická protilátka se získá z reakční směsi gelovou; filtrační p
chromatografií' (Superdex 200). Výtěžek syntetického F(Ab*)2 přípravku byl v rozmezí 3-4 mgíasi 30 %). Sekvence oparací zahrnutých v 3ab syntéze jsou shrnuty na obr. 1.
Příklad 3
Syntéza BAb<361, AICD2.M1 >F(ab*)2:
Podle příkladu 2 se připraví bispecifická protilátka; tak, že se vyjde z MAb AICD2.M1 a MAb 3^1 * Výtěžek 3Ab je přibližně 34 %.
Příklad 4
Syntéza 3Ab<15, AIGD2.MI>F(ab')2:
Podle příkladu 2 se bispecifická protilátka připraví tak, že se vychází z MAb AICD2.M1 a MAb 15. Výtěžek 3Ab je přibližně 23. %·
-18'Příkla® 55 ί
Syntéza BAb^.425, AICD2.M2 > F(ab')2:
Postupem podle příkladu 2 se připraví bispecifické protilátka tak, že se vychází z MAb AICD2.M2 a MAb 42?. Výtěžek; SAb je přibližně 30 %.
Příklad &
Syntéza BAb<425, AICD2.MI 5» (scFv)2:
Dva jednořetězcové proteiny s VL a VE doménami! AICD2.M1 a MAb 425 byly připraveny polekulárním; inženýrstvím· (Winteir a spol., 1991, Nátuře 349, 293-299). Expresní plasmidy byly získány z pHEE1 (Hoagenboom· a spol., Nucleic Aciď Res. 19, 4133-4137), který obsahuje strukturální geny pro VL a VE domény získané buď z anti-EGF-R myšího hybridomu (MAb 425) nebo anti-CD2 myšího hybridomu; (AICD2.M1 ). pelB vedoucí sekvence byla použita pro zprostředkování. periplasmatické sekrece v E.coli.scFv- byly čištěny afinitní chromatografií a použity pro konstrukci bispecifických scFv. Chemické zesítění EGF-R a CD2-specifickýck scFw bylo provedeno za pomoci, činidla 2-iminothiofflanu; a heterofunkčního zesí£ovače SPDP. Vychází se z 10 mg, MAb 425 scFv a dosáhne se statistického zabudování jedné molekuly 2-pyridyldiáulfidu na scFv molekulu via SPDP. Čištění derivátu bylo provedena gelověv filtrační chromatografií. Zavedení reaktiwní -SE skupiny da MAbi AICD2.M1 >scFv bylo získáno; derivatizac-í 10 mg scFv Z-iminothiolarrem. Čištění derivátu bylo provedeno, gelovou filtrační - chromatograf ií. Ekvimolární množství 2-pyridyI.čísulfidem aktivovaného, MAb 425 scFv a 2-iminothiolanem; modifikovaného MAb AICD2.M1 scFv byla spolu kopulována při neutrálním pH* Kopulační reakce byla následována monitorováním uvolnění pyridin-2-thionu;.
Ciii~
-19Finální bispecifický produkt* byl získá gelovou filtrační chromátografií s výtěžkem asi ? %„ v
Příklad ?
Charakterizace bispecifických protilátek'
Jednotlivé stupně BAb syntézy byly monitorovány pomocí SDS-PAGE v oboru známými technikami. Meziprodukty chenické syntézy a finální bispecifické produkty jsou uvedeny na obr. 2..Navíc k SDS-PAGE analýza byly čistota a homogenita SAb sledovány chromatograficky na hydroxyapatitové koloně. Eluce SAb byla provedená gradientem· fosfátového pufru; (pH=7,0-0,1 mol/l). Obr.l ukazuje chromá tograf i cký profil BAb <425··, AIGD2rM1> F(ab*)2. BAb představuje hlavní pík II a menší píky I a II jsou malá množství nečistot.
Příklad ff
Vazebné vlastnosti BAb< 42?, AICD2‘.M1 >F(ab')2 k EGF-R
Vazebné vlastnosti bispecifické protilátky byly porovnávány kompetitivní zkouškou ELISA, Krátce: byl použit biotinem značený' MAb 42? pro soutěžení s neznačenou protilátkou nebo BAb pro vazbu k EGF-R. EGF-R byl izolováni z A 431 buněk (ATCC; CRL 1?5?·) známými metodami. A 43.1 buňky jsou CD2 negativní'. Detekce byla provedena po inkubaci s POlAkonjugovaným streptavidinem a substrátem. Z inhibičních hodnot byly konstruovány křivky (obr.4). Inhibiční křivky· obou BAb jsou posunuty doprava, což znamená ztrátu; aktivity změnou z dvojvazné na jednovaznou vazebnost.
-20Příklad 9 v
Vazebné vlastnosti BAb^MAb 42?, MAb AICD2.M2 >F(ab'ř)2 k EGF-R
Podle příkladu 8 byly vazebné vlastnosti brspecifické protilátky hodnoceny (obr-4). Obě SAb měly srovnatelnou aviditm vůči svým antigenovým cílům.
