CN2938101Y - 快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及一种快速检测苯二氮卓类药(BZO)的试纸，属于胶体金免疫检测领域。试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、单抗金标垫、玻璃纤维样品吸液层组成，是一种用于检测苯二氮卓类药(BZO)的试纸。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原试验线和一条多克隆抗体控制线，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层，通过胶体金免疫竞争方法制成试纸。其原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，在试纸上出现特定的显色结果。具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

Description

快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸

技术领域

本发明是一种利用胶体金免疫分析方法来检测苯二氮卓类药(BZO)的试纸。

背景技术

苯二氮卓类药品属镇静催眠药，由于滥用后可导致性乱行为，因此近年来被受到特别关注。

苯二氮卓类药品通常与酒精合并滥用，滥用后可使受害者在药物作用下无能力反抗而被强奸，并产生顺行性遗忘(anterograde amnesia)，而对所发生的事情失忆。苯二氮卓类药品与酒精和其它镇静催眠药合用后可导致中毒死亡。据美国急诊室报告因滥用氟硝死亡案例由1994年的13例上升至1999年的540例。具有成瘾性和依赖性，属于国家毒品行列。

目前，对苯二氮卓类药(BZO)快速检测的方法和仪器较多，主要是依靠气相色谱(GS)、高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和毛细管电泳等方法进行检测，但存在仪器昂贵、检测时间太长，并且需要专业的技术人员进行操作，因此急需一种能快速、准确、方便的检测方法。

胶体金试纸的原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，利用特定的显色反应在试纸上准确的显示测试的结果，具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

发明内容

本发明目的在于提供了一种利用胶体金免疫分析方法来检测苯二氮卓类药(BZO)的试纸。

为了达到所述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

在苯二氮卓类药(BZO)检测试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原试验线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水层，另一端端头为玻璃纤维样品层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水层和抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标垫相互交叠连接，在抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标垫上压有玻璃纤维样品层。

把苯二氮卓类药(BZO)检测试纸的样品层放入被检测尿液中(液面不得超过MAX线)由于毛细管作用样品将沿着试纸条向吸水层端移动，当移动至抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标垫时，样品中的苯二氮卓类药(BZO)与抗苯二氮卓类药(BZO)金标探针发生特异反应，当移动至固定有苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原试验线时，由于抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标垫中的抗体会与样品中苯二氮卓类药(BZO)结合而失去其与苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原结合位点，因此其胶体金不能滞留于试验线上；相反，如果样品中没有与抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标垫中的抗体结合的苯二氮卓类药(BZO)，抗苯二氮卓类药(BZO)单抗金标探针就会与试验线上的苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原发生特异结合，使胶体金滞留于试验线上，这就是免疫竞争法原理。所以试验线的颜色深浅与样品中苯二氮卓类药(BZO)含量高低成反比。若设定界限值为300ng/ml，出现两条红线代表尿样中BZO低于300ng/ml，为阴性；出现一条红线表示尿样中BZO超过界限值300ng/ml，为阳性。

当移动至抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中苯二氮卓类药(BZO)含量多少，金标探针都会与已包被在硝酸纤维素膜上的鼠IgG结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误(检测时，样品液面超过MAX线)或试纸已经过期。

在用试纸检测尿液后，将其试验线与检测色标进行比色，按颜色深浅判断为阳性，可疑或阴性，进而确定所测尿液中苯二氮卓类约(BZO)含量是否超标。用含甲基安非他命对照品得尿液检测，设定界限值为300ng/ml。

由于采用上述技术方案，本发明所提供的检测苯二氮卓类药(BZO)的试纸及其检测方法具有这样的有益效果，即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，不需要仪器设备，而且结果易读。

附图说明

图1为苯二氮卓类药(BZO)检测试纸的主视结构图。

图2为苯二氮卓类药(BZO)检测试纸的俯视剖视结构图。

图3为苯二氮卓类药(BZO)检测试纸应用于测试时显示为阳性结果图。

图4为苯二氮卓类约(BZO)检测试纸应用于测试时显示为阴性结果图。

具体实施方式

1.应用活化脂法，将半抗原苯二氮卓类药(BZO)结合牛血清白蛋白(BSA)制备苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原。

2.抗苯二氮卓类药(BZO)单克隆抗体的制备。

(1)将制备的苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原免疫小鼠。

(2)提取小鼠腹水，分离纯化以得到抗苯二氮卓类药(BZO)单克隆抗体。

3.胶体金的制备及与抗苯二氮卓类药(BZO)单克隆抗体的结合。

(1)10％氯化金(0.5ml)+10％柠檬酸三钠(0.75ml)+去离子水(500ml)→胶体金。

(2)体金500ml+0.1M磷酸缓冲液pH7.4(50ml)+抗苯二氮卓类药(BZO)单克隆抗→抗苯二氮卓类药(BZO)单抗胶体金。

(3)抗苯二氮卓类药(BZO)单抗胶体金+吸水纸→金标记抗体吸附吸水纸上备用。

4.选择硝酸纤维素膜做为底物覆着处，利用毛细管原理使胶体金朝向底物处移动。

5.特种制膜机制膜：机器特制，利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。

控制线选用：羊抗鼠IgG，浓度2-10mg/ml

试验线选用：苯二氮卓类药(BZO)合成免疫原，浓度2-10mg/ml

6.组合：

(1)塑料条+薄膜+胶体金垫

(2)切条

7.使用方法

(1)除去外包装，取出试剂条。将试剂条插入尿样中，尿液界面物超过纸条上的“MAX”线。如为试剂盒，则将尿液滴入样品孔中。

(2)15秒后取出试纸条或继续插在尿液中，5分钟时观察结果；如为试剂盒，则在5分钟后直接在观察孔中观察结果。

(3)结果判断：仅在控制区出现一条红色线为阳性；如在检测区及控制区出现两条红色线，则为阴性。控制区未出现红色线，表面试纸无效。

8.注意事项

(1)仅供定性筛检。

(2)稀释及不洁净的尿样或操作不当，均可产生错误结果。

(3)密封保存，在有效期12个月内使用。

Claims (5)

1.一种快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、苯二氮卓类药单抗金标垫(5)、玻璃纤维样品吸液层(6)组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸，其特征在于控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸，其特征在于试验线是由苯二氮卓类药合成免疫原包被制成。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测苯二氮卓类药的胶体金试纸，其特征在于金标垫是由苯二氮卓类药单克隆抗体作为胶体金标记。

5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于吸水纸用双层吸水纸。