CS209862B2 - Způsob výroby -L-glutamyltaurinu - Google Patents

Description

Předmětem vynálezu je způsob výroby χ-L-glutamyltaurinu vzorce

HžN—CH—COOH (CH₂)2

CO—NH—(CH2)2—SO3H a jeho opticky aktivních antipodů, který se vyznačuje širokým spektrem terapeutické a preventivní účinnosti vůči patologickým změnám, majícím přímou nebo nepřímou příčinu v poškození aerobiosférického genetického adaptačního systému (AG-AS).

K objasnění pojmu AGAS jsou níže uvedeny nejdůležitější tkáně a orgány tvořící tento systém:

a) Všechny biologické hraniční plochy, které jsou ve styku s vnějším vzduchem jako biosférou (pokožka, a pokožkové útvary, rohovka a spojivka, ústí a jícnová dutina, dýchací cesty a plíceJ,

b) kostra a končetiny (duté trubkové kosti a houbovité kosti, kulové klouby, výstelka kloubní dutiny, skeletonové svalstvo), cj orgány účastnící se regulace iontového· hospodářství (transepitelový dopravní systém: střevní klky, ledvinové kanálky),

d) chrup, potřebný k rozmělnění potravy a upevněný kořeny v zubních lůžcích,

e) sluchové, čichové a hlasové orgány.

Sloučenina připravená způsobem podle vynálezu má tedy na výše uvedené orgány, popřípadě tkáně systému AGAS příznivý biologický, popřípadě terapeutický účinek.

Tato sloučenina působí dále na níže uvedené funkce, které souvisí se systémem AGAS: ochranný účinek proti záření, účinek podporující hojení ran a obecně aktivující mesenchym, ochrana proti stále vzrůstajícímu nebezpečí infekce a znečištění pokožky a slizníc (tvorba lysozymu vlhkých slizníc, aktivace řasinkových výstelek v dýchacích cestách atd.j, zvýšená ochrana proti infekcím vyvolaným viry a houbami.

Sloučenina připravená způsobem podle vynálezu je účinná proti stále a ve značné míře se zvyšujícím stresovým účinkům (například meteorologické vlivy, značné rozdíly mezi denní a noční teplotou, zvýšené nebezpečí zranění] života na pevnině tím, že stabilizuje přizpůsobovací syndrom a současně odvrací poškození periferních tkání glukokortikoidy (například poškození spojovacích tkání, poškození základní kostní hmoty atd.). Vznik imunohomoeostázy (vy209862 stupňovaná schopnost poznání těla, které buňky přináleží k tělu, a které nikoliv).

Uvedená sloučenina připravená způsobem podle vynálezu působí zčásti bezprostředně, zčásti řízením metabolismu vitaminu A, vytvářením metabolitů vitanrnu A silněji polárního charakteru. Tento účinek je srovnatelný s účinkem parathormonu na 25-hydroxycholekalc'ferol-1-ia-hydroxylázový enzym ledvinových kanálků. Tímto vysvětlením se stává srozumitelným široké farmakologické, biochemické a terapeutické působení χ-L-glutamyltaurinu připraveného způsobem podle vynálezu. Oblasti působení této sloučeniny jsou tyto:

A. Účinky s charakterem vitaminu A

a) Farmakologické a biochemické účinky

Sulfáty značené radioaktivním prvkem se ve zvýšené míře vpraví do kostní chrupavky krysy, popřípadě do oční čočky, jaterní a plicní tkáně kuřecího zárodku; radioaktivně značený fosfor se ve zvýšené míře vpraví do kostní chrupavky krysy; účinek zvyšující syntézu chondroitinsulfátu; příznivý účinek na hojení ran, popřípadě na hojení ran, experimentálně zhoršené podáváním kortizonu u krys a psů; účinek potencující působení vitaminu A u hypovitaminóz, popřípadě hypervitaminóz, experimentálně vyvolaných na krysách a kuřatech; uklidňující působení na stresové účinky podmíněné vředy u krys; příznivý účinek na degranulaci mastocytů; účinek zvyšující produkci lysozymu; působení na hospodaření se stopovými prvky (křemík, zinek, měď, mangan, fluor); příznivý účinek na tvorbu epitelu; stupňující účinek na alkalickou aktivitu fosfatázy; působení na tvorbu granulomového váčku, vyvolanou lokálním účinkem vitaminu A; velmi plochý průběh křivky dávka/účinek, popřípadě změna znaménka účinku při velkých dávkách; aktivující účinek na Golgiho ústrojí; příznivý účinek na tvorbu kalichových buněk; účinek zvyšující koncentraci vitaminu A.

