CN113567668A - 一种用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条的制备及其应用 - Google Patents
一种用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条的制备及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条的制备及应用，具体涉及生物检测领域。所述的试纸条包括背板和黏贴在所述背板上的样品垫、结合垫、NC膜及吸水垫，其中结合垫分别与样品垫和NC膜的一端搭接，NC膜的另一端与吸水垫搭接，NC膜上喷涂有检测线和质控线，所述结合垫上附有荧光微球标记的鼠抗人CD9抗体和荧光微球标记的兔IgG，所述的检测线上包被有鼠抗人CD9单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗兔抗体。本发明利用优化的荧光免疫层析技术，可以更方便、快速、准确的实现外泌体浓度的测定，为外泌体浓度的检测提供了新的技术手段。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条的制备及应用。
背景技术
外泌体是有活细胞分泌的磷脂双分子层结构的小囊泡，直径在30-150nm，密度在1.13-1.19g/ml，可存在于各种体液中，如血清、血浆、唾液、尿液、腹水、脊髓液、乳汁等。外泌体中含有多种生物分子，如mRNA、miRNA、蛋白质、脂质等，可以传递给受体细胞，从而改变受体细胞的生理功能或病理功能。近几年，外泌体作为细胞间的信息传递工具及各种疾病的生物标志物而引起广泛的关注，外泌体具有在生物医药及疾病诊断领域的应用具有很大的潜力。
外泌体的检测定量是在外泌体研究中的常规实验，目前，可用于外泌体的检测定量技术有很多种，比如动态光散射技术，纳米粒径示踪分析技术，可调节电阻脉冲传感技术，流式细胞技术和纳米流式技术等，都经常被用到外泌体浓度的测定，但是这些技术也存在一定的局限性，其中动态光散射技术，纳米粒径示踪分析技术，可调节电阻脉冲传感技术无法去除复杂样本中的非外泌体颗粒的污染，造成得到的外泌体浓度数据不真实，流式细胞技术检测灵敏度为500nm左右，不能够直接检测外泌体，只能通过免疫磁珠作为载体，对外泌体进行免疫捕获后，再进行浓度检测，由于此流程过于繁琐，操作难度大，实验的失败率极高，纳米流式技术虽然可以直接的检测样本中外泌体的浓度，但是此仪器过于昂贵，普通的实验室不具备该仪器，导致待检测的外泌体样品不能够快速的获得浓度数据，给下游实验带来不便。
因此，为了快速，方便的获得准确的外泌体浓度数据，亟需一种价格便宜，操作简单，定量准确的外泌体检测定量设备。
发明内容
为此，本发明开发了一种用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条，利用优化的荧光免疫层析技术，可以更方便、快速、准确的实现外泌体浓度的测定，为外泌体浓度的检测提供了新的技术手段。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明公开了一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条，所述的试纸条包括背板和黏贴在所述背板上的样品垫、结合垫、NC膜及吸水垫，其中结合垫分别与样品垫和NC膜的一端搭接，NC膜的另一端与吸水垫搭接，NC膜上喷涂有检测线和质控线，所述结合垫上附有荧光微球标记的鼠抗人CD9抗体和荧光微球标记的兔IgG，所述的检测线上包被有鼠抗人CD9单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗兔抗体。
进一步地，所述的NC膜为硝酸纤维素膜，其孔径为450-700nm。
进一步地，所述的荧光微球是粒径大小为100-180nm的羧基荧光微球。
进一步地，所述CD9抗体为单克隆抗体，兔IgG和羊抗兔抗体为多克隆抗体。
一种制备所述荧光免疫层析试纸条的方法，包括以下步骤：
步骤一，将CD9抗体和兔IgG分别进行荧光微球标记
