CN201886026U - 一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,包括底板、样品垫、示踪粒子结合垫、固相反应膜和吸水垫,所述样品垫、示踪粒子结合垫、固相反应膜和吸水垫以水平方向顺序相接方式依次固定在底板上,并且所述示踪粒子结合垫设有超顺磁或荧光颗粒标记的糖化血红蛋白单克隆抗体吸附层;所述固相反应膜上设有糖化血红蛋白单克隆抗体构成的第一检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。本实用新型不仅填补了目前市场上没有超顺磁或荧光免疫层析定量检测糖化血红蛋白的空白,同时也提高了检测灵敏度和准确度,并且将定量检测时间大大缩短。
Description
技术领域
本实用新型属于免疫化学检测领域,具体来说,涉及一种快速定量检测糖化血红蛋白的免疫层析试纸条。
背景技术
全球糖尿病(DM)患病率很高,目前DM的发病率仍呈不断的上升趋势,是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题,DM的防治一直是医学研究的热点和难点。传统的DM诊断和监测采用空腹血糖(FBG),餐后血糖(PBG)和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)等,但是血糖仪的监测数据仅代表抽血时的瞬间糖水平,而糖化血红蛋白(GHb)作为反映长期血糖水平的金标准,也是监测DM的重要指标。
GHb是指由血红蛋白和葡萄糖通过非酶促的缓慢不可逆结合而成的一种Hb组分。GHb的合成率与血液中的葡萄糖浓度呈直接比例。红细胞的平均寿命是120天左右,所以血液中的GHb的水平代表了120天来的平均水平。HBAlc作为GHb的一种亚型,是GHb各组分中最具有代表性的,同时也是目前研究最为广泛的。
1980年,HBAlc已经成为DM常规临床监测项目,一直作为反映长期血糖水平的金标准和DM并发症的风险监测指标,应用于临床和科研工作中。
临床实验室常用的HBAlc分析方法分为两大类:
⑴基于HBAlc和非HBAlc所带电荷不同,包括阳离子交换层析法、电泳法和等电位聚焦法:阳离子交换层析法利用能交换离子的材料为固定相来分离离子型化合物。该方法批内和批间变异系数(CV)均小于3%,检测结果不受所存在的变异性Hb及其衍生物和各种共存干扰物的影响,精密度好,性能稳定,并且检测快速。缺点是需要昂贵的设备和专业的技术人员,不能实现现场检测。
⑵基于GHb基团结构不同,包括亲和层析法和免疫学方法:亲和层析法中应用最多的是硼酸亲和层析法。使用一种水溶性蓝色硼酸衍生物,总Hb包括与硼酸结合的Hb沉淀,并被据记载过滤层,通过双波长发射比色分析系统进行测定,结果直接以HBAlc百分数表示。这种方法简便、快捷、其CV仅3%,线性范围可达20%,与其他已确认的分析方法相比具有良好的相关性。其缺点依然是不能实现现场检测。
最近,国际临床化学联盟(IFCC)建立了一种通过质谱分析特异性检测HBAlc分子浓度的新方法。首先用生理盐水清洗红细胞,然后去除醛亚胺,用水使红细胞溶解,其溶血产物经内蛋白酶作用获得HBAlc和HBAO的N端6肽,经反相液相色谱分离,最后用电喷雾电离质谱法测定。这种方法操作复杂、费时、花费大、不能用于临床常规检测,仅限于HBAlc测定的标准化。
目前糖化血红蛋白的定量检测的有胶体金定量、放射性免疫和化学发光定量试剂,而采用免疫层析技术定量检测糖化血红蛋白的装置,却未见报道。
基于光电效应的胶体金定量免疫层析技术,由于只能检测硝酸纤维素膜表面的胶体金颗粒的光线,不能真实反应检测线上免疫颗粒的总量,硝酸纤维素膜表面也因其本身材质具有不均匀性,因此用胶体金实现定量检测具有一定的局限性。放射性免疫具有对环境和人体的辐射危害,目前已经逐渐淡出历史舞台。而化学发光试剂盒由于设备昂贵、不能现场快速的实现检测。
实用新型内容
本实用新型所要解决的技术问题是提供一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,使用这种试纸条时,只需要微量的全血样本,即可在15分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量,大大提高了筛查的速度,灵敏度高、特异性好;并且该试纸条结构简单,易于标准化生产。
