CS267393B1 - Mouse lymphocytar hybridoma vu ifn b13 - Google Patents

Description

(57) Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho protilátku voči 1’udskému fibroblastovému interferónu beta, uloženého v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ IFN B13. Monoklonálna protilátka hybridómu VÚ IFN B13 je vhodná na stanovenie přítomnosti interferónu beta na základe inhibície jeho biologickej aktivity v interferón-neutralizačných testoch. Monoklonálna protilátka je vhodná aj na přípravu sér Specifických k myšiemu imunoglobulínu podtriedy IgGl. CS 267393 B1 CS 267 393 Bl 1

Vynález sa týká nového hybridómu, t, j. hybridného jednobunkového organizmu, /ostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovcj linie NSO a myšej slezinovej lymfoidnej buňky, prodiikujiícej protilátku pinii fiidskénui inlerferónu beta.

Doposial’ sa protilátky voči interferónu beta vyrábajú tak, že je interferón opakovanou injikovaný ako antigén pokusným zvieratám, najČastejŠíe králikom alebo ovcíam. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po určitej době pósobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátok, používaných predovšetkým pre kvantitatívnu alebo kvalitatívnu analýzu antigénu — interferónu beta — vo výskume a v imunodiagnostickej praxi. Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekofko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátok, ktorých spektrum je v každom jednotlivom organizme rózne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potřebné zo sér odstraňoval vysycovaním. Výrobně šarže konvenčných sér sa preto dajú ťažko štandardizovať a bývajú v širokom rozmedzí kvality. Pre výrobu každej šarže třeba pripravíť čistý imunizačný antigén a ďalšie antigény na vysýtenie balastných protilátok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a doposial používaného postupu odpadnu, ak je k dispozícii hybridóm, produkujúci monoklonálnu protilátku proti fudskému interferónu beta uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VÚ IFN B13.

Uvedený hybridóm bol získaný spósobom známým z odbornej literatúry (Kóhler, C., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nátuře, 256, /1975/, 495; Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses. R. H. Kennt, T. J. McKearn, Κ. B. Bechtol, eds., New York, Plenům Press, /1980/, 370) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovej linie NSO a buniek, získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných preparátom 1’udského fibroblastového interferónu beta. Výhodou hybridómu je, že produkuje homo-

Claims (1)

1. PREDMET VY Myší lymfocytárny hybridóm VÚIFNB13 produkujúci monoklonálnu protilátku podtrie- 2 génnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovať s interferónom beta. Hybridóm VÚ1FNB13 možno kultivoval in vitro v médiách vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myší kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájil produkciu protilátky bez ďalšej imunizácie antigénom. Příklad Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5 χ 10® buniek do peritoneálnej dutiny myší. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dní před prenosom buniek hybridómu premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Celkom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny, ktorá obsahovala 8 mg/ml imunoglobulínu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VÚ IFN B13 Specificky inhibovala antivírusovú a antiproliferatívnu aktivitu 1’udského interferónu beta. In vitro rastů hybridómy ako polosuspenzná kultúra. Majú tvar (gulatý) a vefkosť charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploidné. Buňky hybridómu VÚ IFN B13 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco, R. a Freeman, G., Virology 8 /1959/, 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným koňským sérom (10%, Elán cloně, Bratislava). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C — jeho středná generačná doba je přibližné 24 hod. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgGl. Hybridóm VÚ IFN B13 móže byť priemyslovo využívaný ako zdroj protilátky proti ťudskému fibroblastovému interferónu beta pri kvantitatívnom alebo kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti interferónu beta vo vyšetrovanom materiáli alebo ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgGl) pre přípravu sér Specifických pre uvedenú podtriedu. NÁLEZU dy IgGl proti fudskému interferónu beta.