SK283133B6 - Bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, spôsob jej prípravy, monoklonálna protilátka, farmaceutický prípravok, kit a spôsob čistenia nádorových buniek - Google Patents
Bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, spôsob jej prípravy, monoklonálna protilátka, farmaceutický prípravok, kit a spôsob čistenia nádorových buniek Download PDFInfo
- Publication number
- SK283133B6 SK283133B6 SK912-94A SK91294A SK283133B6 SK 283133 B6 SK283133 B6 SK 283133B6 SK 91294 A SK91294 A SK 91294A SK 283133 B6 SK283133 B6 SK 283133B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- mab
- aicd2
- antibody
- bispecific
- originates
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 title claims abstract description 33
- 102100031547 HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Human genes 0.000 title 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 title 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 58
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 15
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 claims description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 26
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 12
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 12
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 4
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 4
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(diethylamino)ethyl]-2',6'-dimethylspiro[isoquinoline-4,4'-oxane]-1,3-dione;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.O=C1N(CCN(CC)CC)C(=O)C2=CC=CC=C2C21CC(C)OC(C)C2 OFQCQIGMURIECL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 4,4'-dipyridyl disulfide Chemical compound C=1C=NC=CC=1SSC1=CC=NC=C1 UHBAPGWWRFVTFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical compound N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 description 1
- 101150069832 CD2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000283715 Damaliscus lunatus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101100273713 Homo sapiens CD2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000584314 Homo sapiens Myc target protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030625 Myc target protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000028654 Type IV pili-dependent aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000017488 activation-induced cell death of T cell Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N beta-D-GalpNAc-(1->4)-[alpha-Neup5Ac-(2->8)-alpha-Neup5Ac-(2->3)]-beta-D-Galp-(1->4)-beta-D-Glcp-(1<->1')-Cer(d18:1/18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol Chemical compound SC1=CC=CC=N1 WHMDPDGBKYUEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L sodium tetrathionate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)SSS([O-])(=O)=O HAEPBEMBOAIUPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2806—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/74—Inducing cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, obsahujúca protilátkové determinanty X a Z, kde determinant X je špecifický pre epitop na nádorovom antigéne a determinant Z je špecifický pre epitop antigénu CD2, pričom determinant Z je zvolený z monoklonálnej protilátky označenej AICD2.M1, pripraviteľnej z hybridomálnej bunkovej línie 1 H 10 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2116, a ďalšej monoklonálnej protilátky označenej AICD2.M2, pripraviteľnej z hybridomálnej bunkovej línie 7 D 3 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2119; a jej použitie na prípravu liečiva na liečenie ľudských nádorov. Spôsob jej prípravy s použitím monoklonálnej protilátky rozpoznávajúcej leukocytový antigén AICD2.M1 alebo AICD2.M2. Monoklonálne protilátky AICD2.M1 a AICD2.M2 rozpoznávajúce antigén CD2, pripraviteľné izoláciou z bunkových línií 1 H 10 a 7 D 3 uložených v zbierke DSM pod prírastkovými číslami ACC2118 a ACC 2119. Farmaceutický prípravok obsahujúci aspoň jednu bišpecifickú molekulu uvedenú skôr; farmaceutický kit; spôsob čistenia nádorových buniek.ŕ
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka bišpecifickej molekuly použiteľnej na lýzu nádorových buniek, spôsobu jej prípravy, monoklonálnej protilátky, farmaceutického prípravku, kitu a spôsobu čistenia nádorových buniek. Vynález sa predovšetkým týka bišpecifických protilátkových fragmentov, ktoré rozpoznávajú lymfocytový CD2 antigén a akékoľvek rôzne tumorové antigény. Výhodne sa antigénny determinant receptora epidermálneho rastového faktora (EGF-R) použije ako tumorový antigén. Ďalej sa vynález týka dvoch nových monoklonálnych protilátok nazvaných AICD2.M1 a AICD2.M2 a ich kombinovaného pozitívneho vplyvu na lýzu tumoru, pričom aspoň jedna z nich je fragment bišpecifickej protilátky. Protilátky a protilátkové fragmenty môžu byť účinne použité v terapii tumorov a diagnostike.
Doterajší stav techniky
T lymfocyty sú pravdepodobne najúčinnejšie zložky imunitného systému, ak majú byť eliminované tumorové bunky. Jednako len väčšina pacientov s rakovinou nemala významné množstvo cytotoxických T lymfocytov (CTL) špecificky reaktívnych k ich tumorovým bunkám (napr. Knuth a spol. 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 81, 3511). S cieľom aktivácie plného lytického potenciálu CTL by mali všetky tieto bunky byť riadené proti nádorovým bunkám, pre ktoré nemajú prirodzenú špecifitu. T bunky môžu byť aktivované k prolifcrácii, cytokínovej sekrécii a citotoxickej aktivite väzbou monoklonálnych protilátok k určitým membránovým antigénom na povrchu týchto buniek.
Bišpecifické protilátky (BAb), rozpoznávajúce s tumorom spojené antigény jedným väzobným ramienkom a T bunkové markery druhým, boli opísané ako premosťujúce monošpecifické CTL a malígne bunky (napr. Staertz a spol. 1985, Náture 314, 628).
T bunková aktivácia týmito artificiálnymi protilátkami sa môže uskutočniť cez T bunkový receptor (TCR)/CD3 komplex, v ktorom je TCR zodpovedný za rozpoznávanie antigénu a CD3 epitop za transdukciu signálov generovaných interakciou TCR-antigén (napr. pozri prehľad článkov H. Nelsona, Cancer Cells, máj 1991, 163 a tu citované odkazy).
Uskutočnenie bunkovej aktivácie môže tiež prebiehať cez CD2 antigén, glykoproteín, ktorý je prítomný na T lymfocytoch a prirodzených zabíjačských (NK - naturel killer) bunkách (napr. Hiining a spol., Náture 326, 298). CD2 podporuje interakciu efektorovej bunky s prirodzeným ligandom LFA3 (CD58) na cieľovú bunku. Na CD2 boli identifikované tri funkčne dôležité epitopy (TI 1.1, TI 1.2 a TI 1.3). Na rozdiel od CD3 antigénu, ktorý prechádza moduláciou počas väzby protilátky nie je tu až doteraz zmienka o CD2 modulácii po cielení CD2 protilátkou. Práce z posledného času, využívajúce anti-CD2 protilátku na aktiváciu ukazujú, že reálnou sa javí dvojstupňová aktivácia via CD2 antigén. Synergicky pôsobiace anti-CD2-špecifity, ktoré boli použité na aktiváciu, dosiaľ sú charakterizované protilátkami ako anti TI 1.2 plus anti-Tll.l alebo TI 1.2 plus anti-Tl 1.3. Bolo opísané, že TI 1.3 je kritický epitop, ktorý sa stáva prístupný po aktivácii anti TI 1.2. Väčšina protilátok dosiaľ používaných súťaží s prirodzeným, CD2 ligandom LFA-3 vo väzbe (napr. Bolhius a spol., 1991, Cancer Immunol. Immunother. 34,1 a citované odkazy).
Je preto cieľom predloženého vynálezu vyvinúť nové bišpecifické protilátky odvodené od protinádorových pro tilátok a pár synergicky pôsobiacich anti-CD2 protilátok, ktoré sú schopne doručenia cytotoxicity po dvojstupňovej aktivácii pri ponechaní normálnych „cross-talk“ buniek via CD2/LFA3 neovplyvnených.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, obsahujúca protilátkové determinanty X a Z, kde determinant X je špecifický pre epitop na nádorovom antigéne a determinant Z je špecifický pre epitop antigénu CD2, pričom determinant Zje zvolený z monoklonálnej protilátky označenej AICD2.M1 pripraviteľnej z hybridomálnej bunkovej línie 1 H 10 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2116 a ďalšie monoklonálne protilátky označené AICD2.M2 pripraviteľné z hybridomálnej bunkovej línie 7 D 3 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2119.
V tejto molekule je prednostne protilátkový determinant X odvodený od monoklonálnej protilátky MAb 425 uloženej v zbierke ATCC pod prírastkovým číslom HB 9629 alebo MAb 361 uloženej v zbierke ATCC pod prírastkovým číslom HB 9325.
Vo výhodnom uskutočnení je bišpecifickou molekulou podľa vynálezu molekula F(ab')2, najmä potom taká molekula, v ktorej je kombinácia determinantov X a Z zvolená z nasledujúcich kombinácií:
X pochádza z Mab 425 a Z pochádza z Mab AICD2.M 1; X pochádza z Mab 425 a Z pochádza z Mab AICD2.M2; X pochádza z Mab 361 a Z pochádza z Mab AICD2.M1 a X pochádza z Mab 361 a Z pochádza z Mab AICD2.M2.
Predmetom vynálezu je ďalej spôsob prípravy bišpecifickej molekuly uvedenej skôr enzymatickou konverziou dvoch rôznych monoklonálnych protilátok, z ktorých každá obsahuje dve rovnaké L(ľahký reťazec)-H(ťažký reťazec) polovice molekúl spojené jednou alebo viacerými disulfidovými väzbami do dvoch F(ab')2 molekúl, rozštiepením každej F(ab')2 molekuly za redukčných podmienok na Fab' tioly, derivatizáciou jednej z týchto Fab' molekúl každej protilátky aktivačným činidlom pre tiol a zlúčením aktivovanej Fab' molekuly nesúcej nádorovú špecifitu s jednou neaktivovanou Fab' molekulou nesúcou leukocytovú špecifitu alebo naopak na získanie požadovaného bišpecifického protílátkového F(ab')2 fragmentu. Podstata tohto spôsobu spočíva v tom, že sa ako protilátka rozpoznávajúca leukocytový antigén používa monoklonálna protilátka AICD2.M1 alebo AICD2.M2, výhodne monoklonálna protilátka MAb 425 alebo MAb 361.