本实用新型解决上述问题所采用的技术方案是:一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,包括底板、样品垫、示踪粒子结合垫、固相反应膜和吸水垫,所述样品垫、示踪粒子结合垫、固相反应膜和吸水垫以水平方向顺序相接方式依次固定在底板上,并且所述示踪粒子结合垫设有超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的糖化血红蛋白单克隆抗体吸附层;所述固相反应膜上设有糖化血红蛋白单克隆抗体构成的第一检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
所述固相反应膜上还设有血红蛋白单克隆抗体构成的第二检测线。
进一步的技术方案,本实用新型还包括盒体,所述底板置于盒体内,并且所述盒体盒面上对应于固相反应膜的位置设有观察窗,对应于样品垫的位置设有加样孔。
所述底板材料为不吸水的硬质塑料或硬纸片。
所述样品垫为玻璃纤维膜材质或者聚酯膜材质。
所述超顺磁颗粒为氨基化超顺磁颗粒、羧基化超顺磁纳米颗粒和羟基化顺磁纳米颗粒中的一种。
所述荧光颗粒为异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶和别藻青蛋白中的一种。
所述固相反应膜为硝酸纤维素膜、尼龙膜、羧化纤维素膜和纯纤维素膜中的一种。
所述吸水垫为吸水纸或滤油纸。
对于上述一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条的制备方法,本实用新型解决所述技术问题采用的技术方案包括如下步骤:
⑴样品垫的制备:
将玻璃纤维膜或聚酯膜按照工艺要求切割成固定尺寸的样品垫长条,储存备用。
⑵示踪粒子结合垫的制备:
将超顺磁颗粒或荧光颗粒与待标记抗体按照其特有的化学交联标记手法进行标记,免疫荧光复合物通过凝胶层析柱(Sephadex G25柱)纯化,免疫磁珠复合物通过磁铁吸引进行纯化,将超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的糖化血红蛋白单克隆抗体复合物按照一定的浓度,采用浸泡法均匀的铺到玻璃纤维膜上或喷金工艺喷点到聚酯膜上,最后通过真空干燥、冻干或加热干燥的方式去除水份即得到示踪粒子结合垫。
⑶固相反应膜检测线和质控线的制备:
用包被稀释液配制适当浓度的糖化血红蛋白单克隆抗体、血红蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体,将上述三种溶液以点样方式固定到到固相反应膜上,分别为第一检测线、第二检测线和质控线。加热干燥或真空干燥,密封保存备。
所述固相反应膜为硝酸纤维素膜、尼龙膜、羧化纤维素膜和纯纤维素膜中的一种。
⑷吸水垫的制备:
将吸水纸按照一定的规格切割,密封保存备用。
⑸半成品大板的制备:
将包被好的固相反应膜、吸水垫、示踪粒子结合垫和样品垫按照固定的位置粘贴到底板上。
⑹成品试纸条的制备:
用切条机将半成品大板切割成试纸条,将试纸条装入注塑卡中,与干燥剂一起装入铝箔袋中热封,最后按照包装规格将铝箔袋装入到外包装盒中。
本实用新型工作原理是:将糖化血红蛋白单克隆抗体、血红蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体条带状分别固定于固相反应膜上作为第一检测线、第二检测线和质控线,将超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的血红蛋白单克隆抗体复合物吸附在示踪粒子结合垫上。当待测样品加到样品垫上后,通过毛细作用向前移动,与示踪粒子结合垫上的标记物相溶并相互反应,继续向前移动经过固相反应膜上含有相对应的第一检测线、第二检测线和质控线区域时,血液样品中的糖化血红蛋白会在第一检测线的位置形成第一反应线,血液样品中的血红蛋白会在第二检测线的位置形成第二反应线,通过免疫磁珠分析仪读取第一反应线和第二反应线中的反应信号,通过测定校准品绘制标准曲线和分析软件得出样本中的糖化血红蛋白百分含量。
综上所述,本实用新型与现有技术相比,具有如下优点:
(1)本实用新型采用超顺磁颗粒或荧光颗粒替代传统的胶体金纳米颗粒作为标记物实现免疫层析检测,借助于定量分析仪实现定量检测糖化血红蛋白或血红蛋白;不仅填补了目前市场上没有超顺磁或荧光免疫层析定量检测糖化血红蛋白的空白,同时也提高了检测灵敏度和准确度,并且将定量检测时间大大缩短。
(2)本实用新型盒体上设有供样品进入的加样孔和供观测结果的观察窗,根据分析仪判定结果,准确可靠。
(3)本实用新型能大大缩短检测时间,具有快速、简单、现场、干扰小等优点。
(4)本实用新型将超顺磁或荧光作为示踪粒子,没有有害物质及放射性物质的参与,安全可靠。