将荧光微球进行活化处理，再分别将CD9抗体和兔IgG与活化的微球偶联和封闭，洗去未结合的抗体后备用。
步骤二，结合垫的处理
将荧光微球标记的CD9抗体和羊抗兔抗体加入到结合缓冲液中，充分混合，并将所述的混合抗体喷涂在结合垫上，烘箱37℃烘干后备用。
步骤三，检测线和质控线的划线
将CD9抗体配置成浓度为0.1-0.4mg/ml的检测线工作液，羊抗兔抗体配置成浓度为0.4-0.8mg/ml的质控线工作液，将检测线工作液和质控线工作液分别喷涂置NC膜的检测线和质控线上，低温干燥后备用。
步骤四，背板的组装
将结合垫、样品垫、吸水垫，按顺序依次黏贴到背板上。
步骤五，试纸条的切割
将黏贴好的背板用切条机切割成宽度为4mm的试纸条，在干燥条件下储存备用。
进一步地，所述的结合缓冲液的成分包括Tris 200-600mg/L，酪蛋白100-500mg/L，蔗糖100-500mg/L，表面活性剂40-80mg/L，去离子水，pH值为7.2-7.8。
进一步地，荧光免疫试纸条制备完成后，将试纸条放入检测卡壳中，制成试纸卡，每个试纸卡装入一个铝箔袋中，同时放入一包干燥剂，再用封口机封口。
进一步地，所述的试纸卡分为加样区，检测区和手持区，其中检测区可以对检测线和质控线进行检测。
利用荧光免疫层析试纸条检测外泌体浓度的方法，包括以下步骤:
步骤一：样品准备
取适量的外泌体样品，向所述外泌体样品中加入样品稀释液，并充分混匀，形成外泌体样品混合液。
步骤二：试纸卡准备
试纸卡样品拆去外包装，将试纸卡放置在水平的平面上，备用。
步骤三：加样处理
吸取80ul外泌体样品混合液，加入试纸卡的样品槽，并计时。
步骤四：数据检测
15min后将试纸卡置于荧光免疫分析仪中，检测外泌体的浓度。
进一步地，根据权利要求9所述的检测外泌体浓度的方法，其特征在于，所述的样品稀释液为Tris 100-500mg/L，BSA50-200mg/L，表面活性剂400-1000mg/L，去离子水，pH值为7.0-7.6。
本发明具有如下优点：
(1)设备简单，不需要大型的仪器设备，成本低廉。
(2)不需要复杂的操作，实验流程简单方便。
(3)能够获得更准确的外泌体浓度，不受复杂样本中非外泌体颗粒的干扰。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
图1为本发明提供的用于外泌体定量检测的荧光免疫层析试纸条侧面结构示意图，其中，1为背板，2为样品垫，3为结合垫，4为NC膜，5为吸水垫；
图2为本发明提供的用于外泌体定量检测的荧光免疫层析试纸条正面示意图，其中，1为吸水垫，2为检测线，3为质控线，4为背板，5为吸水垫，6为NC膜，7为结合垫；
图3为本发明提供的用于外泌体定量检测的荧光免疫层析试纸卡示意图，
其中，1为样品槽，2为检测线，3为质控线，4为手持区，5为检测区；
图4为本发明提供的用于外泌体定量的荧光免疫层析试纸条中检测线和质控线检测外泌体的原理图，其中，1为荧光微球，2为CD9单克隆抗体，3为外泌体，4为兔IgG，5为羊抗兔抗体；
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1本发明提供的一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条
如图1所示，检测外泌体的荧光免疫层析试纸条试包括背板和黏贴在所述背板上的样品垫、结合垫、NC膜及吸水垫，其中结合垫分别与样品垫和NC膜的一端搭接，NC膜的另一端与吸水垫搭接。所述的NC膜为硝酸纤维素膜，其孔径为450-700nm，所述的样品垫和结合垫为聚酯膜。
如图2所示，NC膜上喷涂有检测线和质控线，所述结合垫上附有荧光微球标记的鼠抗人CD9抗体和荧光微球标记的兔IgG，荧光微球是粒径大小为100-180nm的羧基荧光微球，所述的微球经过活化后可与CD9抗体和兔IgG结合。当稀释后的样品滴入样品垫，流经结合垫时，荧光微球标记的鼠抗人CD9抗体将与外泌体首次结合，并与兔IgG一起流向检测线。如图4所示，所述的检测线上包被有鼠抗人CD9单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗兔抗体，以此可以分别捕获外泌体和兔IgG。吸水垫可提升整个体系的反应速度，且使反应更加充分。
