CN105445454A - 一种可定量的免疫层析装置 - Google Patents

一种可定量的免疫层析装置 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物检测技术领域,具体公开了一种可定量的免疫层析装置,包括壳体和置于壳体内的血液分离膜片、可移动基片、免疫层析膜片,可移动基片包括样品预定量膜片,壳体上设有加样孔、稀释孔、观察窗,血液分离膜片紧贴在加样孔对应的壳体内壁上,可移动基片设在血液分离膜片下方,使经过血液分离膜片的样品正好流入可移动基片的样品预定量膜片,可移动基片能移动到免疫层析膜片上。本发明的血液分离膜片可以去除待测血液样本中的红细胞,得到血浆样本,血浆样本通过毛细血管作用自动转移到样品预定量膜片上,当样品预定量膜片上的血浆样本达到饱和状态时,将样品预定量膜片移动到免疫层析试纸条上方,再进行检测。因此,本发明的免疫层析装置可真正的实现定量检测。

Description

一种可定量的免疫层析装置
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域,更具体地,涉及一种可定量的免疫层析装置。
背景技术
免疫层析法是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术,其原理是将特异的抗体先固定于硝基纤维素膜的某一区带,当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合,若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色,来提供对样品的定量检测数据,从而实现特异性的免疫诊断。与常规诊断方法相比,该技术分析速度快,全部检测过程仅需5-30分钟。操作简便,不需要其它任何仪器,无需专业人员,为实时实地检测提供了条件。检测样品种类多,可用于医疗、卫生、食品安全、环境检测中的血液、唾液、食物、水质、土壤等制备的微量溶液。
免疫层析试纸条是结合免疫标记物与对应抗原(抗体)的反应特异性和层析技术而制成的。免疫层析测试条通常由加样区、反应区和吸水区三部分组成。加样区含有免疫标记物颗粒,通常由玻璃纤维将免疫胶体金颗粒吸附在该区;反应区则喷涂两条反应线,一条为检测线,一条为质控线。检测线用以检测此处(抗原)物质与免疫标记物颗粒的包被抗原(抗体或抗体携带的抗原)的反应性;质控线则用以检测免疫标记物颗粒上的包被蛋白质的活性及程度,免疫标记物由加样区释放后,经反应区,部分继续到吸附区,完成层析,从而达到快速检测的目的。
目前采用的免疫层析装置无法自动控制进入反应区的样品量,无法自动实现准确定量。如果要加定量的样品,一般要用定量加样的工具。如果用定量加样的工具加定量的样品,需要更多的操作步骤而不方便。如果想直接用全血样品检测,由于每个全血样品中血浆含量不一样而会造成误差。而如果先分离血浆再定量加样,步骤多而不方便,且还需要用定量加样的工具。
发明内容
本发明为了克服上述缺陷,提供一种可定量的免疫层析装置。
为了实现上述目的,本发明是通过以下方案予以实现的:
一种可定量的免疫层析装置,包括壳体和置于壳体内的血液分离膜片、可移动基片、免疫层析膜片,可移动基片包括样品预定量膜片,壳体上设有加样孔、稀释孔、观察窗,血液分离膜片紧贴在加样孔对应的壳体内壁上,可移动基片设在血液分离膜片下方,使经过血液分离膜片的样品正好流入可移动基片的样品预定量膜片,可移动基片能移动到免疫层析膜片上;免疫层析膜片包括卡片和依次放置于卡片上的稀释垫、连接垫、结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫,稀释垫与连接垫部分重叠,结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫依次部分重叠,连接垫和结合垫的距离刚好使样品预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠;稀释垫对应壳体上的稀释孔,硝基纤维素膜对应壳体上的观察窗;样品预定量膜片饱和后,将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。
优选地,所述血液分离膜片为多层多孔分离膜,也可以是携带有红细胞凝集素的多层多孔分离膜。红细胞凝集素可以截留血液中的红细胞,从而得到血浆样本。孔的大小可设置到让其它成分通过,但阻止血红细胞通过。
可移动基片的样品预定量膜片可以紧贴在血液分离膜片下面,使经过血液分离膜的血浆更容易进入到样品预定量膜片上;或者,可移动基片的样品预定量膜片在血液分离膜片正下方的1~3mm处,这样的距离也可以使经过血液分离膜的血浆正好滴在样品预定量膜片上。
