CS219344B2

CS219344B2 - Method of preparation of the pleuromutiline glycoside

Info

Publication number: CS219344B2
Application number: CS804091A
Authority: CS
Inventors: Ramakrishnan Nagarajan
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1977-12-08
Filing date: 1978-12-04
Publication date: 1983-03-25
Also published as: RO84426A; FI783709A; CS219342B2; IL56115A0; RO80082B; GB2009738A; FR2411205B1; IT1160316B; IE782421L; DD139858A5; ZA786872B; GR72774B; BE872489A; RO84425B; DE2862226D1; CA1109866A; JPS5498751A; ATA871578A; HU181429B; AU4216278A

Description

Nové glykosidy pleuromutilinu jsou použitelné jako- činidla proti grampositivním a gramnegativním bakteriím, anaerobním bakteriím a mykoplasmatům. Připravují se reakcí acetylovaného glykosyld-erivátu - s pleuromutilinem nebo - jeho derivátem nebo- glykosylderivátem pleuromutilinu.

Antibiotikum pleuromutilin bylo izolováno v roce 1951 Kavanaghem aj. Proč. Nati. Acad. Soc. 37, 570—574 (1951). Struktura pleuromutilinu stanovená později -odpovídá vzorci

(II)

Alkalickou hydrolýzou pleuromutilinu se získá sloučenina známá jako mutilin. Muti'lin má strukturu vzorce II

Diále byl připraven velký počet derivátů pleuromutilinu [švýcarský patent č. 572 894 (Derwent č. 26553X); holandský patent č. 89,11083 (Derwent č. 40,642); Knauseder aj., USA patent č. 3 716 579; Egger -aj. USA patent č. 3 919 290; Brandl aj., USA patent č. 3 949 079; Riedl, USA patent č. 3 979 423; Baughn -aj., USA patent č. 3 987 194; Egger aj., USA patent č. 4 032 530; K. Riedl, „Studios on Pleuromutilin and Some of Its Derivatives“, J. Antibiotics 29, 132—139 (1976); H. Egger - a H. Reinshagen, „New Pleuromutilin Derivatives with Enhanced Antimicrobial Activity. I. Synthesis“, J. Antibiotics 29,

915—922 (1976) a „II. Structure—Activity Correlations“, J. Antibiotics 29, 923—927 (1976); F. Knauseder a E. . Brandl, „Pleuromu-tťlins: Fermentation, Structure and Biosynthesis“, J. Antibiotics 29, 125—131 (1976); J. Drews aj., „Antimicrobial Activitles of 81.723 hfu, a New Pleuromutilin Derivative“, Antimicrob. Agents and Chemotherapy 7, 507—615 (1975)].

Nedávno Michel a Higgens nalezl antibiotikum A—40104, faktor A, které je novým členem pleuromutilinové skupiny antibiotik. Struktura antibiotika A—40104 faktor A odpovídá vzorci III

OH

kde D-xylopyranosová skupina je v β-konfigur,aci.

Sloučeniny připravené podle předloženého vynálezu jsou novými glykosidy pleuromutilinu, které jsou aktivní nejen proti grampositivnim a gramnegativním bakteriím a anaerobním bakteriím, ale také mykoplasmatům. Lékaři a veterinární lékaři tak mají k dispozici dalčí činidlo, které se může používat pro· léčení infekčních nemocí lidí nebo domácích zvířat.

Předmětem předloženého· vynálezu je způsob přípravy glykosidů pleuromutilinů obecného vzorce IV

(/V) kde R je ethyl, R¹ je vybrané ze skupiny sestávající z:

a) «- a /З-anomerů následujících hexopyra- nos: 1-thio-D- a L- glukosy, 1-thio-D- a L-galaktosy, ·

b) a- a β-anomerů následujících pentopyranos a pentofuranos: 1-thio-D- a L-ribosy, lHthio-1- a D- arabínosy,

c) a- a /-anomerů pentopyranosových forem: 1-thio-D- a L-xýlosy,

d) a- a /J-anomerů následujících pyranos amin-ocukrů: 2-deoxy-2-amino-D- a L-glukosy, 2-deoxy-2-amino-D- a L-galaktosy, 4-deoxy-4-amino-D- a L-xylosy, a N,N-dialkylderivátů těchto aminocukrů s 1 až 4 atomy uhlíku v každém z alkylů,

e) a- a β-anomerů disacharidů: 1-thiomaltosy,

f) 2-deoxy-2- (hydroxyimino) -3,4,6-tri-O-acetýNa-D-glukopyranosyl, 2-deoxy-2-amino-4,6-di-O-acetyl-a-D-glukopyranosyi,

g) kterýkoli zbytek uvedený v odstavcích a) až e), který je peracylovaný alkanoy- lem s 2 až 4 atomy uhlíku,

R² je atom vodíku, který se vyznačuje tím, že se hydrogenuje glykosid pleuromutilinů obecného vzorce V

kde R¹ a R² mají výše uvedený význam.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu, kde R²· je atom vodíku, se připraví reakcí pleuromutilinu s příslušnou cukernou částí použitím běžných metod pro· tvorbu glykosidů. Například glykosidy, které jsou β-anomery, se obecně připravují Koenigs-Knorrovou metodou (viz H. Krauch a W. Kunz, „Organic Name Reactions“, John Wíley and Sons, New York, N. Y., 1964, str. 269). Glykosidy, které jsou α-anomery se obecně připravují halogenem katalyzovanou glykosidací. Pro tyto reakce jsou zejména výhodné bromderiváty.

Ještě další glykosidační metoda použitelná pro přípravu některých sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnuje použití katalysy rtuťnatými sloučeninami, jako je například kyanid rtuťnatý.

Rozumí se, že při těchto metodách je per-O-acyiglykosy 1 h.alogeníci příslušným výchozím sacharidem. Příprava těchto per-O-acylglykosylhalogenidů je známa. Přehledný referát o chemii těchto sloučenin viz Advan. Carbohyd. Chem. 10, 207—256 . (1955).

Per-O-acetylglykosylhalogenidy jsou nejčastěji používanými výchozími částmi sacharidů. Rovněž tak jsou použitelné jiné acylglykosylhalogenidy, jako například per-O- (C₂ až C/ álkanoyl) -glykosylhaiogenidy. Bromidy a. chloridy jsou nejčastěji používanými deriváty halogenidů, neboť jodidy se snadněji rozkládají a fluoridy jsou méně reaktivní.

Jiné metody pro přípravu sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnuje reakci pleuromutilinu s nitrosylchloridovým adduktem per-O-acylglykolderivátu příslušného cukru za vzniku odpovídajícího 2-(hydroxyimino )derivátu, načež se pak tento derivát převede na požadovaný aminoglykosid.

Thioglykosidové deriváty podle předloženého vynálezu, kde R² je atom vodíku, se připraví reakcí 14-deoxy-14-(monojodacetoxy Jmutilinu, dále nazývaného jodpleuromutilin s příslušným per-O-acylmerkaptoderivátem sacharidu. Jodpleuromutilin- se připravuje postupem popsaným v USA patentu č. 3 979 423. Per-O-acylmerkaptoderiváty sacharidů se mohou připravit z příslušných halogensubstituovaných per-O-acylovaných analogů sacharidů běžnými postupy. Jiná metoda pro přípravu příslušných merkaptoderivátů sacharidů zahrnuje bortrifluoridetherátem katalyzovanou kondenzaci příslušně per-O-acylované cukerné části molekuly s pleuromutilinthiolem za použití postupu popsaného· R. J. Ferrierem a R. H. Furneauxem, Carbohydra-te Research 52, 63— —68 (1976).

2-Aiiiino''l.-thio-<r'D-glykosidy se s výhodou připravují kondenzací 14-deoxy-14-(merkaptoacetoxyjmutilinu, dále nazývaného pleuromutilinthiol, s příslušným 2-deoxy-2-( hydroxyimino ) (per(O-acyl-α(D-glykosylchloridem za vzniku odpovídajícího- 2-(hydroxyimino )derivátu a pak redukcí oximinoderivátu za vzniku požadované 2-aminosloučeniny.

Dialkylamino-l-thío-je-D-glykopyranosyl deriváty se připraví převedením dialkylamino-per-O-acyl-l-brom-a-D-glykopyranosidů (pro přípravu viz J. Am. Chem. Soc. 99, 5826 (1977)] na odpovídající dialkylamino-per-O-acyl-l-merkapto-^-D-glykopyranosidy a pak reakcí s jodpleuromutilinem. Sloučeniny podle předloženého vynálezu, kde R je ethyl, se mohou připravit z odpovídajících sloučenin, kde R je vinyl, standardní redukcí, jako například hydrogenací za použití katalyzátoru paládia na uhlí. Tyto sloučeniny se také mohou připravit reakcí 19,20(dihydrtpleurtmutШnu s příslušnou cukernou částí, jak je popsáno výše.

Hydrogenace se s výhodou provádí reakcí sloučeniny rozpuštěné v ethanolu v přítomnosti 5 °/o paládia na uhlí. Rovněž tak se jako .katalyzátor může použít Raney nikl nebo PtO2.

Ty sloučeniny, kde R¹ je per-O-acylovaná cukerná část, jsou použitelné jako meziprodukty těch sloučenin, kde R¹ je vybrané ze skupin uvedených v a) až c) a jako· aktivní sloučeniny.

Ty sloučeniny, kde R1 je vybrané ze substituentů a) až c), se připraví z příslušných per-O-acylovaných sloučenin, štěpením acylových skupin v přítomnosti báze, jako je triethylamin.

Příprava sloučenin podle předloženého vynálezu je blíže objasněna v následujících příkladech.

