CN2935156Y - 快速检测大麻的胶体金试纸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种快速检测大麻的试纸，属于胶体金免疫检测领域。试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、单抗金标垫、样品吸液层组成，是一种用于检测大麻的试纸。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有四氢大麻酚(THC)合成免疫原反应线和一条多克隆抗体控制线，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层，通过胶体金免疫竞争方法制成试纸。其原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，在试纸上出现特定的显色结果。具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

Description

快速检测大麻的胶体金试纸

技术领域

本发明是一种利用胶体金免疫分析方法来检测大麻的试纸。

背景技术

大麻(Cannabis)，又名火麻等，大麻的化学成份错综复杂，主要有以下几种化学构成：类脂物、黄酮类化合物、萜烯、碳氢化合物、非环形大苯酚、生物碱，柠檬酸银和环形大麻酚(如四氢大麻酚)。每个化学构成的含量在不同植物中，甚至在同一植物里也是变化无常的。

大麻吸食途径通常是吸食、饮用、吞服，加工后注射。吸食大麻，对人体器官有很大的影响。在生殖系统方面，会产生精液数量下降，精子数量下降，质量差或不正常，造成产生不正常新生儿或死胎；脑活动方面，产生记忆下降或错觉，感觉迟钝；心血管方面，会产生心动过速；视力方面，会产生对光敏感，对弱光的适应力和辨别色彩的能力减弱；呼吸器官方面，大麻吸食者常感染支气管炎、咽喉疼痛、鼻窦炎、哮喘、鼻炎、慢性支气管炎等疾病。长期吸食大麻，造成人体免疫能力下降，特别易感染流行性传染病。吸食大麻后，感到兴奋，舒适，接下来就是心理上处于混乱；再接下来第三阶段出现梦幻般的心醉神迷；最后突然情绪下降，心情压抑导致沉睡。长期吸食大麻者生理上失调，对大麻产生依赖，一旦停用，即出现失眠、食欲减退、性情急躁、易怒、呕吐、颤抖等状。国家相关部门将其列为毒品行列。

大麻中的有毒成分是四氢大麻酚及大麻酚、大麻酚类衍生物，主要毒性成分(即有效成分)是四氢大麻酚(THC)。

对四氢大麻酚(THC)的检测方法如气相色谱(GC)，气相色谱/质谱(GC/MS)，高效液相色谱(HPLC)等已有报道。高效毛细管电泳是近年来发展起来的分析方法，它具有分离能力强、分离效率高、分析时间短，所需的样品及溶剂量小等特点。国外已有利用胶束毛细管电动色谱法等，但是所需的时间较长，因此需要一种快速、方便的检测方法。

胶体金试纸的原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，利用特定的显色反应在试纸上准确的显示测试的结果，具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

发明内容

本发明目的在于提供了一种利用胶体金免疫分析方法来检测四氢大麻酚(THC)的试纸。

为了达到所述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

在四氢大麻酚(THC)检测试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条四氢大麻酚(THC)合成免疫原反应线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

本试纸的控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成，反应线是由四氢大麻酚合成免疫原包被制成，单克隆抗体金标垫是由大麻单克隆抗体作为胶体金标记，吸水板用双层吸水纸。

把四氢大麻酚(THC)检测试纸的样品吸液层放入被检测尿液中(液面不得超过MAX线)由于毛细管作用样品将沿着试纸条向吸水板端移动，当移动至抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体金标垫时，样品中的四氢大麻酚(THC)与抗四氢大麻酚(THC)金标探针发生特异反应，当移动至固定有四氢大麻酚(THC)合成免疫原反应线时，由于抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体金标垫中的抗体会与样品中四氢大麻酚(THC)结合而失去其与四氢大麻酚(THC)合成免疫原结合位点，因此其胶体金不能滞留于试验线上；相反，如果样品中没有与抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体金标垫中的抗体结合的四氢大麻酚(THC)，抗四氢大麻酚(THC)单抗金标探针就会与试验线上的四氢大麻酚(THC)合成免疫原发生特异结合，使胶体金滞留于试验线上，这就是免疫竞争法原理。所以反应线的颜色深浅与样品中四氢大麻酚(THC)含量高低成反比。设定最低检出量应不高于50ng/ml，出现两条红线代表尿样中THC低于50ng/ml，为阴性；出现一条红线表示尿样中THC超过界限值50ng/ml，为阳性。