Predmetom vynálezu je ďalej tiež monoklonálna protilátka AICD2.M1 rozpoznávajúca antigén CD2, pripraviteľná izoláciou z bunkovej línie 1 H 10 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2118 a monoklonálna protilátka AICD2.M2 rozpoznávajúca antigén CD2, pripraviteľná izoláciou z bunkovej línie 7 D 3 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2119.
Predmetom vynálezu je aj farmaceutický prípravok, ktorý obsahuje aspoň jednu definovanú bišpecifickú molekulu, spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, excipientom alebo riedidlom.
Predmetom vynálezu je aj farmaceutický kit, ktorý' obsahuje
i) prvý farmaceutický prípravok (I) obsahujúci uvedenú bišpecifickú molekulu, kde Z pochádza z AICD2.M2 a ii) druhý oddelený farmaceutický prípravok (II) obsahujúci protilátku MAb AICD2.M1 alebo jej Fv, alebo F(ab’)2 fragment, alebo uvedenú bišpecifickú molekulu podľa nároku 1, kde Z pochádza z protilátky MAb AICD2.M1, alebo farmaceutický kit, ktorý obsahuje
i) prvý farmaceutický prípravok (I) obsahujúci uvedenú bišpecifickú molekulu, kde Z pochádza z AICD2.M1 a ii) druhý oddelený farmaceutický prípravok (II) obsahujúci protilátku MAb AICD2.M2 alebo jej Fv alebo F(ab')2 fragment, alebo uvedenú bišpecifickú molekulu, kde Z pochádza z protilátky MAb AICD2.M2.
V naposledy uvedenom kite obsahuje farmaceutický prípravok I výhodne bišpecifickú F(ab')2 molekulu, v ktorej je determinant X odvodený z protilátky MAb 425 a determinant Z je odvodený z protilátky MAb AICD2.M1, alebo v ktorej je determinant X odvodený z protilátky MAb 361 a determinant Z je odvodený z protilátky MAb AICD2.M1 a farmaceutický prípravok II obsahuje F(ab')2 fragment protilátky MAb AICD2.M2.
Predmetom vynálezu je ďalej tiež spôsob čistenia nádorových buniek ex vivo v autológnom transplantáte kostnej drene pomocou uvedených farmaceutických kitov, prípadne za prítomností ďalších T-lymfocytov, pri ktorom sa bunky najprv ošetria prípravkom I a potom prípravkom II a potom prípadne nasleduje stupeň obvyklého čistenia.
Konečne je predmetom vynálezu tiež použitie bišpecifického protilátkového fragmentu definovaného skôr na prípravu liečiva na liečenie ľudských nádorov.
Nasleduje podrobnejšie vysvetlenie vynálezu.
Teraz bolo zistené, že nové bišpecifické protilátky podľa vynálezu majú tieto vynikajúce vlastnosti: silnú aviditu k nádorovým bunkám, silnú aviditu k T bunkám a NK bunkám, sú nekompetitívne proti LFA3, nesynergizujú s LFA3, nemodulujú receptory, sú vysoko špecifické k NK- a T bunkám, pôsobia len cez dvojstupňovú aktiváciu, t. j. jedna BAb sama osebe nemá žiadny vplyv na aktiváciu T buniek a lýzu nádorových buniek.
Objektom vynálezu je teda bišpeciflcká molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, obsahujúca prvé väzobné miesto k epitopu nádorovej bunky a druhé väzbové miesto k epitopu CD2 antigénu, s označením BAb<X, AICD2.M1>Y alebo BAb<X, AICD2.M2>Y, kde BAb znamená bišpecifickú protilátku,
X je determinant protilátky rozpoznávajúci nádorový natigén,
AICD2.M1, AICD2.M2 sú monoklonálne protilátky rozpoznávajúce CD2 antigén, a
Y je časť celej protilátky.
AICD2.M1 a AICD2.M2 sú nové monoklonálne protilátky, ktoré boli získané imunizáciou myší s geneticky konštruovaným CD2 a izoláciou a purigikáciou protilátok z vhodných myšacích hybridomových buniek (detaily pozri príklady) a ktoré sú vysoko špecifické k CD2 antigénu T- a NK buniek.
Objektom predloženého vynálezu je preto monoklonálna protilátka nazvaná AICD2.M1, rozpoznávajúca CD2 antigén, získateľná izoláciou z bunkovej línie 1 H 10, uloženej pod prírastkovým číslom č. DSM ACC 2118.
Objektom predloženého vynálezu je tiež monoklonálna protilátka nazvaná AICD2.M2, rozpoznávajúca CD2 antigén, získateľná izoláciou z bunkovej línie 7 D 3 uloženej pod označením č. DSM ACC 2119.
Nové bunkové línie produkujúce uvedené protilátky boli uložené v „Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen“ (DSM, Brauns chweig, DE) podľa Budapeštianskej zmluvy 23. februára 1993.
Vynález sa tiež týka monoklonálnych protilátok, ktoré sú prirodzené alebo umelé varianty, alebo mutanty AICD2.M1 a AICD2.M2, ktoré zahrnujú geneticky modifi kované alebo konštruované, výhodne ľudské a chiméme verzie.
Bišpeciflcká molekula podľa vynálezu obsahuje väzobné ramienko AICD2.M1 alebo AICD2.M2 a ďalšie väzobné ramienko protilátky, ktorá rozpoznáva akýkoľvek nádorový antigén. Voľba protinádorového antigénu nemá významný vplyv na účinnosť bišpecifickej protilátky bez ohľadu na aktiváciu T buniek a lýzu nádorových buniek. Vo výhodnej realizácii vynálezu je uvedené druhé väzobné ramienko predstavované väzobným remienkom monoklonálnej protinádorovej protilátky MAb 425, MAb 361 alebo MAb 15, čo podľa vynálezu zahrnuje modifikované, výhodne humanizované alebo chimerické verzie a geneticky konštruované minimálne fragmenty.
Objektom vynálezu je poskytnutie bišpecifického protilátkového fragmentu ako je definovaný skôr a v nárokoch, kde X je protilátkový determinant odvodený od monoklonálnych protilátok MAb 425, MAb 361 alebo MAb 15.
MAb 425 je myšacia monoklonálna protilátka proti dobre známej bunkovej línii ľudského A431 karcinómu (ATCC, CRL 1555), viaže sa k polypeptidovému epitopu vonkajšej domény ľudského EGF-R a inhibuje väzbu EGF.MAb 425 (ATCC HB 9629), o ktorej bolo zistené, že sprostredkuje cytotoxicitu in vitro a potláča rast nádorových buniek epidermoidu a bunkových línií kolorektálneho karcinómu in vitro (Rodek a spol., 1987, Cancer Res., 47, 3692). Humanizovené a chimerické verzie MAb 425, boli opísané vo WO 92/15683.
MAb 361 je IgG2a myšacia monoklonálna protilátka (ATCC HB 9325) a viaže sa špecificky ku gangliozidovému GD2 antigénu a GD3 antigénu. Tieto gangliozidy sú značne obohatené v melanómových nádoroch (EP 0280209, US SN 016902).
MAb 361 má významnú hladinu cytotoxicity in vitro proti nádorovým bunkám exprimujúcim GD2 antigén (Thurin a spol. 1987, Cancer Res. 47,1229).
MAb 15 je IgGl myšacia monoklonálna protilátka generovaná imunizáciou s bunkami rakoviny ľudských malých pľúcnych buniek TKB-2 (Endo a spol., 1986, Cancer Res. 46, 6369). Protilátka rozpoznáva včasnú diferenciáciu antigénu.
Bišpecifické protilátky podľa vynálezu sú fragmenty celých protilátok, napríklad F(ab')2 molekuly alebo miniprotilátky (Fv molekuly, výhodne F(ab') molekuly. Na rozdiel od celých protilátok, fragmenty ako je F(ab')2 a miniprotilátky môžu penetrovať do masy nádoru pevných nádorov oveľa ľahšie a prejaviť svoju toxicitu a pôsobenie bunkovej lýzy v nádore. Navyše F(ab')2 molekuly a miniprotilátky získané z myšacích zdrojov majú normálne zníženú reakciu na ľudskú anti-myšaciu protilátku (HAMA).
Preferovaným objektom vynálezu je teda poskytnutie bišpecifického protilátkového fragmentu, ako je už definovaný, kde Y je F(ab')2 molekula. Osobitne výhodné uskutočnenia sú vybrané zo skupiny: BAb 425, AICD2.M1 F(ab')2, BAb 425, AICD2.M2 F(ab')2,
BAb361, AICD2.M1 F(ab')2, BAb361, AICD2.M2 F(ab')2, BAb 15, AICD2.M1 F(ab')2, BAb 15, AICD2.M2 F(ab')2.
Boli opísané rôzne méty na reprodukciu bišpecifických protilátok na báze kompletných protilátok alebo fragmentov (napr. pozri článok: Brissinck a spol. 1992, Drug ofthe Future 17 (11), 1003). Jednou z ciest konštrukcie bišpecifických protilátkových fragmentov je prevedenie celých protilátok na (monošpecifické)F(ab')2 molekuly proteolý zou, rozštiepenie týchto fragmentov na Fab' molekuly a rekombinácia Fab' molekúl s rôznou špecificitou na bišpecifické F(ab')2 molekuly (pozri napríklad EP 0179872 BI).