Příklad 1

A. Příprava 14-detxy-14-{[.2-deoxy-2-(hydroxyimino )-3,4,6-tri-O-acetyl-α-D-gluktpyranosyl ] o-xyacetoxyj-mutilinu

Pleuromutilin (3,9797 g ,0,01052 mol) se rozpustí v dimethylformamidu (75 ml). K tomuto roztoku se přidá adiční produkt triacetátu D-glukalu a NOCI (3,6756 g, 0,0109 mol). Reakční směs se míchá 4 dny při teplotě místnosti a pak se odpaří ve vakuu k suchu. Vysušený odparek se rozpustí v dichlormethanu a tento roztok se čtyřikrát promyje nasyceným roztokem chloridu sodného. Dichlormethanový roztok se suší síranem horečnatým 30 minut a pak se odpařením k suchu ve vakuu získá 7,25 g surového produktu.

Tento surový produkt se dále čistí chromatografií na koloně silikagelu (3,5 x 100 centimetrů) elucí směsí ethylacetátu a toluenem (1 : 1). V intervalu 45 minut se jímají frakce po 10 ml. Crni^i^ito^^rafie se sleduje chromattgr.afií na- tenké vrstvě silikagelu použitím stejného systému rozpouštědel. Příslušné frakce se spojí a odpařením ve vakuu se získá 1,9 g požadovaného produktu. Opakovanou chromatografií frakcí obsahujících další nečistoty za použití stejných podmínek se získá 1,2141 .g produktu. Celkem se tak získá 3,1141 g 14-deoxy-14-j [ 2-deoxy(2( (hydroxyimino) -3,4,6-tri-0-acetyl-a-D-glukopyranosyl]oxyacetoxy|mutilinu, výtěžek 43,67 %.

B. Příprava 14-detχy-14-([2-deoxy-2-(hydroxylmino- ) -3,4,6-tri-O-acetyl(α-D-gluktpyranosyl ] oxyacetoxyj-19,20-dihydromutilinu

14-deoxy-14-{( 2-deoxy-2- (hydroxyimino )-3,4,6--ri-O-acetyl-.α-D-glukopyranosyl]txyacetoxyjmutilin (3,5 g) připravený postupem podle odstavce A se rozpustí v bezvodém ethanolu (50 ml] a přidá se PtO₂ (2,9495 g), který se předredukuje v bezvodém ethanolu (50 ml) 30 minut. Vzniklý roztok se hydrogenuje jeden a půl dne při teplotě místnosti.

Reakční směs se přefiltruje přes nálev i

ku se šmírovaným sklem a vrstvu celitu. Filtrát se odpaří k suchu ve vakuu a 1 hodinu se ve vysokém vakuu odstraňují zbytky rozpouštědla. Získá se tak 3,33 g surového produktu.

Tento surový produkt se čistí chromatografií na koloně silikagelu (3 x 105 cm). Elucí směsí toluenu a acetonu (2 : 1) se jímají frakce 8 až 10 ml v 30minutových intervalech. Chromatografické frakce se sledují chromatografií na tenké vrstvě použitím stejného· systému rozpouštědel. Příslušná frakce se spojí a odpařením ve vakuu k suchu se získá 2,5914 g 14-deoxy-14-{[2-deoxy-2-(hydroxyimino)-3,4,6-tri-0-acetyl-a·-D-glukopyranosyl]oxyacetoxy}-19,20-dihydromutilinu. Hmotové spektrum M+ + 1 = = 682, NMR spektrum 5 x CH₃ 0,73 (a), 0,88 (t), 0,94 (d), 0,96 (s) a 1,40 (s).

Příklad 2

Příprava 14-deoxy-14-[ (2-deoxy-2-amino-4,6-d i-O-a cetyl-a-D-glukopyranosyljoxyacetoxy]-19,20-dihy<dromutilinu

14-deoxy-14-{[ 2-deoxy-2- (hydroxyimino )-3,4,6--ri-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl]oxyacetoxyjmutilin (508,6 mg), připravený postupem podle příkladu 1A se rozpustí v absolutním ethanolu (50 ml) a hydrogenuje se přes noc při teplotě místnosti na Raney niklu (0,5 g). Vzniklá reakční směs se filtruje přes nálevky se šmírovaným sklem a vrstvou celitu. Filtrát se odpaří k suchu, znovu se rozpustí v malém množství chloroformu, znovu odpaří ve vakuu k suchu a získá se tak bílá pěna. Pěna se suší ve vysokém vakuu 2 hodiny a získá se tak 381,7 miligramu surového produktu.

Surový produkt se rozpustí v minimálním množství methanolu a chromatografuje se na koloně silikagelu (1,5 x 75 cm, Merck). Kolona se eluuje směsí acetonitrilu a vody (4 - : 1) a jímají se frakce objemu 2 až 3 ml v 60minutových intervalech. Eluované frakce se -sledují chromatografií na tenké vrstvě silikagelu za použití stejného systému rozpouštědel a také ve směsi ethylacetátu a ethanolu (9 : 1). Příslušné frakce se spojí a odpařením ve vakuu se získá 25,5 mg 14-deoxy-14-[ (2-deoxy-2-amino-4,6-di-O-ace•tyl-a-D-glukopyranosyl) oxyacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu.

P ř í k 1 a d 3

A. Příprava 14-deoxy-14-{[2-deoxy-2-(hydroxyimino )-3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-galaktopyranosyl joxyacetoxyjmutilinu

Pleuromutilin (7,6342 g 20,19 mmol) se nechá reagovat s adičním produktem triacetátu D-galaktalu s NOCI (7,6723 g, 22,76 mmol) za použití podmínek popsaných v příkladu 5. Čištěním chromatografií na silikagelu -za použití směsi ethylacetátu a to luenu (1 : 1) se získá 14-deoxy-14-([2-deoxy-2--hydroxyimino)-3,4,6-tri-O-aeetylca·-D-gaaaktopyranosyl] oxyacet ox yjmutilin (10,0739 g, 14,8 mmol) ve výtěžku 73 %.

B. Příprava 14-deoχy-14-|[2-deoxy-2-l hydroxyimino ) -a-D-gaiaktopyranosyl ] oxyacetoxylmutilinu

14-deoxy-14-[[ 2-deoxy-2- (hydroxy^iminD) -3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-galaktopyr anosyl ]oxyacetoxyjmutilin (1,5) g, připravený postupem podle odstavce A se rozpustí v methanolu (50 ml) a vodě (50 ml).

K tomuto roztoku se přidá (C2H₅)₃N, (50 mililitrů). Vzniklý roztok se míchá tři dny při teplotě místnosti. Reakční směs se pak odpaří ve vakuu. Přidá se chloroform a odparek se umístí ve vakuu. Vzniklá, pěna pak po jednohodinovém sušení ve vysokém vakuu poskytne 414 mg surového produktu.

Surový produkt se rozpustí v minimálním množství methanolu a nanese se na 1,5 x x 70 cm kolonu silikagelu (Merck). Elucí ethylacetátem a ethanolem (9 : 1) se jímají v jednohodinových intervalech 2 až 3 ml frakce. Frakce se sledují chromatografií na tenké vrstvě silikagelu za použití stejného systému rozpouštědel. Příslušné frakce se spojí a odpařením ve vakuu k suchu -se získá celkem 104,4 g 14-deoxy-14-[[2-deoxy-2- (hydroxyimino) -a-D-g g lak t о p у ranosyl ] oxyacetoxyjmutillnu.

C. Příprava 14-deoxy-14-[ (2-deoxy-2-amino-а-D-gaaaktopyr anosyl) oxyacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu

14-deoxy-14-[ [ 2-deoxy-2- l^,htdroxtimino) -α-D-ga-aatopytanosyljoxýacetoxyjmutШn (566,6 mg, 1,02459 mmol) připravený -postupem podle -odstavce B se rozpustí v ethanolu (25 ml). K tomuto roztoku se přidá 5 proč, paládia na uhlí (333 mg) a - 1N kyselina chlorovodíková (1,2 ml).

Vzniklý roztok se hydrogenuje 4 dny při teplotě místnosti a po odstranění katalyzátoru se filtrát odpaří ve vakuu k suchu. Odparek se suší ve vysokém vakuu alespoň 4 hodiny. Získá se tak 606,7 mg surového produktu ve formě bílé pěny. Tento· surový produkt se dále čistí chromatografií na koloně -silikagelu o průměru 2,7 cm (150 g, Měrek) ve směsi CH3CN : H₂O (9 1) a jímají se frakce objemu asi 4 ml v 30minutových intervalech. Chromatografie na koloně se sleduje chromatografií na tenké vrstvě silikagelu za použití stejného systému rozpouštědel a jodu, jako detekčního činidla. Frakce se odpaří k suchu ve vakuu. Frakce 371—420 se spojí a získá se 33,2 mg 14-de·oxy-14-[ (2-deoxy-2-amin o-a-D-gaaaktopyranosyl) oxyacetoxy] -19,20-dihydromutilinu.

Příklad 4

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-1^^-0219344

-acetyl-/3-D--glukopyranosyl)thioacetoxy]mutilinu

Roztok jodpleuromutilinu (577,3 mg), připravený psdle příkladu 3 USA patentu č. 3 979 423, v acetonu (2 ml) se přidá k roztoku 2,3,4,6-tetrn-Ό-ncetyl-j3-D-glukopyrnossylmerkaptanu (428,8 mg) v .acetonu (2 · ml). K míchané reakční směsi se přidá roztok K2CO3 (168,4 mg] ve vodě . (1 ml) a získaný roztok se míchá 30 minut při teplotě místnosti.. Reakční směs se pak naleje do· deionizovaoé vody (25 ml) a vodný roztok se extrahuje dichlormethanem. Dichlormethaoový roztok se vysuší síranem sodným, přefiltruje a odpaří ve vakuu k suchu. Odparek se suší ve vysokém vakuu 1,5 hodiny a získá se 989,7 mg 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-ncetyl-₁β-D-glukopyranosylt thioacetoxy ]mutilinu.

