DK157109B - Immunokemisk reagens - Google Patents

Immunokemisk reagens Download PDF

Info

Publication number
DK157109B
DK157109B DK190582A DK190582A DK157109B DK 157109 B DK157109 B DK 157109B DK 190582 A DK190582 A DK 190582A DK 190582 A DK190582 A DK 190582A DK 157109 B DK157109 B DK 157109B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
reagent
antibody
antigen
sensitized
particles
Prior art date
Application number
DK190582A
Other languages
English (en)
Other versions
DK157109C (da
DK190582A (da
Inventor
Satoshi Tsutsui
Tadamitsu Sudo
Michio Ito
Original Assignee
Mitsubishi Chem Ind
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=13341952&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK157109(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Mitsubishi Chem Ind filed Critical Mitsubishi Chem Ind
Publication of DK190582A publication Critical patent/DK190582A/da
Publication of DK157109B publication Critical patent/DK157109B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK157109C publication Critical patent/DK157109C/da

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Conductive Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Silicon Compounds (AREA)

Description

DK 157109 B
Den foreliggende opfindelse angâr et innnunokemisk reagens.
Analyse af sporstoffer, især antigener og antistoffer, er for nylig blevet et meget vigtigt emne inden for forskellige omrâder sâsora lægevidenskab, biokemi, sundhedslære og epidemiologi.
5 Kendte fremgangsmâder, der i vidt omfang er blevet anvendt til dette formai, omfatter omsætning af et antigen eller antistof med latex-partikler, der er gjort falsomme med det pâgældende antistof eller antigen, pâ en glasplade og visuel iagttagelse af agglutinerings-graden (se fx GB 1.346.862, US 3.912.805, US 4.092.114).
10 GB 1.346.862 omhandler serologisk inerte latexpolymerer med en gen-nemsnitlig partikelstarrelse i omrâdet 0,01-0,9 μπι og med en vægt-fylde pâ omkring 1,0, til hvilke det serologisk bestemmende materiale kobles med en kovalent binding ved dannelse af en amidbinding. Denne metode kan benyttes til binding af fx polysaccharider, intakte pro-15 teinmolekyler og peptider.
US 3.912.805 omhandler et biologisk reagens indeholdende en oplosning af inerte partikler, der er gjort falsomme med antistoffer mod humane fibrinogennedbrydningsprodukter, hvilket reagens kan benyttes i et direkte agglutinations-assay for humane fibrinogen-nedbrydningspro-20 dukter.
US 4.092.114 omhandler en indirekte test til kvalitativ og kvanti-tativ bestemmelse af immunoglobulineme G, A eller M i humane legems-væsker ved at benytte immunoglobulineme (IgG, IgA og IgM), kemisk koblet til latexbærerpartikler, som reagens. Ved at benytte en række 25 af fortyndinger af en patients sérum er det muligt at bestemme mæng-den af immunoglobulin i sérum ved at sammenligne agglutinationsresul-taterne med de resultater, der er opnâet med en referencestandard.
Med disse fremgangsmâder er det imidlertid vanskeligt at udfore analysen med stor najagtighed.
30 Det er for nylig som en modifikation af det ovennævnte kendte analy-sesystem til antigener og antistoffer, der anvender sensitiserede
DK 157109 B
2 latexpartikler, blevet foreslàet, at hastigheden af turbiditetsned-gangen af supematanten af latexet efter reaktionen kan mâles optisk, hvorved analysen udfares under udnyttelse af det fænomen, at reaktionen af et antigen- eller antistof sensitiseret latex med et anti-5 stof eller antigen forârsager agglutinering af latexpartiklerne (fx Croatia Chemica Acta, bind 42, side 457-466 (1970), Jugoslavien;
