CN207851085U - 一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条 - Google Patents

Abstract

本实用新型提供了一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，所述试纸条主要包含样品垫、标记垫、NC膜、吸收垫、带有胶黏层的底板以及卡壳，所述的样品垫的孔径比红细胞直径小，或者比红细胞直径大；技术效果：1）本实用新型在进行样本测试时，血液样本无需进行处理，红细胞即可在到达测试线（T线）及质控线（C线）之前被去除，从而消除了红细胞对测试结果的影响。2）本实用新型的最佳技术方案，是通过选择孔径小于红细胞直径并处理上可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的样品垫以及在NC膜上划上含有与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的阻拦线制作的试纸条，可有效地消除红细胞对检测的干扰。

Description

一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条

技术领域

本实用新型涉及生物检测技术领域，尤其涉及快速体外诊断领域，具体涉及一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条。

背景技术

在生物体系中，存在着各种各样的物质，它们对生物学过程的各个方面都有十分重要的影响，对这些物质进行快速准确的分析一直是分析科学所追求的目标。环境监测、毒品监测以及临床诊断等应用领域也很迫切需要建立各种快速的、简便的分析方法。传统的分析方法是以化学法为主，常常需要一系列繁琐的操作过程，分析周期长，而且灵敏度低、选择性差、准确度差。免疫层析技术是一种基于利用抗体的特异反应性来检测样品液中的抗原的简单且便利的体外诊断技术，用该技术制作的检测试纸条具有快速、较高的选择性和灵敏度等特点，可以实现快速、简便和在线分析，代替某些传统的实验室分析手段，简化分析方法，而且能应用在实际常规测量中，对操作者的技能要求也不高。这些优点与分析化学的总战略目标是相一致的。

免疫层析法是上世纪90年代兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝基纤维素膜(NC膜)的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，来提供对样品的定性或定量检测数据，从而实现特异性的免疫诊断。与常规诊断方法相比，采用免疫层析法制作的试纸条具有结构简单、操作简便，易于检测、灵敏度高、选择性好、易于小型化、微型化等诸多优点而被广泛的用于临床和现场检测分析。但传统的免疫层析检测试纸条在测试血液全血样本时会受到血液中红细胞的干扰，如不进行相应的处置，将造成测试结果不准确。一直以来，以血液作为测试样本的免疫层析检测试纸条很容易受到血液中红细胞的干扰，造成测试结果的不准确。如以胶体金免疫层析检测为例，当血液样品中有红细胞存在时，在NC膜上会形成很深的背景，干扰人肉眼或仪器的判读，造成测试结果不准确。

发明内容

本实用新型的目的是克服现有技术的不足，提供了一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条方案。通过该方案，可以消除测试样本中的红细胞干扰测试结果判读，造成测试结果不准确的现象可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条。

为了解决上述红细胞对血样测试造成干扰的问题，我们进行了深入研究。结果发现，通过选择特殊孔径的样品垫，并对样品垫及NC膜特定位置进行处理，可有效地消除红细胞的干扰完成了本实用新型。

本实用新型的技术方案如下：

一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，所述试纸条主要包含样品垫、标记垫、NC膜、吸收垫、带有胶黏层的底板以及卡壳，所述的样品垫的孔径比红细胞直径小，或者比红细胞直径大。优选地，所述的样品垫的孔径比红细胞直径小。样品垫具有滤除血样中红细胞的作用，避免在测试时红细胞对检测结果的干扰。样品垫的孔径比红细胞直径小可以让滤除红细胞更彻底。

所述的样品垫的材质为玻纤或聚酯。优选地，所述的样品垫的材质为聚酯。

所述的样品垫处理有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质，所述的物质为抗红细胞抗体或凝集素类物质。优选地，所述的样品垫处理有抗红细胞抗体。

所述的样品垫上处理的抗红细胞抗体是单抗或多抗。优选地，所述的样品垫上处理的抗红细胞抗体是多抗。

所述的NC膜包含有捕获样本中目标物质的测试线T线以及可与标记垫中标记探针相结合的质控线C线。优选地，所述的NC膜在靠近样品垫和标记垫端的NC膜T线前端设有阻拦线。 NC膜是进行样本检测时免疫反应发生及检测结果观察的主要场所。阻拦线是为避免样品垫过滤血样中红细胞不完全。