b) Klinicky therapeutické účinky

Keratoconjunctivitis sicca; Sjorgrenův syndrom; rhinolaryngopharyngitis sicca; ozaena; chronická bronchitida; sinobronchitida; mukoviscidóza; konstitucionální onemocnění plic u malých dětí; paradentóza; náchylnost kůže a sliznice k nákaze viry a houbami; antagonistické působení vůči kortizonu; příznivý účinek na hojení ran kůže a sliznice při operacích; erosio colli; snížení čichového a chuťového smyslu, způsobené svěděním¹.

B. Účinky bez charakteru vitaminu A

a.) Farmakologické a biochemické účinky

Působení na hladinu cukru v krvi ve smyslu přechodného snížení; stupňující účinek na fosfaturii; snižující účinek na hladinu fosforu v séru; radioochranný účinek, účinek snižující dobu potřebnou k dosažení cíle při pokusech s labyrintem inaktivních zvířat; tlumicí účinek na experimentálně vyvolanou fluorovou a kadmiovou toxikózu; stupňující účinek na cyklické vyprazdňování ledviny, vyvolané odenosinmonofosfátem; zmírňující účinek na symptomy experimentálně vyvolaného lathyrismu; snížení citlivosti na histamin; stupňující účinek na aktivitu jaterního enzymu tyrosinamiinotransferázy.

b) Terapeutické účinky

Slabá poškození zářením; místní nedostatek barviva v kůži; svalová hypotonie; psychoenergetizující účinek; příznivý účinek na involuční a gerontologické stavy, jakož i na mnestické funkce; sklon k tvorbě jizvových fibromů; spondylosis ankylopoetica; onemocnění pohybových orgánů vyvolaná opotřebením; sklerotický fundus; amyloidóza; morphea; fibrocystická mastopathie.

Při podávání sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu je doba léčení velmi různá. U mnohých nemocí (například u rhinolaryngopharyntis sicca) se při orálním podávání 5 ,«g třikrát denně nevyskytují symptomy již po dvou týdnech, k symptomatickému uzdravení jiných nemocí (například paradentózy, SjÓrgrenova syndromu) je třeba jednoho až dvou měsíců, u dalších nemocí (například u spondylosis ankylopoetica) musí léčba probíhat čtvrt až půl roku.

Ze sloučeniny připravené způsobem podle vynálezu je možno jednoduchým způsobem vyrobit libovolné farmaceutické preventivní, kosmetické, popřípadě veterinárně léčebné preparáty. Tyto preparáty mohou obsahovat účinnou látku v kombinaci s jinými účinnými látkami. Denní dávka samotné účinné látky činí 50 až 500 pg, vztaženo na 1 kg tělesné hmotnosti a podává se rozdělena ve tři jednotlivé dávky.

Jedna tableta obsahuje 2 až 20 pg, s výhodou. 10 pg účinné látky, a kromě toho· biologicky inertní nosiče, například mléčný cukr, škrob, jakož i obvyklé pomocné tabletovací látky (granulační a kluzné látky, například polyvimylpyrrolidon, želatinu, mastek, stearát bořečnatý, aerosil, atd.).