Européen Journal of Biochemistry, bind 20, nr. 4, side 558-560 (1971), Tyskland; Immunochemistry, bind 12, side 349-351 (1975), Storbritannien og GB 2.013.211).
10 GB 2.013.211 omhandler problemet med interferens med andre proteiner end det, der anskes bestemt, nâr disse andre proteiner [fx rheumatoid faktor (RF) og (Clq, en komplement komponent)] er til stede i det undersegte sérum. Patentansogningen beskriver en metode, i hvilken F(ab^- ) 2 - fragmenterne af immunoglobulin benyttes i stedet for hele 15 immunoglobulinmolekylerne.
Selv sâdanne modificerede metoder giver imidlertid ikke tilfreds-stillende resultater, hvad angâr naj agtighed og reproducerbarhed, og de er endnu ikke blevet anvendt i praksis.
Det er ogsâ blevet foreslàet, at analysen udfares med lys af en spe-20 cifik balgelængde under anvendelse af bærerpartikler med en specifik partikeldiameter (fx USA patentskrift nr. 4.118.192).
US 4.118.192 omhandler sâledes en metode til kvantitativ bestemmelse af antigener og antistoffer ved at reagere uoplaselige bærerpartikler, der er gjort falsomme med antistof eller antigen, med et til-25 svarende antigen eller antistof eller en blanding deraf i en prave og bestraie reaktionsblandingen med lys af en specifik balgelængde, i starrelsesordenen 0,6-2,4 pm, for at bestemme absorbansen i reaktionsblandingen .
Kendte reagenser til analyse af et antigen eller antistof med stor 30 falsomhed, hvilke reagenser omfatter fine partikler, der er gjort falsomme med vedkommende antistof eller antigen, har imidlertid de ulemper til fælles, at de sensitiserede partiklers dispergerbarhed kan nedsættes i en sâdan grad, at de er tilbajelige til ikke-speci- 3
DK 157109 B
fikke agglutineringsreaktioner, og at deres folsomhed og immunoreak-tivitet kan variere kraftigt under lagring, hvilket resulterer i en væsentlig forringelse af bestemmelsesgrænsen og -nejagtighed.
Der er blevet foretaget undersegelser ined det formâl at udvikle sen-5 sitiserede partikelformige reagenser til iimmmologiske reaktioner, som er fri for de ovennævnte ulemper, og det har vist sig, at det medium, hvori de sensitiserede partikler er dispergeret, er kritisk, hvorved opfindelsen er blevet udfert.
Den foreliggende opfindelse angâr sàledes et sensitiseret reagens til 10 immunologisk reaktion, hvilket reagens omfatter partikelformige bærere som har en gennemsnitlig partikeldiameter pâ 0,05-1,2 /zm, i en koncentration pâ 0,01-20 vægtprocent, suspenderet i et vandigt medium med en elektrisk ledningsevne pâ 5,0 mS/cm (5.0 πιΩ'^-. cm'^-) eller mindre og en pH-værdi pâ fra 5 til 10, idet de partikelformige bærere 15 er gjort folsomme med et antigen eller antistof.
Den partikelformige bærer, som er en bestanddel af reagenset ifolge opfindelsen, omfatter sædvanligvis sâdanne partikler, som i det væ-sentlige er uoploselige i vandige medier. Sâdanne partikelformige bærere kan være fremstillet af et hvilket som helst egnet materiale, 20 hvilket omfatter gitre af polymerstoffer sâsom polystyren, styren-bu-tadien-copolymer, polyacrylat, polymethacrylat, acrylonitril-butadi-en- styren-copolymer, gitre af disse polymerer, som er blevet akti-veret ved indsætning af en carboxy- eller amidgruppe ved hjælp af copolymerisering med acrylsyre, methacrylsyre eller acrylamid; blod-25 celler, bakterier sâsom staphylococcer og streptococcer, Serratia -marcescens eller rickettsia og fragmenter af disse bakterier.
Gennemsnitspartikeldiametere af disse bærere er sædvanligvis 0,05-1,2 μια., fortrinsvis Ο,Ι-Ι,Ο /zm, især 0,2-0,8 /zm. Hvis den partikelformige bærers diameter er meget for stor, bliver analyseomrâdet begrænset 30 eller mere ustabilt. Pâ den anden side medferer partikelformige bærere med en meget mindre diameter et stort okonomisk tab i frem-stillingen af reagenset, og de kan ikke let medfere en forbedret felsomhed. Derfor foretrækkes hverken en for stor eller for lille partikeldiameter.