B. Příprava 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-ncetyl-/S-D-glukoρyranosyl) -thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu

14-deoxy-14-[ (2,3,4,6--etra-O-acetyl-0-D-glukopyranosyl) thio-acetoxy] mutilio (611 miligramů), připravený postupem podle odstavce A se rozpustí v ethaoolu (55 ml) a přidá se 5 % paládia na uhlí (495 mg).· Reakční směs se hydrogenuje asi 10 hodin a pak se filtruje přes nálevku se stohovaným sklem s vrstvou celitu. Filtrát se odpaří ve vakuu k suchu a znovu odpaří s malým množstvím chloroformu. Získá se tak 500 mg 14-deoxy-14-[ (2,3₎4,6--etm-O-acetyl--3-D-gluUopyranoyyl) thioncetoxy]-19,20gdihydrsmktiliou ve formě bílé pěny. Hmotové spektrum M+ · 726, NMR 4 x CH₃ 0,70 (d), 0,91 (d), 1,13' (s) a 1,40 (s).

Příklad 5

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (/3-D-glukopyr·noosyl) thioacetoxy ] mutilinu

14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-'tetra-O-acet^yl-/^-D-glkkspyraoosylt thisncetoxy] mutilin (529,8 miligramu), připravený postupem podle příkladu 4 se rozpustí v methanolu (50 ml). K tomuto roztoku se přidá voda (50 ml) a (CjjHs^N (50 ml). Vzniklý roztok se míchá 3 dny při teplotě místnosti a pak se odpařením ve vakuu k suchu zbaví veškerých stop rozpouštědla. Odparek se znovu odpaří z chloroformu a získá se tak 492 mg surového produktu.

Tento produkt se dále čistí chromatografií oa kolonie silikagelu (2 cm v průměru, 150 g, Merck). Elucí směsí ethylacetátu a ethanolu (9 : 1) se jímají frakce objemu 6 mililitrů v 30miniitových intervalech. Frakce se kontrolují chromatografií oa tenké vrstvě yilikngciu ve stejném systému rozpouštědel za použití jodu, jako detekčního činidla. Frakce č. 28 až 120 se spojí a odpa řením se získá 366 mg 14-deoxy-14-[ (j3-D-glukopyraoosyl) thioacetoxy ] mutilinu.

B. Příprava 14-deoxy-14-[ (/^D-glukopyrnoosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutiИok

14-deoxy-14-['(-3D-glukopyranosyl) thioacetoxy] mutilio (465,5 mg), připravený postupem podle odstavce A, se rozpustí v horkém tetrahydrofumou (100 ml). K tomuto roztoku se přidá 5 % paládia na uhlí (250 mligramů) a směs se hydrogenuje 7 hodin při teplotě místnosti. Vzniklá reakční směs se filtruje ze stohovaným sklem s vrstvou celitu. Filtrát se odpaří · k suchu ve vysokém vakuu a získá se 500 mg 14-deoxy-14- Γ (β-D-glukopyranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu. Hmotové spektrum M+ +1 = 559.

Příklad 6

A. Příprava hydrobromidu 2,3,4-tri-O-ačetyl-1-thioul’OlШIτn-/-D-xylopyI’nnosy

2,3,4-tri-O-acetD-xx-lo-xylopyranosylbroniid (1,3 g, 3,83 mmol), připravený podle „Methods of Carbohydrate Chemistry“, sv. 1, Academie Press, New York, N. Y., 1962, str. 183, se rozpustí v . acetonu (3 ml). K tomuto roztoku se přidá thiomočovioa (330 mg, 4,33 mmol).

Po dalším přidání acetonu (asi 3 ml) se vzniklý roztok zahřívá к varu [olejová lázeň 70 °C) po dobu asi 20 minut. Produkt vykrystaluje stáním reakční směsi v lázni s ledem. Krystaly se odfiltrují, promyjí minimálním množstvím acetonu a vysušením se získá 849 mg hydrobromidu 2,3,4-tri-O-acetyl-U-thoшгoniшl--/-D-xylopyrnгlosy, t. 1174 až 175 °C.

B. Příprava 2,3,4--ri-O-aoetyl-l-thio-Ji-D-xylopyranosy

K hydrobromidu 2,3,4-tri-O-aceeyl-l-thiouronшm-3-D-xylopyraoosy (608,4 mg, 1,466 mmol) připravenému postupem podle odstavce A a Na₂S2O5 (218 mg, 1,14 mmol) se přidá voda (5 ml) a chlorid uhličitý (5 ml). Reakční směs se zahřívá 40 minut k varu pod zpětným chladičem, načež se ochladí na teplotu místnosti. Organická fáze se oddělí a vodoá fáze se dvakrát promyje po· 10 mililitrech chloridu uhličitého.

Spojené frakce chloridu uhličitého se vysuší bezvodým síranem sodným, přefiltrují a odpařením ve vakuu se získá 212,9 mg

2,3,4-hi-O-auetyi-l-t-Do-3-D-xynopyranosy ve formě žlutého oleje. Teoto produkt vyžaduje další čištění na koloně silikagelu a získá se olej (132,3 mg), který krystaluje (t. t. 117 až 122 °C).

Při pozdějších přípravách chromatografické čištění není nutné, oeboť produkt krystaluje přímo po naočkování.

C. Příprava 14-deoxy-14-[(2,3,4-tri-O-acetyl-y-D-xylo.pyranosyl) thioacetoxy] mutilinu

2,3O--rC-0-acetyl-l--hio-y-D-yylopyranosa (1,46 g, 5 mmol) připravená postupem podle odstavce B, ye rozpustí v acetonu (10 ml). Pak se přidá jpdp-euromutilio (2,48 g, 5,08 mmol) v acetonu (10 ml). K míchané reakční směsi se přidá roztok K2CO3, (721 mg, 5,19 mmol) ve vodě (5 ml). Vzniklý roztok se. míchá 20 minut při teplotě místnosti a pak se naleje do deipoizpvané vody (100 mililitrů). Tento roztok se extrahuje dl·chlDrmethanem. Dichlormethanový roztok se vysuší bezvodým síranem sodným, přefiltruje se, odpaří ve vakuu k suchu a znovu suší ve vysokém vakuu 8 hodin. Získá se tak 3,8246 . g produktu ve formě bílé pěny, která vykrystaluje buď z diethyletheru a hexanu, nebo z diethyletheru a ethylacetátu a má t. t. 91 až 97 °C.

D. 'Příprava 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/3-D--y1opyranosyl) thioacetoxy ]-19,20-dihydrpmutiliou

14ideoxy-14- [ (2,3,4-trilO-acetyl-β-D-xy-Dpyranpsyl)thipacetpχyjmutШo (523 mg), připravený postupem podle odstavce C se rozpustí' v .ethanolu (20 ml). K tomuto roztoku §e· přidá '5' % ' paládia na uhlí (216 mg). Vzniklá směs se 'hydrogenuje 11,5 hodiny při teplotě místnosti. „ . Reakční směs se filtruje přes vrstvu celitu. Filtrát se odpaří ve vakuu a získá se 14-deoxyi14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-xylopyraoosyl) thioacetoxy]-19,20-di-hydromu-tilm' (446 mg).

Hmotové spektrum M+ = 654. NMR 5 x x CH₃' 0,70 (d), 0,78 (t), 0,94 (d), ' 0,96 (s) a 1,43 (s).

Příklad 7

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (β-D-xylopyranosyl) thioacetoxy ] mutilinu

14-deoxy-14-[(2,3,4-tr--O-ace1y--;3-D-xy-opyraoDsyl)thioacetDxyjmutШn (1,5954 g), připravený postupem podle příkladu 6 se rozpustí v methanolu (60 ml), vodě (50 mililitrů) a přidá se triethylamm (55 ml).· Vzniklá reakční směs se míchá dva dny při teplotě místnosti, načež se odpaří ve vakuu k suchu. Odparek se znovu rozpustí v chloroformu a čtyřikrát znovu rozpustí a odpaří. Odparek se suší 4 hodiny ve vysokém vakuu a získá se tak 1,79 g surového produktu.

Tento produkt se čistí chrDmatDgyafií na koloně silikagelu (průměr 2,7 cm, 200 g, Merck) a elucí směsí ethylacetátu a ethanolu (9 : 1) se jímají frakce 5 ml v 20minutových intervalech. Frakce se kDotУD-ují chromatografií na silikagelu v tenké vrstvě za použití stejného systému rozpouštědel a jodu jako detekčního činidla. Frakce č. 38—60 se spojí a odpařením ve vakuu se získá 1,2066 g 14-deDxy-14l[y-D-xylopyranosy!) thioacetoxy ] mutilinu.

B. Příprava 14-deDxy-14-[ (y-D-xylopyranosy!)-thiDacetDxy ] -19,20-dihydromutilinu

Н^е-у-М- [ (y-D-xylopyranosyl j thioacetoxy Jmutilin (285 mg), připravený postupem podle odstavce A se rozpustí v ethanolu (10 ml) a přidá se 5 % paládia na uhlí (145 mg). Vzniklá směs se hydrogenuje 7 hodin při teplotě místnosti a pak se filtruje přes celit. Filtrát se odpaří a získá se bílá pěna, která se dále suší 30 minut ve vysokém vakuu. Získá se kvantitativní výtěžek produktu. Produkt připravený obdobně (7,75 g) se krystaluje z ethylacetátu (15 mililitrů) a získá se 5,87 g 14-deoxy-14-[ - (/3-D-xylopyranosyl) ·thiDacetoxy]l19,20-dihydromutilinu, t, t. 93 až 95 °C. Hmotové spektrum M+ +1 = 529. NMR 5 x CH₃ 0,69 (d), 0,77 (t), 0,94 (d), 0,97 (s), 1,43 (s).