Vzhledem k mimořádně malým dávkám fe účelné přidat účinnou látku ke hmotě, z níž se pak lisují tablety, ještě před granulací, a to v podobě roztoku. Tímto způsobem se dosáhne rovnoměrného rozptýlení účinné látky. Malý obsah účinné látky ostatně umožňuje vyrábět účinnou látku — i při výrobě mnoha miliónů tablet ročně — pouze v laboratorním měřítku, a to· za cenu, která je dostupná každému nemocnému. Účinná látka je stabilní, proto se mbhou tableϊ

209882 ty dodávat do obchodu bez uvedení lhůty pro spotřebování. Obsah účinná látky u tablet s retardačním účinkem, popřípadě u spansulárních tobolek; může být v rozmezí 10 až 20 μ§. U injekčních preparátů činí účinná dávka v jedné ampulce 5 až 10 ,«g a preparát se popřípadě může připravit ve formě práškové ampulky, v níž je účinná látka smíšena s netečným vodorozpustným plnivem. Parenterální aplikace se může provádět intramuskulárně, subkutánně nebo intravenosně. V uvedené koncentraci nemá účinná látka škodlivý účinek ani na tkáně, ani na stěny cév. Účinná látka se může podávat i jako infúze. Čípky obsahují 2 až 20, s výhodou asi 10 /zg účinné látky a vyrábějí se z kakaového másla nebo ze syntetických vosků či tuků, vhodných pro tento účel. Obsah účinné látky v kosmetických mastích nebo v mastích určených pro hojení kůže činí 0,1 až 1 /zg/g. Základní hmota pro- mast může být hydrofilní nebo hydrofobní a obsahuje obvyklé složky, například cholesterol, parafin, glycerin, lanolin, kakaové máslo, lněný olej' atd. Účinná látka může být též formulována jako aerosolový preparát, přičemž její obsah je rovněž v rozmezí 0,1 až 1 Ag/g· Ve formě perlinguální tablety obsahuje tableta 10 p.g účinné látky, doba rozpadu je 0,5 až 1 hodinu. Polymery k prodlouženému uvolňování účinné látky se mohou připravit například jako suspenze a obsahují 1 až 5 /zg účinné látky na 1 g polymeru. Injekční preparáty se zpožděným účinkem se mohou formulovat buď za použití vysokomolekulárních polymerů, nebo ze solí sloučeniny podle vynálezu, vytvořených s vysokomolekulárními organickými zásadami (například histon, protamin), přičemž 1 ampulka obsahuje 10 až 20 ,«g účinné látky. Pudry pro kosmetické použití nebo pro- použití k léčení pokožky se připravují s obvyklými nosiči, například s mastkem, a obsahují 0,1 až 1 /zg účinné látky v 1 g pudru. Pro oční lékařství se sloučenina vyrobená způsobem podle vynálezu formuluje v podobě kapek, popřípadě v podobě masti mísitelné, popřípadě nemísitelné se slzami; obsah účinné látky v těchto preparátech činí 0,1 až 1 /zg/g. Dětem má být sloučenina podle vynálezu podávána v dávce přibližně 0,3 ,ug na 1 kg tělesné hmotnosti.

Sterilní propráty se účelně vyrábějí sterilizační filtrací.

Požadovaný preventivní farmakologický, popřípadě kosmetický účinek výše popsaných preparátů je možno· zvýšit a doplnit •četnými kombinacemi. Jak-o· biologicky aktivní přísady přicházející v úvahu je v první řadě možno uvést tyto látky a chránit jejich použití:

Vitaminy A, C, E a K, stopové prvky, kcrtizon a jeho deriváty, progesteron, hormony štítné žlázy, radiomimeťcky a imunosupresivně účinné látky, psychofarmaka, preÚBVŠÍm látky s uklidňujícím účinkem, timoleptika, organické sloučeniny křemíku, gerontologické přípravky, látky snižující hladinu cholesterolu v krvi, orální antidiabetika, protizánětlivé látky, antihistaminy atd. Dávkování těchto· aktivních přísad je zpravidla stejné jako obvyklá terapeutická dávka při použití těchto látek samotných.

Sloučenina vyrobená způsobem podle vynálezu se může používat i jako přísada do nutrivních, popřípadě léčivých směsí. Vyvolává jednak přírůstek na hmotnosti, jednak snižuje potřebu vitaminu A, popřípadě zlepšuje jeho metabolismus. Dále se sloučeninou podle vynálezu zvyšuje resorpce stopových prvků a jejich hladina v krvi. Při použití sloučeniny podle vynálezu jako přísady do krmív činí orální dávka účelně 200 μ%/ /kg denně. Při smísení s krmivém odpovídá tato dávka přibližně koncentraci 1 až 2 /tg/ /kg, popřípadě i až 2 mg/t krmivá, tj. koncentraci 0,001 až 0,002 ppm. Vzhledem k těmto velmi nízkým koncentracím je použití sloučeniny podle vynálezu jakožto přísady do krmivá mimořádně hospodárné. Výhodně se tato sloučenina přidá k vitaminovým předsměsím nebo se používá v mikrotobolkách obsahujících sloučeninu podle vynálezu spolu s jinými potřebnými přísadami do krmív. Sloučeniny podle vynálezu je dále možno používat v pitné vodě k napájení dobytka, v soli k olizování nebo popřípadě i ve formě spraye.

Ve veterinárním lékařství má sloučenina podle vynálezu obdobné oblasti použití jako v humánním lékařství, tj. například při onemocnění pokožky, pro hojení ran, při zlomeninách kostí atd.

Způsob podle vynálezu k výrobě χ-L-glutamyltaurinu vzorce

................................

HzN—CH—COOH I (CH2)2 i

CO—NH—(CH2)2—S°3H se provádí tak, že se nechá reagovat redukovaný glutathion s taurinem v přítomnosti y-glutamyltranspeptidázy.

Způsob podle vynálezu je blíže objasněn dále uvedeným příkladem provedení:

6,05 g (50 mmolů) 2-amino-2-(hydroxymethyl)propan-l,3-diolu [TRISj, 4,38 gramu (75 mmolů) chloridu sodného, 2,50 gramu (20 mmolů) taurinu a 6,14 g (20 mmolů) redukovaného glutathionu se rozpustí v 900 mililitrech vody; pH vzniklého roztoku :se upraví na hodiotu 8,0 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, načež se objem roztoku doplní vodou na 1 litr. K roztoku se přidá 100 mg y-glutamyltranspeptidázového fermentu, isolovaného z ledvin vepře postupem popsaným M. Orlowskim, A. Meisterem v časopisu J. Biol. Chem. 240, str. 338 (1965). Pak se roztok ponechá stát 1 hodinu při teplotě 37 °C, načež se k němu přidá 100· ml 50% roztoku kyseliny trichloroctové. Vznik209862 lá sraženina se odstředí, načež se roztok trichloroctové kyseliny extrahuje po 8 hodin v kontinuálním extraktoru. Roztok se pak odpaří při teplotě 30 °C za sníženého tlaku na objem přibližně 100 ml, načež se vnese na iontoměničovou kolonu 2,2—50 cm, naplněnou Dowexem 1 ve formiátovém cyklu. Látka adsorbovaná v koloně se eluuje 1 N kyselinou chlorovodíkovou. Po objevení se kyseliny chlorovodíkové se získá 50 ml roztoku. Tento roztok se odpaří nejprve při teplotě 30 °C za tlaku 2 kPa, pak při teplotě místnosti za tlaku 13,3 Pa do sucha. Zbytek se překrystaluje z 80% ethanolu, čímž se získá 250 až 300 mg χ-L-glutamintaurinu. Teplota tání je v rozmezí od 219 do 220 °C, [_a]_D20 = ý i4° _{ívodaj c =} 1,02).

Relativní pohyblivost, vztažená na kyselinu cysteinovou, při papírové elektroforéze prováděné při pH 6,5 je 0,73, při pH 1,8 0,53.

R_f (směs n-butanol/pyridin/ledová kyselina octová/voda 15 : 10 : 3 : 12) — 0,19.

Analýza pro C7H11N2O6S (molekulová hmotnost 254,27):

vypočteno:

33,07 % C, 5,55 % H, 11,02 % N, 37,75 % N, 12,61 % S;

nalezeno:

33,15 % C, 5,76 % H, 10,94 % N,

37,53 % O, 12,17 % S.

Claims (1)

1. PŘEDMĚT

   Způsob výroby χ-L-glutamyltaurinu vzorce

   H2N—CH—COOH (CH2!)2

   CO—NH—(CH2)2—SO3H ·'

   VYNÁLEZU vyznačující se tím, že se nechá reagovat redukovaný glutathion s taurinem v přítomnosti χ-glutamyltranspeptidázy.