DK 157109 B
4
De antigener, der skal stattes af den partikelformige bærer af rea-genset ifalge opfîndelsen, omfatter fx proteiner, polypeptider, steroider, polysaccharider, lipider, pollenarter, stav og haptener. Antistofferne omfatter fx sâdanne proteiner, som frembringes ved 5 reaktion med de ovennævnte antigener.
Koncentrationen af den partikelformige bærer er sædvanligvis 0,03-0,3 vægtprocent, fortrinsvis 0,05-0,2 vægtprocent som slutkoncentration.
Ved en hajere koncentration af den partikelformige bærer er det nadvendigt at anvende et mere kompliceret apparatur til analysen med 10 reagenset ifalge opfîndelsen, hvorimod der ikke opnâs nogen yderli-gere forbedring af virkningen. Pâ den anden side foretrækkes en lavere koncentration heller ikke, idet den ikke giver en tilfreds-stillende falsomhed og reaktivitet.
Den partikelformige bærer kan gares falsom med et antigen eller anti-15 stof pâ en hvilken som helst kendt mâde, dvs. ved fysisk adsorption af antigenet eller antistoffet til den partikelformige bærer, ved kemisk binding mellem antigenet eller antistoffet og den partikelformige bærer eller ved en kombination af begge dele.
Bæreren gares falsom med antigenet eller antistoffet, idet mængden af 20 antigen eller antistof hensigtsmæssigt kan vælges afhængigt af for-skellige faktorer, herunder arten af det bestemte antigen eller antistof og den pâtænkte najagtighed af analysen med reagenset.
Den partikelformige bærer, som er gjort falsom med et antigen eller antistof, kan behandles med et stabiliseringsmiddel, far den suspen-25 deres i et vandigt medium. De stabiliseringsmidler, der egner sig til dette formai, omfatter aminosyrer, polypeptider, proteiner og lignen-de, som ikke deltager i den pâtænkte immunologiske reaktion, og serumalbumin er det mest foretrukne stabiliseringsmiddel. Behandlin-gen med stabiliseringsmidlet kan udfares pâ kendt mâde, og en sâdan 30 behandling er fordelagtig, hvad angâr lagring og reaktionens stabili-tet. Der opnâs en særlig vigtig virkning i de tilfælde, hvor antigenet eller antistoffet adsorberes fysisk til bæreren.
5
DK 157109 B
Det vandige medium, i hvilket den bærer, der er gjort folsom med antigenet eller antistoffet, suspenderes, skal hâve en elektrisk led-ningsevne pâ 5,0 mS/cm eller mindre, fortrinsvis 2,5 mS/cm eller mindre, især 1,0 mS/cm eller mindre. En elektrisk ledningsevne, som 5 er hojere end 5,0 mS/cm, gor reagenset ustabilt, hvilket forer til en formindsket analysenoj agtighed.
Det vandige medium kan være vand, en pufferoplosning eller lignende, som kan indeholde en eller flere tilsætningsstoffer udvalgt blandt stabiliseringsmidler, konserveringsmidler, chelateringsmidler og 10 overfladeaktive midler. Pufferoplosningen omfatter glycinpuffere, phosphorsyrepuffere, citronsyrepuffere, barbitalpuffere, boratpuf-fere, tris(tris(hydroxymethyl)aminomethan)-saltsyrepuffere, tris-malat-puffere og ammoniumpuffere.
Stabiliseringsmidlerne omfatter fx de ovennævnte stabiliseringsmid-15 1er, og de er sædvanligvis til stede i koncentrationer pâ 0,001-1 vægtprocent, fortrinsvis 0,05-0,6 vægtprocent.
Eksempler pâ foretrukne konserveringsmidler omfatter natriumazid og merthiolat.
Eksempler pâ foretrukne chelateringsmidler omfatter ethylendiaminte-20 traeddikesyre, nitrilotrieddikesyre og cyclohexandiamintetraeddike-syre.
Som overfladeaktivt middel foretrækkes sædvanligvis ikke-ioniske overfladeaktive midler.
