CN1976725A - 采用gpc和sec－mals进行的糖接合物尺度分析 - Google Patents

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Abstract

GPC(凝胶渗透色谱法)和以多角度光散射光度测定法(SEC－MALS)检测的分子排阻色谱可分别用于精确测定糖接合物的分子大小和摩尔质量。本发明提供了：(a)用于测定样品中接合糖抗原分子大小的方法，该方法包括采用GPC分析该样品的步骤；以及(b)用于测定样品中接合糖抗原摩尔质量的方法，该方法包括采用SEC－MALS分析该样品的步骤。

Description

采用GPC和SEC-MALS进行的糖接合物尺度分析
本文所引用的文件均以其全文纳入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及疫苗分析和质控领域，所述疫苗包含与载体接合的细菌荚膜糖。
背景技术
本领域中已熟知与载体蛋白接合的包含荚膜糖抗原的免疫原。接合使非T细胞依赖性抗原转变为T细胞依赖性抗原，由此增强了记忆应答并使得保护性免疫得以发生，原型接合疫苗用于b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzaetype b，Hib)[例如可参见参考文献1的第14章]。继Hib疫苗之后，已开发出了用于针对脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis，脑膜炎双球菌属)和肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，肺炎球菌属)提供保护的接合糖疫苗。对其接合疫苗感兴趣的其它有机体是：无乳链球菌(Streptococcus agalactiae，B组链球菌)[2]、绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[3]和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[4]。
可在水解步骤后选择具有所需大小的寡糖片段而不使用全长荚膜糖[例如参考文献5]，且已报道了用中等链长度的寡糖制备的接合物(conjugate)可提供提高的免疫原性[例如参考文献6和7]。在已开发用于人体的三种脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C接合疫苗中，MenjugateTM[8]和MeningitecTM是以寡糖为基础的，而NeisVac-CTM利用了全长多糖。
当疫苗中包含接合物时，对生产和释放的质量控制通常要求这些接合物具有确定的分子大小和/或摩尔质量，并且要求批次间的这些参数保存一致。也可用分子大小和摩尔质量监测疫苗的稳定性，这是因为接合物会随着时间的推移而聚集，导致大小和质量上升。
本发明的一个目的是提供用于测定接合糖抗原(尤其是脑膜炎球菌的糖接合物的)的分子大小、摩尔质量以及相关参数的新的改进方法。
发明内容
本发明人发现可采用凝胶渗透色谱法和SEC-MALS(以多角度光散射光度测定法检测的分子排阻色谱法)分别精确可靠地测定糖接合物的分子大小和摩尔质量。
因此本发明提供了一种用于测定样品中接合糖抗原分子大小的方法，该方法包括采用凝胶渗透色谱法分析所述样品的步骤。可通过例如与校准曲线比较，将色谱分析中获得的保留时间转化为粘度半径(viscosity radius，Rη)，从而使得对分子大小的简单计算成为可能。可用此方法简单地测定样品中接合物的平均分子大小和/或分子大小分布。
本发明还提供了一种测定样品中接合糖抗原的摩尔质量的方法，所述方法包括采用SEC-MALS分析样品的步骤。可将SEC保留时间转化为摩尔质量。可用此方法简单地测定样品中接合物的平均摩尔质量和/或摩尔质量分布(多分散性)。参考文献9报道了先前已将SEC-MALS用于测定接合前的肺炎球菌的糖和脑膜炎球菌的糖，但未报道任何接合后的数据。
糖
本发明使得接合糖抗原参数的测定成为可能。糖抗原通常为细菌的荚膜糖，例如获自脑膜炎奈瑟氏球菌(血清群A、B、C、W135或Y)、肺炎链球菌(血清型4、6B、9V、14、18C、19F或23F)、无乳链球菌(Ia、Ib、II、III、IV、V、VI、VII或VIII型)、流感嗜血杆菌(可分型株(typeable strain)：a、b、c、d、e或f)、绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌等的荚膜糖。其它糖分析物包括：葡聚糖(例如真菌的葡聚糖，例如白色念珠球菌(Candida albicans)中的葡聚糖)、真菌的荚膜糖(例如获自新型串酵母(Cryptococcus neoformans)的荚膜)。本发明尤其适用于分析获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A、C、W135和Y的荚膜糖。
脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜是(α1→6)连接的N-乙酰基-D-甘露糖胺-1-磷酸的均聚物，其中部分O-乙酰化发生在C3和C4位。脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的荚膜是(α2→8)连接的唾液酸均聚物。脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖是(α2→9)连接的唾液酸(N-乙酰神经氨酸，或′NeuNAc′)的均聚物，其中在7和/或8位上有可变的O-乙酰化。脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135糖是由唾液酸-半乳糖二糖单元[→4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Ga1-α-(1→]组成的，其中在唾液酸第7和9位上有可变的O-乙酰化[10]。脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的糖类似于血清群W135的糖，除了二糖重复单元含有葡萄糖而不是半乳糖，[→4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-α-(2→6)-D-Glc-α-(1→]。b型流感嗜血杆菌的荚膜糖是核糖、核糖醇和磷酸的聚合物[′PRP′(poly-3-β-D-ribose-(1，1)-ribitol-5-phosphate)，聚-3-β-D-核糖-(1，1)-D-核糖醇-5-磷酸]。