Objektom predloženého vynálezu je tak poskytnúť spôsob prípravy bišpecifického protilátkového F(ab')2 fragmentu použiteľného na lýzu nádorových buniek, obsahujúceho prvé väzobné miesto k epitopu nádorovej bunky a druhé väzobné miesto k epitopu CD2 antigénu enzymatickou konverziou dvoch rozdielnych monoklonálnych protilátok, kde každá obsahuje dve identické L (ľahký reťazec)-H (ťažký reťazec) polovice molekúl, spojených jednou alebo viacerými disulfidovými väzbami, na dve F(ab')2 molekuly, rozštiepením každej F(ab')2 molekuly za redukujúcich podmienok na Fab' tioly, derivatizáciou jednej z týchto Fab' molekúl každej protilátky s tiol aktivujúcim činidlom a kombináciou aktivovanej Fab' molekuly nesúcej nádorovú špecifitu s neaktivovanou Fab' molekulou nesúcou elukocytovú špecifitu alebo vice verša s cieľom získania požadovaného bišpecifického protilátkového F(ab')2 fragmentu, ktorý sa vyznačuje tým, že v monoklonálnych protilátkach sa A1CD2.M1 a AICD2.M2 použijú ako protilátky rozpoznávajúce leukocytový antigén.
Ako enzýmy vhodné na konverziu protilátky na jej F(ab')2 molekuly môžu byť použité: pepsín a papain. V niektorých prípadoch sú vhodné: trypsín a bromelín. V predloženom vynáleze sa výhodne používa pepsín. Konverzia disulfidových väzieb na voľné SH-skupiny (Fab' molekuly) môže byť uskutočnená redukujúcimi zlúčeninami, ako je ditiotreitol (DTT), merkaptoetanol a merkaptoetylamín. Tiolové aktivačné činidlá podľa vynálezu, ktoré bránia rekombinácii tiolových polomolekúl, sú: 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzooová kyselina) (DTNB), 2,2'-dipyridínsulfid, 4,4'-dipyridíndisulfid a tetrationát/siričitan sodný (pozri tiež Raso a spol. 1982, Cancer Res. 42, 457 a tu uvedené odkazy). Výhodne sa v postupe podľa predloženého vynálezu používa DTNB.
Spracovanie s tiol-aktivujúcim činidlom sa uskutočňuje len s jedným z dvoch Fab' fragmentov. V zásade nie je rozdiel v tom, ktorá z dvoch Fab' molekúl sa prevedie na aktivovaný Fab' fragment (napr. Fab'-TNB). Vo všeobecnosti však je labilnejší Fab' fragment modifikovaný tioltiolaktivujúcim činidlom. V predloženom vynáleze sú fragmenty nesúce protinádorovú špecifitu o niečo labilnejšie, a preto sa výhodne používajú v tomto postupe. Konjugácia aktivovaného Fab' derivátu s voľnými patentovými-SH skupinami druhej Fab' molekuly na generovanie F(ab')2 protilátky prebieha spontánne pri teplotách medzi 0 a 30 °C. Výťažok čistenej protilátky F(ab')2 je 20 až 40 % (vychádza sa z celých protilátok).
Ako je uvedcnc, vynález tiež zahrnuje bišpecifické minoprotilátky. Miniprotilátky sú fragmenty protilátky, obsahujúce dva Fv fragmenty s jednoduchým reťazcom (scFv fragmenty sú obvykle geneticky spojené buď ako VH-linkcr-VL, alebo ako VL-linker-VH), ktoré sú spojené autoagregáciou alebo fúziou každého z nich na C-konci s pántovou oblasťou (výhodne), aby bola poskytnutá flexibilita, a/alebo s amfipatickým helixom, aby bola dosiahnutá dimerzácia. Helix môže byť tvarovaný zo štvorhelixových zväzkov alebo z leucínového „zipperu“ (zipsu) (napr. Pack a Pliickthun 1992, Biochem. 31, 1579). Príprava miniprotilátok, ako sú definované, je napríklad opísaná vo WO 93-00082.
Fragmenty bišpecifických protilátok podľa vynálezu boli testované in vitro/ex vivo na nasledujúce vlastnosti: kapacita viazať sa k špecifickým nádorovým a T bunkám, imunomodulácia (proliferácia T buniek) a cytotoxicita (lýza nádorových buniek). Testy sú opísané per se v štandardnej literatúre. Detaily a výsledky sú uvedené v príkladoch.
Bišpecifické protilátkové fragmenty podľa vynálezu môžu byť podávané ľudským pacientom na liečbu. Preto je objektom vynálezu poskytnutie farmaceutického prípravku, obsahujúceho ako aktívnu zložku aspoň jeden bišpecifický protilátkový fragment, ako je definovaný a v nárokoch, spolu s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi, prísadami alebo riedidlami.
Typicky fragmenty protilátky podľa vynálezu budú injekované intravenózne alebo parenterálne. Všeobecne dávkové rozmedzia podávania bišpecifických protilátkových fragmentov sú dostatočne veľké na dosiahnutie požadovaného potlačenia nádoru a účinku lýzy buniek. Dávka bude závisieť od veku, stavu, pohlavia a rozsahu choroby pacienta a môže sa meniť od 0,1 mg/kg do 200 mg/kg, výhodne od 0,1 mg/kg do 100 mg/kg/dávku v jednom alebo viacerých denných podaniach, počas jedného alebo niekoľkých dni.
Prípravky parenterálneho podania zahrnujú sterilné vodné a nevodné roztoky, suspenzie a emulzie. Príklady nevodných rozpúšťadiel sú: propylénglykol, polyetyléngykol, prírodné oleje, ako je olivový olej a injekovateľné organické estery, ako je etyloleát a iné rozpúšťadlá známe v odbore, ktoré sú vhodné na tento účel. Bišpecifické protilátky podľa vynálezu môžu byť použité v prípravku, obsahujúcom fyziologicky prijateľný nosič. Príklady takýchto vhodných nosičov sú: salinický roztok, PBS, Ringerov roztok alebo laktátovaný Ringerov roztok. Vo farmaceutických prípravkoch môžu byť prítomné ochranné látky a ďalšie prísady, ako sú antibiotiká, antioxidanty a chelatačné činidlá. Bišpecifické protilátkové fragmenty môžu byť tiež konjugované známymi metódami 1 cytplínom, ako je IL-2 s cieľom podporenia ich cytotoxicity.
Farmaceutické prípravky podľa predloženého vynálezu sú vhodné na liečbu všetkých typov nádorov, zahrnujúcich melanómy, gliómy a karcinómy rovnako ako nádory obehového systému a pevné nádory. Výhodné prípravky obsahujú bišpecifický protilátkový fragment, ktorého jedno väzobné ramienko nesie väzobné miesta monoklonálnych protilátok MAb 425, MAb 361 a MAb 15.
Predložený vynález opisuje veľmi účinnú dvojstupňovú aktiváciu leukocytov podaním dvoch rozdielnych protilátok alebo bišpecifických protilátkových fragmentov.
Preto je objektom predloženého vynálezu poskytnutie farmaceutického kitu (A) s obsahom prvého farmaceutického prípravku I, ako je definovaný skôr alebo v nárokoch, obsahujúceho bišpecifický protilátkový fragment BAb<X, AICD2.M2>Y a druhého farmaceutického prípravku II, obsahujúceho Mab AICD2.M1 alebo Mab<AICD2.Ml>Y, alebo BAb<X, AICD2.M1>Y, kde X, Y majú uvedené významy. V tomto farmaceutickom kite častí prípravok I je nájdený na MAb AICD2.M2 a prípravok II na MAb AICD2.M1.
Alternatívne sa vynález týka kitu (B), kde prípravok I je založený na MAb AICD2.M1, zatiaľ čo prípravok II je nachádzaný na MAb AICD2.M2. Takto je ďalším objektom predloženého vynálezu poskytnutie farmaceutického kitu, ktorý obsahuje prvý farmaceutický prípravok I, obsahujúci bišpecifický protilátkový fragment BAb<X, AICD2.M1>Y a druhý oddelený farmaceutický prípravok II, obsahujúci MAb A1CD2.M2 alebo MAb<AICD2.M2>Y, alebo BAb<X, AICD2.M2>Y, kde X, Y majú uvedené významy.
Rozdiely medzi prípravkom A a B nie sú normálne príliš významné. V prípade MAb 425 je možné vidieť, že prípravok B, kde prípravok I je založený na MAb AICD2.M1 pracuje lepšie.
Rozdiely v nádorových väzobných miestach v prípravku ((A) alebo (B)) tiež nie sú významné. Účinnosť farmaceutických kitov podľa vynálezu s ohľadom na väzobnú kapacitu, imunomoduláciu (proliferáciu leukocytov) a cytotoxicitu však závisia od vplyvu väzobných miest bišpecifíckých protilátkových fragmentov, ktoré sú derivované z protilátok AICD2.M1 a AICD2.M2. Výhodné uskutočnenia predloženého vynálezu tak majú podobné vlastnosti.
Rozdiely v terapeutickom účinku prípravku II (alternatívne celá protilátka, monošpeciflcký protilátkový fragment alebo BAb) nie sú tiež príliš dramatické. Jednako len sú preferované prípravky II, obsahujúce vhodný monošpeciflcký protilátkový fragment.