Příklad 8

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (2,3,4-ti’i-O-acetyl-y-D-arabinDpyranDsyl) thioacetoxy] mutilmu

2,3,4-tгi-O-acetyDl-thil-ylDiOryainosa (3,177 g 0,0109 mol), připravená postupem podle příkladu 6, odstavce A a B se rozpustí v acetonu (20 ml) a jodpleuromutilin (5,31 g 0,0109 mol) se také rozpustí v acetonu (20 ml) a raztoky se smísí. Pak ' se přidá uhličitan draselný (1,506 g, 0,0109 ml) ve vodě (10 ml). Vzniklý roztok se míchá 30 minut při teplotě místnosti, načež se naleje do vody (100 ml).

Vodný roztok se 'třikrát extrahuje 50 ml dávkami dichlormethanu. DichlormethaoDvé extrakty se spojí, vysuší bezvodým síranem sodným a filtrují. Filtráty se odpaří ve vakuu k suchu a získá se 7,1 g surového produktu.

Tento produkt se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC, Waters* Associates Prep. LC/System 500) elucí směsí tDlueo-ethylacetát (1 : 1) rychlostí 250 ml/min. Jímají se frakce objemu 250 ml. Jednotlivé frakce se kontrolují chromatografií na tenké vrstvě silikagelu ' za použití směsi toluenu a ethylacetátu (1 : 1) a jodu jako detekčního činidla. Frakce 17—22 obsahují maximální množství čistého produktu. Tyto frakce se spojí a odpařením ve vakuu se získá 4,989 g 14-deoxyl14l[ ^^á-tri-O-acety-ljЗ-Il-arybinopyraoDyy 1) thioacetoxy ] mutilinu.

B. Příprava 14^0-1-14^ (2,3,4-tri-O-ace'tyl-/^D-llУbinopyranosyl) thioacetoxy ]-19,20-di'hay^romutilmu

14-de—y-14-[ (Z^l-tri-O-acctyM-D-arabmDpyraoDsy1jthiDacetoχyjmuШm (100 mg), připravený postupem podle odstavce A se rozpustí v bezvodém ethanolu [10 ml) a přidá se 5 % paládia na uhlí (25 mg). Reakční směs se hydrogenuje přes noc a pak se filtruje přes celit, aby se odstranil katalyzátor. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 100,5 g 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/3-D-arabinopyranosyl) thioacetoxy ] -19, 20-dihydromutilinu.

Příklad 9

A. Příprava 14-deoxy-14-[,(/S-D-arabinopyranosyl) thioacetoxy Jmutilinu

14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/?-D-a.rabinopyranosyl) thioacetoxy Jmutilin (1 g), připravený postupem podle příkladu 8 se rozpustí v methanolu (50 ml), vodě (50 ml) a pak se к tomuto roztoku přidá triethylamin (50 ml). Vzniklý roztok se míchá 48 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se pak odpaří ve vakuu a získá se surový produkt, který se dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií postupem podle příkladu 8 elucí gradientem rozpouštědel [počínaje ethylacetátem do směsi ethylacetátu s 95%' ethanolem (9 : 1)]. Získá se tak 0,62 g 14-deoxy-14-[ (/3-D-arabinopyranosyl)thioacetoxy ] mutilinu.

B. Příprava 14-deoxy-14-[ (/3-D-arabinopyranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu

14-deoxy-14-[i(/3-D-arabinopyranosyl)thioacetoxy Jmutilin (100 mg), připravený postupem podle odstavce A se hydrogenuje 24 hodin za použití postupu podle příkladu 8. Získá se tak 100 mg 14-deoxy-14-[ (/?-D-arabinopyranosyl) thioacetoxy]-19,20-dihydromutilinu. NMR 5 x CH₃ 0,65 (d), 0,70 (t), 0,87 (d), 0,92 (s) a 1,40 (s).

Příklad 10

A. Příprava 14-deoxy-14-[(2,3,4-tri-O-acetyl-/S-L-arabin.opyranosyl)thioacetoxy jmutilinu

Jodpleuromutilin (4,636 g, 0,0095 mol) se nechá reagovat s 2,3,4-tri-O-acetyl-l-thio-L-arabinosou (2,76 g, 0,0095 mol) postupem podle metody popsané v příkladu 8. Získá se tak 6,265 g surového produktu, který se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií postupem podle příkladu 8 za použití gradientu rozpouštědel z 4 litrů toluenu až 4 litrů směsi toluenu a ethylacetátu (1 : 1). Získá se tak 3,53 g 14-deoxy-14-(2,3,4-tri-O-acetyl-/J-L-arabinopyranosyl) thioacetoxy Jmutilinu.

B. 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/3-Larabinopyranosyl) thioacetoxy]-19,20-dihydromutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-|S-L-arabinopyranosyl)thioacetoxy jmutilinu postupem podle příkladu 8. Hmotové spektrum M⁺ +1 = 655. NMR 4 x x CH₃ 0,73 (d), 0,87 (d), 1,17 (s), 1,46 (s).

Příklad 11

A. Příprava 14-deoxy-14-( [/3-L-arabinopyranosyl) thioacetoxy Jmutilinu

14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/3-L-arabinopyranosyljthioacetoxyjmutilin (1 g) připravený postupem podle příkladu 10 se deacyluje postupem popsaným v příkladu 8 a získá se 1,09 g surového produktu. Tento produkt se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií za použití gradientu rozpouštědel z 4 litrů ethylacetátu až 4 litrů směsi ethylacetátu a ethanolu (9 : 1). Získá se tak 0,6862 g 14-deoxy-14-[(/3-L-arabinopyranosyl) thioacetoxy Jmutilinu.

B. 14-deoxy-14-[ (β-L-arabinopyranosyl)thioacetoxy]-19,20-dihydromutilin se připraví z 14-deoxy-14-[ (/5-L-arabinopyranosyl)-thioacetoxyJmutilinu postupem podle příkladu 9. Hmotové spektrum M⁺ 4-1 = 529. NMR 5 x CH₃ 0,67 (d), 0,71 (t), 0,88 (d), 0,95 (s), 1,42 (s).

Příklad 12

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/5-D-galaktopyranosyl) thioacetoxy ] mutilinu

Jodpleuromutilin (9,27 g, 0,019 mol) se nechá reagovat s 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-galaktopyranosyl merkaptanem (6,96 g, 0,019 mol) postupem popsaným v příkladu 4 a získá se 14,14 g surového produktu. Tento produkt se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií popsanou v příkladu 8 použitím gradientu rozpouštědel z 4 litrů toluenu až 4 litrů směsi toluenu a ethylacetátu ( 1 : 1) (8 litrů).

Jednotlivé frakce se kontrolují chromatografií na tenké vrstvě a získá se 3,99 g 14-deoxy-14- [ (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-j3-D-galaktopyranosyl) thioacetoxy ] mutilinu.

B. Příprava 14-deoxy-14-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-já-D-galaktopy r anosy 1) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu

14-deoxy-14-[ 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-Dgalaktopyranosyl)thioacetoxyJmutilin (200 miligramů), připravený postupem podle odstavce A, se hydrogenuje 20 hodin postupem podle příkladu 4 a získá se 0,19 g 14-deoxy-14- [ (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-]5-D-galaktopyranosyl) thioacetoxy]-19,20-dihydromutilinu. Hmotové spektrum M⁺ = 726. NMR 5 x x CH₃ 0,71 (d), 0,78 (t), 0,94 (d), 0,98 (s) a 1,43 (s).

Příklad. 13

A. Příprava 14-deoxy-14-[ (/3-D-galaktopyranosyl) thioacetoxy ] mutilinu

14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-galaktopyranosyl)thioacetoxyJmutilin (1 g) připravený postupem podle příkladu 12 se deacetyluje použitím metody popsané v příkladu 5 a získá , se 1,16 g surového· produktu. Tento produkt se dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií popsanou v příkladu 8 za použití gradientu rozpouštědel ze 4 litrů ethylacetátu až 4 litrů směsi ethylacetátu a ethanolu (9 ' : 1). Získá se 0,49 g ' 14-deo-xy-14-[ (3-D-galaktopyranosyl)thioacetoxy] mutilinu.

B. 14-deoxy-14-[ (β-D-galaktopyranosyl)thioacetoxy]-19,20-dihydromutiiin se připraví z 14-deoxy-14-[ (/-D-gaLaktopyranosyl)thioacetoxyjmutilinu postupem podle příkladu 5. Hmotové spektrum M+ 4-1 = 559. NMR 5 x CH₃ 0,63 (d), 0,67 (t), 0,83 (d), 0,87 (s), 1,37 (s).

Příklad 14

A. 14-deoxy-14-[ (2,3,4-t'ri-O-acety--3'-L-xylo-pyranosyllthioacetoxyjmutilin se připraví použitím postupu popsaného v příkladu 6 za použití L-xylosy jako výchozího· materiálu. V konečném stupni se jodpleuromutilin (31 g) nechá reagovat s 2,3,4-tri-O-acetyl-l-thio-jLL-xylosou (19 g) a získá se 39,6 g surového produktu. Tento surový produkt se čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií postupem popsaným v příkladu 8 za použití gradientu rozpouštědel (8 1) z toluenu · až směsi toluenu a ethylacetátu (7 : :3). Vyčištěné, frakce vtkrtstalují ze směsi toluenu a ethylacetátu a získá se 21,05 g 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-kcety--3-L-xylopy.rknostl)thiokcetoxt]'mutшnu, t. t. 210 až 213 stupňů Celsia.