实施例2本发明提供的检测外泌体的荧光免疫层析试纸条的方法
1.CD9抗体和兔IgG的荧光微球标记
(1)荧光微球进行活化处理
取200ul固含物为1％的荧光微球加入离心管中，并加入1ml的MES缓冲液(MES200mg/ml)，混匀后放入离心机，6000g离心5min后，去掉上清。再向离心管中加入1ml的MES缓冲液(MES 200mg/ml)，对荧光微球进行重悬，再向溶液中加入100ul(20mg/ml)EDC和100ul(20mg/ml)NHS，震荡混匀40min后，将离心管放置离心机，6000g离心5min，吸去上清。
(2)CD9单克隆抗体的荧光微球标记
向活化完毕的微球中加入1ml的MES缓冲液(MES 200mg/ml)，颠倒混匀后，加入80ug的CD9单克隆抗体，4℃颠倒混匀2h，再放入离心机，4℃6000g离心10min，吸去上清。
(3)兔IgG多克隆抗体的荧光微球标记
向活化完毕的微球中加入1ml的MES缓冲液(MES 200mg/ml)，颠倒混匀后，加入80ug的兔IgG多克隆抗体，4℃颠倒混匀2h，再放入离心机，4℃6000g离心10min，吸去上清。
(4)荧光微球封闭
分别向CD9单克隆抗体和兔IgG多克隆抗体标记的荧光微球中加入200ul的封闭液(BSA20mg/ml、乙醇胺10mg/ml，去离子水)，室温旋转混匀30min，再用离心机4℃6000g离心10min，吸去上清。
(5)荧光微球的洗涤
分别向CD9单克隆抗体和兔IgG多克隆抗体标记的荧光微球中加入1ml的洗涤液(BSA 20mg/ml、吐温20 20ul/ml，去离子水)，充分混匀后，放置离心机中4℃6000g离心10min，吸去上清。重复上述洗涤步骤(共两次)。最后加入200ul洗涤液，4℃储存备用。
2.结合垫的处理
将上述的CD9单克隆抗体和兔IgG多克隆抗体标记的荧光微球按照体积比1:1的比例混合，并加入5倍体积的结合缓冲液(Tris 200-600mg/L，酪蛋白100-500mg/L，蔗糖100-500mg/L，表面活性剂40-80mg/L，去离子水，pH值为7.2-7.8)，颠倒混匀。再将混匀后的微球溶液用喷金仪(采购自上海杰一生物技术有限公司，型号JY-EQ04)喷到准备好的聚酯膜上，放入烘箱，温度37℃干燥3h，烘干后放置干燥密封的条件下备用。
3.检测线和质控线的喷涂
(1)配制检测线和质控线的抗体工作液
分别用包被缓冲液(磷酸氢二钠0.3mg/ml，磷酸二氢钠0.3mg/ml，BSA 10mg/ml，pH7.0)溶解CD9单克隆抗体和羊抗兔抗体配置成检测线工作液和质控线工作液，使其抗体终浓度分别为0.3mg/ml和0.6mg/ml。
(2)NC膜背板划线
将NC膜贴在背板上，形成附和好的NC膜背板。取配置好的检测线工作液和质控线工作液分别置于喷金仪的T线和C线储液瓶中备用。将划线管对准好位置后，再将NC膜背板放置在喷金仪的划线台，并调整好位置，设置仪器出样量为1.0ul/cm，长度300mm后，开启划线。划线后的NC膜背板放置在烘箱中，37℃干燥2h后，放置干燥密封的条件下备用。
4.背板的组装
将结合垫、样品垫、吸水垫，按顺序依次黏贴到NC膜背板上，放置干燥密封处备用。
5.试纸条的切割
将黏贴好的背板用切条机切割成宽度为4.5mm的试纸条，在干燥条件下储存备用。
将所述的荧光免疫层析试纸条放入准备好的检测卡壳中，制成试纸卡(试纸卡示意图如图3所示)，每个试纸卡装入一个铝箔袋中，同时放入一包干燥剂，再用封口机封口。
实施例3本发明提供的利用所述荧光免疫层析试纸条检测外泌体浓度的方法
外泌体样品的浓度检测
步骤一：样品准备
取适量的外泌体样品，向所述外泌体样品中加入样品稀释液，并充分混匀，形成外泌体样品混合液。
步骤二：试纸卡准备
试纸卡样品拆去外包装，将试纸卡放置在水平的平面上，备用。
步骤三：加样处理
吸取80-100ul外泌体样品混合液，加入试纸卡的样品槽，并计时。
步骤四：数据检测