Farmaceutický kit sa používa takto: medikálna liečba sa začne injekovaním prípravku I z farmaceutického kitu podľa predloženého vynálezu pacientovi. Bišpecifická protilátka sa viaže podľa jej špecifity nielen k povrchu nádoru, ale z dôvodu jej malej veľkosti môže tiež penetrovať do pevnej nádorovej hmoty. Podanie bišpecifického protilátkového fragmentu podľa vynálezu spôsobuje obohatenie injekovaného imunoglobulínu v lokálnej ploche nádoru, ale nevedie k významnej imunitnej odpovedi. Po individuálnej perióde (závisí od rozsahu choroby, typu nádoru, stavu, pohlavia a veku pacienta) od niekoľkých hodín do niekoľkých dní sa podá prípravok II a imunologické odpovede sú indukované ihneď. Prípravky I a II sú výhodne podávané v ekvimolárnych množstvách. Ex vivo experimenty ukazujú, že autológne a alogénne nádory infiltrujúce lymfocyty (TIL), ktoré sú normálne neschopné indukovať významnú cytotoxicitu proti nádoru (bunkovú lýzu), môžu byť vysoko aktivované uvedeným ošetrením (obr. 6a, b, 7).
Pomocou farmaceutického kitu podľa vynálezu je tiež možné čistiť ex vivo nádorové bunky v preparátoch kostnej drene. S cieľom intenzifikácie cytotoxického efektu je možné pridať exogénne T-lymfocyty.
Nakoniec je teda objektom predloženého vynálezu poskytnutie metódy na čistenie nádorových buniek ex vivo v autológnych transplantátoch kostnej drene pomocou farmaceutického kitu definovaného skôr alebo v nárokoch, prípadne za prítomnosti ďalších T-lymfocytov, keď sa začína tak, že sa bunky spracujú s prípravkom I a potom s prípravkom II, prípadne s nasledujúcim obvyklým stupňom čistenia. Techniky čistenia kostnej drene ex vivo sú v odbore dobre známe per se.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1: Syntéza BAb (schéma)
Obr. 2: SDS-PAGE protilátkových fragmentov a BAb: dráha 1: marker molekulovej hmotnosti dráha 2: MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 pred redukciou DTT dráha 3: MAb<425>F(ab')2 pred redukciou s DTT dráha 4: MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 po redukcii s DTT a derivatizácii s DTNB dráha 5: MAb<425>F(ab')2 po redukcii s DTT a derivatizácii s DTNB dráha 6: BAb pred a dráha 7: BAb po čistení. Obr. 3: Chromatografícký profil BAb<425,
AICD2.Ml>F(ab')2 na hydroxylapatitu ľavá vertikálna os: optická hustota OD pri 280 nm, pravá vertikálna os: koncentrácia fosfátového pufra (pH = 7,0), horizontálna os: elučný čas (min). Bišpecifícký protilátkový fragment je reprezentovaný píkom II. Piky I a III sú malé množstvá nečistôt.
Obr. 4: Kompetitívna väzba BAbs/MAbs k EGF-R:
vertikálna os: % absorbancie pri 490 nm, horizontálna os: koncentrácia protilátkových fragmentov v mol/1 (logaritmická stupnica), biotín-značený MAb 425 bol použitý na súťaž s neznačeným MAb<425>F(ab')2 alebo BAb na väzbu k EGF-R, • BA<425, AICD2.MI>F(ab')2
V BAb<425, AICD2.M2>F(ab')2 □ MAb<425>F(ab')2
Obr. 5: Proliferácia leukocytov ľudskej periférnej krvi (PBL):
vertikálna os: % inkorporácie 3H-tymidínu, horizontálna os: koncentrácia protilátkových fragmentov (pg/ml) • BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2 + M'\b<AlCD2Jvl2>F(ab')2
V BAtx425, AICD2.M2>F(ab')2+MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 ▼ MAB<AICD2.M2>F(ab')2 □ MAb<AICD2.Ml>F(ab')2
MAb<425>F(ab')2
Obr. 6a: BAb indukovaná lýza nádoru: alogénne TIL ako efektorové bunky:
vertikálna os: % cytotoxicity, horizontálna os:
= BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2 + MAb<AICD2.M2 >F (ab')2 = MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.M2>F(ab’)2 = MAb<425>F(ab')2
Obr. 6b: BAb indukovaná lýza nádoru: autológne TIL ako efektorové bunky:
vertikálna os: % cytotoxicity, horizontálna os:
= BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2 + + MAb<AICD2.M2>F(ab')2 = BAb<425, AICD2.M2>F(ab’)2 + + MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.Ml>F(ab')2 = MAb<AICD2.M2>F(ab’)2 = MAb<425>F(ab')2 vertikálna dráha na vrchole stĺpcov: priemerná odchýlka Obr. 7: BAb sprostredkované cielenie T buniek a lýza nádorových buniek:
Obr. 7A a B predstavujú kokultúru nádor infiltrujúcich lymfocytov (TIL) spolu s autológnymi malígnymi bunkami pri pomere efektor/cieľ 4P/1; kokultúra bola inkubovaná 4 hodiny bez (obr. 7A, kontrola) a za prítomnosti
BAb<425, AICD2.M1>F(ab')2 + + MAb<AICD2.M2>F(ab')2 (20 pg/ml každý) (obr. 7b). Za prítomnosti CD2 BAb mnoho T lymofocytov adheruje a v chumáč sa nakupuje k autológnym nádorovým bunkám zabíjajúc melanómové bunky. Šípka na obr. 7b označuje konjugát TIL, ktorý rozrušuje melanómové bunky. Kokultúra TIL a melanómových buniek bola uskutočnená v 24-jamkových platničkách v kultivačnom médiu, obsahujúcom 10 % FCS. Mikrofágy boli sledované inverzným mikroskopom (modifikovaný fázovaný kontrast, originálne zväčšenie 100).
Nasledujúce príklady opisujú podrobne vynález.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Príprava MAbs AICD2.M1 a AICD2.M2
Balb/C myši boli imunizované štyrikrát v dvoch týždňoch geneticky spracovaným CD2. DNA sekvencia ľudského CD2 a jej klonovanie bolo opísané Sayrom a spol.
1987, Proc. Natl. Acad. USA 84, 2941. CD2 génová expresia bola uskutočnená v bakulovírusovom systéme metódami v odbore (Fraser 1992, Current Topies in Microbiol. Immunol. 158, 131 a tu citovaných odkazoch).
Slezinové bunky imunizovanej myši boli izolované a fúzované myelómovou bunkovou líniou (Ag8. 653, ATCC CRL 1580). Hybridómy boli skrinované na produkciu monoklonálnej špecifickej protilátky testovaním supematantu z rastúcich hybridómov na ľudských T lymfocytoch (CD2 pozitívne) pomocou fluorescenciu aktivujúceho bunkového sorteru (FACS). Pozitívne hybridómy boli získané metódou „limited dilution cloning“. Supematanty selektovaných hybridómov boli hodnotené pomocou imunoprecipitácie a analýzy westem blot. Izolácia selektovaných monoklonálnych protilátok bola uskutočnená čistením kultúr supematentov podľa Eye a spol. 1978, Immunochemistry 15,429.
Funkčná analýza CD2 antigénu miereného k protilátkam bola uskutočnená pomocou proliferačného testu (inkorporáciou 3H-tymidínu). Dve protilátky vybrané zo série monoklonálnych protilátok reagujú s CD2 antigénom a silne indukujú proliferáciu T buniek. Tieto monoklonálne protilátky boli označené AICD2.M1 a AICD2.M2 a uložené v Deutsche Sammlung fúr Mikroorganismen.
Všetky použité metódy boli uskutočnené štandardnými postupmi. Mnohé z nich sú opísané, napríklad v „Antibodies, a Laboratory Manual“, Harlow and Lane, 1988, Cold Spring Harbor a tu citovaných odkazoch.
Príklad 2
Syntéza BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2
Syntéza vychádza z 10 mg protilátky A1CD2.M1 a 10 mg protilátky MAb 425. Použité protilátky boli dopredu aktivované ošetrením papaínom (10 mg/ml) v pufri kyseliny citrónovej, 3 mM EDTA, pH 5,5. Po proteolýze boli F(ab')2 získané z eluátu proteín A sefarózovej kolóny. Získanie F(ab')2 je všeobecne blízke 100 %. Obidva F(ab')2 fragmenty sú individuálne konvertovane na Fab’ fragment spracovaním s 0,5 mM DTT počas 40 min. pri 30 °C. Po redukčnom stupni sa prebytok DTT odstráni a Fab' sa získa gélovou filtráciou (SuperdexR 200). V neprerušenom procese sa Fab'-TNB derivát generuje spracovaním MAb 425 fragmentu s 0,5 mM Ellmanovho činidla (5,5'-ditio-bis-(2-nitrobenzooová kyselina) (DTNB)) pri 4 °C počas 60 min. Nadbytok DTNB sa odstráni gélovou filtráciou. 6 mg každého konjugačného partnera (Fab'-AICD2.M1 a Fab'-TNB MAb 425) sa použije na finálny konjugačný kork miešaním zmesi konjugačných partnerov pri 4 °C počas 18 hodín. Bišpecifická protilátka sa získa z reakčnej zmesi gélovou filtračnou chromatografiou (SuperdexR 200). Výťažok syntetického F(ab')2 prípravku bol v rozmedzí 3 - 4 mg (asi 30 %). Sekvencie operácii zahrnutých v Bab sú zhrnuté na obr. L
Príklad 3
Syntéza BAb<361, AICD2.Ml>F(ab')2
Podľa príkladu 2 sa pripraví bišpecifická protilátka tak, že sa vychádza z MAb AICD2.M1 a MAb 361. Výťažok BAb je približne 34 %.