Det vandige médiums pH-værdi er sædvanligvis 5-10, fortrinsvis 6-9,5, 25 især 6,5-8,5. Hvis det vandige médiums pH-værdi er lavere end 5, kan reagenset blive ustabilt, selv om folsomheden foroges. Et vandigt medium med en pH-værdi, som overstiger 10, er ogsâ uonsket, fordi det forer til en nedsat folsomhed og i visse tilfælde en ustabil lagring af reagenset.
30 Den partikelformige bærer, som er gjort folsom med et antigen eller antistof, suspenderes sædvanligvis i det vandige medium i en kon-
DK 157109 B
6 centration pâ 0,01-20 vægtprocent, fortrinsvis 0,05-10 vægtprocent.
Ved en lavere koncentration har det resulterende reagens en nedsat stabilitet, og dets anvendelse bliver uhensigtmæssig og begrænset, medens stabiliteten ved en hojere koncentration ogsâ bliver nedsat, 5 og en sâdan koncentration er ühensigtsmæssig og foretrækkes ikke.
Reagenset ifolge opfindelsen kan fx fremstilles pâ den i de neden-nævnte eksempler beskrevne mâde, dvs. ved at gare partikelformige bærere falsomme som ovenfor beskrevet med et antigen eller antistof pâ i og for sig kendt mâde, hvorefter den sensitiserede bærer om 10 nedvendigt behandles med et stabiliseringsmiddel, og derefter sus-penderes bæreren i et vandigt medium som ovenfor beskrevet pâ i og for sig kendt mâde.
Reagenset ifolge opfindelsen egner sig som reagens eller som en stan-dardoplosning til anvendelse i fx en metode til reaktion pâ et ob-15 jektglas eller i et reagensglas og visuel iagttagelse af aggluti- neringen eller i en metode til reaktion i en optisk celle og optisk mâling af reaktionen.
Reagenset kan anvendes til at analysere en immunologisk reaktion pâ den nedenfor beskrevne mâde.
20 Reagenset ifolge opfindelsen fortyndes om nodvendigt farst med en pufferoplasning for at indstille koncentrationen af bæreren, der er gjort folsom med et antigen eller antistof, sâledes at det egner sig til analysen af den immunologiske reaktion. Den hensigtsmæssige koncentration afhænger af forskellige faktorer, herunder det bestemte 25 antigen eller antistof, som skal analyseres, og koncentrationen og reaktiviteten deraf, og den kan bestemmes eksperimentelt. I tilfælde af optisk mâling af den immunologiske reaktion, foretrækkes det sædvanligvis, at slutkoncentrationen af bæreren er mindst 0,03 vægtprocent, fortrinsvis 0,05-1 vægtprocent, især 0,1-0,5 vægtprocent. I 30 tilfælde af visuel iagttagelse af den immunologiske reaktion er slutkoncentrationen sædvanligvis i omrâdet 0,05-0,8 vægtprocent, fortrinsvis 0,1-0,5 vægtprocent.
De pufferoplosninger, der kan anvendes til fortynding af reagenset, omfatter glycinpuffere, boratpuffere, tris-saltsyre-puffere, tris- malatpuffere og ammoniumpuffere.
DK 157109 B
7
Den anvendte pufferopl0snings pH-værdi er sædvanligvis i omrâdet 5 7,6-9,6, fortrinsvis i omrâdet 8,0-9,0. En pufferoplesning med lavere pH-værdi har en tendens til at foràrsage agglutinering, hvorved reagenset bliver ustabilt, skent det resulterer i foroget folsomhed. Ved en hojere pH-værdi nedsættes folsomheden, og lagringsegenskaber ved hojere temperaturer kan uonsket forringes.
10 Det sâledes vundne reagens kan anvendes til at mâle en immunologisk reaktion pâ kendt mâde.
I tilfælde, hvor den immunologiske reaktion iagttages visuelt, blan-des sâledes forudbestemte mængder af reagenset og en prove, der inde-holder antigen eller antistof, pâ et objektglas eller et reagensglas, 15 og agglutineringen af de sensitiserede partikler iagttages.
I tilfælde, hvor den immunologiske reaktion mâles optisk, blandes forudbestemte mængder af reagenset og en prove, der indeholder antigen eller antistof, og ændringen i lystransmission, lysets spredning eller turbiditeten bestemmes i en optisk celle.