B. 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acatyl-0-L-xylopyranosyl·)thioacetoxy]-19,20-dihydromutilin so připraví z 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-0-acetyl-3-L-xylopytrnosyt) thioacetoxy]mutilinu (2,56 g, připraveného podle odstavce A), za použití postupu podle příkladu 7 a získá se 2,23 g produktu. NMR 5 x CH3 0,62 (d), 0,65 (t), 0,82 (d), 0,86 (s) a 1,37 (s).

Příklad 15

A. 14-deoxy-14-[ (e-L-xyyopyranosyl Jihlo- acetoxy]mutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[ (2,3,,^-^l^'i-O-^íacettl-^-L^:^У )thiokcetoxt] mutilinu (15,8 g, připraveného podle příkladu 14) postupem podle příkladu 7 a získá se 14,3 g produktu ve . formě bílé ' pěny.

B. 14-deoxy-14-[ (_:-3L-xylopptrnosyl)thioacetoxy]-19,20-dihydromutilin se připraví z 14-deoxy-14- [ (/8L-xylopptrnosyl) thioacetoxyjmutilinu (7 g, připraveného· podle odstavce A) postupem podle příkladu 7 a získá se 6,3 g produktu ve formě bílé pěny. Hmotové spektrum M+ +1 = 529. NMR 5 x x CH3 0,62 (d), 0,66 (t), 0,82 (d), 0,87 (s), a 1,35 (s).

Příklad 16

Γ ··

A. Příprava pleuromutilinthiouronium hydrojodidu

Jodpleuromptilin (46,8 g) se rozpustí v acetonu (300 ml a k tomuto roztoku se přidá thiomočovina (7,418 g) a další aceton (60 m,l). Vzniklá reakční směs se zahřívá k varu na olejové lázni na 90 °C po dobu 30 minut. Reakční směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti, odpaří se ve vakuu k suchu a získá se 60 g hydrojodidu 14-deoxy-14--·(thiouroniшnace-oxy) mutilinu, nazývaného dále pleuromutilinthiouroniun hydrojodid, ve formě amorfní bílé sloučeniny.

B. Příprava pleuromutllinthiolu

Pleuromutilinthiouronium hydrojodid (60 gramů) připravený postupem podle oddílu A se rozpustí ve vodě (200 ml) a dostatečném množství horkého methanolu tak, aby se získal úplný roztok. K tomuto roztoku se přidá roztok №38205 (23 g) rozpuštěný ve vodě (100 ml) a chlorid uhličitý (150— —200 ml). Vzniklá reakční směs se zahřívá k varu na olejové lázni na 80 až 90 °C po dobu 30 minut. Chloroformová fáze se oddělí, vysuší bezvodým síranem sodným a odpařením k suchu se získá 32,5 g pleuromutilinthiolu ve formě bílé amorfní sloučeniny.

C. Příprava a- a d-anomerů 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-D-ribopyranosyl)thioacetoxy] mutilinu

Pleuromu₍-ilin-hiol (7,53 g, 19,1 mmol), připravený postupem podle odstavce B se rozpustí v chloroformu (100 ml) a přidá se te-ra-0-kc·e-tlribopyrknosk (6,19 g, 19,46 mmol). K , vzniklému roztoku se přidá bortrifluoride-herá- (9 ml). Vzniklá reakční směs se míchá asi 2 1/2 hodiny při teplotě místnosti, načež se ve vakuu odpaří k suchu. Takto získaný odparek se znovu rozpustí v chloroformu a dvakrát se promyje stejným objemem vody. Chloroformová fáze se oddělí, vysuší bezvodým síranem sodným přes noc a pak se odpaří ve vakuu k suchu. Získá se 13 g směsi a- a -J-anomerů •14-deoxy-14- [ (2,3,4-tri-O-acetyI-D-ribopyranosyl ^hioacetoxy ] mutilinu.

Tento surový produkt se dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií popsanou v příkladu 8 nejprve použitím gradientu rozpouštědel z 4 litrů toluenu až 4 litrů směsi toluenu a e-htlace-átu (3 : 1) a pak použitím směsi toluenu a ethylacetátu (3 : : 1) a nakonec 2 litrů ethylacetátu. Příslušné frakce se z vysokotlaké chromatografie dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií za použití nejprve 4 litrů toluenu a pak gradientu rozpouštědel z 4 litrů toluenu až 4 litrů směsi toluenu a ethylacetátu (4:1). Znovu se příslušné frakce spojí a poskytnou vyčištěný produkt. Tento produkt (stále směs anomerů) se dále čistí na koloně silikagelu o průměru 3,5 centimetru za použití směsi toluenu a isobutylalkoholu [9 : 1) a. frakce se jímají v intervalech 30 minut o objemu asi 5 ml. Frakce se také kontrolují chromatografií na tenké vrstvě silikagelu. Izoluje se tak 307,3 mg α-anomeru a 1,32 g β-anomeru.

D. 14-deoxy-14-[ (a--D-ribopyranosyl)thioaceitoxyjmutilin, se připraví z 14-deoxy-14- [ . (2,3,4-tri-O-acetyl-a-D-ribopyranosyl) thioacetoxy ]mutilinu (připraveného postupem podle příkladu C) postupem podle příkladu 5. Hmotové spektrum M⁺ = 516 . NMR 4 x x CH₃ při 0,72 (d), 0,88 (d), 1,16 (s), 1,45 (s).

E. 14-deoxy-14-[ («-D-ribopyranosylJthóoacetoxy]-19,20-dihydromutilin, se připraví z 14-deoxy-14- (a-D-ribopyranosyl) thioacetoxyjmutilinu (připraveného postupem podle odstavce D) postupem podle příkladu 7. Hmotové spektrum M+ —H₂O —- 510.

Příklad 17

A. 14-deoxy-14-[. (b-Diáibop^^i-anosylJthioacetoxyjmutilin se připraví z 14-deoxr-14-[ (2,3,4-.tri-O-aaeeyl--^D--ibopyranosyl jťhioacetoxy ] mutilinu (připraveného postupem podle příkladu 16) postupem podle příkladu 5.

B. 14-deoxy-14-[ (/3-D-rtbbppranosyl)ťhioaceítoxy]-19,20-dihrdromutilin, se připraví z 14-deoxy-14- [ (β-D-ribopyranosylj thioacetoxyjmutilinu (připraveného postupem podle odstavce A) postupem podle příkladu 7. Hmotové spektrum M+ — 528. NMR 5 x CH₃0,71 (d), 0,77 (t), 0,95 (d), 0,98 (s), 1,44 (s).

Příklad 18

A. Příprava a- a β-anomerů 14-deoxy-14-[ (2,3,5-.trtiO-aaeeťl-D-ribbpyranosyl)thioacetoxy]mutilinu 'Pleuromutilinthiol (6,5 g, 16,49 mmol) připravený postupem podle příkladu 16, odstavec B se rozpustí v chloroformu (150 ml) a k tomuto roztoku se přidá tetra-O-acetyl-/β-D-ribofuranosa (6,9 g, 21,69 mmol). K vzniklému roztoku se postupně přidá bortrifluoridetherát (10 ml). Reakce se provádí postupem podle příkladu 16, odstavec C a získá se 10 g surového produktu, který je směsí anomerů.

Tato směs se dělí na vysokotlakou kapalinovou chromatografií jak je popsána v příkladu 8 za použití nejprve 8 litrů gradientu z toluenu až směsi toluenu a ethylacetátu (3 : 1) a dalších 8 litrů gradientu ze směsi toluenu a ethylacetátu (3 : 1) až směsi toluenu a ethylacetátu (1 : 3). Získá se tak

1,6589 g přečištěného surového produktu. Tento produkt se chromatografuje na koloně silikagelu (2,5 cm, v průměru, 225 g, Merck), za použití směsi toluenu .a isobutylalkoholu (.9 : 1) .jako elučního činidla. V 30mínutových intervalech se jímají frakce o objemu asi 3 ml.

Frakce č. 205—250 se spojí a odpařením ve vakuu se získá 0,494 g dále vyčištěného¹materiálu. Tento materiál se rechromatografuje na jiné koloně silikagelu za použití stejných podmínek. Frakce č. 209—215 se spojí a odpařením ve vakuu se získá 56 mg 14-deoxy-14- [ (2,3,5-tri-O-acetrl-t<í-D-гiboprranosyl íthioacet^oxy] mutilinu.

Frakce č. 248—260 se rovněž spojí a získá se 28 mg 14-detxy-14-I(2,3,5-tti-O-aceťylr -^-D-nb oíurano-syl)thioacetoxy] mutilinu.

B. 14-deoxy-14-[ (2,3,5-tri-O~acetyl-a-D-ribofu.ranosyl)thioacetoxy]-19.,20-dihydromutilin se připraví z 14-deo.xy-14-[ (2,3,5-tri-O^ř^f^tetyl-a-D^-ňbi^f^i^ranosyl thioacetoxy]mutilinu (připraveného podle odstavce A) postupem podle příkladu 6.

Příklad 19

14-deoxy-14- [ (2,3,5-rrirO-.-u:.чtrl-£-D-ribOr furanosyl) thioacetoxy ] -19,20-díhydromutilinu se připraví z 14-deoxy-14-[ (2,3,5-tri-O-acetyl-Д-D-rtboturanosyl) thioacetoxy] mutilinu (připraveného podle příkladu 18A) postupem podle příkladu 6.