所述的阻拦线中含有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质，所述的物质为抗红细胞抗体或凝集素类物质。优选地，所述的物质为抗红细胞抗体。

所述的阻拦线上所划的抗红细胞抗体是单抗或多抗。优选地，所述的阻拦线上所划的抗红细胞抗体是多抗。

本实用新型的可消除红细胞对测试结果影响的免疫层析试纸条的制作是通过选择特殊孔径的样品垫，并在样品垫及NC膜特定位置处理上含有与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的方法对传统的免疫层析试纸条进行改进而制得。

具体制作过程如下：

(1)将带有背衬(或不带背衬)的NC膜粘贴于带有胶黏层的底板，粘贴好后应辊压平整，NC膜与底板之间应无气泡。

(2)在NC膜特定位置用喷膜仪喷涂上含有含有与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的阻拦线、与样本目标物质结合的测试线(T线)以及与标记垫上标记探针结合的质控线 (C线)。

(3)喷涂好的NC膜放入干燥设备进行干燥，以便将喷涂的物质固定在NC膜上。

(4)选择一种一定孔径的样品垫，该样品垫可用含有与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的样品垫处理液处理，也可不处理。本实用新型优选处理的方案，处理好的样品垫放入干燥设备进行干燥。

(5)选择一种标记垫，标记垫的材质可以玻纤、无纺布或聚酯，优选聚酯材质的标记垫，并用标记垫处理液处理或不处理，本实用新型优选处理的方案，处理好的标记垫放入干燥设备干燥。

(6)在干燥好的标记垫上用喷膜仪喷涂上标记探针并放入干燥设备干燥。

(7)上述组成部分处理好后，按照图1的方式进行组装，组装好的试纸条放入卡壳，压壳机压紧即为完整的测试试纸条检测卡。

评估方案：

(1)采集全血血液样本，将样本用待测目标物质调节成至少5个测试浓度的样本。

(2)随机选取一个样本，将其加入按照传统制备的试纸条以及按照本实用新型制备的试纸条，观察消除红细胞的效果。

(3)将每个待测浓度的血样样本分成二等分。第一份离心取血浆后用对照检测仪器检测样本中目标物质的含量；第二份用本方案制作的试纸条在配套检测仪器上直接用全血样本进行检测。

(4)比较用本方案制作的试纸条测试结果与对照仪器检测结果的偏差，并计算测试CV 和测试线性。

本实用新型具有如下技术效果：

1)本实用新型在进行样本测试时，血液样本无需进行处理，红细胞即可在到达测试线 (T线)及质控线(C线)之前被去除，从而消除了红细胞对测试结果的影响。2)本实用新型的优选技术方案，是通过选择孔径小于红细胞直径并处理上可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的样品垫以及在NC膜上划上含有与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质的阻拦线制作的试纸条，可有效地消除红细胞对检测的干扰。

附图说明

图1为本实用新型试纸条结构图。

图中1-1为样品垫，1-2为标记垫，1-3为NC膜，1-4为吸收垫，1-5为底板，1-6为阻拦线，1-7为测试线，1-8为质控线。

具体实施方式

下面结合实施例更详细地说明本实用新型，但本实用新型的技术范围不限于这些实施例。

如图1所示，本实用新型的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，所述试纸条包含带有胶黏层的底板1-5以及卡壳，所述的底板1-5上依次叠加有样品垫1-1、标记垫1-2、NC膜1-3和吸收垫1-4，样品垫的孔径为6微米，比红细胞直径小。样品垫的材质为聚酯，样品垫处理有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的抗红细胞多抗；NC膜包含有捕获样本中目标物质的测试线1-7以及可与标记垫中标记探针相结合的质控线1-8；NC膜在靠近样品垫和标记垫端的NC膜T线前端设有阻拦线1-6，阻拦线中含有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的抗红细胞多抗。

免疫层析试纸条检测卡的制作过程如下：

(1)将带有背衬的NC膜粘贴于带有胶黏层的PVC底板，粘贴好后应辊压平整，避免粘贴过程中因有气泡造成NC膜不平整。

(2)在NC膜确定的阻拦线、T线和C线位置用喷膜仪分别划上用0.01M pH 7.4的磷酸盐缓冲液配制的浓度为1mg/mL的抗红细胞多抗、1mg/mL的CRP鼠单抗以及0.5mg/mL的羊抗鼠多抗；划好后放入干燥设备，以便将相应的抗体固定在NC膜上。