20 Nâr den optiske mâling udfores ved bestemmelse af lystransmission, er lysets bolgelængde sædvanligvis storre end bærerens gennemsnitlige partikeldiameter med en faktor pâ mindst 1,1, fortrinsvis mindst 1,5, især mindst 2. Belgelængden er sædvanligvis i omrâdet 600-2400 nm, fortrinsvis 800-1800 nm. Hvis lyset har en mindre bolgelængde, er det 25 for at fâ en hensigtsmæssig lystransmission nedvendigt at anvende en partikelformig bærer med tilstrækkelig lav koncentration sammen med et reagens med særdeles god dispergerbarhed, og det er derfor van-skeligt at forage folsomheden, og i visse tilfælde kan der forekomme omslag af reaktionen. En længere balgelængde er ogsâ uonsket, fordi 30 folsomheden formindskes.
Lyset kan enten være monochromatisk eller polychromatisk.
\
DK 157109 B
8
Den optiske celle, som anvendes i mâlingen af lystransmissionen, har sædvanligvis en tykkelse pâ 0,2-10 mm.
Mâlingen af transmissionen kan udfores ved at bestemme den tid, det tager at nâ en forudbestemt absorbansværdi, eller ved at bestemme 5 forogelsen i absorbans i et forudbestemt tidsrum.
Den optiske mâling ved anvendelse af lysets spredning kan udfores pà sanune mâde som i de ovennævnte tilfælde, hvor lystransmissionen bestemmes.
Reagenserne ifelge opfindelsen er sensitiserede partikelformige rea-10 genser til anvendelse i immunologiske reaktioner, hvilke reagenser kan bestemme mængderne af et antigen eller antistof i forskellige prover med god reproducerbarhed og stor nojagtighed. De er tillige virksomme, efter at de er blevet frosset og toet op igen, og de kan derfor lyofiliseres og genbruges.
15 Opfindelsen belyses nærmere ved nedenstâende eksempler.
EKSEMPEL 1
Antistofglobulin mod α-fetoprotein oplostes i 0,1M glycinpuffer (pH-værdi 8,8). Antallet af antistofglobulinerne svarede til 800-1500 for hver latexpartikel (med en diameter pâ 0,220 pm, fremstillet af Dow 20 Chemical). Oplosningen blev derefter blandet med en lige sâ stor mængde latex-glycinpuffer (pH-værdi 8,8) ved stuetemperatur under omraring for at opnâ en tilstrækkelig sensitisering. Efter adskillel-se ved centrifugering blev supernatanten fjernet, og bundfaldet blev behandlet med en passende mængde bovint serumalbumin. De sâledes 25 'vundne sensitiserede partikler blev suspenderet i en pufferoplosning med en elektrisk ledningsevne pâ 1,5 mS/cm, hvilken oplosning inde-holdt en hensigtsmæssig mængde af et konserveringsmiddel, og sus-pensionen blev lagret. Det resulterende reagens viste en særdeles god noj agtighed i analysen.
DK 157109 B
9
Reagenset blev fortyndet og anvendtes til at analysere en immunolo-gisk reaktion.
Fortyndingen blev udfort med en glycinpuffer (pH-værdi 8,6). Resul-taterne af analysen udtrykt i nejagtighed i det enkelte forseg og 5 nejagtighed fra dag til dag er vist i tabel 1 og 2.
Tabel 1 N0jagtighed i hvert enkelt forseg Serumpreve ng/ml 10 Nr. 1 2 3 (45,0)1 (195,6)1 (950,0)1 1 45,2 189,2 906,2 2 41,3 190,5 917,5 15 3 42,0 195,8 887,5 4 44,5 181,1 901,3 5 44,6 190,5 906,3 6 43,6 189,7 937,1 7 42,5 190,1 885,0 20 8 42,0 184,5 918,0 9 38,9 180,5 913,5 10 38,6 184,2 925,3 11 40,2 185,6 921,0 12 39,7 190,1 887,2 25 ______
Gennemsnit 41,9 187,7 908,8
Standardaf- vigelse 2,26 4,49 16,4
Variations- 30 koefficient 5,4% 2,4% 1,8% \
De i parentes anferte værdier er værdier, der bestemmes ved ra-dioimmunoassay.
DK 157109 B
10
Tabel 2
Najagtighed fra dag til dag
Nr. Mâned/dag Serumprave ng/ml 5 (1980) 123 1 2/4 55,3 153,0 530,6 2 2/7 49,2 145,8 517,6 3 3/5 54,3 154,1 542,9 10 4 3/27 45,5 149,0 464,3 5 4/10 47,5 146,0 483,3 6 5/7 48,5 151,0 500,8 7 5/14 47,8 148,3 478,3 8 5/21 51,8 138,2 507,3 15 9 6/10 50,3 159,7 512,8 10 6/25 52,1 156,3 521,3