(5)本实用新型可通过磁信号分析仪的软件系统计算出糖化血红蛋白的百分含量,方便进行结果的分析和诊断。
(6)本实用新型制作方便,体积小、便于携带;而且可以批量生产,易于保存,有利于基层单位推广。
附图说明
图1 是实施例1的结构示意图。
图2 是实施例2固相反映膜的结构示意图。
图3 是实施例3的结构示意图。
图中标记相对应的部件名称:1-底板;2-固相反应膜;3-示踪粒子结合垫;4-样品垫;5-吸水垫;6-盒体;7-加样孔;8-观察窗;T1-第一检测线;T2-第二检测线;C-质控线。
具体实施方式
下面结合实施例及附图,对本实用新型作进一步的详细说明,但本实用新型的实施方式不限于此。
实施例1
如图1所示,一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,包括底板1,样品垫4、示踪粒子结合垫3、固相反应膜2和吸水垫5,所述样品垫4、示踪粒子结合垫3、固相反应膜2和吸水垫5以水平方向顺序相接方式依次固定在底板1上。所述示踪粒子结合垫3设有超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的糖化血红蛋白单克隆抗体吸附层;所述固相反应膜上设有糖化血红蛋白单克隆抗体构成的第一检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。
本实施例中,所述底板材料为不吸水的硬质塑料或硬纸片。所述样品垫4为玻璃纤维膜材质或者聚酯膜材质。所述超顺磁颗粒为氨基化超顺磁颗粒、羧基化超顺磁纳米颗粒和羟基化顺磁纳米颗粒中的一种。所述荧光颗粒为异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶和别藻青蛋白中的一种。所述固相反应膜可以为硝酸纤维素膜,也可以用尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜替代。所述吸水垫5为吸水纸或滤油纸。
实施例2
如图2所示,所述固相反应膜上还设有血红蛋白单克隆抗体溶液印制的第二检测印迹检测线T2,其余与实施例1相同。
实施例3
如图3所示,本实施例与实施例1的区别在于还包括盒体6,所述底板置于盒体6内,并且所述盒体盒面上对应于固相反应膜2的位置设有观察窗8,对应于样品垫4的位置设有加样孔7,其余与实施例1相同。
实施例4
快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸的制备方法如下:
⑴样品垫的制备:
将300mm×210mm的玻璃纤维膜裁切成300mm×18mm的长条后保存。
⑵制备示踪粒子结合垫:
①取氨基化超顺磁纳米颗粒5mg,用0.01M 的PBS(pH=7.2-7.4)的缓冲液洗涤3次,加入到1ml含1%的戊二醛溶液中,在室温条件下震荡反应1小时。
②反应结束后,用磁铁分离磁珠,再用缓冲液充分洗涤除去多余的戊二醛。
③加入0.25mg的待标记抗体,于室温下震荡反应3小时,偶联结束后按照1/10的比例加入含有2%BSA的封闭液封闭2小时。
④用磁铁分离器分离得到免疫磁珠复合物,用洗涤液清洗2-3次,最后用复溶液10%重悬免疫磁珠复合物。
⑤用10mM Tris-HCl缓冲液(1%BSA,2%海藻糖)按照一定的比例稀释免疫磁珠复合物,采用浸泡法均匀的铺到玻璃纤维膜上或喷金工艺喷点到聚酯膜上。
⑥将包被有免疫磁珠复合物的示踪粒子结合垫采用真空干燥、冻干或加热干燥的方式去除水份,按照一定的规格切割,密封保存。
本实施例中的氨基化超顺磁纳米颗粒也可以用羧基化超顺磁纳米颗粒、羟基化顺磁纳米颗粒、异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶或别藻青蛋白代替。
⑶硝酸纤维素膜检测线和质控线的制备::
将1mg/ml糖化血红蛋白单克隆抗体,0.5mg/ml血红蛋白单克隆抗体,1mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体分别泵入注射泵中,按照1μL/ cm的包被体积,将上述三种溶液条状包被固定到硝酸纤维素膜适当的位置,制备得到第一检测线T1、第二检测线T2和质控线C;加热干燥或真空干燥,密封保存备用。
本实施例中硝酸纤维素膜也可采用尼龙膜、羧化纤维素膜或纯纤维素膜替代。
⑷制备吸水垫:
将300mm×210mm的吸水纸切割成300mm×21mm,密封保存备用。
⑸半成品大板的制备:
将按照上述步骤制备好的样品垫4、示踪粒子结合垫3、硝酸纤维素膜2及吸水垫5沿水平方向顺序相接并粘贴到底板1上,得到半成品大板。
