CS235072B2 - Method of l-tyrosyl-d-alanyl-glycyl-l-phenylalanylamide's new derivatives production - Google Patents

Method of l-tyrosyl-d-alanyl-glycyl-l-phenylalanylamide's new derivatives production Download PDF

Info

Publication number
CS235072B2
CS235072B2 CS786285A CS628578A CS235072B2 CS 235072 B2 CS235072 B2 CS 235072B2 CS 786285 A CS786285 A CS 786285A CS 628578 A CS628578 A CS 628578A CS 235072 B2 CS235072 B2 CS 235072B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
acid
acetic acid
tyrosyl
glycyl
alanyl
Prior art date
Application number
CS786285A
Other languages
English (en)
Inventor
Edward L Smithwick
Robert C A Frederickson
Robert Shuman
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CS235072B2 publication Critical patent/CS235072B2/cs

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K5/00Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08Tripeptides
    • C07K5/0802Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K5/00Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10Tetrapeptides
    • C07K5/1002Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby nové skupiny sloučenin vykazujících při parenterálním podání analgetickou účinnost.
V poslední době byly z mozku nebo mozkomíšního moku savců extrahovány endogenní látky s vlastnostmi morfinového typu. Tyto látky, pojmenované jako enkefalin, identifikovali Hughes a spol. [Nátuře, 258, 577 (1975)] jako pentapeptidy s následujícími řetězci:
H—Tyr—Gly—Gly—Phe—Met—OH
H—Tyr—Gly—Gly—Phe—Leu—OH
Tyto látky se nazývají methionin-enkefalin resp. leucin-enkefalin.
I když bylo prokázáno, že tyto sloučeniny při intracerebroventrikulární aplikaci myším vykazují analgetickou účinnost [viz Buscher a spol., Nátuře, 261, 423 (1976)], při parenterálním podání nemají prakticky vůbec žádnou analgetickou účinnost.
Nyní byl nalezen způsob výroby nové skupiny sloučenin, které při systemické aplikaci vykazují významnou a prokazatelnou analgetickou účinnost.
V souhlase s tím se vynález týká způsobu výroby derivátů L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-fenylalanylamidu
OH fL)
O RuRsO li Г Г II -CH-C-H-C-C-NH, д I 2.
ve kterém .......
L a D, tam, kde je to vhodné, definují chiralitu,
R3 představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,
R4 představuje atom vodíku nebo primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a
R5 znamená atom vodíku nebo primární alkylovou skupinu . s 1 až 3 atomy uhlíku, s tím, že jeden ze symbolů R4 a R5 znamená vždy primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a druhý atom · vodíku, a jejich farmaceuticky upotřebitelných netoxických adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se ze sloučeniny odpovídající obecného vzorci I, v němž jsou aminoskupina nebo/a hydroxyskupina v L-tyrosylovém zbytku vhodným způsobem chráněny, odštěpí chránící skupiny působením kyselého prostředí.
Farmaceuticky upotřebitelné netoxické adíční soli s kyselinami zahrnují adiční soli s organickými a anorganickými kyselinami, jako například soli odvozené od kyseliny chlorovodíkové, sírové, sulfonové, vinné, fumarové, bromovodíkové, giykolové, citrónové, maleinové, fosforečné, jantarové, octové, dusičné, benzoové, askorbové, p-toluensulfonové, benzensulfonové, naftalensulfonové a propionové.
Výhodnými adičními solemi s kyselinami jsou soli odvozené od kyseliny chlorovodíkové, kyseliny octové nebo kyseliny jantarové. Všechny shora zmíněné soli se připravují běžnými metodami.
Jak je z definice . různých substituentů obsažených v obecném vzorci I zřejmé, jsou sloučeniny definované touto strukturou primárními amidickými deriváty konkrétně definovaných tetrapeptidů. Základním aspektem sloučenin obecného vzorce I je jejich stereokonfigurace. Pro zjednodušení se zbytky aminokyselin modifikovaných tetrapeptidů obecného vzorce I číslují postupně počínaje od zbytku na terminální aminové funkci.
Chiralita zbytků aminokyseliny, postupuje-li se od polohy 1 do polohy 3, je L, D a žádná. Zbytkem v poloze 3 je totiž glycinový zbytek, v jehož případě chiralita neexistuje. Pokud jde o polohu 4 (C-terminální poloha], kterou se označuje primární amidický zbytek, je chiralita této polohy definována jako chiralita odpovídající příslušnému žádanému zbytku L-aminokyseliny.
Primárními alkylovými skupinami s 1 až 3 atomy uhlíku ve významu symbolů R4 a R5 jsou methylové, ethylové a n-propylové . skupiny.
Alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku ve významu symbolu R3 se míní skupina methylová, ethylová, n-propylová, isopropylová, n-butylová, isobutylová a sek.butylová.
V následující části je blíže diskutován charakter jednotlivých zbytků v každé z poloh modifikovaných tetrapeptidů obecného vzorce I.
(A) Poloha 1
Tato poloha představuje amino-terminální část peptidu. Zbytkem v této poloze je zbytek odvozený od L-tyrosinu.
(B) Poloha 2
Zbytkem aminokyseliny přítomným v poloze 2 peptidu obecného vzorce I musí být D-stereoisomer odvozený od libovolného z řady zbytků aminokyselin. Sem náležejí zbytky odvozené od D-alaninu [Ala] (R3 znamená methylovou skupinu], D-a-aminomáselné kyseliny (Abu) (R3 znamená ethylovou skupinu), D-norvalinu (Nva) (R3 znamená n-propylovou skupinu], D-valinu (Val) (R3 znamená isopropylovou skupinu), D-norleucinu (Nle) (R3 znamená n-butylovou skupinu], D-leucinu (Leu) (R3 znamená isobutylovou skupinu] a D-isoleucinu (Ile) (R3 znamená sek.butylovou skupinu). S výhodou je tímto zbytkem zbytek odvozený od D-alaninu.
(C) Poloha 3
Zbytkem aminokyseliny přítomným v této poloze je zbytek odvozený od glycinu (Gly).
(D) Poloha 4
Zbytkem přítomným v této C-terminální poloze je zbytek odvozený od L-fenylalaninu (Phe).
Zmíněný zbytek může být buď nesubstituovaný, nebo substituovaný na aminovém dusíku (symbol R/J. V případě, že tento zbytek je substituován na dusíku, jedná se o substituci methylovou, ethylovou nebo n-propylovou skupinou. V případě, že zmíněný zbytek není na aminovém dusíku substituovaný, musí být substituovaný na «-uhlíku (symbol Rs). V těchto případech znamená R5 methylovou, ethylovou nebo n-propylovou skupinu. Jediným omezením je, že jeden ze symbolů R4 a R5 představuje primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a druhý znamená atom vodíku.
Nejvýhodnější primární alkylovou skupinou s 1 až 3 atomy uhlíku je skupina . methylová. Velmi výhodnými sloučeninami jsou tedy ty, v nichž R4 nebo R5 znamená methylovou skupinu, a nejvýhodněji pak ty, v nichž R4 znamená methylovou skupinu.
V předchozím i následujícím textu se používají následující zkratky, z nichž většina je známá a v . daném oboru běžně používaná:
Abu = a-aminomáselná kyselina Ala = alanin
Cys = cystein Gly = glycin Hse = homoserin Ile = isoleucin Leu = leucin Met = methionin Nle = norleucin Nva = norvalin Phe — fenylalanin
Phe—NH2 = amid fenylalaninu
Phe—A — primární alkoholický derivát fenylalaninu
Phe—CN = nitrilový derivát fenylalaninu
Ser — serin
Tyr = tyrosin Val = valin
Ac = acetyl Me = methyl
Et = ethyl
Ip = isopropyl
Pr = n-propyl Bu = n-butyl i-Bu = isobutyl t-Bu = terc.butyl s-Bu = sek.butyl BOC = terc.butyloxykarbonyl Bzl = benzyl
Sloučeniny obecného vzorce I se připravují běžnými metodami syntézy peptidů. Během syntézy určitých sloučenin obecného vzorce I může dojít к parciální racemizaci, pokud však к takovéto racemizaci dojde, není její rozsah takový, aby nějak vážněji ovlivnil analgetickou účinnost sloučenin obecného vzorce I.
Způsoby přípravy sloučenin obecného vzorce I spočívají v kondenzaci aminokyselin nebo peptidických fragmentů reakcí karboxylové funkce jedné komponenty s aminovou funkcí komponenty druhé za vzniku amidové vazby. К účinnému průběhu kondenzace je žádoucí nejprve inaktivovat všechny reaktivní funkce, které se přímo nezúčastňují reakce, použitím vhodných chránících skupin, a za druhé pak příslušně aktivovat karboxylovou skupinu podílející se na kondenzaci. Všechna tato opatření vyžadují pečlivý výběr sledu reakcí a reakčních podmínek, jakož i použití specifických chránících skupin, aby se získal žádaný peptidický produkt. Každá z aminokyselin, která se používá к výrobě sloučenin obecného vzorce I, a která obsahuje vhodně zvolené Chrániči skupiny nebo/a aktivované funkční skupiny, se připravuje technikami dobře známými v chemii peptidů.
V každém bodu totální syntézy sloučenin obecného vzorce I se používají vybrané kombinace chránících skupin. Byla zjištěno, že tyto konkrétní kombinace vedou к nejhladšímu průběhu žádané syntézy. Při syntéze sloučenin obecného vzorce I je možno po užít i jiné kombinace, i když snad s menším úspěchem. Tak je možno při syntéze sloučenin obecného vzorce I používat jako chránící skupiny aminových funkcí například skupinu benzyloxykarbonylovou (CBz), terc.butyloxykarbonylovou (BOC), terc.amyloxykarbonylovou (AOC ), p-methoxybenzyloxykarbonylovou (MBOC), adamantyloxykarbonylovou (AdOC) a isobornyloxykarbonylovou. Dále se jako chránící skupina hydroxylové funkce tyrosolového zbytku obecně používá skupina benzylová (Bzl), i když je možno dobře použít i jiné chránící skupiny, jako skupinu p-nitrobenzylovou (PNB) nebo p-methoxybenzylovou (PMB).
Chránícími skupinami karboxylových funkcí, používanými při výrobě sloučenin obecného vzorce I, mohou být všechny typické esterotvorné skupiny, jako například methylová, ethylová, benzylová, p-nitrobenzylová, p-methoxybenzylová nebo 2,2,2-trichlorethylová skupina.