Geimemsnit 50,2 150,1 505,9
Standardafvigelse 3,13 6,12 24,5 20 Variationskoefficient 6,2 4,1 4,9 (%) EKSEMPEL 2
Anti-CRP (C-reaktivt protein)-antistof blev oplast i 0,2M boratpuffer 25 (pH-værdi 8,8), og latexpartikler (med en diameter pâ 0,220 /im frem-stillet af Dow Chemical) suspenderet i samme puffer blev gjort fal-somme med den resulterende oplasning pâ en sâdan mâde, at hver parti-kel bar 800-1800 antigener. De sensitiserede latexpartikler blev behandlet med bovint serumalbumin og dispergeret i en hensigtsmæssig 30 mængde boratpuffer (4,0 mS/cm). Det resulterende reagens viste en særdeles god mâlingsnaj agtighed.
DK 157109 B
11 EKSEMPEL 3
Anti-humant-fibrinogen-antistof F ( ab ' ) 2 fra kaniner eller geder blev opl0st i 0,1M tris-malatpuffer (pH-værdi 8,6), og latexpartikler (med en diameter pâ 0,220 μπι, fremstillet af Dow Chemical) suspenderet i 5 samme puffer blev gjort folsomme med den resulterende oplesning pâ en sâdan mâde, at felsomheden af det resulterende reagens var i sterrel-sesordenen 100 ng/ml. Partiklerne blev derefter behandlet med bovint serumalbumin og suspenderet i en vandig oplosning, som indeholdt 0,1% natriumazid (1,0 mS/cm). Ved anvendelse fortyndes reagenset med en 10 tris-malatpuffer (pH-værdi 8,4) eller tris-saltsyrepuffer (pH-værdi 8,4) til en onsket latexkoncentration og reageres pâ et objektglas, eller det kan anvendes som reagens til optisk analyse, som det er, uden fortynding. I en reaktion pâ et objektglas under anvendelse af dette reagens kan monsteret for agglutinering og ikke-agglutinering 15 klart skelnes.
EKSEMPEL 4
Gede-antistofglobulin mod humant IgG oplostes i 0,1M tris-malatpuffer (pH-værdi 8,8), og latexpartikler (med en diameter pâ 0,312 μπι, fremstillet af Dow Chemical) suspenderet i samme puffer gérés felsom-20 me med oplasningen. De sensitiserede partikler behandles derefter med bovint serumalbumin og suspenderes til slut i en vandig oplosning med en ledningsevne pâ ca. 3,0 mS/cm. Under anvendelsen fortyndes suspen-sionen med 0,1M tris-malat- eller tris-saltsyrepuffer til en ensket koncentration eller anvendes, som den er.
25 EKSEMPEL 5
Anti-humant-IgA-antïstof F (ab')o fra kaniner opleses i 0,2M borat- / puffer (pH-værdi 8,3), og oplosningen behandles pâ samme mâde som i beskrevet i eksempel 4 til fremstilling af et anskét reagens i suspension med undtagelse af, at den vandige oplosning, der til slut 30 anvendes til at suspendere de sensitiserede partikler, har en ledningsevne pâ ca. 0,5-0,8 mS/cm.
\
DK 157109 B
12 EKSEMPEL 6
Latexpartikler gares falsomme med hajrenset anti-humant-IgM-antistof fra kaniner i en glycinpuffer med en pH-værdi pâ 9,6. Det kvantita-tive forhold varierer afhængigt af antistoffets kvalitet og den 5 anskede falsomhed. Efter at de sensltiserede partikler er blevet behandlet med en hensigtsmæssig mængde bovint serumalbumin, suspen-deres de i en vandig oplasning med en ledningsevne pâ ca. 1,2 mS/cm (som kan indeholde ca. 0,05% bovint serumalbumin), hvorved fâs et ansket reagens.
10 EKSEMPEL 7
Hajrenset anti-hCG-antistof F (ab')2 fra kaniner oplases i 0,2M tris-saltsyrepuffer (pH-værdi 8,6), og den resulterende oplasning anvendes til at sensitisere latexpartikler (med en diameter pâ 0,220 pm, fremstillet af Dow Chemical) suspenderet i den samme puffer ved stue-15 temperatur. Efter behandling med en hensigtsmæssig mængde bovint serumalbumin suspenderes de sensitiserede partikler i en vandig oplasning med en ledningsevne pâ ca. 0,8 mS/cm og lagres.