15min后将试纸卡置于荧光免疫分析仪(购自广州蓝勃生物科技有限公司)中，检测外泌体的浓度。
对比例纳米粒径示踪分析仪定量外泌体的浓度
采用纳米粒径示踪分析仪对各浓度梯度的外泌体标准品进行定量，并记录数据。
实验例1对准确性的比较
将血浆样品进行等比稀释，稀释比例如图表，利用荧光免疫层析仪和纳米粒径示踪分析仪分别对稀释的外泌体进行浓度检测(每个浓度点检测三次，取平均值)，将荧光免疫层析仪得到的T/C值代入拟合曲线中得出外泌体浓度，以稀释的外泌体浓度为自变量，以测定的浓度值为因变量，计算求出线性回归方程和线性回归系数，结果如表1所示。
从表1的结果可以得出结论，本发明提供的荧光免疫层析试纸条测得外泌体浓度的线性回归系数(r2)值高于纳米粒径示踪分析法，表明荧光免疫层析法可以更准确的测定外泌体的浓度。此外，纳米粒径示踪分析法测得的外泌体浓度明显高于外泌体标准品，其原因可能是纳米粒径示踪分析法记录了外泌体标准品中的非外泌体颗粒，导致其测得的浓度值偏高。
表1外泌体线性检测结果
实验例2对重复性的比较
将外泌体标准品分别稀释成浓度为107P/ml和106P/ml的外泌体溶液，分别用荧光免疫层析仪和纳米粒径示踪分析仪对上述浓度的外泌体溶液进行测定，每个浓度测10次，计算均值，标准差和变异系数。重复性实验结果如表2和3所示。
根据表2和3的列出的数据可以得出，本发明提供的荧光免疫层析试纸条可以更稳定的检测出107P/ml和106P/ml的外泌体浓度值。而纳米粒径示踪分析仪可能由于非外泌体颗粒的影响，其重复性较差，只能达到半定量的目的。
表2外泌体浓度为107P/ml的重复性结果
| 10<sup>7</sup>P/ml | 荧光免疫层析(P/ml) | 纳米粒径示踪分析(P/ml) |
| 1 | 9.11×10<sup>6</sup> | 1.78×10<sup>7</sup> |
| 2 | 8.73×10<sup>6</sup> | 1.63×10<sup>7</sup> |
| 3 | 8.31×10<sup>6</sup> | 1.68×10<sup>7</sup> |
| 4 | 8.54×10<sup>6</sup> | 1.81×10<sup>7</sup> |
| 5 | 8.29×10<sup>6</sup> | 1.65×10<sup>7</sup> |
| 6 | 8.46×10<sup>6</sup> | 1.74×10<sup>7</sup> |
| 7 | 8.18×10<sup>6</sup> | 1.71×10<sup>7</sup> |
| 8 | 8.88×10<sup>6</sup> | 1.67×10<sup>7</sup> |
| 9 | 8.93×10<sup>6</sup> | 1.76×10<sup>7</sup> |
| 10 | 8.25×10<sup>6</sup> | 1.62×10<sup>7</sup> |
| 均值 | 8.57×10<sup>6</sup> | 1.71×10<sup>7</sup> |
| SD | 0.31×10<sup>6</sup> | 1.44×10<sup>6</sup> |
| CV | 3.62％ | 8.42％ |
表3外泌体浓度为106P/ml的重复性结果
| 10<sup>6</sup>P/ml | 荧光免疫层析(P/ml) | 纳米粒径示踪分析(P/ml) |
| 1 | 8.71×10<sup>5</sup> | 1.76×10<sup>6</sup> |
| 2 | 8.42×10<sup>5</sup> | 1.52×10<sup>6</sup> |
| 3 | 8.12×10<sup>5</sup> | 1.83×10<sup>6</sup> |
| 4 | 8.35×10<sup>5</sup> | 1.81×10<sup>6</sup> |
| 5 | 8.03×10<sup>5</sup> | 1.68×10<sup>6</sup> |
| 6 | 8.86×10<sup>5</sup> | 1.43×10<sup>6</sup> |
| 7 | 8.27×10<sup>5</sup> | 1.52×10<sup>6</sup> |
