CN2935155Y - 快速检测可卡因的胶体金试纸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及种快速检测可卡因的胶体金试纸，属于胶体金免疫检测领域。试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、单抗金标垫、玻璃纤维样品吸液层组成，是一种用于检测可卡因(COC)的试纸。底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有可卡因(COC)合成免疫原试验线和一条多克隆抗体控制线，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层，通过胶体金免疫竞争方法制成试纸。其原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，在试纸上出现特定的显色结果。具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

Description

快速检测可卡因的胶体金试纸

技术领域

本发明是一种利用胶体金免疫分析方法来检测可卡因(COC)的试纸。

背景技术

可卡因(Benzoylecgonine)是古柯叶的主要生物碱，是通过化学方法从古柯属的小灌木树的叶(古柯叶)中提取出来所得。通常可卡因为纯白、灰白粉末，极少潮湿，有特殊气味。偶见无色晶状可卡因(即可卡因钻石)。

可卡因有很强的成瘾性。通过鼻孔吸会产生一种高度欣快状态，持续20分钟，会经历一种感觉增强的“高潮”。当这些感觉慢慢消退，出现相应的低潮，使吸食者极想重复使用，恢复其欣快感，逐渐形成对可卡因的依赖性，即上瘾。长期使用，会使人产生严重颓废，不可救药。可卡因可使心律加快，血管收缩，动脉压力增大。一定剂量的可卡因能致幻，短期的精神旺盛现象，使人感到精力一时充沛，感觉意识增强。可以抵消饥饿、困倦和疲劳等人体自然现象。但大剂量使用，可使人产生难以预想的荒诞行为和可怕举止，有时甚至可达到只有施以暴力才可释放其能力的程度。常表现为：过分兴奋激动，周身颤抖、痉挛，肌肉扭曲、变形，甚至出现颠狂的幻觉病。大剂量使用可卡因能导致中枢神经的传源受阻，甚至可导致窒息。过度使用可卡因能导致人极度痉挛、心力衰竭而死亡。属国家毒品行列。

对可卡因(COC)的检测方法如气相色谱(GC)，气相色谱/质谱(GC/MS)，高效液相色谱(HPLC)等已有报道。高效毛细管电泳是近年来发展起来的分析方法，它具有分离能力强、分离效率高、分析时间短，所需的样品及溶剂量小等特点。国外已有利用胶束毛细管电动色谱法等，但是所需的时间较长，因此需要一种快速、方便的检测方法。

胶体金试纸的原理是利用抗原抗体的特异结合反应和免疫层析技术，利用特定的显色反应在试纸上准确的显示测试的结果，具有灵敏度高，特异性强，重复性好，精确度高，操作简单，检测快速准确的特点，无须复杂的设备。

发明内容

本发明目的在于提供了一种利用胶体金免疫分析方法来检测可卡因(COC)的试纸。

为了达到所述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

在可卡因(COC)检测试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条可卡因(COC)合成免疫原试验线和一条抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水层，另一端端头为玻璃纤维样品层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水层和抗可卡因(COC)单抗金标垫相互交叠连接，在抗可卡因(COC)单抗金标垫上压有玻璃纤维样品层。

把可卡因(COC)检测试纸的样品层放入被检测尿液中(液面不得超过MAX线)由于毛细管作用样品将沿着试纸条向吸水层端移动，当移动至抗可卡因(COC)单抗金标垫时，样品中的可卡因(COC)与抗可卡因(COC)金标探针发生特异反应，当移动至固定有可卡因(COC)合成免疫原试验线时，由于抗可卡因(COC)单抗金标垫中的抗体会与样品中可卡因(COC)结合而失去其与可卡因(COC)合成免疫原结合位点，因此其胶体金不能滞留于试验线上；相反，如果样品中没有与抗可卡因(COC)单抗金标垫中的抗体结合的可卡因(COC)，抗可卡因(COC)单抗金标探针就会与试验线上的可卡因(COC)合成免疫原发生特异结合，使胶体金滞留于试验线上，这就是免疫竞争法原理。所以试验线的颜色深浅与样品中可卡因(COC)含量高低成反比。设定界限值为300ng/ml，出现两条红线代表尿样中COC低于300ng/ml，为阴性；出现一条红线表示尿样中COC超过界限值300ng/ml，为阳性。

