CS241506B2 - Sensitized agent in form of particles for immunological reactions - Google Patents
Sensitized agent in form of particles for immunological reactions Download PDFInfo
- Publication number
- CS241506B2 CS241506B2 CS823120A CS312082A CS241506B2 CS 241506 B2 CS241506 B2 CS 241506B2 CS 823120 A CS823120 A CS 823120A CS 312082 A CS312082 A CS 312082A CS 241506 B2 CS241506 B2 CS 241506B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- sensitized
- antibody
- particles
- buffer
- reagent
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims description 34
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 title abstract description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 27
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 16
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 15
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 5
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- -1 pollen Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[3,3-diamino-1,2,2-tris(carboxymethyl)cyclohexyl]acetic acid Chemical compound NC1(N)CCCC(CC(O)=O)(CC(O)=O)C1(CC(O)=O)CC(O)=O RNMCCPMYXUKHAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229920003048 styrene butadiene rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Conductive Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Silicon Compounds (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
Description
Vynález se týká senzitizovaného činidla ve formě částic pro imunologické reakce.
V posledních letech je velmi důležité prokázat v lékařství, biochemii, hygieně a epidemiologii látky, které se vyskytují pouze ve stopách, zejména antigeny a protilátky.
Dříve se к těmto účelům užívala převážně reakce antigenu nebo protilátky s částicemi latexu, které byly senzitizovány příslušnou protilátkou nebo antigenem na skleněné destičce a pak se pozoroval stupeň shlukování.
Tímto způsobem je však velmi obtížné provést přesné stanovení.
V poslední době byla navrhována modifikace tohoto systému pro antigeny a protilátky při použití senzitizovaných částic latexu tak, že stupeň poklesu zákalu supernatantu latexu po proběhnutí reakce je možno měřit opticky, takže se využívá skutečnosti, že při reakci antigenu nebo protilátky se senzitizovaným latexem dochází ke shlukování částic latexu, jak bylo popsáno například v publikacích Croatia Chemica Acta, sv. 42, str. 457 až 466 (1970), Jugoslavia, Europan Journal of Biochemistry, sv. 20, č. 4, str. 558 až 560 (1971), Germany and Immunochemistry, sv. 12, str. 349 až 351 (1975), U.K. I při takto modifikované metodě se nedosahuje uspokojivých výsledků, zejména pokud jde o přesnost a schopnost reprodukce, takže nová modifikace nebyla uvedena do praxe.
V US-patentovém spisu č. 3 088 875 jsou navrhovány imunologické diagnostické materiály s obsahem částic polystyrolového latexu o středním průměru 0,15 až 0,25 mikrometrů. Prostředek nemá vlastnosti, které by zajišťovaly přesnou reprodukovatelnost a uvedený patentový spis také nikde neuvádí elektrickou vodivost diagnostického materiálu.
US-patentový spis č. 3 658 982 navrhuje stabilní latexové činidlo ke zjišťování theumatoidní arthritidy s latexovými částicemi s vrstvou králičího gamma-globulinu, předem zpracovaného působením papainu, trypsinu nebo chymotrypsinu. Ani tento prostředek nezajišťuje dobrou reprodukovatelnost získaných výsledků, ve spisu se nikde neuvádí vodivost činidla.
Bylo také navrhováno provádět stanovení při použití světla o specifické vlnové délce při použití nosiče, který měl určitý průměr částic, například v US patentu č. 4 118 192.
Dosud známá činidla pro stanovení antigenu a protilátky, která sestávají z jemných částic, senzitizovaných příslušným antigenem nebo protilátkou mají společnou nevýhodu, že dispergovatelnost takto senzitizovaných částic se může tak zhoršit, že tyto částice podlehnou nespecifickým aglutinačním reakcím a jejich citlivost a imunoreaktivita se může v průběhu skladování do značné míry měnit, což má opět za následek nepřesnost u omezené možnosti stanovení.