其它优选的糖抗原是真核生物的糖类，例如真菌的糖、植物的糖、人的糖(例如癌症抗原)等。其它优选的糖类是脂多糖和脂寡糖。
糖抗原可以天然的形式存在，或可以衍生的形式存在，例如已经经过化学改变和/或解聚的糖。本发明尤其适用于分析荚膜多糖的寡糖片段。天然多糖通常具有至少20(例如20、30、40、50、60或更高)的聚合度，它们可通过解聚作用(例如通过水解)转化为寡糖片段(例如具有小于20的聚合度)。
糖的化学水解通常涉及在本领域的标准条件下用酸或碱进行处理。本领域中已知使荚膜糖解聚为它们的组成单糖的条件。对于血清群W135和Y糖，优选采用酸水解。血清群C、W135和Y都可用采用TFA(三氟乙酸)的酸水解来水解，其中对于血清群C优选使用稍低的孵育温度以防止其唾液酸的降解(90℃而不是100℃)。代表性的TFA处理包括：以2M的终浓度加入TFA，然后加热到90-100℃，90分钟。可用100mM的HCl在80℃下水解血清群C的糖2小时，以分析总的糖含量[11]。其它代表性的水解条件涉及在提高的温度下(例如70-80℃)采用毫摩尔浓度的弱酸(如乙酸)。
本发明尤其适用于包含不同长度的各种糖(例如同一原始糖的不同片段)的接合物样品。
接合物
待分析的糖抗原接合在载体上。采用共价接合，通过将糖从非T细胞依赖性抗原转化为T细胞依赖性抗原以启动免疫记忆，从而增强其免疫原性。接合尤其适用于儿科疫苗，其是众所周知的技术[例如参考文献12-21中的综述]。糖可与载体直接连接[22、23]，但通常会使用接头或间隔物，例如己二酸、β-丙酰胺[24]、硝基苯基-乙胺[25]、卤化卤酰[26]、糖苷键[27]、6-氨基己酸[28]、ADH[29]、C4-C12部分[30]等。
接合物中代表性的载体蛋白是：细菌毒素或类毒素，例如白喉类毒素或破伤风类毒素。CRM197白喉毒素衍生物[31-33]是MenjugateTM和MeningitecTM的载体蛋白，而破伤风类毒素则用于NeisVacTM中。白喉类毒素在MenactraTM中用作载体。CRM197是PrevnarTM中的载体蛋白。其它已知的载体蛋白包括脑膜炎奈瑟氏球菌外膜蛋白[34]、合成肽[35、36]、热休克蛋白[37、38]、百日咳蛋白[39、40]、细胞因子[41]、淋巴因子[41]、激素[41]、生长因子[41]、包含获自各种病原体衍生的抗原的多个人CD4+T细胞表位的人造蛋白[42]、获自流感嗜血杆菌的蛋白D[43，44]、肺炎球菌的表面蛋白PspA[45]、铁吸收蛋白(iron-uptake protein)[46]、获自艰难梭菌(C.difficile)的毒素A或B[47]等。可在组合物中使用多种载体蛋白(例如以降低载体抑制的风险)，以及单个载体蛋白可运载一个以上糖抗原[48]。接合物的糖∶蛋白质比(w/w)通常为1∶5(即蛋白过量)-5∶1(即糖过量)。除了接合物以外，组合物还可包含游离的载体蛋白[49]。
本发明尤其适用于分析脑膜炎球菌的糖类(血清群A、C、W135和Y)与CRM197载体的接合物。可通过参考文献50-53中所揭示的方法来制备此类接合物。优选的接合物是根据参考文献51制备的那些接合物，即带有CRM 197载体和己二酸接头的寡糖片段。
凝胶渗透色谱法
凝胶渗透色谱法(GPC)是一种众所周知的标准技术。本发明将通常采用HPGPC(高效GPC)。根据本发明运用GPC技术来测定样品中接合物的水动力学(hydrodynamic)大小(在混合物中，平均大小和/或大小分布)。
可通过标准技术将GPC柱上的保留时间转化为粘度半径(Rη)。通常会测定已知分子大小的标准物在柱上的保留时间，从而使得这两组参数相关。然后可根据接合物在柱上的保留时间推断其分子大小。例如，用已知分子大小的葡聚糖对柱进行校准，采用三阶多项式方程(third order polynomial equation)将它们的保留时间与粘度半径关联[54、55]。粘度半径利用固有粘度和分子质量来解释分子形状对保留的影响。
在异源性混合物中，可用GPC技术测定该混合物中的平均分子大小和/或分子大小分布。
SEC-MALS
分子排阻色谱法(SEC)是一种众所周知的技术。可用多角度光散射(MALS)光度测定法和差量折射法(differential refractometry)分析分离的结果。该方法可提供摩尔质量分布和水动力学半径(分子大小)的信息，聚合物的确认和其它物理参数，而无需依赖于色谱参数(例如流速和固定相)且无需校准摩尔质量[9]。通过MALS测定分子质量是在预先测定感兴趣溶剂中感兴趣聚合物在感兴趣波长和温度下的比折光率(dn/dc)的基础上进行的，而不需要对摩尔质量进行校准。
因此，可采用SEC-MALS测定接合物的摩尔质量。从典型的德拜曲线(Debye plot)上可见，在SEC峰的各数据分片(data slice)测定样品的摩尔质量，从该曲线的截距测得摩尔质量[56-58]。可将与浓度成比例的折射率信号和与浓度以及摩尔质量成比例的90°MALS信号叠加以测定摩尔质量分布。
在异质性的混合物中，可用SEC-MALS技术测定该混合物中的平均摩尔质量和/或摩尔质量分布(多分散性)。
接合组合物
本发明提供了一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是57.1和/或所述接合物的摩尔质量是88.5kDa。该组合物还可包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的摩尔质量是190kDa。