Kondenzace vhodně chráněné N-blokované aminokyseliny nebo peptidického fragmentu s vhodně chráněnou aminokyselinou nebo peptidickým fragmentem s blokovanou karboxylovou skupinou při přípravě sloučenin obecného vzorce I zahrnuje aktivaci volné karboxylové funkce aminokyseliny nebo peptidického fragmentu co do kondenzační reakce. Tuto aktivaci je možno uskutečnit libovolnou z několika známých technik. Jedna z těchto aktivačních technik spočívá v konverzi karboxylové funkce na smíšený anhydrid. Volná karboxylové funkce se aktivuje reakcí s jinou kyselinou, obvykle s derivátem kyseliny uhličité, jako s chloridem této kyseliny. Jako příklady chloridů kyselin používaných к přípravě smíšených anhydridů lze uvést chlormravenčan ethylnatý, chlormravenčan fenylnatý, chlormravenčan sek.butylnatý, chlormravenčan isobutylnatý a pivaloylchlorid. S výhodou se používá chlormravenčan isobutylnatý.
Další metoda aktivace karboxylové funkce pro účely provedení kondenzační reakce spočívá v konverzi této karboxylové funkce na seskupení aktivovaného esteru. Mezi tyto aktivované estery náležejí například 2,4,5-trichlorfenylester, pentachlorfenylester a p-nitrofenylester. Další kondenzační metodou, kterou je možno použít, je dobře známá azidová kondenzační metoda.
Výhodná kondenzační metoda pro přípravu sloučenin obecného vzorce I spočívá v použití N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu к aktivaci volné karboxylové funkce, čímž se umožní průběh kondenzace. Při této aktivační a kondenzační metodě se používá ekvimolární množství N,N(-dicyklohexylkarbodiimidu vzhledem к aminokyselině nebo peptidickému fragmentu a kondenzace se provádí v přítomnosti ekvimolárního množství 1-hydroxybenzotriazolu. Přítomnost 1-hydroxybenzotriazolu potlačuje nežádoucí vedlejší reakce včetně možnosti racemizace.
V určitých bodech syntézy sloučenin obecného vzorce I je nutno provést štěpení vybraných chránících skupin. Pro odborníky nebude obtížné vybrat z reprezentativních chránících skupin ty skupiny, které umožňují selektivní štěpení, tzn. odštěpení jedné nebo několika, ne však všech chránících skupin přítomných na aminokyselině nebo peptidickém fragmentu. Tyto techniky jsou v chemii peptidů dobře známé. Bližší diskuse technik použitelných pro selektivní štěpení je uvedena například v práci, kterou publikovali Schrbder a Líibke v The Peptides, sv. I, Academie Press New York, (1965) a zejména v tabulce na stranách 72 až 75 této publikace.
Štěpení chránících skupin karboxylové funkce lze uskutečnit alkalickým zmýdelněním. К deesterifikaci chráněné karboxylové funkce se obecně používají relativně silně alkalické podmínky, jichž se obvykle dosahuje použitím hydroxidů alkalických kovů, jako hydroxidu sodného, hydroxidu draselného a hydroxidu lithného.
Reakční podmínky, při nichž ziuýdelnění probíhá, jsou v daném oboru dobře známé. Chránicí skupiny karboxylové funkce lze rovněž odstraňovat katalytickou hydrogenolýzou, například hydrogenolýzou v přítomnosti paládia na uhlí jako katalyzátoru. V těch případech, kdy chránicí skupinou karboxylové funkce je skupina p-nitrobenzylová nebo 2,2,2-trichlorethylová, je možno odštěpení chránicí skupiny uskutečnit rovněž redukcí v přítomnosti zinku a kyseliny chlorovodíkové.
Chránicí skupiny aminových funkcí se odštěpují tak, že se na chráněnou aminokyselinu nebo peptid působí kyselinou, jako kyselinou mravenčí, kyselinou trifluoroctovou, kyselinou p-toluensulfonovou, kyselinou benzensulfonovou, nebo kyselinou naftalensulfonovou, za vzniku příslušné adiční soli s kyselinou.
Odštěpení chránicí skupiny aminové funkce lze rovněž uskutečnit tak, že se na chráněnou aminokyselinu nebo peptid působí směsí kyseliny bromovodíkové nebo chlorovodíkové a kyseliny octové, za vzniku příslušné adiční soli s kyselinou bromovodíkovou nebo chlorovodíkovou. Konkrétně používaný postup nebo činidlo závisí na chemických nebo fyzikálních vlastnostech materiálů podrobovaných specifickým reakcím к odštěpování chránících skupin. Bylo zjištěno, že v těch případech, kdy symbol Rz, má jiný význam než atom vodíku a mají se odštěpovat chránicí skupiny z peptidu obsahujícího alespoň tři zbytky aminokyselin, je nanejvýš výhodné odstraňovat chránicí skupiny z takovéhoto peptidu působením kyseliny trifluoroctové nebo kyseliny mravenčí, vedoucím к vzniku odpovídající adiční soli s kyselinou. Sůl lze pak přeměnit na farmaceuticky upotřebitelnější formu působením vhodného iontoměniče, jako například iontoměniče dlethylaminoethyl — Sephadex A25 a Amberlyst A27.
Chránicí skupinu hydroxylové funkce, přítomnou na tyrosylovém zbytku, je možno na peptidu ponechat během celé jeho přípravy, protože tato skupina se odštěpí v průběhu finálního reakčního stupně v souvislosti s odštěpováním chránicí skupiny aminové funkce. V závislosti na podmínkách používaných к odštěpování chránicí skupiny karboxylové funkce může ovšem dojít к odštěpení chránící skupiny hydroxylové funkce již v dřívějším reakčním stupni. Pokud se chránicí skupina karboxylové funkce odštěpuje alkalickým zmýdelněním, zůstává chránicí skupina hydroxylové funkce zachována, používá-li se však к odštěpování chránící skupiny karboxylové funkce katalytická hydrogenolýza, dochází rovněž к odštěpení chránicí skupiny hydroxylové funkce. Posledně zmíněný případ však nepředstavuje žádný vážný problém, protože přípravu sloučenin obecného vzorce I je možno uskutečnit i v přítomnosti tyrosylového zbytku obsahujícího volnou hydroxylovou skupinu.
Výhodná specifická metoda přípravy sloučenin obecného vzorce I spočívá v kondenzaci separátně připraveného N-terminálního tripeptidu se separátně připraveným C-terminálním fenylalanylamidem a v následujícím odštěpení všech zbývajících chránících skupin. Alternativně může být separátně připravená C-terminální fenylalanylová sloučenina, která se podrobuje reakci s N-terminálním tripeptidem, strukturně upravena tak, že obsahuje skupinu představující prekursor amidického zbytku. Obecný postup ilustrující přípravu tetrapeptidu obecného vzorce I je možno znázornit následujícím reakčním schématem, v němž symbol AA představuje zbytek aminokyseliny а к němu připojené číslo označuje polohu aminokyseliny v řetězci výsledného peptidu.
A. Příprava tripeptidického fragmentu:
1oh Hz
J>d/Q
BOC~L-Tyr-D~(A A ) -Gly-OH I *
OH '
B0C-L'1Yr-0H 1- H-D-lAA)^OBzl
I DCC I НВТ
BOC-L -Ty, -D-( A A λ-O Bal
I
OBaI
В ос-L -Туг -D~(AA kOH 2 ОВЛ
H Gly- OBzl DCC
HBT В ОС ~L-Tyr~D-( A A^Gl-y-OBzl· OBzl _______________
I Nt-OH „THF/HzO 0OC-L-Tyt'-D-(AA)2G'l.y--OH OBzl
B. Kondenzace tripeptidu a terminálního fenylalanylového zbytku:
R< R5 I I
BOC—L—Tyr—D— (AA)2—Gly—OH + HN—C—Q
I CH2
I
Pii
DCC
V HBT
R4 R5 I I BOC—L—Tyr—D— (AA)2—Gly—N—C—Q
CH2
Ph
Ve shora uvedených reakčních schématech znamená DCC N,N‘-dicyklohexylkarbodilmid, HBT představuje 1-hydroxybenzotriazol, Ph znamená fenylovou skupinu a Q představuje skupinu —c—nh2, o
—COCH3,
II o
o
II —C—OCH2Ph a jiné podobné skupiny.
Pokud Q představuje benzylesterové seskupení nebo jiné esterové seskupení obsahující skupinu snadno odštépitelnou hydrogenolýzou, je možno takovéto seskupení převést na volnou karboxylovou skupinu hydrogenolýzou v přítomnosti paládia na uhlí. Volnou kyselinu je možno převést na amid působením amoniaku v přítomnosti N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu a 1-hydroxybenzotriazolu.
Při přípravě sloučenin obecného vzorce I výše popsaným sledem reakcí je nanejvýš výhodné používat jako C-terminální reakční složku sloučeninu obsahující již přímo skupinu —C—NH2.
II o
Po přípravě žádaného modifikovaného tetrapeptidu obsahujícího C-terminální skupinu je možno chránící skupinu na kyslíku tyrosylového zbytku (pokud je přítomna) odštěpit hydrogenolyticky a terc.butyloxykarbonylovou chránící skupinu na dusíku působením trifluoroctové kyseliny.
Shora uvedený postup představuje pouze jeden sled reakcí vedoucí к přípravě sloučenin obecného vzorce I. Je pochopitelně možno použít i jiné reakční postupy. Další použitelná metoda spočívá v postupném napojování jednotlivých aminokyselin nebo jejich derivátů obsažených v peptidickém řetězci, počínaje od karboxamidového terminálního zbytku. Při tomto postupu je možno používat různé reakční techniky, včetně technik popsaných výše, jakož i libovolné jiné vhodné sledy reakcí.
Další způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I představuje syntéza v pevné fázi. Při tomto postupu se C-terminální zbytek naváže na vhodný polymerní nosič a peptid se prodlužuje vždy o jeden zbytek tak dlouho, až vznikne žádaný výsledný peptid, dosud navázaný na polymerní nosič. Výsledný peptid se pak z nosiče odstraní za použití vhodného činidla štěpícího chránící skupiny. Tak například C-terminální zbytek, chráněný na α-aminoskupině terc.butyíoxykarbonylovou skupinou, se za použití aktivace N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidem nekondenzuje na benzhydrylaminový polymer.
Chrániči terc.butyloxykarbonylová skupina na dusíku se odstraní reakcí zbytku, navázaného na polymer, s trifluoroctovou kyselinou v methylenchloridu. Výsledná sůl se neutralizuje vhodným terciárním aminem a postup se opakuje pro napojení každé následující aminokyseliny. Po skončení přípravy žádané peptidické sekvence se chráněný peptid z polymerního nosiče odštěpí působením fluorovodíku při teplotě 0 CC. Produkt lze pak vyčistit chromatografií. Konkrétní podmínky syntézy, jako například reakční doby, reakční teploty, časy potřebné pro vymývání, činidla, chránící skupiny apod., jsou v oboru syntézy peptidů v pevné fázi dobře známé.