Príklad 4
Syntéza BAb< 15, AICD2.Ml>F(ab')2:
Podľa príkladu 2 sa bišpecifická protilátka pripraví tak, že sa vychádza z MAb AICD2.M1 a MAb 15. Výťažok BAb je približne 23 %.
Príklad 5
Syntéza BAb<425, AICD2.M2>F(ab')2
Postupom podľa príkladu 2 sa pripraví bišpecifická protilátka tak, že sa vychádza z MAb AICD2.M2 a MAb 425. Výťažok BAb je približne 30 %.
Príklad 6
Syntéza BAb<425, AICD2.Ml>(scFv)2
Dva jcdnoreťazcové proteiny s VL a VH doménami AICD2.M1 a MAb 425 boli pripravené molekulárnym inžinierstvom (Winter a spol., 1991, Náture 349, 293 - 299). Expresné plazmidy boli získané z pHENl (Hoogenboom a spol., Nucleic Acid Res. 19, 4133 - 4137), ktorý obsahuje štrukturálne gény pre VL a VH domény získané buď z anti-EGF-R myšacieho hybridómu (MAb 425) alebo anti-CD2 myšacieho hybridómu (AICD2.M1). pelB vedúca sekvencia bola použitá na sprostredkovanie periplazmatickej sekrécie v E. coli. scFv boli čistené afinitnou chromatografiou a použité na rekonštrukciu bišpecifických scFv. Chemické zosietenie EGF-R a CD2-špecifických scFv bolo uskutočnené pomocou činidla 2-iminotiolanu a heterofunkčného zosieťovača SPDP. Vychádza sa z 10 mg MAb 425 scFv a dosiahne sa štatistické zabudovanie jednej molekuly 2-pyridyldisulfidu na scFv molekulu via SPDP. Čistenie derivátu bolo uskutočnené gólovo filtračnou chromatografiou. Zavedenie reaktívnej -SH skupiny do MAb<AICD2.Ml>scFv bolo získané derivatizáciou 10 mg scFv 2-iminotiolánom. Čistenie derivátu bolo uskutočnené gélovou filtračnou chromatografiou. Ekvimoláme množstvá 2-pyridyldisulfidom aktivovaného MAb 425 scFv a 2-iminotiolánom modifikovaného MAb AICD2.M1 scFv boli spolu kopulované pri neutrálnom pH. Kopulačná reakcia bola nasledovaná monitorovaním uvoľnenia pyridín-2-tiónu. Finálny bišpecifický produkt bol získaný gélovou filtračnou chromatografiou s výťažkom asi 5 %.
Príklad 7
Charakterizácia bišpecifických protilátok
Jednotlivé stupne BAb syntézy boli monitorované pomocou SDS-PAGE v odbore známymi technikami. Medziprodukty chemickej syntézy a finálne bišpecifické produkty sú uvedené na obr. 2. Navyše k SBS-PAGE analýze boli čistota a homogenita BAb sledované chromatograficky na hydroxyapatitovej kolóne. Elúcia BAb bola uskutočnená gradientom fosfátového pufra (pH = 7,0 - 0,3 mol/1). Obr. 3 ukazuje chromatografický profil BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2. BAb predstavuje hlavný pík II a menšie piky I a II sú malé množstvá nečistôt.
Príklad 8
Väzobné vlastnosti BAb<425, AICD2.Ml>F(ab')2 k EGP-R
Väzobné vlastnosti bišpeciflckej protilátky boli porovnávané kompetitívnou skúškou ELISA. V krátkosti: bol použitý biotínom značený MAb 425 na súťaženie s neznačenou protilátkou alebo BAb na väzbu k EGF-R. EGF-R bol izolovaný z A 431 buniek (ATCC CRL 1555) známymi metódami. A 431 bunky sú CD2 negatívne. Detekcia bola uskutočnená po inkubácii s POD-konjugovaným streptavidínom a substrátom. Z inhibičných hodnôt boli konštruované krivky (obr. 4). Inhibičné krivky obidvoch BAb sú posunuté doprava, čo znamená stratu aktivity zmenou z dvoj- na jednoväzbovosť.
Príklad 9
Väzobné vlastnosti BAb<MAb 425, MAb AICD2.M2>F(ab')2 k EGF-R
Podľa príkladu 8 boli väzobné vlastnosti bišpeciflckej protilátky hodnotené (obr. 4). Obidve BAb mali porovnateľnú aviditu proti svojim antigénovým cieľom.
koncl/2 n»».
x 108 > 1 x 10? (nenes.) x 107 (nenes.) x 108 > 1 x 107 (nenas.) x 1O7 (nenes.)
Príklad 10
Väzobné vlastnosti bišpecifických a monošpecifických protilátkových fragmentov k CD2 antigénu
Jurkat bunky (T bunky ľudskej akútnej leukémie, CD2, CD3 pozitívne, EGF-R negatívne, A'ľCC TIB 152) boli inkubované (1 x 106 buniek/vzorka) s logaritmickým riedením bišpecifického/monošpecifického protilátkového fragmentu počas 15 minút pri asi 4 °C. Bunky potom boli premyté a inkubované s kozím-antimyšacím-kepa-FITC ako druhým stupňom antiséra. Bunky boli premyté opäť a imunofluorescencia bola analyzovaná pomocou FACStar plusR. FACStar plusR s jedinou excitáciou žiarenia a zoznam hodnôt prírastkov boli použité na analýzu protilátkového zasiahnutia žijúcich buniek. Špecifické fluorescenčné intenzity celej bunkovej populácie a percentá buniek reagujúcich s protilátkou boli stanovené. Ako negatívne kontroly slúži len fluorescenčná distribúcia buniek vyfarbených druhým stupňom antiséra.
V nasledujúcej tabuľke sú uvedené polonasýtené koncentrácie (konCq/2 nas) ako miera väzobnej sily rozdielnych bišpecifických/monošpccifických protilátkových fragmentov na Jurkat bunky. Hodnoty pre konc.1/2 nas sú odčítané z titračných kriviek (intenzita fluorescencie (lineárna prezentácia) verzus koncentrácia protilátky) a sú približne vyhodnotené.
fragment protilátky MAb<AICD2.Mľ>F(eb')2 BAb<425, AICI)2.Ml^(ab72 BAb<361, AICD2.Ml>F(eb72
MAb<AICD2,M2>F(abT2 BAb<A25, AICt2.M2>F(abT2 BAb<15, AICD.M2bF(eb72
Príklad 11
Proliferácia leukocytov
Mononukleáme leukocyty periférnej krvi boli spoločne kultivované s ožiarenými (30 Gy) autológnymi nádorovými bunkami v médiu (RPMI 1640) doplnenom IL-2 (20 j/ml) a IL-4 (1000 j/ml). Zodpovedajúce bunky boli slabo restimulované autológnymi nádorovými bunkami.
Čerstvo pripravené leukocyty ľudskej periférnej krvi (huPBL) od zdravých darcov boli kultivované v 96-jamkových mikrotitračných platničkách v celkovom objeme 200 pl pri hustote 1 x 105 buniek/jamku. Bunky boli inkubované s monošpecifickými 2 bišpecifickými protilátkovými fragmentmi v uvedených koncentráciách. Po 72 hodinách boli bunky pulzované s 0,5 pCi 3H-tymidínu, inkubované cez noc a spracované. Bola meraná inkorporácia 3H-tymidínu kvapalinovou scintiláciou β-platničky a výsledky boli vyjadrené ako priemer cpm. Výsledky pre protilátkové fragmenty odvodené od MAb 425 je detailne možné vidieť na obr. 5. Podobné výsledky boli získané použitím protilátkových fragmentov odvodených od MAb 361 a MAb 15. Kombinované podanie protilátkových fragmentov spôsobuje významnú indukciu proliferácie v každom z týchto prípadov.
Príklad 12
BAb indukovaná lýza nádoru
Bunková línia C8161, vysoko intenzívna a spontánne metastatická, EGF-E pozitívna ľudská melanómová bunková línia (Welch a spol., 1991, Int. J. Cancer 47, 227 a tu citované odkazy) boli použité ako cieľ pre EGF-R dependentné cielenie alogenickými a autológnymi nádor infiltrujúcimi T lymfocytmi (TIL). Iné pozitívne EGF-R ľudské melanómové bunkové línie môžu byť tiež použité. Celá TIL kultúra bola zbavená melanómovej vzorky. Kultivačné podmienky pre nádorové bunky a TIL boli opísané predtým (napr. Shimizu a spol. 1991, Cancer Res. 51,6153).
Produkcia stabilných CTL klonov bola uskutočnená s MLTC zodpovedajúcimi bunkami za podmienok medzného riedenia. MTLC zodpovedajúce T bunky boli naočkované jedna bunka na jamku na 96-jamkovú platničku v médiu doplnenom 11-2 a 11-4 spolu s autológne stimulovanými bunkami a autológne EBV-transformovanými B bunkami ako živými bunkami. Kolónie boli slabo restimulované autológnymi nádorovými bunkami a živými bunkami.