本发明提供了一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是57.0和/或所述接合物的摩尔质量是85.2kDa。
本发明提供了一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是68.7和/或所述接合物的摩尔质量是110.1kDa。所述组合物还可包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的摩尔质量是347kDa。
本发明提供了一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是63.3和/或所述接合物的摩尔质量是84.7kDa。所述组合物还可包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的摩尔质量是486kDa。
虽然上文中以单一数字的形式给出了分子大小和摩尔质量值，本发明延伸到这些数字±20％、±15％、±10％、±5％、±2％等的接合物。
本发明还提供了一种组合物，所述组合物包含2种或2种以上(即2、3或4种)上文所述血清群A、C、W135和Y的接合物。
本发明还提供了一种制备多价接合疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：(a)采用本发明的方法分析2种或2种以上的接合物，和(b)混合经分析的接合物以形成多价疫苗。
本发明还提供了一种制备多价接合疫苗的方法，所述方法包括将2种或2种以上已采用本发明的方法分析的接合物混合的步骤。
混合的糖
本发明使得对含有荚膜糖接合物的组合物的分析成为可能。总体而言，本发明可用于含有单一类型接合物(即与同一种载体连接的衍生自同一种荚膜糖的糖类)的样品。因此对于多价接合疫苗(例如MenactraTM，PrevnarTM)，本发明通常用于连接形成多价终产物前的单独的接合物，而不是用于终产物本身。然而，如果2种接合物具有差异很大的分子大小和摩尔质量，则可直接进行平行分析。
储藏稳定性
本发明可用于监测接合物在储藏中的稳定性。因此，可在时间点t1和t2对获自同一物质的样品施行本发明的方法，并比较分析结果。摩尔质量和/或分子大小的显著变化指示该疫苗不完全稳定。因此，本发明可用于筛选稳定的疫苗以及淘汰不稳定的疫苗。
非接合成分
本发明的方法不仅可用于分析组合物中的接合物，还可包括其它成分或性质的分析，例如对重量克分子渗透浓度、pH、单一糖或接合物的聚合程度、蛋白质含量(尤其是载体蛋白)、铝含量、去污剂含量、防腐剂含量等的分析。
本发明提供了一种制备疫苗组合物的方法，所述方法包括以下步骤：根据本发明分析接合物摩尔质量和/或分子大小，测定组合物的pH，然后任选地将该组合物的pH调节到所需的值，例如6-8。或约7。
本发明还提供了一种制备疫苗组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供如上文所述的一种或多种接合物；(b)将该一种或多种接合物配制入混合(bulk)疫苗；(c)分析所述混合疫苗的pH和/或其它特性；以及如果从步骤(c)中获得的结果指示该混合疫苗是临床使用中可接受的，则(d)从该混合疫苗制备和包装人用疫苗。步骤(c)可涉及最小糖浓度的评估、未接合的糖∶接合的糖的比例评估等。步骤(d)可涉及包装成单位剂量形式或多剂量形式，例如包装到药水瓶或注射器中。代表性的人用注射剂量是0.5ml的体积。
本发明还提供了一种用于制备疫苗组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供如上文所述的一种或多种接合物；(b)将该接合的糖与一种或多种其它抗原混合，例如与以下抗原混合：
-获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖抗原。
-获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖抗原。
-获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的蛋白质抗原。
-脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B微泡[59]、′天然OMV′[60]、疱(bleb)或外膜小泡(vesicle)[例如参考文献61-66等]的制备物。
-获自b型流感嗜血杆菌的糖抗原。
-获自肺炎链球菌的抗原，例如多价接合糖抗原[例如参考文献67-69]。
-获自甲肝病毒的抗原，例如灭活的病毒[例如70、71]。
-获自乙肝病毒的抗原，例如表面和/或核心抗原[例如71、72]。
-获自百日咳杆菌(Bordetella pertussis)的抗原，例如获自百日咳杆菌的百日咳全毒素(PT)和丝状血球凝集素(FHA)，还可任选地与百日咳杆菌粘附素(pertactin)和/或凝集原2和3组合[例如参考文献73和74]。可使用细胞百日咳抗原。
-白喉抗原，例如白喉类毒素[例如参考文献75的第3章]、例如CRM197突变体[例如76]。
-破伤风抗原，例如破伤风类毒素[例如参考文献75的第4章]。
-一种或多种脊髓灰质炎抗原[77、78]，例如IPV。
可使这些抗原吸附于铝盐佐剂(例如氢氧化物或磷酸盐)。优选包含作为接合物的其它糖抗原。
本发明的接合物可类似地吸附于铝盐佐剂(例如氢氧化物或磷酸盐)，或它们可不吸附(例如游离在溶液中)。
批间一致性
本发明的方法是可靠一致的，因此使得不同批次接合物间的有效比较成为可能。可由此制备不同批次的接合物，对其进行测定，筛选出一致的批次用于释放(release)和制备接合疫苗，反之则淘汰异常的批次。
本发明提供了两个批次的疫苗，其中：(a)两个批次的疫苗均包含：(i)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物；(ii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物；(iii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物；(iv)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物；(b)第一批次中血清群A的糖的分子大小是A1，而第二批次中血清群A的糖的分子大小是A2；(c)第一批次中血清群C的糖的分子大小是C1，而第二批次中血清群C的糖的分子大小是C2；(d)第一批次中血清群W135的糖的分子大小是W1，而第二批次中血清群W135的糖的分子大小是W2；(e)第一批次中血清群Y的糖的分子大小是Y1，而第二批次中血清群Y的糖的分子大小是Y2；(f)A1/A2、C1/C2、W1/W2和Y1/Y2的比值各为0.90-1.10，优选各为0.95-1.05。
本发明提供了两批疫苗，其中：(a)两个批次的疫苗均包含：(i)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物；(ii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物；(iii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物；(iv)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物；(b)第一批次中血清群A的糖的摩尔质量是A1，而第二批次中血清群A的糖的摩尔质量是A2；(c)第一批次中血清群C的糖的摩尔质量是C1，而第二批次中血清群C的糖的摩尔质量是C2；(d)第一批次中血清群W135的糖的摩尔质量是W1，而第二批次中血清群W135的糖的摩尔质量是W2；(e)第一批次中血清群Y的糖的摩尔质量是Y1，而第二批次中血清群Y的糖的摩尔质量是Y2；(f)A1/A2、C1/C2、W1/W2和Y1/Y2的比值各为0.90-1.10，优选各为0.95-1.05。
(f)中指定的比值可基于获自各比较批次中的单个样品，但通常基于各批次中多个样品的平均值(例如平值)。因此可对两个批次进行多次取样，对各样品进行A1、A2、C1、C2、W1、W2、Y1和Y2的多次测定，然后计算各批次的平均值，用该平均值计算必需的比例。
可分别制备各批次(或多个)疫苗。例如，可通过分开混合同一批次单一接合物、或通过混合分别制备的批量单一接合物来制备两个不同的批次。同一批次混合物的不同样品不是不同批次，因为这些样品不会产生因制备不同接合物的混合物时的差异而引起的批间差异性。
通用
术语″包括″涵盖了″包括″以及″由……组成″，例如一种″包括″X的组合物可由X唯一地组成，或可包含某些其它组成，例如X+Y。
用语″基本上″不排除″完全″，例如″基本上不含″Y的组合物可完全不含Y。如果需要的话，可从本发明的限定中省略用语″基本上″。
关于数值x的术语″约″是指，例如x±10％。
附图简述
图1所示为6种已知水动力学大小的葡聚糖的校准曲线。
图2-5显示获自血清群A、C、W135和Y的CRM197接合物的HPGPC分析。
图6显示已知浓度的调整电压输出，dn/dc校准示于图7和8中。
图9所示为获自SEC-MALS的德拜曲线，图10显示了RI信号与90°MALS信号的叠加。
图11-14显示采用SEC-MALS对获自血清群A、C、W135和Y的CRM197接合物的摩尔质量分析。
本发明的实施方式
如参考文献51中大致所述制备获自脑膜炎球菌血清群A、C、W135和Y的寡糖的CRM197接合物。根据本发明采用HPGPC和SEC-MALS对各接合物进行分析。
HPGPC分析
糖接合疫苗通常由糖形(glycoform)的阵列组成，其具有多种结合在蛋白质载体不同位点的具有不同长度的糖。HPGPC通过测定脑膜炎球菌的糖接合物的水动力学大小和大小分布，以分子大小来表明脑膜炎球菌的糖接合物的特征。
校准使用了具有17-115水动力学大小的一系列6种葡聚糖。该标准物的HPGPC分析示于图1中。标准分子量和计算分子量如下：
  标准   115360   54130   26000   91840   38560   17590
  计算   115666   53847   25425   91514   39280   17767
采用三阶多项式方程，将该葡聚糖分析用于使粘度半径(Rη)与GPC保留时间相关[54，55]：
Rη(单位为)＝(108)(30Mp[η]/(π×6.023×1023))1/3
其中：Mp＝峰顶Mw，[η]＝单位为dL/g的固有粘度
用该方程计算接合物的粘度半径，该方程采用固有粘度和Mw说明分子形状对保留的影响。
对单独接合物的分析示于图2-5中。计算的水动力学大小如下：
  血清群   A   C   W135   Y
  大小()   57.1   57.0   68.7   63.3
  多分散性   1.032   1.018   1.040   1.035
作为分析的示例性条件，以50μl的进样体积，在TSK-Gel G4000SW(300×7，5mm ID)柱上，以0.1M磷酸钠/0.2M硫酸铵(pH 7.0)为流动相，对血清群A接合物进行分析。流速为0.5ml/分钟。使用了Waters 410折射率检测仪。
SEC-MALS分析
在进行SEC-MALS分析之前，在分析条件下测定接合物的折射指数(dn/dc)。图6所示为设定浓度下电压输出的一个例子。从该输出导出了图7和图8中所示的标准曲线。计算值如下：
  血清群   A   C   W135   Y
  dn/dc   0.163   0.190   0.159   0.201
采用SEC-MALS分析该接合物。如图9中典型德拜曲线上可见，在SEC峰的各数据分片测定样品的摩尔质量。从该曲线的截距测得摩尔质量[56-58]。可将与浓度成比例的RI信号(蓝色)和与浓度以及摩尔质量成比例的90°MALS信号检出(红色)叠加(图10)。
对摩尔质量(g/mol)的分析示于图11-14中。分析显示MenA、MenW135和MenY糖接合物的主峰具有较高MW的低浓度肩峰，而MenC接合物具有更具同源性物质的单峰。
峰(MW的单位为kDa；多分散性的单位为Mw/Mn)的分析结果如下：
  A   C   W135   Y
主峰   MW   88.540   85.230   110.100   84.650
  多分散性   1.012   1.011   1.049   1.050
肩峰   MW   190.000 -   485.800   347.200
  多分散性   1.053   -   1.090   1.096
应理解虽然仅通过举例的方式描述了本发明，但可在保持本发明的范围和精神的同时对本发明作出改变。
参考文献(其内容纳入本文作为参考)
[1]《疫苗》，“Vaccines”(Plotkin等编)，第4版，ISBN：0721696880。
[2]Baker等，(2003)J Infect Dis 188：66-73。
[3]Theilacker等，(2003)Infect Immun 71：3875-84。
[4]无名氏，(2003)Drugs R D 4：383-5。
[5]Ravenscroft等，(1999)Vaccine 17：2802-2816。
[6]Paoletti等，(1992)J Clin Invest 89：203-9。
[7]Anderson等，(1986)J～Immunol 137：1181-6。
[8]Jones，(2001)Curr OpinInvestig Drugs 2：47-49。
[9]D′Ambra等，(2000)Dev Biol Basel 103：241-242。
[10]WO2005/033148。
[11]Jumel等，(2002)Biotechnol Appl Biochem 36：219-226。
[12]Ramsay等，(2001)Lancet 357(9251)：195-196。
[13]Lindberg，(1999)Vaccine 17增刊2：S28-36。
[14]Buttery和Moxon，(2000)J R Coll Physicians Lond 34：163-168。
[15]Ahmad和Chapnick，(1999)Infect Dis Clin North Am 13：113-133，vii。
[16]Goldblatt，(1998)J.Med.Microbial.47：563-567。
[17]欧洲专利0477508。
[18]美国专利5,306,492。
[19]WO98/42721。
[20]《接合疫苗》，“Conjugate Vaccines”(Cruse等编)ISBN 3805549326，具体参见第10卷：48-114。
[21]Hermanson，(1996)，《生物接合技术》，“Bioconjugate Techniques”，ISBN：0123423368或012342335X。
[22]美国专利4,761,283。
[23]美国专利4,356,170。
[24]WO00/10599。
[25]Gever等，Med.Microbiol.Immunol，165：171-288(1979)。
[26]美国专利4,057,685。
[27]美国专利4,673,574；4,761,283；4,808,700。
[28]美国专利4,459,286。
[29]美国专利4,965,338。
[30]美国专利4,663,160。
[31]无名氏，(2002年1月)Research Disclosure，453077。
[32]无名氏，(1983)Infect Immun 39(1)：233-238。
[33]Anderson等，(1985)J Clin Invest 76(1)：52-59。
[34]EP-A-0372501。
[35]EP-A-0378881。
[36]EP-A-0427347。
[37]WO93/17712。
[38]WO94/03208。
[39]WO98/58668。
[40]EP-A-0471177。
[41]WO91/01146。
[42]Falugi等，(2001)Eur Jlmniunol 31：3816-3824。
[43]EP-A-0594610。
[44]WO00/56360。
[45]WO02/091998。
[46]WO01/72337。
[47]WO00/61761。
[48]WO99/42130。
[49]WO96/40242。
[50]WO02/058737。
[51]WO03/007985。
[52]Rennels等，(2002)Pediatr Infect DisJ21：978-979。
[53]Campbell等，(2002)J Infect Dis 186：1848-1851。
[54]Kunitani等，(1991)J Chrom 588：125及其后。
[55]Kunitani等，(1993)J Chrom632：19及其后。
[56]Wyatt，(1997)Instrumentation Science & Technology 25(1)：1及其后。
[57]Wen等，(1996)Anal Biochem240：155及其后。
[58]Rollings，(1992)《生物化学中的激光散射》，“Laser Light Scatteringin Biochemistry”，第19章。
[59]WO02/09643。
[60]Katial等，(2002)Infect Immun 70：702-707。
[61]WO01/52885。
[62]欧洲专利0301992。
[63]Bjune等，(1991)Lancet 338(8775)：1093-1096。
[64]Fukasawa等，(1999)Vaccine 17：2951-2958。
[65]WO02/09746。
[66]Rosenqvist等，(1998)Dev.Biol.Stand.92：323-333。
[67]Watson，(2000)Pediatr Infect Dis J 19：331-332。
[68]Rubin，(2000)Pediatr Clin North Am 47：269-285，v。
[69]Jedrzejas，(2001)Microbiol Mol Biol Rev 65：187-207。
[70]Bell，(2000)Pediatr Infect Dis J 19：1187-1188。
[71]Iwarson，(1995)APMIS 103：321-326。
[72]Gerlich等，(1990)Vaccine 8 Suppl：S63-68 & 79-80。
[73]Gustafsson等，(1996)N.Engl.J.Med.334：349-355。
[74]Rappuoli等，(1991)TIBTECH 9：232-238。
[75]《疫苗》，“Vaccines”(1988)，Plotkin和Mortimer编。ISBN0-7216-1946-0。
[76]Del Guidice等，(1998)Molecular Aspects of Medicine 19：1-70。
[77]Sutter等，(2000)Pediatr Clin North Am 47：287-308。
[78]Zimmerman和Spann，(1999)Am Fam Physician 59：113-118，125-126。

Claims (14)

1.一种测定样品中接合糖抗原分子大小的方法，所述方法包括采用凝胶渗透色谱法分析所述样品的步骤。
2.一种测定样品中接合糖抗原摩尔质量的方法，所述方法包括采用SECMALS分析所述样品的步骤。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述糖是细菌的荚膜糖。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述荚膜糖获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A、C、W135或Y。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述糖是寡糖。
6.如前述任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述接合物具有蛋白质载体。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述蛋白质载体是CRM197或白喉类毒素。
8.一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是57.1±20％和/或所述接合物的摩尔质量是88.5±20％kDa。
9.一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是57.0±20％和/或所述接合物的摩尔质量是85.2±20％kDa。
10.一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是68.7±20％和/或所述接合物的摩尔质量是110.1±20％kDa。
11.一种组合物，所述组合物包含获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物，其中所述接合物的分子大小是63.3±20％和/或所述接合物的摩尔质量是84.7±20％kDa。
12.一种组合物，所述组合物包含2种或2种以上权利要求8-11中所定义的接合物。
13.两个批次的疫苗，其特征在于：(a)两个批次的疫苗均包含：(i)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物；(ii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物；(iii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物；(iv)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物；(b)第一批次中血清群A的糖的分子大小是A1，第二批次中血清群A的糖的分子大小是A2；(c)第一批次中血清群C的糖的分子大小是C1，第二批次中血清群C的糖的分子大小是C2；(d)第一批次中血清群W135的糖的分子大小是W1，第二批次中血清群W135的糖的分子大小是W2；(e)第一批次中血清群Y的糖的分子大小是Y1，第二批次中血清群Y的糖的分子大小是Y2；(f)A1/A2、C1/C2、W1/W2和Y1/Y2的比值各为0.90-1.10。
14.两个批次的疫苗，其特征在于：(a)两个批次的疫苗均包含：(i)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A的荚膜糖的接合物；(ii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群C的荚膜糖的接合物；(iii)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群W135的荚膜糖的接合物；(iv)获自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群Y的荚膜糖的接合物；(b)第一批次中血清群A的糖的摩尔质量是A1，第二批次中血清群A的糖的摩尔质量是A2；(c)第一批次中血清群C的糖的摩尔质量是C1，第二批次中血清群C的糖的摩尔质量是C2；(d)第一批次中血清群W135的糖的摩尔质量是W1，第二批次中血清群W135的糖的摩尔质量是W2；(e)第一批次中血清群Y的糖的摩尔质量是Y1，第二批次中血清群Y的糖的摩尔质量是Y2；(f)A1/A2、C1/C2、W1/W2和Y1/Y2的比值各为0.90-1.10。
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WO (1) WO2006000920A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101936901A (zh) * 2009-06-30 2011-01-05 怀亚特技术公司 高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
MX2007016402A (es) 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
AR064642A1 (es) 2006-12-22 2009-04-15 Wyeth Corp Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi
TW201009337A (en) 2008-05-30 2010-03-01 Intervet Int Bv Analytical method to monitor vaccine potency and stability
JP6151021B2 (ja) 2009-06-01 2017-06-21 ウオーターズ・テクノロジーズ・コーポレイシヨン クロマトグラフ分離用ハイブリッド材料
SG10201407096RA (en) 2009-10-30 2014-12-30 Novartis Ag Purification of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides
US20130135610A1 (en) * 2009-12-15 2013-05-30 Waters Technologies Corporation Device and methods for performing size exclusion chromatography
EP3388081A1 (en) * 2010-05-26 2018-10-17 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
EP3834928B1 (en) 2010-07-26 2024-05-15 Waters Technologies Corporation Superficially porous materials comprising a substantially nonporous hybrid core having narrow particle size distribution
BR112013004236A2 (pt) 2010-08-23 2016-07-12 Wyeth Llc formulações estáveis de antígenos de neisseria meningitidis rlp2086
ES2728282T3 (es) 2010-09-10 2019-10-23 Wyeth Llc Variantes no lipidadas de antígenos ORF2086 de Neisseria meningitidis
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
KR101784644B1 (ko) 2012-03-09 2017-10-11 화이자 인코포레이티드 수막염균 조성물 및 이의 사용 방법
US10481164B2 (en) 2012-03-26 2019-11-19 Amgen Inc. Method for using light scattering in real time to directly monitor and control impurity removal in purification processes
US9802987B2 (en) 2013-03-08 2017-10-31 Pfizer Inc. Immunogenic fusion polypeptides
KR20180099912A (ko) 2013-09-08 2018-09-05 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
KR20190049940A (ko) 2015-02-19 2019-05-09 화이자 인코포레이티드 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
JP6764021B2 (ja) 2016-09-02 2020-09-30 サノフィ パスツール インコーポレイテッド ナイセリア・メニンギティディスのワクチン
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
KR20220011796A (ko) 2017-01-31 2022-01-28 화이자 인코포레이티드 네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법
CN109459504B (zh) * 2017-09-06 2022-05-27 绿谷(上海)医药科技有限公司 一种测定聚古罗糖醛酸硫酸酯盐重均分子量和含量的方法
CN109459523B (zh) * 2017-09-06 2022-11-08 上海绿谷制药有限公司 一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法
JP7409055B2 (ja) * 2019-12-05 2024-01-09 株式会社島津製作所 検出器の出力を補正する方法、および多角度光散乱検出器

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
JPH01125328A (ja) 1987-07-30 1989-05-17 Centro Natl De Biopreparados 髄膜炎菌ワクチン
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
ES2055785T3 (es) 1989-01-17 1994-09-01 Eniricerche Spa Peptidos sinteticos y su uso como vehiculos universales para la preparacion de conjugados inmunogenos aptos para el desarrollo de vacunas sinteticas.
WO1991001146A1 (en) 1989-07-14 1991-02-07 Praxis Biologics, Inc. Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
ATE128628T1 (de) 1990-08-13 1995-10-15 American Cyanamid Co Faser-hemagglutinin von bordetella pertussis als träger für konjugierten impfstoff.
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
NZ311000A (en) 1995-06-07 1999-04-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and a free carrier protein
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
US7018637B2 (en) * 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
EP1109576B1 (en) 1998-08-19 2009-10-21 Baxter Healthcare SA Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide
EP1162999B1 (en) 1999-03-19 2006-11-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against Streptococcus pneumoniae
WO2000061761A2 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
BR0107679A (pt) 2000-01-17 2004-07-06 Chiron Spa Vacina de vesìcula de membrana externa (omv) compreendendo proteìnas de membrana externa do grupo sérico b de neisseria meningitidis
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
BRPI0112928B1 (pt) 2000-07-27 2017-08-29 Children's Hospital & Research Center At Oakland A composition comprising preparations comprising outer membrane vesicles (OMV), microvesicles (MV) or both MVO and MV
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
YU66103A (sh) 2001-01-23 2006-05-25 Aventis Pasteur Vakcina multivalentnog konjugata meningokokalnog polisaharid-proteina
US20030035806A1 (en) * 2001-05-11 2003-02-20 D'ambra Anello J. Novel meningitis conjugate vaccine
GB0115176D0 (en) * 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
CN1809380B (zh) 2002-10-11 2010-05-12 启龙有限公司 广泛防御高毒性脑膜炎球菌谱系的多肽-疫苗
CN102319427A (zh) * 2003-01-30 2012-01-18 诺华疫苗和诊断有限公司 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
RU2378010C2 (ru) * 2003-10-02 2010-01-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. Жидкие вакцины для множественных серогрупп менингококков
GB0408978D0 (en) * 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101936901A (zh) * 2009-06-30 2011-01-05 怀亚特技术公司 高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法
CN101936901B (zh) * 2009-06-30 2014-09-17 怀亚特技术公司 高浓度的溶液中大分子的可逆缔合的表征方法

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