Vynález si klade za úkol vyvinout senziti zované činidlo ve formě částic pro imunologické reakce tak, aby toto činidlo bylo prosté uvedených nevýhod, přičemž bylo zjištěno, že kritické je právě prostředí, v němž jsou senzitizované částice dispergovány.
Předmětem vynálezu je tedy senzitizované činidlo ve formě částic pro imunologické reakce, vyznačující se tím, že sestává z nosičů ve formě částic se středním průměrem 0,05 až 1,2 μΐη suspendovaných ve vodném prostředí s elektrickou vodivostí 5,0 mS/cm až 0,5 mS/cm, s výhodou 2,5 až 5,0 mS/cm, přičemž částice nosiče jsou senzitizovány antigenem nebo protilátkou.
Nosič ve formě částic, který tvoří součást činidla podle vynálezu, je obvykle v podstatě nerozpustný ve vodném prostředí. Tímto nosičem může být jakýkoliv vhodný materiál, například latexy polymerních materiálů jako polystyren, kopolymery styrenu a butadienu, polyakryláty, polymethakryláty, kopolymery akrylonitrilu, butadienu a styrenu, latexy těchto polymerů, aktivované včleněním karboxylové nebo amidové skupiny kopolymerací s kyselinou akrylovou, kyselinou methakrylovou, akrylamidem a podobně, krevní buňky, bakterie, například Staphylococci a Streptococci, Serratia mercescens nebo Rickettsia, jakož i fragmenty těchto bakterií.
Střední průměr částic těchto nosičů se pohybuje obvykle v rozmezí 0,05 až 1,2, s výhodou 0,1 až 1,0, zvláště 0,2 až 0,8 μΐη. V případě, že průměr částic nosiče je příliš velký, snižuje se rozsah možnosti stanovení nebo je nosič nestálý. Na druhé straně nosiče s menším průměrem mají za následek nehospodárnost při výrobě reakčního činidla a není snadné dosáhnout při jejich použití zlepšené citlivosti. Je tedy zřejmé, že není výhodné užít nosičů s většími nebo menšími částicemi.
Antigeny, které mohou být naneseny na uvedený nosič jsou například bílkoviny, polypeptidy, steroidy, polysacharidy, tukové látky, pyly, prachy, hapteny a podobně. Protilátky zahrnují například bílkoviny, které jsou produkovány při reakci se svrchu uvedenými antigeny.
Koncentrace nosiče ve formě částic se obvykle pohybuje v rozmezí 0,03 až 0,3, s výhodou 0,05 až 0,02 %. Při vyšší koncentraci nosiče je zapotřebí užít komplikovanějšího zařízení ke stanovení, takže se nedosáhne žádné další výhody. Na druhé straně při použití nižší koncentrace není snadné dosáhnout uspokojivé citlivosti a reaktivity.
Nosič ve formě částic je možno senzitizovat působením antigenu nebo protilátky jakýmkoliv známým způsobem, například fyzikální adsorpcí antigenu nebo protilátky na nosič ve formě částic, chemickou vazbou mezi antigenem nebo protilátkou a částicovým nosičem nebo kombinací těchto způsobů.
Množství antigenu nebo protilátky, které se užije к senzitizaci nosiče se stanoví v zá241506 vislosti na různých faktorech, například na typu určitého antigenu nebo protilátky a na požadované přesnosti stanovení.
Nosič ve formě částic, senzitizovaný antigenem nebo protilátkou je možno dále stabilizovat použitím vhodného stabilizátoru před uvedením v suspenzi ve vodném prostředí.
Vhodným stabilizátorem pro toto použití jsou aminokyseliny, polypeptidy, bílkoviny a podobně, musí jít o látky, které se neúčastní předpokládané imunologické reakce, nejvýhodněji je sérový albumin. Stabilizátor se užije známým způsobem, dbá se zejména na možnost skladování a stabilitu reakce. Zvláště vhodného účinku se dosahuje v případě, že antigen nebo protilátka jsou fyzikálně adsorbovány na nosiči.
