CN1963515A - 一种登革热病毒抗体胶体金检测试纸条 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种能同时检测登革热病毒IgG和IgM抗体的胶体金试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上，分别包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体，结合胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原，应用免疫膜层析技术，同时检测登革热病毒的IgG和IgM抗体。用本发明所述的试纸条检测，简便、快速、准确，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合大批量检测，适用于基层和流调，对登革热病毒感染的早期及中晚期都能起到辅助诊断作用。

Description

一种登革热病毒抗体胶体金检测试纸条
技术领域
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种登革热病毒抗体检测试纸条及其应用。
背景技术
登革热(Dengue Fever，简称DF)是由登革热病毒引起的急性传染病。登革病毒属黄毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)，按流行病学分类属虫媒病毒B组，血清学上分4个血清型，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊(俗称花班蚊)传播。登革热广泛流行于全球热带和亚热带地区，是分布最广，发病最多，危害较大的一种虫媒病毒性疾病。
常用的抗体检测方法有：ELISA法和RT-PCR法。但这些检测技术需要特殊的仪器设备，并且要求专业技术人员在专业的实验室进行检测，操作复杂，耗时长，不适宜于现场即时检测。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明的目的是提供一种方便、快捷的能同时检测登革热病毒抗体IgG和IgM的检测试纸条。发明人通过在硝酸纤维膜(NC膜)上包被抗人IgM(单克隆抗体或多克隆抗体)、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体三个条带，并结合胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原，实现了用试纸条检测登革热病毒抗体(IgG和IgM)的目的，完成了本发明。克服了现有技术操作复杂、繁琐、耗时长、需要特殊的仪器、且必需专业人员才能操作的不足。
(二)技术方案
本发明提供了一种检测试纸条，它包含：
(1)同时包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体三个条带的硝酸纤维膜；
(2)含有胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原的玻璃纤维膜。
本发明所述试纸条，其中硝酸纤维膜上包被的抗人IgM为单克隆抗体或多克隆抗体。
本发明所述试纸条，其中硝酸纤维膜上包被的登革热病毒重组抗原是四个亚型的登革热病毒的共同抗原。
优选的，本发明所述试纸条，它还包含：
(1)反应支持物；
(2)吸水垫；
(3)金标抗原保护膜。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗原保护膜同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测登革热病毒抗体中的应用。
本发明所述试纸条检测的登革热病毒抗体为IgM和IgG。
本发明的检测样本为患者的血清、血浆或全血。
本发明的技术方案是：采用抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体分别固相于硝酸纤维膜(NC膜)上，结合胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原，应用免疫色谱层析原理检测登革热病毒抗体。
(三)有益效果
本发明的有益效果是：用本发明所述的试纸条能同时检测登革热病毒IgG和IgM抗体，该方法简便、快速、准确，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合大批量检测，适用于基层和流行病学调查，对登革热病毒感染的早期及中晚期都能起到辅助诊断作用。
附图说明
图1：A本发明试纸条的正面示意图；
B本发明试纸条的侧面示意图；
1：吸水垫；
2：硝酸纤维膜(T1：IgM条带，包被抗人IgM；T2：IgG条带，包被登革热病毒重组抗原；C：质控条带，包被抗登革热病毒重组抗原的多抗)；
3：玻璃纤维膜：胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原；
4：金标抗原保护膜；
5：反应支持物。
图2：检测结果示意图；
从左至右依次为：IgG和IgM同时阳性：A、B、C三条线显色；IgG阳性：A、C两条线显色；IgM阳性：B、C两条线显色；阴性：C一条线显色；无效：三条线均不显色。
具体实施方式
实施例1：登革热病毒抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cmm的滤油纸；2.5cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了登革热病毒抗体胶体金检测试纸条。
实施例2：登革热病毒抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2.5cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体；含有0.4cm×0.4cmm胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了登革热病毒抗体胶体金检测试纸条。
实施例3：登革热病毒抗体胶体金检测试纸条(参见图1)
反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2.5cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体；含有0.4cm×0.4cmm胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原的玻璃纤维膜；金标抗原保护膜为2cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了登革热病毒抗体胶体金检测试纸条。
实施例4：检测方法(参见图2)
按临床常规取血并分离血清，如样品不能于三日内检测，应存放入-20℃。取150-200ul血清滴加至实施例1检测试纸条“4”处，样品中的液体上行，如30秒内于“2”处未见液体爬行，则应于“4”处再加1-2滴生理盐水或PBS缓冲液。10-15分钟判读结果：
如样本中含有登革热病毒IgM抗体，则其经过胶体金垫时，会与金标重组登革热病毒抗原结合，进而被T1处的抗人IgM捕获，聚集而形成红色的检测线，是为阳性，反之则为阴性。
如样本中含有登革热病毒IgG抗体，则会与金标重组登革热病毒抗原结合，进而被T2处的包被重组抗原捕获，聚集形成红色的检测线，表明IgG阳性，反之则为阴性。
无论样本中是否含有待检测的抗体，金标重组抗原都会与C处包被的抗重组抗原多抗形成红色沉淀线，即质控线。如此线不出现，说明试纸条失效。
实验例1  疑似病人IgM抗体检测
在流行季节，检验疑似病人血清样本49例，与传统常用的抗体检测ELISA法(T1)比较，，试纸条法(T2)有一例登革热病毒IgM抗体未检出。其敏感性为97.9％，特异性为100％。
ELISA法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
   阳性    阴性
  T1    47    2
  T2    46    2
   灵敏度97.9％    特异度100％
实验例2  确诊病人IgG抗体检测
检测确诊病人恢复期血清样本37例，与传统常用的抗体检测ELISA法(T1)比较，试纸条法(T2)敏感性为100％，特异性为100％。
ELISA法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
  阳性   阴性
  T1   32   5
  T2   32   5
  灵敏度100％   特异度100％

Claims (9)

1、一种检测试纸条，其特征在于，它包含：
(1)同时包被抗人IgM、登革热病毒重组抗原和抗重组抗原多克隆抗体三个条带的硝酸纤维膜；
(2)含有胶体金标记的登革热病毒特异性重组抗原的玻璃纤维膜。
2、根据权利要求1所述试纸条，其特征在于，硝酸纤维膜上包被的抗人IgM为单克隆抗体或多克隆抗体。
3、根据权利要求1所述试纸条，其特征在于，硝酸纤维膜上包被的登革热病毒重组抗原是四个亚型的登革热病毒的共同抗原。
4、根据权利要求1所述试纸条，它还包含：
(1)反应支持物；
(2)吸水垫；
(3)金标抗原保护膜。
5、根据权利要求4所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
6、根据权利要求4所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
7、根据权利要求4所述试纸条，其中金标抗原保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
8、权利要求1-7之任一所述试纸条在检测登革热病毒抗体中的应用。
9、根据权利要求8所述试纸条的应用，其中检测的登革热病毒抗体为IgM和IgG。
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