| 8 | 7.98×10<sup>5</sup> | 1.88×10<sup>6</sup> |
| 9 | 8.19×10<sup>5</sup> | 1.65×10<sup>6</sup> |
| 10 | 8.33×10<sup>5</sup> | 1.79×10<sup>6</sup> |
| 均值 | 8.33×10<sup>5</sup> | 1.69×10<sup>6</sup> |
| SD | 0.26×10<sup>5</sup> | 1.47×10<sup>5</sup> |
| CV | 3.20％ | 8.65％ |
实验例3对最低检出限的比较
以无外泌体血清(采购自美国SBI公司)作为空白样本，分别用荧光免疫层析仪和纳米粒径示踪分析仪分别检测20次外泌体浓度，得到检测体系的最低值，两种方法对无外泌体血清的检测结果如表4所示。荧光免疫层析仪测得的最低值的平均值为4.39×104，纳米粒径示踪分析仪测得的最低值的平均值为6.38×105。
表4的结果可以看出，通过纳米粒径示踪分析仪测得的外泌体最低值明显高于荧光免疫层析法，其原因可能是无外泌体血清中非外泌体颗粒的干扰，导致了纳米粒径示踪分析仪检测的浓度过高，而荧光免疫层析法通过对外泌体特异性的捕获并检测，排除了非外泌体颗粒的干扰，因此大大增加外泌体检测定量的灵敏度，可以获得了更加真实的外泌体浓度数据。
表4两种方法对无外泌体血清的检测结果
| 荧光免疫层析(P/ml) | 纳米粒径示踪分析(P/ml) | |
| 1 | 4.63×10<sup>4</sup> | 6.65×10<sup>5</sup> |
| 2 | 4.25×10<sup>4</sup> | 6.51×10<sup>5</sup> |
| 3 | 4.49×10<sup>4</sup> | 6.48×10<sup>5</sup> |
| 4 | 4.02×10<sup>4</sup> | 6.11×10<sup>5</sup> |
| 5 | 4.17×10<sup>4</sup> | 6.89×10<sup>5</sup> |
| 6 | 4.68×10<sup>4</sup> | 6.81×10<sup>5</sup> |
| 7 | 4.76×10<sup>4</sup> | 5.87×10<sup>5</sup> |
| 8 | 4.29×10<sup>4</sup> | 6.23×10<sup>5</sup> |
| 9 | 4.31×10<sup>4</sup> | 6.93×10<sup>5</sup> |
| 10 | 4.02×10<sup>4</sup> | 6.28×10<sup>5</sup> |
| 11 | 4.45×10<sup>4</sup> | 6.45×10<sup>5</sup> |
| 12 | 4.36×10<sup>4</sup> | 6.33×10<sup>5</sup> |
| 13 | 4.29×10<sup>4</sup> | 6.46×10<sup>5</sup> |
| 14 | 4.09×10<sup>4</sup> | 6.18×10<sup>5</sup> |
| 15 | 4.56×10<sup>4</sup> | 6.49×10<sup>5</sup> |
| 16 | 4.62×10<sup>4</sup> | 5.96×10<sup>5</sup> |
| 17 | 4.28×10<sup>4</sup> | 6.19×10<sup>5</sup> |
| 18 | 4.39×10<sup>4</sup> | 6.23×10<sup>5</sup> |
| 19 | 4.55×10<sup>4</sup> | 6.76×10<sup>5</sup> |
| 20 | 4.51×10<sup>4</sup> | 5.81×10<sup>5</sup> |
| 均值 | 4.39×10<sup>4</sup> | 6.38×10<sup>5</sup> |