将待测血液样品加到加样孔后,血液样品通过加样孔集中在加样孔下方的血液分离膜片上,首先,血液样品经过血液分离膜片,血液分离膜本身或者血液分离膜片上的红细胞凝集素能截留血液样品中的血细胞,形成血浆。血浆浸入到样品预定量膜片上,血浆截留在样品预定量膜片上,当样品预定量膜片上的血浆达到饱和状态后,就可以将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使样品预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠,开始进行检测。
优选地,所述样品预定量膜片为尺寸大小(长度、宽度、厚度)、孔隙度相同的多孔膜片。这样的膜片能够定量截留定量的血浆,这样,只要加入足够量的血样品,样品预定量膜片达到血浆饱和度之后,多余的血浆就不会继续加到样品预定量膜片上,这样就可以实现定量检测。
因为单位面积多孔膜片截留的血浆的量是可以计算或着测量出来的,所以,样品预定量膜片截留血浆的量是可以根据实际检测需要来准确切割多孔膜片的大小和厚度。
更优选地,通常用的多孔膜片为定量血清或者血浆中的硝酸纤维素膜,纤维过滤膜,非织造纤维基片,玻璃纤维基片。
为了使用更方便,可以在稀释孔上设有一稀释袋,刺破稀释袋后稀释液刚好进入稀释孔。这样的免疫层析检测装置在使用时就不用另外携带稀释液。
常用的稀释液为PBS缓冲液或添加了表面活性剂如吐温-20、牛血清蛋白、酪蛋白或叠氮化钠的PBS缓冲液。
作为优选的实施方式,所述可移动基片还包括底板,底板黏贴在样品预定量膜片下方,所述免疫层析膜片位于可移动基片的斜下方,在可移动基片的底板的一侧设有侧壁,侧壁的另一端穿过壳体而伸出,通过拉动伸出的侧壁,可将样品预定量膜片与血液分离膜片分离,并把样品预定量膜片拉到免疫层析膜片正上方,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。在明白了上述拉动操作过程后,在壳体内部设置相应的隔板和滑道来实现拉动过程是很公知的技术结构,对于这些结构本发明就不再垒述。
结合垫是诸如玻璃纤维纸的多孔介质,装有胶体金颗粒,荧光颗料等偶联物,硝基纤维素膜含检测区及对照区/校准区。检测区域为一个或多个抗体结合分析物在膜上;对照区则为另一种特定结合区域。吸水垫作为储备装置将待测血清样本通过毛细血管作用从结合垫转到吸收垫。
本发明所述可定量的侧向层析装置的工作原理为:可移动基片中的血液分离膜片不仅可以附着待测血液样本,而且可以将待测血液样本中的血细胞分离出来,产生血浆,血浆中的全部蛋白预留在样品预定量膜片上,当样品预定量膜片上的血浆达到饱和状态时,就可以将样品预定量膜片推向免疫层析膜片,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。刺破稀释袋,稀释袋中的稀释液流入到稀释孔中,进而进入稀释垫,稀释液通过毛细管作用流到样品预定量膜片上,稀释液带动膜片上的血浆进入结合垫,当样品预定量膜片与结合垫接触后,样本中的待测抗体与预包被在膜上测试区(T)的的重组抗原-结合物反应。然后,混合物随之在毛细血管作用向前层析,在质控区(C)的相应抗体反应。如果血液中含有待测抗体,在测试区内(T)会出现一条红色条带,表明是阳性结果。如果在测试区内(T)没有出现红色条带,则血液中不含有待测抗体,表明是阴性结果。无论抗体是否存在于血液中,混合物都会继续向上层析至质控区(C),质控区的相应抗体与结合物反应出现一条红色条带。质控区内(C)所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明设计的可移动基片可以自动去除待测血液样本中的红细胞,得到血浆样本,血浆样本通过毛细管作用自动转移到样本预定量膜片上。当血浆样本含量达到饱和状态时,定量的血浆样本收集在样本预定量膜片上,再进行检测。因此,可移动基片先将待测样本预定量之后在进行免疫层析检测。
附图说明
图1为可定量免疫层析装置的正视图。
图2为可定量免疫层析装置的正面透视图。
图3为可定量免疫层析装置的内部免疫层析膜片的结构示意图。
图4为可移动基片的结构示意图。
图示说明:1.稀释垫;2.连接垫;3.结合垫;4.硝基纤维素膜;41.检测区;42.对照区;5.吸水垫;6.卡片;7.壳体;71.稀释孔;72.加样孔;73.观察窗;74.侧壁穿出壳体的部分8.可移动基片;81.底板;82.样品预定量膜片;83.血液分离膜片;84.侧壁;9免疫层析膜片。
图5为可定量免疫层析装置的移动轨迹。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述,所述实施例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