Příklad 10.
Vazebné vlastnosti, bispecifických a monospecifických protilátkových fragmentů k CD2 antigenů
Jurka t. buňky (T buňky lidské akutní leukemie, 0D2,
CD3 pozitivnf, EGF-R negativní, ATCC: TI3 152) byly inkubovány (1 x 106 buněk/vzorek) s logaritmickými ředěními bispecifického/monospecifickéhn protilátkového. fragmentu po 15 minut při asi 4 °C. 3uňky pak byly promyty a inkubovány s kozím-antimyším-kappa-FITG jako druhým stupněm antiséra. Vunky byly promyty znovu-a imunofluorescence byla analyzována pomoci FACStar plus . FACSten plus; s jedinou excitací záření a seznam hodnot přírůstků byly použity pro analýzu?protilátkového xasažení žijících buněk. Specifické fluorescenční intenzity celé buněčné populace a procenta buněk reagujících s pro tilátkou byly stanoveny Jako negativní kontroly slouží' pouze fluorescenční distribuce buněk vybarvených druhým stupněm antiséra.
V následující tabulce jsou uvedeny polonasycené. kofficentrace (konc-. /o ) jaká mčřehf vazebné; síly rozdílnýyh bispecifickýcfe/monospecífických protilátkových fragmentů naVurkat. buňky. Hodnoty pro konc.j/^ gat jsou odečteny z titračních křivek (intenzita fluorescence (lineární prezentace) versus koncentrace protilátky) a jsou přibližně vyhodnoceny.
-21fragment protilátky
B4Ab< AICD2.M1;> F(ab')2 BAb < 425·, AICD2.M1> F(ab'}2 BAb <361, AICD2.M1 > F(ab')2
MAb<; AICD2.M2X F(ab')1 3Ab< 425, AIC.D2 Já2> F(ab*)2 3Ab<l5, AICDJá2>F(ab')2
negativní
IÍAb^4257 F(ab')2
Příklad 11
Proliferace leukocytů
Mononukleární leukocyty periferní krve? byly společně kultivovány s ozářenými (30 Gy) au.tologními nádorovými buňkami v mediu (RPMI 1640) doplněném IL~2' (20 j/ml) a IL-4 (1000 j/ml),. Odpovídající buňky byly slabě restfmulovány autologními nádorovými buňkami.
Čerstvě připravené leukocyty lidské periferní krve? (huPBL) od zdravých dárců krve byly kultivovány v 96jamkových mikrotitračních plotnách v celkovém objemu 200 ^ul
s monospecifickými. + bispecifickými protilátkovými fragmenty v uvedených koncentracích. Po 72 hodinách? byly buňky
novou scintilací' -plotny a výsledky byly vyjádřeny jako průměr cpa*. Výsledky u protilátkových fragmentů odvozených od MAb 425 je detailně možno? vidět na obr.5* Podobné výsledky byly získány za použití protilátkových frag-
-22mentů) odvozených': od MAb 361 a MAb 15· Kombinované podání protilátkových fragmentů působí významnou indukci proliferace v každém z těchto případů.
Příklad 12
QAb indukovaná lýze? nádoru
Buněčná linie C8161, vysoce invazivrrí a spontánně metastatická, EGF-R pozitivní lidská melanomové buněčná linie (Welch a spol., 1991, Int.J.Cancer 47, 227 a zde citované odkazy) byly použity jako? cíl pro EGF-R dependentnf cílení allogenickými a autologními nádor infiltrujícími T lymfocyty (TIL). Jiné pozitivní EGF-R lidské melanomové buněčné linie mohou být také použity. Celá TIL kultrura byla zbavena melanomového. vzorku'. Kultivační podmínky pro nádorové buňky a TIL byly popsány dříve (např.. Shimizu a spol- 1991, Cancer Res. 51, 6153?).
Produkce stabilních CTL klonů, byla provedena s? MLTC odpovídajícími buňkami za podmínek mezního ředění. MTLC odpovídájící T buňky byly naočkovány jedna buňka na jamku na 96-jamkovou plotnu?v mediu doplněném Il-2 a IL-4 spolu s autologně stimulovanými buňkami a autologně ES7transformovanými 3 buňkami jako živnými buňkami. Kolonie byly slabě řěstimulovány autologními nádchovými buňkami v
a živnými buňkami.
T lymfocyty z čerstvých nádorových biopsif byly aktivovány imobilizovanům anti-CD3; protilátkou; a expandovány v RPMI doplněném 11-2 a Il-4.