Vodné prostředí, v němž se nacházejí ' senzitízované částice nosiče musí mít elektrickou vodivost 5,0 mS/cm nebo nižší s výhodou 2,5, zvláště 1,0 mS/cm nebo nižší. Při vyšší vodivosti je reakční činidlo nestálé, což snižuje přesnost stanovení.
Vodným prostředím může být voda, roztok pufru a podobně, tento roztok může obsahovat ještě další přísady, jako stabilizátory, konzervační látky, chelatační látky, smáčedla a podobně. Z pufrů jsou vhodné pufr s glycinem, s kyselinou fosforečnou, s kyselinou citrónovou, barbitalový pufr, boritanový pufr, pufr s trisjhydroxymethyl jaminomethanem a kyselinou chlorovodíkovou, tris-malátový pufr, pufr s amoniakem a podobně.
Svrchu uvedené stabilizátory jsou obvykle přítomny v koncentraci 0,001 až 1, s výhodou 0,05 až 0,6 %.
Konzervačním činidlem může být zejména azid sodíku a merthiolát.
Chelatačním činidlem může být kyselina ethylendiamintetraoctová, nitrilotrioctová, cyklohexandiamintetraoctová a podobně.
Ze smáčedel jsou vhodná zejména smáčedla neiontového typu.
Vodné prostředí má obvykle pH 5 až 10, s výhodou 6 až 9,5, zejména 6,5 až 8,5. V případě, že vodné prostředí má pH nižší než 5, reakční činidlo je nestálé, přestože citlivost se zvýší. Při použití vodného prostředí o pH vyšším než 10 klesá citlivost a v některých případech i skladovatelnost reakčního činidla.
Nosič ve formě částic, senzitizovaný antigenem nebo protilátkou se obvykle uvádí v suspenzi ve vodném prostředí v koncentraci 0,01 až 20, s výhodou 0,05 až 10 %. Při nižší koncentraci má výsledné činidlo sníženou stabilitu a jeho použití je omezeno, při vyšší koncentraci stabilita rovněž klesá.
Reakční činidlo podle vynálezu je možno připravit například způsobem, . popsaným v následujících příkladech tak, že se částice nosiče senzitlzují antigenem nebo protilátkou známým způsobem a v případě potřeby se uvedou ve styk se stabilizátorem, načež se nosič uvede v suspenzi ve vodném prostředí známým způsobem.
Reakční činidlo podle vynálezu je možno přímo užít nebo je zásobním roztokem pro metody, prováděné na podložním sklíčku nebo ve zkumavce, výsledek je možno odečítat pouhým okem nebo měřit opticky.
Reakční činidlo je vhodné k imunologickým reakcím svrchu uvedeného typu.
V případě potřeby se nejprve reakční činidlo podle vynálezu zředí roztokem pufru k úpravě koncentrace nosiče tak, aby to odpovídalo požadavkům předpokládané imunologické reakce. Vhodná koncentrace závisí na různých faktorech jako je antigen nebo protilátka, koncentrace těchto látek a jejich reaktivita. Tyto závislosti je možno stanovit pokusem. Obecně je možno uvést, že v případě optického měření imunologické reakce je výhodné udržovat konečnou koncentraci nosiče na hodnotě alespoň 0,03, s výhodou 0,05 až 1, zvláště 0,1 až 0,5 hmotnostních %. V případě pozorování pouhým okem je konečná koncentrace 0,05 až 0,8, s výhodou 0,1 až 0,5 hmotnostních %.
Použitým pufrem pro ředění může být pufr s glycinem, s boritanem, tris-pufr s kyselinou chlorovodíkovou nebo malátem, amoniakový pufr a podobně.
Použitý pufr má obvykle rozmezí pH 7,6 až 9,6, s výhodou 8,0 až 9,0. Pufr s nižším pH může způsobit aglutinaci a nestálost reakčního činidla, přestože citlivost je zvýšena.