如图1-5所示,一种可定量的免疫层析装置,包括壳体和置于壳体内的血液分离膜片、可移动基片、免疫层析膜片,可移动基片包括样品预定量膜片,壳体上设有加样孔、稀释孔、观察窗,血液分离膜片紧贴在加样孔对应的壳体内壁上,可移动基片设在血液分离膜片下方,使经过血液分离膜片的样品正好流入可移动基片的样品预定量膜片,可移动基片能移动到免疫层析膜片上;免疫层析膜片包括卡片和依次放置于卡片上的稀释垫、连接垫、结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫,稀释垫与连接垫部分重叠,结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫依次部分重叠,连接垫和结合垫的距离刚好使样品预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠;稀释垫对应壳体上的稀释孔,硝基纤维素膜对应壳体上的观察窗;样品预定量膜片饱和后,将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。
结合垫是诸如玻璃纤维纸的多孔介质,装有胶体金颗粒,荧光颗料等偶联物,硝基纤维素膜含检测区及对照区/校准区。检测区域为一个或多个抗体结合分析物在膜上;对照区则为另一种特定结合区域。吸水垫作为储备装置将待测血清样本通过毛细血管作用从结合垫转到吸收垫。
优选地,所述血液分离膜片为多层多孔分离膜,只要多层多孔分离膜的孔径合适,孔的大小可设置到让其它成分通过,但阻止血红细胞通过,多层多孔分离膜本身就可以截留红细胞。为了提高效率,血液分离膜片也可以是携带有红细胞凝集素的多层多孔分离膜,红细胞凝集素可以截留血液中的红细胞,从而得到血浆样本。
可移动基片的样品预定量膜片可以紧贴在血液分离膜片下面,使经过血液分离膜的血浆更容易进入到样品预定量膜片上;或者,可移动基片的样品预定量膜片在血液分离膜片正下方的1~3mm处,这样的距离也可以使经过血液分离膜的血浆正好滴在样品预定量膜片上。
将待测血液样品加到加样孔后,血液样品通过加样孔集中在加样孔下方的血液分离膜上,首先,血液样品经过血液分离膜片,血液分离膜片本身或血液分离膜片上的红细胞凝集素能截留血液样品中的血细胞,形成血浆,血浆浸入到样品预定量膜片上,血浆被截留在样品预定量膜片上,当样品预定量膜片上的血浆达到饱和状态后,就可以将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠,开始进行检测。
优选地,所述样品预定量膜片为尺寸大小(长度、宽度、厚度)、孔隙度相同的多孔膜片。这样的膜片能够定量截留血浆中蛋白,这样,无论待测样品中的蛋白浓度是高还是低,只要蛋白量达到样品预定量膜片的饱和度之后,其余的蛋白就不会留在样品预定量膜片上,这样就可以实现定量检测。
因为单位面积多孔膜片截留的样品的量是可以计算出来的,所以,样品预定量膜片截留血浆的量是可以根据实际检测需要来准确切割多孔膜片的大小和厚度。
更优选地,通常用的多孔膜片为定量血清或者血浆中的硝酸纤维素膜,纤维过滤膜,非织造纤维基片,玻璃纤维基片。
为了使用更方便,可以在稀释孔上设有一稀释袋,刺破稀释袋后稀释液刚好进入稀释孔。这样的免疫层析检测装置在使用时就不用另外携带稀释液。
常用的稀释液为PBS缓冲液或添加了表面活性剂如吐温-20、牛血清蛋白、酪蛋白或叠氮化钠的PBS缓冲液。
作为优选的实施方式,所述可移动基片还包括底板,底板黏贴在样品预定量膜片下方,所述免疫层析膜片位于可移动基片的斜下方,在可移动基片的底板的一侧设有侧壁,侧壁穿过壳体而伸出,通过拉动伸出的侧壁,可将样品预定量膜片拉到免疫层析膜片正上方,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。在明白了上述拉动操作过程后,在壳体内部设置相应的隔板和滑道来实现拉动过程是很公知的技术结构,本实施例就详细介绍一种,其他可以实现的结构就不再垒述。
在壳体内部设有一个图4所述的隔区,隔区包括A区和B区,B区和A区通过轨道C相连通。可移动基片位于隔区的A区,免疫层析膜片位于隔区的B区,通过拉动可移动基片的侧壁,样品预定量膜片就会沿着隔区的轨道C划入到位于B区的免疫层析膜片上方,只要免疫层析膜片的位置合适,样品预定量膜片就可以实现分别与连接垫和结合垫部分重叠。
结合垫是诸如玻璃纤维纸的多孔介质,装有胶体金颗粒,荧光颗料等偶联物,硝基纤维素膜含检测区及对照区/校准区。检测区域为一个或多个抗体结合分析物在膜上;对照区则为另一种特定结合区域。吸水垫作为储备装置将待测血清样本通过毛细血管作用从结合垫转到吸收垫。