综上所述，通过与现有技术纳米粒径示踪分析法对比，结合各个性能指标(线性，重复性，最低检出限)，可以明显的看出，本发明提供的用于检测外泌体浓度的荧光免疫层析试纸条，对外泌体浓度检测的性能都优于纳米粒径示踪分析，而且本发明可以更方便、快速、准确的实现外泌体浓度的测定，为外泌体浓度的检测提供了新的技术手段，具有极大的商业价值。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括背板和黏贴在所述背板上的样品垫、结合垫、NC膜及吸水垫，其中结合垫分别与样品垫和NC膜的一端搭接，NC膜的另一端与吸水垫搭接，NC膜上喷涂有检测线和质控线，所述结合垫上附有荧光微球标记的鼠抗人CD9抗体和荧光微球标记的兔IgG，所述的检测线上包被有鼠抗人CD9单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗兔抗体。
2.根据权利要求1所述一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的NC膜为硝酸纤维素膜，其孔径为450-700nm，所述的样品垫和结合垫为聚酯膜。
3.根据权利要求1所述一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述的荧光微球是粒径大小为100-180nm的羧基荧光微球。
4.根据权利要求1所述一种检测外泌体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述CD9抗体为单克隆抗体，兔IgG和羊抗兔抗体为多克隆抗体。
5.一种制备权利要求1-4所述任一项所述的荧光免疫层析试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，将CD9抗体和兔IgG分别进行荧光微球标记
将荧光微球进行活化处理，再分别将CD9抗体和兔IgG与活化的微球偶联和封闭，洗去未结合的抗体后备用。
步骤二，结合垫的处理
将荧光微球标记的CD9抗体和羊抗兔抗体加入到结合缓冲液中，充分混合，并将所述的混合抗体喷涂在结合垫上，烘箱37℃烘干后备用。
步骤三，检测线和质控线的喷涂
将CD9抗体配置成浓度为0.1-0.4mg/ml的检测线工作液，羊抗兔抗体配置成浓度为0.4-0.8mg/ml的质控线工作液，将检测线工作液和质控线工作液分别划线置NC膜的检测线和质控线上，低温干燥后备用。
步骤四，背板的组装
将结合垫、样品垫、吸水垫，按顺序依次黏贴到背板上。
步骤五，试纸条的切割
将黏贴好的背板用切条机切割成宽度为3-5mm的试纸条，在干燥条件下储存备用。
6.根据权利要求5所述的荧光免疫层析试纸条的方法，其特征在于，所述的结合缓冲液的成分包括Tris 200-600mg/L，酪蛋白100-500mg/L，蔗糖100-500mg/L，表面活性剂40-80mg/L，去离子水，pH值为7.2-7.8。
7.根据权利要求5所述的荧光免疫层析试纸条的方法，其特征在于，荧光免疫试纸条制备完成后，还需将试纸条放入检测卡壳中，制成试纸卡，每个试纸卡装入一个铝箔袋中，同时放入一包干燥剂，再用封口机封口。
8.根据权利要求7所述的荧光免疫层析试纸条的方法，其特征在于，所述的试纸卡分为样品槽，检测区和手持区，其中检测区可以对检测线和质控线进行检测。
9.根据权利要求7所述的荧光免疫层析试纸条的方法，其特征在于，对外泌体样品检测包括以下步骤:
步骤一：样品准备
取适量的外泌体样品，向所述外泌体样品中加入样品稀释液，并充分混匀，形成外泌体样品混合液。
步骤二：试纸卡准备
试纸卡样品拆去外包装，将试纸卡放置在水平的平面上，备用。
步骤三：加样处理
吸取80-100ul外泌体样品混合液，加入试纸卡的样品槽，并计时。
步骤四：数据检测
15min后将试纸卡置于荧光免疫分析仪中，检测外泌体的浓度。
10.根据权利要求9所述的检测外泌体浓度的方法，其特征在于，所述的样品稀释液为Tris 100-500mg/L，BSA 50-200mg/L，表面活性剂400-1000mg/L，去离子水，pH值为7.0-7.6。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20211029 |