T lymfocyty z čerstvých nádorových biopsií boli aktivované imobilizovanou anti-CD3 protilátkou a expandované v RPMI doplnenom 11-2 a 11-4.
Bola uskutočnená in vitro skúška cytotoxicity použitím 51Cr-značených nádorových buniek. Cieľové bunky boli značené pomocou 51Cr (100 mCi/107 buniek) počas 1 hodiny a premyté trikrát. Konštantný počet značených buniek (2 x 103/bunka) bol koinkubovaný s monošpecifickou alebo bišpecifickou protilátkou, alebo jej kombináciou s efektorovým TIL v pomere efektor/cieľ 7/1. CTL boli sériovo riedené trikrát v 100 ml média v 96-jamkovej mikrotitračnej platničke. Po pridaní značených cieľových buniek boli platničky inkubované 4 h pri 37 °C v 10 % CO2. Skúška bola ukončená odstredením. Supematanty boli zhromaždené a bola meraná rádioaktivita g-počítačom. Percentá špecifického uvoľnenia 51Cr boli vypočítané podľa vzorca:
% špecifického 51Cr-uvoľnenia = 100 (experimentálne uvoľnenie - spontánne uvoľnenie) (maximálne uvoľnenie - spontánne uvoľnenie)
Výsledky pre protilátkové fragmenty získané z MAb 425 je možné detailne vidieť na obr. 6a, 6b a obr. 7. Podobne výsledky boli získané použitím protilátkových fragmentov získaných z MAb 361 a MAb 15. Kombinované podanie protilátkových fragmentov spôsobujú významnú indukciu lýzy nádoru vo všetkých prípadoch.
Claims (14)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, obsahujúca protilátkové determinanty X a Z, kde determinant X je špecifický pre epitop na nádorovom antigéne a determinant Z je špecifický pre epitop antigénu CD2, pričom determinant Z je zvolený z monoklonálnej protilátky označenej AICD2.M1 pripraviteľnej z hybridomálnej bunkovej línie 1 H 10 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2116 a ďalšej monoklonálnej protilátky označenej AICD2.M2, pripraviteľnej z hybridomálnej bunkovej línie 7 D 3 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2119.
- 2. Bišpecifická molekula podľa nároku 1, v ktorej je protilátkový determinant X odvodený od monoklonálnej protilátky MAb 425 uloženej v zbierke ATCC pod prírastkovým číslom HB 9629 alebo MAb 361 uloženej v zbierke ATCC pod prírastkovým číslom HB 9325.
- 3. Bišpecifická molekula podľa nároku 1 alebo 2, ktorou je molekula F(ab')2.
- 4. Bišpecifická molekula podľa niektorého z nárokov 1 až 3, ktorou je molekula F(ab')2, v ktorej je kombinácia determinantov X a Z zvolená z nasledujúcich kombinácií:X pochádza z Mab 425 a Z pochádza z Mab AICD2.M1; X pochádza z Mab 425 a Z pochádza z Mab AICD2.M2; X pochádza z Mab 361 a Z pochádza z Mab AICD2.M1 aX pochádza z Mab 361 a Z pochádza z Mab AICD2.M2.
- 5. Spôsob prípravy bišpecifickej molekuly podľa nároku 3 alebo 4 enzymatickou konverziou dvoch rôznych monoklonálnych protilátok, z ktorých každá obsahuje dve rovnaké L (ľahký reťazec)-H (ťažký reťazec) polovice molekúl spojené jednou alebo viacerými disulfidovými väzbami do dvoch F(ab')2 molekúl, rozštiepením každej F(ab')2 molekuly za redukčných podmienok na Fab' tioly, derivatizáciou jednej z týchto Fab' molekúl každej protilátky aktivačným činidlom pre tiol a zlúčením aktivovanej Fab' molekuly nesúcej nádorovú špecificilu s jednou neaktivovanou Fab' molekulou nesúcou leukocytovú špecificitu alebo naopak na získanie požadovaného bišpecifického protilátkového F(ab')2 fragmentu, vyznačujúci sa t ý m , že sa ako protilátka rozpoznávajúca leukocytový antigén používa monoklonálna protilátka AICD2.M1 alebo AICD2.M2.
- 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že sa ako protilátka rozpoznávajúca antigén nádorovej bunky používa monoklonálna protilátka MAb 425 alebo MAb 361.
- 7. Monoklonálna protilátka AICD2.M1 rozpoznávajúca antigén CD2, pripraviteľná izoláciou z bunkovej línie 1 H 10 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2118.
- 8. Monoklonálna protilátka AICD2.M2 rozpoznávajúca antigén CD2, pripraviteľná izoláciou z bunkovej línie 7 D 3 uloženej v zbierke DSM pod prírastkovým číslom ACC2119.
- 9. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje aspoň jednu bišpecifíckú molekulu podľa niektorého z nárokov 1 až 4 spolu s farmaceutický prijateľným nosičom, excipientom alebo riedidlom.
- 10. Farmaceutický kit, vyznačujúci sa tým, že obsahuje i) prvý farmaceutický prípravok (I) podľa nároku 9, obsahujúci bišpecifíckú molekulu podľa nároku 1, kde Z pochádza z AICD2.M2 a ii) druhý oddelený farmaceutický prípravok (II) obsahujúci protilátku MAb AICD2.M1 alebo jej Fv, alebo F(ab')2 fragment, alebo bišpecifickú molekulu podľa nároku 1, kde Z pochádza z protilátky MAb AICD2.M1.
- 11. Farmaceutický kit, vyznačujúci sa tým, že obsahuje i) prvý farmaceutický prípravok (I) podľa nároku 9, obsahujúci bišpecifíckú molekulu podľa nároku 1, kde Z pochádza z AICD2.M1 a ii) druhý oddelený farmaceutický prípravok (II) obsahujúci protilátku MAb AICD2.M2 alebo jej Fv, alebo F(ab')2 fragment, alebo bišpecifickú molekulu podľa nároku 1, kde Z pochádza z protilátky MAb AICD2.M2.
- 12. Farmaceutický kit podľa nároku 11, vyznačujúci sa tým,že farmaceutický prípravok I obsahuje bišpecifíckú F(ab')2 molekulu, v ktorej je determinant X odvodený z protilátky MAb 425 a determinant Z je odvodený z protilátky MAb AICD2.M1, alebo v ktorej je determinant X odvodený z protilátky MAb 361 a determinant Z je odvodený z protilátky MAb AICD2.M1 a farmaceutický prípravok II obsahuje F(ab')2 fragment protilátky MAb AICD2.M2.
- 13. Spôsob čistenia nádorových buniek cx vivo v autológnom transplantáte kostnej drene pomocou farmaceutického kitu podľa jedného z nárokov 10 alebo 12, pripadne za prítomnosti ďalších T-lymľocitov, pri ktorom sa bunky najprv ošetria prípravkom I a potom prípravkom II, a potom prípadne nasleduje stupeň obvyklého čistenia.