Byla provedena in vitro zkouška cytotoxicity za póužití Gr-značených nádorových buněk. Cílové buňky byly značeny pomocí ^1Cr (1OQ mCi/IO? buněk) po 1 hodinu a promyty třikrát- Konstantní počet značených buněk (2 x 10^/ buňka) byl koinkubovám s monospěcifickou nebo bispecific-23kou protilátkou; nebo její kombonací s effektorovým TIL v poměru efektor/cíl 7/1. CTL byly sériově ředěny třikrát ve 100: ml media v 96-jamkové' mokrotitrační plotně. Po přidání značených cílových buněk byly plotny inkubovány 4 h při 37 °C w 10% 00^. Zkouška byla ukončena odstředěním. Supernatanty byly shromážděny a byla měřena radioaktivita g-čítačem* Procenta specifického^ uvolnění ^Crr byla vypočtena podle vzorce:
% specifického Cr-uv41nění = 100 (experimentální uvolněni-sponténni uvolněni) (maximální uvolnění spontánní uvolnění)
Výsledky pro přotilétkové fragmenty získané z MAb 425 je možno detailně vidět, na obr. 6a,6b a obr-7. Podobné výsledky byly získány za použití protilátkových fragmentů získaných z MAb 361 a MAb 15. Kombinované podání protilátkových fragmentů působí významnou indukci lýze nádoru ve. všech případech.
Claims (11)
1. Bispecifické molekula použitelná pro lýzi nádorových buněk., obsahující první vazebné místo k epitopunádorové buňky a druhé vazebné místo k epitopu antigenu CD2, mající označeni 3Ab<X, AICD2.M1>Y nebo BAb<X, AICD2.M2>Y, kde
BAb znamená bispecifickou protilátku,
X je? protilátkový determinant rozpoznávající nádorový antigen,
AICD2.M1, AICD2.M2 jsou protilátky' rozpoznávající antigen C.D2, a
Y je Část celé protilátky.
2. Bispecifický protilátkový fragment podle nároku 1, kde X je protilátkový determinant odvozený od monoklonélních protilátek MAb 425, MAb 361 nebo MAb 15.
7·*
3* Bispecifický protilátkový fragment podle nároku 1 nebo 2, kde Y jé F(ab')2 molekula*
4* Bispecifický protilátkový fragment podle jednoho z nároků 1 až 3, vybraný ze skupiny (Vi
-25&
Ρ·'>
BAb<425, AJCD2.Ml>F(ab’)2, .
'.······,« -í v . j ' i·’; -· ;:ΐ . , , BAb< 425, AICD2.M2>F(ab')2 i - ’./ '+ ’ ' BAb< 361, AlČD2.Ml>F(ab')2 ' P E’ ‘ , BAb<36I,AJCD2.M2>F(ab')2.
1 ' 2 -..-.-4, ? ' í -f ’ 71.
.j; >fBAb< 15, AICD2.Ml>F(ab')2M^/· i „,r i . . ji
BAb<Í5)''ÁlCD2.M2>F(áb')2· ‘ί1.* Λ
9 F < .* .* I ' 2-2 -li ' rťl· 'Způsob přípravy bispeciflckého prrotfláíkového
5T ?(ab * *)2ř fragmentu7vhodnéha/pró lýzi nádorových 'buněk„ - obsa, TO z· ~ < (3 f . Λ ..··.< A ' - „ ,| , v hujícínďprvní vazebné'disto k epitopur nádorové banky a drahé, vazebné místo k epit&pu antigenu CP2, enzymatickou ^J· I I· Hk H-JL.'· f ί·. Ϊ ' J*'· ,, K J konverzí dvou rozdílných monoklonálníclx protilátek, kde každá obsahuje 'dva^identické LClehký- ře tě žěcr)-ff( těžký řetězec) poloviny'molekul i spojených*jednou nebodvěma disulfidóvými vazbami/^dó dvou F(ab'j2 molekúlr : rozštěpením každé F(ab*)Z molekuly za redukčních podmínek na Fab* thioly, derivatizací' jedné z těchto Fab*molekul každé
M ••i-· , ,, 1ν-. 1; . . : -· íí ; l4r. ,M , „ ... * „ protilátky s'thiolovým aktivačním činidlem'a kombinací aktivovanář.Fab* molekuly nesoucí nádorovou specifitu $ jed-,ί nou neaktivovanou Fab molekulou nesoucí leukocytovou specifita nebo vice versa za účelem získáni bispecífickéha F(ab*)2 fragméntu, w y'z načující se t í m, že
Γ se monoklonální protilátky AICEC.MI a AICD2.K2 použijí jako protilátky rozpoznávající leukocytový antigen.
* 6. Způsob přípravy bispěčifickéhó protilátkového Λ f fragmentu podle nároku ^'vyznačující se t í mr že se použije MAb 425·, MAfa 361 nebo MAb 15 „ jako protilátka rozpoznávající nádorový buněčný antigerr»'
-267. Monoklonální protilátka AICD2.M1 rozpoznávající antigen CD2 přepravitelná izolací z buněčná linie 1 H 10 * uložené po přírůstkovým číslem DSM ACC2118.