Claims (2)

1. Sensitiseret reagens til immunologisk reaktion, kendetegnet ved, at det omfatter partikelformige bærere med en gennemsnitlig partikeldiameter pâ 0,05-1,2 pm, i en koncentra- 5 tion pà 0,01-20 vægtprocent, suspenderet i et vandlgt medium med en elektrisk ledningsevne pâ 5,0 mS/cm eller mindre og en pH-værdi pâ fra 5 til 10, idet de partikelformige bærere gares falsomme med et antigen eller antistof.
2. Reagens ifalge krav 1, 10 kendetegnet ved, at det vandige medium har en elektrisk ledningsevne pà 2,5 mS/cm eller mindre.
DK190582A 1981-05-02 1982-04-28 Immunokemisk reagens DK157109C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP56067332A JPS57182168A (en) 1981-05-02 1981-05-02 Immunochemical reagent
JP6733281 1981-05-02

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK190582A DK190582A (da) 1982-11-03
DK157109B true DK157109B (da) 1989-11-06
DK157109C DK157109C (da) 1990-04-09

Family

ID=13341952

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK190582A DK157109C (da) 1981-05-02 1982-04-28 Immunokemisk reagens

Country Status (17)

Country Link
EP (1) EP0064275B1 (da)
JP (1) JPS57182168A (da)
KR (1) KR900002347B1 (da)
AT (1) ATE15107T1 (da)
AU (1) AU550925B2 (da)
CA (1) CA1186222A (da)
CS (1) CS241506B2 (da)
DD (1) DD204313A5 (da)
DE (1) DE3265562D1 (da)
DK (1) DK157109C (da)
ES (1) ES511798A0 (da)
HU (1) HU186928B (da)
IL (1) IL65648A0 (da)
NO (1) NO159964C (da)
PT (1) PT74834B (da)
SU (1) SU1431662A3 (da)
ZA (1) ZA822727B (da)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59183369A (ja) * 1983-04-01 1984-10-18 Kazue Ueno ラテツクス試薬
JPS6035263A (ja) * 1983-08-05 1985-02-23 Wako Pure Chem Ind Ltd 不溶性担体に固定化された免疫活性物質の安定化法及び該物質を構成単位として含む生理活性物質測定用試薬
US4713350A (en) * 1983-10-24 1987-12-15 Technicon Instruments Corporation Hydrophilic assay reagent containing one member of specific binding pair
FR2589239B1 (fr) * 1985-10-24 1989-10-20 Cottingham Hugh Chambre de reaction agglutinographique
EP0280559B1 (en) * 1987-02-27 1993-10-20 EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
RU2298798C1 (ru) * 2006-01-17 2007-05-10 Общество с ограниченной ответственностью "Биочип-Аналитика" (ООО "Биочип-Аналитика") Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система для его осуществления
JP4486059B2 (ja) * 2006-05-25 2010-06-23 デンカ生研株式会社 免疫測定用ラテックス組成物
DK2418486T3 (da) 2009-03-05 2013-12-16 Denka Seiken Kk Testreagenskit og dets anvendelse i en fremgangsmåde til måling af en analyt i testprøve
US9075069B2 (en) 2011-12-13 2015-07-07 Baxter International Inc. Measurement of autoantibodies at low conductivity with increased sensitivity
EP3821257A4 (en) * 2018-07-13 2021-11-03 Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. METHOD OF DETECTION OF ABERRANT RESULTS BY INCOMPLETE DISPERSION OF AN IMMUNOASSAY REAGENT