- 14. Použitie bišpecifického protilátkového fragmentu podľa jedného z nárokov 1 až 4 na prípravu liečiva na liečenie ľudských nádorov.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93112330 | 1993-08-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK91294A3 SK91294A3 (en) | 1996-11-06 |
| SK283133B6 true SK283133B6 (sk) | 2003-03-04 |
Family
ID=8213129
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK912-94A SK283133B6 (sk) | 1993-08-02 | 1994-07-28 | Bišpecifická molekula použiteľná na lýzu nádorových buniek, spôsob jej prípravy, monoklonálna protilátka, farmaceutický prípravok, kit a spôsob čistenia nádorových buniek |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5798229A (sk) |
| EP (1) | EP0637593B1 (sk) |
| JP (2) | JP3822653B2 (sk) |
| KR (1) | KR100347465B1 (sk) |
| AT (1) | ATE199378T1 (sk) |
| AU (1) | AU683659B2 (sk) |
| CA (1) | CA2129183C (sk) |
| CZ (1) | CZ291071B6 (sk) |
| DE (1) | DE69426743T2 (sk) |
| DK (1) | DK0637593T3 (sk) |
| ES (1) | ES2156587T3 (sk) |
| GR (1) | GR3035926T3 (sk) |
| HU (1) | HU218100B (sk) |
| NO (1) | NO942850L (sk) |
| PL (1) | PL176761B1 (sk) |
| PT (1) | PT637593E (sk) |
| RU (1) | RU2203319C2 (sk) |
| SK (1) | SK283133B6 (sk) |
| UA (1) | UA40577C2 (sk) |
| ZA (1) | ZA945753B (sk) |
Families Citing this family (111)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2169299T3 (es) * | 1996-09-03 | 2002-07-01 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Procedimiento para la destruccion de celulas tumorales contaminantes en transplantes de celulas madre utilizando anticuerpos especificos. |
| ES2176574T3 (es) | 1996-09-03 | 2002-12-01 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Utilizacion de anticuerpos bi y triespecificos para la induccion de inmunidad tumoral. |
| NZ528767A (en) | 1998-03-30 | 2005-08-26 | Northwest Biotherapeutics Inc | Therapeutic and diagnostic applications based on the role of the CXCR-4 gene in tumorigenesis |
| US6863887B1 (en) * | 1998-03-30 | 2005-03-08 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic and diagnostic applications based on the role of the CXCR-4 gene in tumorigenesis |
| KR20010074697A (ko) * | 1998-07-10 | 2001-08-09 | 추후제출 | 인간 제타사슬의 세포외 도메인과 특이적으로상호반응하는 면역 반응물질 |
| WO2000018806A1 (de) * | 1998-09-25 | 2000-04-06 | Horst Lindhofer | Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren |
| JP4896327B2 (ja) | 1999-08-23 | 2012-03-14 | ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド | Ｐｄ−１、ｂ７−４の受容体、およびその使用 |
| MXPA03008959A (es) | 2001-04-02 | 2004-10-15 | Wyeth Corp | Pd-1, un receptor para b7-4 y sus usos. |
| AT502293B1 (de) * | 2002-05-15 | 2008-03-15 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Immunogener, monoklonaler antikörper |
| EP1539234A4 (en) * | 2002-09-05 | 2006-02-15 | Medimmune Inc | METHODS OF PREVENTING OR TREATING CELLULAR MALIGNITES BY ADMINISTERING CD2 ANTAGONISTS |
| NZ563328A (en) | 2002-10-16 | 2009-08-28 | Euro Celtique Sa | Antibodies that bind cell-associated CA 125/0772P and methods of use thereof |
| JP2007525446A (ja) * | 2003-03-28 | 2007-09-06 | エルシス セラピューティクス， インク． | 抗体活性の転換のための方法及び組成物 |
| WO2005005479A1 (en) * | 2003-05-09 | 2005-01-20 | University Of Massachusetts | Non-human animals expressing heterologous complement receptor type 1 (cr1) molecules on erythrocytes and uses therefor |
| US20070092515A1 (en) * | 2003-11-06 | 2007-04-26 | Icos Corporation | Methods of treating chronic pain using compositions that specifically bind cd11d (alpha-d) integrin |
| JP2007517502A (ja) * | 2003-12-04 | 2007-07-05 | アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ | 活性なｋｉｔチロシンキナーゼ受容体のモジュレーターを同定する方法 |
| US20060263792A1 (en) * | 2004-10-29 | 2006-11-23 | Elusys Therapeutics, Inc. | Use of CR1-binding molecules in clearance and induction of immune responses |
| DK3050963T3 (da) | 2005-03-31 | 2019-12-09 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af polypeptid ved regulering af arrangement |
| AU2007232873B2 (en) | 2006-03-31 | 2014-02-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies |
| CN105177091A (zh) | 2006-03-31 | 2015-12-23 | 中外制药株式会社 | 用于纯化双特异性抗体的抗体修饰方法 |
| EP4368721A2 (en) | 2007-09-26 | 2024-05-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr |
| KR101680906B1 (ko) | 2007-09-26 | 2016-11-30 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 항체 정상영역 개변체 |
| EP2050764A1 (en) * | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
| US9266967B2 (en) * | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8242247B2 (en) * | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
| CA3221018A1 (en) | 2008-01-15 | 2009-07-23 | Ravindra Majeti | Markers of acute myeloid leukemia stem cells |
| CA2998281C (en) | 2008-09-26 | 2022-08-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor |
| US20160095939A1 (en) | 2014-10-07 | 2016-04-07 | Immunomedics, Inc. | Neoadjuvant use of antibody-drug conjugates |
| DK3912643T3 (da) | 2009-02-13 | 2022-10-17 | Immunomedics Inc | Immunokonjugater med en intracellulært-spaltelig binding |
| EP2409991B1 (en) | 2009-03-19 | 2017-05-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody constant region variant |
| EP2826789A1 (en) | 2009-03-19 | 2015-01-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody constant region variant |
| BRPI1014089A2 (pt) | 2009-04-02 | 2016-04-19 | Roche Glycart Ag | anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples |
| WO2010115589A1 (en) | 2009-04-07 | 2010-10-14 | Roche Glycart Ag | Trivalent, bispecific antibodies |
| US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
| CA3057650A1 (en) | 2009-09-15 | 2011-03-24 | Irving L. Weissman | Synergistic anti-cd47 therapy for hematologic cancers |
| RU2573915C2 (ru) | 2009-09-16 | 2016-01-27 | Дженентек, Инк. | Содержащие суперспираль и/или привязку белковые комплексы и их применение |
| EP2478110B1 (en) | 2009-09-16 | 2016-01-06 | Immunomedics, Inc. | Class i anti-cea antibodies and uses thereof |
| US10150808B2 (en) | 2009-09-24 | 2018-12-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Modified antibody constant regions |
| EP2499159B1 (en) | 2009-11-13 | 2017-01-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions, kits, and methods for the diagnosis, prognosis, monitoring, treatment and modulation of post-transplant lymphoproliferative disorders and hypoxia associated angiogenesis disorders using galectin-1 |
| WO2011068845A1 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Immunomedics, Inc. | Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy |
| CN102753194B (zh) * | 2009-12-02 | 2015-07-08 | 伊麦吉纳博公司 | 靶向人前列腺特异性膜抗原的j591微抗体和双抗体 |
| MY159679A (en) | 2009-12-10 | 2017-01-13 | Hoffmann La Roche | Antibodies binding preferentially human csf1r extracellular domain 4 and their use |
| BR112012017124C1 (pt) * | 2009-12-25 | 2021-08-31 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Método para produzir e para purificar um multímero polipeptídico |
| EP2543730B1 (en) | 2010-03-04 | 2018-10-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody constant region variant |
| TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
| RU2624027C2 (ru) * | 2010-04-23 | 2017-06-30 | Дженентек, Инк. | Получение гетеромультимерных белков |
| CN103068846B9 (zh) | 2010-08-24 | 2016-09-28 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 包含二硫键稳定性Fv片段的双特异性抗体 |
| MY166429A (en) | 2010-11-17 | 2018-06-26 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Multi-specific antigen-binding molecule having alternative function to function of blood coagulation factor viii |
| TWI736437B (zh) | 2010-11-30 | 2021-08-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 細胞傷害誘導治療劑 |
| WO2012085111A1 (en) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Polypeptide-polynucleotide-complex and its use in targeted effector moiety delivery |
| RU2013141078A (ru) | 2011-02-28 | 2015-04-10 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Одновалентные антигенсвязывающие белки |
| ES2549638T3 (es) | 2011-02-28 | 2015-10-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Proteínas de unión a antígeno |
| TWI622597B (zh) * | 2011-03-28 | 2018-05-01 | 賽諾菲公司 | 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白 |
| CN103501825B (zh) | 2011-05-02 | 2017-03-15 | 免疫医疗公司 | 用于小体积施用的同种异型选择的抗体的超滤浓缩 |
| EP3418306B1 (en) * | 2011-10-11 | 2023-12-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Improved assembly of bispecific antibodies |
| MX356337B (es) | 2011-12-15 | 2018-05-23 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos contra csf-1r humano y sus usos. |
| CN104105711B (zh) | 2012-02-10 | 2018-11-30 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 单链抗体及其他异多聚体 |
| KR20150030744A (ko) | 2012-06-27 | 2015-03-20 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 표적에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 단위를 포함하는 항체 Ｆｃ－영역 접합체의 제조 방법 및 그의 용도 |
| MX354862B (es) | 2012-06-27 | 2018-03-23 | Hoffmann La Roche | Método para la producción de entidades dirigidas altamente selectivas hechas a la medida y biespecíficas que contienen dos entidades de unión diferentes. |
| WO2014022759A1 (en) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof |
| AU2013302696B9 (en) | 2012-08-14 | 2018-08-09 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease |
| WO2017004144A1 (en) | 2015-07-01 | 2017-01-05 | Immunomedics, Inc. | Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker |
| CN118001422A (zh) | 2012-12-13 | 2024-05-10 | 免疫医疗公司 | 功效改进且毒性降低的抗体与sn-38的免疫缀合物的剂量 |
| EP3004877A4 (en) | 2013-06-06 | 2017-04-19 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for identification, assessment prevention, and treatment of cancer using pd-l1 isoforms |
| CA2919477A1 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for modulating thermogenesis using pth-related and egf-related molecules |
| AR097584A1 (es) | 2013-09-12 | 2016-03-23 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano |
| EP3049442A4 (en) | 2013-09-26 | 2017-06-28 | Costim Pharmaceuticals Inc. | Methods for treating hematologic cancers |
| EP3050896B1 (en) | 2013-09-27 | 2021-07-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for producing polypeptide heteromultimer |
| CN105612182B (zh) | 2013-10-11 | 2019-12-10 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 多特异性结构域交换共有可变轻链抗体 |
| WO2015095868A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Wake Forest University Health Sciences | Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines |
| US11046763B2 (en) | 2014-01-08 | 2021-06-29 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Targeted therapy for small cell lung cancer |
| CN106132436B (zh) | 2014-02-21 | 2021-06-15 | Ibc药品公司 | 通过诱导对trop-2表达细胞的免疫应答的疾病疗法 |
| EP3110445A4 (en) | 2014-02-25 | 2017-09-27 | Immunomedics, Inc. | Humanized rfb4 anti-cd22 antibody |
| WO2015153912A1 (en) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | Igm Biosciences, Inc. | Modified j-chain |
| EP2930188A1 (en) * | 2014-04-13 | 2015-10-14 | Affimed Therapeutics AG | Trifunctional antigen-binding molecule |
| GB201409558D0 (en) | 2014-05-29 | 2014-07-16 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
| CN113416252A (zh) | 2014-05-29 | 2021-09-21 | 宏观基因有限公司 | 三特异性结合分子和其使用方法 |
| CA2953567C (en) | 2014-06-24 | 2023-09-05 | Immunomedics, Inc. | Anti-histone therapy for vascular necrosis in severe glomerulonephritis |
| GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| JP6721590B2 (ja) | 2014-12-03 | 2020-07-15 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 多重特異性抗体 |
| AU2015360903B2 (en) | 2014-12-08 | 2021-03-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for upregulating immune responses using combinations of anti-RGMB and anti-PD-1 agents |
| CN107532188B (zh) | 2015-03-04 | 2022-05-10 | Igm生物科学股份有限公司 | Cd20结合分子及其用途 |
| WO2016149621A1 (en) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | The Johns Hopkins University | Novel monoclonal antibody inhibitors targeting potassium channel kcnk9 |
| JP7082484B2 (ja) | 2015-04-01 | 2022-06-08 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
| AU2016252771B2 (en) | 2015-04-22 | 2021-12-16 | Immunomedics, Inc. | Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating Trop-2-positive cancer cells |
| ES2953441T3 (es) | 2015-06-25 | 2023-11-13 | Immunomedics Inc | Combinación de anticuerpos anti-hla-dr o anti-Trop-2 con inhibidores de microtúbulos, inhibidores de parp, inhibidores de la cinasa de bruton o inhibidores de la fosfoinositida 3-cinasa mejora significativamente el resultado terapéutico en el cáncer |
| GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
| GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
| US11639389B2 (en) | 2015-09-30 | 2023-05-02 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified J-chain |
| EP3355913A1 (en) | 2015-09-30 | 2018-08-08 | IGM Biosciences A/S | Binding molecules with modified j-chain |
| EP3362074B1 (en) | 2015-10-16 | 2023-08-09 | President and Fellows of Harvard College | Regulatory t cell pd-1 modulation for regulating t cell effector immune responses |
| GB201521382D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201521391D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| GB201521389D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Method |
| GB201521383D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech | Method |
| GB201521393D0 (en) | 2015-12-03 | 2016-01-20 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| EP3398965A4 (en) | 2015-12-28 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | METHOD FOR PROMOTING THE EFFICACY OF PURIFYING A POLYPEPTIDE CONTAINING AN FC REGION |
| US20210309965A1 (en) | 2016-03-21 | 2021-10-07 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | T-cell exhaustion state-specific gene expression regulators and uses thereof |
| EP3504239B1 (en) | 2016-08-25 | 2024-05-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Intermittent dosing of an anti-csf-1r antibody in combination with macrophage activating agent |
| WO2018112033A1 (en) | 2016-12-13 | 2018-06-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for targeting tumor-infiltrating tregs |
| JP7304287B2 (ja) | 2016-12-22 | 2023-07-06 | エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗ｐｄ－ｌ１／ｐｄ１治療の不成功後の、抗ｐｄ－ｌ１抗体との組み合わせでの抗ｃｓｆ－１ｒ抗体を用いた腫瘍の治療 |
| RU2663104C1 (ru) * | 2017-07-13 | 2018-08-01 | Общество с ограниченной ответственностью "Реал Таргет" | Получение пегилированных фрагментов gd2-специфичных антител, индуцирующих прямую клеточную гибель gd2-позитивных опухолевых клеток, и их применение в терапии gd2-позитивных опухолей |
| WO2020223121A1 (en) | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods for treating cancer using combinations of anti-cx3cr1 and immune checkpoint blockade agents |
| WO2020236797A1 (en) * | 2019-05-21 | 2020-11-26 | Novartis Ag | Variant cd58 domains and uses thereof |
| EP4342497A1 (en) | 2021-05-10 | 2024-03-27 | Kawasaki Institute of Industrial Promotion | Antibody having reduced binding affinity for antigen |
| WO2022261183A2 (en) | 2021-06-08 | 2022-12-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for treating and/or identifying an agent for treating intestinal cancers |
| WO2023097119A2 (en) | 2021-11-29 | 2023-06-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions to modulate riok2 |
| WO2023201226A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for universal tumor cell killing |
| WO2024059183A1 (en) | 2022-09-14 | 2024-03-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for modulation of piezo1 in the treatment of cancer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE260880T1 (de) * | 1986-09-11 | 1988-11-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc., Boston, Mass., Us | Verfahren zur ausloesung der zytotoxizitaet. |
| ATE122238T1 (de) * | 1987-06-10 | 1995-05-15 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Bifunktionelle antikörperkonstruktionen und verfahren zur selektiven tötung von zellbeständen. |
| WO1991003493A1 (en) * | 1989-08-29 | 1991-03-21 | The University Of Southampton | Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates |
| EP1362868A3 (en) * | 1991-03-06 | 2004-02-11 | MERCK PATENT GmbH | Humanized and chimeric monoclonal antibodies that bind epidermal growth factor receptor (EGF-R) |
-
1994
- 1994-06-22 UA UA94005274A patent/UA40577C2/uk unknown
- 1994-07-21 DE DE69426743T patent/DE69426743T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-07-21 EP EP94111346A patent/EP0637593B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-21 AT AT94111346T patent/ATE199378T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-07-21 PT PT94111346T patent/PT637593E/pt unknown
- 1994-07-21 ES ES94111346T patent/ES2156587T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-21 DK DK94111346T patent/DK0637593T3/da active
- 1994-07-26 AU AU68698/94A patent/AU683659B2/en not_active Ceased
- 1994-07-26 CZ CZ19941802A patent/CZ291071B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-07-28 HU HU9402220A patent/HU218100B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-07-28 SK SK912-94A patent/SK283133B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-07-29 CA CA002129183A patent/CA2129183C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-01 PL PL94304510A patent/PL176761B1/pl unknown
- 1994-08-01 KR KR1019940018956A patent/KR100347465B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-08-01 RU RU94028282/13A patent/RU2203319C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-08-01 NO NO942850A patent/NO942850L/no unknown
- 1994-08-02 JP JP18156894A patent/JP3822653B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-02 ZA ZA945753A patent/ZA945753B/xx unknown
- 1994-08-02 US US08/284,947 patent/US5798229A/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-05-25 GR GR20010400779T patent/GR3035926T3/el not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-10 JP JP2005232483A patent/JP4231862B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2203319C2 (ru) | 2003-04-27 |
| HU218100B (hu) | 2000-06-28 |
| HU9402220D0 (en) | 1994-10-28 |
| PL304510A1 (en) | 1995-02-06 |
| RU94028282A (ru) | 1996-07-20 |
| PT637593E (pt) | 2001-08-30 |
| EP0637593A1 (en) | 1995-02-08 |
| UA40577C2 (uk) | 2001-08-15 |
| NO942850L (no) | 1995-02-03 |
| ATE199378T1 (de) | 2001-03-15 |
| US5798229A (en) | 1998-08-25 |
| SK91294A3 (en) | 1996-11-06 |
| PL176761B1 (pl) | 1999-07-30 |
| AU6869894A (en) | 1995-02-09 |
| DE69426743D1 (de) | 2001-04-05 |
| JP4231862B2 (ja) | 2009-03-04 |
| CA2129183A1 (en) | 1995-02-03 |
| AU683659B2 (en) | 1997-11-20 |
| ZA945753B (en) | 1995-03-15 |
| JP3822653B2 (ja) | 2006-09-20 |
| CA2129183C (en) | 2006-05-16 |
| JPH0789873A (ja) | 1995-04-04 |
| NO942850D0 (sk) | 1994-08-01 |
| DK0637593T3 (da) | 2001-06-25 |
| DE69426743T2 (de) | 2001-08-16 |
| KR950005327A (ko) | 1995-03-20 |
| GR3035926T3 (en) | 2001-08-31 |
| KR100347465B1 (ko) | 2003-03-03 |
| EP0637593B1 (en) | 2001-02-28 |
| ES2156587T3 (es) | 2001-07-01 |
| CZ180294A3 (en) | 1995-02-15 |
| JP2005336207A (ja) | 2005-12-08 |
| CZ291071B6 (cs) | 2002-12-11 |
| HUT71309A (en) | 1995-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2203319C2 (ru) | Биспецифическая молекула антитела для лизиса опухолевых клеток, способ получения f(ab') 2 фрагмента биспецифической молекулы антитела, моноклональное антитело (варианты), фармацевтический препарат, фармацевтический набор для лизиса опухолевых клеток (варианты), способ лизиса опухолевых клеток ex vivo при аутогенной трансплантации костного мозга | |
| DK1648507T3 (en) | PROCEDURES AND COMPOSITIONS FOR INCREASING THE EFFECTIVENESS OF THERAPEUTIC ANTIBODIES USING COMPOUNDS THAT POTENTATE NK CELLS | |
| AU2008235566B2 (en) | Anti-EpCAM antibody and uses thereof | |
| EP0578774B1 (en) | Monoclonal antibodies to stem cell factor receptors | |
| JP7262597B2 (ja) | 二重特異性抗体及びその作製方法と使用 | |
| US20100150935A1 (en) | Use of an anti-cxcr4 antibody in the treatment of cancer | |
| US11351251B2 (en) | Anti-PD-L1-anti-TIM-3 bispecific antibodies | |
| EP4083211A1 (en) | Anti-cdcp1 antibody | |
| EP4299593A1 (en) | Cldn18.2 antigen-binding protein and use thereof | |
| US20030180799A1 (en) | Antibodies against plasma cells | |
| US20210363252A1 (en) | Compositions comprising a t cell redirection therapeutic and a vla-4 adhesion pathway inhibitor | |
| WO2007010941A1 (ja) | 抗原及びこの抗原を識別するモノクローナル抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20090728 |