Příklad 20

A. W-decxy-W-í (a--D-nbo·!!!!^!!.;^^®^acetoxy] mu tilin se připraví z 14-deoxy-14-[ (2,3,5-t-гi-O-acetyl-<aD--ibbpyl’anotyl)thioacetoxyl-mutilinu (připraveného podle příkladu 18) postupem podle příkladu 7.

B. 14-deoxy-14-[ (a-D-nbofuranosylJthioacetoxy]-19,20-dihydromutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[ ( α·tD-rtboturanosyl) ' thioacetoxy] mutilinu (připraveného podle .odstavce A) postupem podle příkladu 7.

Příklad 21

A. 14-deoxy-14-[ (β-D-гtbofuranosyl jthioacetcxyjmutilin, se připraví z 14-deoxy-14- [ (2,3,5--ri-O--icety l-r^D--iboturan.osyl )thioacetoxy] mutilinu (připraveného podle příkladu 18) postupem podle příkladu 7.

B. W^oxi-M-í (β-D-I'ibotmiantsrl)thioaceťoxy]-19,20-di.hydromutilm, se připraví z 14-deoxy-14-[ (,β-D-ribotuuaaosyllthioacetoxyjmutilinu (připraveného podle odstavce A) postupem podle příkladu 7.

Příklad 22

A. Příprava 14-deoxy-14-{(2-deoxyI2r(N,N-dimethylamino) I3,4₎6-rгiICOacetyl7rD-glukoprranosyl ] thioacetoxyjmutilinu

K roztoku D-glukosamin hydrochloridu (10,8 g, 0,05 mol) ve vodě (250 ml) se přidá 250 ml 37% vodného- (roztoku formaldéhydu a 5 g 10% paládia na uhlí. Vzniklá směs se hydrogenuje až se spotřebuje teoretické množství pro převedení na 2-deoxy-2-( Ν,Ν-dimethylamino) -D-glukosamin. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se lyofilizuje. Získaný produkt se acetyluje acetanhydridem a pyridinem a získá se odpovídající tetra-O-acetylderivát. Tento se pak převede na 2-deoxy-2-(N,N-dimethylamino)-3,4,6-tri-O-acetyl-D-glukopyranosylbromid, který se pak převede na odpovídající 1-merkaptoderivát postupem podle příkladu 6. Reakcí 2-deoxy-2-( Ν,Ν-dimethylamino )-3,4,6-tri-O-acetyl-l-thio-D-gluk-opyranosy is jodpleuromutilinem postupem podle příkladu 6, odstavec C se získá požadovaný produkt.

B. 14-deoxy-14-[[2-deoxy-3-(Ν,Ν-dimethylamino )-3,4,6-tri-O-acetyl-^-D-glukopyranosyl]thioacetoxy}-19,20-dihydromutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[[2-deoxy-2-(Ν,Ν-dimethylamino )-3,4,6-tri-O-acetyl-/3-D-glukopyranosyljthioacetoxyj-mutilinu (připraveného podle odstavce A) postupem podle příkladu 6. Hmotové spektrum M⁺ = 725.

Příklad 23

A. 14-deoxy-14-[[2-deoxy-2-(N,N-dimethylamino)-β-D-glukopyranosyl ] thioacetoxyjmutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[[2-deoxy-2-(Ν,Ν-dimethylamino )-3,4,6-tri-O-ace.tyl-/3-D-glukopyranosyl]thioacetoxy}mutilinu (připraveného podle příkladu 22) postupem podle příkladu 7.

B. 14-deoxy-14-{ [ 2-deoxy-2- (Ν,Ν-dimethylamino ) -β-D-glukopyranosy 1 ] thioacetoxyj-19,20-dihydromutilin, se připraví z 14-deoxy-14-[ [ 2-deoxy-2- (N,N-dimethylamino) -β-D-glu.kopyranosyl]thioacetoxyjmutilinu (připraveného podle odstavce A) postupem podle příkladu 7.

Příklad 24

A. Příprava 14-deoxy-14-[[4-O-(2,3,4,6-tetra-0-acetyl-a-D-glukopyranosyl)-2,3,6-tri-0-acetyl-/3-D-glukopyranosyl]thioacetoxyjmutilinu

Tato sloučenina, dále nazývaná jako derivát heptaacetylthiomaltosy se připraví postupem podle příkladu 6, pouze jako výchozí materiál se použije okta-O-acetát maltosy. Okta-O-acetát maltosy se připraví postupem popsaným v Methods díl 1, str. 334; z této sloučeniny se připraví postupem popsaným v práci Finan a Warren. J. Chem. Soc. 1962, 2823 bromid hepta-O-acetylmalto-sy. Jodpleuromutilin (8,6 g) se pak nechá reagovat s thiolem hepta-O-acetylmaltosy (11,8 g, připraveným postupem podle příkladu 16, oddíl A a Bj, postupem podle příkladu 6, oddíl C a získá se 17 g produktu ve formě bílé pěny. Tento- produkt se dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií použitím gradientu ethylacetátu až směsi ethylacetátu a ethanolu (1:1) jako elučního činidla. Získá se tak 1,22 g derivátu heptaacetylthiomaltosy.

B. 14-deoxy-14-( [4-0-( 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl )-2,3,6-tri-O-acetyl-^-D-glukopyranosyl]thioacetoxy)-19,20-dihydromutilin, dále nazývaný jako derivát dihydroheptaacetylthiomaltosy, se připraví edukcí derivátu heptaacetylthiomaltosy (330 miligramů) postupem podle příkladu 6. Získá se 334,5 mg derivátu dihydroheptaacetylthiomaltosy.

Příklad 25

A. 14-deoxy-14-{ [ 4-O- (a-D-glukopyranosyl) -j3-D-gIukopyranosyl ] thioacetoxyjmutilin, dále nazývaný jako derivát thiomaltosy, se připraví deacetylací derivátu heptaacetylthiomaltosy (1,1 g) postupem popsaným v příkladu 7. Získá se 1,1 g surového produktu ve formě žlutého odparku. Tento produkt se dále čistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií popsanou v příkladu 9. Získá se tak 732,6 mg derivátu thiomaltosy.

B. 14-deoxy-14-{ [ 4-O- (a-D-glukopyranosyl)-D-glukopyranosyl]thioacetoxy}-19,20-dihydromutilin, dále nazývaný jako derivát dihydrothiomaltosy se připraví z derivátu thiomaltosy (266,7 mg) redukcí postupem popsaným v příkladu 7. Získá se tak 243 mg derivátu dihydrothiomaltosy.

Biologická aktivita glykosidů pleuromutilinu

Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují růst určitých pathogenních organismů, zejména grampositivních bakterií. Sloučeniny se s výhodou testují proti typickým grampositivním organismům, jako je Staphylococcus aureus za použití turbidometrického .testu na poloautomatickém přístroji (Autoturb Microbiological As-say Syř stem, Elanco) popsaným v práci N. R. Kužel a F. W. Kavanagh v J. Pharmaceut. Sci., 60, (5), 764 a 767 (1971). Při testování těchto sloučenin byly použity následující parametry: Staphylococcus aureus [H—Heatley) NRRL В—314 v živném médiu (pH 7) inkubovaném asi 4 hodiny při 37 °C. Testované vzorky a A—40104 faktor A, které byly použity jako standardy, byly rozpuštěny ve vodě. Standardy byly přítomny v Autoturb přístroji v koncentracích 1,25; 2,50; 3,75; 5,00 a 6,25 ^g/ml.

Testované sloučeniny byly zředěny tak, že obsahovaly přibližně 2,5 až 5,0 ^g aktivity na ml. Jednotky aktivity určitých typických sloučenin podle předloženého vynálezu (R² = I-I v testované skupině) při testech in vitro jsou shrnuty v tabulce 1.

	Ta ibulka 1
testovaná sloučenina		jednotky aktivity
		[/xgAng]
R	R1
ethyl	α-D-glukospranssyi	<100
ethyl	1-thio-3-D-xylopyranssyl	1150—1243
ethyl	2,3,4,6--etra-O-acetyl-l-thio-/b -D-glukopyranosyl	203—220
ethyl	2,3,4-O-triacety-il-thi--3-D- -xylopyranosyl	746—883
ethyl	l-thio-3-D-glukspyraoosri	29— 31
ethyl	2,3,4--n-O-acetylTtbio-3-D- -ribspyraossyi	480—500
ethyl	1-thio-3-D-ribopyгanosyi	1500
ethyl	i-thicua-D-ribopyranosyl	430—433
ethyl	hepta-O-acetyl-l-thiomaltosa	28
ethyl	2₁3,4-tri-O-acetri-l-thi·o-3-D- -arabinopraanosrl	380
ethyl	l-thio-0-D-arabinspyraossyi	420
ethyl	4-deoxy-4- (dimethylamins) -β- -D-xxlopxranosyl	300

Glykosidy pleuromutilinu podle předloženého vynálezu jsou relativně netoxické. Například hodnoty LD_t5₀ 14-deoxy-14-[ (β-D-xylopyranosyljthioacetoxyjmutilinu a 14-deoxy-14-[ (/:éD--xlooyranossllthioacetoxy]-19,20-dihydromutilinu, při intraperitoneální injekci myším jsou větší než 1500 mg/kg; LD5o 14-deoxy-14-| [ 3,4,6-ttri-O-acetyl^-deoxy-2- (hydr oxyimino ) -a-D-glukopyranosyl ] osχacetooχ|-l1,22-dihydromutiliou, jsou rovněž při iotraperitsoeáioí injekci myším větší než 300 mg/kg.