当移动至抗鼠多克隆抗体控制线时，无论样品中可卡因(COC)含量多少，金标探针都会与已包被在硝酸纤维素膜上的鼠IgG结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误(检测时，样品液面超过MAX线)或试纸已经过期。

在用试纸检测尿液后，将其试验线与检测色标进行比色，按颜色深浅判断为阳性，可疑或阴性，进而确定所测尿液中可卡因(COC)含量是否超标。用含可卡因(COC)对照品得尿液检测，设定界限值300ng/ml。

由于采用上述技术方案，本发明所提供的检测可卡因(COC)的试纸及其检测方法具有这样的有益效果，即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，不需要仪器设备，而且结果易读。

附图说明

图1为可卡因(COC)检测试纸的主视结构图。

图2为可卡因(COC)检测试纸的俯视剖视结构图。

图3为可卡因(COC)检测试纸应用于测试时显示为阳性结果图。

图4为可卡因(COC)检测试纸应用于测试时显示为阴性结果图。

具体实施方式

1.应用活化脂法，将半抗原可卡因(COC)结合牛血清白蛋白(BSA)制备可卡因(COC)合成免疫原。

2.抗可卡因(COC)单克隆抗体的制备。

(1)将制备的可卡因(COC)合成免疫原免疫小鼠。

(2)提取小鼠腹水，分离纯化以得到抗可卡因(COC)单克隆抗体。

3.胶体金的制备及与抗可卡因(COC)单克隆抗体的结合。

(1)10％氯化金(0.5ml)+10％柠檬酸三钠(0.75ml)+去离子水(500ml)→胶体金。

(2)胶体金500ml+0.1M磷酸缓冲液pH7.4(50ml)+抗可卡因(COC)单克隆抗体→抗可卡因(COC)单抗胶体金。

(3)抗可卡因(COC)单抗胶体金+吸水纸→金标记抗体吸附吸水纸上备用。

4.选择硝酸纤维素膜做为底物覆着处，利用毛细管原理使胶体金朝向底物处移动。

5.特种制膜机制膜：机器特制，利用电脑控制传动速度，保证每单位膜上包被的抗体量相等。

控制线选用：羊抗鼠IgG，浓度2-10mg/ml

试验线选用：可卡因(COC)合成免疫原，浓度2-10mg/ml

6.组合：

(1)塑料条+薄膜+胶体金垫

(2)切条

7.使用方法

(1)除去外包装，取出试剂条。将试剂条插入尿样中，尿液界面物超过纸条上的“Max”线。如为试剂盒，则将尿液滴入样品孔中。

(2)15秒后取出试纸条或继续插在尿液中，5分钟时观察结果；如为试剂盒，则在5分钟后直接在观察孔中观察结果。

(3)结果判断：仅在控制区出现一条红色线为阳性：如在检测区及控制区出现两条红色线，则为阴性。控制区未出现红色线，表面试纸无效。

8.注意事项

(1)仅供定性筛检。

(2)稀释及不洁净的尿样或操作不当，均可产生错误结果。

(3)密封保存，在有效期12个月内使用。

Claims (5)

1.一种快速检测可卡因的胶体金试纸，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、可卡因单抗金标垫(5)、玻璃纤维样品吸液层(6)组成；底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和单克隆抗体金标垫相互交叠连接，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测可卡因的胶体金试纸，其特征在于控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成。

3.根据权利要求1所述的一种快速检测可卡因的胶体金试纸，其特征在于试验线是由可卡因合成免疫原包被制成。

4.根据权利要求1所述的一种快速检测可卡因的胶体金试纸，其特征在于金标垫是由可卡因单克隆抗体作为胶体金标记。

5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于吸水纸用双层吸水纸。

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