当移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中四氢大麻酚(THC)含量多少，金标探针都会与已包被在硝酸纤维素膜上的鼠IgG结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误(检测时，样品液面超过MAX线)或试纸已经过期。

在用试纸检测尿液后，将其试验线与检测色标进行比色，按颜色深浅判断为阳性，可疑或阴性，进而确定所测尿液中四氢大麻酚(THC)含量是否超标。用含四氢大麻酚(THC)对照品得尿液检测，设定的最低检出量应不高于50ng/ml。

由于采用上述技术方案，本发明所提供的检测四氢大麻酚(THC)的试纸及其检测方法具有这样的有益效果，即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，不需要仪器设备，而且结果易读。

附图说明

图1为四氢大麻酚(THC)检测试纸的主视结构图。

图2为四氢大麻酚(THC)检测试纸的俯视剖视结构图。

图3为四氢大麻酚(THC)检测试纸应用于测试时显示为阳性结果图。

图4为四氢大麻酚(THC)检测试纸应用于测试时显示为阴性结果图。

图中1、吸水板，2、硝酸纤维素膜，3、控制线，4、反应线，5、单克隆抗体金标垫，6、样品吸液层，7、底板，8、MAX线。

具体实施方式

由图1可见，本实用新型是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、单克隆抗体金标垫(5)、样品吸液层(6)组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条反应线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

1.选用与四氢大麻酚分子相类似物(具有羧基或氨基)，与大分子蛋白缩和反应得到具有免疫反应的合成免疫原。

2.抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体的制备。

(1)用制备的四氢大麻酚(THC)合成免疫原免疫小鼠。

(2)提取小鼠腹水，分离纯化以得到抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体。

3.胶体金的制备及与抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体的结合。

(1)10％氯化金(0.5ml)+10％柠檬酸三钠(0.75ml)+去离子水(500ml)→胶体金。

(2)胶体金500ml+0.1M磷酸缓冲液pH7.4(50ml)+抗四氢大麻酚(THC)单克隆抗体→抗四氢大麻酚(THC)单抗胶体金。

(3)抗四氢大麻酚(THC)单抗胶体金+吸水纸→金标记抗体吸附吸水纸上备用。

4.选择硝酸纤维素膜做为底物覆着处，利用毛细管原理使胶体金朝向底物处移动。

5.特种制膜机制膜：机器特制，利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。

控制线选用：羊抗鼠IgG，浓度2-10mg/ml

反应线选用：四氢大麻酚(THC)合成免疫原，浓度2-10mg/ml

6.组合：

(1)塑料条+薄膜+胶体金垫

(2)切条

7.使用方法

(1)除去外包装，取出试剂条。将试剂条插入尿样中，尿液界面物超过纸条上的“Max”线。

如为试剂盒，则将尿液滴入样品孔中。

(2)15秒后取出试纸条或继续插在尿液中，5分钟时观察结果；如为试剂盒，则在5分钟后直接在观察孔中观察结果。

(3)结果判断：仅在控制区出现一条红色线为阳性；如在检测区及控制区出现两条红色线，则为阴性。控制区未出现红色线，表面试纸无效。

8.注意事项

(1)仅供定性筛检。

(2)稀释及不洁净的尿样或操作不当，均可产生错误结果。

(3)密封保存，在有效期12个月内使用。

Claims (5)

1.一种快速检测大麻的胶体金试纸，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、单克隆抗体金标垫(5)、样品吸液层(6)组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条反应线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测大麻的胶体金试纸，其特征在于控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测大麻的胶体金试纸，其特征在于反应线是由四氢大麻酚合成免疫原包被制成。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测大麻的胶体金试纸，其特征在于单克隆抗体金标垫是由大麻单克隆抗体作为胶体金标记。

5.根据权利要求1所述的一种快速检测大麻的胶体金试纸，其特征在于吸水板用双层吸水纸。

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