V určitých sloučeninách obecného vzorce I znamená R4 primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku. V takovýchto případech se při syntéze používají příslušné N-substituované aminokyseliny. Následujícím postupem je možno, za použití aminokyseliny chráněné na dusíku jako výchozí látky, připravit libovolnou z N-monosubstituovaných aminokyselin:
H
BOC—N—(AA)—COOH
KH tetrahydrofuran dimethylformamid 18-crown-6-ether
K +
I
BOC-N - - (AA) -COO - К+ primární alkyljodid
I s 1 až 3 atomy uhlíku (RaI)
Ra
BOC—N— (AA)—COOH
Jak vyplývá z výše uvedeného schématu, působí se nejprve na Nechráněnou aminokyselinu kaliumhydridem v přítomnosti vhodného crown-etheru za vzniku dianiontu. Na takto získaný meziprodukt se pak působí příslušným alkyljodidem za vzniku žádané N-substituované aminokyseliny.
Odborníkům v syntéze peptidů je zřejmé, že za silně alkalických podmínek, jaké se používají při shora popsané alkylaci, může dojít к racemizaci na α-uhlíku. Rozsah racemizace se může měnit v závislosti na příslušné aminosloučenině. Racemizaci je možno omezit na minimum použitím nadbytku alkylačního činidla a prací při co nejkratší reakční době. Nicméně však i v případě, že racemizace proběhla v rozsáhlé míře, je možno produkt vyčistit překrystalováním, jako sůl s vhodným chirálním aminem, například s d( + )-a-fenylethylaminem.
Výslednou aminokyselinu, v níž RZ1 znamená primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, je možno libovolným z výše popsaných postupů převést na odpovídající amid.
V určitých sloučeninách obecného vzorce I znamená R5 primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku. V takovýchto případech se к výrobě těchto sloučenin používá příslušná aminokyselina substituovaná na α-uhlíku nebo její odpovídající ester či amid. Příslušný fenylalanin substituovaný na a-uhlíku je možno připravit postupem, který popsali Stein a spol. v Journal of the Američan Chemical Society, sv. 77, 700 až 703 (1955). Štěpení racemické směsi se provádí postupem, který popsali Turk a spol., J. Org. Chem., sv. 40 č. 7, 953—955 (1975). Výsledný α-substituovaný fenylalanin je možno převést na odpovídající amid podle metod popsaných výše. Tuto přeměnu je možno uskutečnit buď před, nebo až po přípravě tetrapeptidového řetězce, výhodně však před přípravou tetrapeptidu.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou cennými farmaceutickými činidly. Zmíněné látky vykazují analgetickou účinnost a jsou zvlášť užitečné při parenterální aplikaci savcům, včetně lidí.
Sloučeniny obecného vzorce I je možno aplikovat jako takové nebo je lze upravovat na farmaceutické preparáty v jednotkových dávkovačích formách pro parenterální aplikaci. К přípravě těchto preparátů je možno používat organické nebo anorganické pevné, nebo/a kapalné nosné materiály, které jsou farmaceuticky upotřebitelné. Vhodné nosiče jsou v daném oboru dobře známé. Popisované prostředky mohou být ve formě tablet, granulátů, kapslí, suspenzí, roztoků apod.
Při podání v účinném množství působí sloučeniny obecného vzorce I analgeticky. Dávkování účinných látek se může obecně pohybovat zhruba od 0,1 do 100 mg na kilogram tšlesné hmotnosti příjemce. Výhodné dávkování se pohybuje zhruba od 1,0 do mg/kg tělesné hmotnosti.
Následující příklady provedení ilustrují přípravu a účinnost sloučenin obecného vzorce I, v žádném směru však rozsah vynálezu neomezují.
Příklad 1
Příprava L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N*-methyl-L-fenylalanylamid-acetátu
A. Benzyl-D-alaninát-p-toluensulfonát
К směsi 100 ml benzylalkoholu a 200 ml benzenu, obsahující 55,1 g (0,29 mol) monohydrátu p-toluensulfonové kyseliny, se přidá 25 g (0,281 mol) D-alaninu. Směs se uvede к varu pod zpětným chladičem a azeotropicky se z ní odstraňuje voda za použití Dean-Starkovy jímky. Směs se zahřívá 15 hodin, pak se ochladí na teplotu místnosti a zředí se etherem. Vyloučená sraženina se odfiltruje a po překrystalování ze směsi methanolu a etheru poskytne 55, 3 g (56 °/o) shora uvedené sloučeniny o bodu tání 112 až 115 °C.
Analýza: pro C17H21NO5S (351,42) vypočteno:
C: 58,10 %, H: 6,02 %, N: 3,99 %; ηη]ρ7ΡΓΐίΥ
C: 58,19 °/o, H: 6,06 %, N: 3,82 °/o.
B. Benzyl-Na-terc.butyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl-D-alaninát
К 200 ml suchého N,N-dimethylformamidu se přidá 35,1 g (0,1 mol) produktu připraveného v odstavci A. Směs se za míchání ochladí na 0°C a přidá se к ní 11,2 g (0,1 mol) diazabicyklooktanu. Výsledná směs se 10 minut míchá při teplotě 0°C, načež se к ní přidá nejprve 37,1 g (0,1 mol) Na-terc.butyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosinu a potom 13,5 g (0,1 mol) 1-hydroxybenzotriazolu a 20,6 g (0,1 mol) N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě 0 °C a pak 24 hodiny při teplotě místnosti, ochladí se na 0 CC, vzniklá suspenze se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se znovu rozpustí v ethylacetátu a roztok se postupně promyje 1N kyselým uhličitanem sodným, vodou, 0,75 N studeným roztokem kyseliny citrónové a vodou. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a zahustí se va vakuu. Odparek se rozpustí v horkém ethanolu a roztok se ochladí, přičemž produkt vykrystaluje. Po jednom překrystalování z ethanolu se získá 41,5 g (80 %) čisté sloučeniny uvedené v názvu, o bodu tání 121 až 123 °C.
^»3 ,: Anaiýsm: ,ргл>(.адЪ)НА>·.[520,Эй)·.·- jvсь ·-,.;
7.-.-:/--,^7 ·:·-;·7% ' : +.7 i 7·' ,· ΥΥΡΡίίθ^’ ΐ > и; 71;<.i 7f:.; 77i ;Н-‘77! И ί:·Η.;·.··./> ,С::Ъ9,21 ВН;Ш%, №·«8>
/. !!;,;· ---1 'i'., · 7'7-17.' ji i' *: J : . Ύ J jí . ·: . \ .·
ΤΊΟίρ^ΡΥΛΓν· i.
C: 68,99 %, Η: 6,75°/ο, N: 5,17 %.
C. N“-terc.butyloxykarbonyl-O-benzyl-L-
-tyrosyl4>alannj <·, ·γ·ηi, .·s
К směsi 200 mí tetrahydrofuranu a 20 ml vody se přidá ЗД,2, g (0,06 miol) produktu připraveného v odstavci B, výsledný roztok • se;φ; chladí,.na- -0.-°C a„pozvolna se,,к· němu přidá:, 13,2 ml: (1,1 ekvivalentu)., 5 N, hydro-
,.xidu j sodného,.,Směs., se,. za; míchání: nechá .pomalu ohřát, na; teplotu místnosti:a,.p,o,,5 hodinách se . roztřepe ;inezi vpdu a ether. Voďnáyrstva. se, oddělí a ochladí,., její pH . se,,přídavkem kyseliny citrónové, nastaví na hodnotu 2 . a sipěs,,se extrahuje ethylacetátem· Etpylacetátovy. extrakt sp, promyje .VQdon, vysuší, se sír.anepi hořečnatým a po zfiltrování, se, zředí, etherem.. .Odfiltrováním vyloučené, sraženiny.se .získál?,7. g [67,%) sloučeniny uvedené v názvy,: tající při, 160 až 162 °C.
Analýza: pro C24H30N2Ó6 (442,51)
Vypočteno: ,. ·ι . · .··,;:··.,
C: 65,14%, H:6,83 %, N: 6,63 %;
.nalezeno; ..· ...... . .· ·.·,
C: 64,73 %, H: 6,70 %, N: 6,20 %.
D. Benzyl-N“4erp.butylox.ykarbopyl-Q’ ,· -benzyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycinát ,ml .suchého ,dijmethyiformaipíďu se přidá ,6,74 g (0,0.?,mo).) spli bpnzyl-glyčiná.tu s kyseliiiQu; p-tojpensújfopovou. se ochladí pa: 0 fč, přidá se, к ní ,2-,24 .g- (0,0.20 mol) djazabipykiLoQktanu,,, výsledná směs se někplik minut míchá, načež„se; kupí, přidá nejprve. ,8,84 g,, (0,020, moll / prpduktp připrpyepéhpyv pdstavcifqm poijpm.,.2,7 g, (Ó.Q20 mol j l-hydroxybenzptriazQlu a 4,12 g, (0,020 mni.).: N.Nl-diQykióhpxyikarbotjíimjdHíidiRá.akční směs;se 2.,,hpdiny. míqhá > рЦ teplotě 0°C a pak ,2,4 hodiny, při teplotě, místnosti. Výsledná. suspenze se, ochiedí na ,Q °q,, ,zfiltruje..se ,a filtrát .se,,Μήηείί.,νβ:.vakuu. ZbyI tek . se (. rozpustí, ,y; . ethylaqetjátu, roztok „: se postupně ,promyje :1 Ň -kyselýml· Uhličitanem sodným,. vodou, studenou 0,75 N kyselinou citrónovou a vodou, organická;, fáze se, vysuší , síranem,: horečnatým. a, zahustí. se,, ve vykuu.. Krystalizaci odparku ?· . ethanolu, ,se získá Í0,8;;g (Д2 %J .čistésloučeniny uvedené v názvu, tající. při· 145·až 147 ’G,· .·
,.---7- · 7 '< ; . 7'! 7 7; . 7 i · ‘:. . ’. ’ . i <';: . ·.. 1' • v ! 7/7 · ' ; ; /:.7 - í 7 >' },_>’ , ;
Analýza;.pro СэзН<тК,О7 (589,fí9j. ;ι.·,ί , ? i; '· i i;'.' ι · ΐ:. :J ···;/:.·· :>;· :7.// /7 иЧУРРб|в,П0· * :7 : 7 : 7 :.. · ·;:. 7 i: ·/ ·.·. 7; и:
,С= 67,22,%, H:, 0,67. P/h, ,N: -7.,:13,%;
·'/; '»:· 77; 7..· c-j- -:í·. ···-·,. 7, 7;7 .·’ .7 !
! jmlógeno: .;|7%:.::. .-7:-. u : 7 7;1 i! 7‘И ;; ·%!.'%;
..,¢,:, .67,32.,%, H;< 6;83:9/o, Ň:· .6,91. %.