Λ j 8. Monoklonální protilátka AICD2.M2 rozpoznávající '·? CD2 antigen, připravitelná izolací z buněčné linie 7 D 1 uložené pod přírůstkovým Číslemi DSM ACC 2119.
9. Farmaceutický přípravek, vyznač u j í c í se t í m, že obsahuje jako aktivní složku alespoň jeden bispecifický protilátkový fragment podle jednoho z nároků 1 až 4, spolu s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči, přísadami nebo ředidly.
10* Farmaceutický kit, vyznačující se t í m, že obsahuje první farmaceutický přípravek I pofilee nároku 9, obsahující bispecifický protilátkový fragment SAb <X, AICD2.M2^>Y a druhý oddělený farmaceutický přípravek II, obsahující ' MAbkAICD2*Ml nebo MAb< AICD2.M1 > Y nebo 3Ab<X, AICD2Jár>Y, i kde X,Y mají uvedené významy* ·:
11. Farmaceutický kit, vyzna.fiujjící se tím, že obsahuje první farmaceutický přípravek I podle nároku 9, obsahující bispecifický protilátkový fragment BAb-^X. AICD2.M1 >Y a druhý separátní farmaceutický přípravek II, obsahující MAb AICD2.M2 nebo MAb<ÁICD2.M2> Y nebo SAb <X, AICD2.M2 >Y, kde X,Y mají uvedené významy*
12. Farmaceutický kit podle nároku 11, v y z n a č u jící se tím, že obsahuje bispecifický protilátkový
-27fragment 3Ab<425', ATCD2.M1 >F(ab')2 nebo BAb^Sl ,
AICD2.M1 >F(ab')2 nebo SAb<t5, AICD2.141 >F(ab')2 a přípravek II, obsahující MAb-<AICD2.M2 >F(ab*)2.
13.. Způsob čištění nádorových buněk ex vivo v autologním transplantátu kostní dřeně pomocí farmaceutického/ 7 kitu podle jednoho z nároků 10 nebo 12, popřípadě za přítomnosti dalších T-lymfocytů, kde se začíná s buňkami, ošetřenými přípravkem I a potom přípravkem II, popřípadě s následujícím obvyklým stupněm: čištění.
14. Použití bispecifického protilátkového fragmentu podle jednoho z nároků 1 až 4 pro přípravu léčiva pro léčbu lidských nádorů.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93112330 | 1993-08-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ180294A3 true CZ180294A3 (en) | 1995-02-15 |
| CZ291071B6 CZ291071B6 (cs) | 2002-12-11 |
Family
ID=8213129
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19941802A CZ291071B6 (cs) | 1993-08-02 | 1994-07-26 | Bispecifická molekula pouľitelná na lýzu nádorových buněk, způsob její přípravy, monoklonální protilátka, farmaceutický přípravek a kit a způsob čiątění nádorových buněk |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5798229A (cs) |
| EP (1) | EP0637593B1 (cs) |
| JP (2) | JP3822653B2 (cs) |
| KR (1) | KR100347465B1 (cs) |
| AT (1) | ATE199378T1 (cs) |
| AU (1) | AU683659B2 (cs) |
| CA (1) | CA2129183C (cs) |
| CZ (1) | CZ291071B6 (cs) |
| DE (1) | DE69426743T2 (cs) |
| DK (1) | DK0637593T3 (cs) |
| ES (1) | ES2156587T3 (cs) |
| GR (1) | GR3035926T3 (cs) |
| HU (1) | HU218100B (cs) |
| NO (1) | NO942850L (cs) |
| PL (1) | PL176761B1 (cs) |
| PT (1) | PT637593E (cs) |
| RU (1) | RU2203319C2 (cs) |
| SK (1) | SK283133B6 (cs) |
| UA (1) | UA40577C2 (cs) |
| ZA (1) | ZA945753B (cs) |
Families Citing this family (112)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2169299T3 (es) * | 1996-09-03 | 2002-07-01 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Procedimiento para la destruccion de celulas tumorales contaminantes en transplantes de celulas madre utilizando anticuerpos especificos. |
| ES2176574T3 (es) * | 1996-09-03 | 2002-12-01 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Utilizacion de anticuerpos bi y triespecificos para la induccion de inmunidad tumoral. |
| US6863887B1 (en) * | 1998-03-30 | 2005-03-08 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic and diagnostic applications based on the role of the CXCR-4 gene in tumorigenesis |
| WO1999050461A1 (en) * | 1998-03-30 | 1999-10-07 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic and diagnostic applications based on the role of the cxcr-4 gene in tumorigenesis |
| TR200100039T2 (tr) * | 1998-07-10 | 2001-05-21 | Connex Gmbh | İnsan zeta zincirinin ekstraselüler alanıyla etkileşime giren immünolojik reaktif |
| WO2000018806A1 (de) * | 1998-09-25 | 2000-04-06 | Horst Lindhofer | Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren |
| EP2360254A1 (en) | 1999-08-23 | 2011-08-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Assays for screening anti-pd-1 antibodies and uses thereof |
| JP2004533226A (ja) | 2001-04-02 | 2004-11-04 | ワイス | Ｂ７−４に対するｐｄ−１、ａレセプター、およびその使用 |
| AT502293B1 (de) * | 2002-05-15 | 2008-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Immunogener, monoklonaler antikörper |
| AU2003273299B2 (en) * | 2002-09-05 | 2010-04-01 | Medimmune, Llc | Methods of preventing or treating cell malignancies by administering CD2 antagonists |