本发明所述定量层析装置的反应原理如下:将待测血液样品加到加样孔后,血液样品通过加样孔集中在加样孔下方的血液分离膜片上,首先,血液样品经过血液分离膜片,血液分离膜本身或者血液分离膜片上的红细胞凝集素能截留血液样品中的血细胞,形成血浆。血浆浸入到样品预定量膜片上,血浆截留在样品预定量膜片上,当样品预定量膜片上的血浆达到饱和状态后,就可以将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠,开始进行检测;检测时刺破稀释袋,稀释袋中的稀释液流入到稀释孔中,进而进入稀释垫,稀释液通过毛细管作用流到样品预定量膜片上,稀释液带动样品预定量膜片上的血浆进入结合垫,当样品预定量膜片与结合垫接触后,样本中的待测抗体与预包被在硝基纤维素膜上测试区(T)的的重组抗原-结合物反应。然后,混合物随之在毛细血管作用向前层析,在质控区(C)的相应抗体反应。如果血液中含有待测抗体,在测试区内(T)会出现一条红色条带,表明是阳性结果。如果在测试区内(T)没有出现红色条带,则血液中不含有待测抗体,表明是阴性结果。无论抗体是否存在于血液中,混合物都会继续向上层析至质控区(C),质控区的相应抗体与结合物反应出现一条红色条带。质控区内(C)所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。检测区和质控区的反应结果可以从观察凹槽中读出。
本发明可定量免疫层析装置的使用方法如下:
1、向加样孔中加入足量的血液样本,血液浸入到血液分离膜片上;
2、红细胞在血液分离膜片中截留,从血液分离膜片中产生的血浆转移到样品预定量膜片并浸润饱和;
3、通过手工或机械操作将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上面,使得样品预定量膜片刚好分别与连接垫和结合垫部分重叠,刺破稀释袋,稀释袋中的稀释液流入到稀释孔中,进而进入稀释垫;
4、血清样本通过样品预定量膜片转移到结合垫、硝酸素纤维膜及吸收垫上,形成检测区和对照区信号。
5、通过定量分析装置准确定量检测区和对照区信号。
结果判定:阳性(+):两条红色条带出现。一条位于测试区内(T),另一条位于质控区内(C)。阴性(-):仅质控区(C)出现一条红色条带,在测试区内(T)无红色条带出现。无效:质控区(C)未出现红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下,应重新测试。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (7)

1.一种可定量的免疫层析装置,其特征在于,包括壳体和置于壳体内的血液分离膜片、可移动基片、免疫层析膜片,可移动基片包括样品预定量膜片,壳体上设有加样孔、稀释孔、观察窗,血液分离膜片紧贴在加样孔对应的壳体内壁上,可移动基片设在血液分离膜片下方,使经过血液分离膜片的样品正好流入可移动基片的样品预定量膜片,可移动基片能移动到免疫层析膜片上;免疫层析膜片包括卡片和依次放置于卡片上的稀释垫、连接垫、结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫,稀释垫与连接垫部分重叠,结合垫、硝基纤维素膜、吸水垫依次部分重叠,连接垫和结合垫的距离刚好使样品预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠;稀释垫对应壳体上的稀释孔,硝基纤维素膜对应壳体上的观察窗;样品预定量膜片饱和后,将样品预定量膜片移动到免疫层析膜片上,使预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。
2.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其特征在于,所述血液分离膜片为多层多孔分离膜,也可以是携带有红细胞凝集素的多层多孔分离膜。
3.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其特征在于,可移动基片的样品预定量膜片紧贴在血液分离膜片下面,或者,可移动基片的样品预定量膜片在血液分离膜片正下方的1~3mm处。
4.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其特征在于,所述免疫层析膜片位于可移动基片的斜下方,可移动基片一侧设有侧壁,侧壁穿过壳体而伸出,通过拉动伸出的侧壁,可将样品预定量膜片拉到免疫层析膜片正上方,然后正好落在连接垫和结合垫之间,使样品预定量膜片分别与连接垫和结合垫部分重叠。
5.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其特征在于,所述稀释孔上设有一稀释袋,刺破稀释袋后稀释液刚好进入稀释孔。
6.根据权利要求1所述的免疫层析装置,其特征在于,所述样品预定量膜片为尺寸大小、孔隙度相同的多孔膜片。
7.根据权利要求6所述的免疫层析装置,其特征在于,所述多孔膜片为硝酸纤维素膜、纤维过滤膜、非织造纤维基片或玻璃纤维基片。
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