(3)用0.01M pH 7.4含0.5％Tween-20和0.5mg/mL抗红细胞多抗的磷酸盐缓冲液处理孔径为6μm聚酯膜材质的样品垫，然后放入干燥设备干燥。

(4)用0.01M pH 7.4含0.5％Tween-20的磷酸盐缓冲液处理玻纤材质的标记垫，然后放入干燥设备干燥。

(5)干燥好的标记垫用喷膜仪喷涂上浓度为1mg/mL已标记好胶体金的CRP鼠单抗，然后放入干燥设备进行干燥。

(6)将吸收垫、处理好的样品垫、标记垫和粘贴好NC膜并已划好阻拦线、T线、C线的带有胶黏层的PV板按照图1的尺寸进行组装，然后分切成合适的尺寸。

(7)将分切好的试纸条装入下卡壳，扣上上卡壳，然后用压壳机压紧，即为成品免疫层析试纸条检测卡。

评估本实用新型设计的免疫层析试纸条检测CRP全血血液样本时消除红细胞的效果以及测试的检测灵敏度、准确度、测试线性和测试CV等方面的效果，具体步骤如下：

(1)采集全血血液样本，用CRP抗原标准品调节血样中CRP的浓度，将血样调节成0.5mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L以及200mg/L六个浓度的样本。

(2)随机选取一个样本，将其加入按照传统制备的试纸条以及按照本实用新型制备的试纸条，观察消除红细胞的效果。

(3)将每个待测浓度的血样样本分成二等分。第一份离心取血浆后用对照检测仪器检测样本中CRP的含量；第二份用本方案制作的试纸条在配套检测仪器上直接用全血进行检测。

(4)比较用本方案制作的试纸条测试结果与对照仪器检测结果的偏差，并计算测试CV 和测试线性。

表1 本方案制作的试纸条及对照仪器检测CRP样本结果

从表1的测试结果可看出：本实用新型制作的试纸条可有效地消除红细胞对检测的干扰。本方案制作的试纸条在检测CRP血液样本时与对照仪器相比较，两者之间具有良好的线性相关性。本方案制作的检测卡检测灵敏度可达到0.5mg/L，测试CV均小于10％，与对照仪器的准确度偏差亦均小于10％，表现出了优良的测试性能。

Claims (10)

1.一种可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述试纸条包含带有胶黏层的底板（1-5）以及卡壳，所述的底板（1-5）上依次叠加有样品垫（1-1）、标记垫（1-2）、NC膜（1-3）和吸收垫（1-4），所述的样品垫（1-1）的孔径比红细胞直径小，或者比红细胞直径大，所述的样品垫（1-1）处理有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质，所述的物质为抗红细胞抗体或凝集素类物质，所述的NC膜（1-3）包含有捕获样本中目标物质的测试线T线（1-7）以及可与标记垫（1-2）中标记探针相结合的质控线C线（1-8），所述的NC膜（1-3）在靠近样品垫（1-1）和标记垫（1-2）端的NC膜T线前端设有阻拦线（1-6）。

2.根据权利要求1所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的样品垫的材质为玻纤或聚酯。

3.根据权利要求2所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的样品垫的材质为聚酯。

4.根据权利要求1所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的样品垫处理有抗红细胞抗体。

5.根据权利要求4所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的样品垫上处理的抗红细胞抗体是单抗或多抗。

6.根据权利要求5所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的样品垫上处理的抗红细胞抗体是多抗。

7.根据权利要求1所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的阻拦线中含有可与红细胞结合和/或使红细胞聚集的物质，所述的物质为抗红细胞抗体或凝集素类物质。

8.根据权利要求7所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的物质为抗红细胞抗体。

9.根据权利要求8所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的阻拦线上所划的抗红细胞抗体是单抗或多抗。

10.根据权利要求9所述的可消除免疫层析法检测中红细胞干扰的试纸条，其特征在于，所述的阻拦线上所划的抗红细胞抗体是多抗。