| DE60336406D1 (de) | 2002-10-16 | 2011-04-28 | Purdue Pharma Lp | Antikörper, die an zellassoziiertes ca 125/0722p binden, und verfahren zu deren anwendung |
| JP2007525446A (ja) * | 2003-03-28 | 2007-09-06 | エルシス セラピューティクス， インク． | 抗体活性の転換のための方法及び組成物 |
| CA2524771A1 (en) * | 2003-05-09 | 2005-01-20 | University Of Massachusetts | Non-human animals expressing heterologous complement receptor type 1 (cr1) molecules on erythrocytes and uses therefor |
| JP2007510738A (ja) * | 2003-11-06 | 2007-04-26 | アイコス、コーポレーション | ＣＤ１１ｄ（α−ｄ）インテグリンに特異的に結合する組成物を使用した慢性疼痛を処置する方法 |
| US20070225202A1 (en) * | 2003-12-04 | 2007-09-27 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Methods for Identifying Modulators of Active Kit Tyrosine Kinase Receptor |
| CA2585849A1 (en) * | 2004-10-29 | 2006-05-11 | Elusys Therapeutics, Inc. | Use of cr1-binding molecules in clearance and induction of immune responses |
| EP1870459B1 (en) | 2005-03-31 | 2016-06-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association |
| DK2009101T3 (en) | 2006-03-31 | 2018-01-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Antibody modification method for purification of a bispecific antibody |
| DK2006381T3 (en) | 2006-03-31 | 2016-02-22 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | PROCEDURE FOR REGULATING ANTIBODIES BLOOD PHARMACOKINETICS |
| HUE029635T2 (en) | 2007-09-26 | 2017-03-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | A method for modifying an isoelectric point of an antibody by amino acid substitution in CDR |
| SG193868A1 (en) | 2007-09-26 | 2013-10-30 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Modified antibody constant region |
| EP2050764A1 (en) * | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
| US9266967B2 (en) * | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8242247B2 (en) * | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
| WO2009091547A1 (en) | 2008-01-15 | 2009-07-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Markers of acute myeloid leukemia stem cells |
| US8552154B2 (en) | 2008-09-26 | 2013-10-08 | Emory University | Anti-PD-L1 antibodies and uses therefor |
| LT3912643T (lt) | 2009-02-13 | 2023-02-10 | Immunomedics Inc. | Imunokonjugatai su ląstelės viduje skaldoma jungtimi |
| JP5717624B2 (ja) | 2009-03-19 | 2015-05-13 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| TWI682995B (zh) | 2009-03-19 | 2020-01-21 | 日商中外製藥股份有限公司 | 抗體恆定區域改變體 |
| SG175004A1 (en) | 2009-04-02 | 2011-11-28 | Roche Glycart Ag | Multispecific antibodies comprising full length antibodies and single chain fab fragments |
| WO2010115589A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-14 | Roche Glycart Ag | Trivalent, bispecific antibodies |
| US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
| WO2011034969A1 (en) | 2009-09-15 | 2011-03-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Synergistic anti-cd47 therapy for hematologic cancers |
| CN102482701B (zh) | 2009-09-16 | 2015-05-13 | 免疫医疗公司 | I类抗-cea抗体及其使用 |
| RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
| WO2011037158A1 (ja) | 2009-09-24 | 2011-03-31 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| US8968740B2 (en) | 2009-11-13 | 2015-03-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions, kits, and methods for the diagnosis, prognosis, monitoring, treatment and modulation of post-transplant lymphoproliferative disorders and hypoxia associated angiogenesis disorders using galectin-1 |
| CA2782333C (en) * | 2009-12-02 | 2019-06-04 | Imaginab, Inc. | J591 minibodies and cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen (psma) and methods for their use |
| WO2011068845A1 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Immunomedics, Inc. | Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy |
| NZ599516A (en) | 2009-12-10 | 2013-11-29 | Hoffmann La Roche | Antibodies binding preferentially human csf1r extracellular domain 4 and their use |
| BR112012017124C1 (pt) * | 2009-12-25 | 2021-08-31 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Método para produzir e para purificar um multímero polipeptídico |
| WO2011108714A1 (ja) | 2010-03-04 | 2011-09-09 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| AR080793A1 (es) | 2010-03-26 | 2012-05-09 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos biespecificos |
| ES2617777T5 (es) * | 2010-04-23 | 2022-10-13 | Hoffmann La Roche | Producción de proteínas heteromultiméricas |
| CA2807278A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | F. Hoffmann - La Roche Ag | Bispecific antibodies comprising a disulfide stabilized - fv fragment |
| RU2620071C2 (ru) | 2010-11-17 | 2017-05-22 | Чугаи Сеияку Кабушики Каиша | Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii |
| TW202323302A (zh) | 2010-11-30 | 2023-06-16 | 日商中外製藥股份有限公司 | 細胞傷害誘導治療劑 |
| EP2655413B1 (en) | 2010-12-23 | 2019-01-16 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
| CA2824824A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Monovalent antigen binding proteins |
| RU2607038C2 (ru) | 2011-02-28 | 2017-01-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Антигенсвязывающие белки |
| TWI838039B (zh) * | 2011-03-28 | 2024-04-01 | 法商賽諾菲公司 | 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白 |
| CA2831572C (en) | 2011-05-02 | 2019-11-26 | Immunomedics, Inc. | Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration |
| WO2013055958A1 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Genentech, Inc. | Improved assembly of bispecific antibodies |
| WO2013087699A1 (en) | 2011-12-15 | 2013-06-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies against human csf-1r and uses thereof |
| JP6486686B2 (ja) | 2012-02-10 | 2019-03-20 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 単鎖抗体及び他のヘテロ多量体 |
| CA2871882A1 (en) | 2012-06-27 | 2014-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof |
| CN104395339A (zh) | 2012-06-27 | 2015-03-04 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 用于选择并产生含有至少两种不同结合实体的定制高度选择性和多特异性靶向实体的方法及其用途 |
| EP2879710B1 (en) | 2012-08-03 | 2019-11-13 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Medical uses of agents that modulate immune cell activation and corresponding screening methods |
| CN104379169A (zh) | 2012-08-14 | 2015-02-25 | Ibc药品公司 | 用于治疗疾病的t-细胞重定向双特异性抗体 |
| SI2900277T1 (sl) | 2012-12-13 | 2022-05-31 | Immunomedics, Inc. | Odmerki imunokonjugatov protiteles in SN-38 za boljšo učinkovitost in zmanjšano toksičnost |
| EP3004877A4 (en) | 2013-06-06 | 2017-04-19 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for identification, assessment prevention, and treatment of cancer using pd-l1 isoforms |
| WO2015017529A2 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for modulating thermogenesis using pth-related and egf-related molecules |
| AR097584A1 (es) | 2013-09-12 | 2016-03-23 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano |
| EP3049442A4 (en) | 2013-09-26 | 2017-06-28 | Costim Pharmaceuticals Inc. | Methods for treating hematologic cancers |
| CA2925256C (en) | 2013-09-27 | 2023-08-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for producing polypeptide heteromultimer |
| EP3055329B1 (en) | 2013-10-11 | 2018-06-13 | F. Hoffmann-La Roche AG | Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies |
| US11708411B2 (en) | 2013-12-20 | 2023-07-25 | Wake Forest University Health Sciences | Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines |
| WO2015105995A2 (en) | 2014-01-08 | 2015-07-16 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Targeted therapy for small cell lung cancer |
| EP3094736A4 (en) | 2014-01-14 | 2017-10-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for identification, assessment, prevention, and treatment of melanoma using pd-l1 isoforms |
| ES2978993T3 (es) | 2014-02-21 | 2024-09-23 | Ibc Pharmaceuticals Inc | Terapia de enfermedades mediante la inducción de la respuesta inmunitaria a las células que expresan Trop-2 |
| EP3110445A4 (en) | 2014-02-25 | 2017-09-27 | Immunomedics, Inc. | Humanized rfb4 anti-cd22 antibody |
| KR20230155600A (ko) | 2014-04-03 | 2023-11-10 | 아이쥐엠 바이오사이언스 인코포레이티드 | 변형된 j-사슬 |
| EP2930188A1 (en) * | 2014-04-13 | 2015-10-14 | Affimed Therapeutics AG | Trifunctional antigen-binding molecule |
| GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
| SG11201609917PA (en) | 2014-05-29 | 2016-12-29 | Macrogenics Inc | Tri-specific binding molecules and methods of use thereof |
| US9580495B2 (en) | 2014-06-24 | 2017-02-28 | Immunomedics, Inc. | Anti-histone therapy for vascular necrosis in severe glomerulonephritis |
| GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| GB201412659D0 (en) * | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| EP3204018B1 (en) | 2014-10-07 | 2021-08-25 | Immunomedics, Inc. | Neoadjuvant use of antibody-drug conjugates |
| JP6721590B2 (ja) | 2014-12-03 | 2020-07-15 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 多重特異性抗体 |
| CA2968352A1 (en) | 2014-12-08 | 2016-06-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for upregulating immune responses using combinations of anti-rgmb and anti-pd-1 agents |
| ES2874558T3 (es) | 2015-03-04 | 2021-11-05 | Igm Biosciences Inc | Moléculas de unión a CD20 y usos de las mismas |
| CN108368169A (zh) | 2015-03-18 | 2018-08-03 | 约翰霍普金斯大学 | 靶向钾通道kcnk9的新的单克隆抗体抑制剂 |
| EP3279216A4 (en) | 2015-04-01 | 2019-06-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER |
| CN107428837A (zh) | 2015-04-22 | 2017-12-01 | 免疫医疗公司 | 循环trop‑2阳性癌细胞的分离、检测、诊断和/或鉴定 |
| JP6980980B2 (ja) | 2015-06-25 | 2021-12-15 | イミューノメディクス、インコーポレイテッドImmunomedics, Inc. | 抗ｈｌａ‐ｄｒまたは抗ｔｒｏｐ‐２抗体と微小管阻害剤、ｐａｒｐ阻害剤、ブルトンキナーゼ阻害剤またはホスホイノシチド３‐キナーゼ阻害剤との併用は癌の治療効果を有意に改善する |
| EP3316885B1 (en) | 2015-07-01 | 2021-06-23 | Immunomedics, Inc. | Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker |
| GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
| GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
| WO2017059387A1 (en) | 2015-09-30 | 2017-04-06 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified j-chain |
| AU2016329197B2 (en) | 2015-09-30 | 2021-01-21 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
| WO2017066561A2 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | President And Fellows Of Harvard College | Regulatory t cell pd-1 modulation for regulating t cell effector immune responses |
| GB201521391D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201521382D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201521383D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
| GB201521389D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
| GB201521393D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| EP3398965A4 (en) | 2015-12-28 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION |
| AU2017238054B2 (en) | 2016-03-21 | 2023-10-19 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | T-cell exhaustion state-specific gene expression regulators and uses thereof |
| JP7138094B2 (ja) | 2016-08-25 | 2022-09-15 | エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | マクロファージ活性化剤と組み合わせた抗ｃｓｆ－１ｒ抗体の間欠投与 |
| WO2018112032A1 (en) | 2016-12-13 | 2018-06-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for targeting tumor-infiltrating tregs using inhibitors of ccr8 and tnfrsf8 |
| EP3558360A1 (en) | 2016-12-22 | 2019-10-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | Treatment of tumors with an anti-csf-1r antibody in combination with an anti-pd-l1 antibody after failure of anti-pd-l1/pd1 treatment |
| RU2663104C1 (ru) * | 2017-07-13 | 2018-08-01 | Общество с ограниченной ответственностью "Реал Таргет" | Получение пегилированных фрагментов gd2-специфичных антител, индуцирующих прямую клеточную гибель gd2-позитивных опухолевых клеток, и их применение в терапии gd2-позитивных опухолей |
| US20220289854A1 (en) | 2019-04-30 | 2022-09-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for treating cancer using combinations of anti-cx3cr1 and immune checkpoint blockade agents |
| US12037378B2 (en) * | 2019-05-21 | 2024-07-16 | Novartis Ag | Variant CD58 domains and uses thereof |
| WO2022239720A1 (ja) | 2021-05-10 | 2022-11-17 | 公益財団法人川崎市産業振興財団 | 抗原への結合親和性を低減させた抗体 |
| WO2022261183A2 (en) | 2021-06-08 | 2022-12-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for treating and/or identifying an agent for treating intestinal cancers |
| EP4440594A2 (en) | 2021-11-29 | 2024-10-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions to modulate riok2 |
| WO2023201226A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for universal tumor cell killing |
| WO2024059183A1 (en) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for modulation of piezo1 in the treatment of cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE260880T1 (de) * | 1986-09-11 | 1988-11-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc., Boston, Mass. | Verfahren zur ausloesung der zytotoxizitaet. |
| ES2073394T3 (es) * | 1987-06-10 | 1995-08-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Constructos de anticuerpos bifuncionales y su utilizacion para destruir selectivamente las poblaciones celulares. |
| WO1991003493A1 (en) * | 1989-08-29 | 1991-03-21 | The University Of Southampton | Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates |
| ES2204890T3 (es) * | 1991-03-06 | 2004-05-01 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpos monoclonales humanizados. |
-
1994
- 1994-06-22 UA UA94005274A patent/UA40577C2/uk unknown
- 1994-07-21 DE DE69426743T patent/DE69426743T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-07-21 EP EP94111346A patent/EP0637593B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-21 PT PT94111346T patent/PT637593E/pt unknown
- 1994-07-21 DK DK94111346T patent/DK0637593T3/da active
- 1994-07-21 ES ES94111346T patent/ES2156587T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-21 AT AT94111346T patent/ATE199378T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-07-26 AU AU68698/94A patent/AU683659B2/en not_active Ceased
- 1994-07-26 CZ CZ19941802A patent/CZ291071B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-07-28 HU HU9402220A patent/HU218100B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-07-28 SK SK912-94A patent/SK283133B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-07-29 CA CA002129183A patent/CA2129183C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-01 KR KR1019940018956A patent/KR100347465B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-08-01 RU RU94028282/13A patent/RU2203319C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-08-01 NO NO942850A patent/NO942850L/no unknown
- 1994-08-01 PL PL94304510A patent/PL176761B1/pl unknown
- 1994-08-02 ZA ZA945753A patent/ZA945753B/xx unknown
- 1994-08-02 US US08/284,947 patent/US5798229A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-02 JP JP18156894A patent/JP3822653B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-05-25 GR GR20010400779T patent/GR3035926T3/el not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-10 JP JP2005232483A patent/JP4231862B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0637593B1 (en) | 2001-02-28 |
| ES2156587T3 (es) | 2001-07-01 |
| KR100347465B1 (ko) | 2003-03-03 |
| CZ291071B6 (cs) | 2002-12-11 |
| RU94028282A (ru) | 1996-07-20 |
| UA40577C2 (uk) | 2001-08-15 |
| AU6869894A (en) | 1995-02-09 |
| ATE199378T1 (de) | 2001-03-15 |
| JP4231862B2 (ja) | 2009-03-04 |
| EP0637593A1 (en) | 1995-02-08 |
| DE69426743T2 (de) | 2001-08-16 |
| DK0637593T3 (da) | 2001-06-25 |
| HUT71309A (en) | 1995-11-28 |
| NO942850L (no) | 1995-02-03 |
| PL304510A1 (en) | 1995-02-06 |
| JP3822653B2 (ja) | 2006-09-20 |
| RU2203319C2 (ru) | 2003-04-27 |
| SK91294A3 (en) | 1996-11-06 |
| GR3035926T3 (en) | 2001-08-31 |
| HU9402220D0 (en) | 1994-10-28 |
| CA2129183C (en) | 2006-05-16 |
| NO942850D0 (cs) | 1994-08-01 |
| PT637593E (pt) | 2001-08-30 |
| CA2129183A1 (en) | 1995-02-03 |
| JP2005336207A (ja) | 2005-12-08 |
| PL176761B1 (pl) | 1999-07-30 |
| JPH0789873A (ja) | 1995-04-04 |
| DE69426743D1 (de) | 2001-04-05 |
| ZA945753B (en) | 1995-03-15 |
| SK283133B6 (sk) | 2003-03-04 |
| AU683659B2 (en) | 1997-11-20 |
| KR950005327A (ko) | 1995-03-20 |
| HU218100B (hu) | 2000-06-28 |
| US5798229A (en) | 1998-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ180294A3 (en) | Bispecific trigger molecules recognizing lymphocyte antigen cd2 and tumor-specific antigens | |
| US20210206858A1 (en) | Anti-b7-h6 antibody, fusion proteins, and methods of using the same | |
| KR102710963B1 (ko) | 항b7-h3의 모노클로널 항체 및 그가 세포 치료 중에서의 응용 | |
| AU2019243448B2 (en) | Guidance and navigation control proteins and method of making and using thereof | |
| AU2001236621B2 (en) | Cd40-binding apc-activating molecules | |
| EP0557300B1 (en) | Bispecific antibodies, method of production, and uses thereof | |
| KR100376038B1 (ko) | 항-EGFR단일-사슬Fv및항-EGFR항체 | |
| JP2019533475A (ja) | 抗ｃｔｌａ４−抗ｐｄ−１二機能性抗体、その医薬組成物および使用 | |
| EP4299593A1 (en) | Cldn18.2 antigen-binding protein and use thereof | |
| US20240239918A1 (en) | Anti-ror1 antibody and ror1-targeting engineered cells | |
| WO2024140816A1 (zh) | 抗cd33/cll1双特异性抗体-自然杀伤细胞偶联物及其用途 | |
| EP4393954A1 (en) | Anti-tnfr2 monoclonal antibody and application thereof | |
| Ren‐Heidenreich et al. | Redirected T‐cell cytotoxicity to epithelial cell adhesion molecule‐overexpressing adenocarcinomas by a novel recombinant antibody, E3Bi, in vitro and in an animal model | |
| EP4252854A2 (en) | Humanized antibody specific for cd22 and chimeric antigen receptor using the same | |
| WO2015075710A1 (en) | Compositions comprising anti-ceacam1 antibodies, lymphocyte activating agents and activated lymphocytes for cancer therapy | |
| AU2369101A (en) | Antibodies against plasma cells | |
| US20230242666A1 (en) | Methods and Compositions for the Reduction of Chimeric Antigen Receptor Tonic Signaling | |
| Kudo et al. | Specific targeting immunotherapy of cancer with bispecific antibodies | |
| KR20240156612A (ko) | 항b7-h3의 모노클로널 항체 및 그가 세포 치료 중에서의 응용 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20090726 |