,E. /,N“rterc,hu,tyloxykarhQnyltQ:-b©iizyl-,L. y.:,rtýrpsyl-?D-alapylnglycin.,l·: : ;,, . l-j
K.směsi:tetrahydrofuranu, a vody,у poměru 9 , 1 (15p.ml) se.přidá.15,95.g (27· imnol) •produktu i připraveného v odstavci I),,siuěs , ,se za míchání, ochladí, na 7:Gpřikope se . k, ní 30 mi 1N hydroxidu sodného. Po skončeném přikapáyání se .směs 2 hodiny míchá, pak sp dvakrát /extrahuje etherem,;; oddě, lená , уOídná fáze se přidáním 30 mí f 1, N, sky.šaliny,. chlorovodíkové. okyselí,na .рЦ:.2,5, •.vykrystaloyariá ,sloučenina,..uyedena y názvu ; sp,.odfiltruje, a překrystaluje· -.se,. jednou,, ze . směsi methanolu: a. vody a dvakrát z.ethylacetát.u,: Získá se 11,43 g..(85,.%,teorieř.žádaného produktu o bodu tání 104 ažnlOZ^C a optické rotaci i · i+31,4?, (ci. — 0,5
v.methanolu). . ».>.· ;
Analýza;, pro .(.499,5.4) ,. · vypočteno: n-i. ··'-··. ! = >!.·>!.! v
.. C:: 62,51 %,,H: 6,66.:%, N: .8,41 %;
7·- ..17 ;» i. 7 7 i +1-:1/.--. ' · ; :· 7 7'7 7 nalezeno: ·, 7,,ь, , . . C: 62,31%,· H: 6,83 %, N: 8,12··% '7 7 -Ij! : ·-.'·7 í i /77: i /7;\
F.,,gůl; NPrterc.hutylQxykarhqnyi-ŇT·’. ,·:
: .-methyl-L-fenylalanuiu s d-(,rr.]-K-. . rmethylbenzylaminem ;. . ·. . К 75 ml tetrahydrofuranu .se. přidá 13,26 # (0,05 mol) ,N7terc.;b,utymxykarbonyl-7fen.yI. aiarunu a : výsledná i ·: směs -ser. v: dusíkové atmosféře,, tpři, teplotě ;,0.°c7 přikape.::během 30. minut к suspenzi. 0,15, mol imtriumhyd. ridu;a,\ 0,5. g,;: jig-croívn-eiethpru.H 'míchané ,mechanickým;iBjlchadiem.·.Reakční směs ue .jqště,.další:I, hodinu míchá pfl·,.teplotě·,Q °q, pak se к ní během 15 minut, prikape voztok 6,23 : ml (0,1 .mol) . methyljedidu v, .15 ml tetrahydrofuranu, směs se nechá -2 hodiny reagovat, паёе^;.;8£1.,к:.Д1пРг1кдре> nejprve směs, 10 ml kyseliny. .petoyé h. lQ.vml tetrahydrofuraniji, a potom 20 ml ethanolu^. Výsledná. : směs 1 se vylije, na 400.,g. ..ledu, 1 p,H vodné fáze se přídavkem . 2.N hydroxidu sodného zvýší na hodnotu,,12 až,,1,3, vodná směs se.,dvakrát;extrahuje etheremupakise •přídavkem pevné, kyseliny, .citrónové okyselí na pH 3,0 a extrahuje s©,třikrát·,2.00 ml etheru. Etherické extrakty:,se,spojí,-extrahují se· vpdou, vysuší,,se síranem .horečná235072 tým a odpaří se ve vakuu na sirupovitý zbytek. Tento sirupovitý zbytek se rozpustí v 50 ml etheru, přidá se 6,44 ml (0,05 mol) d-( + )-a-methylbenzylaminu a po· zředění výsledného roztoku 350 ml hexanu se stěny nádoby poškrábou skleněnou tyčinkou. Odfiltrováním vyloučeného produktu se získá 15,83 g (70 % teorie) sloučeniny uvedené v názvu, která po překrystalování z ethylacetátu poskytne 13,70 g (68 % teorie) žádaného produktu o bodu tání 136 až 139 °C a optické rotaci [α]η25 = —28,23 (c = 1 v ethanolu).
Analýza: pro C23H32N2O4 (400,50) vypočteno:
C: 68,97 %, H: 8,05 °/o, N: 6,99 %;
nalezeno:
C: 68,75 %, H: 7,81 %, N: 6,74 %.
G. N“-terc.butyloxykarbonyl-Na-methyl-L-fenylalanyiamid
4,0 g (0,01 mol) N“-terc.butyloxykarbonyl-N'a-methyl-L-f enylalaninu [ připraveného okyselením odpovídající soli s d( + )-a-methylbenzylaminem a extrakcí etherem] se rozpustí ve 20 ml N,N-dimethylfo-rmamidu, směs se ochladí na —15 °C a přidá se k ní nejprve 1,56 ml (0,012 mol) isobutyl-chlorformiátu a pak 1,32 ml (0,012 mol) N-methylmorfolinu. Reakční směs se 10 minut míchá při teplotě —15 °C a pak se do· ní po dobu 1,5 hodiny uvádí bezvodý plynný amoniak. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě —15 °C, načež se vylije do nádoby obsahující 200 ml ledu. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem, organická vrstva se oddělí a postupně se promyje 1,5 N kyselinou citrónovou, vodou, 1N kyselým uhličitanem sodným a znovu vodou. Ethylacetátový roztok se vysuší síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu na sirupovitý zbytek, který po krystalizaci ze směsi etheru a petroletheru poskytne 2,12 g (76 % teorie) sloučeniny uvedené v názvu, o bodu tání 91 až 92 °C a optické rotaci [ajj^s —: = —111,2° (c = 0,5 v chloroformu).
Analýza: pro Cj5H22N2O3 (278,33) vypočteno:
C: 64,73 %, H: 7,97 %, N: 10,06 %; nalezeno:
C: 64,95 %, H: 7,81 %, N: 9,79 %.
H. NMerc.butyloxykarbonyl-O--benzyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N^-methyl-L-fenylalanylamid
K 20 ml čerstvě připravené ledové kyseliny octové obsahující bezvodý chlorovodík (1N) a 2 ml anisolu se přidá 1,95 g (0,007 mol) · · NQ;-terc.butyloxykarbonyl-Nl-methyl-L fenylalanylamidu, směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, načež se vylije do etheru. Odfiltrováním a vysušením vyloučené sraženiny se získá 1,5 g příslušného · hydrochloridu, který se rozpustí · ve 30 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. Roztok se ochladí na 0 °C, přidá se k němu 1,4 ml (0,007 mol) dicyklohexylaminu, směs se několik minut míchá, načež se k ní přidá 3,5 gramu (0,007 mol) N“-terc.butylo-xykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycinu, 950 miligramů (0,007 mol) 1-hydroxybenzotriazolu a 1,44 g (0,007 mol) N,Nť-dicyklohet xylkarbodiimidu. Reakční směs se míchá nejprve 2 hodiny při teplotě 0 °C, pak 24 hodiny při teplotě 4 °C, načež se ochladí na 0 °C a · zfiltruje se. Filtrát se zahustí ve vakuu na olejovitý zbytek, který se znovu rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se · postupně extrahuje 1N kyselým uhličitanem sodným, vodou, studenou 0,75 N kyselinou citrónovou a vodou, organická fáze se vysuší síranem horečnatým a zahustí se ve vakuu na olejovitý zbytek, který se chromatografuje na sloupci silikagelu (40 cm x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62) nasypaném v chloroformu. Sloupec se vymývá chloroformem obsahujícím stoupající podíl ·methanolu (až · do 10 procent methano-lu). Produkt se · izoluje z odebraných frakcí, které jej obsahují · podle chromatografie na tenké vrstvě. Získá se 3,55 g (77 · % · teorie] sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [i]d25 — —9,2° (c = 0,5 v methanolu).
Analýza: pro · C36H45N5O7 (659,8) vypočteno:
C: 65,54 %, H: 6,57 %, N: · 10,61 %; nalezeno:
C: 65,46 °/o, H: 6,58 %, N: 10,36 %.
l. Nα-terc.butyloxykaгOonyl-L-·lyrosyl-D-alanyl-glycyl-Na-methyl-L-fenylalanylamid
3,2 g (0,0485 mol) · produktu · připraveného v odstavci H se rozpustí v 60 ml · ethanolu a do · roztoku se přidá 1,5 g 5%· paládia na uhlí ve formě vodné suspenze. Do směsi se pomocí uváděčky plynu uvádí nejprve cca 5 minut dusík a pak 6 hodin vodík. Výsledná směs se propláchne dusíkem, paládiový katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí · ve vakuu na sirupovitý odparek. Sirupovitý odparek se rozpustí v chloroformu a nanese se na sloupec silikagelu (40 cm x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62). Produkt se vymývá chloroformem se stoupajícím obsahem methanolu (až do 10 · % methanolu) a frakce se sledují chromatografií na tenké vrstvě. Z příslušných frakcí se získá 2,0 g (74 % teorie) žádaného produktu o optické rotaci (ajn25 — —9,9° (c — 0,5 v
Analýza aminokyselin:
nalezeno:
Gly 1,01, Ala 0,99, Tyr 0,99, NH3 1,14.
J. Sů 1 L-tyoosyl-D-alanyl-glycyl-№-methyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou
1,6 g (0,00281 mol) produktu připraveného v odstavci I se rozpustí v 10 ml trifluoroctové kyseliny obsahující 0,5 ml anisolu. Výsledná směs se 30 minut míchá při teplotě 0 °C, pak se vylije do etheru a vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší. Získá se 1,1 g pevného produktu, který se rozpustí v příslušném množství vodného tlumivého roztoku (1 % pyridinu a 0,05 % kyseliny octové) na roztok o objemu 15 ml, který se nanese na sloupec (2,5 cm x 99 cm) iontoměniče dlethylaminoethyl-Sephadex
A-25 (acetátová forma), který byl ekvilibrován se stejným tlumivým roztokem. Eluát se kontroluje spektroskopicky při 280 nm. Příslušné frakce se spojí a lyofilizují. Opakovanou lyofilizací z 10% kyseliny octové a následující lyofilizací ze směsi vody a acetonitrilu (75 : 25) se získá 0,84 g sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [a]-25 = +27,8° (c = 1 v 1 N kyselině chlorovodíkové.
Analýza aminokyselin:
nalezeno:
Tyr 0,98, Ala 1,03, Gly 1,00, NH3 1,05.
Příklad 2
Příprava soli L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-a-methylfenylalanylamidu s kyselinou octovou
A. Tosylát benzylesteru L-a-methylfenylalaninu
Do 100 ml benzenu se vnese 3,0 g (0,0168 mol) L-a-methylfenylalaninu a k vzniklé suspenzi se přidá 3,5 g (1,1 ekvivalentu) hydrátu p-toluensulfonové kyseliny a 10 ml benzylalkoholu.
Směs se 4 dny vaří pod zpětným chladičem opatřeným Dean-Starkovým odlučovačem vody, pak se ochladí na teplotu místnosti a přidáním etheru se z ní vysráží žádaná sůl s kyselinou p-toluensulfonovou. Odfiltrováním a vysušením sraženiny se získá . 7,0 g (94 %) sloučeniny uvedené v názvu, o bodu tání 129 až 131 °C a optické rotaci [a]-25 — —10,7° (c — 0,5 v methanolu).
Analýza: pro C24H27NO5S (441,5) vypočteno:
N: 3,17 %,;
nalezeno:
N: 2,87 %.
B. Benzylester NMerc.butyloxykarbonyllO-bennyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-a-methylfenylalaninu
Do 80 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se vnese 5,74 g (0,013 mol) produktu připraveného v odstavci A. Směs se 5 minut chladí na 0 °C, načež se k ní přidá 6,5 g (13 mmol) №-terc.butyloxykarbonylΌ-benzyl-Ll-yrosyl-D-alanyllglycinu (připraveného jako v příkladu 1), 1,8 g (13 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 2,7 g (13 mmol) N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu.
Výsledná směs se 2 hodiny míchá při teplotě 0 °C, pak 24 hodiny při teplotě místnosti, ochladí se na 0 °C a vyloučená sraženina se odfiltruje. Filtrát se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu a ethylacetátový roztok se postupně extrahuje IN kyselým uhličitanem sodným, vodou, 0,75N kyselinou citrónovou a znovu vodou. Organická fáze se vysuší . síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu na olejovitý odparek, který po krystalizaci z etheru a překrystalování ze směsi ethylacetátu a etheru poskytne 7,0 g (72 %) sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci («·]-25 = + 7,9 0 (c = 0,5 v methanolu).
Analýza: pro CeHWijOg (750,86) vypočteno:
C: 68,78 %, H: 6,71 %, N: 7,46 %;
nalezeno:
C: 68,75 %, H: 6,46 %, N: 7,21 %.
C. Sůl N“--erc.butyloxykarbonyllL--yrosyll -Dlalanyllglycyl-Liα-methylfenylalanmu s dicyklohexylaminem
Do 50 ml ethanolu se vnese 4,0 g (0,0053 mol) produktu připraveného v odstavci A a pak se přidá 2,0 g 5% paládia na uhlí v Ν,Ν-dimethylformamidu. Do směsi se pomocí uváděčky plynu uvádí nejprve 5 minut dusík a pak 4 hodiny vodík. Výsledná směs se propláchne dusíkem, paládiový katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu na sirupovitý odparek. Tento sirupovitý odparek se nanese na sloupec silikagelu (10 cm x 2 cm, silikagel Grace and Davison Grade· 62). Sloupec se vymývá chloroformem se stoupajícím podílem methanolu (až do konečného poměru chloroform — methanol
20
9.5 : 0,5], Hlavní frakce se spojí, rozpouštědlo se odpaří, olejovitý odparek se rozpustí v ethylacetátu a k roztoku se přidá 1 mililitr dicyklohexylaminu. Odfiltrováním a vysušením vyloučené sraženiny se získá
2.6 ,g (65 %) sloučeniny uvedené v názvu, o bodu tání 142 až 146 °C a optické rotaci [w]d25 = + 46,3 ° (c — 0,5 v methanolu).
-alanyl-glycyl-L-.a-methylfenylalanylamid
2,0 g produktu připraveného v odstavci C (0,0027 mol) se neutralizuje směsí ethylacetátu a 0,75N kyseliny citrónové. Organická vrstva se oddělí, etxrahuje se vodou, vysuší se síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu na olejovitý odparek o hmotnosti 1,5 gramu. Výsledná volná kyselina se rozpustí ve 30 ml N,N~dimethyl.formamidu, roztok se v tlakové reakční nádobě ochladí na 0 stupňů Celsia, přidá se k němu 560 mg (0,0027 mol) N,N‘idicyklohexylkarbodiimidu a směs se míchá nejprve 4 hodiny při teplotě 0 °C a pak 3 hodiny při teplotě místnosti, Reakční nádoba se ochladí na —78 C, vnese se do ní 30 ml bezvodého amoniaku, nádoba se znovu uzavře a směs se 48 hodin míchá při teplotě místnosti.
Reakční směs se ochladí na —78 °C reakční nádoba se otevře, amoniak se nechá odpařit při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu, ethylacetátový roztok se extrahuje nejprve 0,75N kyselinou citrónovou a pak vodou, vysuší se síranem horečnatým· a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí v chloroformu a nanese se na sloupec silikagelu (3 cm x 4.5 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62). Sloupec se vymývá chloroformem se stoupajícím podílem methanolu (až do výsledného poměru chloroform — methanol 9:1). Odpovídající frakce (podle analýzy chromatografií na tenké vrstvě) se spojí a rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá 1,1 g (72 · %) sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [iq*]dJ5 = —26° (c = 0,4 v methanolu).
Analýza aminokyselin:
nalezeno:
Gly 0,99, Ala 1,00, Tyr 0,99, NH3 1,12.
E. Sul L-tyrosyliD-alanyliglycyliL-a-methyli fenylalanylainidu s kyselinou octovou
K směsi (20 ml) IN plynného chlorovodíku v ledové kyselině octové, obsahující 0,3 mililitru anisolu, se přidá 900 mg (0,0016 mol) produktu připraveného v odstavci D. Reakčn ísměs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, pak se vylije do etheru, vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší se. Získá se 720 mg pevného produktu, který se rozpustí v příslušném, množství vodného tlui mivého roztoku (1 % pyridinu a 0,05 % kyseliny octové] na roztok o objemu 5 ml a výsledný roztok se nanese na sloupec (2,5 centimetru x 99 cm) iontoměniče diethyk amincethyllSephadex A—25 (acetátová forma), předem ekvilibrováného s tímtéž pufi rem. Eluát se sleduje spektroskopicky při 280 nm, příslušné frakce se spojí a lyofilízují. Opakovanou lyofilizací z 10% kyseliny octové a následující lyofilizací ze směsi vody a acetonitrilu (75 : 25) se získá 400 miligramů sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [«Jd75 — 4 23,9° (c — 0,5 v IN kyselině chlorovodíkové).
Analýza; pro (529,60) vypočteno:
C: 58,97 %, H: 6,66 %, N: 13,22 ·%, O: 21,15 proč.;
nalezeno:
C: 59,02 %, H: 6,36 %, N: 12,99 %, O: 21,41 proč.
Analýza aminokyselin:
nalezeno:
Tyr 0,96, Ala 1,01, Gly 1,00, NH3 1,03.
Příklad 3
Příprava soli L-tyrosyliD-alanyliglycyliNKijii ipropyliL-fenylalanylamidu s kyselinou octovou
A. Níl:^tl^:.Lл.l·tAιCc^xykalύκ)г^y’]-^í''..nlp^pylμ iL-fenylalanin
Do 70 ml tetrahydrofuranu se vnese 10,6 gramu (0,04 mol) N^Merc.butyloxykarbonyli iL-fenylalaninu.
Směs se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá během 30 minut k mechanicky míchané suspenzi 0,12 mol kaliumhydridu ve 220 mililitrech tetrahydrofuranu a 0,5 g 18 icrowniG-etheru, výsledná směs se dalších 10 minut míchá při teplotě 0 °C, načež se k ní během 20 minut přikape roztok 23,3 ml (0,24 mol) 1-j-ódpropanu ve 40 ml tetrahydrofuranu. Směs se nechá 2,5 hodiny reagovat při teplotě 0 °C, _ pak se k ní přidá dalších 11,5 ml (0,12 mol) 1-jódprcpanu, reakční směs se další 2 hodiny míchá při teplotě 0 CC, přidá se k ní 10 ml ledové kyseliny octové a po desetiminutovém míchání se výsledná směs vylije na drcený led. Přídavkem 2N hydroxidu sodného se pH vodné fáze zvýší na hodnotu 8,0, vodná směs se dvakrát extrahuje etherem, pak se přidáním studené 2N kyseliny chlorovodíkové okyselí na pH 2,5 a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se jednou promyjí vodou, vysuší se síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu. Sirupovitý odparek se rozpustí ve 200 ml etheru a k roztoku se přif dá 8 ml (0,04 mol) dicyklohexylaminu. Vyloučená sraženina se odfiltruje a filtrát se jednou extrahuje 1,5N kyselinou citrónovou a vodou. Etherická vrstva se vysuší síranem horečnatým a odpaří se ve vakuu na olejovitý zbytek, který se chromatografuje na sloupci silikagelu (40 cm x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62 j v chloroformu. Eluce produktu se provádí chloroformem se stoupajícím podílem, methanolu (až do 5 % methanolu j. Složení frakcí se sleduje chromatograflí na tenké vrstvě. Příslušné frakce se spojí a odpaří se, čímž se získá 3,6 g (31 % · ,teorie) sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [a]D 25 -= —153,3 o (c = 1 v methanolu).
NMR:
<[— CO.H) 10,47;
ó(Me3C—) =- 1,50.
Analýza: pro CnHojNOj (307,4) vypočteno:
C: 66,43 %, H: 8,20 %, N: 4,56 %;
nalezeno:
O: 66,16 %, 11: 7,99 %, N: 4,45 %.
B. Nl-terc.butyloxykarbonyl-Na-.n-propyl-L-řenylalanylamid
Nf-terc.butyloxykaib)oiiyl-N'cn-propyl-L-fenylalanin (připravený v odstavci A) se rozpustí v Ν,Ν-dimethylformamidu, směs ss ochladí na —15 °C a přidá se k ní nejprve 1 ekvivalent isobutyl-chloroformiátu a pak 1 ekvivalent N-methylmorfolrnu. Výsledná směs se 10 minut míchá při teplotě —15 °C, načež se do ní po dobu 30 minut uvádí bezvodý plynný amoniak. Reakční směs so 1 hodinu míchá při teplotě —15 CC a pak se vylije ' do nádoby obsahující 200 ml ledu. Vodný roztok se extrahuje ethylacetátem, organická vrstva se oddělí a postupně se promyje 1,5N kyselinou citrónovou, vodou, IN kyselým uhličitanem sodným a znovu vodou. Ethylacetátový roztok se vysuší síranem hořečnatým a odpaří se ve vakuu, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu.
C. N“-terc.butyloxykarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycylfN'z-n~propyl-L-fenylalanylamid
Do 20 ml čerstvě připravené ledové kyseliny octové, obsahující bezvodý chlorovodík (IN) a 2 ml anisolu, se vnese 1 ekvivalent NMercbu tyloxyk arb ony--N a-n-prop yl-L-fenylalanylamidu. Výsledná směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, pak se vylije do etheru, vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší se. Získaný hydrochlorid se rozpustí ve 30 ml Ν,Νfdimethylformamidu, roztok se ochladí na 0 °C a přidá se k němu 1 ekvivalent dicyklohexylaminu. Směs se několik minut míchá, načež se k ní přidá 1 ekvivalent NMerc.butyloxykarbonyl-O-benzy^--: yrosyl-D-alanyl-glycinu (připraveného postupem podle příkladu 1Ε), 1 ekvivalent lhydroxybenzotriazolu a 1 ekvivalent Ν,Ν -dicyklohexylkarbodiimidu.
Reakční směs se míchá nejprve 2 hodiny při teplotě 0 °C, pak 24 hodiny při teplotě 4 °C, načež se ochladí na 0 °C a zfiltruje se. Filtrát se ' zahustí ve vakuu na olejovitý odparek, který se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se postupně extrahuje IN kyselým uhličitanem sodným, vodou, studenou 0,75 N kyselinou citrónovou a znovu vodou, organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu na olejovitý zbytek. Tento olejovitý zbytek se chromatografuje na sloupci silikagelu (40 cm x x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62) v chloroformu.
Produkt se ze sloupce vymývá chloroformem obsahujícím stoupající množství methanolu (až do 10 % methanolu). Složení odebíraných frakcí se sleduje chromatografií na tenké vrstvě. Příslušné frakce se spojí a izoluje se z nich N,7-terc.butyloxykarbonylfO-benzyl-L-tyгosyl-D-alanyl-glycyl-Nαf -n-propyl-L-fenylalanylamid.
Produkt z výše uvedeného odstavce se rozpustí v 60 ml ethanolu a do směsi se přidá 1,5 g 5% paládia na uhlí ve formě vodné suspenze. Do· reakční směsi se za pomoci uváděčky plynu uvádí nejprve cca 5 minut dusík a pak 6 hodin vodík. Výsledná směs se propláchne dusíkem, paládiový katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Sirupovitý odparek se rozpustí v chloroformu a vnese se na sloupec silikagelu (40 cm x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62).
Produkt se ze sloupce vymývá chloroformem se stoupajícím podílem methanolu (až do 10 % methanolu) a složení frakcí se sleduje chromatografií na tenké vrstvě. Odpovídající frakce se spojí a izoluje se z nich sloučenina uvedená v názvu, o optické rotaci [ajn25 = —34,8 ° (c = 0,5 v methanolu).
Analýza: pro (597,7) vypočteno:
C: 62,29 %, II: 7,25 %, N: 11,72 · %;
nalezeno:
C: 62,13 %, H: 7,24 %, N: 11,70 %.
D. Slil L-tyrosyl-D-alanyl-glycyf-N '-n-propyl-L--enylalaIlylamidu s kyselinou octovou
800 mg (1,34 mmol) produktu připraveného v odstavci C se rozpustí v 10 ml kyseliny trifluoroctové obsahující 0,5 ml anisolu. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě 0 °C a pak se lyofilizuje. Pevný zbytek se rozpustí v příslušném množství vodného tlumivého --roztoku; ,{l:e - - .-pyridinu - a -- 0,05 - % kyseliny - octové) - na - roztok .o objemu 10 ml, < který - se - - nanese na - - sloupec (2,5 - cm x - 99 centimetrů) - -iontoměniče diethylaminoethyl-Sephadex A—25 - {acetátová - - - forma], - ekvilibrovaného se stejným tlumivým roztokem. Eluát se sleduje! spektroskopicky -při - 280 nm. Příslušné frakce se spojí a lyofylizují.
Opakovanou lyofilizací z 1M kyseliny - - octové- - se získá - '655' - mg· - sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [a]D 25 = —11,0° {c = 0,5 v IN kyselině chlorovodíkové).
Analýza: pro С2«Нз<№07 {557,6) vypočteno:
C: 60,31 %, H: 7,05 %, N: - 12,56 - %;
nalezeno:
.Ыт- O:- - - 6032/3-H: - - 6,98 - - %,- N: 12,49 - %.
-Analýza; aminokyselin·:;· - - 0 > - nalezeno: - ... - ' ; u : - Tyr - - 0,99, - - Ala . - 1,00, - Gly - · 1,01,- -NH - 0,96.
Přikládá - ..·’. .•чтх.:
Příprava:: soli L-tyi^Oísyl-D^-alany 1-glycyl-N '-ethyl-rHenylalanylaniidu- - -s kyselinou octovou - A.· N --b-utyloxykarbonyl-N е-et^tlLyi-^^^-^í^i^nyl- alanin - - - m - .-и·.,. ; .
x; - - Do - 70 - - ml - - tetrahydrofuramr -se vnese -10,6 •-gramu ·; - {0,04 - - mol) - - N “-butyloxykarbonyl-lu-fenylalaninu . - a směs - se ;v - dusíkové - atmo-sféře při - teplotě ..- O: - °G- - přikape - - během - 30 - minut k mechanicky - - míchané - suspenzi - - 0,12 - mol - kaliumhydrid.u - ve;-220 -ml - tetrahydrof uranu - - a 0,5ι -g; 1BrciOwn-6^etheru.: Výsledná- - směs se dalších 10 - - minut - míchá . -při - - teplotě- - O . - °C, pak se - -. k, ní, během -. 20 - - minut - přikape. -roztok 19,4 - ml - {0.24- - mol) - ethyl jod idu ve -40 - ml - - tetnah^^drofuranu, směs -se - - - nechá - - -4 - hodiny reagovat při teplotě 0 CC, načež se k - ní - - ve idvou;· stejných: - dávkách.; - - přidá, dalších . - - - 19,4 mililitrů - - {0,24 - - mol ) - - - ethy^ljodidu. - - Reakční směs --se i- ještě 2 ; -hodiny- míchá- - při - teplotě- 0 stupňů - Celsia,. pak;- - se; k ní -přidá; 10 - . ml - -ledové kyseliny octové, výsledná - - směs - - se 10 minut - - míchá - a - - pak - se> - vylije na - -400 ml- drcenéhO'Hledu·;.Přidáním- ; -2N, hydroxidu - sodného se -pH- vodné - fáze - zvýší - na-hodnotu 8,0, vodná - - směs < se - - dvakrát - - extrahuje - etherem, pak se - přídavkem - studené - - 2N - kyseliny- chlorovodkkvvn! okyselí na- - -pH: 2,5 - - a extrahuje se -ethylacetátem. - - Extrakt, - - se - promyje - - vodou, - - vysuší - se: - síranem- horečnatým - a odpaří. - se - ve- vakuu. - - Sirupovitý- - odparek se . rozpustí - -ve - -200- - ml - etheru - a - k: - roztoku se - .přidá; - 8 - - ml - - [0,04 - - mol·)? - dicyklohexylaminu.
Sraženina se.< - odfiltruje - . a - filtrát se - extrahuje 1,5 N kyselinou citrónovou - a vodou. Etňerická vrstva se vysuší síranem hořecnatým a odpaří - se ve - - vakuu, - čímž - se- - získá
4,6- -g .[39 %/o teorie - - sloučnem- uved!né v názvu, uXXh ·.; - x
NMR: ; — 'óífenyl) - = 7,2, -5{Me4COC.— ) = - 1,4. - . : -. 7 X . : . ;.mk < ·. O : .0
B. N-tθгc.butyloxykarbenyS-№-ethylнL- -.
-fenylalanylamid -·.
4,3 - g - {0,0146 - - mol) NMerc.butylexykarbenyl-N -eth yl-L-fenylalamnu - - {připrave něho· v odstavci - - A) - - se - rozpustí .v - 60· - ml N;bhdímethylf ormamidu,- · směs· ·- se. - - ochladí- > ná - - 0 - °C - - a přidá - se . k - ní - 3,0- - g? - {0,0146 - mol). - N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu.· - Reakční - směs - --se míchá ještě - 2 - hodiny - při -teplotě - 0 - -°C- - - a pak 72- - hodiny- při -teplotě.- místnosti, načéž - - se- ochladí na - 0 - °C - a - zfiltrojč - se. : ! - - - --.- o - m· - - -: - . Filtrát - se - : zahustí - - ve vakuu - na- oléjovitý odparek, - - který - - -se - -rozpustí - v - ethylacčtáto. •Roztok- se - extrahuje - IN kyselým - uhličitanem sodným, - vodou, - studenou 1,5N - kyselinou - citrónovou - a - znovu - vodou, - - organická - - fáze - se vysuší - síranem - horečnatým - a zahustí - se.
Získá - - se - - 3,93 - g - - {91 - % - teorie.)- - sloučeniny ; uvedené- v - názvu, - o - - optické - rotaci - [α)0 --= = -—101,51 ° {c - - 1 v methano-lu).; ;
Analýza: pro- C^H^N^- (292,4) -: - :: ; - - - Λ vypočteno·:•mnmm
C: 65,73 - %,- -H:- -8,27- %,. - N:- -9,58 %;
nalezeno:;
C: - 66,03 - %, - H:- - 8,13 %.- -N:- - 9,85 %.
C. Sůt -N^-ethyl-L-fenylalanylamídu x
- s - kyselinou- - chlorovodíkovou - - - - - - - - ?
3,5 - -g - - {11,95 mmol) - - N<--teгc:·butySe:xykaFbenyl-№-ethyl-L-f enylalanylamidu- {přípravm ? ného - - postupem - podle - - odstavce - - B) - - - se - -rozpustí vé. 40- ml- - - čerstvě - - připravené - - ledové kyseliny octové - - obsahující - - bezvodý- chlorovodík - {IN), - 1,5. ml - anisolu;a - . 1,5 - - ml triethylsilanu.- - - - Výsledná - směs -- - se. 30 - minut - míchá při - teplotě - - místnosti, - -pak - -se· - vylije - do ? etheru, - - vyloučená - . sraženina· - se - odfiltruje - - a - - vysuší - se. - Získá se - -2,6 -g - - {96 - - % - teorie) - slouče niny - uvedené - v - - názvu, - - o- bodu tání - -276- až 277 -C. - - i.s . : ; ' .. - ? -m -rm·
Analýza:.pro Cí1H1gN2OCS -(.227,7^- mm vypočteňo:· X; .·; S ' C: - 58,02 %, H: 7,08; - %, - --N:- 12,30 %;
nalezeno:-n C: .- 57,97 - %, H: - 7,26 - - %,- -N: - 12,54 - -%.
D. -· NMelmbutyloxykaгbenyl--L-tyi.osyl-D- - -;
-aSanyS-gSycyS-Nκ-ethyl-L-fenylalanylamld
Do 50 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se vnese 1,14 g (0,005 mol) soli N*-ethyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou chlorovodíkovou (připravené v odstavci C). Směs se ochladí na 0 °C a přidá se k ní 2,95 g (0,005 mol) soli NMerc.butyloxykarbonyl-L-tyrosyl-D -alanyl-glycinu s dicyklohexylaminem. Výsledná směs se 5 minut míchá při teplotě 0 °C, načež se k ní přidá 675 mg (0,005 mol) 1-hydro-xybenzotriazolu a 1,03 g (0,005 mol) N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu.
Reakční směs se míchá nejprve 6,5 hodiny při teplotě 0 °C a pak 20 hodin při teplotě místnosti, načež se ochladí na 0 °C a zfiltruje se. Filtrát se zahustí ve vakuu na olejovitý odparek, který se znovu rozpustí v ethylacetátu. Roztok se extrahuje IN kyselým uhličitanem sodným, vodou, studenou 1,5N kyselinou ' citrónovou a znovu vodou, organická fáze se vysuší síranem horečnatým a zahustí se ve vakuu. Olejovitý zbytek se chromatografuje na sloupci sllikagelu (40 cm x 3 cm, silikagel Grace and Davison Grade 62) v chloroformu. Produkt se ze sloupce vymývá chloroformem se stoupajícím podílem methanolu (až do 15 % methanolu) a složení frakcí se sleduje chromatografií na tenké vrstvě. Z příslušných frakcí se izoluje 1,13 g (39 % teorie) sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [α]025 = —21,(3° (c — 0,5 v methanolu).
Analýza: pro CyoH/jN^ (583,7) vypočteno:
C: 61,73 %, H: 7,08 %, N: 12,00 %; nalezeno:
C: 60,35 %, H: 7,26 %, N: 11,25 %.
E. Sůl LHyiosyl-D-aIanyl-glycyl-N-ethyF -L^-^ť^i^^^l^l^lanylamidu s kyselinou octovou g (1,71 mmol) produktu připraveného v odstavci D se rozpustí ve 20 ml trifluoroctové kyseliny obsahující 3 ml anisolu a 3 mililitry triethylsilanu. Směs se 30 minut míchá při teplotě 0 °C, načež se vylije do etheru. Vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší. Takto se získá 660 mg pevného· produktu, který se rozpustí v příslušném množství vodného tlumivého roztoku (1 % pyridinu a 0,05 % kyseliny octové) na roztok o objemu 10 ml a tento roztok se nanese na sloupec (2,5 cm x 90 cm) iontoměniče diethylaminoethyl-Sephadex A—25 (acetátová forma), který byl ekvilibrován se stejným tlumivým roztokem. Eluát se sleduje spektroskopicky při 280 nm. Příslušné frakce se spojí a lyofilizují, pevný produkt se rozpustí v 10 ml 0,2M kyseliny octové a roztok se chromatografuje na sloupci (2,5 cm x x 99 cm) iontoměniče G—10 Sephadex, který byl ekvilibrován s tímtéž rozpouštědlem.
Eluát se sleduje spektroskopicky při 280 nm. Spojením a lyofilizací příslušných frakcí se získá 448 mg (48 % teorie) sloučeniny uvedené v názvu, o optické rotaci [«.]d25 — —10,6° (c = 0,5 v IN kyselině chlorovodíkové).
Analýza: pro C27H37N5O7 (543,6) vypočteno:
C: 59,65 %, H: 6,86 %, N: 12,88 %;
nalezeno:
C: 59,41 %, H: 7,26 %, N: 13,18 %.
Analýza aminokyselin:
nalezeno:
Tyr 1,03, Ala 0,99, Gly 0,97, NH3 0,98.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou užitečné jako analgetika. Analgetickou účinnost sloučenin obecného vzorce I dokládá test na myších na horké desce. Při tomto testu se myš umisťuje do vzpřímeného válce z akrylové pryskyřicec na jehož dnu je horká deska udržovaná na teplotě 52 °C. Pokusné myši se subkutánně aplikuje předem stanovené množství testované sloučeniny rozpuštěné nebo suspendované ve vhodném nosiči. Po aplikaci testované sloučeniny se nechá uplynout určená doba a myš se pak položí na horkou desku. Zaznamenávají se doby latence (v sekundách) než myš začne reagovat dvojím níže popsaným způsobem. Jako první doba latence se měří časový interval do doby, než si myš začne olizovat zadní tlapku a jako druhá doba latence pak časový interval do doby, než se mys snaží z horké desky uniknout výskokem. Činidlo vykazující analgetickou účinnost prodlužuje tyto doby latence v porovnání s intervaly naměřenými u kontrolní myši, jíž byl injekčně aplikován pouze nosič. K tomuto prodloužení však musí dojít v takovém rozmezí dávek, které ještě nezpůsobuje motorickou inkoordinaci nebo neschopnost pohybu.
Výsledky dosažené při tomto testu jsou uvedeny v následujících tabulkách v porovnání s výsledky dosaženými s kontrolními zvířaty, jimž byl aplikován pouze roztok chloridu sodného. V tabulce I jsou uvedeny doby latence do olizování zadní tlapky (doba latence I), v tabulce II pak doby latence do výskoku myši z horké ' desky (doba latence II). Kritérium prokazatelného analgetického účinku je následující: doba latence I a doba latence II u ošetřeného zvířete musí byt stejná nebo vyšší než průměrná doba latence u kontrolního zvířete plus dvě standardní odchylky od průměru. Každý z výsledků uvedených v tabulkách I a II představuje průměrnou hodnotu plus nebo minus standardní chybu.
o co
CM Ф φ CM гк ’Г см Ч гЧ СО UO У) о? со со со СО Чем СМ гЧ ČQ о о Ч. гЧ СО со СХ СО' со со со со гч гЧ ю О
+1 i -н+1+1-н i 1 +1+1 1 +1+1 i +I+I+I+I ι+ι 1 +1
’ф CQ СМ СМ~Ф Ф *Ф CD гЧ О' СО гЧ о
Г г-Г со см О со cd со оГ о о ю оо о
Ф гЧ тЧ gs ф м т-Ч со со Ш Ф СО со см см ю ф см
co analgetická účinnost [doba latence I v sekundách)
W)
Ίί) £ cd > 'tú xd
co o~
СО СО СМ~ СО' со см чч см Ч см
см о. см см см о»
+1+1 i i i lili +1+1 i i i i 1 1 1 1 +1 |+1
ЧЧ isin ч см
со оо по о ю ф
оо ф СО Ф со ю
Ч U0 со ф со Ч
см см см оо
+1 i i i i 1 1 | 1 +1 || 1 i i i i+l ι+ι
со оэ ф ч
со ф см см
со 00 со ф
о ю см тЧ Č0 о со ОО см Ч см
+1+11 | i 1 1 +11 i i ι+ι ι+ι
Ф~ о О'
о ф CD^ см см
см 00 гЧ 00 оо со
o t-H d o
4 4 Ч 4 4 4 4 °1 °l <4 <4 4 4 4 4 4 4 r-ч СО CM CM o o 00 H rd тГ гч ζθ CO тЧ CM См Г-Г 1-4 Т-Г Г-Γ cm tH +I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I CD Ф^ Ф~ CM CMI СП, O CD см ’Ф CO 0O~ CD O O~ O Ф^ rd CM !>. Co гч co cm oo oo cd ю со о гч cd cd ю o o co oo СО со о ю СМООООООСМСМСМСМСМСМООСМСМСМСОСОСМСМСМСМООСМ cd cd rQ o xd o S 77 to φ .5 й » e Д cd . . a4- cd юююоооююоююооюооооюююю гЧгЧгЧСОСООгЧгЧСМгЧгЧСОСОгЧСООСМСМтЧгЧгЧтЧ
CQ o CO
rH rH х-Н тЧ co s OO OD «-Ч x—< O bx TF bx^ CO CM CM CM U0 OO bx~
cd cm cm ^d cd t< bx cd cd oo bx ud rH CM o
rH rH rH rH rH rH
+1 ι +I+I+I+11 ι +1+11 ι +1+1 1 +I+I+I+I i+i i+i
00 CM^O^CM^ bx^CM^ CO CO '’Φ rH sil o o
см bx cd uo o *d cd oo CD *φ cd ^d co bx
CM CO CO O rH O CM rH 00 00 co O CM CO
CM CM rH rH rH t—1 CM CM rH rH CM CM
CO analgetická účinnost (doba latence II v sekundách) 'ob £ ca > 'Ctí
CO o*
-rH 4 o LO CM CO
5 cd bó oo bx cd
rH rH rH rH rH rH
+1+1 1 1 1 N11 +1+1 U 1 1 ι ι ι i+i i+i
rH ’ЧЧ O Τφ
oo ° см ^d uo co
00 uo *Ф uo rH
rH rH rH rH rH CM
Νγ CM~ cm CD
ud rH *d ud
CM t—1 rH
+i ι ι ι i 1 1 1 1 +1 1 1 1 ι ι i i+i ι +i
id 04 CD r^
co cm o uo
CM t—1 CM oo
CM x-4 bx^ *^d oo oo td~ +1+11
CM (O
CSD bx CM o
CMCM
IDbx uouo rHrH
I +1 I +11 °l·CM rH n см r-4 o jh
4-J tí o rH rH oo co σγ т-^ cm to oo cd cd t-η со оэ cm~ id bx^ rd cd M co oo od co cd *d uo o *d *d cd uo uo to <d bd uo td t>?
+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I+I
Μ °4 4 Μ. M °° °° 4 ^4 °4 ’Ч 4 M Ч 4 M oo cm o o o cd cd cd cd oo cm oo oo oo cd cd cd cd cm ud oo cd SřlCDOOCDOOOObxCDCD^CDbxbxCDUOUOř-xCDCDbxCDbx
ω
2350
Poznámky к tabulkám I а II:
a) číslovky „1“, „2“ а „3“, psané jako indexy u některých hodnot v tabulce označují, že daný výsledek je statisticky významný pro P < 0,001, P < 0,01 resp. P < 0,05.
b] velká písmena označují následující sloučeniny:
В ~ sůl L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-a-methylfenylalanylamidu s kyselinou octovou
C = sůl L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-Na-n-propyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou
D = sůl L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-NK-ethyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou.
A = sůl L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-Na-methyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou

Claims (7)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU ve kterém
    ........· c
    L a D, tam kde je to vhodné, definují chiralitu,
    R3 představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,
    R4 představuje atom vodíku nebo primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a
    R5 znamená atom vodíku nebo primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, s tím, že jeden ze symbolů R4 a R5 znamená vždy primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a druhý atom vodíku, a jejich farmaceuticky upotřebitelných netoxických adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se ze sloučeniny odpovídající obecnému vzorci I, v němž jsou aminoskupina nebo/a hydroxyskupina v L-tyrosylovém zbytku vhodným způsobem chráněny, odštěpí chránící skupiny působením kyselého prostředí vybraného ze skupiny zahrnující kyselinu trifluoroctovou. ledovou kyselinu octovou s plynným chlorovodíkem a kyselinu mravenčí.
  2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se použijí výchozí látky, v nichž R/, znamená primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku.
  3. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se použijí výchozí látky, v nichž R5 znamená primární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku.
  4. 4. Způsob podle bodu 1. к výrobě soli L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N --methyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou, vyznačující se tím, že se Na-terc.butyloxykarbonyi-L-tyrosyl-D-alanyl-glycvl-N-methyl-L-fenylalaoylamid nechá reagovat s kyselinou trifluoroctovou a výsledný produkt se lyofilizuje z kyseliny octové.
  5. 5. Způsob podle bodu 1, к výrobě soli L4уго5у1-О-а1апу1-с?1усу1-ь-с/-те№уИепу1а1аnylamidu s kyselinou octovou, vyznačující se tím, že se N‘-terc.butyloxykarbonyl-L-tyrosylD-alanyl-glycyl-L-rx;-methylfenylalanylamid nechá reagovat s chlorovodíkem v ledové kyselině octové a výsledný produkt se lyofilizuje z kyseliny octové.
  6. 6. Způsob podle bodu 1, к výrobě soli L-tyrosyl-D-alcnyl-glycyl-NY-n-propyl-L-fenylalanylamídu s kyselinou octovou, vyznačující se tím, že se Na-terc.butyloxykarbonyl-Ii-tyrosyl-D-alanyi-glycyl-N^-n-propyl-L-fenylalanylamid nechá reagovat s chlorovodíkem v ledové kyselině octové a výsledný produkt se lyofilizuje z kyseliny octové.
  7. 7. Způsob podle bodu 1, к výrobě soli L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-KP-ethyl-L-fenylalanylamidu s kyselinou octovou, vyznačující se tím, že se NMerc.butyloxykarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N^-ethyl-L-fenylalanylamid nechá reagovat s kyselinou trifluoroctovou a výsledný produkt se lyofilizuje z kyseliny octové.
CS786285A 1977-10-03 1978-09-28 Method of l-tyrosyl-d-alanyl-glycyl-l-phenylalanylamide's new derivatives production CS235072B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/838,516 US4264491A (en) 1977-10-03 1977-10-03 Analgesic compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS235072B2 true CS235072B2 (en) 1985-04-16

Family

ID=25277291

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS786285A CS235072B2 (en) 1977-10-03 1978-09-28 Method of l-tyrosyl-d-alanyl-glycyl-l-phenylalanylamide's new derivatives production

Country Status (33)

Country Link
US (1) US4264491A (cs)
EP (1) EP0001684B1 (cs)
JP (1) JPS5459247A (cs)
AR (1) AR224238A1 (cs)
AT (1) AT367028B (cs)
AU (1) AU520315B2 (cs)
BE (1) BE870819A (cs)
BG (1) BG31224A3 (cs)
CA (1) CA1156219A (cs)
CH (1) CH635571A5 (cs)
CS (1) CS235072B2 (cs)
DD (1) DD139710A5 (cs)
DE (1) DE2861019D1 (cs)
DK (1) DK149231C (cs)
EG (1) EG13636A (cs)
ES (1) ES473925A1 (cs)
FI (1) FI66842C (cs)
FR (1) FR2404629B1 (cs)
GB (1) GB2005688B (cs)
GR (1) GR71651B (cs)
HU (1) HU182866B (cs)
IE (1) IE47378B1 (cs)
IL (1) IL55650A (cs)
IT (1) IT1100839B (cs)
LU (1) LU80316A1 (cs)
NZ (1) NZ188521A (cs)
PH (1) PH14660A (cs)
PL (1) PL114271B1 (cs)
PT (1) PT68598A (cs)
RO (1) RO76176A (cs)
SU (1) SU908246A3 (cs)
YU (1) YU231578A (cs)
ZA (1) ZA785564B (cs)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI770219A7 (cs) 1976-02-02 1977-08-03 Sandoz Ag
US4331593A (en) * 1977-10-03 1982-05-25 Smithwick Jr Edward L Analgesic compounds
US4333873A (en) 1979-12-17 1982-06-08 Eli Lilly And Company Pharmacologically active peptides
US4283330A (en) * 1979-12-17 1981-08-11 Eli Lilly And Company Pharmacologically active peptides
US4265808A (en) * 1979-12-17 1981-05-05 Eli Lilly And Company Pharmacologically active peptides
JPS5692846A (en) * 1979-12-27 1981-07-27 Takeda Chem Ind Ltd Tetrapeptide derivative and its preparation
FR2488253A1 (fr) * 1980-08-08 1982-02-12 Roques Bernard Nouveaux peptides et leur application en therapeutique
JPS5738756A (en) * 1980-08-18 1982-03-03 Earth Chem Corp Ltd Tripeptide alkylamide derivative
JPS5785349A (en) * 1980-11-14 1982-05-28 Earth Chem Corp Ltd Tripeptide alkylamide derivative
US4322340A (en) * 1980-10-20 1982-03-30 Eli Lilly And Company Pharmacologically active peptides
JPS5772950A (en) * 1980-10-24 1982-05-07 Takeda Chem Ind Ltd Tetrapeptide derivative, its preparation and analgesic agent
ATE16495T1 (de) * 1981-06-22 1985-11-15 Ici Plc Peptide und pseudopeptide, die zwei substituenten am n-terminus aufweisen.
US4448717A (en) * 1982-11-12 1984-05-15 Eli Lilly And Company Pharmacologically active peptides
US4495178A (en) * 1983-10-06 1985-01-22 G. D. Searle & Co. Enkephalin analogs

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1042487A (en) * 1964-06-25 1966-09-14 Ici Ltd Polypeptide derivatives
HU184704B (en) * 1976-01-26 1984-10-29 Wellcome Found Process for preparing biologically active encephaline analogues
GB1532181A (en) * 1976-02-02 1978-11-15 Beckman Instruments Inc Pentapetides and a method of preparing them
FI770219A7 (cs) * 1976-02-02 1977-08-03 Sandoz Ag
US4028319A (en) * 1976-05-07 1977-06-07 G. D. Searle & Co. 2 and 3-substituted enkephalins
FR2359817A1 (fr) * 1976-07-27 1978-02-24 Reckitt & Colmann Prod Ltd Nouveaux peptides, leur procede de preparation et composition therapeutique les contenant
DK326477A (da) * 1976-07-27 1978-01-28 Reckitt & Colmann Prod Ltd Kemiske forbindelser og fremgangsmade til fremstilling af samme
US4259234A (en) * 1976-09-27 1981-03-31 Eli Lilly And Company Analgesic compounds

Also Published As

Publication number Publication date
EG13636A (en) 1982-03-31
IT7828359A0 (it) 1978-10-02
EP0001684A2 (en) 1979-05-02
IE47378B1 (en) 1984-03-07
YU231578A (en) 1982-10-31
US4264491A (en) 1981-04-28
PH14660A (en) 1981-10-20
FI66842B (fi) 1984-08-31
FI66842C (fi) 1984-12-10
RO76176A (ro) 1981-11-04
AU520315B2 (en) 1982-01-28
DK149231C (da) 1986-08-18
DK434778A (da) 1979-04-04
GB2005688B (en) 1982-02-24
SU908246A3 (ru) 1982-02-23
IE781926L (en) 1979-04-03
BG31224A3 (bg) 1981-11-16
AR224238A1 (es) 1981-11-13
DD139710A5 (de) 1980-01-16
GR71651B (cs) 1983-06-20
ES473925A1 (es) 1980-01-16
EP0001684B1 (en) 1981-09-02
EP0001684A3 (en) 1979-06-27
LU80316A1 (fr) 1979-03-16
PL114271B1 (en) 1981-01-31
DE2861019D1 (en) 1981-11-26
NZ188521A (en) 1981-07-13
FR2404629A1 (fr) 1979-04-27
FR2404629B1 (fr) 1985-12-27
AU4024778A (en) 1980-04-03
ATA708778A (de) 1981-10-15
IT1100839B (it) 1985-09-28
JPS5459247A (en) 1979-05-12
BE870819A (fr) 1979-03-28
HU182866B (en) 1984-03-28
AT367028B (de) 1982-05-25
PT68598A (en) 1978-10-01
ZA785564B (en) 1980-05-28
PL210045A1 (pl) 1979-06-18
CH635571A5 (fr) 1983-04-15
DK149231B (da) 1986-03-24
FI782971A7 (fi) 1979-04-04
GB2005688A (en) 1979-04-25
IL55650A (en) 1982-02-28
CA1156219A (en) 1983-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6255285B1 (en) Phenethylamine derivatives
US3832337A (en) Peptide enzyme inhibitors
US4259234A (en) Analgesic compounds
EP0148133B1 (en) Tripeptide compounds containing pyroglutamic acid and tryptophan, process for their production and therapeutic applications
US6235876B1 (en) Liquid phase process for the preparation of GNRH peptides
CS235072B2 (en) Method of l-tyrosyl-d-alanyl-glycyl-l-phenylalanylamide&#39;s new derivatives production
US4510082A (en) Pharmacologically active peptides
US4322339A (en) Pharmacologically active peptides
PL131155B1 (en) Process for preparing novel peptides
EP0282891A2 (en) New thymopentin retro-inverso analogs and fragments thereof, a process of preparation of the new compounds and the intermediates obtained therein
KR840001668B1 (ko) 펩티드의 제조방법
US4322342A (en) Analgesic compounds
KR850000476B1 (ko) 펩티드의 제조방법
HU185022B (en) Process for the preparation of biologically active tetrapeptide derivatives
US4491541A (en) Peptides
HU185230B (en) Process for producing pharmacologically active encephaline analogous peptides
EP0112036A1 (en) Pharmacologically active peptides
GB2130590A (en) Peptides
EP0132919B1 (en) Peptides
US4301066A (en) Preparation of (D-Trp 6)-LH-RH via the heptapeptide H-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2
US4331593A (en) Analgesic compounds
KR860001909B1 (ko) 트리펩티드 유도체의 제조방법
KR820001616B1 (ko) 테트라펩타이드의 제조방법
US5276137A (en) Analgesic peptides with a trifluoronorvaline modification
Yamada et al. Studies of unusual amino acids and their peptides. VIII. The syntheses of an iminohexapeptide as a model of bottromycin and its related iminopeptides.