(6)制备成品试纸条:
采用切条机将半成品大板切成试纸条。将一人份试纸条入注塑卡中,再将一人份干燥剂装铝箔袋,铝箔袋开口端热封即可。将封好的铝塑袋装入外包装盒中。
如上所述,便可较好的实现本实用新型。
Claims (9)
1.一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,包括底板(1),样品垫(4)、示踪粒子结合垫(3)、固相反应膜(2)和吸水垫(5),其特征在于,所述样品垫(4)、示踪粒子结合垫(3)、固相反应膜(2)和吸水垫(5)以水平方向顺序相接方式依次固定在底板(1)上,并且所述示踪粒子结合垫(3)设有超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的糖化血红蛋白单克隆抗体吸附层;所述固相反应膜上设有糖化血红蛋白单克隆抗体构成的第一检测线(T1)和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线(C)。
2.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述固相反应膜(2)上还设有血红蛋白单克隆抗体构成的第二检测线(T2)。
3.根据权利要求1或2所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,还包括盒体(6),所述底板⑴置于盒体(6)内,并且所述盒体(6)盒面上对应于固相反应膜(2)的位置设有观察窗(8),对应于样品垫⑵的位置设有加样孔(7)。
4. 根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述底板(1)材料为不吸水的硬质塑料或硬纸片。
5.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述样品垫(4)为玻璃纤维膜材质或者聚酯膜材质。
6.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述超顺磁颗粒为氨基化超顺磁颗粒、羧基化超顺磁纳米颗粒和羟基化顺磁纳米颗粒中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述荧光颗粒为异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶和别藻青蛋白中的一种。
8.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述固相反应膜(2)为硝酸纤维素膜、尼龙膜、羧化纤维素膜和纯纤维素膜中的一种。
9.根据权利要求1所述的一种快速定量检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条,其特征在于,所述吸水垫(5)为吸水纸或滤油纸。
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GR01 | Patent grant | ||
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Assignee: SICHUAN MAKER BIOMEDICAL ELECTRONIC CO., LTD. Assignor: Sichuan Maker Biological Science and Technology Co., Ltd. Contract record no.: 2014510000174 Denomination of utility model: Test paper tape for quick quantitative detection of glycated hemoglobin by immunochromatography Granted publication date: 20110629 License type: Common License Record date: 20141112 |
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LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model | ||
CX01 | Expiry of patent term | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20110629 |