Při vyšším pH se citlivost snižuje a mohou se také nepříznivě měnit vlastnosti při skladování, zejména při vyšší teplotě.
V případě, že výsledek imunologické reakce má být pozorován pouhým okem, smísí se předem stanovené množství reakčního činidla a vzorku s obsahem antigenu nebo protilátky na podložním sklíčku nebo ve zkumavce a pozoruje se aglutinace senzitizovaných částic.
V případě, že se imunologická reakce měří opticky, smísí se reakční činidlo a vzorek s obsahem antigenu nebo protilátky a měří se změna v prostupnosti světla nebo zákal.
V případě, že se opticky měří prostupnost světla, užije se obvykle světla s větší vlnovou délkou, než je střední průměr částic nosiče, užije se faktoru alespoň 1,1, s výhodou
1,5 a zvláště alespoň. 2. Vlnová délka se proto pohybuje obvykle v oblasti 600 až 2 400 nm, s výhodou 800 až 1 . 800 nm. V případě, že se použije světla s nižší vlnovou délkou, je pro získání dobrých výsledků zapotřebí použít nosiče v dostatečně nízké koncentraci spolu s reakčním činidlem s velmi dobrou dispergovatelností, takže v některých případech je velmi nesnadné dosáhnout dostatečně citlivosti a někdy dojde k porušení celé reakce. Při použití světla s vyšší vlnovou délkou klesá citlivost.
Ke stanovení je možno užít monochromatického nebo polychromatického světla.
Buňka, použitá ke stanovení změn propustnosti má obvykle tloušťku 0,2 až 10 mm.
Měření propustnosti je možno provádět tak, že se měří čas, který uplyne do dosažení předem stanovené hodnoty absorbance nebo tak, že se stanoví vzestup absorbance ve stanoveném časovém úseku.
Reakčním činidlem podle vynálezu jsou senzitizované částice a při jejich použití je možno stanovit množství antigenu nebo protilátky v různých vzorcích s dobrou reprodukovatelností a vysokou přesností. Mimoto je činidlo účinné i po zmrazení a rozmražení a je proto možno je lyofilizovat a znovu užít.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
Globulinová protilátka proti a-fetoproteinu se rozpustí v 0,1 M glycinovém pufru o pH 8,8. Množství molekul protilátky globulinového typu je ekvivalentní 800 až 1 500 na každou částici latexu o průměru 0,220 μΐη (Dow Chemical). Roztok se pak smísí se stejným objemem pufru s latexem a glycinem o pH 8,8 při teplotě místnosti za stálého míchání tak, aby došlo к požadované senzitizaci. Po oddělení odstředěním se supernatant odstraní a sraženina se uvede ve styk s příslušným množstvím sérového albuminu Skotu. Takto získané senzitizované částice se uvedou v suspenzi v roztoku pufru s elektrickou vodivostí 1,5 mS/cm a s obsahem vhodného množství konzervační látky a získaná suspenze se skladuje. Takto získané reakční činidlo má velmi dobrou přesnost stanovení.
Reakční činidlo se ředí a používá к provádění imunologických reakcí.
Reakční činidlo se zředí glycinovým pufrem o pH 8,6. V následujících tabulkách 1 a 2 jsou uvedeny výsledky při opakovaném stanovení a mimoto výsledky, získané s činidlem, které bylo určitou dobu skladováno.
Tabulka 1
Výsledky při opakovaném stanovení
| Číslo opakování | 1 (45,0)· |
| 1 | 45,2 |
| 2 | 41,3 |
| 3 | 42,0 |
| 4 | 44,5 |
| 5 | 44,6 |
| 6 | 43,6 |
| 7 | 42,5 |
| 8 | 42,0 |
| 9 | 38,9 |
| 10 | 38,6 |
| 11 | 40,2 |
| 12 | 39,7 |
| Průměr | 41,9 |
| Standardní odchylka | 2,26 |
| Koeficient variace | 5,4 % |
Vzorek séra ng/ml
| 2 (195,6) | 3 (950,0) |
| 189,2 | 906,2 |
| 190,5 | 917,5 |
| 195,8 | 887,5 |
| 181,1 | 901,3 |
| 190,5 | 906,3 |
| 189,7 | 937,1 |
| 190,1 | 885,0 |
| 184,5 | 918,0 |
| 180,5 | 913,5 |
| 184,2 | 925,3 |
| 185,6 | 921,0 |
| 190,1 | 887,2 |
| 187,7 | 908,8 |
| 4,49 | 16,4 |
| 2,4 % | 1,8 % |
* Hodnoty v závorkách jsou výsledky radioimunologického stanovení
Tabulka 2
Stanovení v průběhu delšího období
| Číslo | Měsíc/ den 1980 | 1 | Vzorek séra ng/ml 2 | 3 |
| 1 | 2/4 | 55,3 | 153,0 | 530,6 |
| 2 | 2/7 | 49,2 | 145,8 | 517,6 |
| 3 | 3/5 | 54,3 | 154,1 | 542,9 |
| 4 | 3/27 | 45,5 | 149,0 | 464,3 |
| 5 | 4/10 | 47,5 | 146,0 | 483,3 |
| 6 | 5/7 | 48,5 | 151,0 | 500,8 |
| 7 | 5/14 | 47,8 | 148,3 | 478,3 |
| 8 | 5/21 | 51,8 | 138,2 | 507,3 |
| 9 | 6/10 | 50,3 | 159,7 | 512,8 |
| 10 | 6/25 | 52,1 | 156,3 | 521,3 |
| Průměr | 50,2 | 150,1 | 505,9 | |
| Standardní odchylka | 3,13 | 6,12 | 24,5 | |
| Koeficient variace (%) | 6,2 | 4,1 | 4,9 |
Příklad 2
Protilátka proti CRP (C-reaktivní bílkovina) se rozpustí v 0,2 M boritanovém pufru o pH 8,8 a částice latexu o průměru 0,220 μΐη (Dow Chemical) se výsledným roztokem senzitizují tak, že každá částice nese 800 až 1 800 molekul antigenu. Senzitizované částice latexu se pak uvedou ve styk se sérovým albuminem skotu a dispergují se v příslušném množství boritanového pufru o vodivosti 4,0 mS/cm. Výsledné reakční činidlo zajišťuje velkou přesnost měření.
Přiklad 3
Králičí nebo kozí protilátka proti lidskému fibrinogenu [F(ab4)2j se rozpustí v 0,1 M tris-pufru s malátem o pH 8,6 a částice latexu o průměru 0,220 μΐη (Dow Chemical) se uvedou v suspenzi v témž pufru a jsou takto senzitizovány, citlivost výsledného reakčního činidla je řádu 100 ng/ml. Částice se pak uvedou ve styk se sérovým albuminem skotu a uvedou v suspenzi ve vodném roztoku s obsahem 0,1 % azidu sodíku, vodivost je 1,0 mS/cm. Při použití se reakční činidlo ředí tris-pufrem s malátem o pH 8,4 nebo s kyselinou chlorovodíkovou o pH 8,4 na požadovanou koncentraci latexu a reakce se provádí na podložním sklíčku nebo je možno provádět optické měření bez ředění reakčního činidla. Při reakci na podložním sklíčku je možno při použití tohoto reakčního činidla snadno odlišit, zda došlo nebo nedošlo к aglutinaci.
Příklad 4
Kozí protilátka globulinového typu proti lidskému IgG se rozpustí v 0,1 M tris-pufru s malátem o pH 8,8 a tímto roztokem se senzitizují částice latexu o průměru 0,312 ^m (Dow Chemical), suspendované v tomtéž pufru. Senzitizované částice se pak uvedou ve styk se sérovým albuminem skotu a nakonec se uvedou v suspenzi ve vodném roztoku s vodivostí 3,0 mS/cm. Při použití se suspenze ředí 0,1 M tri-pufru s malátem nebo kyselinou chlorovodíkovou na požadovanou koncentraci nebo se suspenze užívá bez dalšího ředění.
Příklad 5
Králičí protilátka F (ab‘)2 proti lidskému IgA se rozpustí v 0,2 M boritanovém pufru o pH 8,3 a roztok sez pracovává stejně jako v příkladu 4 za vzniku požadovaného reakčního činidla s tím rozdílem, že vodný roztok, užitý ke konečnému ředění má vodivost 0,5 až 0,8 mS/cm.
Příklad 6
Částice latexu se senzitizují vysoce čištěnou králičí protilátkou proti lidskému IgM v glycinovém pufru o pH 9,6. Kvantitativní vztahy se mění v závislosti na kvalitě protilátky a na požadované citlivosti. Pak se senzitizované částice uvedou ve styk s příslušným množstvím sérového albuminu skotu, načež se uvedou v suspenzi ve vodném roztoku s vodivostí 1,2 mS/cm, který popřípadě obsahuje přibližně 0,05 % sérového albuminu skotu, čímž se získá výsledné reakční činidlo.
Příklad 7
Vysoce čištěná králičí protilátka F (ab‘)2 proti lidskému CG se rozpustí v 0,2 M tris-pufru s kyselinou chlorovodíkovou o pH 8,6 a výsledný roztok se užije к senzitizaci částic latexu o průměru 0,220 μΐη (Dow Chemical) v suspenzi v tomtéž pufru při teplotě místnosti. Pak se částice uvedou ve styk s příslušným množstvím sérového albuminu skotu a pak se senzitizované částice uvedou
....... ..... 241 v -suspenzi ve vodném roztoku s vodivostí 0,8 mS/cm a . výsledné činidlo se skladuje.
Vynález byl popsán v souvislosti s několika konkrétními provedeními, je však zcela
Claims (1)
- PŘEDMĚTSenzitizované činidlo ve formě částic pro imunologické . reakce, vyznačující se tím, že sestává z nosičů ve formě částic se středním průměrem 0,05 až 1,2 μΐη, suspendovaných0 6 zřejmé, že je možno provést ještě celou řadu změn a modifikací, které budou stále spadat do oboru vynálezu.ynAlezu ve vodném prostředí s elektrickou vodivostí 5,0 mS/cm až 0,5 mS/cm, například 2,5 až 0,5 mS/cm, přičemž částice nosiče jsou senzitizovány antigenem nebo protilátkou.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56067332A JPS57182168A (en) | 1981-05-02 | 1981-05-02 | Immunochemical reagent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS312082A2 CS312082A2 (en) | 1985-08-15 |
| CS241506B2 true CS241506B2 (en) | 1986-03-13 |
Family
ID=13341952
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS823120A CS241506B2 (en) | 1981-05-02 | 1982-04-30 | Sensitized agent in form of particles for immunological reactions |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0064275B1 (cs) |
| JP (1) | JPS57182168A (cs) |
| KR (1) | KR900002347B1 (cs) |
| AT (1) | ATE15107T1 (cs) |
| AU (1) | AU550925B2 (cs) |
| CA (1) | CA1186222A (cs) |
| CS (1) | CS241506B2 (cs) |
| DD (1) | DD204313A5 (cs) |
| DE (1) | DE3265562D1 (cs) |
| DK (1) | DK157109C (cs) |
| ES (1) | ES8401260A1 (cs) |
| HU (1) | HU186928B (cs) |
| IL (1) | IL65648A0 (cs) |
| NO (1) | NO159964C (cs) |
| PT (1) | PT74834B (cs) |
| SU (1) | SU1431662A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA822727B (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183369A (ja) * | 1983-04-01 | 1984-10-18 | Kazue Ueno | ラテツクス試薬 |
| JPS6035263A (ja) * | 1983-08-05 | 1985-02-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬 |
| US4713350A (en) * | 1983-10-24 | 1987-12-15 | Technicon Instruments Corporation | Hydrophilic assay reagent containing one member of specific binding pair |
| FR2589239B1 (fr) * | 1985-10-24 | 1989-10-20 | Cottingham Hugh | Chambre de reaction agglutinographique |
| EP0280559B1 (en) * | 1987-02-27 | 1993-10-20 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution |
| RU2298798C1 (ru) * | 2006-01-17 | 2007-05-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Биочип-Аналитика" (ООО "Биочип-Аналитика") | Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система для его осуществления |
| JP4486059B2 (ja) * | 2006-05-25 | 2010-06-23 | デンカ生研株式会社 | 免疫測定用ラテックス組成物 |
| ES2440326T3 (es) * | 2009-03-05 | 2014-01-28 | Denka Seiken Co., Ltd. | Kit de reactivo de ensayo y uso en un procedimiento para medir un analito en una muestra de ensayo |
| EP2791675B1 (en) * | 2011-12-13 | 2018-04-25 | Baxalta GmbH | Measurement of autoantibodies in low conductivity conditions |
| CN112352161B (zh) * | 2018-07-13 | 2024-07-09 | 美国西门子医学诊断股份有限公司 | 用于检测由免疫测定试剂的不完全分散引起的异常结果的方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1362776A (en) * | 1970-07-17 | 1974-08-07 | Wellcome Found | Immunological reagent |
| US3857931A (en) * | 1971-02-01 | 1974-12-31 | Hoffmann La Roche | Latex polymer reagents for diagnostic tests |
| JPS5811575B2 (ja) * | 1976-08-16 | 1983-03-03 | 帝国臓器製薬株式会社 | 抗原−抗体反応の測定法 |
| US4092114A (en) * | 1976-10-20 | 1978-05-30 | Fisher Scientific Company | Indirect latex test for determination of immunoglobulins |
| IT1087285B (it) * | 1976-11-10 | 1985-06-04 | Hoffmann La Roche | Procedimento di determinazione immunologico |
| FR2399448A1 (fr) * | 1977-08-03 | 1979-03-02 | Rhone Poulenc Ind | Latex de polymeres vinyliques stables aux electrolytes |
| EP0001223A3 (en) * | 1977-09-19 | 1979-12-12 | F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft | Latex coated with a polyhydroxy compound, process for the preparation of this latex, immunological reagent containing this latex, process for the preparation of this reagent, application of this reagent, testing procedure utilising this reagent and reagent kit containing this reagent |
| GB2013211B (en) * | 1978-01-26 | 1982-06-30 | Technicon Instr | Immunoassays using f(ab')2 fragments |
| GB2027031A (en) * | 1978-08-02 | 1980-02-13 | Hoffmann La Roche | Diagnostic Reagent Comprising a Proteinaceous Material Bonded to a Latex |
-
1981
- 1981-05-02 JP JP56067332A patent/JPS57182168A/ja active Granted
-
1982
- 1982-04-19 AU AU82824/82A patent/AU550925B2/en not_active Expired
- 1982-04-21 ZA ZA822727A patent/ZA822727B/xx unknown
- 1982-04-28 DE DE8282103640T patent/DE3265562D1/de not_active Expired
- 1982-04-28 EP EP82103640A patent/EP0064275B1/en not_active Expired
- 1982-04-28 DK DK190582A patent/DK157109C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-04-28 AT AT82103640T patent/ATE15107T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-04-29 ES ES511798A patent/ES8401260A1/es not_active Expired
- 1982-04-29 IL IL65648A patent/IL65648A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 HU HU821360A patent/HU186928B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 DD DD82239479A patent/DD204313A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-04-30 NO NO821448A patent/NO159964C/no unknown
- 1982-04-30 KR KR8201912A patent/KR900002347B1/ko not_active Expired
- 1982-04-30 CS CS823120A patent/CS241506B2/cs unknown
- 1982-04-30 PT PT74834A patent/PT74834B/pt not_active IP Right Cessation
- 1982-05-03 SU SU823430146A patent/SU1431662A3/ru active
- 1982-05-03 CA CA000402148A patent/CA1186222A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU550925B2 (en) | 1986-04-10 |
| NO159964C (no) | 1989-02-22 |
| DD204313A5 (de) | 1983-11-23 |
| NO821448L (no) | 1982-11-03 |
| EP0064275B1 (en) | 1985-08-21 |
| IL65648A0 (en) | 1982-07-30 |
| DK157109B (da) | 1989-11-06 |
| EP0064275A1 (en) | 1982-11-10 |
| ZA822727B (en) | 1983-11-30 |
| CA1186222A (en) | 1985-04-30 |
| NO159964B (no) | 1988-11-14 |
| PT74834B (en) | 1983-10-28 |
| CS312082A2 (en) | 1985-08-15 |
| JPS57182168A (en) | 1982-11-09 |
| DK190582A (da) | 1982-11-03 |
| ES511798A0 (es) | 1983-12-01 |
| PT74834A (en) | 1982-05-01 |
| HU186928B (en) | 1985-10-28 |
| JPS6367865B2 (cs) | 1988-12-27 |
| ATE15107T1 (de) | 1985-09-15 |
| KR830010385A (ko) | 1983-12-30 |
| DK157109C (da) | 1990-04-09 |
| KR900002347B1 (ko) | 1990-04-12 |
| AU8282482A (en) | 1982-11-11 |
| DE3265562D1 (en) | 1985-09-26 |
| SU1431662A3 (ru) | 1988-10-15 |
| ES8401260A1 (es) | 1983-12-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4397960A (en) | Immunoassays using F(AB')2 fragments | |
| EP0074520B1 (en) | Method and kit for pregnancy detection | |
| US4205954A (en) | Kinetic latex agglutinometry | |
| US4672045A (en) | Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent thereof | |
| JPS60259964A (ja) | 分析試料中の免疫学的に活性な物質の定量法 | |
| CS241506B2 (en) | Sensitized agent in form of particles for immunological reactions | |
| JPH0616044B2 (ja) | 免疫学的ラテツクス凝集法 | |
| US4052504A (en) | Assay for thyroxine binding globulin | |
| JP2553852B2 (ja) | サンプル中の生物学的物質の免疫学的測定法 | |
| CA2520631C (en) | Turbidimetric immunoassay for lipoprotein(a) and reagent therefor | |
| JPH026023B2 (cs) | ||
| JPH02257063A (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定法 | |
| JPH0712818A (ja) | 免疫学的検出方法 | |
| JPH05281229A (ja) | 免疫複合体存在下の抗原または抗体の測定方法 | |
| JPH0261561A (ja) | 免疫反応の測定方法 | |
| AU667700B2 (en) | Method for determining rheumatoid factors and agents for carrying out the method | |
| JPS59187264A (ja) | 抗原−抗体反応速度の測定法 | |
| JPS61296270A (ja) | 免疫学的反応用試薬 | |
| JPH0762683B2 (ja) | 安定なラテックス試薬 | |
| JPH09304386A (ja) | 免疫診断薬の製造方法および得られた免疫診断薬 | |
| AU619179B2 (en) | Method for the quantitative determination of serum proteins in body fluids and agents for carrying out the process | |
| JP3041382B2 (ja) | 免疫学的測定法 | |
| WO2024038863A1 (ja) | 免疫分析方法及び試薬 | |
| JP3246978B2 (ja) | 抗原または抗体測定用試薬の製造方法 | |
| JPH0560757A (ja) | 抗原の定量法及び抗原定量用免疫試薬 |