Typické sloučeniny podle předloženého· vynálezu vykazují in vivo aotimikas'biáioí účinek vůči experimentálním bakteriálním infekcím. Jestliže se dvě dávky těchto sloučenin aplikují myším s příslušnou infekcí, uvádí se nalezená aktivita jako- ED5₀ hodnoty [účinná dávka v mg/kg, která chrání 50 % testovaných zvířat. Viz Warren Wick aj., J. BacterioL 81, 233—235 (1961)]. ED50 hodnoty pozorované u těchto sloučenin jsou uvedeny v tabulkách II a III.

Tabulka II

I.n vivo- aktivita 14-deoxy-14-[ (/3D-xχlosyranosslithioacetsxy]mutiimu

Testovaný organismus	aplikace	^ED50^x2	stupeň infekce
Staphylococcus aureus 3055	podkožně	1,85	82 x LD>50 (ip)
Staphylococcus aureus 3055	orálně	44	3400 x LD5₎₀ (ip)
Staphylococcus aureus 3055	orálně	32,4	500 x LD5₀ (ip)
Streptococcus pyogenes C203	podkožně	11,4	370 x LD50 (ip)
Streptococcus po·eumsoiat Park I	podkožně	65	42 x LD50 (ip)
Streptococcus poeumsoiae B1492	podkožně	15.3	340 x LD5₀ (ip)

Tabulka III

In vivo aktivita 14-deoxy-14-[ (/^D-xχlosyranosyr )thioacetsxy]-19,20-dihrdromutiimu

Testovaný organismus aplikace ED.5i)X2 stupeň infekce

Staphriocsccus aureus 3055	podkožně	1,6	400	X	LDso (ip)
Stupň^o-coccus aureus 3055	orálně	29	3400	X	^LD50	(ip)
Staphylococcus aureus 3055	orálně	21	500	X	^LD50	(ip)
Streptococcus pyogenes C203	podkožně	7,0	500	X	^bDg50	(ip)
Streptococcus pneumornae Park I	podkožně	58,5	42	X	^LD50	(ip)
Streptococcus pneumoniae B1343	podkožně	16,3	30	X	^ld50	(ip)
Streptococcus pneumomae B1492	podkožně	13,25	340	X	^ld50	(ip)

Sloučeniny podle předloženého vynálezu také inhibují růst různých anaerobních bakterií, Tabulka IV shrnuje aktivitu typických sloučenin podle předloženého vynálezu, jak byla stanovena standardními zřeďovacími testy na agaru.

Tabulka IV

MIC (pg/rnlj* sloučeniny číslo

	3 4	5	6	8
Actinomyces israelii	0,5	£0,5	<0,5	2,0	8,0
Clostridium perfringens	2,0	>128	8,0 >128	>128
Clostridium septicum	1,0	4,0	32,0	1,0	>128
Eubacterium aerofaciens	0,5	>128	4,0	16,0	>128
Peptococcus asaccharolyticus	0,5	<0,5	4,0	4,0	8,0
Peptococcus prevoti	£0,125	8,0	2,0	2,0	>128
Peptostreptococcus anaerobius	£0,125	1,0	8,0	<0,5	64,0
Peptostreptococcus intermedius	0,5	2,0	2,0	4,0	>128
Bacteriodes fragilis 111	2,0	32,0	64,0	2,0	>128
Bacterlodes fragilis 1877	1,0	32,0	64,0	2,0	>128
Bacteriodes fragilis 1936B	1,0	64,0	128	8,0	>128
Bacteriodes thetaiotaomicron	0,5	64,0	64,0	8,0	>128
Bacteriodes melaminogenicus 1865/28	0,25	8,0	2,0	2,0	>128
Bacteroides melaninogenicus 2736	0,5	4,0	4,0	4,0	>128
Bacteroides vulgatis	1,0	32,0	32.0	4.0	>128
Bacteroides corrodens	1,0	32,0	64 Ό	4,0	>128
Fu'sobacteriiim symbiosum	1,0	128	16,0	4,0	>128
Fusobacterium necrophorum	1,0	£0,5	8,0	4,0	>128
	Tabu	lka IV	— pokračování
sloučenina č.	N	á ze v

14-deoxy-14-[ (β-D-xylopyranosyl) thioacetoxy ]-19,20-dihydromutilin

14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-_l3-D-glukopyranosyl)thioacetoxy]-19,20-dihydromutilin

14-deoxy-14-[ (β-D-glykopyranosyljthioacetoxy ] -19,20-dihydromutilin

14-deoxy-14- [ (2,3,4-tri-O-acetyl-a-D-xylopyranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydr omutilin

14-deoxy-14-{[3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2-2-(hydroxyimino]-a-D-glukopyranosyl]-oxyacetoxyj-19,20-clihydromutil.in

Důležitým rysem aktivity sloučenin podle předloženého vynálezu je jejich aktivita vůči mykoplasmatům. Některé druhy mykoplasmat jsou pathogenní u lidí a různých zvířat. Látky aktivní vůči mykoplasmatům jsou zejména nutné pro prevenci a léčení nemocí způsobených mykoplasmaty u drůbeže, prasat a dobytka.

Například 14-deoxy-1.4-[ (|3-D-xylopyranosyljthioacetoxyjmutilín a 14-deoxy-14-[ (β-D-xylopyranosyl) thioacetoxy] -19,20-dihyd romutilin jsou in vitro testech aktivní vůči Ureaplasma sp., Mycoplasma bovis, Mycoplasma dispar a některým jiným druhům mykoplasmat hovězího dobytka v množství 0,024 pg/ml.

Minimální inhibiční koncentrace [MIC] řady typických sloučenin podle předloženého vynálezu (R² — H] v testované skupině proti různým druhům mykoplasmat, jak byly stanoveny in vitro ve zřeďovacích testech jsou shrnuty v tabulce V.

Tabulka V

Testovaná sloučenina

R

R¹

MIC (ug/ml)

Mycoplasma Mycoplasma gallisepílcum synoviae

ethyl	3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2- (hydroxyimi- no) -o--D-glukopyranosy 1	3,12	6,25
ethyl	l-thiO/3-D-xylopyra.nosyl	0,39	0,39
ethyl	2,3,4-tri-O-acetyl-l-thiΌ-β-D-xylopyranosyl	0,78	0,78
ethyl	3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2- (hydroxyimino) - -a-D-glukopyranosyl	6,25
ethyl	l-thio-S-D-xylopyranosyl	0,39	<0,15
ethyl	'l.iT-ri-O-acetyl-l-tliio-i-D-xylopyraaosyl	0,39	<0,15

Sloučeniny podle předloženého vynálezu také vykazují in vitro aktivitu proti ' Pasteurella multocida, Pasteurella hemolytica, a druhům Pseudomonas, které jsou pathogenní u ryb. P. multocida například způsobuje infekci dýchacích orgánů u dobytka, drůbeže a vepřů. P. liemolytica je hlavní příčinou dýchacích onemocnění u dobytka.

Při testech in vitro proti Pasteurella ho molytica je například průměrná MIC hodnota pro 14-deoxy-14-[ (β-D-xyiopyranosyl)thioacetoxylmutilin a 14-deoxy-14-[ (β-D-xylopy-ranosyl) thioacetoxy ] -19,2ú--hhyclromutilin 12,5 ,zg/ml a 10,4 .ug/ml.

Aktivita reprezentačních sloučenin podle předloženého vynález.u (R2 = H v testované skupině) proti P. multocida a Pseudomonas sp. je zahrnuta v tabulce VI.

Tabulka VI testovaná sloučenina

R R¹

Pasteurella multocida (hovězí dobytek)

MIC (ug/rnl)

Pasteurella multocida (krůty)

Pseudomonas sp· (ryby)

ethyl	l-thio-U-D-xylopyranosyl	6,25	6,25	12,5
ethyl	2,3,4--ri-O-acetyl-l-thio-U--D- -xylopyranosyl	>50,0	>50,0	12,5

Podle jiného důležitého rysu jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu také účinné proti Spireplasmatům. Spiroplasma citri způsobuje houževnaté onemocnění citrusů, jiné Spiroplasma ovlivňuje růst kukuřice. Tabulka! VII shrnuje in vitro aktivitu reprezentativních sloučenin podle předloženého vynálezu (R2 = H v této skupině) proti spiroplasma citri. V tomto testu je inhibice S. citri stanovována barevnou reakcí. Červená (R) -označuje úplnou inhibici, červeno-oranžová (RO) označuje částečnou inhibici a žlutá (Y) označuje žádnou inhibici. Tak například 14-deoxy-14-[ (/í-D-xylopyranosyl) thioacetoxy)-19,20-dihydromutilin inhibuje růst S. citri v množství 0,01 ppm.

Tabulka VII

R	Testovaná sloučenina Ri	aktivita — ppm
1,0	0,1	0,05	0,01
ethyl	1-thio-U-D-xylopyranosyl	R	R	R	R
ethyl	2,3,4-tri-O-acetyI-l-thiO/β-D-xyl·opyra- nosyl	R	R	R	RO
ethyl	2,3,4,6-tutra-O-acetyl-l.-hii.o-3-D-glukopyranosyl	R	R	R	Y
ethyl	l-thio-3-D-glukopyranosyl	R	R	R	Y
ethyl	3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2- (hydroxyimino) -a-D^-^l^^lkopyrano^yl	R	Y	_	_

Důležitým . rysem předloženého vynálezu je použitu sloučenin podle předloženého· vynálezu pro léčení dysenterie u vepřů. Jak je uvedeno W. E. Brownem aj. v USA patentu č. 4 041 175 je pleuromutilin účinný pro léčení dysenterie u vepřů. Nyní bylo nalezeno, že glykosidy pleuromutilinu podle předloženého vynálezu jsou také účinné proti Treponema hyodysentsriae, organismus který je nejvíce dáván do souvislosti s dysenterií vepřů. Účinek proti T. hyodysenteriae je stanoven in vitro -testem. Test zahrnuje přidání sloučeniny v množství 50; 5,0; 0,5 -a 0,05 jíg/ml agarových desek z trypticasy se sójou, obsahujících 5 % hovězí krve.

Agarový povrch se naočkuje 0,1 ml.lO^-1 zředěním suspenze T. hyodysenteriae. Desky se inkubují 4 dny za anaerobních podmínek a pak se stanovuje přítomnost nebo nepřítomnost hemolytické trepohemy. 14-deoxy-14-[ (/3‘-D-xy lopy г anosyljthioaceto.xy]mutilin a 14-deoxy-14-[ (-3-D-xytopyranosyl)thioacetoxy]-19,20-dihydromutilm inhibují růst 50; 5,0; 0,5 ag/ml koncentrace agaru.

Při použití pro léčení dysenterie vepřů se sloučeniny podle předloženého· vynálezu mohou aplikovat vepřům s infekcí orálně ve fo.rmě tablet, kapslí, prášků apod. Výhodnou metodou aplikace je však podávání sloučeniny spolu s potravou.

Claims

PŘEDMĚT VYNALEZU

1. Způsob přípravy glykosidů pleuromutU linu obecného vzorce IV kde R je ethyl, R¹ je vybírané ze skupiny sestávající z a- a β-anomerů hexopyranos 1-thio-D- a L-glukosy, 1-thio-D- a L-galaktosy, z a- a -3-anomerů pentopyranos a pentofuranos 1-thio-D- a L-ribosy, 1-thio-L- a D-arabinosy, z -a- -a -3-ano-merů pentopyranosových forem 1-thio-D- a L-xylosy, z a- a -3-anomerů pyranos aminocukrů 2-deoxy-2-amino-D- a L-glukosy, 2-deoxy-2-amino-D- a L-galaktosy, 4-deoxy-4-amino-Da L-xylosy a Ν,Ν-dialkylderivátů těchto aminocukrů s 1 až 4 atomy uhlíku v každém z alkylů, z — a /-anomerů disacharidu 1-thiomaltosy, z 2-deoxy-2-(hydroxyimino)-3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranosylu, 2-deoxy-2-amino-4,()-di-O-acetyl-a-D-glukt.)pyranosylu, a -z kteréhokoli zbytku uvedeného výše, který je peracylovaný alkanoylem s 2 až 4 atomy uhlíku,

R2 je atom vodíku, vyznačený tím, že se hydrogenuje glykosid pleuromutilinu obecného vzorce V kde R¹ a R2 mají význam uvedený výše.
2. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-j[2-deoxy-2-(hydroxyimino )-3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl]))xyacetoxy}-11,22-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-{[ (2-deoxy---hydroxyíminop-^^-tri-O-acety-ar-D-glukopyranosyl ] oxyacetoxyjmutilin.
3. Způsob podle bodu 1 pro· přípravu 14-deoxy-14- [ (2-deoxy-2-amino-4,6-di-O-acetyl-α-D-glukO'Pyl·anosyl) oxyacetoxy ] -19,20-dihydronutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (2-d·eoxd-2-ammo-4,6-di-0-al:etyl·-·-l-D-glukopyranosyl)-oxdacetoxy] mutilin.
4. Způsob podle bodu 1, pro přípravu 14-deoxy-14-[ (2-deoxy-2-amino-í?-D-galaktopyranosyl) -oxyacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje - 14-deoxy-14- [ (2-deoxd-2-amino-rl-D-galaktopyr anosy 1) oxyacetoxy ] mutilin.
5. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6--etra-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl)-thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený -tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6tetra--O^-^íc(^<jyl^--^3J-^D glukopyranosyl] thioacetoxy Jmutilin.
6. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14- [ (Д-D-glukoppyanosyl) thioacetoxy] -19,20-dihyd.romutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (/ř-D-glukopyranosyl) thioacetoxy ] mutilin.
7. Způsob podle bodu 1 pro· přípravu 14-deoxy-14- [ (2,3,4-tri-O-acetyl-/--D-xyl.opyranosyl j -thioacetoxy ] -19,2 0-d ih yd romutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-/--D-xχlo·pyranosyl]thioacetoxy ] mutílin.
8. Způsob podle -bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14- [ ( 3-D-xxl 01^1^1103^1 ) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14--(3-D-xylopyranosyl) thioacetoxy] mutilin.
9. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14- [ (2,3,4-tTi-O-acetyT,ó''U-arabinopyranosyl jthioacetoxy ] -19,20-dihycii'omutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14- [ (ZMl-Rri-O-acetyl/í-D-arabinopyranosy 1] thioacetoxy ] mutilin.
10. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14- [ (£-D-arabinopyranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-depχy-14-[(3-D-arabinopyranosyl] thioacetoxy Jmutilin.
11. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-[ (2,3,4-^Jtri-O-acetyl-/--L-aI’abinppyranosyl )thioacetoxy--19,20-dihydronktilinrι, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tat-O-acetyl-ý-L-arabinppyranosyl) thioacetoxy ] mutilin.
12. Způsob podle bodu 1 pro- přípravu 14-deoxy-14- [ (β-L-arábinopyranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (^-L-arabinopyranosyl) thioacetoxy ] mutilin.
13. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-[ (2,3,4,6-tetra-O-acely--₁3-D-galaOtopyrano-syl) thioacetoxy ] -W^O-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14- [ (2,3,4,6--eti’a-O-acetyl-(í-D-galaktopyranosyl) thioacetoxy] mutilin.
14. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-[ (β-D-galaktopyranosyl jthioacetpχy]-19,20-dihydromktilinιl, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoxy-14-[ (β-D-galakto-pyranosy 1) thioacetoxy ] mutilin.
15. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxy-14-[ (2,3,4-tri-O-acetyl-3-L-xylopy.''anosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyynačený tím, že se hydrogenuje 14-d'eoxy-14- [ (2,3,4--гi-O-acetyll/3-L-xχ1opyranosyl) thioacetoxy jmutilin.
16. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14ldepχy-14- [ (/--L-xyloopranosyl) thioacetoxy^^ZO-dihydromutilinu, vyznačený tím, že -se hydrogenuje 14-deoyy-14-[ [ /--L-xylopyranosyl )thioacetoyr]nutilin.
17. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14- ldepχr-14l[ (α-D-ribopyranosrl] thioacetoxy ]l19,2ϋ-dihydrom'atilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje (a-D-i-ibopyrano-yl) thioacet^oxy ] mutílin.
18. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-depχr-14- [ (/^--^--it^c^i^y^ri^n osy I) thioacetoxyPW^O-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-deoyyl14-[(3-D·-ribopyranosyl) thioacetoxy Jmutilin.
19. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14ldepχyl14l[ (2,3,5-trilO-acetrila'-D-ribρfuranosyl] thioacttoyy]-1.9,
20-dihrdronutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-depyy-14-[ (2,3,5-tri-O-acetyllpíD--iboPuranPsyl )thioacetoxy ] mutilin.

2-. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deoxyl14l[ (α-D-ribofuranosyl)thipacetoxy] l19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje (a-D-ríbofuranosyl) thioacetoxy ] mutílin.
21. Způsob podle bodu 1 pro- přípravu 14-d-Boxy-W [ (β-D-ribof uranosyl) thioacetoxy ] -19,20^11^1'01^00111, vyznačený tím, že - se hydrogenuje 14-deoxyl14-[(£--D-aibofuranosyl) thioacetoxy Jmutilin.
22. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-deo xy-14-- [ 2-depχy-2l (N,N-dimethylami- no ] -3,4,6-trilO-acetyl-/3-D-glukopyranosyl ] thipacetoxy}-19,20-dihydromutilmu, vyznačený tím, že se hydrogenuje -14--(2-deoxyl2l (N,N-diinethylamino} ^Дб-ЬЮ lacetyll_j'--D-glukopyranosyl]thioac·etoxy}l mutilin.

2-. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14ld.eoxyl14---2<-eooχl---N,^I-dimethylammo]l/^D-gluUopyranosyl]thipao-ePoxy)-19,20-dtl hydapnutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14ldtPxyl14-( -2-deoxy-2-(N,N-dimethylanino]-/--D--gukopyranopy1]thioacttl oxylmutilin.
24. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-depχy-14-- [4-0-( 2,3,4,6-tetгa-O-acely--α-D-glukpprranpsyl)-2,3,6ltгi-O-acetyl-$--Dlglu0pprraIlPsyltth(oatetχyy--19,20ldihydl romutilinu, -vyznačený tím, že se hydrogenuje 1.4-dtJpχy-14--[ 4-Ol(2,3,4,6-tttra-Olacttyllα-D-glukoprranρsyl)-2,3,6-trilOlacetyll l3-D-ghι^o>ρy’Vlnosyl]thioacetPxy|nlutilm.
25. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-decxy-14-- [ 4--- (a-D-glukopyranosyl ] -D-glukρpyranosyl]thioacttyχy--1.9,20-dihydl romutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-200x1-^ 1^4--, [ 4-ϋ- (alD-glukopyranpsyl) -D-glukopyranosy 1 ] thipacetoxyjmutШn.
26. Způsob podle bodu 1 pro přípravu 14-depχy-14-[ (2,3,5-tri-O-acetyl-3lD-aibofuranosyl) thioacetoxy ] -19,20-dihydromutilinu, vyznačený tím, že se hydrogenuje 14-depχyl -14-[ (2,3_l5-lt'i-O-acetyl-3-D-τ'ibPлιгanosyl)l thioacetoxy ] mutílin.