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1362776A (en) * 1970-07-17 1974-08-07 Wellcome Found Immunological reagent
US3857931A (en) * 1971-02-01 1974-12-31 Hoffmann La Roche Latex polymer reagents for diagnostic tests
JPS5811575B2 (ja) * 1976-08-16 1983-03-03 帝国臓器製薬株式会社 抗原−抗体反応の測定法
US4092114A (en) * 1976-10-20 1978-05-30 Fisher Scientific Company Indirect latex test for determination of immunoglobulins
IT1087285B (it) * 1976-11-10 1985-06-04 Hoffmann La Roche Procedimento di determinazione immunologico
FR2399448A1 (fr) * 1977-08-03 1979-03-02 Rhone Poulenc Ind Latex de polymeres vinyliques stables aux electrolytes
EP0001223A3 (en) * 1977-09-19 1979-12-12 F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft Latex coated with a polyhydroxy compound, process for the preparation of this latex, immunological reagent containing this latex, process for the preparation of this reagent, application of this reagent, testing procedure utilising this reagent and reagent kit containing this reagent
GB2013211B (en) * 1978-01-26 1982-06-30 Technicon Instr Immunoassays using f(ab')2 fragments
GB2027031A (en) * 1978-08-02 1980-02-13 Hoffmann La Roche Diagnostic Reagent Comprising a Proteinaceous Material Bonded to a Latex

Also Published As

Publication number Publication date
CA1186222A (en) 1985-04-30
CS312082A2 (en) 1985-08-15
ES8401260A1 (es) 1983-12-01
IL65648A0 (en) 1982-07-30
NO159964C (no) 1989-02-22
KR900002347B1 (ko) 1990-04-12
AU550925B2 (en) 1986-04-10
ATE15107T1 (de) 1985-09-15
DE3265562D1 (en) 1985-09-26
JPS6367865B2 (da) 1988-12-27
JPS57182168A (en) 1982-11-09
ES511798A0 (es) 1983-12-01
NO821448L (no) 1982-11-03
DK157109C (da) 1990-04-09
HU186928B (en) 1985-10-28
DD204313A5 (de) 1983-11-23
EP0064275B1 (en) 1985-08-21
DK190582A (da) 1982-11-03
EP0064275A1 (en) 1982-11-10
ZA822727B (en) 1983-11-30
PT74834A (en) 1982-05-01
AU8282482A (en) 1982-11-11
NO159964B (no) 1988-11-14
PT74834B (en) 1983-10-28
CS241506B2 (en) 1986-03-13
KR830010385A (ko) 1983-12-30
SU1431662A3 (ru) 1988-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4332783A (en) Process for immunologic determination tests
Cambiaso et al. Particle counting immunoassay (PACIA). I. A general method for the determination of antibodies, antigens, and haptens
EP0074520B1 (en) Method and kit for pregnancy detection
EP0064274B1 (en) Method for assaying antigen-antibody reactions and reagent therefor
US20130302907A1 (en) Method of assaying antigen and reagent therefor
DK157109B (da) Immunokemisk reagens
CA1168580A (en) Immunological reagent for the detection of tubes of the rheumatoid factor in a biological specimen and process for preparing this novel reagent
JP4065600B2 (ja) 免疫学的測定法および免疫学的測定用キット
US4052504A (en) Assay for thyroxine binding globulin
Thurston et al. A rapid method for recovering serologically active globulins by sodium sulfate precipitation
JPH02257063A (ja) 免疫測定試薬および免疫測定法
AU657595B2 (en) A method for the determination of antigens or antibodies in the presence of an immune complex
EP0354954B1 (en) Reagent and method for detecting rheumatoid factor
JPH04329357A (ja) 免疫学的測定方法
AU667700B2 (en) Method for determining rheumatoid factors and agents for carrying out the method
JPH01253654A (ja) 安定なラテックス試薬
EP0290017B1 (de) Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Serumproteinen in Körperflüssigkeiten und Mittel zur Durchführung des Verfahrens
JP2821040B2 (ja) 細胞固相化容器の製造方法
JPH0230665B2 (ja) Shinkinakogenteiryoho
JPH05113442A (ja) 免疫比濁測定方法
JP2002181822A (ja) 免疫測定試薬及び免疫測定法
JPH02143163A (ja) 免疫測定用試薬およびそれを用いた免疫測定法
JPH0230664B2 (ja) Shinkinakogenteiryoho
JPH10253629A (ja) 免疫測定試薬製造法
EP0586693A1 (en) Technique for prevention of false reactions in immunological testing

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed