ES2688796T3 - Análisis dimensional de conjugados de sacáridos con GPC y SEC-MALS - Google Patents

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Abstract

Uso de conjugados para la producción de una vacuna que comprende conjugados de N. meningitidis de los serogrupos A, C, W135 e Y, en donde los conjugados son a) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo A, en donde el tamaño molecular del conjugado es 57,1±2% Å y/o la masa molar del conjugado es 88,5±2% kDa; b) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo C, donde el tamaño molecular del conjugado es 57,0±2% Å y/o la masa molar del conjugado es 85,2±2% kDa; c) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo W135, donde el tamaño molecular del conjugado es 68,7±2% Å y/o la masa molar del conjugado es 110,1±2% kDa; y d) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo Y, donde el tamaño molecular del conjugado es 63,3±2% Å y/o la masa molar del conjugado es 84,7±2% kDa.

Description

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DESCRIPCION
Análisis dimensional de conjugados de sacáridos con GPC y SEC-MALS Campo de la invención
La presente invención pertenece al campo de las vacunas que incluyen sacáridos capsulares bacterianos conjugados a un transportador.
Antecedentes de la invención
Los inmunógenos que comprenden antígenos sacáridos capsulares conjugados a proteínas transportadoras son conocidos en la técnica. La conjugación transforma antígenos T-independientes en antígenos T-dependientes, por lo que mejora la respuesta de memoria y permite que se desarrolle la protección inmunológica. El prototipo de vacuna conjugada fue para Haemophilus influenzae tipo b (Hib) [véase el ejemplo del capítulo 14 de la ref. 1]. Desde la vacuna contra Hib, se han desarrollado vacunas de sacáridos conjugados contra Neisseria meningitidis (meningococo) y contra Streptococcus pneumoniae (neumococo), como las vacunas conjugadas meningocócicas polivalentes que aparecen en la referencia 50. Otros organismos en los que las vacunas conjugadas son de interés son Streptococcus agalactiae (estreptococo del grupo B) [2], Pseudomonas aeruginosa [3] y Staphylococcus aureus [4].
En vez de utilizar sacáridos capsulares de cadena larga, es posible seleccionar fragmentos de oligosacáridos del tamaño deseado después de una fase de hidrólisis [p.ej., ref. 5], y se ha informado que los conjugados de oligosacáridos de cadena media ofrecen una inmunogenicidad mejorada [p.ej., ref. 6 y 7]. De las tres vacunas conjugadas contra la N. meningitidis del serogrupo C cuyo uso se ha aprobado en humanos, Menjugate™ [8] y Meningitec™ se basan en oligosacáridos, mientras que NeisVac-C™ usa un polisacárido de cadena larga.
Cuando se incluyen conjugados en una vacuna, el control de calidad para producirlos y comercializarlos generalmente necesita que estos tengan un tamaño molecular y/o una masa molar definidos, y también que esos parámetros sean consistentes entre los lotes. El tamaño molecular y la masa molar también se pueden utilizar para controlar la estabilidad de la vacuna, ya que se pueden añadir conjugados según avanza el tiempo, lo que provoca un aumento en el tamaño y en la masa.
Un objeto de la invención es proporcionar conjugados de sacáridos meningocócicos.
Descripción de la invención
Los inventores han descubierto que la cromatografía de permeabilidad en geles y SEC-MALS (cromatografía por exclusión de tamaño con detector de dispersión de luz multiangular) pueden utilizarse para medir de manera precisa y fiable el tamaño molecular y la masa molar, respectivamente, de sacáridos conjugados. El tiempo de retención del análisis cromatográfico se puede transformar en un radio de viscosidad (Rr|); por ejemplo, por comparación con la curva de calibración, lo que permite un cálculo fácil del tamaño molecular. El tamaño molecular medio y/o la distribución de los tamaños moleculares de conjugados de una muestra se pueden determinar fácilmente de esta manera. De forma similar, el tiempo de retención de SEC se puede transformar en masa molar. La masa molar media y/o la distribución de la masa molar (polidispersidad) de conjugados de una muestra se pueden determinar fácilmente de esta manera. La referencia 9 señala que SEC-MALS se ha utilizado con anterioridad para medir la preconjugación de sacáridos neumocócicos y meningocócicos, sin embargo, no existen datos sobre postconjugación.
Estos métodos se pueden usar para medir el tamaño molecular y/o la masa molar de conjugados de CRM197 con los sacáridos capsulares meningocócicos de los serogrupos A, C, W135 e Y, y, tal como se expone en la reivindicación 1, la invención proporciona el uso de dichos conjugados en la producción de una vacuna.
El sacárido
La invención permite medir los parámetros de antígenos sacáridos conjugados. El antígeno sacárido es un sacárido capsular bacteriano de la Neisseria meningitidis (serogrupos A, C, W135 o Y).
La cápsula de la N. meningitidis del serogrupo A es un homopolímero de N-acetil-D-manosamina-1-fosfato con enlaces (a1^6), con O-acetilación parcial en las posiciones C3 y C4. El sacárido capsular de la N. meningitidis del serogrupo C es un homopolímero de ácido siálico (ácido N-acetilneuramínico o Neu5Ac) con enlaces (a2^9), con una O-acetilación variable en las posiciones 7 y/u 8. El sacárido de la N. meningitidis del serogrupo W135 es un polímero que consiste en unidades de disacárido de ácido siálico-galactosa [^4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-a-(2^6)-D- gal-a-(1^], con O-acetilación variable en las posiciones 7 y 9 del ácido siálico [10]. El sacárido de la N. meningitidis del serogrupo Y es similar al sacárido del serogrupo W135, excepto en que la unidad repetitiva del disacárido incluye glucosa en lugar de galactosa [^4)-D-Neup5Ac(7/9OAc)-a-(2^6)-D-Glc-a-(1^]. El sacárido capsular de la H. influenzae del tipo B es un polímero de ribosa, ribitol y fosfato [“PRP”, (poli-3-p-D-ribosa-(1, 1)-D-ribitol-5-fosfato)].
La invención es particularmente útil para analizar fragmentos de oligosacáridos de polisacáridos capsulares. Por lo general, los polisacáridos naturales tienen un grado de polimerización de al menos 20 (p. ej., 20, 3o, 40, 50, 60 o
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más), y estos pueden transformarse en fragmentos de oligosacáridos (p. ej., con un grado de polimerización de menos de 20) mediante despolimerización, como, por ejemplo, por hidrólisis.
La hidrólisis química de sacáridos, por lo general, implica tratamiento tanto con un ácido como con una base en condiciones que son estándar en la técnica. Las condiciones para la despolimerización de sacáridos capsulares a sus monosacáridos constituyentes son conocidas en la técnica. Se prefiere la hidrólisis ácida para los sacáridos de los serogrupos W135 e Y. La hidrólisis ácida con TFA (ácido trifluoroacético) se puede utilizar para hidrolizar todos los serogrupos C, W135 e Y, preferentemente a una temperatura de incubación ligeramente inferior para el serogrupo C, para evitar la degradación de sus ácidos siálicos (90°C en vez de 100°C). El tratamiento típico con TFA implica añadir TFA en una concentración final de 2 M, seguido por aplicación de calor a 90-100°C durante 90 minutos. El sacárido del serogrupo C puede hidrolizarse para el análisis del contenido total de sacáridos mediante tratamiento con 100 mM de hCi a 80°C durante 2 horas [11]. Otras condiciones de hidrólisis típicas implican concentraciones milimolares de un ácido débil (p.ej. ácido acético) a altas temperaturas (p. ej., 70-80°C).
La invención es particularmente útil para su uso en muestras conjugadas que incluyen varios sacáridos de distintas longitudes, por ejemplo, fragmentos diferentes del mismo sacárido original.
Conjugados
El antígeno sacárido que se va a analizar se conjuga con una proteína transportadora CRM197. Se utiliza conjugación covalente para mejorar la inmunogenicidad de los sacáridos al transformarlos de antígenos T- independientes a antígenos T-dependientes, lo que permite la imprimación de la memoria inmunológica. La conjugación es particularmente útil en las vacunas pediátricas y es conocida en la técnica [p. ej., en las referencias de la 12 a la 21]. Los sacáridos pueden unirse directamente a transportadores [22, 23], pero una molécula de unión o una separadora se usa por lo general, como en el ácido adípico, p-propionamida [24], nitrofeniletilamina [25], haluros de haloacilo [26], enlaces glicosídicos [27], ácido 6-aminocaproico [28], ADH [29], restos C4 a C12 [30], etc.
El derivado de la toxina diftérica CRM197 [31-33] es una proteína transportadora en Menjugate™ y Meningitec™, mientras que el toxoide tetánico se usa en NeisVac™. En Menactra™, se utiliza toxoide diftérico como el transportador. La proteína transportadora en Prevnar™ es CRM197.
Los conjugados tienen generalmente una relación sacárido:proteína (p/p) de entre 1:5 (es decir, exceso de proteína) y 5:1 (es decir, exceso de sacárido). Las composiciones pueden incluir una proteína transportadora libre además de los conjugados [49].
Se pueden preparar conjugados de sacáridos meningocócicos (serogrupos A, C, W135 e Y) con la transportadora CRM197 según los métodos descritos en las referencias 50-53. Los conjugados que se prefieren son aquellos que se preparan según la referencia 51, es decir, fragmentos de oligosacáridos con una transportadora CRM197 y un enlazador de ácido adípico.
Cromatografía de permeabilidad en geles
La cromatografía de permeabilidad en gel (GPC) es conocida en la técnica estándar. Por lo general, la medición utiliza HPGPC (GPC de alto rendimiento). Las técnicas de GPC se utilizan para determinar el tamaño hidrodinámico (en una mezcla, el tamaño medio y/o la distribución de los tamaños) de un conjugado en una muestra.
El tiempo de retención en una columna de GPC se puede transformar en un radio de viscosidad (Rr|) por medio de técnicas estándar. Normalmente, el tiempo de retención en una columna se determinará por los estándares de un tamaño molecular conocido, lo que permite que exista una correlación de estos dos parámetros. Por lo tanto, el tamaño molecular de un conjugado se puede inferir a partir de su tiempo de retención en la columna. Por ejemplo, la calibración de una columna por medio de dextranos de un tamaño molecular conocido y sus tiempos de retención pueden estar correlacionados con el radio de viscosidad al usar una ecuación polinómica de tercer grado [54, 55]. El radio de viscosidad utiliza la viscosidad intrínseca y la masa molecular para explicar el efecto que tiene la forma de la molécula en la retención.
En una mezcla heterogénea, la técnica de GPC se puede utilizar para determinar el tamaño molecular medio y/o la distribución del tamaño molecular en la mezcla.
SEC-MALS
La cromatografía por exclusión de tamaño (SEC) es una técnica conocida. Los resultados de la separación se pueden analizar mediante fotometría de dispersión de luz multiangular (MALS) y refractometría diferencial. Este método puede proporcionar información sobre la distribución de la masa molar y del radio hidrodinámico (tamaño molecular), confirmación y otros parámetros físicos de un polímero, independientemente de parámetros cromatográficos tales como caudal y fase estacionaria sin la necesidad de calibración para la masa molar [9]. En vez de necesitar calibración para la masa molar, la determinación de la masa molar mediante MALS se basa en una determinación previa del índice de refracción específico (dn/dc), para el polímero de interés en el disolvente de interés a una longitud de onda y temperatura de interés.
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De este modo, SEC-MALS se puede utilizar para determinar la masa molar de un conjugado. La masa molar de una muestra se determina en cada segmento de datos de un pico de la SEC, como se ha observado en un gráfico de Debye típico, donde la masa molar se determina a partir de la intersección del gráfico [56-58]. La señal del índice de refracción proporcional a la concentración y la señal MALS 90° proporcional a la concentración y a la masa molar pueden superponerse para determinar las distribuciones de la masa molar.
En una mezcla heterogénea, la técnica SEC-MALS puede utilizarse para determinar la masa molar y/o la distribución de la masa molar (polidispersidad) en la mezcla.
Conjugados
Los conjugados definidos en la reivindicación 1 tienen una transportadora CRM197 y lo siguiente:
a) un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo A, en el que el tamaño molecular del conjugado es 57,1 A y/o la masa molar del conjugado es 88,5 kDa,
b) un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo C, en el que el tamaño molecular del conjugado es 57,0 A y/o la masa molar del conjugado es 85,2 kDa,
c) un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo W135, en el que el tamaño molecular del conjugado es 68,7 A y/o la masa molar del conjugado es 110,1 kDa, y
d) un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo Y, en el que el tamaño molecular del conjugado es 63,3 A y/o la masa molar del conjugado es 84,7 kDa.
Aunque los valores anteriores para el tamaño molecular y la masa molar se dan como cifras únicas, la invención se extiende a conjugados en los que estas cifras varían ±2%.
Sacáridos mixtos
Las técnicas descritas en este documento permiten el análisis de composiciones que comprenden conjugados de sacáridos capsulares. En general, las muestras contienen un único tipo de conjugado (es decir, sacáridos derivados del mismo sacárido capsular, unido al mismo transportador). Por lo tanto, en vacunas conjugadas polivalentes, por lo general, las mediciones se llevan a cabo en conjugados individuales antes de que se combinen para crear el producto polivalente final, en vez de hacerlo directamente en el producto final. Sin embargo, si dos conjugados tienen tamaños moleculares y masas molares muy diferentes, directamente, se realiza un análisis paralelo.
Estabilidad durante el almacenamiento
La invención puede utilizarse para controlar la estabilidad de los conjugados durante el almacenamiento. Por lo que estos métodos pueden llevarse a cabo en muestras del mismo material en el tiempo t1 y t2, y los resultados del análisis se pueden comparar. Un cambio significativo en la masa molar y/o en el tamaño molecular indica que la vacuna no es completamente estable. Por lo que los resultados pueden utilizarse para seleccionar vacunas estables y rechazar las inestables.
General
El término “comprender” abarca tanto “incluir” como “consistir en”; por ejemplo, una composición que “comprende” X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir otro componente adicional, como X + Y.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra una curva de calibración de seis dextranos de tamaños hidrodinámicos conocidos.
Las figuras de la 2 a la 5 muestran análisis HPGPC de conjugados de CRM197 de los serogrupos A, C, W135 e Y.
La figura 6 muestra la tensión de salida ajustada de concentraciones conocidas; en las figuras 7 y 8, se muestra para calibración dn/dc.
La figura 9 muestra un gráfico de Debye de SEC-MALS, y la figura 10 muestra la superposición de la señal IR y la señal de MALS 90°.
Las figuras de la 11 a la 14 muestran el análisis de la masa molar mediante SEC-MALS para conjugados de CRM197 de los serogrupos A, C, W135 e Y.
Modos de realización de la invención
Conjugados de CRM197 de oligosacáridos de los serogrupos A, C, W135 e Y de meningococo se prepararon como se describe, en general, en la referencia 51. Cada uno de estos conjugados se analizó mediante HpGPC y SEC- MALS según la invención.
Análisis HPGPC
En general, las vacunas glicoconjugadas consisten en un conjunto de glicoformas con una gama de sacáridos de distintas longitudes, unido a una proteína transportadora en múltiples emplazamientos. HPGPC se utilizó para describir los gliconconjugados meningocócicos desde el punto de vista del tamaño molecular, al determinar su 5 tamaño hidrodinámico y su distribución.
La calibración se realizó por medio de un conjunto de seis dextranos con tamaños hidrodinámicos que se encontraban entre 17 y 115 A. El análisis HPGPC de los estándares se muestra en la figura 1. Los pesos moleculares estándar y los pesos moleculares calculados fueron los siguientes:
Estándar
115360 54130 26000 91840 38560 17590
Calculado
115666 53847 25425 91514 39280 17767
10 El análisis de dextrano se utilizó para correlacionar el radio de viscosidad (Rr|) con el tiempo de retención de GPC mediante el uso de una ecuación polinómica de tercer grado [54, 55]:
Rn (en A) = (108) (30 Mp [n] / (n x 6,023 x 1023))1/3
en la que: Mp = PM apical y [n] = viscosidad intrínseca en dL/g
Los radios de viscosidad de los conjugados se calcularon a partir de esta ecuación, la cual utiliza viscosidad 15 intrínseca y PM para calcular el efecto que la forma de la molécula tiene sobre la retención.
El análisis de conjugados individuales se muestra en las figuras de la 2 a la 5. Los tamaños hidrodinámicos se calcularon de la siguiente manera:
Serogrupo
A C W135 Y
Tamaño (A)
57,1 57,0 68,7 63,3
Polidispersidad
1,032 1,018 1,040 1,035
Como ejemplo de las condiciones del análisis, el conjugado del serogrupo A se analizó en un volumen de inyección 20 de 50 |jl en TSK-Gel G4000SW (300 x 7,5 mm Di), con una fase móvil de 0,1 M de fosfato de sodio / 0,2 M de sulfato de amonio, pH 7,0. El caudal fue 0,5 ml/min. Se utilizó un detector de índice de refracción 410 de Waters.
Análisis SEC-MALS
Antes del análisis SEC-MALS, se determinaron los índices de refracción (dn/dc) de los conjugados en las condiciones del análisis. Un ejemplo de tensión de salida para la concentración establecida se muestra en la figura 25 6. Esta tensión de salida provoca las curvas estándar mostradas en las figuras 7 y 8. Los valores calculados fueron
los siguientes:
Serogrupo
A C W135 Y
dn/dc
0,163 0,190 0,159 0,201
Los conjugados se analizaron por medio de SEC-MALS. La masa molar de las muestras se determinó en cada segmento de datos de un pico de una SEC, como se muestra en un gráfico de Debye típico en la figura 9. La masa 30 molar se determinó a partir de la intersección del gráfico [56-58]. La señal IR (azul), proporcional a la concentración, y el detector MALS 90° (rojo), proporcional a la concentración y a la masa molar, se pueden superponer (figura 10).
Los análisis de la masa molar (gramos por mol) se muestran en las figuras de la 11 a la 14. Los análisis muestran que los glicoconjugados de MenA, MenW135 y MenY tienen un pico principal con un hombro a una baja concentración de un PM mayor, mientras que el conjugado de MenC tiene un pico único de composición más 35 homogénea.
Los resultados de los análisis de los picos (PM en kDa; polidispersidad en PM/Mn) son los siguientes:
5
10
15
20
25
30
A C W135 Y
Pico principal
PM 88,540 85,230 110,100 84,650
Polidispersidad
1,012 1,011 1,049 1,050
Hombro
PM 190,000 - 485,800 347,200
Polidispersidad
1,053 - 1,090 1,096
Se entenderá que la invención se ha descrito solo a modo de ejemplo y que cualquier modificación puede llevarse a cabo mientras permanezca dentro del alcance de la invención.
Referencias
[1] Vaccines (eds. Plotkin et al.) 4ta edición, ISBN: 0721696880.
[2] Baker et al. (2003) J Infect Dis 188:66-73.
[3] Theilacker et al. (2003) Infect Immun 71:3875-84.
[4] Anónimo (2003) Drugs R D 4:383-5.
[5] Ravenscroft et al. (1999) Vaccine 17:2802-2816.
[6] Paoletti et al. (1992) J Clin Invest 89:203-9.
[7] Anderson et al. (1986) J Immunol 137:1181-6.
[8] Jones (2001) Curr Opin Investig Drugs 2:47-49.
[9] D'Ambra et al. (2000) Dev Biol Basel 103:241-242.
[10] WO2005/033148.
[11] Jumel et al. (2002) Biotechnol Appl Biochem 36:219-226.
[12] Ramsay et al. (2001) Lancet 357(9251):195-196.
[13] Lindberg (1999) Vaccine 17 Suppl 2:S28-36.
[14] Buttery & Moxon (2000) J R Coll Physicians Lond 34:163-168.
[15] Ahmad & Chapnick (1999) Infect Dis Clin North Am 13:113-133, vii.
[16] Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47:563-567.
[17] Patente europea 0477508.
[18] Patente de Estados Unidos 5,306,492.
[19] WO98/42721.
[20] Conjugate Vaccines (eds. Cruse et al.) ISBN 3805549326, especialmente vol. 10:48-114.
[21] Hermanson (1996) Bioconjugate Techniques ISBN: 0123423368 o 012342335X.
[22] Patente de Estados Unidos 4,761,283
[23] Patente de Estados Unidos 4,356,170
[24] WO00/10599
[25] Gever et al. Med. Microbiol. Immunol, 165 : 171-288 (1979).
[26] Patente de Estados Unidos 4,057,685.
[27] Patente de Estados Unidos 4,673,574; 4,761,283; 4,808,700.
[28] Patente de Estados Unidos 4,459,286.
[29] Patente de Estados Unidos 4,965,338
[30] Patente de Estados Unidos 4,663,160.
5 [31] Anónimo (Ene 2002) Research Disclosure, 453077.
[32] Anderson (1983) Infect Immun 39(1):233-238.
[33] Anderson et al. (1985) J Clin Invest 76(1):52-59.
[49] WO96/40242
[50] WO02/058737.
10 [51] WO03/007985.
[52] Rennels et al. (2002) Pediatr Infect Dis J 21:978-979.
[53] Campbell et al. (2002) J Infect Dis 186:1848-1851.
[54] Kunitani et al. (1991) J Chrom 588:125ff.
[55] Kunitani et al. (1993) J Chrom 632:19ff.
15 [56] Wyatt (1997) Instrumentaron Science & Technology 25(1):1ff.
[57] Wen et al. (1996) Anal Biochem 240:155ff.
[58] Rollings (1992) in Laser Light Scattering in Biochemistry, capítulo 19.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Uso de conjugados para la producción de una vacuna que comprende conjugados de N. meningitidis de los serogrupos A, C, W135 e Y, en donde los conjugados son a) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo A, en donde el tamaño molecular del conjugado es 57,1±2% A y/o la masa molar del 5 conjugado es 88,5±2% kDa; b) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo C, donde el tamaño molecular del conjugado es 57,0±2% A y/o la masa molar del conjugado es 85,2±2% kDa; c) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo Wl35, donde el tamaño molecular del conjugado es 68,7±2% A y/o la masa molar del conjugado es 110,1±2% kDa; y d) un conjugado de CRM197 y un sacárido capsular de N. meningitidis del serogrupo Y, donde el tamaño molecular del conjugado es 63,3±2% A y/o la 10 masa molar del conjugado es 84,7±2% kDa.
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
MX2007016403A (es) * 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
AR064642A1 (es) 2006-12-22 2009-04-15 Wyeth Corp Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi
TW201009337A (en) * 2008-05-30 2010-03-01 Intervet Int Bv Analytical method to monitor vaccine potency and stability
EP2437882A4 (en) 2009-06-01 2016-11-23 Waters Technologies Corp HYBRID MATERIAL FOR CHROMATOGRAPHY SEPARATIONS
US8195405B2 (en) * 2009-06-30 2012-06-05 Wyatt Technology Corporation Method for characterizing reversible association of macromolecules at high concentration
DK2493498T3 (en) 2009-10-30 2017-05-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification of Staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsule saccharides
US20130135610A1 (en) * 2009-12-15 2013-05-30 Waters Technologies Corporation Device and methods for performing size exclusion chromatography
ES2661978T3 (es) * 2010-05-26 2018-04-04 Selecta Biosciences, Inc. Vacunas multivalentes de nanovehículos sintéticos
EP2598441B1 (en) 2010-07-26 2021-01-06 Waters Technologies Corporation Superficially porous materials comprising a substantially nonporous core having narrow particle size distribution; process for the preparation thereof; and use thereof for chromatographic separations
RU2580620C2 (ru) 2010-08-23 2016-04-10 ВАЙЕТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ АНТИГЕНОВ Neisseria meningitidis rLP2086
PE20140173A1 (es) 2010-09-10 2014-02-20 Wyeth Llc Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis
MY198910A (en) 2012-03-09 2023-10-02 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
US10481164B2 (en) 2012-03-26 2019-11-19 Amgen Inc. Method for using light scattering in real time to directly monitor and control impurity removal in purification processes
EP2964665B1 (en) 2013-03-08 2018-08-01 Pfizer Inc Immunogenic fusion polypeptides
MX369534B (es) 2013-09-08 2019-11-11 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y sus metodos.
CN107249626A (zh) 2015-02-19 2017-10-13 辉瑞大药厂 脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法
MX2019002489A (es) 2016-09-02 2019-10-21 Sanofi Pasteur Inc Vacuna contra neisseria meningitidis.
MA47223A (fr) 2016-12-30 2019-11-06 Sutrovax Inc Conjugués polypeptide-antigène avec des acides aminés non naturels
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
SG11201906519RA (en) 2017-01-31 2019-08-27 Pfizer Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
CN109459523B (zh) * 2017-09-06 2022-11-08 上海绿谷制药有限公司 一种测定酸性糖可溶性盐重均分子量和含量的方法
CN109459504B (zh) * 2017-09-06 2022-05-27 绿谷(上海)医药科技有限公司 一种测定聚古罗糖醛酸硫酸酯盐重均分子量和含量的方法
JP7409055B2 (ja) * 2019-12-05 2024-01-09 株式会社島津製作所 検出器の出力を補正する方法、および多角度光散乱検出器

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
JPH01125328A (ja) 1987-07-30 1989-05-17 Centro Natl De Biopreparados 髄膜炎菌ワクチン
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
CA2006700A1 (en) 1989-01-17 1990-07-17 Antonello Pessi Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
JPH04506662A (ja) 1989-07-14 1992-11-19 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 接合体ワクチンのためのサイトカイニンおよびホルモンのキヤリヤー
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
ATE128628T1 (de) 1990-08-13 1995-10-15 American Cyanamid Co Faser-hemagglutinin von bordetella pertussis als träger für konjugierten impfstoff.
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
ATE400295T1 (de) 1995-06-07 2008-07-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Vakzine mit einem polysaccharide antigen- trägerprotein konjugat und freiem trägerprotein
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
US7018637B2 (en) * 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
EP1109576B1 (en) 1998-08-19 2009-10-21 Baxter Healthcare SA Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide
EP1880735A3 (en) 1999-03-19 2008-03-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine
JP2002541808A (ja) 1999-04-09 2002-12-10 テクラブ， インコーポレイテッド ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア
DK2289545T3 (en) 2000-01-17 2016-09-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Supplemented OMV vaccine against meningococcus
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
CA2416137C (en) 2000-07-27 2013-01-29 Dan Granoff Vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by neisseria meningitidis
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
JP2005504718A (ja) * 2001-01-23 2005-02-17 アヴェンティス パストゥール 多価髄膜炎菌多糖−タンパク質複合ワクチン
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
AU2003274511B2 (en) * 2002-10-11 2009-06-04 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
WO2004067030A2 (en) 2003-01-30 2004-08-12 Chiron Srl Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
ES2397923T3 (es) * 2003-10-02 2013-03-12 Novartis Ag Vacunas líquidas para múltiples serogrupos meningocócicos
GB0408978D0 (en) * 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines
GB0413868D0 (en) * 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates

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